CN102809545B - 一种藏药烈香杜鹃及其制剂的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种藏药烈香杜鹃及其制剂的质量检测方法，该方法包括采用紫外-分光光度法测定烈香杜鹃及其制剂中总黄酮的含量，采用高效液相色谱法同一色谱条件下同时测定烈香杜鹃及其制剂中总槲皮素含量，采用高效液相色谱法建立烈香杜鹃及其制剂中黄酮类成分的指纹图谱，通过指纹图谱中共有峰的有无，可有效保证烈香杜鹃及其制剂的质量，进而保证了患者用药的安全。本发明质量检测方法供试品溶液稳定，精密度高，重现性良好，具有一定的专属性，所得指纹图谱中各特征成分分离效果良好，可用于烈香杜鹃药材的质量检测，有利于保证藏药烈香杜鹃及其制剂的安全有效、质量可控和临床疗效。
Description
技术领域
本发明涉及一种质量检测方法，具体涉及一种藏药烈香杜鹃及其制剂的质量检测方法。
背景技术
烈香杜鹃（Rhododendron anthopogoniodes Maxim.et Franch）为杜鹃花科植物烈香杜鹃的干燥花和叶或带叶嫩枝，系常用藏药材，性味：甘、涩，平；具有清热消肿，补肾的功效，主要用于气管炎，肺气肿，浮肿，身体虚弱及水土不适，消化不良，胃下垂，胃扩张，外用治疮疬。《月王药诊》记载：“治龙、赤巴、培根病、脾胃虚寒、消化不良、水土不服。”《晶珠本草》记载：“滋补益寿，治寒性培根病。”《味气铁鬘》记载：味苦、性温、效轻。治培根病。《明释三十章》记载：性温，治培根病、肺病疼痛、呃逆。《图鉴》记载：本品生于高山阴面。树干白色，叶褐色，花白色，味甘、苦、涩，治龙病、赤巴病、培根病、喑哑病、肺病。
烈香杜鹃现已大量应用于藏成药制剂中，藏医常用于培根病、肺病、脾胃虚寒、消化不良、水土不服症等的治疗，该药材收载于《卫生部药品标准》藏药第一册中，原标准除有显微理化鉴别外，未制定任何含量测定方法。
《RP-HPLC测定烈香杜鹃叶总黄酮含量的研究》一文提供了一种烈香杜鹃叶总黄酮含量测定的RP-HPLC方法。该方法以槲皮素、山奈素、异鼠李素3种黄酮甙元的总含量作为烈香杜鹃叶总黄酮含量，但未对供试品中杂质进行处理，干扰成分多，不能准确可靠的说明烈香杜鹃的质量，不适用于制剂中含量的控制。
《藏药烈香杜鹃质量标准研究》一文提供了一种采用高效液相色谱法同时测定烈香杜鹃中金丝桃苷、槲皮素的含量的方法。该方法通过对金丝桃苷、槲皮素的含量测定来控制烈香杜鹃的质量，但是仍不能全面的反应烈香杜鹃的质量。
综上所述：亟需一种可以全面控制藏药烈香杜鹃的检测方法，以保证患者用药的安全有效。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种藏药烈香杜鹃及其制剂全面的质量检测方法。
为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：
一种藏药烈香杜鹃质量检测方法，所述方法包括烈香杜鹃中总黄酮含量测定的紫外分光光度方法，烈香杜鹃中总槲皮素含量测定的高效液相色谱方法，和烈香杜鹃中黄酮类成分HPLC指纹图谱的检测方法中的一种或几种。
优选的，所述质量检测方法包括以下一种或几种：
所述总黄酮的含量测定方法是以金丝桃苷制成对照品溶液，经黄酮的亚硝酸钠和硝酸铝的显色反应（即硝酸铝显色法），通过紫外-可见分光光度法测定不同对照品浓度的吸收度并绘制吸收曲线；将烈香杜鹃粉末经过石油醚除杂后配制供试品溶液，经过硝酸铝显色法显色后，通过紫外-可见分光光度法测定其吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的含量的方法；
所述总槲皮素含量测定方法是以槲皮素对照品为对照，烈香杜鹃使用酸水解后，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积份数比45:55的甲醇-体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相，检测波长为360nm的高效液相色谱法；
所述黄酮类成分HPLC指纹图谱的检测方法，其是以槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品为对照制成四种参照物溶液；色谱条件是：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以异丙醇为流动相B，以体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相C，梯度洗脱，流速为1ml/min，检测波长为360nm；将参照物溶液与供试品所制备的供试品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，比较参照物溶液与供试品溶液的相对保留时间和相对峰面积。
上面步骤中，作为进一步之优选，所述总黄酮的含量测定方法中，对照品溶液和供试品溶液均为乙醇为溶剂配制。所述黄酮的亚硝酸钠和硝酸铝的显色反应（即硝酸铝显色法）的步骤是：对照品溶液或供试品溶液均加水至5ml，加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml，混匀，放置6分钟，加重量体积份数比10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟。
上面步骤中，作为进一步之优选，所述总槲皮素含量测定方法中，对照品溶液和供试品溶液均由体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液配制，供试品使用回流的方法制备，对供试品进行除杂，使脂类及叶绿素类进行消解，同时使含槲皮素的黄酮苷均水解转化为槲皮素（即总槲皮素包括游离槲皮素和转化之后槲皮素之和），便于测定。而且在此条件下还可以采用山奈素对照品作对照，测量山奈素含量，且与槲皮素互不影响。
上面步骤中，作为进一步之优选，所述黄酮类成分HPLC指纹图谱的检测方法中，四份参照物溶液和供试品溶液均由75%乙醇配制。另外，作为本发明另一优选，梯度洗脱优选下面技术方案：
下面是本发明的具体技术方案：
总黄酮的含量测定：
对照品溶液的制备取金丝桃苷对照品15mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1ml含金丝桃苷60μg）。
标准曲线的制备精密量取对照品液1ml、2ml、3ml、4ml与5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml，混匀，放置6分钟，加重量体积份数比10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录ⅤA），在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取本品细粉约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，加石油醚50ml，加热回流1小时，过滤，滤渣洗涤3次，每次10ml，弃去石油醚液，滤渣挥干溶剂后，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中金丝桃苷的含量（μg/ml），计算，即得。
