CN105087549A - 一种同时高效提取rna和dna的方法及试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种同时高效提取RNA和DNA的方法及试剂。该RNA和DNA提取试剂包括组分：Buffer？A：盐酸胍，吗啉乙磺酸，EDTA，DEPC水；Buffer？B：醋酸钠，DEPC水；Buffer？C：乙醇，DEPC水；Buffer？D：NaOH溶液。本发明提供的提取试剂在提取RNA和DNA时操作简单，试剂成份简单，价格低廉，提取效率高，RNA和DNA质量稳定；本发明可同时完成了同一样品提取RNA和DNA的操作，节省了提取时间，尤其节省了对稀有样品的使用量，同时大大降低了成本。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种同时高效提取RNA和DNA的方法及试剂。
背景技术
在生物及生物技术的研究和应用中，RNA的提取已经成为重要的基本实验技术。尽管已经建立了多种提取方法，但对于特定的材料和不同的实验室，需要从材料、可利用的试剂及基金等方面考虑从而做出不同的选择。此外，提取的RNA的质量直接影响后续的研究结果。
通常采用异硫氰酸胍、盐酸胍、饱和酚等强变性剂来提取细胞或组织的总RNA。异硫氰酸胍和盐酸胍都是强烈的蛋白变性剂，不仅能有效解离核蛋白和核酸的复合体，还能强烈抑制RNA酶的活性，并且与加入的β-巯基乙醇共同对RNase产生强烈的抑制作用。这种方法的优点在于用了强烈的蛋白变性剂，对细胞本身和提取液中的RNase的活性有非常好的抑制效果。
为了提高RNA提取的效率，GIBCOBRL公司提出了“硫氰酸胍-酚-氯仿”抽提法，即TRIZOL法。TRIzol主要成份是异硫氰酸胍，它可以破坏细胞使RNA释放出来的同时，保护RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。无论是人、动物、植物还是细菌组织，TRIzol法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。TRIZOL试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIZOL抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。TRIZOL试剂能使不同种属不同分子量大小的多种RNA析出。因此，TRIZOL法的特点是快速，高效，获得RNA浓度高、纯度高，不需要超速离心或多步酚-氯仿抽提。
以上两种方法虽然均能较好的提取大部分组织和细胞中的总RNA，但是，由于准备试剂种类多，操作步骤多，耗时长，一般提取一次需花费2小时左右，并且由于操作手法问题，会造成不同批次RNA提取的质量或浓度相差过大，且RNA质量很容易受环境中RNAse的破坏。
为了简化RNA提取方法，提高提取效率，目前市面上也有一些组装开发的试剂盒。Invitrogen公司的RNAMiniKit，利用快速脱盐法去除污染的大分子物质，能从大量样本中纯化出总RNA；Promega公司的TotalRNAIsolationSystem，采用离心或抽滤技术，用高浓度的亚硫氰胍稀释细胞，使RNA酶失活，并选择性的沉淀胞内蛋白，可从组织，细胞，细菌和血液中直接提取RNA，具有高效，快速的特点；Qiagen公司的RNAIsolationMiniKit含RNA稳定剂，使RNA保持原有的表达模式，应用硅胶膜技术和柱式离心技术，用RNase-FreeDNaseset，在分离RNA的过程中直接在纯化离心柱上消化DNA，最后洗脱得到纯净的RNA，该试剂盒步骤简单，无需酚-氯仿抽提，也不用进行繁琐的RNA沉淀，且RNA产物中不含5SrRNA，tRNA或其他低分子量RNA；Ambion公司的RNAwizTMKit利用一步法提取，可在1h内完成，并可大量提取RNA；上海生工的TRIZOL总RNA抽提试剂盒(UNIQ-10柱式)，利用柱式离心技术，可从组织，细菌和细胞中提取200个碱基以上的总RNA；北京天根的RNApreppureCellKit利用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统，从培养细胞或细菌中分离纯化高质量的总RNA。使用试剂盒提取细菌总RNA主要有以下优点：速度快，一般不超过1h；提取试剂中一般含有抑制RNA酶活性的成分，能较好的防止RNA降解，得到的RNA纯度和浓度较高。试剂盒提取虽然效率高，获得的RNA质量高，并且能同时处理大量样本，但是价格较高，一般通用型的50次总RNA提取试剂盒价格为1000元左右，如果是国外品牌价格会在这个基础上高出2-3倍。尤其在需要大量长期提取样本RNA时，花费过大，不能普遍适用于广大的实验室。
