CN107748211A - 一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法 - Google Patents

一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107748211A
CN107748211A CN201710824961.8A CN201710824961A CN107748211A CN 107748211 A CN107748211 A CN 107748211A CN 201710824961 A CN201710824961 A CN 201710824961A CN 107748211 A CN107748211 A CN 107748211A
Authority
CN
China
Prior art keywords
maca
deep
melting solvent
macamides
kinds
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710824961.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107748211B (zh
Inventor
李珂珂
弓晓杰
陈书笑
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dalian University
Original Assignee
Dalian University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dalian University filed Critical Dalian University
Priority to CN201710824961.8A priority Critical patent/CN107748211B/zh
Publication of CN107748211A publication Critical patent/CN107748211A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107748211B publication Critical patent/CN107748211B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明具体涉及一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法，属于分析化学技术领域。其技术要点主要包括以下几个步骤：深共融溶剂的制备、待测溶液的制备、对照品混合液的制备、标准曲线的建立、待测样品中玛咖酰胺含量的测定。本发明的提取方法使用的深共融溶剂有较好的化学稳定性、可设计性和可循环使用，原料廉价易得且绿色环保，合成工艺简单并且不需要引入其它有机溶剂就可获得高纯度的产物，原子经济性达100％，解决了传统提取方法有机溶剂毒性大、提取率低、成本高、提取时间较长、提取次数多的问题。

Description

一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法
技术领域
本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法。
背景技术
玛咖(Lepidiummeyenii)为十字花科独行菜属的一种一年生草本植物，最早生长在海拔超过4000米的秘鲁中央的安第斯山区，具有2000年的食用历史。玛咖的根茎部分比地上部分具有更高的营养价值，根形似小圆萝卜，外形颜色有紫、黑、黄等。研究表明玛咖具有丰富的营养价值和药用价值，玛咖还具有许多传统的疗效，如作为泻药、治疗风湿病、呼吸道疾病、痛经及女性更年期综合征等。另外，玛咖还具有改善性功能、提高人畜生育能力、缓解疲劳及抗氧化等功能。基于以上特点，玛咖被称为“秘鲁人参”。玛咖中的玛咖酰胺被视为主要的活性功能成分，是评价玛咖质量的重要标准。
目前对提取玛咖酰胺的溶剂很多，但都是有机化合物，对人体危害大、对环境污染较严重。而深共融溶剂有较好的化学稳定性、可设计性和可循环使用等优点，与有机溶剂相比还具有原料廉价易得且绿色环保，合成工艺简单并且不需要引入其它有机溶剂就可获得高纯度的产物，原子经济性达100％。目前用深共融溶剂(DESs)提取中药中有效成分的方法已有报道，但是用DESs提取玛咖中玛咖酰胺的报道还没有出现。
发明内容
为弥补现有技术的不足，本发明提供的采用DESs做提取剂提取玛咖中5种玛咖酰胺并用HPLC测定其含量的方法，提取含量比石油醚高，并且简便快捷，有较好的化学稳定性、可设计性和可循环使用等优点，是一种分析玛咖酰胺类成分的有效途径，有望替代有机溶剂来提取玛咖中玛咖酰胺。