本品按干燥品计算，藏药烈香杜鹃中总黄酮含量以金丝桃苷（C21H20O12）计，不得少于2.0%。
总槲皮素、山奈素的含量测定（因山奈素对总槲皮素的测定条件及结果无影响，因此加一并加到总槲皮素的含量测定中）：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比45:55的甲醇-体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相；检测波长为360nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备取槲皮素对照品适量，精密称定，加体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液制成每1ml含槲皮素150μg、山奈素8μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品细粉约1g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，藏药烈香杜鹃中槲皮素（C15H10O7）含量不得少于0.53%，山奈素（C16H12O6）含量不得少于0.03%。
黄酮类成分的指纹图谱建立及其测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以异丙醇为流动相B，以体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相C，梯度洗脱；流速为1ml/min，检测波长为360nm；理论板数按参照物金丝桃苷峰计算应不低于2000；
参照物溶液的制备取槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品适量，精密称定，加体积份数比75%乙醇制成每1ml含槲皮素16μg、山奈素3μg、金丝桃苷74μg、芦丁13μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品细粉约1g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比75%乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比75%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
供试品特征谱图中应呈现12个特征峰，其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致；与金丝桃苷参照峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，面积在5%以下的色谱峰不做峰面积要求，其相对保留时间和相对峰面积应在规定值的±10%之内。相对保留时间规定值为：0.33（峰1）、0.89（峰2）、1.00（峰3）、1.08（峰4）、1.19（峰5）、1.50（峰6）、1.74（峰7）、1.92（峰8）、2.13（峰9）、2.30（峰10）、2.75（峰11）、3.21（峰12）；相对峰面积规定值为：0.19（峰1）、0.16（峰2）、1.00（峰3）、0.30（峰4）、0.09（峰5）、0.13（峰6）、0.29（峰7）、0.86（峰8）、0.59（峰9）、0.31（峰10）、0.40（峰11）、0.07（峰12）。
也可按上述方法用外标法对烈香杜鹃中槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁进行含量测定。
本发明还提供了一种药物制剂中烈香杜鹃的质量检测方法，采用上述方法对制剂中烈香杜鹃进行质量检测。
药物制剂中烈香杜鹃的质量检测方法具体为：
总黄酮的含量测定：
对照品溶液的制备取金丝桃苷对照品15mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1ml含金丝桃苷60μg）。
标准曲线的制备精密量取对照品液1ml、2ml、3ml、4ml与5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml，混匀，放置6分钟，加重量体积份数比10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录ⅤA），在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取待检测制剂细粉约6-10g，精密称定，置圆底烧瓶中，加石油醚50ml，加热回流1小时，过滤，滤渣洗涤3次，每次10ml，弃去石油醚液，滤渣挥干溶剂后，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中金丝桃苷的含量（μg/ml），计算，即得。
本品按干燥品计算，藏药制剂总黄酮含量以金丝桃苷（C21H20O12）计，不得少于烈香杜鹃的2.0%。
总槲皮素、山奈素的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比45:55的甲醇-体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相；检测波长为360nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备取槲皮素、山奈素对照品适量，精密称定，加体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液制成每1ml含槲皮素150μg、山奈素8μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取待检测制剂细粉约6-10g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，藏药制剂中槲皮素（C15H10O7）含量不得少于烈香杜鹃的0.53%，山奈素（C16H12O6）含量不得少于烈香杜鹃的0.03%。
黄酮类成分的指纹图谱建立：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以异丙醇为流动相B，以体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相C，梯度洗脱；流速为1ml/min，检测波长为360nm；理论板数按参照物金丝桃苷峰计算应不低于2000；
参照物溶液的制备取槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品适量，精密称定，加体积份数比75%乙醇制成每1ml含槲皮素16μg、山奈素3μg、金丝桃苷74μg、芦丁13μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取待检测制剂细粉约6-10g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比75%乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比75%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
