CN112730687B - 一种同时测定木香顺气丸中木脂素类和萜类成分含量的方法 - Google Patents
一种同时测定木香顺气丸中木脂素类和萜类成分含量的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种同时测定木香顺气丸中木脂素类和萜类成分含量的方法，包括如下步骤：木香顺气丸粉末和吸附剂混合研磨，研磨好的固体混合物转移至移液枪头中，加入洗脱剂加压洗脱，洗脱液离心后取上清液即为木香顺气丸提取液；将木香顺气丸提取液经高效液相色谱检测，得到木香顺气丸中木脂素类和萜类成分的峰面积代入到相应的标准曲线中得到木香顺气丸中木脂素类和萜类成分的含量。本发明采用基质固相分散与一次性移液枪头提取相结合的技术来提取中成药木香顺气丸中的有效成分，集提取与分离为一体，且样品、吸附剂及洗脱溶剂用量极微量，具有实验成本低、操作简单方便、提取分离时间短、提取效率高等优点。
Description
技术领域
本发明涉及中药分析领域，具体涉及一种同时测定木香顺气丸中木脂素类和萜类成分含量的方法，特别涉及一种同时对木香顺气丸中极微量的木脂素类和萜类进行含量测定的方法。
背景技术
为了克服传统的样品前处理技术如回流提取、索氏提取、超声提取耗时、溶剂消耗量大、样品消耗量大等缺点，一系列微萃取方法被开发并受到广泛关注，如分散液-液微萃取，分散微固相萃取，固相微萃取等，并且由于其样品与有机溶剂消耗低，操作简单，萃取时间短和高预浓缩/分离能力而广泛应用于样品前处理中。
移液枪头提取(DPX)是一种日益流行的微萃取方法，具有低样品消耗，有机溶剂量少，效率高和回收率高，减少样品操作和萃取时间的优点，已被用于分析食品，生物基质样品和废液中的各种类型的分析物。
基质固相分散萃取(MSPD)是一种新型样品前处理技术，集萃取与纯化为一步，具有溶剂用量少、对环境污染少、萃取时间短、操作简洁、提取效率高等优点。此外，近年来开发了一种将DPX和MSPD相结合的方法，称为移液枪头基质固相分散萃取(PT-MSPD)，并已经被应用于面霜和食品中的有毒成分的分析检测，且与单个DPX或MSPD相比，PT-MSPD具有更快，更简单和更经济的优点。
目前，以分子筛SBA-3作为吸附剂以提取中药中的天然活性成分尚未被报道。
木香顺气丸是一种传统的名贵理气中药，具有行气化湿，健脾和胃之功效，主治湿浊中阻、脾胃不和所致的胸膈痞闷、脘腹胀痛、呕吐恶心、嗳气纳呆，常用于治疗胃肠胀气胸胁胀满，食积气滞肝气郁结不舒等症。木香顺气丸以木香、香附疏肝理气，和中止痛为君药。厚朴、青皮行气燥湿，散结消积；枳壳、槟榔行气导滞宽中；陈皮、砂仁理气化湿和中；苍术燥湿健脾，共为臣药。甘草为使，调和诸药。全方配伍，共奏行气化湿，健脾和胃之功。中国药典2015版将和厚朴酚与厚朴酚作为指标性成分控制木香顺气丸的质量。
常用的提取木香顺气丸中有效成分的方法有加热回流提取法、超声提取法，但是普遍存在有机溶剂用量大、样品浪费、环境污染大、耗时长、操作繁琐等缺点。
因此，继续开发一种快速，简单，环境友好检测木香顺气丸中的有效成分的方法。
发明内容
本发明的目的在于要解决常规方法存在的耗时长、样品用量大、有毒有机溶剂用量大的问题，并建立一种更高效、更简单的微提取及同时检测木香顺气丸中木脂素类和萜类成分的方法。
本发明具体提供了一种以分子筛SBA-3作为吸附剂，结合移液枪头微基质固相分散萃取技术，提取检测木香顺气丸中的木脂素类和萜类有效成分的方法。
本发明采用的技术方案是：
一种同时测定木香顺气丸中木脂素类和萜类成分含量的方法，包括如下步骤：
木香顺气丸粉末和吸附剂混合研磨，研磨好的固体混合物转移至移液枪头中，加入洗脱剂加压洗脱，洗脱液离心后取上清液即为木香顺气丸提取液；
