CN102776174A - 一种从百合组织中同时提取dna和rna的方法 - Google Patents
一种从百合组织中同时提取dna和rna的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102776174A CN102776174A CN2012102964642A CN201210296464A CN102776174A CN 102776174 A CN102776174 A CN 102776174A CN 2012102964642 A CN2012102964642 A CN 2012102964642A CN 201210296464 A CN201210296464 A CN 201210296464A CN 102776174 A CN102776174 A CN 102776174A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- rna
- dna
- lily
- supernatant
- mixing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000234435 Lilium Species 0.000 title claims abstract description 77
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 68
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 title abstract description 102
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 title abstract 9
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 title 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 56
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 28
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 22
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 22
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 13
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 8
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 52
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 52
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 50
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 32
- 241001634091 Lilium regale Species 0.000 claims description 25
- 239000010353 tongjiang Substances 0.000 claims description 24
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 20
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 20
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 17
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 15
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 claims description 15
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 14
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 12
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N guanidine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.NC(N)=N YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 5
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 5
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 5
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 5
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000009514 concussion Effects 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 claims description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 abstract description 24
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 abstract description 24
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 abstract description 20
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 abstract description 10
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 6
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 abstract description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 2
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 abstract 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 23
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 13
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 12
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 10
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 10
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 5
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- -1 polysaccharide polyphenol Chemical class 0.000 description 4
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- 244000228451 Stevia rebaudiana Species 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 3
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N rebaudioside A Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 244000298697 Actinidia deliciosa Species 0.000 description 2
- 235000009436 Actinidia deliciosa Nutrition 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 244000274847 Betula papyrifera Species 0.000 description 2
- 235000009113 Betula papyrifera Nutrition 0.000 description 2
- 235000009109 Betula pendula Nutrition 0.000 description 2
- 235000010928 Betula populifolia Nutrition 0.000 description 2
- 235000002992 Betula pubescens Nutrition 0.000 description 2
- 240000008564 Boehmeria nivea Species 0.000 description 2
- 235000004936 Bromus mango Nutrition 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 2
- 241000274842 Kalidium Species 0.000 description 2
- 240000007228 Mangifera indica Species 0.000 description 2
- 235000014826 Mangifera indica Nutrition 0.000 description 2
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 2
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 2
- 235000009184 Spondias indica Nutrition 0.000 description 2
- NDQKGYXNMLOECO-UHFFFAOYSA-N acetic acid;potassium Chemical compound [K].CC(O)=O NDQKGYXNMLOECO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 229960004249 sodium acetate Drugs 0.000 description 2
- 239000005418 vegetable material Substances 0.000 description 2
- 241001513358 Billardiera scandens Species 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 235000002722 Dioscorea batatas Nutrition 0.000 description 1
- 235000006536 Dioscorea esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 240000001811 Dioscorea oppositifolia Species 0.000 description 1
- 235000003416 Dioscorea oppositifolia Nutrition 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000404037 Eucalyptus urophylla Species 0.000 description 1
- 235000016623 Fragaria vesca Nutrition 0.000 description 1
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 description 1
- 235000011363 Fragaria x ananassa Nutrition 0.000 description 1
- 240000006444 Lilium sargentiae Species 0.000 description 1
- 235000016025 Lilium sargentiae Nutrition 0.000 description 1
- RHEXWAQFMZCXIM-UHFFFAOYSA-N NC(N)=N.N=C=S.OC1=CC=CC=C1.ClC(Cl)Cl Chemical compound NC(N)=N.N=C=S.OC1=CC=CC=C1.ClC(Cl)Cl RHEXWAQFMZCXIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 1
- 238000003976 plant breeding Methods 0.000 description 1
