CN108956829B - 一种同时测定香砂养胃片中六种成分的方法 - Google Patents

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Abstract

一种同时测定香砂养胃片中六种成分的方法，包括以下步骤：分别称取去氢木香内酯、油酸、硬脂酸、厚朴酚、4‑O‑甲基和厚朴酚、和厚朴酚置容量瓶中，加无水乙醇，混匀，得对照品溶液；精密吸取对照品溶液至容量瓶中，加无水乙醇，混匀，得混合对照品溶液；取香砂养胃片研细，取样品细粉，精密称定，置锥形瓶中，加入无水乙醇，超声处理，混匀，用滤膜滤过；精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，测定；色谱条件为：载气：氮气；进样口温度：250℃；柱温箱温度：210℃；检测器温度：280℃；载气流速：3.0ml/min；尾吹：30ml/min，分流比：2:1；空气流量：200ml/min；氢气燃气流量：30ml/min；进样量：1μl；检测器：FID检测器。该方法操作简单，检测结果更加准确、可信。

Description

一种同时测定香砂养胃片中六种成分的方法
技术领域
本发明涉及化学药品质量检测领域，具体涉及一种采用气相色谱同时测定中成药香砂养胃片中六种成分的方法。
背景技术
香砂养胃片的处方由木香、麦芽、陈皮、白术、苍术、厚朴、甘草等组成，具有健胃消食，行气止痛的功效，用于胃肠衰弱、消化不良、胸膈满闷、腹痛呕吐、肠鸣泄泻等症状。香砂养胃片中木香能行气止痛、健脾消食，为君药，其主要成分有木香烃内酯、去木香烃内酯；厚朴能燥湿消痰，下气除满，为臣药，其主要成分有厚朴酚、4-O-甲基和厚朴酚、和厚朴酚，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗炎镇痛等药理作用；硬脂酸镁为处方中的辅料，为片剂润滑剂，成分为硬脂酸镁与棕榈酸镁。
据有关文献报道，大部分采用高效液相色谱梯度洗脱法同时测定香砂养胃片中去氢木香内酯、和厚朴酚和厚朴酚等活性成分的含量时，存在测定耗时长，不环保等缺点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种同时测定香砂养胃片中六种成分的方法，该方法利用气相色谱同时测定香砂养胃片中去氢木香内酯、油酸、硬脂酸、厚朴酚、4-O-甲基和厚朴酚与和厚朴酚的含量，有效解决现有采用高效液相色谱梯度洗脱法测定耗时长，不环保的技术难题，其操作简单，保证香砂养胃片的质量检测结果更加准确、可信。
为实现上述目的，本发明是采用如下技术方案实现的：
一种同时测定香砂养胃片中六种成分的方法，具体操作步骤如下：
步骤S1、去氢木香内酯对照品溶液的制备：精密称取去氢木香内酯对照品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得浓度399.20μg·mL-1的去氢木香内酯对照品溶液；
步骤S2、油酸对照品溶液的制备：精密称取油酸对照品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得浓度301μg·mL-1的油酸对照品溶液；
步骤S3、硬脂酸对照品溶液的制备：精密称取去氢木香内酯对照品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得浓度1001μg·mL-1的硬脂酸对照品溶液；
步骤S4、厚朴酚对照品溶液的制备：精密称取厚朴酚对照品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得浓度1024.56μg·mL-1的厚朴酚对照品溶液；
步骤S5、4-O-甲基和厚朴酚对照品溶液的制备：精密称取4-O-甲基和厚朴酚对照品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得浓度203μg·mL-1的4-O-甲基和厚朴酚对照品溶液；
步骤S6、和厚朴酚对照品溶液的制备：精密称取和厚朴酚对照，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得浓度521.76μg·mL-1的和厚朴酚对照品溶液；
步骤S7、混合对照品溶液的制备：分别精密吸取去氢木香内酯、油酸、硬脂酸、厚朴酚、4-O-甲基和厚朴酚与和厚朴酚对照品溶液为1ml、1ml、1ml、1ml、2ml、0.5ml，至容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得混合对照品溶液；
步骤S8、含量测定供试品溶液的制备：取至少10片香砂养胃片，精密称定，研细，取样品细粉，精密称定，置锥形瓶中，精密加入无水乙醇，超声处理，混匀，用滤膜滤过；
步骤S9、测定：分别精密吸取混合对照品溶液和含量测定供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，记录12min的色谱图，按外标法以峰面积计算，即得；
其中，气相色谱条件为：
色谱柱：WondaCAP 5 30m×320μm×0.25μm毛细管色谱柱；
载气：氮气；
进样口温度：250℃；
柱温箱温度：210℃；
检测器温度：280℃；
载气流速：3.0ml/min；
尾吹：30ml/min，分流比：2:1；
空气流量：200ml/min；
氢气燃气流量：30ml/min；
进样量：1μl；
检测器：FID检测器。
本发明的优点和积极效果：本发明建立了一种采用气相色谱同时测定香砂养胃片中去氢木香内酯、油酸、硬脂酸、厚朴酚、4-O-甲基和厚朴酚与和厚朴酚含量的方法，该方法与现有常用的高效液相检测方法相比，进样量少，色谱分析时间短，操作简单，重现性和稳定性好，检测灵敏度高，检测结果准确，理论板数均超过25000，优于高效液相测定的理论板数值；另外，该方法采用试剂仅为无水乙醇，对环境污染少，环保，且能同时测定药物活性成分与辅料成分控制，可全面、更有效地控制该药的质量。
附图说明
图1是去氢木香内酯线性回归方程。
图2是油酸线性回归方程。
图3是硬脂酸线性回归方程。
图4是厚朴酚线性回归方程。
图5是4-O-甲基和厚朴酚线性回归方程。
图6是和厚朴酚线性回归方程。
图7是混合对照品气相色谱图。
图8是批号为170424供试品气相色谱图。
图9是阴性样品气相色谱图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施方式对本发明作以进一步的阐述，以便本领域的技术人员更了解本发明所述的技术方案，但并不以此限制本发明。
仪器与试药
仪器：安捷伦7890B气相色谱仪；火焰离子化检测仪检测器；WondaCAP 5 30m×320μm×0.25μm毛细管色谱柱；电子天平BT125D型万分之一分析天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂制造)；KQ-300DE型数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)
试药：去氢木香内酯对照品(批号：111525-201209，含量：99.8％，来源：中国食品药品检定研究院)；油酸对照品(批号：111621-200301，来源：中国食品药品检定研究院)；硬脂酸对照品(批号：190032-201603，来源：中国食品药品检定研究院)；厚朴酚对照品(批号：110729-201513，含量：98.8％，来源：中国食品药品检定研究院)；4-O-甲基和厚朴酚对照品(参照中国专利CN 102159205 A公开的方法制备)；和厚朴酚对照品(批号：110730-201313，含量：99.1％，来源：中国食品药品检定研究院)；香砂养胃片(云南大唐汉方制药股份有限公司；批号：170424；另外按照国家中成药标准，标准编号为：WS-10392(ZD-0392)-2002，自制两批样品，批号为180508；180519)；阴性样品制备：取按照国家中成药标准，标准编号为：WS-10392(ZD-0392)-2002公布的香砂养胃片片处方工艺，去除木香、厚朴、陈皮、砂仁、豆蔻、广藿香油、硬脂酸镁辅料制成阴性样品；无水乙醇(色谱纯，天津市康科德科技有限公司，批号：170109)。
实施例1
一种同时测定香砂养胃片中六种成分的方法，具体操作步骤如下：
步骤S1、去氢木香内酯对照品溶液的制备：精密称取去氢木香内酯对照品4.00mg，置10ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得去氢木香内酯对照品溶液；
步骤S2、油酸对照品溶液的制备：精密称取油酸对照品3.01mg，置10ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得油酸对照品溶液；
步骤S3、硬脂酸对照品溶液的制备：精密称取去氢木香内酯对照品10.01mg，置10ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得硬脂酸对照品溶液；
步骤S4、厚朴酚对照品溶液的制备：精密称取厚朴酚对照品10.37mg，置10ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得厚朴酚对照品溶液；
步骤S5、4-O-甲基和厚朴酚对照品溶液的制备：精密称取4-O-甲基和厚朴酚对照品2.03mg，置10ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得4-O-甲基和厚朴酚对照品溶液；
步骤S6、和厚朴酚对照品溶液的制备：精密称取和厚朴酚对照品10.53mg，置10ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得和厚朴酚对照品溶液；
步骤S7、混合对照品溶液制备：分别精密吸取去氢木香内酯、油酸、硬脂酸、厚朴酚、4-O-甲基和厚朴酚与和厚朴酚对照品溶液分别为1ml、1ml、1ml、1ml、2ml、0.5ml，至20ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得混合对照品溶液。
步骤S8、含量测定供试品溶液的制备：取香砂养胃片20片，精密称定，研细，取样品细粉1.5032g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，超声处理5min，混匀，用0.45μm滤膜滤过；
步骤S9、阴性样品溶液的制备：取阴性样品1.5011g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，超声处理5min，混匀，用0.45μm滤膜滤过；
步骤S10、测定：分别精密吸取混合对照品溶液、阴性样品溶液和供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，记录12min的色谱图，按外标法以峰面积计算，即得；
其中，气相色谱条件为：
色谱柱：WondaCAP 5 30m×320μm×0.25μm毛细管色谱柱
载气：氮气；
进样口温度：250℃；
柱温箱温度：210℃；
检测器温度：280℃；
载气流速：3.0ml/min；
尾吹：30ml/min，分流比：2:1；
空气流量200ml/min；
氢气燃气流量30ml/min；
进样量：1μl；
检测器：FID检测器。
检测结果见图7至图9，其中，图7至图9中标记的1为去氢木香内酯、2为油酸、3为硬脂酸、4为厚朴酚、5为4-O-甲基和厚朴酚、6为和厚朴酚。
方法学考查
1.1线性关系：精密量取去氢木香内酯(浓度399.20μg·mL-1)、油酸(浓度301μg·mL-1)、硬脂酸(浓度1001μg·mL-1)、厚朴酚(浓度1024.56μg·mL-1)、4-O-和厚朴酚(浓度203μg·mL-1)、和厚朴酚(浓度521.76μg·mL-1)0.05mL、0.25mL、0.5mL、2.5mL、5mL置10mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，注入气相色谱仪，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，峰面积对浓度作线性方程，得线性方程结果见表1。
表1线性关系方程
成分 回归方程 相关系数 线性范围(μg/mL)
去氢木香内酯 y＝0.6903x+43.874 0.9991 1.996～199.6
油酸 y＝2.665x+18.409 0.9992 1.505～150.5
硬脂酸 y＝0.9132x+43.11 0.9991 5.005～500.5
厚朴酚 y＝0.8283x+73.12 0.9993 5.123～512.3
4-O-甲基和厚朴酚 y＝0.7698x+83.43 0.9991 1.015～101.5
和厚朴酚 y＝0.9907x+164.06 0.9993 2.609～260.9
上述结果表明，去氢木香内酯、油酸、硬脂酸、厚朴酚、4-O-甲基和厚朴酚与和厚朴酚具有良好的线性关系，见附图1至6。
1.2精密度试验：精密吸取去氢木香内酯、油酸、硬脂酸、厚朴酚、4-O-甲基和厚朴酚与和厚朴酚对照品溶液，连续进样6次，测定其峰面积，RSD分别为0.49％(n＝6)，结果见表2，结果表明仪器精密度良好。
表2精密度试验结果
Figure BDA0001763030640000051
Figure BDA0001763030640000061
1.3稳定性试验：取同一供试品溶液，按照上述色谱条件分别做0、3、6、9和12h的色谱图，测定其稳定性，去氢木香内酯、油酸、硬脂酸、厚朴酚、4-O-甲基和厚朴酚与和厚朴酚的峰面积的RSD为0.86％，由实验数据说明，样品溶液在12h内基本稳定，该方法稳定性良好，结果见表3。
表3稳定性试验结果
Figure BDA0001763030640000062
Figure BDA0001763030640000071
1.4重复性试验：取同一批号的供试品6份，按照含量测定样品溶液的配制方法制备溶液，并依照上述色谱条件测定，表明方法重复性良好，结果见表4。
表4重复性试验结果
Figure BDA0001763030640000072
1.5回收率试验：精密称取已知含量的供试品6份(批号为170424)每份约0.75g，置50ml量瓶中，精密加入与其含有量相应对照品溶液适量，加无水乙醇定容至刻度，分别按照供试品制备方法制备供试品溶液，按色谱条件测定，记录峰面积，计算回收率(n＝6)，结果见表5。
表5回收率试验结果
Figure BDA0001763030640000073
Figure BDA0001763030640000081
1.6样品含量测定：按上述色谱条件测定三批供试品溶液，结果测定样品中含去氢木香内酯、油酸、硬脂酸、厚朴酚、4-O-甲基和厚朴酚与和厚朴酚值，结果见表6。
表6三批样品含量测定结果
Figure BDA0001763030640000082

Claims (1)

1.一种同时测定香砂养胃片中六种成分的方法，其特征在于：具体操作步骤如下：
步骤S1、去氢木香内酯对照品溶液的制备：精密称取去氢木香内酯对照品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得浓度399.20μg·mL-1的去氢木香内酯对照品溶液；
步骤S2、油酸对照品溶液的制备：精密称取油酸对照品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得浓度301μg·mL-1的油酸对照品溶液；
步骤S3、硬脂酸对照品溶液的制备：精密称取去氢木香内酯对照品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得浓度1001μg·mL-1的硬脂酸对照品溶液；
步骤S4、厚朴酚对照品溶液的制备：精密称取厚朴酚对照品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得浓度1024.56μg·mL-1的厚朴酚对照品溶液；
步骤S5、4-O-甲基和厚朴酚对照品溶液的制备：精密称取4-O-甲基和厚朴酚对照品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得浓度203μg·mL-1的4-O-甲基和厚朴酚对照品溶液；
步骤S6、和厚朴酚对照品溶液的制备：精密称取和厚朴酚对照，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得浓度521.76μg·mL-1的和厚朴酚对照品溶液；
步骤S7、混合对照品溶液的制备：分别精密吸取去氢木香内酯、油酸、硬脂酸、厚朴酚、4-O-甲基和厚朴酚与和厚朴酚对照品溶液为1ml、1ml、1ml、1ml、2ml、0.5ml，至容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，得混合对照品溶液；
步骤S8、含量测定供试品溶液的制备：取至少10片香砂养胃片，精密称定，研细，取样品细粉，精密称定，置锥形瓶中，精密加入无水乙醇，超声处理，混匀，用滤膜滤过；
步骤S9、测定：分别精密吸取混合对照品溶液和含量测定供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，记录12min的色谱图，按外标法以峰面积计算，即得；
其中，气相色谱条件为：
色谱柱：WondaCAP 5 30m×320μm×0.25μm毛细管色谱柱；
载气：氮气；
进样口温度：250℃；
柱温箱温度：210℃；
检测器温度：280℃；
载气流速：3.0ml/min；
尾吹：30ml/min，分流比：2:1；
空气流量：200ml/min；
氢气燃气流量：30ml/min；
进样量：1μl；
检测器：FID检测器。
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