CN102712650B - 螺-吲哚酮mdm2拮抗剂 - Google Patents

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Abstract

本文涉及药物化学领域中的化合物、组合物和方法。本文提供的化合物和组合物涉及螺-吲哚酮，其具有p53和MDM2之间相互作用的拮抗剂的功能；本发明还涉及它们作为癌症和其他疾病的治疗的治疗剂的用途。

Description

螺-吲哚酮MDM2拮抗剂
相关申请的交叉参考
本申请要求于2009年11月12日提交的美国临时申请No.61/260,685和于2009年11月23日提交的美国临时申请No.61/263,662的优先权。
关于联邦政府赞助的研究或研发的声明
本发明是在国立卫生研究院(NIH)资助金No.CA121279、CA069568和CA097248的支持下完成的。政府对本发明享有一定的权利。
发明背景
攻击性癌细胞表型是多种遗传和外遗传改变(epigenetic alteration)致使细胞内信号传导通路失调的结果(Ponder，Nature 411:336(2001))。癌细胞通常不能执行细胞凋亡程序，且认为由于正常细胞凋亡机制的缺陷引起的缺乏适当细胞凋亡是癌症的标志(Lowe等人，Carcinogenesis 21:485(2000))。由于正常细胞凋亡机制的缺陷引起的癌细胞不能执行细胞凋亡程序，通常与对化学治疗、放射或免疫治疗诱导的细胞凋亡的抗性增加相关。不同来源的人癌症由于细胞凋亡缺陷引起的对于目前治疗方案的原发性或获得性抗性，是目前癌症治疗的主要问题(Lowe等人，Carcinogenesis 21:485(2000)；Nicholson，Nature 407:810(2000))。因此，目前和未来对设计和研发靶点-特异性新分子抗癌治疗以改善癌症患者的存活率和生活质量的努力，必须包括对细胞凋亡特异性靶点癌细胞抗性的策略。
p53肿瘤抑制基因对于控制细胞周期进程、衰老和细胞凋亡起着核心作用(Vogelstein等人，Nature 408:307(2000)；Goberdhan，Cancer Cell 7:505(2005))。MDM2和p53是自身调节反馈回路的部分(Wu等人，Genes Dev.7:1126(1993))。MDM2在转录中被p53和MDM2激活，其又通过至少三种机理抑制p53活性(Wu等人，Genes Dev.7:1126(1993))。第一，MDM2蛋白直接结合p53反式激活区，从而抑制p53介导的反式激活。第二，MDM2蛋白含有核输出信号序列，并在结合至p53后诱导p53的核输出，阻止p53结合至靶DNA。第三，MDM2蛋白为E3泛素连接酶，且在结合至p53后能够促进p53的降解。
尽管之前已经成功地设计了基于肽的MDM2的高亲和性抑制剂(Garcia-Echeverria等人，Med.Chem.43:3205(2000))，然而这些抑制剂并非合适的治疗性分子，因为它们的细胞穿透性和体内生物利用度较差。尽管制药工业付出大量的努力，但高通量筛选策略在鉴定有效的非肽小分子抑制剂方面收效甚微。因此，需要p53-MDM2相互作用的非肽药物样小分子抑制剂。
p53和MDM2相互作用的结构基础已由X射线结晶学确定(Kussie等人，Science 274:948(1996))。
p53-MDM2相互作用的基于螺-吲哚酮(spiro-oxindole)的拮抗剂公开于美国专利No.7,759,383B2和7,737,174B2中。
发明内容
本发明涉及将罹患癌症的动物暴露于治疗有效量的药物(例如小分子)抑制癌细胞或支持细胞的生长，该药物增加p53和p53相关蛋白(例如p63，p73)的功能。在一些实施方案中，本文提供的化合物抑制p53或p53相关蛋白与MDM2或MDM2相关蛋白(例如MDMX)之间的相互作用。抑制p53或p53相关蛋白与MDM2或MDM2相关蛋白之间的相互作用，抑制癌细胞或支持细胞的生长和/或使得所述细胞作为一个群体更易感于癌症治疗性药物或放射治疗的诱导细胞死亡活性。在一些实施方案中，本文提供的抑制剂通过干扰p53-MDM2相互作用延长p53的半衰期，所述p53-MDM2相互作用通常会促进p53降解。本文提供的化合物满足了治疗多种癌症类型的尚未满足的需要，无论是作为单一治疗给药以诱导癌细胞的衰老、细胞生长抑制、细胞凋亡和/或细胞周期终止，还是以暂时方式给药其他药物，例如其他诱导细胞死亡或细胞周期干扰性癌症治疗剂或放射治疗(组合治疗)，以使得相比于仅用癌症治疗性药物或放射治疗进行治疗的动物中的相应细胞比例，有更大比例的癌细胞或支持性细胞对执行细胞凋亡程序敏感。
在一些实施方案中，相比于仅用所述化合物或抗癌药物/放射单独治疗的动物，用治疗有效量的一种或多种本文提供的化合物和抗癌剂治疗动物产生更大的抗肿瘤活性和临床益处。另外，由于本文提供的化合物能降低表达p53或p53相关蛋白的细胞的细胞凋亡阈值，因此当与一种或多种本文提供的化合物组合使用时，成功地执行细胞凋亡程序(作为对抗癌药物/放射的细胞凋亡诱导活性的响应)的细胞比例将会增加。或者，本文提供的化合物可用于给药更低剂量的、且因此毒性更低和更易耐受的抗癌药物和/或放射，以产生与单用常规剂量的抗癌药物/放射相同的肿瘤响应/临床益处。由于经批准的抗癌药物和放射治疗的剂量是已知的，因此本发明提供的化合物、组合物和方法能与一种或多种经批准的抗癌药物和/或放射治疗一起使用。另外，由于本文提供的化合物可至少部分地通过刺激p53和p53相关蛋白的促细胞凋亡和/或细胞周期抑制活性而起作用，将癌细胞和支持性细胞暴露于治疗有效量的所述化合物可暂时地连接为响应于抗癌药物或放射治疗的细胞执行细胞凋亡程序的尝试。因此，在一些实施方案中，与其他已知的抗癌药物组合给药本文提供的化合物或组合物，特别提供了有效的治疗实践。
在其他实施方案中，本文提供的p53或p53相关蛋白与MDM2和MDM2相关蛋白之间的相互作用的抑制剂可保护正常细胞(例如非过度增殖性细胞)免遭某些化学治疗剂和放射的毒性作用，这可能是通过所述抑制剂诱导正常细胞的细胞周期终止的能力实现的。例如，本文提供的抑制剂可引起包含野生型或功能性p53(和/或野生型或功能性p53相关蛋白)的细胞的细胞周期终止，同时对包含突变、缺失或者非功能性或低功能性p53(和/或突变、缺失或者非功能性或低功能性p53相关蛋白)的癌细胞无作用或作用较低。当与本文提供的抑制剂组合给予时，通过允许使用更高剂量或具有更长期治疗的化学治疗剂或疗法而不增加所述治疗的毒性副作用，这种有差别的保护性作用可允许更有效地治疗癌症。