本发明的技术方案如下：一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法，包括以下步骤：
(1)深共融溶剂的制备
氯化胆碱经真空干燥12h后，按照摩尔比为1:2分别称取氯化胆碱和1,6-己二醇置于圆底烧瓶中，在80℃下加热回流搅拌直到形成均匀的液体，然后再反应4个小时即得到无色透明的深共融溶剂；
(2)待测溶液的制备
将玛咖粉末按照1g:10mL料液比加入含30wt％水的深共融溶剂中，70℃下超声波提取30min，离心后上清液即为提取液；将提取液溶解于甲醇中得到待测溶液，其中提取液的体积浓度为10％；
(3)对照品混合液的制备
分别精密称取N-(间-甲氧基苄基)-亚麻酰胺、N-苄基亚麻酰胺、N-(间甲氧基苄基)-亚油酰胺、N-苄基亚油酰胺、N-苄基十六烷酰胺对照品，用甲醇分别溶解后混合，配制成多组对照品混合液，所述对照品混合液中各对照品的质量浓度介于0.5～2000μg/mL范围内；
(4)标准曲线的建立
分别吸取步骤(3)中多组对照品混合溶液，进行液相色谱测定；
色谱条件如下：色谱柱为XtimateXB-C18色谱柱4.6×250mm，5μm；流动相：流动相A为水，流动相B为乙腈；梯度：0～24min，80vt％流动相B～100vt％流动相B；检测器为G4212-60008二极管阵列检测器，检测波长210nm、280nm；流速0.8mL/min；柱温40℃；进样量10μL；
以步骤(3)中各对照品混合液的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线；
(5)待测溶液中玛咖酰胺含量的测定
按步骤(4)的色谱条件对待测溶液进行测定，并利用标准曲线计算待测样品中每种玛咖酰胺的含量。
进一步的，步骤(4)中所述的多组对照品混合溶液中各对照品的浓度范围分别为：N-(间-甲氧基苄基)-亚麻酰胺0.5～85μg/mL、N-苄基亚麻酰胺3～700μg/mL、N-(间甲氧基苄基)-亚油酰胺0.5～100μg/mL、N-苄基亚油酰胺4～2000μg/mL、N-苄基十六烷酰胺1～2000μg/mL。
进一步的，对N-(间甲氧基苄基)-亚麻酰胺的检出限为2.57μg/mL。
进一步的，对N-苄基亚麻酰胺的检出限为1.46μg/mL。
进一步的，对N-(间甲氧基苄基)-亚油酰胺的检出限为2.06μg/mL。
进一步的，对N-苄基亚油酰胺的检出限为1.64μg/mL。
进一步的，对N-苄基十六烷酰胺的检出限为2.82μg/mL。
本发明的有益效果如下：
(1)本发明的提取方法使用的DESs有较好的化学稳定性、可设计性和可循环使用，原料廉价易得且绿色环保，合成工艺简单并且不需要引入其它有机溶剂就可获得高纯度的产物，原子经济性达100％，解决了传统提取方法有机溶剂毒性大、提取率低、成本高、提取时间较长、提取次数多的问题；
(2)本发明的检测方法为高效液相色谱(HPLC)检测，采用梯度洗脱方法，分离度好，可以同时检测玛咖中5种玛咖酰胺；本发明只用乙腈和水作为流动相，解决了三氟乙酸对色谱柱损耗大、清洗不便等问题，流动相配置方便，简便了操作；
(3)本发明的提取测定方法线性关系良好、精密度高、重复性好、稳定性好、回收率高、简便、快捷并且准确可行，可作为玛咖中玛咖酰胺标准的定量检测方法。
附图说明
图1为DESs提取玛咖样品液相色谱图；
图2为石油醚提取玛咖样品液相色谱图。
其中：1为编号C1，2为编号C2，3为编号C3，4为编号C4，5为编号C5。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的说明，但本发明不以任何形式受限于实施例内容。实施例中所述试验方法如无特殊说明，均为常规方法；如无特殊说明，所述试剂和生物材料，均可从商业途径获得。
实施例1
本实施例选择西藏地区黄玛咖作为待测样品进行测定，具体步骤如下：
(1)DESs的制备
氯化胆碱经真空干燥12h后，然后按摩尔比为1:2分别称取一定量的氯化胆碱和1,6-己二醇置于100ml的圆底烧瓶中，在80℃下加热回流搅拌直到形成均匀的液体，然后再反应4个小时即得到无色透明的深共融溶剂；
(2)待测溶液的制备
粉碎，过筛，精密称取玛咖粉末，以1g:10mL料液比加入已制备好的含有30％水的DESs中，70℃下超声提取30min，离心，取提取液1mL用甲醇定容至10mL的容量瓶中，待HPLC定量分析；
(3)对照品混合液的制备
分别精密称取N-(间-甲氧基苄基)-亚麻酰胺、N-苄基亚麻酰胺、N-(间甲氧基苄基)-亚油酰胺、N-苄基亚油酰胺、N-苄基十七烷酰胺对照品，用甲醇分别溶解后混合，配制成多组对照品混合液，所述对照品混合液中各对照品的质量浓度介于0.5～2000μg/mL范围内；
各对照品的浓度具体如下表1：
表1各对照品的浓度
*表1中浓度单位为μg/mL。
(4)标准曲线的建立
分别吸取步骤(3)中多组对照品混合溶液，进行液相色谱测定；
