CN107290471B - 一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法 - Google Patents
一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法。该方法分离度好、专属性强、精密度高、重复性好、回收率高、稳定性好、测量结果准确，此外，该方法还可以用于同时测量毛蕊异黄酮的含量，此外，该方法还可以用于同时测量毛蕊异黄酮的含量。以保证药品质量稳定以及临床用药的安全和有效。
Description
1、技术领域
本发明属于中药质量检测技术领域，涉及一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法。
2、背景技术
补肺活血胶囊由黄芪、赤芍、补骨脂组成，益气活血，补肺固肾，用于肺心病(缓解期)属气虚血瘀证，症见：咳嗽气促，或咳喘胸闷，心悸气短，肢冷乏力，腰膝酸软，口唇紫绀，舌淡苔白或舌紫暗等。
《中国药典》2015版第一部记载了补肺活血胶囊处方、制备方法及含量测定方法，仅记载了黄芪甲苷、芍药苷的含量测定方法，并未记载毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法。
为进一步完善补肺活血胶囊的质量标准，确保其药品质量，建立补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法非常必要。
3、发明内容
本发明的目的在于提供一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法，该方法分离度好、专属性强、精密度高、重复性好、回收率高、稳定性好、测量结果准确，此外，该方法还可以用于同时测量毛蕊异黄酮的含量，以保证药品质量稳定以及临床用药的安全和有效。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明要求保护一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，0.2％甲酸溶液为流动相B，流动相B的比例为16～42:84～58，进行梯度洗脱，以毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品为对照，采用高效液相色谱法测定补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，检测波长为260nm，理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于10000。
本发明所述的补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，还可以以毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品为对照，采用高效液相色谱法测定补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和毛蕊异黄酮的含量，检测波长为260nm，理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于13000。
本发明进一步要求保护一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，对照品溶液的制备方法为：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含毛蕊异黄酮葡萄糖苷30μg溶液，即得。
本发明进一步要求保护一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，供试品溶液的制备方法为：取补肺活血胶囊内容物，研细，取1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 25ml，回收溶剂至干，残渣加50％甲醇溶解，定量转移至5ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得。
本发明进一步要求保护一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，测定步骤为：
(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.2％甲酸溶液为流动相B，洗脱梯度至如下表所示，检测波长为260nm，理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于10000；
(2)对照品溶液的制备：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含毛蕊异黄酮葡萄糖苷30μg溶液，即得；
(3)供试品溶液的制备：取补肺活血胶囊内容物，研细，取1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加50％甲醇溶解，定量转移至5ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得；
(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl注入液相色谱仪，测定，即得；
补肺活血胶囊每粒含黄芪以毛蕊异黄酮葡萄糖苷(C22H22O10)计，不少于40μg。
本发明进一步要求保护一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，测定步骤为：
(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.2％甲酸溶液为流动相B，洗脱梯度至如下表所示，检测波长为260nm，理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于13000；
(2)对照品溶液的制备：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含毛蕊异黄酮葡萄糖苷30μg溶液，即得；