供试品特征谱图中应呈现12个特征峰，其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致；与金丝桃苷参照峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，面积在5%以下的色谱峰不做峰面积要求，其相对保留时间和相对峰面积应在规定值的±10%之内。相对保留时间规定值为：0.33（峰1）、0.89（峰2）、1.00（峰3）、1.08（峰4）、1.19（峰5）、1.50（峰6）、1.74（峰7）、1.92（峰8）、2.13（峰9）、2.30（峰10）、2.75（峰11）、3.21（峰12）；相对峰面积规定值为：0.19（峰1）、0.16（峰2）、1.00（峰3）、0.30（峰4）、0.09（峰5）、0.13（峰6）、0.29（峰7）、0.86（峰8）、0.59（峰9）、0.31（峰10）、0.40（峰11）、0.07（峰12）。
所述制剂为雪上胃宝丸、手参肾宝胶囊。
重量体积份数比的单位为g/ml。
本法选择黄酮类成分对烈香杜鹃的质量加以控制，以金丝桃苷为对照品对烈香杜鹃中总黄酮进行了控制；测定游离槲皮素及黄酮水解后苷元为槲皮素类成分的黄酮的总量，并在同一条件下可以测山奈素的含量，且无干扰；同时使用指纹图谱，更加保证了烈香杜鹃中各个黄酮的量。以上方法全面的控制烈香杜鹃中黄酮类成分的含量，进而保证了烈香杜鹃的质量，从而保证了患者用药的安全性、有效性，质量均一性。
本发明的有益效果是，采用紫外-分光光度法测定烈香杜鹃及其制剂中总黄酮的含量，采用高效液相色谱法同时测定烈香杜鹃及其制剂中总槲皮素、山奈素的含量，采用高效液相色谱法建立烈香杜鹃及其制剂中黄酮类成分的指纹图谱，通过指纹图谱中共有峰的有无，可有效保证烈香杜鹃及其制剂的质量，进而保证了患者用药的安全。本发明质量控制方法稳定可靠，专一性强，能够确保藏药烈香杜鹃及其制剂的稳定、安全有效、质量可控，有较大的科学性和应用价值。
附图说明
图1是烈香杜鹃中总黄酮含量测定标准曲线图；
图2是槲皮素、山奈素混合对照品的高效液相色谱图；
图3是烈香杜鹃中槲皮素、山奈素含量测定供试品的高效液相色谱图；
图4是槲皮素含量测定标准曲线图；
图5是山奈素含量测定标准曲线图；
图6是槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁混合对照品的高效液相色谱图；
图7是烈香杜鹃药材的液相标准指纹图谱；
其中，图1、图4、图5的横坐标是浓度C，单位：μg/ml；纵坐标是峰面积A，单位：μV·s；图2、图3、图6、图7的横坐标是时间，单位：Minutes；纵坐标是电压，单位：Volts。
具体实施方式
下面通过具体实例对本发明进行进一步的阐述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。
实验例1：烈香杜鹃中总黄酮的含量测定实验
1.仪器、试药和供试样品
仪器：岛津UV-2450紫外-可见分光光度计；岛津AuW220D电子天平。
对照品：金丝桃苷对照品（中国药品生物制品检定所），批号：111521-201004。
样品：烈香杜鹃（青海金诃藏药药业股份有限公司提供），批号分别为：110901、110902、110903、111101、111102、111103。
2.对照品溶液的制备
取金丝桃苷对照品15mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1ml含金丝桃苷60μg）。
3.检测波长的选择
精密量取对照品溶液3ml，置25ml量瓶中，加水至5ml，加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml，混匀，放置6分钟，加重量体积份数比10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，用紫外-可见分光光度计在400nm~600nm作全波长扫描，确定最大吸收波长。根据紫外吸收图谱可知，反应后的对照品溶液在400nm~600nm波长范围内扫描，最大吸收在500nm，故选定500nm为检测波长。
4.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取对照品液（62.48μg/ml）1ml、2ml、3ml、4ml与5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml，混匀，放置6分钟，加重量体积份数比10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录ⅤA），在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程A=0.0201C+0.0003，相关系数R=0.9997。结果表明，金丝桃苷在2.5μg/ml～12.5μg/ml范围内，吸光度(A)与对照品浓度(C)线性关系良好。结果见表1和附图1。
表1总黄酮含量测定线性关系考察结果
5.样品溶液测定
取本品细粉约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，加石油醚50ml，加热回流1小时，过滤，滤渣洗涤3次，每次10ml，弃去石油醚液，滤渣挥干溶剂后，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中金丝桃苷的含量（μg/ml），计算，即得。
6.精密度试验
精密量取对照品溶液3ml6份，分别置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度。测定结果，RSD=1.28%（n=6）。结果表明，仪器精密度良好。结果见表2。
表2总黄酮含量测定精密度试验结果
7.重复性试验
取同一批烈香杜鹃药材（批号：110901）细粉约1g，精密称定，共6份，按样品溶液测定项下的方法制备样品溶液，依法测定吸光度，计算样品中总黄酮的含量。测定结果，样品中总黄酮含量的平均值为37.69mg/g，RSD=1.52%（n=6）。结果表明，该分析方法重复性良好。结果见表3。
表3总黄酮含量测定重复性试验结果
8.回收率试验
精密称取同一批已知总黄酮含量的烈香杜鹃药材（批号：110901）6份，各精密加入金丝桃苷对照品，按样品溶液测定项下的方法制备样品溶液，依法测定吸光度，计算样品中总黄酮的含量，计算回收率。测定结果，样品中总黄酮的含量测定平均回收率为97.80%，RSD=1.60%（n=6）。结果表明，该测定方法测定结果准确。结果见表4。
表4总黄酮含量测定回收率试验结果
9.样品测定
取藏药烈香杜鹃药材三批，测定并计算总黄酮含量。结果见表5。
表5总黄酮含量测定结果
实验例2：烈香杜鹃中总槲皮素、山奈素的含量测定实验
1.仪器、试药和供试样品
仪器：高效液相色谱仪：日立L-2100泵，日立L-2400紫外检测器；
电子天平：岛津AUW220D型。
对照品：槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所），批号：100081-200406；山奈素（中国药品生物制品检定所），批号：110861~200808。
