CN105092767A

CN105092767A - 一种半合成药物中间体的质量检测方法

Info

Publication number: CN105092767A
Application number: CN201410214812.6A
Authority: CN
Inventors: 严洁; 李轩
Original assignee: Tianjin Hankang Pharmaceutical Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Tianjin Hankang Pharmaceutical Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2014-05-21
Filing date: 2014-05-21
Publication date: 2015-11-25

Abstract

本发明涉及的是一种半合成药物中间体的质量检测方法，采用HPLC指纹图谱法进行检测，其中以乙腈-水-磷酸系统为流动相进行梯度洗脱，能全面的分析提取物中的黄酮类化合物成分，能够有效的控制产品的质量。

Description

一种半合成药物中间体的质量检测方法

技术领域

本发明涉及药物检测领域，具体涉及一种半合成药物中间体的质量检测方法。

背景技术

半合成药物是指在天然药物提取物的基础上，进行化合结构改造，所获得药物的统称。而天然药物提取物的质量对最后成药的质量至关重要。

天然药物指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在天然药物化学成分系统研究的基础上，主要用于评价天然药物及其提取物质量的真实性、优良性和稳定性。

天然药物及其提取物均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，建立天然药物指纹图谱将能较为全面地反映天然药物及其提取物中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。天然药物指纹图谱的研究和建立，对于有效控制天然药物的质量具有重要意义。

近年来，现代中医学研究表明，天然植物药中的黄酮类化合物具有降血糖和血脂、降低心肌耗氧量、软化血管、抗心律不齐、使冠脉和脑血管流量增加等功能，植物中总黄酮测定有高效液相色谱法、毛细管电泳法、紫外分光光度法、气相色谱法等方法，目前，一般采用高效液相色谱法对天然药物中的总黄酮含量进行测定。

本申请发明人对高效液相色谱法测定天然药物中的黄酮类化合物进行研究，发现了一种便捷，灵敏度高的，能够对多种天然药物中的黄酮类化合物进行测定，为产品的质量得到更好的控制奠定基础。

发明内容

本发明涉及的是一种半合成药物中间体的质量检测方法，能全面的分析药物中的黄酮类化合物成分，用以有效的控制产品的质量。

本发明首先公开了一种半合成药物中间体的质量检测方法，采用HPLC指纹图谱法进行检测，具体步骤如下：

1）取中间体粉末样品和对照品粉末，精密称定并以甲醇或乙醇为溶剂溶解、定容后，得供试品溶液和对照品溶液；

2）精密吸取供试品溶液或对照品溶液注入高效液相色谱仪，采用反相色谱柱进行HPLC分析，HPLC指纹图谱法的条件为：柱温20～30℃，流动相为乙腈-水-磷酸系统，梯度洗脱，流速为0.7～1.5ml/mim，检测波长为370nm。

较优的，步骤1）中所述溶剂为30～100v/v%甲醇水溶液或50v/v%乙醇水溶液；

最优的，步骤1）中溶解药物样品的溶剂为50v/v%甲醇水溶液；溶解对照品的溶剂为100v/v%甲醇溶液。

较优的，步骤1）所述溶解为超声溶解。更优的，步骤1）超声溶解的时间为5～

30min。最优的，步骤1）超声溶解的时间为10min。

较优的，步骤1）供试品溶液还需要经0.22μm微孔滤膜过滤。

较优的，步骤3）所述反相色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18色谱柱。

较优的，步骤3）所述乙腈-水-磷酸系统中，流动相A为乙腈，流动相B为0.05v/v%磷酸溶液。

更优的，步骤3）所述梯度洗脱程序以及流动相的组成为：洗脱时间0~35min，磷酸溶液：乙腈=95:5，流速为1.0ml/min，洗脱时间35~55min，磷酸溶液：乙腈=85:15，流速为1.5ml/min，洗脱时间55~70min，磷酸溶液：乙腈=45:55，流速为0.7ml/min。

优选的，步骤3）精密吸取供试品溶液或参照物溶液5～15ul，优选10ul注入高效液相色谱仪，进行测定。记录60～90min，优选70分钟的色谱图。

与现有技术相比，本发明由于对色谱条件进行合理设置，使得本发明半合成药物中间体的质量检测方法更为简便、易行、重复性好，通过HPLC指纹图谱检测半合成药物中间体中总黄酮的含量，更利于其质量控制，有助于提高药剂的安全性和稳定性。

具体实施方式

下面结合实施例进一步阐述本发明。应理解，实施例仅用于说明本发明，而非限制本发明的范围。

实施例1

1.仪器与试剂

仪器：Agilent1100型高效液相色谱仪，四元泵，全自动进样仪；二极管阵列检测

器（DAD）；色谱柱：AgilentZORBAXSB-C18StableBondAnalytical4.6*150mm5-Micron。

试药：芦丁；槲皮素；金丝桃苷；金银花总黄酮

2.实验方法

样品溶液的制备

1）供试品溶液的制备：取金银花总黄酮0.5g，精密称定，置25ml容量瓶中，加50%甲醇适量，超声提取10min，冷却后加50%甲醇定容至刻度，用

0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，即得。

2）对照品溶液的制备：精密称取芦丁、槲皮素、金丝桃苷对照品适量，置于25ml容量瓶中，加100%甲醇超声溶解，制成每1ml含芦丁0.060mg、槲皮素0.320mg、金丝桃苷0.200mg的混合对照品。