(3)供试品溶液的制备：取补肺活血胶囊内容物，研细，取1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加50％甲醇溶解，定量转移至5ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得；
(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl注入液相色谱仪，测定，即得；以毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品的峰面积为对照，计算毛蕊异黄酮的含量，峰位用待测成分色谱峰与毛蕊异黄酮葡萄糖苷色谱峰的相对保留时间确定，毛蕊异黄酮的峰位，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内，即得；
补肺活血胶囊每粒含毛蕊异黄酮葡萄糖苷和毛蕊异黄酮，不得少于0.11mg。
本发明更进一步要求保护一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，本含量测定方法的定量限为毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.002255μg、毛蕊异黄酮0.000748μg。
本发明更进一步要求保护补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，本含量测定方法毛蕊异黄酮葡萄糖苷相对保留时间为1.00，毛蕊异黄酮的相对保留时间为2.00～2.44。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)本发明提供了一种新的补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，该含量测定方法还可以同时测量毛蕊异黄酮的含量。
(2)本发明的方法分离度好、专属性强、精密度高、重复性好、回收率高、稳定性好、测量结果准确，以保证药品质量稳定以及临床用药的安全和有效。
(3)本发明采用一测多评法，以毛蕊异黄酮葡萄糖苷为对照，有效的控制毛蕊异黄酮葡萄糖苷和毛蕊异黄酮的含量，一测多评质量评价模式对毛蕊异黄酮成分具有较好的准确性与可行性，有效的控制补肺活血胶囊的质量。
4、附图说明
图1为毛蕊异黄酮葡萄糖苷紫外吸收光谱图。
图2为毛蕊异黄酮苷紫外吸收光谱图。
图3为补肺活血胶囊毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮含量测定色谱图，依次为混合对照品、补肺活血胶囊(批号：150035)。
图4为毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮含量测定专属性试验，依次为混合对照品、补肺活血胶囊(150035)、黄芪阴性对照、黄芪饮片(16001)、空白溶剂。
图5为毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品标准曲线。
图6为毛蕊异黄酮对照品标准曲线。
图7为标准曲线最低点及噪音色谱图，从上至下依次为线性最低点、噪声。
图8为毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮含量测定重复性试验。
图9为混合对照品稳定性试验。
图10为毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮含量测定稳定性试验。
5、具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说
明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。
本发明实施例中使用的试验材料、试剂和仪器如下：
(1)仪器：十万分之一电子分析天平(MS205DU，瑞士Mettler Toledo公司)；万分之一电子分析天平(ME204，瑞士Mettler toledo公司)；超纯水器 (Simplicity，美国密理博Millipore公司)；数控超声波清洗器(KQ500DE，昆山市超声仪器有限公司)；电热恒温水浴锅(HWS24，上海一恒科技有限公司)；旋转蒸发仪(SB-1200水浴锅，N-1100)；Ultimate3000DGLC高效液相色谱仪(美国Dionex公司，DGP-3600SD双三元泵、SRD-3600脱气机、 WPS-3000SL自动进样器、TCC3000-RS柱温箱、DAD检测器、Chromeleon6.8 数据处理软件)；Agilent1260高效液相色谱仪(美国Agilent公司，G1311B四元泵、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱、G1315D DAD检测器、 ChemStation Edition数据处理软件)；色谱柱：Hitachi High-Tech C18 (4.6×250mm，5μm，NO.27H5I-024)、Welch UltimateXB-C18(4.6×250mm， 5μm，S.N.211503514)、Sepax Technologies Amethyst C18-H(4.6×250mm， 5μm，S.N.05111690391、S.N.11041698381)、Thermo BDSHYPERSIL C18 (4.6×250mm，5μm，S.N.10263885)。
(2)试药实验溶剂：甲醇(天津大茂化学试剂厂，20160316、20160817、 20190901分析纯)。
(3)液相色谱所用试剂：甲醇(Honeywell，PBBG1H，色谱级)；乙腈 (Honeywell，Q4TA1H，色谱级)；甲酸(阿拉丁，D1502086，色谱级)。
(4)对照品毛蕊异黄酮(成都普菲德生物技术有限公司，151208， 99.3％)；毛蕊异黄酮葡萄糖苷(中国食品药品检定研究院，111920-201505，纯度：97.1％)。
(5)样品：见下表1。
表1补肺活血胶囊样品来源
实施例1色谱条件的选择
1、流动相
参照2015年版《中国药典》黄芪药材中【含量测定】毛蕊异黄酮葡萄糖苷项下，以乙腈为流动相A，0.2％甲酸溶液为流动相B，调整洗脱梯度至如下表 2所示时，毛蕊异黄酮葡萄糖苷与毛蕊异黄酮均有较好的分离度。
表2流动相洗脱梯度