样品：烈香杜鹃（青海金诃藏药药业股份有限公司提供），批号分别为：110901、110902、110903。
2.检测波长选择
取槲皮素、山奈素混合对照品溶液，于190-400nm波长范围内进行扫描，根据紫外吸收图谱，选定360nm为检测波长。
3.流动相选择
分别考察了甲醇-水，乙腈-水、甲醇-体积份数比0.5%磷酸水溶液、乙腈-体积份数比0.5%磷酸水溶液等不同体积份数比为流动相时供试品溶液中槲皮素、山奈素的分离效果，研究发现，选用甲醇-体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相时，能够得到较好的分离效果，同时该体系毒性相对较小且稳定。甲醇-体积份数比0.5%磷酸水溶液的体积份数比为45:55时，供试品溶液中槲皮素、山奈素的分离效果最好。
4.系统适用性试验
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，对照品、供试品色谱中槲皮素、山奈素与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5。结果见附图2、图3。
5.对照品溶液制备
取槲皮素、山奈素对照品适量，精密称定，加体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液制成每1ml含槲皮素150μg、山奈素8μg的溶液，即得。
6.供试品溶液制备
分别考察了超声、回流、振揺三种提取方法的提取效果，体积份数比3:1的甲醇-5mol/L盐酸水溶液、体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液、体积份数比75%乙醇水溶液三种提取溶剂的提取效果；还分别考察了0.5小时、1小时、1.5小时三种提取时间的提取效果。以每克药品中槲皮素、山奈素的含量为指标确定提取方法、提取溶剂、提取时间。结果见表6、表7和表8。
表6提取方法考察试验结果
表7提取溶剂考察试验结果
表8提取溶剂量考察试验结果
结果表明，采用回流提取比较充分，提取溶剂优选体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液，提取时间选用1小时，能够保证槲皮素、山奈素提取完全。具体方法如下：
取本品细粉约1g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
7.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取槲皮素、山奈素混合对照品贮备液溶液（槲皮素含量为315.2μg/ml，山奈素含量为16.7μg/ml）1ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液稀释至刻度，摇匀，各精密进样10μl，以峰面积（A）对对照品浓度（C）进行线性回归，得槲皮素回归方程：A=18799C+5562.4，相关系数：R=0.9999；山奈素回归方程：A=14398C+449.58，相关系数：R=0.9996。结果表明：槲皮素在31.52μg/ml~315.2μg/ml范围内，槲皮素的峰面积（A）与对照品浓度（C）线性关系良好；山奈素在1.67μg/ml~16.7μg/ml范围内，山奈素的峰面积（A）与对照品浓度（C）线性关系良好。结果见表9、表10和附图4、图5。
表9槲皮素线性关系考察结果
表10山奈素线性关系考察结果
8.精密度试验
精密吸取槲皮素、山奈素混合对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明，仪器精密度良好。结果见表11、表12。
表11槲皮素精密度试验结果
表12山奈素精密度试验结果
9.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以后每隔2小时测定一次，考察8小时，计算峰面积的相对标准偏差。结果表明：供试品溶液中槲皮素、山奈素在8小时内测定结果稳定。结果见表13、表14。
表13槲皮素稳定性试验结果
表14山奈素稳定性试验结果
10.重复性试验
取本品（批号：110901），重复测定6次，计算样品中槲皮素、山奈素的含量及其相对标准偏差。结果表明：分析方法重复性良好。结果见表15、表16。
表15槲皮素重复性试验结果
表16山奈素重复性试验结果
11.回收率试验
精密称取已知槲皮素、山奈素含量的同一批样品6份（批号：110901），精密加入槲皮素、山奈素对照品，测定其含量，计算回收率及其相对标准偏差。结果表明：该测定方法测定结果准确。结果见表17、表18。
表17槲皮素回收率试验结果
表18山奈素回收率试验结果
12.样品测定
取藏药烈香杜鹃药材三批，按上述含量测定方法对总槲皮素、山奈素含量进行测定。结果见表19。
表19含量测定结果
实验例3：烈香杜鹃中黄酮类成分的指纹图谱建立实验
1.仪器、试药和供试样品
仪器：高效液相色谱仪：日立L-2100泵，日立L-2400紫外检测器；
电子天平：岛津AUW220D型。
对照品：槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所），批号：100081-200406；山奈素（中国药品生物制品检定所），批号：110861~200808；金丝桃苷对照品（中国药品生物制品检定所），批号：111521-200303；芦丁（中国药品生物制品检定所），批号：10080-200306。
样品：烈香杜鹃（青海金诃藏药药业股份有限公司提供），批号分别为：110901、110902、110903。
2.检测波长选择
取槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁混合对照品溶液，于190-400nm波长范围内进行扫描，根据紫外吸收图谱，选定360nm为检测波长。
3.流动相选择
分别考察了甲醇-体积份数比0.5%磷酸水溶液等度洗脱，甲醇-体积份数比0.5%磷酸水溶液梯度洗脱，乙腈-体积份数比0.5%磷酸水溶液梯度洗脱，乙腈-异丙醇-体积份数比0.5%磷酸水溶液梯度洗脱4种流动相系统供试品溶液中各成分的分离效果，研究发现，选用乙腈-异丙醇-体积份数比0.5%磷酸水溶液梯度洗脱流动相系统，供试品中各色谱峰能够得到较好的分离效果，分析时间为70min。
以乙腈为流动相A，以异丙醇为流动相B，以体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相C。
4.液相色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以异丙醇为流动相B，以体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相C，梯度洗脱；流速为1ml/min，检测波长为360nm；理论板数按参照物金丝桃苷峰计算应不低于2000；
5.参照物溶液的制备
取槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品适量，精密称定，加体积份数比75%乙醇制成每1ml含槲皮素16μg、山奈素3μg、金丝桃苷74μg、芦丁13μg的溶液，即得。
6.供试品溶液的制备