针对以上缺点，研发一种快速、高效、廉价的RNA提取方法及试剂具有重要的现实意义。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种同时高效提取RNA和DNA的方法及试剂。该提取试剂种类少，操作简单快速，成本低，提取效果稳定，RNA质量合格，可用于大批样本的RNA的提取和长时间使用，且能够同时完成同一样本RNA和DNA的提取，节省了提取时间。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种RNA提取试剂，包括如下组分：
BufferA：盐酸胍，吗啉乙磺酸，EDTA，DEPC水；
BufferB：醋酸钠，DEPC水；
BufferC：乙醇，DEPC水。
本发明改善了RNA提取试剂的种类及其配比，本发明提供的RNA提取试剂种类少，操作简单快速，成本低，提取效果稳定高效，RNA质量合格，可用于大批样本的RNA的提取和长时间使用。
作为优选，RNA提取试剂包括如下组分：
BufferA：1～10mol/L盐酸胍，10～50mmol/L吗啉乙磺酸，10～50mmol/LEDTA，余量为DEPC水；
BufferB：1～10mol/L醋酸钠，余量为DEPC水；
BufferC：50％～90％乙醇，余量为DEPC水。
优选地，RNA提取试剂包括如下组分：
BufferA：3～5mol/L盐酸胍，10～30mmol/L吗啉乙磺酸，10～30mmol/LEDTA，余量为DEPC水；
BufferB：2～4mol/L醋酸钠，余量为DEPC水；
BufferC：60％～80％乙醇，余量为DEPC水。
更优选地，RNA提取试剂包括如下组分：
BufferA：4mol/L盐酸胍，20mmol/L吗啉乙磺酸，20mmol/LEDTA，余量为DEPC水；
BufferB：3mol/L醋酸钠，余量为DEPC水；
BufferC：70％乙醇，余量为DEPC水。
作为优选，BufferB的pH值为5.0～6.0。
优选地，BufferB的pH值为5.2。
本发明还提供了一种提取RNA的方法，包括如下步骤：
步骤1：采用BufferA裂解细胞，得到细胞裂解混合物；
步骤2：将细胞裂解混合物与乙醇水溶液混合，加入硅胶膜离心柱中，离心，弃掉液体，加入BufferB进行洗涤，再次离心；
步骤3：向硅胶膜离心柱中加入BufferC进行洗涤，离心，弃掉液体，再次离心，洗脱得到RNA；
BufferA包括：盐酸胍，吗啉乙磺酸，EDTA，DEPC水；
BufferB包括：醋酸钠，DEPC水；
BufferC包括：乙醇，DEPC水。
作为优选，RNA提取试剂包括如下组分：
BufferA：1～10mol/L盐酸胍，10～50mmol/L吗啉乙磺酸，10～50mmol/LEDTA，余量为DEPC水；
BufferB：1～10mol/L醋酸钠，余量为DEPC水；
BufferC：50％～90％乙醇，余量为DEPC水。
优选地，RNA提取试剂包括如下组分：
BufferA：3～5mol/L盐酸胍，10～30mmol/L吗啉乙磺酸，10～30mmol/LEDTA，余量为DEPC水；
BufferB：2～4mol/L醋酸钠，余量为DEPC水；
BufferC：60％～80％乙醇，余量为DEPC水。
更优选地，RNA提取试剂包括如下组分：
BufferA：4mol/L盐酸胍，20mmol/L吗啉乙磺酸，20mmol/LEDTA，余量为DEPC水；
BufferB：3mol/L醋酸钠，余量为DEPC水；
BufferC：70％乙醇，余量为DEPC水。
作为优选，BufferB的pH值为5.0～6.0。
优选地，BufferB的pH值为5.2。
作为优选，BufferA、BufferB与BufferC的体积比为(250～450)：(400～600)：(300～500)。
在本发明提供的一些实施例中，BufferA、BufferB与BufferC的体积比为350:500:400。
作为优选，细胞裂解混合物与乙醇水溶液的体积比为(1～2):(1～2)，乙醇水溶液的体积百分含量为90％～99％。
优选地，细胞裂解混合物与乙醇水溶液的体积比为1:1，乙醇水溶液的体积百分含量为96％。
作为优选，离心的转速为8000～15000g。
优选地，离心的转速为8000～12000g。
在本发明提供的一些实施例中，除步骤3中再次离心的转速为12000g，其余的离心步骤的转速为8000g。