申请人已经发现，本文提供的具体螺-吲哚酮呈现了药物样性质的出乎意料的组合。所述出乎意料的组合包括例如体外功效，体内功效，体外肝微粒体稳定性，想要的吸收、分布、代谢和排泄(ADME)性质之中的两种或多种。例如，相比于已知的p53-MDM2相互作用拮抗剂，本文提供的具体螺-吲哚酮更耐受代谢降解(例如通过体外肝微粒体稳定性和/或体内药代动力学所测量)和/或显示体内功效增加。
申请人还发现，可代谢裂解的基团可用于增加母体分子的水溶性。因此，在一些实施方案中，本文提供的螺-吲哚酮是相比于母体分子水溶性增加的有用的前药。
在一些实施方案中，本文提供的螺-吲哚酮具有式I：
其中：
R1a、R1b、R1c和R1d独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷氧基、芳基氧基、任选被取代的烷基、卤代烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的环烯基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、羧酰胺基(carboxamido)和磺酰胺基；
R2选自任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；
R3选自任选被取代的烷基、任选被取代的(环烷基)烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的环烯基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；
R4选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R5选自：
其中：
各R6a和R6b独立地选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R7选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；
R8a和R8b各独立地选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；或
R8a和R8b与它们所连接的碳一起形成任选被取代的3-至8-元环烷基；
W1选自-OR9a和-NR9bR9c；
R9a为氢；
R9b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO2R9d和-CONR9eR9f；
R9c选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R9b和R9c与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
R9d选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；
R9e和R9f各独立地选自氢、任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或
R9e和R9f与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
W2选自-OR10和-NR11aR11b；
条件是当W1为-OR9a和W2为-OR10时，R7、R8a和R8b的至少一个不为氢；
R10为氢；或
R9a和R10中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；
R11a选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO2R11c和-CONR11dR11e；
R11b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R11a和R11b与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
R11c选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；
R11d和R11e各独立地选自氢、任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或
R11d和R11e与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
n为1、2、3、4或5；
各R12a、R12b、R12c和R12d独立地选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R13选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R14选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；
Z选自-OR15和-NR16aR16b；或
Z和R14一起形成羰基，即C=O基团；
R15选自氢和可代谢裂解的基团；
R16a选自-SO2R16c和-CONR16dR16e；
R16b选自氢和任选被取代的烷基；
R16c选自任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；
R16d和R16e各独立地选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R16d和R16e与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环；
o为1、2或3；
p为0、1、2或3；
各R17a、R17b、R17c和R17d独立地选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R18选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R19选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；
R20选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；
R21a和R21b各为氢；或
R21a和R21b中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；
q为0、1、2或3；
r为1、2或3；
各R22a、R22b、R22c和R22d独立地选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R23选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R24选自-SO2R24a和-CONR24bR24c；
R24a选自任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；
R24b和R24c各独立地选自氢、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R24b和R24c与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环；
s和t各独立地为1、2或3；
X选自O、S和NR'；
Y选自O、S和NR"；
R'选自氢、任选被取代的烷基、芳烷基和任选被取代的环烷基；
R"选自氢、任选被取代的烷基、芳烷基和任选被取代的环烷基；和代表单键或双键,
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，或具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
在一些实施方案中，本文提供的化合物抑制p53或p53相关蛋白与MDM2或MDM2相关蛋白之间的相互作用。
在一些实施方案中，本文提供的化合物含有可代谢裂解的基团。具体而言，在一些实施方案中，本文提供的化合物含有羟基环烷基侧链的羟基，其可用于连接可代谢裂解的基团。合适的可代谢裂解的基团包括但不限于氨基酸酯或磷酸酯。
在一些实施方案中，本文提供的化合物可用于在包含功能性p53或p53相关蛋白的细胞中诱导衰老、细胞周期终止和/或细胞凋亡。本发明还提供了使用本文提供的化合物使细胞对其他药物敏感的方法，所述其他药物例如衰老、细胞凋亡和/或细胞周期终止的诱导剂。本文提供的化合物还能通过在治疗前用化学治疗剂诱导细胞周期终止而用于为正常细胞提供化学保护。在一个实施方案中，使正常细胞耐受化学治疗剂或疗法的所述方法包括将所述细胞与一种或多种本文提供的化合物接触。在一个实施方案中，在具有过度增殖性疾病的动物中保护正常细胞免遭化学治疗剂或疗法的毒性副作用的方法包括向该动物给药本文提供的化合物。本文提供治疗、改善或防止由对正常细胞给药化学治疗剂引起的疾病、副作用或病症的方法，该方法包括向经历化学治疗的动物给药本文提供的化合物。化学治疗引起的障碍和病症的实例包括但不限于粘膜炎、口腔炎、口干症、胃肠道病症和脱发。
本文提供的化合物可用于治疗、改善或防止障碍，例如响应于诱导凋亡细胞死亡的障碍，例如表征为细胞凋亡失调的障碍，包括过度增殖性疾病，例如癌症。在一些实施方案中，所述化合物可用于治疗、改善或防止表征为耐受癌症治疗的癌症(例如化学耐受、放射耐受、激素耐受等的那些癌细胞)。在其他实施方案中，所述化合物可用于治疗表征为功能性p53或p53相关蛋白的表达的过度增殖性疾病。在其他实施方案中，本文提供的化合物通过诱导所述细胞的细胞周期终止可用于保护正常细胞(例如非过度增殖性细胞)免遭化学治疗剂和疗法的毒性副作用。
在一个实施方案中，提供药物组合物。所述药物组合物可在药学上可接受的载剂中包含一种或多种本文提供的化合物。
在一个实施方案中，提供试剂盒(kit)。所述试剂盒可包含一种或多种本文提供的化合物和用于给予动物所述化合物的说明书。所述试剂盒可任选地含有其他治疗剂，例如抗癌剂或细胞凋亡调节剂。
附图说明
图1为显示在具有野生型p53的SJSA-1癌细胞中MDM2抑制剂诱导细胞死亡的柱状图。
图2为显示在具有野生型p53的SJSA-1癌细胞中由MDM2抑制剂诱导的p53活化的蛋白印迹分析的示意图。
图3为显示在具有野生型p53的SJSA-1癌细胞中由MDM2抑制剂诱导的p53活化的蛋白印迹分析的示意图。
图4为显示在具有野生型p53的SJSA-1癌细胞中由MDM2抑制剂诱导的p53活化的蛋白印迹分析的示意图。
图5为显示在大鼠中静脉内(IV)给药MDM2抑制剂后所得的血浆浓度-时间曲线的线形图。
图6为显示在大鼠中口服给药MDM2抑制剂后所得的血浆浓度-时间曲线的线形图。
图7为显示在小鼠SJSA-1异种移植物模型中MDM2抑制剂的体内抗肿瘤活性的线形图。
图8为显示在小鼠中给药MDM2抑制剂后动物重量的线形图。
图9为显示在小鼠SJSA-1异种移植物模型中MDM2抑制剂的体内抗肿瘤活性的线形图。
图10为显示在小鼠中给药MDM2抑制剂后动物重量的线形图。
图11为显示在小鼠SJSA-1异种移植物模型中MDM2抑制剂的体内抗肿瘤活性的线形图。
图12为显示在小鼠中给药MDM2抑制剂后动物重量的线形图。
图13A-D分别为质子化的MI-219、MI-142、MI-63和MI-708B的四张MS/MS谱图。
图14A-B分别为去质子化的MI-219和MI-142的两张MS/MS谱图。
图15A-D为在大鼠血浆中的M1(A和B)和合成的M1(C和D)的LC-MS色谱图和MS/MS谱图。
图16为显示在大鼠中MI-219和M1血浆浓度的线形图。
图17A-B为质子化的M2(A)和去质子化的M2(B)的MS/MS谱图。
图18A-D为质子化的MI-773和三种代谢物M1、M2和M3的MS/MS谱图。
图19A-C为质子化的MI-519-63及其代谢物M1和M2的MS/MS谱图。
发明详述
本文提供了抑制p53或p53相关蛋白与MDM2或MDM2相关蛋白之间的相互作用的化合物。通过抑制MDM2或MDM2相关蛋白对p53或p53相关蛋白的负面作用(negative effect)，这些化合物使细胞对细胞凋亡和/或细胞周期终止的诱导剂敏感。在一些实施方案中，本文提供的化合物诱导细胞凋亡和/或细胞周期终止。因此，本发明还提供了使细胞对细胞凋亡和/或细胞周期终止的诱导剂敏感的方法和诱导细胞中细胞凋亡和/或细胞周期终止的方法。在一些实施方案中，所述方法包含将所述细胞与单独的一种或多种本文提供的化合物或其与其他药物的组合接触，所述其他药物例如细胞凋亡诱导剂或细胞周期干扰剂。
本发明还提供了治疗、改善或防止患者病症的方法，该方法包括向所述患者给药一种或多种本文提供的化合物和其他药物，例如细胞凋亡诱导剂。所述病症包括表征为细胞凋亡失调和表征为表达功能性p53或p53相关蛋白的细胞增殖的病症。在其他实施方案中，提供了在动物中保护正常细胞(例如非过度增殖性细胞)免遭化学治疗剂和疗法的毒性副作用的方法。所述方法包含给予所述动物一种或多种本文提供的化合物。
定义
本文所用的术语“抗癌剂”是指在过度增殖性疾病例如癌症(例如在哺乳动物中，例如人)的治疗中所用的任何治疗剂(例如化学治疗化合物和/或分子治疗性化合物)、反义治疗、放射治疗或外科手术介入。
本文所用的术语“前药”是指母体“药物”分子的药理学上不活泼的衍生物，其需要在靶生理系统中发生生物转化(例如自发转化或酶促转化)，以释放或将前药转化(例如酶促、生理、机械、电磁转化)为活性药物。前药设计为克服与以下方面相关的问题：稳定性、水溶性、毒性、缺乏特异性、或有限的生物利用度。示例性前药包含活性药物分子本身以及化学掩蔽基团(例如可逆性抑制所述药物活性的基团)。一些前药是具有在代谢条件下可裂解基团的化合物的变型或衍生物。前药能够容易地使用本领域已知的方法由母体化合物制备，所述方法例如公开于以下文献中：A Textbook of Drug Designand Development,Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard(eds.),Gordon&Breach,1991,特别是第5章:"Design and Applications of Prodrugs"；Design ofProdrugs,H.Bundgaard(ed.),Elsevier,1985；Prodrugs:Topical and Ocular DrugDelivery,K.B.Sloan(ed.),Marcel Dekker,1998；Methods in Enzymology,K.Widder等人(eds.),Vol.42,Academic Press,1985,特别是pp.309-396；Burger'sMedicinal Chemistry and Drug Discovery,5th Ed.,M.Wolff(ed.),J ohn Wiley &Sons,1995,特别是Vol.1和pp.172-178和pp.949-982；Pro-Drugs as NovelDelivery System,T.Higuchi和V.Stella(eds.),Am.Chem.Soc.,1975；业绩Bioreversible Car riers in Drug Design,E.B.Roche(ed.),Elsevier,1987。
在经历生理条件下的溶剂分解或经历酶促降解或其他生物化学转化(例如磷酸化，氢化，去氢化，糖基化)时，示例性前药在体内或体外具有药学活性。在哺乳动物机体中，前药常常具有水溶性、组织相容性或延迟释放的优势(参见例如Bundgard,Design of Prodrugs,pp.7-9,21-24,Elsevier,Amsterdam(1985)；和Silverman,The有机Chemistry of Drug Design andDrug Action,pp.352-401,Academic Press,San Diego,CA(1992))。常见前药包括：酸衍生物，例如将母体酸与合适的醇(例如低级烷醇)反应得到的酯，或通过将母体醇与合适的羧酸(例如氨基酸)反应得到的酯，通过将母体酸化合物与胺、反应形成酰化的碱性衍生物(例如低级烷基酰胺)的碱性基团反应得到的酰胺；或含磷衍生物，例如磷酸酯(phosphate)、膦酸酯(phosphonate)和氨基磷酸酯(phosphoramidate ester)，包括环状磷酸酯、膦酸酯和氨基磷酸酯，参见例如US 2007/0249564A1。
本文所用的术语"可代谢裂解的基团"是指能够从母体分子通过代谢过程裂解和被氢取代的基团。某些包含可代谢裂解的基团的化合物可为前药，即其在药理学上不活泼。某些其他包含可代谢裂解的基团的化合物可为p53与MDM2之间相互作用的拮抗剂。在该情况下，这些化合物与母体分子相比可具有更高、更低或相当的活性。可代谢裂解的基团的实例包括源自氨基酸(参见例如US 2006/0241017A1；US 2006/0287244A1；和WO 2005/046575A2)或含磷化合物(参见例如U.S.2007/0249564A1)的基团，如反应方程式1所示。
反应方程式1
本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指本文提供的化合物在目标动物(例如哺乳动物)中生理上耐受的任何盐(例如通过与酸或碱反应所得)。本文提供的化合物的盐可来自无机或有机酸和碱。酸的实例包括但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富马酸、马来酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸等。其他酸，例如草酸，尽管其本身并非药学上可接受，但可用于制备盐，所述盐用作获得本文提供的化合物和它们的药学上可接受的酸加成盐的中间体。
碱的实例包括但不限于碱金属(例如钠)氢氧化物，碱土金属(例如镁)氢氧化物，氨和式NW4 +化合物(其中W为C1-4烷基)等。
盐的实例包括但不限于：乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐(flucoheptanoate)、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一酸盐等。盐的其他实例包括使本文提供的化合物的阴离子与合适的阳离子(例如Na+，NH4 +和NW4 +(其中W为C1-4烷基)等)形成的盐。出于治疗性用途，本文提供的化合物的盐应为药学上可接受的。然而，酸和碱的非药学上可接受盐也可用于例如制备或纯化药学上可接受的化合物。
本文所用的术语"溶剂合物"是指本文提供的化合物与一种或多种有机或无机溶剂分子的物理结合。该物理结合通常包括氢键结合。在一些实例中，例如当一种或多种溶剂合物分子掺入晶状固体的晶格中时，所述溶剂合物能够分离。"溶剂合物"涵盖溶液相溶剂合物和可分离的溶剂合物。示例性溶剂合物包括水合物、乙醇合物和甲醇合物。
本文所用的术语"药学上可接受的一价阳离子"是指无机阳离子，例如但不限于碱金属离子，例如Na+和K+，以及有机阳离子，例如但不限于铵和取代的铵离子，例如NH4 +、NHMe3 +、NH2Me2 +、NHMe3 +和NMe4 +。
本文所用的术语"药学上可接受的二价阳离子"是指无机阳离子，例如但不限于碱土金属离子，例如Ca2+和Mg2+。
药学上可接受的一价和二价阳离子的实例例如公开于Berge等人，J.Pharm.Sci.，66:1-19(1997)。
本文所用的术语“治疗有效量”是指足以改善一种或多种疾病症状、或防止疾病进展、或使疾病退化的治疗剂(包括本文提供的化合物和组合物)的量。例如，对于癌症的治疗，在一个实施方案中，治疗有效量可指达到以下效果的治疗剂的量：降低肿瘤生长速率，减小肿瘤质量、减小转移数量、延长肿瘤进展时间、增加肿瘤细胞的细胞凋亡、或增加存活时间至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或至少100%。
本文所用的术语“使…敏感”和“致敏”是指通过给药第一治疗剂(例如本文提供的化合物)使动物或动物细胞对于第二治疗剂生物效应更敏感或响应性更强，所述生物效应(例如细胞功能的促进或延迟，包括但不限于细胞分裂、细胞生长、增殖、侵袭、血管生成、坏死或细胞凋亡)。在伴随或不伴随给药第一药物的情况下给药第二药物后，在想要的生物学效应(例如细胞功能的促进或延迟，包括但不限于细胞生长、增殖、侵袭、血管生成或细胞凋亡)方面，测得第一药物对靶细胞的致敏作用可能不同。相比于无第一药物的响应，致敏细胞的响应可提高至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约100%、至少约150%、至少约200%、至少约250%、至少300%、至少约350%、至少约400%、至少约450%或至少约500%。
本文所用的术语"细胞凋亡失调"是指细胞通过细胞凋亡而死亡的能力的任何缺失(例如遗传缺陷)。细胞凋亡失调与多种病症有关或由多种病症诱导，所述病症的非限制性实例包括：自身免疫性疾病(例如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、移植物抗宿主病、重症肌无力或干燥综合征)、慢性炎症(例如牛皮癣、哮喘或节段性回肠炎)、过度增殖性疾病(例如肿瘤、B细胞淋巴瘤或T细胞淋巴瘤)、病毒感染(例如疱疹、乳头状瘤或HIV)及其他病症，例如骨关节炎和动脉粥样硬化。应注意，当通过病毒感染诱导所述失调或所述失调与病毒感染有关时，该病毒感染在失调发生或观察时可能被检测到，也可能检测不到。即病毒诱导的失调在病毒感染症状消失后也能够发生。
本文所用的术语"功能性p53"是指在正常水平、低水平或高水平表达的野生型p53，且p53的突变体或等位基因突变体保持至少约5%野生型p53的活性，例如保持至少约10%、约20%、约30%、约40%、约50%或更多的野生型活性。
本文所用的术语"p53相关蛋白"是指与p53具有至少25%的序列同源性、具有肿瘤抑制基因活性、且通过与MDM2或MDM2相关蛋白相互作用而被抑制的蛋白。p53相关蛋白的实例包括但不限于p63和p73。
本文所用的术语"MDM2相关蛋白"是指与MDM2具有至少25%的序列同源性、且与p53或p53相关蛋白相互作用并使其受到抑制的蛋白。MDM2相关蛋白的实例包括但不限于MDMX。本文所用的术语"衰老"是指非癌性二倍体细胞失去分裂活性的现象，且其特征部分地在于末端着丝粒(telomeric)机能障碍或缩短。
本文所用的术语“过度增殖性疾病”是指在动物的局部增殖细胞的群体不受正常生长限制的病症。过度增殖性疾病的实例包括肿瘤、新生物、淋巴瘤、白血病等。若不经历侵袭或转移则新生物为良性；反之则为恶性。“转移性”细胞是指细胞能够侵入邻近身体结构。增生是细胞增殖的形式，其涉及组织或器官中细胞数量的增长，而在结构或功能上无显著变化。组织转化则是受控制的细胞生长的形式，其中一类完全分化的细胞取代另一类分化的细胞。
活化的淋巴样细胞的病理性生长常常导致自身免疫障碍或慢性炎性病症。本文所用的术语“自身免疫障碍”是指其中机体产生识别机体自身的分子、细胞或组织的抗体或免疫细胞的任何病症。自身免疫障碍的非限制性实例包括自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、伯格氏病(Berge’s disease)或IgA肾病、乳糜泻(celiac sprue)、慢性疲劳综合征、节段性回肠炎、皮肌炎、纤维肌痛、移植物抗宿主病、格雷夫氏病(Grave’s disease)、桥本氏甲状腺炎、特发性血小板减少性紫癜、扁平苔藓、多发性硬化、重症肌无力、牛皮癣、风湿热、风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合征、系统性红斑狼疮、I型糖尿病、溃疡性结肠炎、白癜风等。
本文所用的术语“肿瘤性疾病”是指细胞的任何异常生长，或为良性(非癌性)或为恶性(癌性)。
本文所用的术语"正常细胞"是指不经历异常生长或分裂的细胞。正常细胞是非癌性的，不是过度增殖性疾病或病症的部分。
本文所用的术语“抗肿瘤剂”是指延缓靶(例如恶性)肿瘤增殖、生长或扩散的任何化合物。
本文所用的术语“防止”或“预防”是指在动物中降低病理性细胞(例如过度增殖性或肿瘤细胞)出现的可能性。所述预防可以是完全的，例如在受试者中完全无病理性细胞。所述预防也可以是部分的，使得在受试者中病理性细胞出现的可能性低于未经一种或多种本文提供的化合物治疗的受试者中出现的可能性。
本文所用的术语"细胞凋亡调节剂"是指参与调节(例如抑制、减少、增加、促进)细胞凋亡的物质。细胞凋亡调节剂的实例包括蛋白，其包含例如但不限于以下的死亡结构域：Fas/CD95、TRAMP、TNF RI、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、FADD和RIP。细胞凋亡调节剂的其他实例包括但不限于TNFα、Fas配体、Fas/CD95抗体和其他TNF家族受体、TRAIL (也已知为Apo2配体或Apo2L/TRAIL)、TRAIL-R 1抗体或TRAIL-R2抗体、Bcl-2、p53、BAX、BAD、Akt、CAD、PI3激酶、PP1和半胱天冬酶蛋白。广义的调节剂包括TNF家族受体和TNF家族配体的激动剂和拮抗剂。细胞凋亡调节剂可为可溶性或膜结合性(例如配体或受体)。细胞凋亡调节剂包括细胞凋亡诱导剂，例如TNF或TNF相关配体，特别是TRAMP配体、Fas/CD95配体、TNFR-1配体或TRAIL。
术语"药学上可接受的载剂"或"药学上可接受的载体"涵盖任何标准的药用载剂、溶剂、表面活性剂或载体。合适的药学上可接受的载体包括水性载体和非水性载体。标准药用载剂和它们的制剂公开于Remington'sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，PA，第19版，1995中。
以其本身或作为另一基团的部分，本文所用的术语“烷基”是指直链或支链饱和脂肪烃，其具有1至18个碳或指定数目的碳(例如C1-C18指1至18个碳)。在一个实施方案中，所述烷基为C1-C10烷基。在另一实施方案中，所述烷基为C1-C6烷基。在另一实施方案中，所述烷基为C1-C4烷基。示例性烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正己基、异己基、正庚基、4,4-二甲基戊基、正辛基、2,2,4-三甲基戊基、壬基、癸基等。
以其本身或作为另一基团的部分，本文所用的术语"任选被取代的烷基"是指或未被取代或被一个、两个、三个取代基取代的如上所述的烷基，所述取代基独立地选自：羟基(即-OH)、硝基(即-NO2)、氰基(即-CN)、任选被取代的环烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。在一个实施方案中，所述任选被取代的烷基被两个取代基取代。在另一实施方案中，所述任选被取代的烷基被一个取代基取代。在另一实施方案中，所述取代基选自羟基(即羟基烷基)、任选被取代的环烷基(即(环烷基)烷基)或氨基(即氨基烷基)。示例性任选被取代的烷基包括-CH2OCH3、-CH2CH2NH2、-CH2CH2NH(CH3)、-CH2CH2CN、-CH2SO2CH3、羟基甲基、羟基乙基、羟基丙基等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"亚烷基"是指包含一个、两个、三个、四个或更多连接在一起的亚甲基的二价烷基。示例性亚烷基包括-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"任选被取代的亚烷基"是指或未被取代或被一个、两个、三个或四个取代基取代的如上所述的亚烷基，所述取代基独立地选自任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基。在一个实施方案中，所述任选被取代的C1-C6烷基为甲基。在一个实施方案中，所述任选被取代的芳基为任选被一个或两个卤基取代的苯基。示例性的任选被取代的亚烷基包括-CH(CH3)-，-C(CH3)2-、-CH2CH(CH3)-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH(Ph)CH2-、-CH(CH3)CH(CH3)-等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"卤代烷基"是指具有1至6个卤素取代基的如上定义的烷基。在一个实施方案中，所述卤代烷基具有一个、两个或三个卤素取代基。示例性卤代烷基包括三氟甲基、-CH2CH2F等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"羟基烷基"是指具有一个羟基取代基的如上定义的烷基。示例性羟基烷基包括羟基甲基、羟基乙基、羟基丙基等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语“二羟基烷基”是指具有两个羟基取代基的如上定义的烷基。示例性二羟基烷基包括-CH2CH2CCH3(OH)CH2OH、-CH2CH2CH(OH)CH(CH3)OH、-CH2CH(CH2OH)2、-CH2CH2CH(OH)C(CH3)2OH、-CH2CH2CCH3-(OH)CH(CH3)OH等，包括其立体异构体。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"羟基环烷基"是指具有至少一个，例如一个或两个羟基取代基的如下定义的任选被取代的环烷基。示例性羟基环烷基包括：
等，包括其立体异构体。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"任选被取代的(环烷基)烷基"是指具有任选被取代的环烷基(如下定义)取代基的如上定义的任选被取代的烷基。示例性任选被取代的(环烷基)烷基包括：
等，包括其立体异构体。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"芳烷基"是指具有一个、两个或三个任选被取代的芳基取代基的如上定义的任选被取代的烷基。在一个实施方案中，所述芳烷基具有两个任选被取代的芳基取代基。在另一实施方案中，所述芳烷基具有一个任选被取代的芳基取代基。在另一实施方案中，所述芳烷基为芳基(C1-C4烷基)。在另一实施方案中，所述芳基(C1-C4烷基)具有两个任选被取代的芳基取代基。在另一实施方案中，所述芳基(C1-C4烷基)具有一个任选被取代的芳基取代基。示例性芳烷基包括例如，苄基、苯基乙基、(4-氟苯基)乙基、苯基丙基、二苯基甲基(即Ph2CH-)、二苯基乙基(Ph2CHCH2-)等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"环烷基"是指饱和和部分不饱和(包含一个或两个双键)的环状烃基，其包含一至三个环，具有3至12个碳原子(即C3-C12环烷基)或所指定的碳数。在一个实施方案中，所述环烷基具有一个环。在另一实施方案中，所述环烷基为C3-C6环烷基。示例性环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、降冰片基、十氢萘、金刚烷基等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语“任选被取代的环烷基”是指或未被取代或被一个、两个或三个取代基取代的如上定义的环烷基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、氨基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。术语"任选被取代的环烷基"也指如上定义的环烷基可稠合至任选被取代的芳基。示例性任选被取代的环烷基包括：
等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"烯基"是指包含一个、两个或三个碳碳双键的如上定义的烷基。在一个实施方案中，所述烯基具有一个碳碳双键。示例性烯基包括-CH=CH2、-CH2CH=CH2、-CH2CH2CH=CH2、-CH2CH2CH=CHCH3等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"任选被取代的烯基"是指或未被取代或被一个、两个或三个取代基取代的如上定义的烯基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。示例性任选被取代的烯基包括-CH=CHPh、-CH2CH=CHPh等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"环烯基"是指包含一个、两个或三个碳碳双键的如上定义的环烷基。在一个实施方案中，所述环烯基具有一个碳碳双键。示例性环烯基包括环戊烯、环己烯等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"任选被取代的环烯基"是指或未被取代或被一个、两个或三个取代基取代的如上定义的环烯基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"炔基"是指包含一至三个碳碳叁键的如上定义的烷基。在一个实施方案中，所述炔基具有一个碳碳叁键。示例性炔基包括-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-CH2CH2C≡CH  和-CH2CH2C≡CCH3。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"任选被取代的炔基"是指或未被取代或被一个、两个或三个取代基取代的如上定义的炔基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。示例性任选被取代的烯基包括-C≡CPh、-CH2C≡CPh等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"芳基"是指单环和双环状芳香环系统，其具有6至14个碳原子(即C6-C14芳基)，例如苯基(缩写为Ph)、1-萘基和2-萘基等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语“任选被取代的芳基”是指或未被取代或被一至五个取代基取代的如上定义的芳基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。在一个实施方案中，所述任选被取代的芳基为任选被取代的苯基。在一个实施方案中，所述任选被取代的苯基具有四个取代基。在另一实施方案中，所述任选被取代的苯基具有三个取代基。在另一实施方案中，所述任选被取代的苯基具有两个取代基。在另一实施方案中，所述任选被取代的苯基具有一个取代基。示例性被取代的芳基包括2-甲基苯基、2-甲氧基苯基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、3-甲基苯基、3-甲氧基苯基、3-氟苯基、3-氯苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-甲氧基苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、2,6-二-氟苯基、2,6-二-氯苯基、2-甲基-3-甲氧基苯基、2-乙基-3-甲氧基苯基、3,4-二-甲氧基苯基、3,5-二-氟苯基、3,5-二-甲基苯基和3,5-二甲氧基-4-甲基苯基、2-氟-3-氯苯基、3-氯-4-氟苯基等。术语任选被取代的芳基意在包括已稠合至任选被取代的环烷基和稠合至任选被取代的杂环的基团。实例包括
等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"杂芳基"是指具有5至14个碳原子(即C5-C14杂芳基)和一、二、三或四个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的单环和双环状芳香环系统。在一个实施方案中，所述杂芳基具有三个杂原子。在一个实施方案中，所述杂芳基具有两个杂原子。在一个实施方案中，所述杂芳基具有一个杂原子。示例性杂芳基包括1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、4-苯并咪唑基、5-苯并咪唑基、2-苯并噻唑基、4-苯并噻唑基、5-苯并噻唑基、5-吲哚基、3-吲唑基、4-吲唑基、5-吲唑基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、2-喹啉基、3-喹啉基、6-喹啉基等。术语杂芳基意在包括可能的N-氧化物。示例性N-氧化物包括吡啶基N-氧化物等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"任选被取代的杂芳基"是指或未被取代或被一至四个取代基、通常被一个或两个取代基取代的如上定义的杂芳基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。在一个实施方案中，所述任选被取代的杂芳基具有一个取代基。在另一实施方案中，所述取代基为任选被取代的芳基、芳烷基或任选被取代的烷基。在另一实施方案中，所述取代基为任选被取代的苯基。任何可用的碳或氮原子均可被取代。示例性任选被取代的杂芳基包括：