取本品细粉约1g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比75%乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比75%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
7.系统适用性试验
在上述色谱条件下，分别精密吸取空白溶剂、混合对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品特征谱图中呈现12个特征峰，其中4个峰分别与相应的参照物峰保留时间相一致，各色谱峰与其相邻峰的分离度均大于1.5，且在与供试品色谱12个特征峰相应的位置上空白溶剂均无干扰。
8.精密度试验
精密吸取同一份烈香杜鹃供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，各连续测定6次，记录特征色谱峰的保留时间和峰面积，考察各特征色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的一致性。结果表明，各共有特征峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2%，符合指纹图谱分析要求，仪器精密度良好。结果见表20。
表20精密度试验结果
9.稳定性试验
供试品溶液制备完成后，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，分别在0、4、8、12、24小时进样分析，记录特征色谱峰的保留时间和峰面积，考察各特征色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的一致性。结果表明，各共有特征峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2%，符合指纹图谱分析要求，供试品溶液在24小时内测定基本稳定。结果见表21。
表21稳定性试验结果
10.重复性试验
取同一批烈香杜鹃药材（批号：110901）6份，按照供试品的制备方法制备供试品溶液，在上述液相色谱条件下，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录特征色谱峰的保留时间和峰面积，考察各特征色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的一致性。结果表明，各共有特征峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2%，符合指纹图谱分析要求，分析方法重复性良好。结果见表22。
表22重复性试验结果
11.烈香杜鹃药材标准指纹图谱的制定
取藏药烈香杜鹃药材6批，按照供试品的制备方法制备供试品溶液，在上述液相色谱条件下，分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。依据6批样品的指纹图谱，制定标准指纹图谱，色谱图见附图6、图7。供试品特征谱图中呈现12个特征峰，其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致；以金丝桃苷参照峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，面积在5%以下的色谱峰不做峰面积要求。结果表明，各共有特征峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2%，符合指纹图谱分析要求，其相对保留时间和相对峰面积应在规定值的±10%之内。根据标准指纹图谱，相对保留时间规定值为：0.33（峰1）、0.89（峰2）、1.00（峰3）、1.08（峰4）、1.19（峰5）、1.50（峰6）、1.74（峰7）、1.92（峰8）、2.13（峰9）、2.30（峰10）、2.75（峰11）、3.21（峰12）；相对峰面积规定值为：0.19（峰1）、0.16（峰2）、1.00（峰3）、0.30（峰4）、0.09（峰5）、0.13（峰6）、0.29（峰7）、0.86（峰8）、0.59（峰9）、0.31（峰10）、0.40（峰11）、0.07（峰12）。结果见表23。
表23共有特征峰相对保留时间和相对峰面积表
下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。
实施例1：烈香杜鹃的质量检测方法
总黄酮的含量测定：
对照品溶液的制备取金丝桃苷对照品15mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1ml含金丝桃苷60μg）。
标准曲线的制备精密量取对照品液1ml、2ml、3ml、4ml与5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml，混匀，放置6分钟，加重量体积份数比10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录ⅤA），在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取本品细粉约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，加石油醚50ml，加热回流1小时，过滤，滤渣洗涤3次，每次10ml，弃去石油醚液，滤渣挥干溶剂后，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中金丝桃苷的含量（μg/ml），计算，即得。
本品按干燥品计算，藏药烈香杜鹃中总黄酮含量以金丝桃苷（C21H20O12）计，不得少于2.0%。
总槲皮素、山奈素的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比45:55的甲醇-体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相；检测波长为360nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备取槲皮素、山奈素对照品适量，精密称定，加体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液制成每1ml含槲皮素150μg、山奈素8μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品细粉约1g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，藏药烈香杜鹃中总槲皮素（C15H10O7）含量不得少于0.53%，山奈素（C16H12O6）含量不得少于0.03%。
黄酮类成分的指纹图谱建立：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以异丙醇为流动相B，以体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相C，梯度洗脱；流速为1ml/min，检测波长为360nm；理论板数按参照物金丝桃苷峰计算应不低于2000；