色谱条件为：色谱柱XtimateXB-C18色谱柱4.6×250mm，5μm；流动相：流动相A为水，流动相B为乙腈；梯度：0～24min，80vt％流动相B～100vt％流动相B；检测器G4212-60008二极管阵列检测器，检测波长210nm、280nm；流速0.8mL/min；柱温40℃；进样量10μL；
以步骤(3)中各对照品的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线；按信噪比3:1确定检测限，标准曲线方程及检出限见表2；
表2 5种玛咖酰胺对照品标准曲线方程
(5)待测溶液中5种玛咖酰胺含量的测定
色谱条件为：色谱柱XtimateXB-C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)；流动相为A(水)和B(乙腈)，梯度：0～24min，80vt％B～100vt％B；检测器G4212-60008二极管阵列检测器，检测波长210nm、280nm；流速0.8mL/min；柱温40℃；进样量10μL，并利用标准曲线计算待测样品中5种玛咖酰胺的含量。结果如下表3：
表3石油醚与DESs提取玛咖中玛咖酰胺的含量对照
通过利用HPLC的检测，得出图1和图2，图1为用10mL含有30％水的DESs提取1g玛咖样品后，取1mL用甲醇稀释10倍的液相色谱图；图2为10mL石油醚提取5g玛咖样品后旋蒸，所得样品用甲醇溶解的液相色谱图。根据标准曲线方程得出5种玛咖酰胺各自的含量如表3可所示，经过分析得出DESs提取的玛咖中5种玛咖酰胺的含量均比石油醚提取的含量高，说明DESs的提取效率更高。
实施例2
(1)精密度实验
取玛咖酰胺对照品溶液，上述色谱条件连续进样3次，计算各玛咖酰胺峰面积的相对标准偏差(RelativeStandardDeviation，RSD)，结果所有玛咖酰胺的RSD值在0.94％～4.73％之间，表明所用仪器精密度良好。结果如表4所示。
表4精密度实验结果(n＝3)
(2)重复性实验
取玛咖样品最终溶液，上述色谱条件连续进样3次，计算各玛咖酰胺含量的相对标准偏差，结果所有玛咖酰胺的RSD值在0.42％～4.42％之间，表明该方法重复性良好。结果如表5所示。
表5重复性实验结果(n＝3)
(3)稳定性实验
取同一玛咖样品提取液，按上述色谱条件，分别在放置0、2、4、8和12h后进样分析，计算含量，计算样品各玛咖酰胺的RSD，结果其RSD值在0.47％～4.40％之间，表明供试品溶液在室温条件下放置12h稳定性良好。结果如表6所示。
表6稳定性实验结果(n＝5)
(4)加样回收率实验
分别取9份相同重量的已知各玛咖酰胺含量的玛咖样品按上述方法制备玛咖酰胺提取液，分别加入不同含量的玛咖酰胺对照品溶液，完全混匀后经过0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μL。各玛咖酰胺的平均回收率在98.23％～100.82％之间，表明本发明方法准确率高，结果见表7。
表7加样回收率实验结果(n＝9)
综上所述，DESs有较好的化学稳定性、可设计性和可循环使用等优点，与离子液体相比还具有原料廉价易得且绿色环保，合成工艺简单并且不需要引入其它有机溶剂就可获得高纯度的产物，原子经济性达100％。并且结合HPLC线性关系良好、精密度高、重复性好、稳定性好、回收率高、简便、快捷并且准确可行，可作为玛咖中玛咖酰胺标准的定量检测方法。

Claims (7)

1.一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)深共融溶剂的制备
氯化胆碱经真空干燥12h后，按照摩尔比为1:2分别称取氯化胆碱和1,6-己二醇置于圆底烧瓶中，在80℃下加热回流搅拌直到形成均匀的液体，然后再反应4个小时即得到无色透明的深共融溶剂；
(2)待测溶液的制备
将玛咖粉末按照1g:10mL料液比加入含30wt％水的深共融溶剂中，70℃下超声波提取30min，离心后上清液即为提取液；将提取液溶解于甲醇中得到待测溶液，其中提取液的体积浓度为10％；
(3)对照品混合液的制备
分别精密称取N-(间-甲氧基苄基)-亚麻酰胺、N-苄基亚麻酰胺、N-(间甲氧基苄基)-亚油酰胺、N-苄基亚油酰胺、N-苄基十六烷酰胺对照品，用甲醇分别溶解后混合，配制成多组对照品混合液，所述对照品混合液中各对照品的质量浓度介于0.5～2000μg/mL范围内；
(4)标准曲线的建立
分别吸取步骤(3)中多组对照品混合溶液，进行液相色谱测定；
色谱条件如下：色谱柱为XtimateXB-C18色谱柱4.6×250mm，5μm；流动相：流动相A为水，流动相B为乙腈；梯度：0～24min，80vt％流动相B～100vt％流动相B；检测器为G4212-60008二极管阵列检测器，检测波长210nm、280nm；流速0.8mL/min；柱温40℃；进样量10μL；
