CN102731271B - 一种纯化五味子醇甲的新方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种五味子醇甲的纯化方法，特别是涉及一种利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法本发明优点：1、本发明采用微波提取，以乙醇为溶剂，除掉部分脂肪油，大大降低了提取时间，提高了生产效率，方法简单。2、大孔树脂再生方便迅速，适合大生产，且成本大大降低，水洗脱降去大部分色素和杂质，容易操作。3、大孔树脂和硅胶柱层析结合，分离和纯化效果好，后期又采用重结晶，大大提高了产品纯度本发明采用了微波逆流提取、大孔树脂分离纯化和柱层析进一步纯化，产品纯度大大提提高，最终得到含量65％以上的五味子醇甲半成品和含量98％以上的五味子醇甲终产品。
Description
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种五味子醇甲的纯化方法，特别是涉及一种利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法。
背景技术：
五味子，俗称山花椒、秤砣子、药五味子、面藤、五梅子等，唐等《新修本草》载“五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味”，故有五味子之名。占医书称它荎蕏、玄及、会及，最早列于神农本草经上品，中药功效在于滋补强壮之力，药用价值极高。本发明采用俗称北五味子的干燥成熟果实为原料，五味子含有丰富的有机酸、维生素、类黄酮、植物固醇及有强效复原作用的木脂素(例如五味子醇甲、五味子乙素或五味子脂素)。主要提取的五味子醇甲属于木脂素成分中的联苯环辛烯类，是一类脂溶性小分子化合物，溶于氯仿、乙醚、苯、丙酮、乙醇等有机溶剂，难溶于水。
五味子醇甲是一种对人类健康有显著保健作用的天然活性物质，已引起国际社会的普遍关注。经科学研究及临床应用证明，五味子醇甲具有保肝及再生肝脏组织、保护及增强心脏机能、养阴固精，男女皆宜、增进智能健全；增强体能耐力；抗防自由基侵害、延缓老化过程，滋补和增强肾脏机能，人体测试结果显示，五味子醇甲对于患有因病毒所引起之慢性肝炎者(包括A型、B型、C型、D型和E型)尤其有效。五味子传统提取方法有醇提取和氯仿提取，提取时间长，纯度较低；近年来利用超临界提取的专利报道较多，但设备要求较高，不利于大规模生产。本发明采用了微波逆流提取设备，缩短了提取时间，又采用了适合大生产操作的大孔树脂分离纯化和柱层析进一步纯化，产品纯度大大提高。
发明内容：
本发明采用微波提取，以乙醇为溶剂，除掉部分脂肪油，大大降低了提取时间，提高了生产效率，方法简单。大孔树脂再生方便迅速，适合大生产，且成本大大降低，水洗脱除去大部分色素和杂质；一方面通过除油除杂，另一方面大孔树脂和硅胶柱层析结合，分离和纯化效果好，后期又采用重结晶，所以本发明所得产品纯度高，显著提高有效成分含量，克服了常规提取方法纯度低、时间长等缺点。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法， 其步骤如下：
(1)微波逆流提取：
五味子粉碎至40-60目，加入60-75％乙醇溶液，在400～600W，时间10～30min，8～12倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料.反向进水.物料与水的流动为逆向连续动态流动，提取液加石油醚分层，除脂肪油；
(2)大孔树脂吸附：
回收乙醇至无醇后，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为DA201、D101、HPD300、AB-8树脂中的种，树脂柱的高径比为8∶1-15∶1；
(3)纯水洗脱：
在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为3-5 BV，洗掉五味子水溶液中的色素、鞣质、无机盐类等水溶性杂质；
(4)乙醇洗脱：
再用40％-95％的乙醇溶液在1-3BV/h流速、洗脱体积为6-8BV下进行洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测(以五味子醇甲为对照品对照)；
(5)得五味子醇甲粗提物：
收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为65％以上五味子醇甲半成品粗粉；
(6)硅胶柱层析：
将所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以95～85∶2比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集五味子醇甲各阶段洗脱液；
(7)重结晶：
将所收集的五味子醇甲洗脱液浓缩，喷粉干燥得粉末。加适量醋酸乙酯完全溶解后加热，边震荡边滴加石油醚至浑浊，放置过夜即可得到五味子醇甲晶体，再反复重结晶两次，得到高纯度五味子醇甲，其含量在98％以上。
具体实施方式：
实施例1：一种利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法，
其步骤如下：
(1)取500g五味子粉碎至40目，加入60％乙醇溶液，在400W，时间10min，8倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料.反向进水.物料与水的流动为逆向连续动态流动。提取液加石油醚分层，除脂肪油；
(2)回收乙醇，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为DA201树脂，树脂柱的高径比为8∶1；
(3)在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为3BV；
(4)再用40％、50％、60％、70％、85％、95％的乙醇溶液在1BV/h流速、洗脱体积为6BV下进行洗脱。以五味子醇甲对照品为对照，洗脱液用薄层层析跟踪监测，收集60％乙醇部分的洗脱液。
(5)将乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为65.47％五味子醇甲半成品4.17g；
(6)将所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60目筛，干法上样，上工业级柱200目硅胶柱层析，并以石油醚、乙酸乙酯以95∶2、90∶1比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集五味子醇甲各阶段洗脱液；
(7)将所收集的五味子醇甲洗脱液浓缩，喷粉干燥得粉末，加适量醋酸乙酯完全溶解后加热，边震荡边滴加石油醚至浑浊，放置过夜即可得到五味子醇甲晶体，再反复重结晶两次，得到高纯度五味子醇甲2.76g，其含量在98.5％。
实施案例2：
(1)取500g五味子粉碎至50目，加入70％乙醇溶液，在500W，时间20min，10倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料.反向进水.物料与水的流动为逆向连续动态流动。提取液加石油醚分层，除脂肪油；