参照物溶液的制备取槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品适量，精密称定，加体积份数比75%乙醇制成每1ml含槲皮素16μg、山奈素3μg、金丝桃苷74μg、芦丁13μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品细粉约1g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比75%乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比75%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
供试品特征谱图中应呈现12个特征峰，其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致；与金丝桃苷参照峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，面积在5%以下的色谱峰不做峰面积要求，其相对保留时间和相对峰面积应在规定值的±10%之内。相对保留时间规定值为：0.33（峰1）、0.89（峰2）、1.00（峰3）、1.08（峰4）、1.19（峰5）、1.50（峰6）、1.74（峰7）、1.92（峰8）、2.13（峰9）、2.30（峰10）、2.75（峰11）、3.21（峰12）；相对峰面积规定值为：0.19（峰1）、0.16（峰2）、1.00（峰3）、0.30（峰4）、0.09（峰5）、0.13（峰6）、0.29（峰7）、0.86（峰8）、0.59（峰9）、0.31（峰10）、0.40（峰11）、0.07（峰12）。
实施例2：雪山胃宝丸中烈香杜鹃的质量检测方法
雪山胃宝丸来自藏药部颁标准，标准编号：WS-10105(ZD-0105)-2002。由南寒水石227g、荜茇136g、木香92g、石榴皮136g、山楂136g、土木香45g、烈香杜鹃136g、木瓜92g组成。
总黄酮的含量测定：
对照品溶液的制备取金丝桃苷对照品15mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1ml含金丝桃苷60μg）。
标准曲线的制备精密量取对照品液1ml、2ml、3ml、4ml与5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml，混匀，放置6分钟，加重量体积份数比10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录ⅤA），在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取待检测制剂细粉约6g，精密称定，置圆底烧瓶中，加石油醚50ml，加热回流1小时，过滤，滤渣洗涤3次，每次10ml，弃去石油醚液，滤渣挥干溶剂后，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中金丝桃苷的含量（μg/ml），计算，即得。
本品按干燥品计算，总黄酮含量以金丝桃苷（C21H20O12）计，不得少于0.3%。
总槲皮素的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比45:55的甲醇-体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相；检测波长为360nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备取槲皮素对照品适量，精密称定，加体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液制成每1ml含槲皮素150μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取待检测制剂细粉约6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，槲皮素（C15H10O7）含量不得少于0.07%。
黄酮类成分的指纹图谱建立：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以异丙醇为流动相B，以体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相C，梯度洗脱；流速为1ml/min，检测波长为360nm；理论板数按参照物金丝桃苷峰计算应不低于2000；
参照物溶液的制备取槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品适量，精密称定，加体积份数比75%乙醇制成每1ml含槲皮素16μg、山奈素3μg、金丝桃苷74μg、芦丁13μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取待检测制剂细粉约6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比75%乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比75%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
供试品特征谱图中应呈现12个特征峰，其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致；与金丝桃苷参照峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，面积在5%以下的色谱峰不做峰面积要求，其相对保留时间和相对峰面积应在规定值的±10%之内。相对保留时间规定值为：0.33（峰1）、0.89（峰2）、1.00（峰3）、1.08（峰4）、1.19（峰5）、1.50（峰6）、1.74（峰7）、1.92（峰8）、2.13（峰9）、2.30（峰10）、2.75（峰11）、3.21（峰12）；相对峰面积规定值为：0.19（峰1）、0.16（峰2）、1.00（峰3）、0.30（峰4）、0.09（峰5）、0.13（峰6）、0.29（峰7）、0.86（峰8）、0.59（峰9）、0.31（峰10）、0.40（峰11）、0.07（峰12）。
实施例3：手参肾宝胶囊中烈香杜鹃的质量检测方法
手参肾宝胶囊来自藏药部颁标准，标准编号：WS-10550(ZD-0550)-2002。由手参100g、黄精100g、天冬62.4g、烈香杜鹃32g、冬虫夏草6.3g组成。
总黄酮的含量测定：
对照品溶液的制备取金丝桃苷对照品15mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1ml含金丝桃苷60μg）。
标准曲线的制备精密量取对照品液1ml、2ml、3ml、4ml与5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml，混匀，放置6分钟，加重量体积份数比10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录ⅤA），在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取待检测制剂细粉约10g，精密称定，置圆底烧瓶中，加石油醚50ml，加热回流1小时，过滤，滤渣洗涤3次，每次10ml，弃去石油醚液，滤渣挥干溶剂后，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中金丝桃苷的含量（μg/ml），计算，即得。