在本发明提供的一些实施例中，硅胶膜离心柱为普通硅胶膜柱式离心柱。
本发明还提供了一种RNA和DNA提取试剂，包括如下组分：
BufferA：盐酸胍，吗啉乙磺酸，EDTA，DEPC水；
BufferB：醋酸钠，DEPC水；
BufferC：乙醇，DEPC水；
BufferD：NaOH溶液。
作为优选，RNA和DNA提取试剂包括如下组分：
BufferA：1～10mol/L盐酸胍，10～50mmol/L吗啉乙磺酸，10～50mmol/LEDTA，余量为DEPC水；
BufferB：1～10mol/L醋酸钠，余量为DEPC水；
BufferC：50％～90％乙醇，余量为DEPC水；
BufferD：10％～50％NaOH溶液。
优选地，RNA和DNA提取试剂包括如下组分：
BufferA：3～5mol/L盐酸胍，10～30mmol/L吗啉乙磺酸，10～30mmol/LEDTA，余量为DEPC水；
BufferB：2～4mol/L醋酸钠，余量为DEPC水；
BufferC：60％～80％乙醇，余量为DEPC水；
BufferD：10％～30％NaOH溶液。
更优选地，RNA和DNA提取试剂包括如下组分：
BufferA：4mol/L盐酸胍，20mmol/L吗啉乙磺酸，20mmol/LEDTA，余量为DEPC水；
BufferB：3mol/L醋酸钠，余量为DEPC水；
BufferC：70％乙醇，余量为DEPC水；
BufferD：20％NaOH溶液。
作为优选，BufferB的pH值为5.0～6.0。
优选地，BufferB的pH值为5.2。
本发明还提供了一种提取RNA和DNA的方法，包括如下步骤：
步骤1：采用BufferA裂解细胞，得到细胞裂解混合物；
步骤2：将细胞裂解混合物与乙醇水溶液混合，加入硅胶膜离心柱中，离心，弃掉液体，加入BufferB进行洗涤，再次离心，收集液体得到混合液体；
步骤3：向硅胶膜离心柱中加入BufferC进行洗涤，离心，弃掉液体，再次离心，采用DEPC水洗脱，得到RNA；
步骤4：将步骤2得到的混合液体与BufferD混合，加入到步骤3洗脱掉RNA的硅胶膜离心柱中，离心，弃掉液体，采用BufferC洗涤，再次离心，采用DEPC水洗脱，得到DNA；
BufferA包括：盐酸胍，吗啉乙磺酸，EDTA，DEPC水；
BufferB包括：醋酸钠，DEPC水；
BufferC包括：乙醇，DEPC水；
BufferD包括：NaOH溶液。
柱式提取RNA后，通常就会将硅胶膜柱丢弃。本发明研究发现，在RNA提取最后一步将RNA洗脱后，硅胶柱上仍然有大量的DNA留在上面。因此本发明根据DNA和RNA对酸碱的偏好性不同，将DNA洗脱下来，进而达到RNA和DNA同时提取的目的。
作为优选，混合液体与BufferD的体积比为(3～5)：1。
在本发明提供的一些实施例中，混合液体与BufferD的体积比为4:1。
作为优选，RNA和DNA提取试剂包括如下组分：
BufferA：1～10mol/L盐酸胍，10～50mmol/L吗啉乙磺酸，10～50mmol/LEDTA，余量为DEPC水；
BufferB：1～10mol/L醋酸钠，余量为DEPC水；
BufferC：50％～90％乙醇，余量为DEPC水；
BufferD：10％～50％NaOH溶液。
优选地，RNA和DNA提取试剂包括如下组分：
BufferA：3～5mol/L盐酸胍，10～30mmol/L吗啉乙磺酸，10～30mmol/LEDTA，余量为DEPC水；
BufferB：2～4mol/L醋酸钠，余量为DEPC水；
BufferC：60％～80％乙醇，余量为DEPC水；
BufferD：10％～30％NaOH溶液。
更优选地，RNA和DNA提取试剂包括如下组分：
BufferA：4mol/L盐酸胍，20mmol/L吗啉乙磺酸，20mmol/LEDTA，余量为DEPC水；
BufferB：3mol/L醋酸钠，余量为DEPC水；
BufferC：70％乙醇，余量为DEPC水；
BufferD：20％NaOH溶液。
作为优选，BufferB的pH值为5.0～6.0。
优选地，BufferB的pH值为5.2。
本发明提供了一种同时高效提取RNA和DNA的方法及试剂。该RNA和DNA提取试剂包括组分：BufferA：盐酸胍，吗啉乙磺酸，EDTA，DEPC水；BufferB：醋酸钠，DEPC水；BufferC：乙醇，DEPC水；BufferD：NaOH溶液。本发明至少具有如下优势之一：
1、本发明提供的提取试剂在提取RNA和DNA时操作简单，试剂成份简单，价格低廉，提取效率高，RNA和DNA质量稳定；