- 230000008638 plant developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 230000037039 plant physiology Effects 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000012913 prioritisation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 150000004053 quinones Chemical class 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了一种同时提取百合组织中DNA和RNA的方法，该方法是利用百合组织样品经过相同的步骤粗提和纯化，得到总核酸溶液，再依次选择性沉淀RNA和DNA，得到高质量的DNA和RNA；本发明方法优点在于所用时间短、经济快速、稳定性好，并且提取的核酸质量高；其特点在于两次利用高浓度醋酸钾沉淀多糖，能有效地去除百合样品中的多糖；在DNA和RNA分离过程中，先用氯化锂和无水乙醇协同作用选择性沉淀RNA，然后利用醋酸钠和异丙醇沉淀DNA，DNA和RNA分离效率高，核酸损失小，且沉淀时间大大缩短。该方法适用于从富含多糖及其他次生代谢物质的百合组织中同时提取DNA和RNA。
Description
技术领域
本发明属于植物分子生物学技术领域，具体涉及从百合组织中同时提取DNA和RNA的方法，尤其是从百合鳞片中同时提取DNA和RNA的方法。
背景技术
提取较高质量的DNA和RNA是分子生物学实验研究的一项最基本工作，使用一种简便、高效的核酸提取方法对提高实验效率很有必要。目前，植物组织DNA的提取方法主要有CTAB法、SDS法、高盐低渗法等，RNA提取的主要方法有异硫氰酸胍-酚-氯仿法（一步法）、CTAB法、SDS法和热硼酸法等。这些提取方法的步骤基本相似，首先充分破碎植物细胞的细胞壁，接着使核蛋白复合体中的蛋白充分变性，实现核蛋白与核酸的分离；同时抑制内源和外源核酸酶的活性，防止核酸污染被降解，然后将DNA和RNA与多糖、多酚等杂质分离，得到纯净的DNA或RNA，最后进行质量检测。目前，常规的核酸提取方法或使用的试剂盒大都是针对单独的DNA或RNA进行提取，较少有用一种方法同时提取植物组织中的DNA和RNA。
百合等植物中富含大量的多糖类物质和酚类化合物，同时还含有较多的成分确定或不确定的次生代谢物。酚类化合物在匀浆和提取过程中极易被氧化成醌类物质，与核酸发生不可逆结合，严重影响核酸的分离纯化。多糖的许多理化性质与核酸相似，在提取过程中与核酸共沉淀，很难将它们分离。在植物生长发育过程中，包括DNase和RNase在内的各种水解酶大量积累，同时各种次生代谢物质大量积累，给植物组织中核酸的提取带来极大的困难。近年来，有关从富含多糖多酚及次生代谢物质的植物组织中提取DNA或RNA的方法已有较多报道。葛晓萍等利用CTAB-LiCl法从苹果和草莓的一些组织中提取到总RNA（一种适合多糖、多酚植物的RNA提取方法。青岛科技大学学报，2007，28：6-8）。郭书巧等也利用CTAB-LiCl法从甜叶菊中成功的分离了甜叶菊的总RNA（甜叶菊RNA分离方法研究。基因组学与应用生物学，2009，28：101-104）。贾晋等确定了SDS法为提取盐爪爪核酸的最佳方法，同时增加了LiCl和无水乙醇特异沉淀步骤，用于RNA的提取（盐爪爪核酸提取方法研究。中国农学通报，2010,26:49-52）。陈肃等通过无水乙醇对植物材料的预处理，用CTAB-LiCl-无水乙醇法从一些木本植物组织中得到了质量合格的RNA（一种快捷有效的提取树木RNA方法。辽宁林业科技，2008,05:25-27）。尹慧等采用改进了的CTAB从百合叶片中成功的提取了总RNA（百合叶片总RNA提取方法比较及优化。中国农业大学学报，2008，13:41-45）。杜中军等采用改进的SDS法，结合使用无水乙醇和醋酸钾除去多糖，从富含多糖的芒果组织中提取到完整的总RNA（一种改进的富含多糖的芒果组织中完整总RNA的提取方法。植物生理学通讯，2005,41:202-204）。杨秀梅等采用CTAB法提取百合鳞片基因组DNA，用去多糖缓冲液除去多糖，得到了高质量的基因组DNA（百合鳞片DNA的提取及RGA-PCR体系的优化。西南农业学报，2011，24：266-269）。侯思名等利用加入了抗氧化剂和高盐溶液的CTAB法成功提取了苎麻组织的DNA（苎麻总DNA提取的CTAB法优化方案。西北植物学报，2005,25:2193-2197）。占亚光等采用改良的CTAB法从白桦成熟叶片中提取了质量较好的DNA（富含多糖的白桦成熟叶片DNA的提取方法。东北林业大学学报，2005,33:24-25）。
对于同时从一种植物组织中提取DNA和RNA的方法，一些文献也有所报道。黄真池等利用钙盐分级沉淀法从尾叶桉叶片中得到了完整的DNA和RNA（一种木本植物RNA和DNA的简捷提取方法。湖北农业科学，2010,49:773-774）。魏利斌等采用CTAB法同步提取了芝麻中的DNA和RNA（芝麻DNA和RNA同步提取方法。分子植物育种，2008,06:1025-1030）。刘胜洪等利用高盐低pH的缓冲液提取核酸，再用LiCl选择性沉淀RNA，从猕猴桃组织中分离得到了DNA和RNA（一种高效提取猕猴桃DNA和RNA的方法。生物技术通报，2011,09:171-175）。王伶平等利用CTAB法提取山药总核酸，然后总核酸溶液一分为二，一份用于分离RNA，另一份用于分离DNA（一种同时提取植物DNA和RNA的方法。CN101486747B）。
许多植物组织中富含多糖、多酚及次生代谢物质，使得核酸提取困难。目前，对这些植物组织核酸的提取一般只针对单一的DNA或RNA，很少采用一种方法同时提取DNA和RNA。当植物组织有限或较稀少时，单一的提取DNA或RNA很难满足实验的需要。百合组织中富含多糖多酚及次生代谢物质，特别是百合鳞片中多糖含量极高，给百合组织核酸的提取带来极大的困难。现有的同步提取植物DNA和RNA的方法存在耗时长、操作复杂、分离效率低等不足，而且对于百合组织DNA和RNA的提取效果并不好。因此，发展一种应用广、耗时少、操作简便的同步提取百合组织中DNA和RNA的方法十分必要。
发明内容
本发明提供了一种从百合组织中同时提取DNA和RNA的方法，尤其是从多糖含量很高的百合鳞片中同时提取DNA和RNA的方法。
本发明共分为三步，第一步利用异硫氰酸胍法结合高浓度醋酸钾去除多糖得到总核酸粗提沉淀；第二步采用DEPC处理过的ddH2O溶解核酸沉淀，并用碱性的Tris平衡酚和氯仿纯化总核酸，得到总核酸溶液；第三步利用氯化锂和无水乙醇选择性沉淀RNA，之后用醋酸钠以及异丙醇沉淀DNA，最终依次获得了RNA和DNA。
本发明包括以下具体步骤：
（1）取0.5-1g百合植物组织，加入液氮研磨成粉末，按每克组织材料添加12-15ml的异硫氰酸胍提取缓冲液的比例加入预冷的异硫氰酸胍提取液，充分震荡混匀，冰浴10-15min，再加入提取液1/10体积3mol L-1醋酸钠(pH4.5-5.5)，颠倒混匀；其中异硫氰酸胍提取缓冲液成分为：4.5mol L-1 异硫氰酸胍，25mmol L-1柠檬酸钠，0.5%（w/v）十二烷基肌氨酸钠，3%（w/v）可溶性聚乙烯吡咯烷酮，使用前每100mL提取缓冲液加入1mL β-巯基乙醇；
（2）在步骤（1）得到的混合液中加入与提取液等体积的氯仿，剧烈震荡混匀，冰上放置5min后于4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中，重复此步骤一次；
（3）向步骤（2）中得到的上清液中加入1/3提取液体积的8mol L-1 醋酸钾(pH4.5-5.5，预冷)，颠倒混匀，冰上放置10min， 4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中，重复此步骤一次；
（4）向步骤（3）得到的上清液中加入与提取液等体积的异丙醇，混匀后-20℃放置30min，接着4℃ 12000g离心10min，得到核酸粗提沉淀物；