将木香顺气丸提取液经高效液相色谱检测，得到木香顺气丸中木脂素类和萜类成分的峰面积，分别代入到相应的标准曲线中得到木香顺气丸中木脂素类和萜类成分的含量。
所述的木脂素类成分为和厚朴酚或厚朴酚；所述的萜类成分为木香烃内酯或去氢木香内酯。
所述吸附剂为分子筛SBA-3。
本发明要点在于以移液枪头微基质固相分散萃取技术做为样品前处理方法，并将分子筛SBA-3作为移液枪头微基质固相分散萃取的吸附剂与木香顺气丸粉末中的目标分子吸附结合，从而使得目标分子从木香顺气丸粉末中分离出来，然后用洗脱剂进行洗脱，得到含有目标分子的洗脱液，并采用HPLC进行分析检测。与药典的提取方法相比，本发明的样品和有机溶剂使用量大大减少，耗时更短，经济，环保，安全，快速。
分子筛SBA-3适用于木香顺气丸中木脂素类和萜类成分含量检测的原因可能是由于分子筛SBA-3具有的大量Si-O-Si和Si-OH的基团，其与目标分析物之间氢键和静电相互作用。且介孔材料SBA-3具有较大的表面积也促进了吸附剂与目标分析物之间吸附过程。以SBA-3作为吸附剂并结合移液枪头微基质固相分散萃取技术用于木香顺气丸中活性成分的提取检测尚未见报道。
所述移液枪头内中装有适量脱脂棉的避免固体混合物流出，固体混合物转移至移液枪头中后，在固体混合物上方铺适量脱脂棉。
所述标准曲线的制作方法为：用相同的高效液相色谱检测条件获得和厚朴酚的谱图，以和厚朴酚的浓度为横坐标，以和厚朴酚对照品溶液谱图中的峰面积为纵坐标，制作和厚朴酚标准曲线；按同样的方法制作厚朴酚、木香烃内酯、去氢木香内酯的标准曲线。
进一步，所述木香顺气丸粉末和分子筛SBA-3的质量比为1:1～3，优选为1:1.9～2.1，更进一步优选为1:2。
进一步，步骤(1)所述研磨采用研钵研磨90～180s，优选为115～125s。
进一步，步骤(1)所述洗脱剂为下列之一：甲醇、乙醇、乙腈，优选为甲醇。
所述高效液相色谱检测条件为：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径≤5μm；流动相为体积分数0.08～0.12％的甲酸或乙酸的水溶液与乙腈的混合溶液；柱温为20-35℃；流速为0.8-1.2mL/min；紫外检测器，检测波长为220～230nm。
与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果：
本发明采用基质固相分散与一次性移液枪头提取相结合的技术来提取中成药木香顺气丸中的有效成分，集提取与分离为一体，且样品、吸附剂及洗脱溶剂用量极微量，具有实验成本低、操作简单方便、提取分离时间短、提取效率高等优点。
目前SBA-3主要用于催化以及在污水中染料的去除，本发明是首次将SBA-3作为吸附剂用于中药制剂木香顺气丸中复杂基质的提取分离，同时测定木香顺气丸中两种木脂素类和两种萜类成分的含量，为木香顺气丸的质量控制提供一种更加绿色环保、廉价、快速、简便、高效的新方法。
附图说明
图1为本发明移液枪头微基质固相分散微萃取方法的工艺流程图。
图2为SBA-3的表征，其中，图(a)为SBA-3的扫描电镜图像；图(b)为SBA-3的FT-IR光谱。
图3为考察基质固相分散萃取工艺中的萃取效果柱状图，图中，1、2、3、4分别代表木香顺气丸中木香顺气丸中萜类和木脂素类成分，分别为：1：和厚朴酚；2：厚朴酚；3：木香烃内酯；4：去氢木香内酯；图(a)为吸附剂种类萃取效果柱状图；(b)样品与吸附剂的质量比萃取效果柱状图；(c)研磨时间萃取效果柱状图；(d)洗脱溶剂种类萃取效果柱状图；(e)洗脱溶剂体积萃取效果柱状图。
图4为BBD实验的3D响应面图可说明相应与参数之间联系以及三个参数之间的相互作用，其中，图(a)为样品与吸附剂的质量比与研磨时间的关系；图(b)为样品与吸附剂的质量比与洗脱溶剂体积的关系；图(c)为研磨时间与洗脱剂溶剂体积的关系。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