(2)回收乙醇，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为D101树脂，树脂柱的高径比为10∶1；
(3)在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为4BV；
(4)再用40％、50％、60％、70％、85％、95％的乙醇溶液在2BV/h流速、洗脱体积为7BV下进行洗脱。洗脱液用薄层层析跟踪监测(以五味子醇甲为对照品对照)；
(5)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为65.86％五味子醇甲半成品4.15g；
(6)将所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过70目筛，干法上样，上工业级柱300目硅胶柱层析，并以石油醚、乙酸乙酯以90∶2、85∶1比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集五味子醇甲各阶段洗脱液；
(7)将所收集的五味子醇甲洗脱液浓缩，喷粉干燥得粉末。加适量醋酸乙酯完全溶解后加热，边震荡边滴加石油醚至浑浊，放置过夜即可得到五味子醇甲晶体，再反复重结晶两次，得到高纯度五味子醇甲2.79g，其含量为98％。
实施案例3：
(1)取500g五味子粉碎至60目，加入75％乙醇溶液，在500W，时间30min，12倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料.反向进水.物料与水的流动为逆向连续动态流动。提取液加石油醚分层，除脂肪油；
(2)回收乙醇，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为AB-8树脂，树脂柱的高径比为10∶1；
(3)在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为4BV；
(4)再用40％、50％、60％、70％、85％、95％的乙醇溶液在2BV/h流速、洗脱体积为7BV下进行洗脱。洗脱液用薄层层析跟踪监测(以五味子醇甲为对照品对照)；
(5)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为66％五味子醇甲半成品4.21g；
(6)将所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60目筛，干法上样，上工业级柱200目硅胶柱层析，并以氯仿、甲醇以95∶2、90∶1比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集五味子醇甲各阶段洗脱液；
(7)将所收集的五味子醇甲洗脱液浓缩，喷粉干燥得粉末，加适量醋酸乙酯完全溶解后加热，边震荡边滴加石油醚至浑浊，放置过夜即可得到五味子醇甲晶体，再反复重结晶两次，得到高纯度五味子醇甲2.82g，其含量在98.6％。
实施案例4：
(1)取500g五味子粉碎至50目，加入75％乙醇溶液，在600W，时间20min，10倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料.反向进水.物料与水的流动为逆向连续动态流动。提取液加石油醚分层，除脂肪油；
(2)回收乙醇，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为HPD300树脂，树脂柱的高径比为15∶1；
(3)在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为5BV；
(4)再用40％、50％、60％、70％、85％、95％的乙醇溶液在3BV/h流速、洗脱体积为8BV下进行洗脱。洗脱液用薄层层析跟踪监测(以五味子醇甲为对照品对照)；
(5)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为65.2％的五味子醇甲半成品4.13g；
(6)将所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过80目筛，干法上样，上工业级柱300目硅胶柱层析，并以氯仿、甲醇以90∶2、85∶1的比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集五味子醇甲各阶段洗脱液；
(7)将所收集的五味子醇甲洗脱液浓缩，喷粉干燥得粉末。加适量醋酸乙酯完全溶解后加热，边震荡边滴加石油醚至浑浊，放置过夜即可得到五味子醇甲晶体，再反复重结晶两次，得到高纯度五味子醇甲2.74g，其含量在98.09％。
Claims (1)
1.一种利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法，其步骤如下：
(1)微波逆流提取：
五味子粉碎至40-60目，加入60-75％乙醇溶液，在400～600W，时间10～30min，8～12倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料，反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动；提取液加石油醚分层，除脂肪油；
(2)大孔树脂吸附：
回收乙醇至无醇后，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为DA201、D101、HPD300、AB-8树脂中的一种，树脂柱的高径比为8:1—15:1；
(3)纯水洗脱：
在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为3-5 BV，洗掉五味子水溶液中的色素、鞣质、无机盐类水溶性杂质；
(4)乙醇洗脱：
再用40％-95％的乙醇溶液在1-3BV/h流速、洗脱体积为6-8BV下进行洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测，以五味子醇甲为对照品对照；
(5)得五味子醇甲粗提物：
收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为65％以上五味子醇甲半成品粗粉；
(6)硅胶柱层析：
将所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以98～85:2比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集五味子醇甲各阶段洗脱液；
(7)重结晶：
将所收集的五味子醇甲洗脱液浓缩，喷粉干燥得粉末，加适量醋酸乙酯完全溶解后加热，边震荡边滴加石油醚至浑浊，放置过夜即可得到五味子醇甲晶体，再反复重结晶两次，得到高纯度五味子醇甲，其含量在98％以上。
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