（5）用75%的乙醇清洗沉淀两次，室温下干燥20min，用0.5-1mL DEPC处理过的ddH2O彻底溶解沉淀；
（6）在步骤（5）得到的总核酸溶液中加入0.5-1mLTris饱和酚/氯仿混合液，Tris饱和酚/氯仿混合液中Tris饱和酚与氯仿的体积比为1:1，剧烈震荡混匀，冰上放置5min，于4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中；
（7）向步骤（6）的上清液中加入0.5-1mL氯仿，剧烈震荡混匀，冰上放置5min，4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中；
（8）向步骤（7）的上清液中加入0.125-0.25mL 10mol L-1氯化锂，混匀后加入0.25-0.5mL无水乙醇，上下颠倒混匀后-20℃放置2h沉淀RNA，4℃ 14000g离心15min，取上清液置于新的离心管中；
（9）用75%的乙醇清洗步骤（8）得到的RNA沉淀两次，室温下干燥10min，用60-100μL DEPC处理过的ddH2O溶解RNA沉淀，-80℃保存备用；
（10）向步骤（8）得到的上清液中加入0.875-1.75mL异丙醇和0.0875-0.175mL 3mol L-1醋酸钠(pH4.5-5.5)，混匀后-20℃放置30min沉淀DNA，室温下12000g离心15min，得到DNA沉淀，用75%乙醇清洗两次，在室温下干燥10min，用60-100μL TE缓冲液溶解，于-20℃保存备用。
所用的植物材料为岷江百合(Lilium regale)的幼嫩鳞片、东方百合(Lilium "Oriental Hybrids")西伯利亚百合的幼嫩叶片、通江百合(Lilium sargentiae)的幼嫩根。
本发明在传统的异硫氰酸胍法提取RNA的基础上，针对百合组织中富含多糖多酚及次生代谢物质的特点，特别是多糖含量极高的特点，做了以下改进：
在细胞裂解后，不直接用酚抽提，而是采取氯仿抽提两次，能有效的去除次生代谢物质。
在异丙醇沉淀粗提核酸沉淀之前，两次利用高浓度醋酸钾沉淀多糖，能将有效去除溶液中的多糖。
在沉淀RNA这一步，利用氯化锂和无水乙醇协同选择性沉淀RNA，使沉淀RNA的时间大大缩短，且RNA沉淀充分，接着利用异丙醇和醋酸钠沉淀DNA，实验结果表明本发明所得到的RNA没有DNA的污染，同时提取的DNA中也没有RNA的残留。
本发明操作简便，耗时较短，全部过程可在7小时内完成，较好的解决了从富含多糖多酚及次生代谢物质百合组织提取DNA和RNA过程中多糖和次生代谢物质干扰的问题，且可以同时得到高质量的DNA和RNA，为后续的分子生物学实验奠定了很好的基础。
附图说明
图1为本发明中从岷江百合鳞片中同时提取基因组DNA和总RNA的琼脂糖凝胶电泳图；其中：泳道1为岷江百合鳞片基因组DNA；泳道2为岷江百合鳞片总RNA。
图2为本发明中从西伯利亚百合叶片中同时提取的基因组DNA和总RNA的琼脂糖凝胶电泳图；其中：泳道1为西伯利亚百合叶片基因组DNA；泳道2为西伯利亚百合叶片总RNA。
图3为本发明中从通江百合根中同时提取的基因组DNA和总RNA的琼脂糖凝胶电泳图；其中：泳道1为通江百合根基因组DNA；泳道2为通江百合根总RNA。
图4为本发明中岷江百合鳞片基因组DNA酶切产物的琼脂糖凝胶电泳图；其中：Marker为分子量标准（DL2000 DNA Marker，由2,000bp、1,000bp、750bp、500bp、250bp以及100bp六条DNA片段组成）；泳道1为岷江百合鳞片基因组DNA；泳道2为岷江百合鳞片基因组DNA的EcoRI酶切产物；泳道3为岷江百合鳞片基因组DNA的BamHI酶切产物。
图5为本发明中西伯利亚百合叶片基因组DNA酶切产物的琼脂糖凝胶电泳图；其中：Marker为分子量标准（DL2000 DNA Marker）；泳道1为西伯利亚百合叶片基因组DNA；泳道2为西伯利亚百合叶片基因组DNA的EcoRI酶切产物；泳道3为西伯利亚百合叶片基因组DNA的BamHI酶切产物。
图6为本发明中通江百合根基因组DNA酶切产物的琼脂糖凝胶电泳图；其中：Marker为分子量标准（DL2000 DNA Marker）；泳道1为通江百合根基因组DNA；泳道2为通江百合根基因组DNA的EcoRI酶切产物；泳道3为通江百合根基因组DNA的BamHI酶切产物。
图7为本发明中岷江百合鳞片、西伯利亚百合叶片、通江百合根总RNA用于扩增3-磷酸甘油醛脱氢酶基因（GAPDH）的RT-PCR分析结果；其中：Marker为分子量标准（DL2000 DNA Marker）；泳道1为空白对照（ddH2O为模板）；泳道2为岷江百合鳞片总RNA的RT-PCR产物；泳道3为西伯利亚百合叶片总RNA的RT-PCR产物；泳道4为通江百合根总RNA的RT-PCR产物。
图8为本发明中岷江百合鳞片、西伯利亚百合叶片、通江百合根总RNA用于扩增肌动蛋白基因（Actin）的RT-PCR分析结果；其中：Marker为分子量标准（DL2000 DNA Marker）；泳道1为空白对照（ddH2O为模板）；泳道2为岷江百合鳞片总RNA的RT-PCR产物；泳道3为西伯利亚百合叶片总RNA的RT-PCR产物；泳道4为通江百合根总RNA的RT-PCR产物。
具体实施方式
下面通过附图和实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容。
实施例1：从岷江百合鳞片中同时提取RNA和DNA的方法，具体操作如下：
(1) 取液氮速冻的野生岷江百合幼嫩鳞片0.8g，用液氮研磨成粉末，将样品粉末迅速转移到离心管中，加入12mL预冷的异硫氰酸胍提取缓冲液，充分震荡混匀置于冰上12min，再加入1.2mL 3mol L-1醋酸钠（pH5.0），颠倒混匀；其中异硫氰酸胍提取缓冲液成分为：4.5mol L-1 异硫氰酸胍，25mmol L-1柠檬酸钠，0.5%（w/v）十二烷基肌氨酸钠，3%（w/v）可溶性聚乙烯吡咯烷酮，使用前每100mL提取缓冲液加入1mL β-巯基乙醇；
(2) 在步骤（1）得到的样品混合液中加入12mL氯仿，剧烈震荡混匀，冰上放置5min后于4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中，重复此步骤一次；
(3) 向步骤（2）中得到的上清液中加入4mL 8mol L-1 醋酸钾(pH5.0，预冷)，颠倒混匀，冰上放置10min，4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中，重复此步骤一次；
(4) 向步骤（3）得到的上清液中加入12mL异丙醇，混匀后-20℃放置30min，接着4℃ 12000g离心10min，得到核酸粗提沉淀物；
(5) 用75%的乙醇清洗沉淀两次，室温下干燥20min，用0.8mL DEPC处理过的ddH2O彻底溶解沉淀；
(6)在步骤（5）得到的总核酸溶液中加入0.8mL Tris饱和酚/氯仿混合液，Tris饱和酚/氯仿混合液中Tris饱和酚与氯仿的体积比为1:1，剧烈震荡混匀，冰上放置5min，于4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中；