2、本发明提取方法所用硅胶膜柱式离心柱为普通硅胶膜，容易购买，价格低廉，大大降低了总RNA提取的成本；
3、本发明可同时完成了同一样品提取RNA和DNA的操作，节省了提取时间，尤其节省了对稀有样品的使用量，同时大大降低了成本，相较于商品化的RNA提取试剂盒和DNA提取试剂盒，时间成本(降低3-4倍)和经济成本(降低5-10倍)会低很多。
附图说明
图1示RNA和DNA提取的流程；
图2示本发明提取RNA与商品化OMEGA方法提取RNA的电泳图；其中，泳道1-3为：OMEGA试剂盒提取的RNA；泳道4-6为：本发明试剂与方法提取的RNA；
图3示本发明方法同时从相同样品中提取总RNA和DNA；其中，3-1为RNA的电泳图，3-2为DNA的电泳图；
图4示内参GAPDH普通PCR扩增结果；其中，M为：Marker；泳道1-3为：cDNA来自本发明方法提取的RNA获得；泳道4-6为：cDNA来自OMEGA试剂盒提取的RNA获得；
图5示目的基因BDNF全长序列的普通PCR扩增结果；其中，M：Marker；泳道1-3为：cDNA来自本发明方法提取的RNA获得；泳道4-5为：cDNA来自OMEGA试剂盒提取的RNA获得；
图6示本发明方法提取RNA反转录后，用real-timePCR扩增内参基因GAPDH的扩增曲线，说明GAPDH能被成功扩增；
图7示本发明方法提取RNA反转录后，用real-timePCR扩增目的基因BDNF的扩增曲线，说明BDNF基因能被成功扩增；
图8示商品化OMEGA试剂盒提取RNA反转录后，用real-timePCR扩增内参基因GAPDH的扩增曲线，说明GAPDH能被成功扩增；
图9示商品化OMEGA试剂盒提取RNA反转录后，用real-timePCR扩增目的基因BDNF的扩增曲线，说明BDNF能被成功扩增；
图10示用本发明方法提取DNA的PCR扩增电泳图。
具体实施方式
本发明公开了一种同时高效提取RNA和DNA的方法及试剂，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
术语解释：
RNA(Ribonucleicacid，RNA)：是一种生物大分子，存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中，是具有细胞结构生物的遗传信息的中间载体。RNA由核糖核苷酸经磷酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种，即A腺嘌呤、G鸟嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶。
DNA，全称Deoxyribonucleicacid，中文名为脱氧核糖核酸，是一种长链聚合物，组成单位称为四种脱氧核苷酸，由碱基，脱氧核糖，磷酸组成。
反转录：反转录是以RNA为模板，通过反转录酶，合成DNA的过程，是DNA生物合成的一种特殊方式。
PCR：聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)，是DNA在体外酶促扩增技术，模仿体内DNA的复制过程，由变性、复性以及延伸等反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有灵敏度高、操作简便等特点。
Real-timePCR：又称实时定量荧光PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量的一种方法。
琼脂糖凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷，是一种很好的电泳支持物。DNA在碱性条件下(pH8.0的缓冲液)带负电荷，在电场中通过凝胶介质向正极移动，不同DNA分子片段由于分子和构型不同，在电场中的泳动速率液不同。溴化乙锭(EB)可嵌入DNA分子碱基对间形成荧光络合物，经紫外线照射后，可分出不同的区带，达到分离、鉴定分子量，筛选重组子的目的。
本发明提供的同时高效提取RNA和DNA的方法及试剂中所用试剂或仪器均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1RNA和DNA的提取
RNA和DNA提取的流程图见图1，具体步骤如下：
1、细胞培养
TM3Leydigcell接种到24孔板，在37℃二氧化碳培养箱中培养，细胞密度为2.5×105/mL。
2、试剂配置
BufferA：4M盐酸胍+20mM吗啉乙磺酸+20mMEDTA；
