CN110133158A - 一种酒蒸黄连的hplc指纹图谱检测方法 - Google Patents

一种酒蒸黄连的hplc指纹图谱检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱,它是采用高效液相色谱法检测,包括如下步骤:1)参照物溶液的制备;2)供试品溶液的制备;3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图。本发明酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法,建立的指纹图谱具有很强的特异性,特征峰的规律性强,一致性较好,可作为酒蒸黄连的质量评价方法,同时也可用于酒蒸黄连中格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小襞碱和/或小檗红碱的含量测定,并能有效鉴别酒蒸黄连。

Description

一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法
技术领域
本发明具体涉及一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法。
背景技术
中药(TCM)是在中医理论指导下生产的药物,其是许多化学物质的集合,并且在这些组分中的一种或多种中有效。因此,用现有的质量评价方法难以真实地反映中药的多效性和完整性,难以准确反映中药的内部综合质量。因此,多组分同时测定的质量控制模型已成为未来中药质量控制的关键。多指标成分的定量分析是中药质量控制的最直接方法,可以揭示化学成分含量的变化,是中药质量控制的关键环节。
在中国药典中,黄连是Coptis chinensis Franch,Coptis deltoideaC.Y.Chenget Hsiao,or Coptisteeta Wall.的干燥根茎。黄连在我国用药历史悠久,味连是目前的主流品种。在中医理论中,黄连具有“清热燥湿、泻火解毒”的功能。目前,现代药理研究表明,黄连可用于治疗腹泻、黄疸、高热、头晕、烦躁不安、失眠、心悸不安等。酒蒸黄连是黄连的炮制加工产品,对治疗糖尿病有很好的效果。
近年来,有文献表明,小檗红碱在黄连酒蒸过程中可产生,是小檗碱的代谢产物,具有多种生物活性,如降血糖作用,抗肿瘤作用,抗炎作用等。研究表明,酒蒸黄连能够改善3T3-L1脂肪细胞的胰岛素抵抗,增强脂肪细胞吸收葡萄糖的能力,并利用其在体外提高细胞水平的胰岛素抵抗。
降血糖药有益于改善糖尿病患者的症状,表明小檗碱是酒蒸黄连的活性成分之一,有抗糖尿病活性。然而,到目前为止,酒蒸黄连的质量控制体仍然缺乏,酒蒸黄连未被纳入2015年版中国药典,极少的文献研究它的含量测定。因此,为酒蒸黄连建立全面的质量控制方法非常重要。
目前HPLC-ELSD、HPLC和UPLC-PAD可用于黄连的质量控制。在2015版《中国药典》和《香港中药材标准》中,分别采用4和2个化学组分对黄连质量进行控制。目前,酒蒸黄连的质量控制是建立在黄连的基础上,对酒蒸黄连缺乏专属性研究。此外,同时测定酒蒸黄连中的格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱尚无报道。
发明内容
为解决上述问题,本发明提供了一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法,它是采用高效液相色谱法检测,其操作步骤如下:
1)参照物溶液的制备:取生物碱类对照品,加甲醇溶解,即得;
2)供试品溶液的制备:取待测样品,加甲醇-盐酸提取,过滤,取滤液,加甲醇稀释2-5倍,即得;
3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪,色谱条件如下:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:以乙腈为流动相A,以0.1%三氟乙酸溶液为流动相B梯度洗脱;梯度洗脱程序如下:
进一步地,步骤1)所述生物碱类对照品为格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小襞碱和/或小檗红碱。
更进一步地,所述格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱在参照物溶液中浓度分别为1.36μg/ml,7.12μg/ml,0.643μg/ml,4.176μg/ml,18.33μg/ml,0.515μg/ml,15.708μg/ml和58.32μg/ml。
进一步地,步骤2)所述待测样品与甲醇-盐酸的质量体积比为0.2g:50ml;所述滤液加甲醇稀释5倍。
进一步地,步骤2)所述甲醇-盐酸的体积比为100:1。
进一步地,步骤2)所述加甲醇稀释5倍。
进一步地,步骤2)所述提取为超声提取,时间30min,功率250W,频
率40kHz。
进一步地,步骤3)所述的分别注入液相色谱仪的参照物溶液和供试品溶液量为10μl。
进一步地,步骤3)所述色谱条件的波长为346nm,柱温为25℃,流动相流速为1.00ml/min,理论板数不低于6000。