本发明实施例所用木香顺气丸粉末根据中国药典2015年版制备。
本发明实施例所用硅胶mSiO2·nH2O，优选购自上海安谱实验科技股份有限公司。
本发明实施例所用C18，购自上海正亚化工有限公司。
木香顺气丸对照品溶液的制备方法具体步骤为：分别精密称取适量和厚朴酚、厚朴酚、木香烃内酯及去氢木香烃内酯对照品，用甲醇混合溶解定容至1mL容量瓶中，制成上述各种对照品浓度分别为660.00μg/mL、721.00μg/mL、416.00μg/mL、226.00μg/mL的对照品混合液。
本发明中实施例中采用的仪器为安捷伦高效液相色谱系统(Agilent1260Infinity LC，Agilent Technologies，Santa Clara，CA，USA)配备真空抽气泵，二元流动相系统，恒温自动进样器，恒温柱温箱。色谱柱ZORBAX SB-C18 column(4.6×250mm,5μm)，柱温35℃。流动相为乙腈(A)和0.1％甲酸水(69：31，V/V)(B)；进样量：10μL，流速：1mL/min，检测波长：225nm。
实施例1、分子筛SBA-3制备
本发明所述的分子筛SBA-3可以市售可得，也可以自行制备得到，制备方法如下所述：
正硅酸乙酯和十六烷基三甲基溴化铵分别作为硅源和模板。首先，将1g十六烷基三甲基溴化铵和20mL 37％HCl溶解在50mL去离子水中，在室温下剧烈搅拌2h，并缓慢滴加5mL正硅酸乙酯。
然后，将混合物在室温下老化12h，过滤得到白色沉淀物并在100℃下干燥12h。将得到的材料放入乙醇中浸泡6h，过滤并用纯水洗涤。将得到的固体在100℃下干燥8小时，并在100℃至550℃之间以2℃/min的速率进行升温至550℃，然后在550℃的空气中煅烧8h，即得作为吸附剂的分子筛SBA-3，供样品前处理使用。
SBA-3的扫描电镜图像和FT-IR光谱如图2所示。
实施例2、吸附剂种类的影响
本发明基于移液枪头微基质固相分散微萃取方法同时测定木香顺气丸中木脂素类和萜类成分含量的方法的工艺流程图如图1所示，称取3份木香顺气丸粉末3mg分别加入到3个玛瑙研钵中，并称取6mg不同吸附剂分子筛SBA-3、吸附剂C18(上海正亚化工有限公司)、中性Al2O3(上海安谱实验科技有限公司))，分别加入3组研钵中与木香顺气丸粉末研磨3min。
然后，将得到的均匀固体混合物小心地转移至填有适量的脱脂棉的200μl移液枪头内，并在固体混合物上方铺适量脱脂棉，加入200μl的甲醇对填装好的移液枪头进行洗脱，并收集洗脱液于1.5ml离心管内，最后，在13000rpm的转速下用离心机离心5min,收集离心得到上清液，取上清液装入样品瓶，用高效液相色谱仪进行检测分析。
在PT-MMSPD的吸附过程中，吸附剂是影响提取效率的中药因素，不仅可以作为固体载体而且还起到吸附分离目标化合物的作用。
本实施例考察了分子筛SBA-3与传统吸附剂C18和中性Al2O3对木香顺气丸中木脂素类和萜类成分提取效率的影响，结果如图3(a)所示。
结果显示，分子筛SBA-3对木脂素和萜类目标分析物的提取效率高于其他三种吸附剂。
实施例3、样品与吸附剂的质量比的选择
平行称取4份木香顺气丸粉末3mg分别加入到4组玛瑙研钵中，并称取不同质量(0mg、3mg、6mg、9mg)的SBA-3，分别加入4组研钵中与木香顺气丸粉末研磨3min。
然后，将得到的均匀固体混合物小心地转移至填有适量的脱脂棉的200μl移液枪头内，并在固体混合物上方铺适量脱脂棉，加入200μl的甲醇对填装好的移液枪头进行洗脱，并收集洗脱液于1.5ml离心管内，最后，在13000rpm的转速下用离心机离心5min,收集离心得到上清液，取上清液装入样品瓶，用高效液相色谱仪进行检测分析。