本品按干燥品计算，总黄酮含量以金丝桃苷（C21H20O12）计，不得少于0.4%。
槲皮素的含量测定：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比45:55的甲醇-体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相；检测波长为360nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备取槲皮素对照品适量，精密称定，加体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液制成每1ml含槲皮素150μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取待检测制剂细粉约10g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，藏药烈香杜鹃中槲皮素（C15H10O7）含量不得少于0.11%。
黄酮类成分的指纹图谱建立：
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以异丙醇为流动相B，以体积份数比0.5%磷酸水溶液为流动相C，梯度洗脱；流速为1ml/min，检测波长为360nm；理论板数按参照物金丝桃苷峰计算应不低于2000；
参照物溶液的制备取槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品适量，精密称定，加体积份数比75%乙醇制成每1ml含槲皮素16μg、山奈素3μg、金丝桃苷74μg、芦丁13μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取待检测制剂细粉约10g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比75%乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比75%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
供试品特征谱图中应呈现12个特征峰，其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致；与金丝桃苷参照峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，面积在5%以下的色谱峰不做峰面积要求，其相对保留时间和相对峰面积应在规定值的±10%之内。相对保留时间规定值为：0.33（峰1）、0.89（峰2）、1.00（峰3）、1.08（峰4）、1.19（峰5）、1.50（峰6）、1.74（峰7）、1.92（峰8）、2.13（峰9）、2.30（峰10）、2.75（峰11）、3.21（峰12）；相对峰面积规定值为：0.19（峰1）、0.16（峰2）、1.00（峰3）、0.30（峰4）、0.09（峰5）、0.13（峰6）、0.29（峰7）、0.86（峰8）、0.59（峰9）、0.31（峰10）、0.40（峰11）、0.07（峰12）。
Claims (5)
1.一种藏药烈香杜鹃质量检测方法，其特征是，所述方法包括烈香杜鹃中总黄酮含量测定的紫外分光光度方法，烈香杜鹃中总槲皮素含量测定的高效液相色谱方法，和烈香杜鹃中黄酮类成分HPLC指纹图谱的检测方法：
所述总黄酮的含量测定方法如下：
对照品溶液的制备取金丝桃苷对照品15mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得；
标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml与5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加重量体积份数比5％亚硝酸钠试液1ml，混匀，放置6分钟，加重量体积份数比10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线；
测定法取烈香杜鹃细粉约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，加石油醚50ml，加热回流1小时，过滤，滤渣洗涤3次，每次10ml，弃去石油醚液，滤渣挥干溶剂后，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中金丝桃苷的含量(μg/ml)，计算，即得；
所述总槲皮素含量测定方法如下：
照高效液相色谱法；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比45:55的甲醇-体积份数比0.5％磷酸水溶液为流动相；检测波长为360nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备取槲皮素对照品适量，精密称定，加体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液制成每1ml含槲皮素150μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品细粉约1g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
所述黄酮类成分的指纹图谱建立方法如下：
照高效液相色谱法；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以异丙醇为流动相B，以体积份数比0.5％磷酸水溶液为流动相C，梯度洗脱；流速为1ml/min，检测波长为360nm；理论板数按参照物金丝桃苷峰计算应不低于2000；
参照物溶液的制备取槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品适量，精密称定，加体积份数比75％乙醇制成每1ml含槲皮素16μg、山奈素3μg、金丝桃苷74μg、芦丁13μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品细粉约1g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比75％乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比75％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得；
供试品特征谱图中应呈现12个特征峰，其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致；与金丝桃苷参照峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，面积在5％以下的色谱峰不做峰面积要求，其相对保留时间和相对峰面积应在规定值的±10％之内，
