CN109060985A - 一种俄色果提取物及其质量检测方法 - Google Patents

一种俄色果提取物及其质量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种俄色果提取物，采用高效液相色谱检测，具有至少6个特征峰，相对保留时间分别为：峰1：0.408±5％；峰3：1.000±5％；峰4：1.050±5％；峰9：1.586±5％；峰10：1.962±5％；峰11：2.335±5％。本发明还提供了一种检测俄色果提取物的质量的方法。本发明指纹图谱方法分离好，且该方法简便、准确、快速，重复性好，可用于评价俄色果药材的质量。

Description

一种俄色果提取物及其质量检测方法
技术领域
本发明涉及一种俄色果提取物及其质量检测方法。
背景技术
俄色果为蔷薇科植物变叶海棠Malus toringoides(Rehd.)Hughes.和花叶海棠Malus transitoria(Batal.)Schneid.的干燥成熟果实。在甘孜藏区，俄色果习称瓦多、红瓦多、白瓦多等，此外在甘肃又称大白石枣、小白石枣、涩枣子等，另还有花叶杜梨(陕北)、马杜梨、细弱海棠等别名。俄色果在《新修晶珠本草》、《中华藏本草》和《藏汉大辞典》中均有记载，具有“健胃、降血压，治肝病、高血压、腹泻、眼病、月经不调”等作用。俄色果在藏区的药用历史悠久，但其现代药理作用研究甚少，文献报道俄色果对酒精造成的小鼠急性肝损伤表现出一定的保护作用。(见曾俊，等，藏药“俄色果”对CCl4诱导HL-7702肝细胞损伤的保护作用，中国商品学会第五届全国中药商品学术大会论文集，2017-05-12)。
对于俄色果的质量检测方法，目前尚无相关的文献报道。
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种俄色果提取物。本发明的另一技术方案是提供了该一种检测俄色果质量的方法。
本发明提供了一种俄色果提取物，采用高效液相色谱检测，具有至少6个特征峰，相对保留时间分别为：峰1：0.408±5％；峰3：1.000±5％；峰4：1.050±5％；峰9：1.586±5％；峰10：1.962±5％；峰11：2.335±5％；
其色谱条件为：
色谱柱为Insertsil ODS-3(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸溶液(B)，梯度洗脱，洗脱程序为：0～10min，12％～15％A；10～15min，15％～18％A；15～62min，18％A；62～65min，18％～25％A；65～70min，25％A；70～80min，25％～35％A；80～85min，35％～40％A；85～90min，40％～50％A；柱温30℃；检测波长350nm；进样量10μL；体积流量为0.8mL.min-1。
进一步优选地，还含有5个特征峰，相对保留时间分别为：峰2：0.476±5％；峰5：1.232±5％；峰6：1.294±5％；峰7：1.455±5％；峰8：1.528±5％。
本发明还提供了一种检测所述的俄色果提取物的质量的方法，它是采用HPLC方法检测，包括如下步骤：
a、供试品溶液制备：取俄色果粉末，过筛，精密称定，加入甲醇提取，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，滤过，即得；
b、对照品溶液制备：精密称取绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素、根皮苷；加甲醇溶解并稀释至刻度摇匀，制成相应质量浓度的混合对照品溶液；
c、分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，检测。
其中，a、b步骤所述的甲醇为50％甲醇。
其中，a步骤所述的提取方法为超声提取。
其中，c步骤所述的检测色谱条件为：色谱柱为Insertsil ODS-3(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸溶液(B)，梯度洗脱，洗脱程序为：0～10min，12％～15％A；10～15min，15％～18％A；15～62min，18％A；62～65min，18％～25％A；65～70min，25％A；70～80min，25％～35％A；80～85min，35％～40％A；85～90min，40％～50％A；柱温30℃；检测波长350nm；进样量10μL；体积流量为0.8mL.min-1。
采用高效液相色谱方法建立了俄色果药材的指纹图谱，确定了11个共有峰构成俄色果药材的特征指纹图谱，根据对照品确认了特征指纹图谱中6个特征峰：1号峰为绿原酸，3号峰为金丝桃苷，4号峰为异槲皮苷，9号峰为槲皮苷，10号峰为根皮苷，11号峰为槲皮素。对采集的11批不同基原和年份的俄色果药材进行了相似度分析，各批药材的相似度均在0.9以上。
本发明采用乙腈-磷酸溶液洗脱系统，使俄色果大部分黄酮类化合物得到了较好分离，得到较完整的HPLC图谱，确定了指纹图谱条件。本发明检测方法所采用的供试品制备简单，色谱条件易于实现；该方法快速、准确，精密度，重现性和稳定性良好，色谱峰信息丰富且分离度好，所建立的指纹图谱能够有效地表征俄色果的质量。本发明提供了一种俄色果指纹图谱的构建方法，通过该方法可获得俄色果较为全面的图谱信息，为俄色果质量的控制提供了理论和实践基础。
本发明指纹图谱方法分离好，且该方法简便、准确、快速，重复性好，可用于评价俄色果药材的质量。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1 11批俄色果HPLC指纹图谱及其对照指纹图谱(R)
图2俄色果HPLC图
具体实施方式
本实验比较了甲醇-0.1％磷酸水溶液、乙腈-0.1％磷酸水溶液洗脱系统，结果表明乙腈-0.1％磷酸水溶液洗脱系统分离效果较好，故选用乙腈-0.1％磷酸水溶液洗脱系统。测定了多个波长(256、286、330、340、345、350、355、360nm)的色谱图，发现俄色果在350nm处基线平稳，出峰数目最多，色谱峰相互之间分离效果最好，且各峰形较好，故俄色果检测波长为350nm。分别考察了0.8mL.min-1和1mL.min-1的体积流量，结果表明体积流量为0.8mL.min-1样品的基线较平，各成分能达到很好的分离效果，因而体积流量选择0.8mL.min-1。
在样品处理过程中，俄色果比较了料液比1:50、1:25、1:12.5，结果料液比1:12.5色谱峰数目最多且峰形较好。分别考察了俄色果超声提取时间30min、45min、60min，结果均表明超声45min后，延长提取时间，提取量无明显差别，故提取时间选择45min。
试验例1本发明俄色果HPLC指纹图谱建立
1色谱条件
色谱柱为Insertsil ODS-3(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸溶液(B)，梯度洗脱，洗脱程序为：0～10min，12％～15％A；10～15min，15％～18％A；15～62min，18％A；62～65min，18％～25％A；65～70min，25％A；70～80min，25％～35％A；80～85min，35％～40％A；85～90min，40％～50％A；柱温30℃；检测波长350nm；进样量10μL；体积流量为0.8mL.min-1。
2溶液的制备
混合对照品溶液制备：精密称取绿原酸、槲皮素对照品各1mg，金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷对照品各2mg，根皮苷5mg，置于50mL容量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度摇匀，制成相应质量浓度的混合对照品溶液。
供试品溶液制备：取俄色果粉末(过四号筛)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇25mL，称定质量，超声提取45min，放冷，再称定质量，用50％甲醇补足减失的质量，0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
3方法学考察
3.1精密度试验
取俄色果(S1)供试品溶液，按“1色谱条件”项下色谱条件连续进样6次，记录色谱图，计算各主要色谱峰相对峰面积RSD值在0.12％～2.70％，相对保留时间RSD值在0.03％～1.44％，表明仪器精密度良好。
3.2稳定性试验
取俄色果(S1)供试品溶液，在“1色谱条件”项下色谱条件下，分别于0、2、4、8、12、24h进行液相分析，记录色谱图，计算各主要色谱峰相对峰面积RSD值在0.16％～2.92％，相对保留时间RSD值在0.05％～1.54％，表明供试品溶液在24h内稳定。
3.3重复性试验
取同一批俄色果(S1)供试品，按按“2溶液的制备”项下方法平行制备6份，按“1色谱条件”项下色谱条件依次测定，计算各主要色谱峰相对峰面积RSD值在0.67％～2.64％，相对保留时间RSD值在0.02％～0.26％，表明方法重复性良好。
4俄色果HPLC指纹图谱的建立与分析
将收集的11批俄色果样品按“2溶液的制备”项下俄色果供试品溶液制备方法进行制备，并按“1色谱条件”项下色谱条件进行HPLC测定，记录色谱图。
由色谱图可知，金丝桃苷的色谱峰分离度良好，峰型稳定，且各样品中均含有此峰，故将金丝桃苷作为参照峰(S)。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A版建立俄色果的HPLC指纹图谱，结果见图1。
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A版，以共有模式图谱(R)为参照，计算相似度，结果见表1。俄色果HPLC指纹图谱相似度分别为0.957、0.955、0.948、0.952、0.949、0.921、0.977、0.957、921、0.977，相似度均在0.9以上，因此可作为俄色果HPLC指纹图谱对俄色果样品进行比较分析研究。
表1 11批俄色果HPLC指纹图谱相似度评价结果
5色谱峰的指认
分别取混合对照品溶液和俄色果供试品溶液，按“1色谱条件”项下色谱条件进行HPLC测定，色谱图见图2。通过与混合对照品色谱峰进行对比分析，对其中6个色谱峰进行指认定性，分别为1号峰为绿原酸，3号峰为金丝桃苷，4号峰为异槲皮苷，9号峰为槲皮苷，10号峰为根皮苷，11号峰为槲皮素。

Claims (6)

1.一种俄色果提取物，其特征在于：采用高效液相色谱检测，具有至少6个特征峰，相对保留时间分别为：峰1：0.408±5％；峰3：1.000±5％；峰4：1.050±5％；峰9：1.586±5％；峰10：1.962±5％；峰11：2.335±5％；
其色谱条件为：
色谱柱为Insertsil ODS-3(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸溶液(B)，梯度洗脱，洗脱程序为：0～10min，12％～15％A；10～15min，15％～18％A；15～62min，18％A；62～65min，18％～25％A；65～70min，25％A；70～80min，25％～35％A；80～85min，35％～40％A；85～90min，40％～50％A；柱温30℃；检测波长350nm；进样量10μL；体积流量为0.8mL.min-1。
2.根据权利要求1所述的俄色果提取物，其特征在于：还含有5个特征峰，相对保留时间分别为：峰2：0.476±5％；峰5：1.232±5％；峰6：1.294±5％；峰7：1.455±5％；峰8：1.528±5％。
3.一种检测权利要求1或2所述的俄色果提取物的质量的方法，其特征在于：它是采用HPLC方法检测，包括如下步骤：
a、供试品溶液制备：取俄色果粉末，过筛，精密称定，加入甲醇提取，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，滤过，即得；
b、对照品溶液制备：精密称取绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素、根皮苷；加甲醇溶解并稀释至刻度摇匀，制成相应质量浓度的混合对照品溶液；
c、分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，检测。
4.根据权利要求3所述的检测俄色果提取物的质量的方法，其特征在于：a、b步骤所述的甲醇为50％甲醇。
5.根据权利要求3所述的检测俄色果提取物的质量的方法，其特征在于：a步骤所述的提取方法为超声提取。
6.根据权利要求3所述的检测俄色果提取物的质量的方法，其特征在于：c步骤所述的检测色谱条件为：色谱柱为Insertsil ODS-3(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸溶液(B)，梯度洗脱，洗脱程序为：0～10min，12％～15％A；10～15min，15％～18％A；15～62min，18％A；62～65min，18％～25％A；65～70min，25％A；70～80min，25％～35％A；80～85min，35％～40％A；85～90min，40％～50％A；柱温30℃；检测波长350nm；进样量10μL；体积流量为0.8mL.min-1。
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