不同样品与吸附剂的质量比的萃取效果柱状图如图3(b)所示，结果表明，当样品与吸附剂的质量比从1:0升到1:2时，目标分析物的提取效率逐渐提高。而当质量比提高到1：3时，提取效果则开始下降，因此选用1：2作为样品与吸附剂质量比。
实施例4、研磨时间的选择
平行称取4份木香顺气丸粉末3mg与4份6mgSBA-3分别加入到4组玛瑙研钵中，并分别研磨不同的时间(90s、120s、150s、180s)。
然后，将得到的均匀固体混合物小心地转移至填有适量的脱脂棉的200μl移液枪头内，并在固体混合物上方铺适量脱脂棉，加入200μl的甲醇对填装好的移液枪头进行洗脱，并收集洗脱液于1.5ml离心管内，最后，在13000rpm的转速下用离心机离心5min,收集离心得到上清液，取上清液装入样品瓶，用高效液相色谱仪进行检测分析。
不同研磨时间的萃取效果柱状图如图3(c)所示，结果表明，随着研磨时间的增加萃取效果增强，增至最优值120s后，当研磨时间延长至180s时，提取效果反而下降。这可能是由于研磨时间过长导致活性成分被过度提取而被挤压到吸附剂中致密的孔内，增加了洗脱的难度，从而使提取效果下降。
实施例5、洗脱溶剂种类影响
平行称取3份木香顺气丸粉末3mg与3份6mgSBA-3分别加入到3组玛瑙研钵中，并分别研磨120s。
然后，将得到的均匀固体混合物小心地转移至填有适量的脱脂棉的200μl移液枪头内，并在固体混合物上方铺适量脱脂棉，分别加入200μl的甲醇、乙腈、乙醇对填装好的移液枪头进行洗脱，并收集洗脱液于1.5ml离心管内，最后，在13000rpm的转速下用离心机离心5min,收集离心得到上清液，取上清液装入样品瓶，用高效液相色谱仪进行检测分析。
不同洗脱溶剂种类的萃取效果柱状图如图3(d)所示，结果表明，甲醇对四种分析物的洗脱效率略高于另外两种，且考虑到甲醇在洗脱过程中较乙醇能更快将分析物洗脱下来，故优选甲醇作为洗脱液。
实施例6、洗脱溶剂体积的影响
平行称取4份木香顺气丸粉末3mg与4份6mgSBA-3分别加入到4组玛瑙研钵中，并分别研磨120s。
然后，将得到的均匀固体混合物小心地转移至填有适量的脱脂棉的200μl移液枪头内，并在固体混合物上方铺适量脱脂棉，分别加入不同体积的甲醇(100μl、150μl、200μl、250μl)对填装好的移液枪头进行洗脱，并收集洗脱液于1.5ml离心管内，最后，在13000rpm的转速下用离心机离心5min,收集离心得到上清液，取上清液装入样品瓶，用高效液相色谱仪进行检测分析。
不同洗脱剂对种类的提取效果如柱状图3(e)所示，当洗脱剂体积从100μl逐渐增加到200μl时，目标分析物的提取效率逐渐提高，但当体积增加至250μl时，提取效率并没有提高反而有所下降。说明洗脱剂体积200μl足够把SBA-3上的活性成分洗脱下来。
实施例7、响应面优化实验
选取其中三个因素和水平范围(如表1所示)，并使用Design-Expert 10.0.7软件进行Box-Behnken设计(BBD)。根据设计所得方案进行实验，并对结果进行多元回归分析，拟合得到木香顺气丸中四种木脂素类和萜类目标分析物的总提取含量Y的二次多项式函数，且回归方程为：
Y＝2.70+0.074X1+0.027X2-0.024X3-0.017X1X2+0.052X1X3+0.016
X2X3-0.097X1 2-0.058X2 2-0.022X3 2
其中，R2为0.8317，说明木香顺气丸中提取得到的四种木脂素类和萜类目标分析物的总含量Y的真实值与预测值之间具有较好的拟合度，此模型可用于预测实际情况的Y。
表1BBD试验因素与水平