所述12个特征峰的相对保留时间规定值为：0.33(峰1)、0.89(峰2)、1.00(峰3)、1.08(峰4)、1.19(峰5)、1.50(峰6)、1.74(峰7)、1.92(峰8)、2.13(峰9)、2.30(峰10)、2.75(峰11)、3.21(峰12)；相对峰面积规定值为：0.19(峰1)、0.16(峰2)、1.00(峰3)、0.30(峰4)、0.09(峰5)、0.13(峰6)、0.29(峰7)、0.86(峰8)、0.59(峰9)、0.31(峰10)、0.40(峰11)、0.07(峰12)。
2.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征是，它还包括通过分别以槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品为对照，对烈香杜鹃中的槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁进行含量测定的方法。
3.一种药物制剂中烈香杜鹃的质量检测方法，其特征是，采用权利要求1-2任一项所述的方法对制剂中烈香杜鹃进行质量检测。
4.如权利要求3所述的质量检测方法，其特征是，所述质量检测方法如下：
总黄酮的含量测定：
对照品溶液的制备取金丝桃苷对照品15mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得；
标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml与5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加重量体积份数比5％亚硝酸钠试液1ml，混匀，放置6分钟，加重量体积份数比10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线；
测定法取待检测制剂细粉6-10g，精密称定，置圆底烧瓶中，加石油醚50ml，加热回流1小时，过滤，滤渣洗涤3次，每次10ml，弃去石油醚液，滤渣挥干溶剂后，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀；精密量取5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中金丝桃苷的含量(μg/ml)，计算，即得；
总槲皮素含量测定：
照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比45:55的甲醇-体积份数比0.5％磷酸水溶液为流动相；检测波长为360nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备取槲皮素对照品适量，精密称定，加体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液制成每1ml含槲皮素150μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品细粉约1g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比3:1的乙醇-5mol/L盐酸水溶液混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
黄酮类成分的指纹图谱建立：
照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以异丙醇为流动相B，以体积份数比0.5％磷酸水溶液为流动相C，梯度洗脱；流速为1ml/min，检测波长为360nm；理论板数按参照物金丝桃苷峰计算应不低于2000；
参照物溶液的制备取槲皮素、山奈素、金丝桃苷、芦丁对照品适量，精密称定，加体积份数比75％乙醇制成每1ml含槲皮素16μg、山奈素3μg、金丝桃苷74μg、芦丁13μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取待检测制剂细粉6-10g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入体积份数比75％乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用体积份数比75％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得；
供试品特征谱图中应呈现12个特征峰，其中4个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致；与金丝桃苷参照峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，面积在5％以下的色谱峰不做峰面积要求，其相对保留时间和相对峰面积应在规定值的±10％之内；相对保留时间规定值为：0.33(峰1)、0.89(峰2)、1.00(峰3)、1.08(峰4)、1.19(峰5)、1.50(峰6)、1.74(峰7)、1.92(峰8)、2.13(峰9)、2.30(峰10)、2.75(峰11)、3.21(峰12)；相对峰面积规定值为：0.19(峰1)、0.16(峰2)、1.00(峰3)、0.30(峰4)、0.09(峰5)、0.13(峰6)、0.29(峰7)、0.86(峰8)、0.59(峰9)、0.31(峰10)、0.40(峰11)、0.07(峰12)。
5.如权利要求3或4所述的质量检测方法，其特征是，所述制剂为雪山胃宝丸或手参肾宝胶囊。
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| Separation and Quantification of Flavonoid Compounds in Rhododendron anthopogonoides Maxim by High-Performance Liquid Chromatography;L. ZHAO 等;《Acta Chromatographica》;20081231;第20卷(第1期);第135-146页 * |
| 国家药典委员会 编.中华人民共和国药典2010年版 一部.《中华人民共和国药典2010年版 一部》.中国医药科技出版社,2010,第1046-1047页. * |
| 地锦草总黄酮的提取及质量控制研究;江超;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20090815(第8期);摘要，正文第14-22、24-26、32-39页 * |
| 烈香杜鹃中的黄酮类化合物II;戴胜军 等;《中国中药杂志》;20051231;第30卷(第23期);第1830-1833页 * |
| 藏药烈香杜鹃质量标准研究;周燕雪 等;《中成药》;20100430;第32卷(第4期);第619-621页 * |
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