BufferB：3MNa-acetate(PH5.2)；
BufferC：70％乙醇；
BufferD：20％NaOH；
BufferA、B、C均用DEPC水配置。
3、器材准备和试剂
普通硅胶膜柱式离心柱子，RNAse-free1.5离心管，RNAse-freePCR管，RNA聚合酶，反转录酶，SYBR荧光定量染料，96％乙醇，DEPC水。
4、总RNA提取
(1)细胞在24孔板中培养24h后，弃掉培养液。每个孔加入350微升BufferA裂解液，然后用移液器吹打，充分裂解细胞。将细胞裂解混合物移到Rnase-free的1.5离心管中，盖上管盖，在振荡器中进一步充分裂解15s。然后在离心管里按1:1体积比加入350微升96％乙醇，充分混合。
(2)将第一步中的混合物移到硅胶膜离心柱中，然后8000g离心1分钟。
(3)弃掉收集管中的液体，将硅胶膜离心柱重新放入收集管中，加入500微升BufferB，8000g离心1分钟。
(4)收集管中的液体用于DNA提取，将硅胶膜离心柱重新放入收集管中，加入400微升BufferC，8000g离心1分钟。
(5)弃掉收集管中的液体，将硅胶膜离心柱重新放入收集管中，12000g离心2分钟。
(6)离心结束后，将硅胶膜离心柱放置在Rnase-free的1.5毫升离心管中，然后用30-50微升DEPC水洗脱RNA。
(7)用琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量，并且用Nanodrop测定RNA浓度。
(8)在(4)收集的液体中加入BufferD(1ml收集液加250μLBufferD),充分混匀，然后移入(6)中洗脱RNA的柱子中。
(9)然后8000g离心1分钟。弃掉收集管中的液体，将硅胶膜离心柱重新放入收集管中，加入500微升BufferC，8000g离心1分钟。
(10)离心结束后，将硅胶膜离心柱放置在1.5毫升离心管中，然后用30-50微升DEPC水洗脱DNA。
在整个RNA提取过程中，用商品化的RNA提取OMEGA试剂盒作为对照。
5、RNA质量鉴定
(1)本发明提取RNA与商品化OMEGA方法提取RNA的电泳图见图2。其中，泳道1-3为：OMEGA试剂盒提取的RNA；泳道4-6为：本发明试剂与方法提取的RNA。
(2)本发明方法同时从相同样品中提取总RNA和DNA见图3。其中图3-1为RNA的电泳图，图3-2为DNA的电泳图。
(3)本发明提取RNA与商品化OMEGA方法提取RNA的浓度测定。细胞密度：5×105。浓度检测结果见表1：
表1本发明提取RNA与商品化OMEGA方法提取RNA的浓度
由上述试验结果得出结论：本发明方法可以提出质量合格的RNA，但是RNA浓度略低于商品化试剂盒。从经济角度计算，普通的商品化OMEGA试剂盒50次，1000元，每个样品每次20元；本发明方法，每次每个样品成本2-3元，极大地降低了RNA提取的成本。可以用于大批样本RNA提取和长时间使用。
6、反转录实验
本发明提取RNA与商品化OMEGA方法提取RNA后，进行反转录，然后用普通方法和Real-timePCR方法进行内参基因GAPDH和目的基因BDNF(脑源性神经营养因子)的扩增。
反转录体系：反转录酶1μL；Buffer4.01μL；总RNA500ng；OligodT1μL；DEPC水补足到20μL。所用引物及序列见表2。
表2所用引物
| Primer name | Sequence 5’-3’ |
| BDNF-F(普通PCR) | ATGACCATCCTTTTCCTTACTAT(cDNA 740bp) |
| BDNF-R | TATCTTCCCCTTTTAATGGT |
| BDNF-F(Real-time PCR) | GTGACAGTATTAGCGAGTGGG(cDNA 213bp) |
| BDNF-R | GGGTAGTTCGGCATTGC |
| GAPDH-F | AGGTCGGTGTGAACGGATTTG(cDNA 123bp) |
| GAPDH-R | TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA |
| MIS-F | TCTCTGTTGAAGCTGTGGTGACCTG |
| MIS-R | TAGTCGCTAGCAGCAGTACCAGT |
普通PCR扩增体系及条件见表3：
表3普通PCR扩增体系及条件
内参GAPDH普通PCR扩增结果见图4。其中M为：Marker；泳道1-3为：cDNA来自本发明方法提取的RNA获得；泳道4-6为：cDNA来自OMEGA试剂盒提取的RNA获得。