使用Design-Expert 10.0.7软件对BBD实验结果进行方差分析(ANOVA)，结果可见表2.方差分析数据表明，所建立的四种木脂素类和萜类目标分析物总提取模型具有显著性(p值(0.0448)<0.05)。同时，失拟值的p(0.0623)大于0.5，这表明“失拟值”相对于纯误差而言并不显著，说明随机误差对实验结果影响不大，所建立数学模型具有较好的拟合性，故该模型是有效的。
此外，根据方差分析结果，吸附样剂/样品用量比是影响四种目标分析物总提取效率的最重要因素，而研磨时间和洗脱溶剂体积在实验范围内的影响并不显著。
表2方差分析结果
BBD实验的3D响应面图可说明响应面与参数之间的联系以及三个参数之间相互作用，其结果可见图4。
根据建立的模型(即回归方程)，可得最优条件：吸附剂/样品用量比(2：1)，研磨时间(130s)和洗脱溶剂体积(200μl)。
在最佳条件下，该模型预测四种目标分析物最大的总含量为7.21mg/g。
最后利用优化的提取条件进行三个真实的验证性实验，得到四种目标分析物总含量为7.11±0.12mg/g，与预测值之间无明显差异，表明PT-MMSPD过程的相应模型有效。
实施例8、三批木香顺气丸中四种分析物的含量测定
1、分别称取3批不同厂家的木香顺气丸粉末各称取3mg与6mg的分子筛SBA-3于玛瑙研钵中，研磨130s，将研磨好的固体混合物转移至在枪头装有适量脱脂棉的200μL的移液枪头内，并在固体混合物上方铺适量脱脂棉，加入200μL的甲醇对填充好的移液枪进行洗脱，并收集洗脱液于1.5ml离心管内，最后，在13000rpm离心5min，取上清液即为木香顺气丸提取液。用高效液相色谱仪进行采样分析。
三批木香顺气丸中四种分析物的含量测定如表3所述。
表3
(1)线性、检测限和定量限
将分别精密称取和厚朴酚对照品3.3mg、厚朴酚对照品3.605mg、木香烃内酯1.13mg和去氢木香烃内酯2.08mg，用甲醇溶解并定容至5mL，配制成含和厚朴酚660.00μg/mL、厚朴酚721.00μg/mL、木香烃内酯226.00μg/mL、去氢木香烃内酯416.00μg/mL的对照品混合液。配得的混合对照品溶液稀释至不同的溶度，分别精密吸取10μl的混合对照品溶液注入液相色谱仪进行分析，测得峰面积。以目标分析物的进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
和厚朴酚、厚朴酚、木香烃内酯、去氢木香烃内酯的标准曲线、线性相关系数、线性范围和检测限如下表4。
表4各成分标准曲线方程、线性相关系数、线性范围和检测限
3、重复性实验
称取3mg木香顺气丸粉末与6mg的分子筛SBA-3于玛瑙研钵中，研磨130s，将研磨好的固体混合物转移至在枪头装有适量脱脂棉的200μL的移液枪头内，并在固体混合物上方铺适量脱脂棉，加入200μL的甲醇对填充好的移液枪进行洗脱，并收集洗脱液于1.5ml离心管内，最后，在13000rpm离心5min，取上清液即为木香顺气丸提取液。按照上述方法平行制样6个，在上述色谱条件下考察其重复性，结果见表5。
4、精密度考察
在上述色谱条件下，精密吸取混合对照品溶液同一天内重复进样6次，为日内精密度。在上述色谱条件下，精密吸取标准品溶液，连续3天每天进样2次，为日间精密度。结果见表5。
5、稳定性考察
称取3mg木香顺气丸粉末与6mg的分子筛SBA-3于玛瑙研钵中，研磨130s，将研磨好的固体混合物转移至在枪头装有适量脱脂棉的200μL的移液枪头内，并在固体混合物上方铺适量脱脂棉，加入200μL的甲醇对填充好的移液枪进行洗脱，并收集洗脱液于1.5ml离心管内，最后，在13000rpm离心5min，取上清液即为木香顺气丸提取液。在上述色谱条件下，分别于2、4、8、16、24h测定峰面积，考察其稳定性，结果见表5。
表5重复性、精密度、稳定性实验结果
表中数据显示，本发明方法重复性好、稳定性好，仪器的精密度好。
6、加样回收考察