(7) 向步骤（6）的上清液中加入0.8mL氯仿，剧烈震荡混匀，冰上放置5min，4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中；
(8) 向步骤（7）的上清液中加入0.2mL 10mol L-1氯化锂，混匀后加入0.4mL无水乙醇，上下颠倒混匀后-20℃放置2h沉淀RNA，4℃ 14000g离心15min，取上清液置于新的离心管中；
(9) 用75%的乙醇清洗步骤（8）得到的RNA沉淀两次，室温下干燥10min，用80μL DEPC处理过的ddH2O溶解RNA沉淀，-80℃保存备用；
(10) 向步骤（8）得到的上清液中加入1.4mL异丙醇和0.14mL 3mol L-1醋酸钠(pH5.0)，混匀后-20℃放置30min沉淀DNA，室温下12000g离心15min，得到DNA沉淀，用75%乙醇清洗两次，在室温下干燥10min，用80μL TE缓冲液溶解，于-20℃保存备用。
应用本发明的方法，从0.8g野生岷江百合鳞片中提取了总RNA 63μg，总DNA76μg，RNA和DNA的得率分别为78.75μg/g和95μg/g。
核酸质量检测：经琼脂糖凝胶电泳结果（见图1）表明从岷江百合鳞片中提取的DNA、RNA完整性好。在紫外分光光度计上测定260nm和280nm吸光度比值A260/A280分别为1.76和1.95，而DNA和RNA纯品的A260/A280分别为1.8和2.0，可见利用本发明的方法从岷江百合鳞片中同时提取的RNA和DNA纯度很高，完全满足分子生物学实验的要求。
实施例2：从西伯利亚百合叶片中同时提取RNA和DNA的方法，具体操作如下：
(1) 取液氮速冻的东方百合品种西伯利亚幼嫩叶片1g，用液氮研磨成粉末，将样品粉末迅速转移到离心管中，加入12mL预冷的异硫氰酸胍提取缓冲液，充分震荡混匀置于冰上15min，再加入1.2mL 3mol L-1醋酸钠（pH4.5），颠倒混匀；其中异硫氰酸胍提取缓冲液成分为：4.5mol L-1 异硫氰酸胍，25mmol L-1柠檬酸钠，0.5%（w/v）十二烷基肌氨酸钠，3%（w/v）可溶性聚乙烯吡咯烷酮，使用前每100mL提取缓冲液加入1mL β-巯基乙醇；
(2) 在步骤（1）得到的样品混合液中加入12mL氯仿，剧烈震荡混匀，冰上放置5min后于4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中，重复此步骤一次；
(3) 向步骤（2）中得到的上清液中加入4mL 8mol L-1 醋酸钾(pH4.5，预冷)，颠倒混匀，冰上放置10min，4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中，重复此步骤一次；
(4) 向步骤（3）得到的上清液中加入12mL异丙醇，混匀后-20℃放置30min，接着4℃ 12000g离心10min，得到核酸粗提沉淀物；
(5) 用75%的乙醇清洗沉淀两次，室温下干燥20min，用1mL DEPC处理过的ddH2O彻底溶解沉淀；
(6)在步骤（5）得到的总核酸溶液中加入1mL Tris饱和酚/氯仿混合液，Tris饱和酚/氯仿混合液中Tris饱和酚与氯仿的体积比为1:1，剧烈震荡混匀，冰上放置5min，于4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中；
(7) 向步骤（6）的上清液中加入1mL氯仿，剧烈震荡混匀，冰上放置5min，4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中；
(8) 向步骤（7）的上清液中加入0.25mL 10mol L-1氯化锂，混匀后加入0.5mL无水乙醇，上下颠倒混匀后-20℃放置2h沉淀RNA，4℃ 14000g离心15min，取上清液置于新的离心管中；
(9) 用75%的乙醇清洗步骤（8）得到的RNA沉淀两次，室温下干燥10min，用100μL DEPC处理过的ddH2O溶解RNA沉淀，-80℃保存备用；
(10) 向步骤（8）得到的上清液中加入1.75mL异丙醇和0.175mL 3mol L-1醋酸钠(pH4.5)，混匀后-20℃放置30min沉淀DNA，室温下12000g离心15min，得到DNA沉淀，用75%乙醇清洗两次，在室温下干燥10min，用100μL TE缓冲液溶解，于-20℃保存备用。
应用本发明所述的方法，从1g西伯利亚百合叶片中同时提取获得了102μg总RNA，135μg总DNA；RNA和DNA的得率分别为102μg/g和135μg/g。
质量检测：经琼脂糖凝胶电泳结果（见图2）表明本发明提取的西伯利亚叶片的RNA、DNA完整性很好，在紫外分光光度计上测定260nm和280nm吸光度比值A260/A280分别为1.77和1.96，而DNA和RNA纯品的A260/A280分别为1.8和2.0，可见利用本发明的方法从西伯利亚百合叶片中同时提取的RNA和DNA纯度很高，完全满足分子生物学实验的要求。
实施例3：从通江百合根中同时提取RNA和DNA的方法，具体操作如下：
(1) 取液氮速冻的通江百合幼嫩根0.5g，用液氮研磨成粉末，将样品粉末迅速转移到离心管中，加入6.5mL预冷的异硫氰酸胍提取液，充分震荡混匀置于冰上10min，再加入0.65mL 3mol L-1醋酸钠（pH5.5），颠倒混匀；其中异硫氰酸胍提取缓冲液成分为：4.5mol L-1 异硫氰酸胍，25mmol L-1柠檬酸钠，0.5%（w/v）十二烷基肌氨酸钠，3%（w/v）可溶性聚乙烯吡咯烷酮，使用前每100mL提取缓冲液加入1mL β-巯基乙醇；
(2) 在步骤（1）得到的样品混合液中加入6.5 mL氯仿，剧烈震荡混匀，冰上放置5min后于4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中，重复此步骤一次；
(3) 向步骤（2）中得到的上清液中加入2.17mL 8mol L-1 醋酸钾(pH5.5，预冷)，颠倒混匀，冰上放置10min，4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中，重复此步骤一次；
(4) 向步骤（3）得到的上清液中加入6.5mL异丙醇，混匀后-20℃放置30min，接着4℃ 12000g离心10min，得到核酸粗提沉淀物；
(5) 用75%的乙醇清洗沉淀两次，室温下干燥20min，用0.5mL DEPC处理过的ddH2O彻底溶解沉淀；
(6)在步骤（5）得到的总核酸溶液中加入0.5mL Tris饱和酚/氯仿混合液，Tris饱和酚/氯仿混合液中Tris饱和酚与氯仿的体积比为1:1，剧烈震荡混匀，冰上放置5min，于4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中；
(7) 向步骤（6）的上清液中加入0.5mL氯仿，剧烈震荡混匀，冰上放置5min，4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中；
(8) 向步骤（7）的上清液中加入0.125mL 10mol L-1氯化锂，混匀后加入0.25mL无水乙醇，上下颠倒混匀后-20℃放置2h沉淀RNA，4℃ 14000g离心15min，取上清液置于新的离心管中；
(9) 用75%的乙醇清洗步骤（8）得到的RNA沉淀两次，室温下干燥10min，用60μL DEPC处理过的ddH2O溶解RNA沉淀，-80℃保存备用；