目的基因BDNF全长序列的普通PCR扩增结果见图5。其中，M：Marker；泳道1-3为：cDNA来自本发明方法提取的RNA获得；泳道4-5为：cDNA来自OMEGA试剂盒提取的RNA获得。
结论：图4和图5结果表明本发明提取的RNA经反转录后，可以用于普通PCR的基因扩增。
7、Real-timePCR扩增
Real-timePCR扩增体系及条件见表4：
表4Real-timePCR扩增体系及条件
用本发明方法提取RNA，反转录后，用real-timePCR扩增内参基因(GAPDH)和目的基因(BDNF)的扩增曲线分别见图6、7。
商品化OMEGA试剂盒提取RNA，反转录后，用real-timePCR扩增内参基因(GAPDH)和目的基因(BDNF)的扩增曲线分别见图8、9。
结论：本发明提取的RNA经反转录后，可以用于Real-timePCR方法检测基因的转录水平。
8、DNA的扩增
用本发明提取DNA的进行PCR扩增，PCR扩增体系及条件见表5：
表5普通PCR扩增体系及条件
PCR扩增的结果见图10。
结论：本发明提取DNA可用于PCR扩增。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种RNA提取试剂，其特征在于，包括如下组分：
BufferA：盐酸胍，吗啉乙磺酸，EDTA，DEPC水；
BufferB：醋酸钠，DEPC水；
BufferC：乙醇，DEPC水。
2.根据权利要求1所述的RNA提取试剂，其特征在于，包括如下组分：
BufferA：1～10mol/L盐酸胍，10～50mmol/L吗啉乙磺酸，10～50mmol/LEDTA，余量为DEPC水；
BufferB：1～10mol/L醋酸钠，余量为DEPC水；
BufferC：50％～90％乙醇，余量为DEPC水。
3.根据权利要求1所述的RNA提取试剂，其特征在于，所述BufferB的pH值为5.0～6.0。
4.一种提取RNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：采用BufferA裂解细胞，得到细胞裂解混合物；
步骤2：将所述细胞裂解混合物与乙醇水溶液混合，加入硅胶膜离心柱中，离心，弃掉液体，加入BufferB进行洗涤，再次离心；
步骤3：向硅胶膜离心柱中加入BufferC进行洗涤，离心，弃掉液体，再次离心，洗脱得到RNA；
所述BufferA包括：盐酸胍，吗啉乙磺酸，EDTA，DEPC水；
所述BufferB包括：醋酸钠，DEPC水；
所述BufferC包括：乙醇，DEPC水。
5.根据权利要求4中所述的方法，其特征在于，所述BufferA、所述BufferB与所述BufferC的体积比为(250～450)：(400～600)：(300～500)。
6.根据权利要求4中所述的方法，其特征在于，所述细胞裂解混合物与所述乙醇水溶液的体积比为(1～2):(1～2)，所述乙醇水溶液的体积百分含量为90％～99％。
7.根据权利要求4中所述的方法，其特征在于，所述离心的转速为8000～15000g。
8.一种RNA和DNA提取试剂，其特征在于，包括如下组分：
BufferA：盐酸胍，吗啉乙磺酸，EDTA，DEPC水；
BufferB：醋酸钠，DEPC水；
BufferC：乙醇，DEPC水；
BufferD：NaOH溶液。
9.一种提取RNA和DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：采用BufferA裂解细胞，得到细胞裂解混合物；
步骤2：将所述细胞裂解混合物与乙醇水溶液混合，加入硅胶膜离心柱中，离心，弃掉液体，加入BufferB进行洗涤，再次离心，收集液体得到混合液体；
步骤3：向硅胶膜离心柱中加入BufferC进行洗涤，离心，弃掉液体，再次离心，采用DEPC水洗脱，得到RNA；
步骤4：将步骤2得到的混合液体与BufferD混合，加入到步骤3洗脱掉RNA的硅胶膜离心柱中，离心，弃掉液体，采用BufferC洗涤，再次离心，采用DEPC水洗脱，得到DNA；
所述BufferA包括：盐酸胍，吗啉乙磺酸，EDTA，DEPC水；
所述BufferB包括：醋酸钠，DEPC水；
所述BufferC包括：乙醇，DEPC水；
所述BufferD包括：NaOH溶液。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述混合液体与所述BufferD的体积比为(3～5)：1。
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