2、检测波长
取毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮对照品的甲醇溶液测定紫外吸收光谱，在260nm处二者均有较大吸收，故选择260nm为检测波长。见附图1和附图2。
实施例2样品的制备
1、对照品溶液的制备：分别取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含毛蕊异黄酮葡萄糖苷30μg、毛蕊异黄酮20μg的混合溶液，即得。
2、供试品溶液的制备：取本品内容物，研细，取约1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加50％甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得。
3、供试品溶液制备溶剂的选择：本试验对比了甲醇与50％甲醇溶液作为提取溶剂时，补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷与毛蕊异黄酮的含量的变化。本实验中供试品的称样量较大，为了避免未完全提取的情况发生，故同时对比了加大一倍体积溶剂时两种物质的提取情况。结果显示(见表3)，均使用加热回流提取2小时的情况下，选择甲醇或50％甲醇作为提取溶剂，将提取溶剂体积翻倍，两种物质的提取量一致，均无显著性差异。说明针对供试品中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷与毛蕊异黄酮，两种溶剂的提取无明显差异，鉴于50％甲醇溶解范围更大，提取到的杂质更多，故选择甲醇作为提取溶剂。同时，为了节省溶剂，确定溶剂体积为50ml。
表3毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮供试品溶液制备提取溶剂的选择
4、供试品溶液制备提取时间的选择：本试验对比了加热回流1小时和2小时，补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷与毛蕊异黄酮的含量的变化。结果显示(见表4)，加热回流提取1小时与2小时的提取量没显著性差异，RAD值均小于1％。综合考虑，确定加热回流的提取时间为1小时。
表4毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄含量测定供试品溶液制备提取时间的选择
实施例3系统适应性试验
分别吸取对照品溶液及供试品溶液注入液相色谱仪测定，在此色谱条件下毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮与其它组分达到基线分离，分离度R>1.5，根据不同色谱柱理论塔板数(Hitachi柱约为13000；Sepax柱约为15000； Welch柱约为17000；Thermo柱约为12000)，拟定本样品理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷计算不低于12000。见表5、表6和附图3。
表5系统适应性数据(毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品)
表6系统适应性数据(毛蕊异黄酮对照品)
注：表格中分离度为精密度中分离度数据
实施例4专属性试验
空白溶剂为甲醇，进样即得结果图4。
取补肺活血胶囊(批号：150035)、黄芪阴性对照及黄芪饮片分别按“供试品溶液的制备”项下方法制备，用相同的色谱条件进行分析，结果表明，毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰和毛蕊异黄酮峰的鉴定均不受溶剂、其他药材及辅料等因素干扰，具有良好的专属性。
实施例5线性关系及范围
取混合对照品溶液(毛蕊异黄酮葡萄糖苷浓度：45.09μg/ml；毛蕊异黄酮浓度：14.95μg/ml)，采用自动进样器分别进样0.5、1、2、5、10、15、20μl，即毛蕊异黄酮葡萄糖苷进样量为0.02254、0.04509、0.09018、0.2254、0.4509、 0.6764、0.9018μg，毛蕊异黄酮进样量为0.00748、0.01495、0.02990、0.07475、 0.1495、0.2242、0.2990μg，在260nm下测定，以峰面积积分值A对进样量C 进行回归分析。毛蕊异黄酮葡萄糖苷回归方程为：A＝47.456C-0.1418，相关系数r＝1，结果表明毛蕊异黄酮葡萄糖苷在0.0225μg～0.9018μg范围内，浓度与峰面积呈良好线性关系；毛蕊异黄酮回归方程为：A＝68.324C-0.0638，相关系数 r＝1，结果表明毛蕊异黄酮在0.0075～0.2990μg范围内，浓度与峰面积呈良好线性关系。线性关系数据见表7～8，标准曲线见附图5～6。
表7毛蕊异黄酮葡萄糖苷线性及范围
表8毛蕊异黄酮线性及范围
实施例6标准曲线最低点
取混合对照品溶液(毛蕊异黄酮葡萄糖苷浓度：45.09μg/ml；毛蕊异黄酮浓度：14.95μg/ml)适量，进样0.5μl(即对应毛蕊异黄酮葡萄糖苷进样量为 0.02254μg、毛蕊异黄酮进样量为0.00748μg)，依法测定，连续进样5次，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮峰面积RSD分别为0.79％和1.89％，即本含量测定方法的定量限为毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.002255μg、毛蕊异黄酮0.000748μg (见表9～10，附图7)。
表9毛蕊异黄酮葡萄糖苷定量下限
表10毛蕊异黄酮定量下限
实施例7重复性试验
取同一批号补肺活血胶囊样品平行6份(批号：150035)，按供试品项下方法处理后，按上述色谱条件进行含量测定，并对所得数据进行处理，计算毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮的平均含量及RSD(见表11)，结果表明该方法重复性良好(见附图8)。
表11毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮含量测定重复性试验
实施例8稳定性试验