(10) 向步骤（8）得到的上清液中加入0.875mL异丙醇和0.0875mL 3mol L-1醋酸钠(pH5.5)，混匀后-20℃放置30min沉淀DNA，室温下12000g离心15min，得到DNA沉淀，用75%乙醇清洗两次，在室温下干燥10min，用60μL TE缓冲液溶解，于-20℃保存备用。
应用本发明的方法，从0.5g通江百合根中同时提取了总RNA 53μg，总DNA67μg，RNA和DNA的得率分别为106μg/g和134μg/g。
质量检测：琼脂糖凝胶电泳结果（见图3）表明从通江百合根中同时提取的RNA、DNA完整性很好，在紫外分光光度计上测定260nm和280nm吸光度比值A260/A280分别为1.76和1.97，而DNA和RNA纯品的A260/A280分别为1.8和2.0，可见利用本发明的方法从通江百合根中同时提取的RNA和DNA纯度很高，完全满足分子生物学实验的要求。
实施例4：从岷江百合鳞片、西伯利亚百合叶片以及通江百合根中提取基因组DNA的酶切检测
对上述实施例中应用本发明的方法分别提取的岷江百合鳞片、西伯利亚百合叶片以及通江百合根基因组DNA进行限制性内切酶处理，进一步检验所提取DNA的质量。酶切反应体系为：基因组DNA 4μg；限制性内切酶15U（EcoRI或BamHI）；10×Tango Buffer 2μL；补充ddH2O至终体积为20μL。酶切反应时间为12h，酶切结束后取8μL用于琼脂糖凝胶电泳，结果分别如附图4、5、6所示。表明本发明从岷江百合鳞片、西伯利亚百合叶片以及通江百合根中提取基因组DNA均能被EcoRI或BamHI完全酶切，可见所提取的DNA质量高，能满足分子生物学实验所需。
实施例5：从岷江百合鳞片、西伯利亚百合叶片以及通江百合根中提取总RNA的RT-PCR分析
根据上述实施例中测定的RNA浓度，分别将岷江百合鳞片、西伯利亚叶片以及通江百合根总RNA样品稀释至0.5μg/μL。采用TIANScript cDNA第一链合成试剂盒将RNA逆转录成第一链cDNA，反应体系和操作过程如下：分别取总RNA 5μg，加入oligo(dT) 2 μL，加入DEPC处理过的ddH2O定容至14μL。混匀后，70℃加热变性5 min后迅速在冰上冷却2 min，然后加入下列成分：5×First-stand buffer 4 μL、dNTP (10mM each) 0.5μL、RNasin (40U) 0.5 μL、M-MLV (200U) 1 μL。混匀短时离心后，42℃温浴1.5h，取出后95℃加热5min终止反应。cDNA第一链合成后置于-20℃保存备用。
RT-PCR共分析了两个基因，百合3-磷酸甘油醛脱氢酶基因（GAPDH）以及肌动蛋白基因（Actin），引物序列、扩增产物长度以及引物退火温度见表1。PCR反应体系如下所示：模板（第一链cDNA） 0.2μL，10×Buffer 2μL，dNTP (10mM each) 0.5μL，上游引物(10μM) 0.2μL，下游引物(10μM） 0.2 μL，Taq DNA polymerase (5U) 0.2 μL，ddH2O 16.7μL。PCR反应条件为94℃ 3 min；94℃ 30s，59℃或63℃ 30s，72℃ 50s，30个循环；72℃ 5min。PCR结束后，取8μL PCR产物在1.2%TAE琼脂糖凝胶中进行电泳。结果分别见图7和图8，从岷江百合鳞片、西伯利亚百合叶片以及通江百合根中提取总RNA逆转录的cDNA均能成功扩增出看家基因GAPDH、Actin的特异片段，两个基因片段的大小均与预期值相符，表明本发明所提取的RNA质量高，适合进行RT-PCR及其他分子生物学实验。
表1 ：RT-PCR引物序列
序列表（SEQ ID）
<110> 昆明理工大学
<120> 一种从百合组织中同时提取DNA和RNA的方法
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 1
ggtcagtgga agcaccatga ga 22
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 2
accctcaaca ataccaaact tatca 25
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 3
cttctacaac gagcttcgtg ttgc 24
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 4
tctcaactga tgagctgctc tttgc 25
Claims (2)
1.一种从百合组织中同时提取DNA和RNA的方法，其特征在于它包括以下步骤：
（1）取0.5-1g百合植物组织，加入液氮研磨成粉末，按每克组织材料添加12-15ml的异硫氰酸胍提取缓冲液的比例加入预冷的异硫氰酸胍提取液，充分震荡混匀，冰浴10-15min，再加入提取液1/10体积的pH4.5-5.5、3mol L-1醋酸钠，颠倒混匀；其中异硫氰酸胍提取缓冲液成分为：4.5mol L-1 异硫氰酸胍，25mmol L-1柠檬酸钠，0.5%（w/v）十二烷基肌氨酸钠，3%（w/v）可溶性聚乙烯吡咯烷酮，使用前每100mL提取缓冲液加入1mL β-巯基乙醇；
（2）在步骤（1）得到的混合液中加入与提取液等体积的氯仿，剧烈震荡混匀，冰上放置5min后于4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中，重复此步骤一次；
（3）向步骤（2）中得到的上清液中加入1/3提取液体积的pH4.5-5.5、8mol L-1预冷醋酸钾，颠倒混匀，冰上放置10min， 4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中，重复此步骤一次；
（4）向步骤（3）得到的上清液中加入与提取液等体积的异丙醇，混匀后-20℃放置30min，接着4℃ 12000g离心10min，得到核酸粗提沉淀物；
（5）用75%的乙醇清洗沉淀两次，室温下干燥20min，用0.5-1mL DEPC处理过的ddH2O彻底溶解沉淀；
（6）在步骤（5）得到的总核酸溶液中加入0.5-1mLTris饱和酚/氯仿混合液，Tris饱和酚/氯仿混合液中Tris饱和酚与氯仿的体积比为1:1，剧烈震荡混匀，冰上放置5min，于4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中；
（7）向步骤（6）的上清液中加入0.5-1mL氯仿，剧烈震荡混匀，冰上放置5min，4℃ 12000g离心10min，取上清置于新的离心管中；
（8）向步骤（7）的上清液中加入0.125-0.25mL 10mol L-1氯化锂，混匀后加入0.25-0.5mL无水乙醇，上下颠倒混匀后-20℃放置2h沉淀RNA，4℃ 14000g离心15min，取上清液置于新的离心管中；
（9）用75%的乙醇清洗步骤（8）得到的RNA沉淀两次，室温下干燥10min，用60-100μL DEPC处理过的ddH2O溶解RNA沉淀，-80℃保存备用；
（10）向步骤（8）得到的上清液中加入0.875-1.75mL异丙醇和0.0875-0.175mL pH4.5-5.5的3mol L-1醋酸钠，混匀后-20℃放置30min沉淀DNA，室温下12000g离心15min，得到DNA沉淀，用75%乙醇清洗两次，在室温下干燥10min，用60-100μL TE缓冲液溶解，于-20℃保存备用。