进一步地,步骤3)所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱为Welch规格为:250mm×4.6mm,5μm。
进一步地,所述检测方法得到的特征图谱中应呈现13个特征峰,与格兰地新参照物相应的峰为峰4,与非洲防己碱参照物相应的峰为峰7,与表小檗碱参照物相应的峰为峰8,与盐酸药根碱参照物相应的峰为峰9,与盐酸黄连碱参照物相应的峰为峰10,与小檗红碱参照物相应的峰为峰11,与盐酸巴马汀参照物相应的峰为峰12,与盐酸小檗碱参照物相应的峰为峰13。
更进一步地,所述供试品为酒蒸黄连,其通过特征图谱计算的盐酸小檗碱含量大于7%,盐酸黄连碱的含量大于2%。
本发明酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法,建立的指纹图谱具有很强的特异性,特征峰的规律性强,一致性较好,可作为酒蒸黄连的质量评价方法,同时也可用于酒蒸黄连中格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小襞碱和/或小檗红碱的含量测定,并能有效鉴别酒蒸黄连。
本发明酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法,相对于现有技术中酒蒸黄连的HPLC检测方法,具备以下优势:
1.流动相配制简单快捷,在不调整流动相pH值的情况下,就能使流动相pH值范围达到理想状态,即能完成对成分的分离,又不损伤色谱柱;
2.通过改变流动相及其比例,使酒蒸黄连中更多特征成分的色谱峰被分离,尤其是小檗红碱,且分离度更高,拖尾因子等参数也能达到标准,使更多色谱峰被指认确定。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1黄连与酒蒸黄连图(A原植物(黄连),B原药材,C黄连,D酒蒸黄连)
图2酒蒸黄连高效液相色谱图(混合对照品(A)、样品(B)和空白溶液(C);图中各标号表示4:格兰地新、7:非洲防己碱、8:表小檗碱、9:盐酸药根碱、10:盐酸黄连碱、11:小檗红碱、12:盐酸巴马汀、13:盐酸小檗碱)
图3酒蒸黄连(S1-S10)的指纹图谱
具体实施方式
1、材料、试剂与仪器
1.1实验仪器
高效液相色谱仪:岛津LC-2030C 3D系列高效液相色谱仪;
电子天平:FA1204C电子天平(上海越平科学仪器有限公司);
超声波清洗器:PS-80超声波清洗机(深圳市洁康洗净电器有限公司);
色谱柱:Welch(250mm×4.6mm,5m)
1.2试剂及试药
格兰地新对照品(含量≥98%,批号:MUST-17110502),非洲防己碱对照品(含量≥98%,批号:MUST-17031901),表小檗碱对照品(含量≥98%,批号:MUST-072011),盐酸药根碱对照品(含量≥98%,批号:MUST-17110702),盐酸黄连碱对照品(含量≥98%,批号:MUST-17061705),盐酸巴马汀对照品(含量≥98%,批号:MUST-17022604),盐酸小襞碱对照品(含量≥98%,批号:MUST-17110105)购买于成都曼思特生物科技有限公司;小檗红碱对照品(含量≥98%,批号:16121302)购买于成都普菲德生物技术有限公司。Fisher色谱乙腈(色谱纯)、水(up水),甲醇、盐酸、三氟乙酸等为分析纯。
由雅安联成迅康提供5批酒蒸黄连样品(S1-S5),另外5批酒蒸黄连(S6-S10)在成都中医药大学实验室(国家中医药研究实验室)加工,从成都荷花池药材市场获得黄连样品,由卢先明教授鉴定。样品信息详见表1。与黄连相比,酒蒸黄连的颜色为棕棕色至深棕色,外观粗糙,有细小的纤维根。详见图1。
表1 10批酒蒸黄连样品信息
实施例1本发明酒蒸黄连指纹图谱检测方法
1)参照物溶液的制备:
分别精密称取对照品格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱,置于25mL容量瓶中,用甲醇溶解,得到格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱浓度分别为1.36,7.12,0.643,4.176,18.33,0.515,15.708和58.32μg/ml的混合对照品溶液;
2)供试品溶液的制备:
精密称定酒蒸黄连的粉末(过二号筛)0.2g,置具塞锥形瓶中,分别精密加入甲醇-盐酸(100:1)的混合溶液50ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液2ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,取续滤液,即得;
3)特征图谱的测定
分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,得到色谱图;
色谱条件如下:
检测波长:346nm;
色谱柱:Welch(250mm×4.6mm,5μm);
流动相:乙腈(A)和0.1%三氟乙酸(B),其中A(乙腈)的梯度变化为:0-30min,15-20%;30-50min,20-25%;50-60min,25-35%;60-70min,35%;
柱温为25℃;
流速为1.00ml/min;
4)分析特征图谱
酒蒸黄连特征图谱中呈现13个特征峰,与格兰地新参照物相应的峰为峰4,与非洲防己碱参照物相应的峰为峰7,与表小檗碱参照物相应的峰为峰8,与盐酸药根碱参照物相应的峰为峰9,与盐酸黄连碱参照物相应的峰为峰10,与小檗红碱参照物相应的峰为峰11,与盐酸巴马汀参照物相应的峰为峰12,与盐酸小檗碱参照物相应的峰为峰13。
实施例2本发明酒蒸黄连中成分含量检测
1)参照物溶液的制备:
分别精密称取对照品格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱,置于25mL容量瓶中,用甲醇溶解,得到格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱浓度分别为1.36,7.12,0.643,4.176,18.33,0.515,15.708和58.32μg/ml的混合对照品溶液;
2)供试品溶液的制备:
精密称定酒蒸黄连的粉末(过二号筛)0.2g,置具塞锥形瓶中,分别精密加入甲醇-盐酸(100:1)的混合溶液50ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液2ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,取续滤液,即得;
3)特征图谱的测定
分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,得到色谱图;
色谱条件如下:
检测波长:346nm;
色谱柱:Welch(250mm×4.6mm,5μm);
流动相:乙腈(A)和0.1%三氟乙酸(B),其中A(乙腈)的梯度变化为:0-30min,15-20%;30-50min,20-25%;50-60min,25-35%;60-70min,35%;
柱温为25℃;
流速为1.00ml/min;
4)采用外标法计算酒蒸黄连中格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量。
以下通过试验例具体说明本发明的有益效果:
试验例1
1、仪器和色谱条件
色谱柱为Welch(250mm×4.6mm,5μm);柱温25℃;流动相由A(乙腈)和B(0.1%三氟乙酸)(v/v)组成,其中A(乙腈)的梯度变化为:0-30min,15-20%;30-50min,20-25%;50-60min,25-35%;60-70min,35%;流速为1mL/min,进样量为10μl,检测波长为346nm。
在上述色谱条件下,样品溶液和对照品溶液的色谱峰具有相同的保留时间。格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱色谱峰的分离度均大于1.5,理论板数大于60000,空白对照表明该方法具有良好的特异性。混合对照品、样品和空白对照的高效液相色谱图如图2所示。
2、样品制备
精密称定酒蒸黄连的粉末(过二号筛),置具塞锥形瓶中,分别精密加入甲醇-盐酸(100:1)的混合溶液50ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液2ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,取续滤液,即得。
3、标准溶液的制备
分别精密称取对照品格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱适量,置于25mL容量瓶中,用甲醇溶解,得到格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱浓度分别为1.36,7.12,0.643,4.176,18.33,0.515,15.708and 58.32μg/ml的混合对照品溶液。
4、方法学考察
4.1、线性关系考察
精密称取格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱适量对照品适量,置25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,制成对照品溶液。精密吸取溶液2、4、6、8、10、20μl注入液相色谱仪。计算回归方程。检测限(LOD)和定量限(LOQ)是信噪比为3:1和10:1时的相应质量。
4.2、精密度考察
精密吸取对照品溶液10μl,按上述色谱条件,连续进样6次,分别测定峰面积,计算RSD值。
4.3、重复性考察
取同一批酒蒸黄连6份,按供试品溶液制备方法制备,精密吸取供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,记录色谱峰面积,计算RSD值。
4.4、稳定性考察
取同一份酒蒸黄连供试品溶液,按上述色谱条件,分别在不同时间(0,2,4,6,8,10,12,16和24h)精密吸取供试品溶10μl,注入液相色谱仪,记录色谱峰面积。计算RSD值。
4.5、加样回收率试验
取已知含量的供试品6份,每份取样约0.1g,精密称定,分别加入上述已配制好的混合对照品溶液,浓度分别为0.2125,0.6675,0.150,0.475,2.225,0.08125,2.025和2.625mg/mL,按“供试品溶制备”项下的方法制成供试品溶液,精密吸取供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,计算回收率。回收率计算公式如下:
4.6、结果和讨论
为了寻求更加高效的提取方式,以相应参照物含量为指标,考察了不同的提取方式,包括提取方法(超声提取和回流提取)、提取溶剂(甲醇、甲醇-盐酸(100:1)、甲醇-盐酸(100:3)、70%甲醇、70%甲醇-盐酸(100:1)。研究并优化了溶剂剂量(30、50、70mL)和提取时间(15、30、45min)。
最后,选择50mL甲醇-盐酸(100:1)超声提取30分钟的样品提取方法作为最佳提取参数。此外,研究了不同类型的色谱柱,结果表明采用Welch(250mm×4.6mm,5μm)时,所得色谱曲线基线平稳,分离良好,保留时间适中,选择Welch(250mm×4.6mm,5m)进行分离。以乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液为最佳洗脱液,采用梯度洗脱,色谱曲线基线良好,具有较好的分离度。
8种化合物的线性结果如表2所示,具有良好的线性关系(R2>0.9993)。LOD和LOQ值分别为0.03~0.54ng和0.11~1.90ng。
表2酒蒸黄连中8种化合物的线性关系、检出限和定量限
精密度实验中,各组分峰面积的RSD值在0.88~1.51%之间,表明该仪器具有较高的精密度。
重复性试验中,各组分的相对标准偏差小于2.98%,表明该方法具有良好的重复性。
稳定性试验中,各组分的RSD值分别为1.12%、1.06%、1.09%、1.25%、1.13%、1.93%、1.18%和0.99%,表明各组分在24小时内稳定。
各组分回收率在96.97~103.01%之间,RSD为0.92~2.88%。结果表明各检测指标回收率良好。如表3所示。
表3 加样回收结果
根据10批酒蒸黄连样品的色谱图进行分析,结果表明酒蒸黄连共有13个特征峰(图3),通过与对照品的比较确定了8个峰。峰4为格兰地新、峰7-13分别为非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱。上述特征峰的规律性较强,一致性较好,可作为酒蒸黄连的质量评价方法。所建立的指纹图谱具有很强的特异性,能用于酒蒸黄连的鉴别。
根据HPLC-PDA测定结果,10批酒蒸黄连样品的8种组分的定量结果如表4所示。在酒蒸黄连中,盐酸小檗碱和盐酸黄连碱的含量是最高的两种成分,平均含量分别为7.69%和2.46%,加工过程可能引起其它生物碱含量的变化。
表4 10批酒蒸黄连中的各组分的含量
从指纹图谱和多组分含量测定的角度分析酒蒸黄连,建立同时测定酒蒸黄连中8个组分的方法,方法简单,重现性好。该法为酒蒸黄连的质量标准提供参考,为后续的研究奠定了基础。
综上,本发明酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法,建立的指纹图谱具有很强的特异性,特征峰的规律性强,一致性较好,可作为酒蒸黄连的质量评价方法,同时也可用于酒蒸黄连中格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小襞碱和/或小檗红碱的含量测定,并能有效鉴别酒蒸黄连。

Claims (11)

1.一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法,其特征在于:它是采用高效液相色谱法检测,其操作步骤如下:
1)参照物溶液的制备:取生物碱类对照品,加甲醇溶解,即得;
2)供试品溶液的制备:取待测样品,加甲醇-盐酸提取,过滤,取滤液,加甲醇稀释2-5倍,即得;
3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪,色谱条件如下:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:以乙腈为流动相A,以0.1%三氟乙酸溶液为流动相B梯度洗脱;梯度洗脱程序如下:
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤1)所述生物碱类对照品为格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小襞碱和/或小檗红碱。
3.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于:所述格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱在参照物溶液中浓度分别为1.36μg/ml,7.12μg/ml,0.643μg/ml,4.176μg/ml,18.33μg/ml,0.515μg/ml,15.708μg/ml和58.32μg/ml。
4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤2)所述待测样品与甲醇-盐酸的质量体积比为0.2g:50ml;所述滤液加甲醇稀释5倍。
5.根据权利要求1或4所述的检测方法,其特征在于:步骤2)所述甲醇-盐酸的体积比为100:1;所述加甲醇稀释5倍。
6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤2)所述提取为超声提取,时间30min,功率250W,频率40kHz。
7.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤3)所述的分别注入液相色谱仪的参照物溶液和供试品溶液量为10μl。
8.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤3)所述色谱条件的波长为346nm,柱温为25℃,流动相流速为1.00ml/min,理论板数不低于6000。
9.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤3)所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱为WelchXB-C18,规格为:250mm×4.6mm,5μm。
10.根据权利要求1~9任意一项所述的检测方法,其特征在于:所述供试品为酒蒸黄连,其特征图谱中应呈现13个特征峰,与格兰地新参照物相应的峰为峰4,与非洲防己碱参照物相应的峰为峰7,与表小檗碱参照物相应的峰为峰8,与盐酸药根碱参照物相应的峰为峰9,与盐酸黄连碱参照物相应的峰为峰10,与小檗红碱参照物相应的峰为峰11,与盐酸巴马汀参照物相应的峰为峰12,与盐酸小檗碱参照物相应的峰为峰13。
11.根据权利要求10所述的检测方法,其特征在于:所述供试品为酒蒸黄连,其通过特征图谱计算的盐酸小檗碱含量大于7%,盐酸黄连碱的含量大于2%。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111610272A (zh) * 2020-06-05 2020-09-01 广东华南药业集团有限公司 一种液相色谱法分离测定小檗碱及其杂质的方法
CN112578038A (zh) * 2020-11-17 2021-03-30 沈阳化工大学 一种盐酸小檗碱原料药分析检测方法
CN118191130A (zh) * 2024-03-06 2024-06-14 南方医科大学第五附属医院 一测多评法测定黄连解毒汤中7种生物碱成分含量

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101874832A (zh) * 2009-04-30 2010-11-03 成都中医药大学 酒蒸黄连炮制品及其制备方法和用途

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101874832A (zh) * 2009-04-30 2010-11-03 成都中医药大学 酒蒸黄连炮制品及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SILVIA SPINOZZI 等: "Berberine and Its Metabolites: Relationship between Physicochemical Properties and Plasma Levels after Administration to Human Subjects", 《J. NAT. PROD.》 *
刘芳 等: "基于生物碱类成分优选黄连药材的加工方法", 《中国医院药学杂志》 *
周元瑶 等: "高效液相色谱-二极管阵列检测法用于植物药中原小檗碱型季铵生物碱的研究", 《中草药》 *
孙佳彬 等: "高压酒蒸黄连质量标准研究", 《亚太传统医药》 *
张春艳 等: "黄连HPLC Maxplot指纹图谱的建立", 《天津中医药》 *
虞文妹 等: "基于超高效液相色谱分析黄连、吴茱萸配伍药对的有效成分", 《世界中医药》 *
降雪 等: "黄连酒炙过程中5种生物碱的变化研究", 《中国中医药信息杂志》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111610272A (zh) * 2020-06-05 2020-09-01 广东华南药业集团有限公司 一种液相色谱法分离测定小檗碱及其杂质的方法
CN112578038A (zh) * 2020-11-17 2021-03-30 沈阳化工大学 一种盐酸小檗碱原料药分析检测方法
CN118191130A (zh) * 2024-03-06 2024-06-14 南方医科大学第五附属医院 一测多评法测定黄连解毒汤中7种生物碱成分含量

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