取同一批号补肺活血胶囊样品(批号：150035)及对照品适量，按供试品项下方法处理后，按上述色谱条件进行含量测定，在0、2、4、6、8、12、24、48h进样10μl，测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮的峰面积及RSD值(见表12)，结果表明补肺活血胶囊供试品溶液及混合对照品溶液在48h内稳定性良好(见附图9～10)。
表12毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮含量测定稳定性试验
实施例9精密度试验
取同一批号补肺活血胶囊样品(批号：150035)，按上述色谱条件，于高效液相色谱仪上连续进样6次，分别测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮的峰面积，计算RSD(见表13)。结果上述2种黄酮类成分峰面积的RSD均小于2.0％，表明该方法精密度良好。
表13毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮含量测定精密度试验
实施例10加样回收率试验
精密称取已测毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮含量的补肺活血胶囊(批号：150035，平均含量为毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.3684mg/g，毛蕊异黄酮 0.1258mg/g)适量，平行9份，分别精密加入低、中、高浓度的混合对照品，按供试品项下操作，依法测定，计算回收率(见表14～15)，表明该方法回收率良好。
表14补肺活血胶囊含量测定加样回收率试验(毛蕊异黄酮葡萄糖苷)
表15补肺活血胶囊含量测定加样回收率试验(毛蕊异黄酮)
实施例11补肺活血胶囊一测多评与外标法测定结果的比较
首先使用外标法对广东雷允上药业有限公司提供的4批饮片、4批中间体及14批补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和毛蕊异黄酮进行含量测定，再用建立的一测多评法对两种物质的含量进行计算，最后将2种方法得到的结果以相对误差进行评价。结果表明，2种方法所得毛蕊异黄酮的含量测定结果无显著性差异。表明建立的毛蕊异黄酮葡萄糖苷一测多评质量评价模式对毛蕊异黄酮成分具有较好的准确性与可行性(见表16～22)。
表16一测多评法与外标法测得黄芪药材中待测成分含量
表17一测多评法与外标法测得中间体中待测成分含量
表18一测多评法与外标法测得补肺活血胶囊中待测成分含量
表19补肺活血胶囊含量测定结果
表20毛蕊异黄酮葡萄糖苷在黄芪药材、中间体、胶囊间的相关性研究
表21毛蕊异黄酮在黄芪药材、中间体、胶囊间的相关性研究
表22总含量在黄芪药材、中间体、胶囊间的相关性研究
实施例12毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.2％甲酸溶液为流动相B，洗脱梯度至如下表所示；检测波长为 260nm。理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于10000。
流动相洗脱梯度
对照品溶液的制备：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含毛蕊异黄酮葡萄糖苷30μg溶液，即得。
供试品溶液的制备：取补肺活血胶囊内容物，研细，取约1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加50％甲醇溶解，定量转移至5ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl注入液相色谱仪，测定，即得。以毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品的峰面积为对照，计算毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量。
补肺活血胶囊每粒含黄芪以毛蕊异黄酮葡萄糖苷(C22H22O10)计，不得少于 40μg。
实施例13毛蕊异黄酮葡萄糖苷及毛蕊异黄酮的含量测定
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.2％甲酸溶液为流动相B，洗脱梯度至如下表19所示；检测波长为260nm。理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于13000。
表19流动相洗脱梯度
对照品溶液的制备：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含毛蕊异黄酮葡萄糖苷30μg溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品内容物，研细，取约1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加50％甲醇溶解，定量转移至5ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl注入液相色谱仪，测定，即得。以毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品的峰面积为对照，计算毛蕊异黄酮的含量。峰位用待测成分色谱峰与毛蕊异黄酮葡萄糖苷色谱峰的相对保留时间确定。
毛蕊异黄酮的峰位，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内，即得。相对保留时间见下表23。
表23相对保留时间
本品每粒含总黄酮以毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮之和计，不得少于0.11mg。
Claims (6)
1.一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，0.2%甲酸溶液为流动相B，流动相B的比例为16-42:84-58，进行梯度洗脱，洗脱梯度如下表所示：
以毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品为对照，采用高效液相色谱法测定补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，检测波长为260nm，理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于10000；
对照品溶液的制备方法为：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含毛蕊异黄酮葡萄糖苷30μg溶液，即得；
供试品溶液的制备方法为：取补肺活血胶囊内容物，研细，取1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加50%甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加50ml甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.如权利要求1所述的补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，还可以以毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品为对照，采用高效液相色谱法测定补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和毛蕊异黄酮的含量，检测波长为260nm，理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于13000。
3.如权利要求1所述的补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，测定步骤为：
（1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.2%甲酸溶液为流动相B，洗脱梯度如下表所示，检测波长为260nm，理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于10000；
（2）对照品溶液的制备：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含毛蕊异黄酮葡萄糖苷30μg溶液，即得；
（3）供试品溶液的制备：取补肺活血胶囊内容物，研细，取1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加50%甲醇溶解，定量转移至5ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得；
（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl注入液相色谱仪，测定，即得；
补肺活血胶囊每粒含黄芪以毛蕊异黄酮葡萄糖苷（C22H22O10）计，不少于40μg。
4.如权利要求2所述的补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，测定步骤为：
（1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.2%甲酸溶液为流动相B，洗脱梯度如下表所示，检测波长为260nm，理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于13000；
（2）对照品溶液的制备：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含毛蕊异黄酮葡萄糖苷30μg溶液，即得；
（3）供试品溶液的制备：取补肺活血胶囊内容物，研细，取1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加50%甲醇溶解，定量转移至5ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得；
（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl注入液相色谱仪，测定，即得；
以毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照区的峰面积为对照，计算毛蕊异黄酮的含量，峰位用待测成分色谱峰与毛蕊异黄酮葡萄糖苷色谱峰的相对保留时间确定，毛蕊异黄酮的峰位，其相对保留时间应在规定值的±10%范围之内，即得；
补肺活血胶囊每粒含毛蕊异黄酮葡萄糖苷和毛蕊异黄酮，不得少于0.11mg。
5.如权利要求1或2所述的补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，本含量测定方法的定量限为毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.002255μg、毛蕊异黄酮0.000748μg。
6.如权利要求1或2所述的补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，毛蕊异黄酮葡萄糖苷相对保留时间为1.00，毛蕊异黄酮的相对保留时间为2.00-2.44。
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Denomination of invention: A Method for Determining the Content of Isoflavone Glucoside in Bufei Huoxue Capsules Effective date of registration: 20230329 Granted publication date: 20180817 Pledgee: Industrial and Commercial Bank of China Limited Yunfu Yun'an Branch Pledgor: GUANGDONG LEIYUNSHANG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Registration number: Y2023980036720 |
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