2.如权利要求1所述的从百合组织中同时提取DNA和RNA的方法，其特征在于：百合植物组织为野生岷江百合幼嫩鳞片、东方百合品种西伯利亚幼嫩叶片、通江百合的幼嫩根中的一种。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012102964642A CN102776174A (zh) | 2012-08-21 | 2012-08-21 | 一种从百合组织中同时提取dna和rna的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012102964642A CN102776174A (zh) | 2012-08-21 | 2012-08-21 | 一种从百合组织中同时提取dna和rna的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102776174A true CN102776174A (zh) | 2012-11-14 |
Family
ID=47121282
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2012102964642A Pending CN102776174A (zh) | 2012-08-21 | 2012-08-21 | 一种从百合组织中同时提取dna和rna的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102776174A (zh) |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103275970A (zh) * | 2013-06-24 | 2013-09-04 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种总核酸、总rna和基因组dna的同步提取方法 |
| CN103756996A (zh) * | 2014-01-08 | 2014-04-30 | 西北农林科技大学 | 一种苹果组织总rna的提取方法 |
| CN103882008A (zh) * | 2014-02-28 | 2014-06-25 | 浙江省农业科学院 | 一种快速提取百合鳞茎dna的方法 |
| CN104450681A (zh) * | 2014-12-11 | 2015-03-25 | 丽水市农业科学研究院 | 一种三叶青基因组dna提取纯化的方法 |
| CN105087549A (zh) * | 2015-09-16 | 2015-11-25 | 吉林大学 | 一种同时高效提取rna和dna的方法及试剂 |
| CN106801051A (zh) * | 2017-03-09 | 2017-06-06 | 中国科学院华南植物园 | 一种用于提取植物rna的试剂盒以及提取方法 |
| CN107603975A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-01-19 | 山西农业大学 | 一种百合总rna提取方法 |
| KR20180080319A (ko) * | 2015-11-17 | 2018-07-11 | 아이에스피 인베스트먼츠 엘엘씨 | 소형 rna 참나리 추출물을 포함하는 국소 조성물 및 노화의 피부 징후를 감소시키는 미용 관리 방법 |
| CN108977434A (zh) * | 2018-07-03 | 2018-12-11 | 张罗 | 鼻腔脱落细胞rna的提取方法 |
| CN110229810A (zh) * | 2019-06-24 | 2019-09-13 | 福建省农业科学院果树研究所 | 一种高效提取橄榄叶片核酸物质的方法 |
| CN110452906A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-11-15 | 上海美吉生物医药科技有限公司 | 一种快速高效提取百合花瓣总rna的方法 |
| CN110760508A (zh) * | 2019-05-08 | 2020-02-07 | 漯河市农业科学院 | 一种提取小麦总rna的方法 |
| CN113278610A (zh) * | 2021-06-17 | 2021-08-20 | 浙江省亚热带作物研究所 | 一种秋茄rna的提取方法 |
| CN114426965A (zh) * | 2020-10-29 | 2022-05-03 | 深圳华大生命科学研究院 | 一种从植物组织样本中同时提取dna、rna和蛋白的试剂盒以及通用方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101486747A (zh) * | 2009-02-20 | 2009-07-22 | 浙江省农业科学院 | 一种同时提取植物dna和rna的方法 |
| CN101638651A (zh) * | 2009-07-09 | 2010-02-03 | 昆明理工大学 | 从富含多糖多酚及次生代谢物质的植物组织中提取总rna的方法 |
-
2012
- 2012-08-21 CN CN2012102964642A patent/CN102776174A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101486747A (zh) * | 2009-02-20 | 2009-07-22 | 浙江省农业科学院 | 一种同时提取植物dna和rna的方法 |
| CN101638651A (zh) * | 2009-07-09 | 2010-02-03 | 昆明理工大学 | 从富含多糖多酚及次生代谢物质的植物组织中提取总rna的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 刘胜洪等: "一种高效提取猕猴桃DNA和RNA 的方法", 《生物技术通报》 * |
| 田亚平等: "《生化分离与原理与技术》", 30 May 2010, 化学工业出版社 * |
Cited By (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103275970A (zh) * | 2013-06-24 | 2013-09-04 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种总核酸、总rna和基因组dna的同步提取方法 |
| CN103275970B (zh) * | 2013-06-24 | 2014-08-27 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种总核酸、总rna和基因组dna的同步提取方法 |
| CN103756996A (zh) * | 2014-01-08 | 2014-04-30 | 西北农林科技大学 | 一种苹果组织总rna的提取方法 |
| CN103882008A (zh) * | 2014-02-28 | 2014-06-25 | 浙江省农业科学院 | 一种快速提取百合鳞茎dna的方法 |