色谱条件

色谱柱：AgilentZORBAXSB-C18StableBondAnalytical4.6*150mm

5-Micron；检测波长为370nm；柱温为25℃；洗脱流速及流动相梯度如下表1，图谱记录时间为70min。此条件下对照品芦丁、槲皮素、金丝桃苷的保留时间分别为20.091min，23.160，26.320min，。

表1乙腈-0.05v/v%磷酸溶液梯度洗脱表

洗脱时间	磷酸溶液0.05v/v%	乙腈v/v%	流速ml/min
				0~35	95	5	1.0
35~55	85	15	1.5
				55~70	45	55	0.7

流动相的确定

实验过程中选择了4种流动相系统：①甲醇-水（22:78）固定配比；②甲醇-水的梯度洗脱；③乙腈-0.5%磷酸梯度洗脱；④乙腈-0.05%磷酸梯度洗脱。

结果表明，以乙腈-0.05%磷酸系统，即如表1所示的梯度洗脱条件为最佳，谱图上各个色谱峰的分离度较好，色谱峰多，保留时间适中，故选乙腈-水-磷酸系统作为HPLC指纹图谱检测流动相。

提取溶剂的考察

精密称定金银花提取物5份，每份0.2g，分别置于25ml容量瓶中；对上述5分粉末分别用适量100%甲醇、70%甲醇、50%甲醇、30%甲醇、50%乙醇五种溶剂（有机溶剂的水溶液）进行超声提取10min，冷却后用相同的溶剂定容至刻度，用0.22μm微孔滤膜过滤，获得不同溶剂提取的滤液作为供试品溶液。

不同提取溶剂制备的提取物样品进行测定，由HPLC结果可知，上述溶剂提取后，均能获得正确分离的HPLC图谱；其中，50%甲醇提取液色谱图

中色谱峰分离最好，故选用50%甲醇作为样品制备优选溶剂。

提取方式的考察

取金银花提取物5份，每份0.2g，精密称定，置于25ml容量瓶中，采用50%

甲醇作为溶剂对金银花粉末超声提取进行溶解，分别检验超声处理5min、10min、15min、20min、30min的提取效果，超声后冷却、定容，0.22μm微孔滤膜过滤后进样分析。

结果表明当提取时间大于10min，提取时间对提取效率产生的影响降低，考虑到实验的快捷、简便，故样品提取超声时间定为10min。

精密度实验

取供试品溶液，按照上述色谱条件，连续进样6次，记录色谱图。结果表明，各共有峰的相对保留时间和相对峰面积比值基本一致，各峰保留时间比值的RSD在0.00%~0.46%，峰面积比值的RSD在0.20%~2.83%，RSD均小于3%，符合指纹图谱技术要求。结果表明，仪器等整个检测系统的精密度良好。

稳定性实验

取供试品溶液，按照上述色谱条件，分别于0、2、4、6、8、22、24h进行检测，记录色谱图。结果表明，样品在24h内，各共有峰的相对保留时间和相对峰面积比值基本一致，各峰相对保留时间比值的RSD在0.09%~0.47%；各峰相对面积比值的RSD在0.28%~2.81%；RSD均小于3%，符合指纹图谱的技术要求。结果表明供试品24h内指纹图谱稳定。

对比实施例1

采用现有技术中的GC-MS检测方法对半合成药物中间体中的黄酮类化合物进行检测分析，进一步验证本发明所采用方法的准确度和灵敏度。

色谱柱：DB-1毛细管柱（30m×0.25mm，0.25μm）；

溶剂：正己烷；

载气：氦气；

进样口：分流，温度200℃；

柱温：程序升温100℃保持3分钟后以15℃每分钟升温到180℃保持5分钟；

柱流速：2.0ml/min；

分流进样：分流比10:1；

进样模式：顶空进样；

顶空进样器：炉温100℃保温10分钟，针温度100℃，进样量1ml；

MS参数：采用全扫描模式；采集质量数范围：40-510。

供试品溶液：称取金银花总黄酮样品适量，精密称定，先用少量水溶解，加乙醇适量并超声提取10min，再用乙醇定容制成10mg/ml溶液；

对照品溶液：分别精密称取芦丁、槲皮素、金丝桃苷对照品适量，精密称定，用乙醇溶解并稀释配成0.02mg/ml溶液。

分别取对照品、供试品溶液，依法顶空进样，记录色谱图，计算色谱峰面积。

结果显示金银花总黄酮中各黄酮类化合物的含量与采用本发明的HPLC法测定的含量相符。

Claims

1.一种半合成药物中间体的质量检测方法，采用HPLC指纹图谱法进行检测，具体步骤如下：

1）取中间体的粉末样品和对照品粉末，精密称定并以甲醇或乙醇为溶剂溶解、定容后，得供试品溶液和对照品溶液；

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤1）中所述溶剂为30～100v/v%甲醇水溶液或50v/v%乙醇水溶液。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤1）所述溶解为超声溶解，超声溶解的时间为5～30min。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤2）所述反相色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18色谱柱。

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤2）所述乙腈-水-磷酸系统包括流动相A和流动相B，其中流动相A为乙腈，流动相B为0.05v/v%磷酸溶液。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤2）所述梯度洗脱程序以及流动相的组成为：洗脱时间0~35min，磷酸溶液：乙腈=95:5，流速为1.0ml/min，洗脱时间35~55min，磷酸溶液：乙腈=85:15，流速为1.5ml/min，洗脱时间55~70min，磷酸溶液：乙腈=45:55，流速为0.7ml/min。