以步骤(3)中各对照品混合液的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线；
(5)待测溶液中玛咖酰胺含量的测定
按步骤(4)的色谱条件对待测溶液进行测定，并利用标准曲线计算待测样品中每种玛咖酰胺的含量。
2.根据权利要求1一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法，其特征在于，步骤(4)中所述的多组对照品混合溶液中各对照品的浓度范围分别为：N-(间-甲氧基苄基)-亚麻酰胺0.5～85μg/mL、N-苄基亚麻酰胺3～700μg/mL、N-(间甲氧基苄基)-亚油酰胺0.5～100μg/mL、N-苄基亚油酰胺4～2000μg/mL、N-苄基十六烷酰胺1～2000μg/mL。
3.根据权利要求1所述一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法，其特征在于，对N-(间甲氧基苄基)-亚麻酰胺的检出限为2.57μg/mL。
4.根据权利要求1所述一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法，其特征在于，对N-苄基亚麻酰胺的检出限为1.46μg/mL。
5.根据权利要求1所述一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法，其特征在于，对N-(间甲氧基苄基)-亚油酰胺的检出限为2.06μg/mL。
6.根据权利要求1所述一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法，其特征在于，对N-苄基亚油酰胺的检出限为1.64μg/mL。
7.根据权利要求1所述一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法，其特征在于，对N-苄基十六烷酰胺的检出限为2.82μg/mL。
CN201710824961.8A 2017-09-14 2017-09-14 一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法 Active CN107748211B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710824961.8A CN107748211B (zh) 2017-09-14 2017-09-14 一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710824961.8A CN107748211B (zh) 2017-09-14 2017-09-14 一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107748211A true CN107748211A (zh) 2018-03-02
CN107748211B CN107748211B (zh) 2020-05-19

Family

ID=61255674

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710824961.8A Active CN107748211B (zh) 2017-09-14 2017-09-14 一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107748211B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108535375A (zh) * 2018-03-26 2018-09-14 烟台新时代健康产业有限公司 一种基于液质联用代谢组学分析玛咖标志性代谢产物的方法
CN110596264A (zh) * 2019-09-03 2019-12-20 谱尼测试集团股份有限公司 一种uplc-q-tof快速筛查玛咖酰胺类化合物的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105866314A (zh) * 2016-05-31 2016-08-17 江苏慧博生物科技有限公司 一种采用hplc分析玛咖中玛咖酰胺含量的检测方法
CN106290673A (zh) * 2016-09-27 2017-01-04 深圳市计量质量检测研究院 一种低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定罗丹明b 的方法