称取3mg木香顺气丸粉末与6mg的分子筛SBA-3于玛瑙研钵中，研磨130s，将研磨好的固体混合物转移至在枪头装有适量脱脂棉的200μL的移液枪头内，并在固体混合物上方铺适量脱脂棉，加入200μL的甲醇溶液(含对1.45μg/mL和厚朴酚、3.71μg/ml厚朴酚、0.92μg/ml木香烃内酯、1.56μg/ml去氢木香烃内酯)对填充好的移液枪进行洗脱，并收集洗脱液于1.5ml离心管内，最后，在13000rpm离心5min，取上清液即为木香顺气丸提取液。在上述色谱条件下进行分析。
称取3mg木香顺气丸粉末与6mg的分子筛SBA-3于玛瑙研钵中，研磨130s，将研磨好的固体混合物转移至在枪头装有适量脱脂棉的200μL的移液枪头内，并在固体混合物上方铺适量脱脂棉，加入200μL的甲醇溶液(含对2.01μg/mL和厚朴酚、4.64μg/ml厚朴酚、1.24μg/ml木香烃内酯、1.75μg/ml去氢木香烃内酯)对填充好的移液枪进行洗脱，并收集洗脱液于1.5ml离心管内，最后，在13000rpm离心5min，取上清液即为木香顺气丸提取液。在上述色谱条件下进行分析。
称取3mg木香顺气丸粉末与6mg的分子筛SBA-3于玛瑙研钵中，研磨130s，将研磨好的固体混合物转移至在枪头装有适量脱脂棉的200μL的移液枪头内，并在固体混合物上方铺适量脱脂棉，加入200μL的甲醇溶液(含对2.30μg/mL和厚朴酚、5.56μg/ml厚朴酚、1.40μg/ml木香烃内酯、2.20μg/ml去氢木香烃内酯)对填充好的移液枪进行洗脱，并收集洗脱液于1.5ml离心管内，最后，在13000rpm离心5min，取上清液即为木香顺气丸提取液。在上述色谱条件下进行分析。
加样回收率实验结果如下表6。
表6加样回收率实验
表中数据显示，四种成分的加样回收率在95.79％-102.81％之间，且其RSD值均≦4.19％，表明该方法测定结果准确可靠性。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种同时测定木香顺气丸中木脂素类和萜类成分含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
木香顺气丸粉末和吸附剂混合研磨，研磨好的固体混合物转移至移液枪头中，加入洗脱剂加压洗脱，洗脱液离心后取上清液即为木香顺气丸提取液；
将木香顺气丸提取液经高效液相色谱检测，得到木香顺气丸中木脂素类和萜类成分的峰面积，分别代入到相应的标准曲线中得到木香顺气丸中木脂素类和萜类成分的含量；
所述的木脂素类成分为和厚朴酚或厚朴酚；所述的萜类成分为木香烃内酯或去氢木香内酯；
所述吸附剂为分子筛SBA-3；
所述的洗脱剂为甲醇、乙醇或乙腈；
所述高效液相色谱检测条件为：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径≤5μm；流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸水，流动相A和流动相B的体积比为69：31；柱温为20-35℃；流速为0.8-1.2mL/min；紫外检测器，检测波长为220～230nm。
2.根据权利要求1所述的同时测定木香顺气丸中木脂素类和萜类成分含量的方法，其特征在于，木香顺气丸粉末和分子筛SBA-3的质量比为1:1～3。
3.根据权利要求1所述的同时测定木香顺气丸中木脂素类和萜类成分含量的方法，其特征在于，所述的研磨为于研钵中均匀研磨，研磨的时间为90～180s。
4.根据权利要求1所述的同时测定木香顺气丸中木脂素类和萜类成分含量的方法，其特征在于，所述的洗脱剂的体积为：每1mg木香顺气丸粉末对应80～90μl洗脱剂。
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