CN102875561A

CN102875561A - 一种海兰地嗪的提取方法

Info

Publication number: CN102875561A
Application number: CN 201210363078
Authority: CN
Inventors: 苏刘花
Original assignee: Nanjing Zelang Agricultural Development Co Ltd
Current assignee: Nanjing Zelang Agricultural Development Co Ltd
Priority date: 2012-09-26
Filing date: 2012-09-26
Publication date: 2013-01-16

Abstract

本发明公开了一种海兰地嗪的提取方法，它是将金丝马尾连原料粉碎，加0.4-1.2%盐酸或硫酸水溶液提取，提取液上阳离子交换树脂柱，先用去离子水洗至中性，再用碱性醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调pH10-11，用氯仿萃取，萃取液浓缩后再采用高速逆流色谱和制备型液相色谱分离，收集目标成分，低温干燥即得海兰地嗪产品。本发明能耗低，污染少，产品含量高，可达98%以上，为工业自动化生产提供了可能。

Description

一种海兰地嗪的提取方法

技术领域

本发明属于中药提取分离技术领域，特别涉及一种海兰地嗪的提取方法。

背景技术

海兰地嗪（Hernandezine），又名金丝马尾连碱甲，分子式为C₃₉H₄₄N₂O₇，分子量为652.79，是一种异喹啉类生物碱，mp.120-122℃。主要存在于毛茛科唐松草属植物中，如偏翅唐松草、金丝马尾连、波斯唐松草等多种植物中。

金丝马尾连Thalictrum glandulosissimum(Fin.et Gagn.)W.T.Wang et S.H.Wang，别名多腺唐松草，分布在我国云南大理一代，海兰地嗪主要从金丝马尾连中提取分离得到。

药理研究表明，海兰地嗪体外对胶原、ADP、A₂₃₁₈₇和AA诱导的大鼠血小板聚集有明显的抑制作用，由于海兰地嗪不抑制AA诱导的大鼠血小板MD的生成，因而其抗血小板聚集作用与AA环氧酶代谢途径无关。马氏等试验表明，海兰地嗪能升高兔血小板cAMP水平，抑制凝血酶诱导的人血小板胞浆内游离钙浓度升高，结果提示海兰地嗪可能通过增加血小板cAMP水平和抑制细胞内钙水平而抑制血小板聚集。徐承熊等研究发现海兰地嗪还具有抗肿瘤活性，初步研究表明，海兰地嗪可使G1细胞进入S期受阻，海兰地嗪对癌细胞主要起杀伤作用，作用24h后损伤不可逆。

经文献检索，尚未发现海兰地嗪的工业化提取纯化方法的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种海兰地嗪的提取方法。

本发明是通过以下技术方案加以实现的：

（1）将金丝马尾连原料粉碎，加0.4-1.2%盐酸或硫酸水溶液浸泡3-5h，超声处理30-60min，过滤得到提取液；

（2）提取液上阳离子交换树脂柱，先用去离子水洗至中性，再用碱性醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩；

（3）浓缩液调节pH至10-11，用氯仿萃取，取有机层，回收氯仿，干燥得到粗品；

（4）以正丁醇-丙醇-水为溶剂系统，采用高速逆流色谱仪分离粗品中的海兰地嗪，收集目标成分，浓缩干燥得到海兰地嗪粗晶；

（5）粗晶采用制备型液相色谱分离，紫外在线检测，收集目标成分，低温干燥即得海兰地嗪纯品。

步骤（2）中所述阳离子交换树脂可选D151、HZD-2或HD-8中的一种。

步骤（2）中所述碱性醇溶液为pH9-11的乙醇水溶液，其中乙醇的体积百分比浓度为75-90%。

步骤（4）中所述溶剂系统正丁醇-丙醇-pH8.5氨水的体积比为（6-8）:（1-2）:（8-11），下相为固定相，上相为流动相。

步骤（5）中所述制备液相的流动相为甲醇-0.1%氨水溶液，体积比为77:23，紫外检测波长为208nm。

本发明的有益效果是：

（1）本发明采用酸水浸提，可有效减少杂质的溶出，采用超声处理，提取时间短、提率高；

（2）高速逆流色谱和制备型液相色谱结合进行分离纯化，分离效果好，产品纯度高，可实现工业自动化生产。

具体实施方式：

下面结合具体实施例对本发明进行说明。

实施例1：

将金丝马尾连的干燥根粉碎，取2kg，加1.0%盐酸水溶液浸泡4h，超声处理40min，过滤得到的提取液上HZD-2阳离子交换树脂，先用去离子水洗至中性，再用8LpH10的85%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调pH至10.5，用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、pH8.5氨水，按体积比为7:2:10混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集海兰地嗪流分，浓缩、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成浓度为25mg/ml的溶液，经0.45μm微滤膜过滤，得到样品溶液，以C8键合相为柱填料，粒径为10μm，柱长为15cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为25ml，以甲醇-0.1%氨水溶液为流动相，体积比为77:23，控制流速为30ml/min，紫外在线检测，检测波长为208nm，收集目标成分，低温干燥，得到纯度为99.1%的海兰地嗪。