CN106526033A (zh) * 2016-12-30 2017-03-22 大连大学 一种同时测定玛咖中11种玛咖酰胺含量的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105866314A (zh) * 2016-05-31 2016-08-17 江苏慧博生物科技有限公司 一种采用hplc分析玛咖中玛咖酰胺含量的检测方法
CN106290673A (zh) * 2016-09-27 2017-01-04 深圳市计量质量检测研究院 一种低共熔溶剂萃取液相色谱法快速测定罗丹明b 的方法
CN106526033A (zh) * 2016-12-30 2017-03-22 大连大学 一种同时测定玛咖中11种玛咖酰胺含量的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MARKUS GANZERA等: "Chemical Profiling and Standardization of Lepidium meyenii (Maca) by Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography", 《CHEM. PHARM. BULL.》 *
朱颖秋等: "不同产地玛咖中酰胺含量分析", 《天然产物研究与开发》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108535375A (zh) * 2018-03-26 2018-09-14 烟台新时代健康产业有限公司 一种基于液质联用代谢组学分析玛咖标志性代谢产物的方法
CN108535375B (zh) * 2018-03-26 2020-08-04 烟台新时代健康产业有限公司 一种基于液质联用代谢组学分析玛咖标志性代谢产物的方法
CN110596264A (zh) * 2019-09-03 2019-12-20 谱尼测试集团股份有限公司 一种uplc-q-tof快速筛查玛咖酰胺类化合物的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN107748211B (zh) 2020-05-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104777249B (zh) 测定止咳枇杷糖浆中有效成分苦杏仁苷含量的方法
CN104502518B (zh) 一种治疗小儿厌食症的中药制剂的检测方法
CN106526033A (zh) 一种同时测定玛咖中11种玛咖酰胺含量的方法
CN104931620B (zh) 平卧菊三七中绿原酸类成分的分离和含量测定方法
CN109283274A (zh) 一种荷丹片的多成分含量测定方法
CN110196290A (zh) 一种刺梨中鞣花酸含量测定方法
CN107677745A (zh) 广金钱草总黄酮提取物的质量检测方法
CN104090040B (zh) 一种快速检测多穗柯主要活性成分的hplc方法
CN107748211A (zh) 一种使用深共融溶剂提取测定玛咖中5种玛咖酰胺的方法
CN106198810B (zh) 一种具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物的质量检测方法
CN109060985A (zh) 一种俄色果提取物及其质量检测方法
CN104458941A (zh) 一种基于uhplc技术的补骨脂多成分qams检测方法及其应用
CN109633003A (zh) 一种测定远志中远志口山酮ⅲ和3,6，-二芥子酰基蔗糖含量的方法
CN102818782B (zh) 总2-（2-苯乙基）色酮类化合物含量的测定方法
CN104678004A (zh) 一种葛山降脂颗粒的质量控制方法
CN104914194B (zh) 一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的方法
CN109632781A (zh) 抗球虫饲料添加剂产品中绿原酸与咖啡酸含量的测定方法
CN107290471B (zh) 一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法
CN104634911B (zh) 一种喘可治注射液4种黄酮类有效成分检测方法
CN108414666B (zh) 一种姜药材挥发油提取物中姜辣素含量的测定方法
CN110133158A (zh) 一种酒蒸黄连的hplc指纹图谱检测方法
CN108693289A (zh) 一种人字果药材中木兰花碱的含量测定方法
CN106706804B (zh) 一种同时测定乌榄叶中六种成分含量的方法
CN104597168B (zh) 桑枝精制饮片含量测定方法
CN106501419A (zh) 萝卜提取物中氧化型和还原型萝卜硫苷的同步定量检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant