CN102731271A

CN102731271A - 一种纯化五味子醇甲的新方法

Info

Publication number: CN102731271A
Application number: CN2012101448711A
Authority: CN
Inventors: 姚德坤; 姚德利; 张亚红; 万莉
Original assignee: GREAT XINGAN MOUNTAINS LINGEBEI ORGANIC FOOD CO Ltd
Current assignee: Daxing'an Mountainrange Lin Gebei psychrophile Science and Technology Co., Ltd.
Priority date: 2011-12-25
Filing date: 2012-05-06
Publication date: 2012-10-17
Anticipated expiration: 2032-05-06
Also published as: CN102731271B

Abstract

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种五味子醇甲的纯化方法，特别是涉及一种利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法本发明优点：1、本发明采用微波提取，以乙醇为溶剂，除掉部分脂肪油，大大降低了提取时间，提高了生产效率，方法简单。2、大孔树脂再生方便迅速，适合大生产，且成本大大降低，水洗脱降去大部分色素和杂质，容易操作。3、大孔树脂和硅胶柱层析结合，分离和纯化效果好，后期又采用重结晶，大大提高了产品纯度本发明采用了微波逆流提取、大孔树脂分离纯化和柱层析进一步纯化，产品纯度大大提提高，最终得到含量65％以上的五味子醇甲半成品和含量98％以上的五味子醇甲终产品。

Description

一种纯化五味子醇甲的新方法

技术领域：

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种五味子醇甲的纯化方法，特别是涉及一种利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法。

背景技术：

五味子，俗称山花椒、秤砣子、药五味子、面藤、五梅子等，唐等《新修本草》载“五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味”，故有五味子之名。占医书称它荎蕏、玄及、会及，最早列于神农本草经上品，中药功效在于滋补强壮之力，药用价值极高。本发明采用俗称北五味子的干燥成熟果实为原料，五味子含有丰富的有机酸、维生素、类黄酮、植物固醇及有强效复原作用的木脂素(例如五味子醇甲、五味子乙素或五味子脂素)。主要提取的五味子醇甲属于木脂素成分中的联苯环辛烯类，是一类脂溶性小分子化合物，溶于氯仿、乙醚、苯、丙酮、乙醇等有机溶剂，难溶于水。

五味子醇甲是一种对人类健康有显著保健作用的天然活性物质，已引起国际社会的普遍关注。经科学研究及临床应用证明，五味子醇甲具有保肝及再生肝脏组织、保护及增强心脏机能、养阴固精，男女皆宜、增进智能健全；增强体能耐力；抗防自由基侵害、延缓老化过程，滋补和增强肾脏机能，人体测试结果显示，五味子醇甲对于患有因病毒所引起之慢性肝炎者(包括A型、B型、C型、D型和E型)尤其有效。五味子传统提取方法有醇提取和氯仿提取，提取时间长，纯度较低；近年来利用超临界提取的专利报道较多，但设备要求较高，不利于大规模生产。本发明采用了微波逆流提取设备，缩短了提取时间，又采用了适合大生产操作的大孔树脂分离纯化和柱层析进一步纯化，产品纯度大大提高。

发明内容：

本发明采用微波提取，以乙醇为溶剂，除掉部分脂肪油，大大降低了提取时间，提高了生产效率，方法简单。大孔树脂再生方便迅速，适合大生产，且成本大大降低，水洗脱除去大部分色素和杂质；一方面通过除油除杂，另一方面大孔树脂和硅胶柱层析结合，分离和纯化效果好，后期又采用重结晶，所以本发明所得产品纯度高，显著提高有效成分含量，克服了常规提取方法纯度低、时间长等缺点。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法，其步骤如下：

(1)微波逆流提取：

五味子粉碎至40-60目，加入60-75％乙醇溶液，在400～600W，时间10～30min，8～12倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料.反向进水.物料与水的流动为逆向连续动态流动，提取液加石油醚分层，除脂肪油；

(2)大孔树脂吸附：

回收乙醇至无醇后，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为DA201、D101、HPD300、AB-8树脂中的种，树脂柱的高径比为8∶1-15∶1；

(3)纯水洗脱：

在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为3-5 BV，洗掉五味子水溶液中的色素、鞣质、无机盐类等水溶性杂质；

(4)乙醇洗脱：

再用40％-95％的乙醇溶液在1-3BV/h流速、洗脱体积为6-8BV下进行洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测(以五味子醇甲为对照品对照)；

(5)得五味子醇甲粗提物：

收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为65％以上五味子醇甲半成品粗粉；

(6)硅胶柱层析：

将所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以95～85∶2比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集五味子醇甲各阶段洗脱液；

(7)重结晶：

将所收集的五味子醇甲洗脱液浓缩，喷粉干燥得粉末。加适量醋酸乙酯完全溶解后加热，边震荡边滴加石油醚至浑浊，放置过夜即可得到五味子醇甲晶体，再反复重结晶两次，得到高纯度五味子醇甲，其含量在98％以上。

具体实施方式：

实施例1：一种利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法，

其步骤如下：

(1)取500g五味子粉碎至40目，加入60％乙醇溶液，在400W，时间10min，8倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料.反向进水.物料与水的流动为逆向连续动态流动。提取液加石油醚分层，除脂肪油；

(2)回收乙醇，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为DA201树脂，树脂柱的高径比为8∶1；

(3)在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为3BV；

(4)再用40％、50％、60％、70％、85％、95％的乙醇溶液在1BV/h流速、洗脱体积为6BV下进行洗脱。以五味子醇甲对照品为对照，洗脱液用薄层层析跟踪监测，收集60％乙醇部分的洗脱液。

(5)将乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为65.47％五味子醇甲半成品4.17g；

(6)将所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60目筛，干法上样，上工业级柱200目硅胶柱层析，并以石油醚、乙酸乙酯以95∶2、90∶1比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集五味子醇甲各阶段洗脱液；

(7)将所收集的五味子醇甲洗脱液浓缩，喷粉干燥得粉末，加适量醋酸乙酯完全溶解后加热，边震荡边滴加石油醚至浑浊，放置过夜即可得到五味子醇甲晶体，再反复重结晶两次，得到高纯度五味子醇甲2.76g，其含量在98.5％。

实施案例2：

(1)取500g五味子粉碎至50目，加入70％乙醇溶液，在500W，时间20min，10倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料.反向进水.物料与水的流动为逆向连续动态流动。提取液加石油醚分层，除脂肪油；

(2)回收乙醇，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为D101树脂，树脂柱的高径比为10∶1；

(3)在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为4BV；

(4)再用40％、50％、60％、70％、85％、95％的乙醇溶液在2BV/h流速、洗脱体积为7BV下进行洗脱。洗脱液用薄层层析跟踪监测(以五味子醇甲为对照品对照)；

(5)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为65.86％五味子醇甲半成品4.15g；

(6)将所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过70目筛，干法上样，上工业级柱300目硅胶柱层析，并以石油醚、乙酸乙酯以90∶2、85∶1比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集五味子醇甲各阶段洗脱液；

(7)将所收集的五味子醇甲洗脱液浓缩，喷粉干燥得粉末。加适量醋酸乙酯完全溶解后加热，边震荡边滴加石油醚至浑浊，放置过夜即可得到五味子醇甲晶体，再反复重结晶两次，得到高纯度五味子醇甲2.79g，其含量为98％。

实施案例3：

(1)取500g五味子粉碎至60目，加入75％乙醇溶液，在500W，时间30min，12倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料.反向进水.物料与水的流动为逆向连续动态流动。提取液加石油醚分层，除脂肪油；

(2)回收乙醇，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为AB-8树脂，树脂柱的高径比为10∶1；

(5)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为66％五味子醇甲半成品4.21g；

(6)将所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60目筛，干法上样，上工业级柱200目硅胶柱层析，并以氯仿、甲醇以95∶2、90∶1比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集五味子醇甲各阶段洗脱液；