实施例2：

将金丝马尾连的干燥根粉碎，取2kg，加0.5%盐酸水溶液浸泡3h，超声处理45min，过滤得到的提取液上D-151阳离子交换树脂，先用去离子水洗至中性，再用8LpH9的75%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调pH至11.0，用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、pH8.5氨水，按体积比为6:1:8混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集海兰地嗪流分，浓缩、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成浓度为25mg/ml的溶液，经0.45μm微滤膜过滤，得到样品溶液，以C8键合相为柱填料，粒径为10μm，柱长为15cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为25ml，以甲醇-0.1%氨水溶液为流动相，体积比为77:23，控制流速为40ml/min，紫外在线检测，检测波长为208nm，收集目标成分，低温干燥，得到纯度为98.5%的海兰地嗪。

实施例3：

将金丝马尾连的干燥根粉碎，取5kg，加1.2%硫酸水溶液浸泡5h，超声处理60min，过滤得到的提取液上HD-8阳离子交换树脂，先用去离子水洗至中性，再用20LpH11的90%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调pH至10.0，用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、pH8.5氨水，按体积比为6:2:10混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集海兰地嗪流分，浓缩、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成浓度为25mg/ml的溶液，经0.45μm微滤膜过滤，得到样品溶液，以C8键合相为柱填料，粒径为10μm，柱长为15cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为25ml，以甲醇-0.1%氨水溶液为流动相，体积比为77:23，控制流速为20ml/min，紫外在线检测，检测波长为208nm，收集目标成分，低温干燥，得到纯度为99.3%的海兰地嗪。

实施例4：

将金丝马尾连的干燥根粉碎，取10kg，加0.8%盐酸水溶液浸泡4h，超声处理50min，过滤得到的提取液上HZD-2阳离子交换树脂，先用去离子水洗至中性，再用40LpH9的90%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调pH至10.2，用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、pH8.5氨水，按体积比为8:1:8混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集海兰地嗪流分，浓缩、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成浓度为25mg/ml的溶液，经0.45μm微滤膜过滤，得到样品溶液，以C8键合相为柱填料，粒径为10μm，柱长为15cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为25ml，以甲醇-0.1%氨水溶液为流动相，体积比为77:23，控制流速为45ml/min，紫外在线检测，检测波长为208nm，收集目标成分，低温干燥，得到纯度为98.2%的海兰地嗪。

实施例5：

将金丝马尾连的干燥根粉碎，取10kg，加0.4%硫酸水溶液浸泡5h，超声处理30min，过滤得到的提取液上HD-8阳离子交换树脂，先用去离子水洗至中性，再用40LpH11的75%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调pH至10.8，用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、pH8.5氨水，按体积比为8:2:10混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集海兰地嗪流分，浓缩、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成浓度为25mg/ml的溶液，经0.45μm微滤膜过滤，得到样品溶液，以C8键合相为柱填料，粒径为10μm，柱长为15cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为25ml，以甲醇-0.1%氨水溶液为流动相，体积比为77:23，控制流速为35ml/min，紫外在线检测，检测波长为208nm，收集目标成分，低温干燥，得到纯度为98.8%的海兰地嗪。

实施例6：

将金丝马尾连的干燥根粉碎，取20kg，加1.0%硫酸水溶液浸泡3h，超声处理35min，过滤得到的提取液上D151阳离子交换树脂，先用去离子水洗至中性，再用80LpH10的75%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调pH至11.0，用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、pH8.5氨水，按体积比为7:1:9混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集海兰地嗪流分，浓缩、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成浓度为25mg/ml的溶液，经0.45μm微滤膜过滤，得到样品溶液，以C8键合相为柱填料，粒径为10μm，柱长为15cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为25ml，以甲醇-0.1%氨水溶液为流动相，体积比为77:23，控制流速为30ml/min，紫外在线检测，检测波长为208nm，收集目标成分，低温干燥，得到纯度为98.4%的海兰地嗪。

Claims

1.一种海兰地嗪的提取方法，其特征在于包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种海兰地嗪的提取方法，其特征在于步骤（2）中所述阳离子交换树脂可选D151、HZD-2或HD-8中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种海兰地嗪的提取方法，其特征在于步骤（2）中所述碱性醇溶液为pH9-11的乙醇水溶液，其中乙醇的体积百分比浓度为75-90%。

4.根据权利要求1所述的一种海兰地嗪的提取方法，其特征在于步骤（4）中所述溶剂系统正丁醇-丙醇-pH8.5氨水的体积比为（6-8）:（1-2）:（8-11），下相为固定相，上相为流动相。

5.根据权利要求1所述的一种海兰地嗪的提取方法，其特征在于步骤（5）中所述制备液相的流动相为甲醇-0.1%氨水溶液，体积比为77:23，紫外检测波长为208nm。