| CN104450681A (zh) * | 2014-12-11 | 2015-03-25 | 丽水市农业科学研究院 | 一种三叶青基因组dna提取纯化的方法 |
| CN105087549A (zh) * | 2015-09-16 | 2015-11-25 | 吉林大学 | 一种同时高效提取rna和dna的方法及试剂 |
| JP2018537455A (ja) * | 2015-11-17 | 2018-12-20 | アイエスピー・インヴェストメンツ・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー | 低分子ｒｎａオニユリ抽出物を含む局所組成物および加齢に関する皮膚の徴候を低減するための美容ケア方法 |
| KR20180080319A (ko) * | 2015-11-17 | 2018-07-11 | 아이에스피 인베스트먼츠 엘엘씨 | 소형 rna 참나리 추출물을 포함하는 국소 조성물 및 노화의 피부 징후를 감소시키는 미용 관리 방법 |
| US11673905B2 (en) | 2015-11-17 | 2023-06-13 | Isp Investments Llc | Topical composition comprising a small RNA tiger lily extract and method of cosmetic care to reduce skin signs of aging |
| KR102268324B1 (ko) * | 2015-11-17 | 2021-06-24 | 아이에스피 인베스트먼츠 엘엘씨 | 소형 rna 참나리 추출물을 포함하는 국소 조성물 및 노화의 피부 징후를 감소시키는 미용 관리 방법 |
| CN106801051A (zh) * | 2017-03-09 | 2017-06-06 | 中国科学院华南植物园 | 一种用于提取植物rna的试剂盒以及提取方法 |
| CN107603975A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-01-19 | 山西农业大学 | 一种百合总rna提取方法 |
| CN108977434A (zh) * | 2018-07-03 | 2018-12-11 | 张罗 | 鼻腔脱落细胞rna的提取方法 |
| CN110760508A (zh) * | 2019-05-08 | 2020-02-07 | 漯河市农业科学院 | 一种提取小麦总rna的方法 |
| CN110229810A (zh) * | 2019-06-24 | 2019-09-13 | 福建省农业科学院果树研究所 | 一种高效提取橄榄叶片核酸物质的方法 |
| CN110452906A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-11-15 | 上海美吉生物医药科技有限公司 | 一种快速高效提取百合花瓣总rna的方法 |
| CN114426965A (zh) * | 2020-10-29 | 2022-05-03 | 深圳华大生命科学研究院 | 一种从植物组织样本中同时提取dna、rna和蛋白的试剂盒以及通用方法 |
| CN114426965B (zh) * | 2020-10-29 | 2023-12-26 | 深圳华大生命科学研究院 | 一种从植物组织样本中同时提取dna、rna和蛋白的试剂盒以及通用方法 |
| CN113278610A (zh) * | 2021-06-17 | 2021-08-20 | 浙江省亚热带作物研究所 | 一种秋茄rna的提取方法 |
| CN113278610B (zh) * | 2021-06-17 | 2022-05-20 | 浙江省亚热带作物研究所 | 一种秋茄rna的提取方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102776174A (zh) | 一种从百合组织中同时提取dna和rna的方法 | |
| CN101638651B (zh) | 从富含多糖多酚及次生代谢物质的植物组织中提取总rna的方法 | |
| CN101962639B (zh) | 一种广谱高效提取植物rna的试剂盒 | |
| CN102443580B (zh) | 一种分离植物或微生物总rna的试剂组合物及其制备方法 | |
| CN102533737B (zh) | 一种利用硅胶膜从多糖多酚植物中提取总核糖核酸的方法 | |
| Huang et al. | An efficient DNA isolation method for tropical plants | |
| CN101735297B (zh) | 一种植物低分子量rna的快速提取方法 | |
| CN103484451B (zh) | 一种植物小rna的快速提取方法 | |
| CN102286459A (zh) | 不含基因组dna的总rna制备方法 | |
| CN104560956A (zh) | 一种用于提取桑树叶片rna的提取剂及其应用 | |
| CN102732503B (zh) | 一种藻类叶绿体dna的提取方法 | |
| CN109306352B (zh) | 番木瓜u6启动子基因及应用 | |
| CN102424825A (zh) | 榛子叶片和花芽总rna提取方法 | |
| CN102250881B (zh) | 一种高效提取热带植物dna的方法 | |
| CN102634511B (zh) | 成熟油菜次生休眠种子rna的提取方法 | |
| CN105647929B (zh) | 马铃薯stu-miR4322及其筛选方法和应用 | |
| Reddy et al. | An efficient and rapid method for the isolation of RNA from different recalcitrant tissues of mango (Mangifera indica L.) | |
| CN106148351B (zh) | 一种提高人参抗病性的基因g61及其编码蛋白 | |
| CN114774406B (zh) | 一种从蔷薇属植物组织中提取总rna的方法 | |
| CN105695469B (zh) | 马铃薯stu-miR9471及其应用 | |
| CN102134571A (zh) | OsmiR528的调控位点及其应用 | |
| CN102676538B (zh) | 桉树wpgs1或wpgs2基因及其过量表达具有增加植物生物量功能 | |
| CN107164386A (zh) | 一种利于苹果愈伤的苹果MdARF5基因及其应用 | |
| CN118374482A (zh) | 真菌或支原体的核酸释放液、提取试剂盒及提取方法 | |
| Zhu et al. | A generic plant RNA isolation method suitable for RNA-Seq and suppression subtractive hybridization |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20121114 |