(7)将所收集的五味子醇甲洗脱液浓缩，喷粉干燥得粉末，加适量醋酸乙酯完全溶解后加热，边震荡边滴加石油醚至浑浊，放置过夜即可得到五味子醇甲晶体，再反复重结晶两次，得到高纯度五味子醇甲2.82g，其含量在98.6％。

实施案例4：

(1)取500g五味子粉碎至50目，加入75％乙醇溶液，在600W，时间20min，10倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料.反向进水.物料与水的流动为逆向连续动态流动。提取液加石油醚分层，除脂肪油；

(2)回收乙醇，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为HPD300树脂，树脂柱的高径比为15∶1；

(3)在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为5BV；

(4)再用40％、50％、60％、70％、85％、95％的乙醇溶液在3BV/h流速、洗脱体积为8BV下进行洗脱。洗脱液用薄层层析跟踪监测(以五味子醇甲为对照品对照)；

(5)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为65.2％的五味子醇甲半成品4.13g；

(6)将所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过80目筛，干法上样，上工业级柱300目硅胶柱层析，并以氯仿、甲醇以90∶2、85∶1的比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集五味子醇甲各阶段洗脱液；

(7)将所收集的五味子醇甲洗脱液浓缩，喷粉干燥得粉末。加适量醋酸乙酯完全溶解后加热，边震荡边滴加石油醚至浑浊，放置过夜即可得到五味子醇甲晶体，再反复重结晶两次，得到高纯度五味子醇甲2.74g，其含量在98.09％。

Claims

1.一种利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法，其步骤如下：

(1)微波逆流提取：

五味子粉碎至40-60目，加入60-75％乙醇溶液，在400～600W，时间10～30min，8～12倍料液比条件下微波逆流提取，正向进料，反向进水.物料与水的流动为逆向连续动态流动。提取液加石油醚分层，除脂肪油。

(2)大孔树脂吸附：

回收乙醇至无醇后，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为DA201、D101、HPD300、AB-8树脂中的一种，树脂柱的高径比为8∶1-1 5∶1。

(3)纯水洗脱：

在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为3-5BV，洗掉五味子水溶液中的色素、鞣质、无机盐类等水溶性杂质；

(4)乙醇洗脱：

(5)得五味子醇甲粗提物：

(6)硅胶柱层析：

将所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以98～85∶2比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集五味子醇甲各阶段洗脱液；

(7)重结晶：

将所收集的五味子醇甲洗脱液浓缩，喷粉干燥得粉末。加适量醋酸乙酯完全溶解后加热，边震荡边滴加石油醚至浑浊，放置过夜即可得到五味子醇甲晶体，再反复重结品两次，得到高纯度五味子醇甲，其含量在98％以上。

2.根据权利要求1所述的利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是：在所属的步骤(1)中，五味子粉碎后过40～60目筛，乙醇浓度为60-75％，

3.根据权利要求2所述利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是：在所属的步骤(1)中，微波处理功率400～600W，时间10～30min，8～12倍料液比。

4.根据权利要求3所述的利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是：在所属的步骤(2)中，大孔树脂型号为DA201、D101、HPD300、AB-8树脂中的种，树脂柱的高径比为8∶1-15∶1。

5.根据权利要求4所述的利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是：在所属的步骤(3)中，蒸馏水洗脱流速为1BV/h，洗脱体积为3-5BV。

6.根据权利要求5所述的利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是：在所属的步骤(4)中，洗脱乙醇浓度为40％-95％、流速为1-3BV/h流速、洗脱体积为6-8BV。

7.根据权利要求6所述的利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是：在所属的步骤(6)中，上硅胶柱层析前，五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯，烘干过60-80目筛，上工业级柱200-300目。

8.根据权利要求7所述的利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附、柱层析纯化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是：在所属的步骤(6)中，洗脱溶剂为氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液中的一种，洗脱比例为95～85∶2，薄层色谱法跟踪检测。