等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"杂环"是指饱和和部分不饱和(包含一个或两个双键)的环状基团，其包含一至三个环，具有2至12个碳原子(即C2-C12杂环)和一个或两个氧、硫或氮原子。所述杂环能够任选地通过碳或氮原子连接至分子的其他部分。示例性杂环基包括
等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语“任选被取代的杂环”是指或未被取代或被一至四个取代基取代的，如上定义的杂环所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基、磺酰胺基、-CORc、-SO2Rd、-N(Re)CORf、-N(Re)SO2Rg或-N(Re)C=N(Rh)-氨基，其中：Rc为氢、任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；Rd为任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；Re为氢、任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；Rf为氢、任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；Rg为任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；和Rh为氢、-CN、任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基。可在任何可用的碳或氮原子上发生取代。示例性被取代的杂环基包括
等。
任选被取代的杂环可稠合至芳基，以提供如上所述任选被取代的芳基。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"烷氧基"是指连接至末端氧的卤代烷基、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基或任选被取代的炔基。示例性烷氧基包括甲氧基、叔丁氧基、-OCH2CH=CH2等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"芳基氧基"是指连接至末端氧原子的任选被取代的芳基。示例性芳基氧基包括苯氧基等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"芳烷基氧基"是指连接至末端氧原子的芳烷基。示例性芳烷基氧基包括苄基氧基等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"烷硫基"是指连接至末端硫原子的卤代烷基、芳烷基、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基或任选被取代的炔基。示例性烷基包括-SCH3等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"卤"或"卤素"是指氟、氯、溴或碘。在一个实施方案中，所述卤素为氟或氯。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"氨基"是指式-NRaRb的基团，其中Ra和Rb独立地为氢、卤代烷基、芳烷基、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的杂环、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；或Ra和Rb与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的四至七元杂环。示例性氨基包括-NH2、-N(H)CH3、-N(CH3)2、N(H)CH2CH3、N(CH2CH3)、-N(H)CH2Ph等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"羧酰胺基"是指式-CO-氨基的基团。示例性羧酰胺基包括-CONH2、-CON(H)CH3、-CON(H)Ph、-CON(H)CH2CH2Ph、-CON(CH3)2、CON(H)CHPh2等。
以其本身或作为另一基团的部分，术语"磺酰胺基"是指式-SO2-氨基的基团。示例性磺酰胺基包括-SO2NH2、-SO2N(H)CH3、-SO2N(H)Ph等。
本文所用的术语"约"，包括所述数值的±10%的范围。因此，"约10"指9至11。
一些本发明的化合物可以以立体异构体的形式存在，包括光学异构体和构象异构体。本发明包括所有立体异构体，其既作为纯的单独的立体异构体制品也可作为各自的富集制品，还包括所述立体异构体的外消旋混合物，以及根据本领域技术人员公知的方法可分离的单独的非对映异构体和对映异构体。
化合物
在一些实施方案中，提供式I化合物：
其中：
R1a、R1b、R1c和R1d独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷氧基、芳基氧基、任选被取代的烷基、卤代烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的环烯基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、羧酰胺基和磺酰胺基；
R2选自任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；
R3选自任选被取代的烷基、任选被取代的(环烷基)烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的环烯基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；
R4选自氢和任选被取代的烷基；
R5选自：
其中：
各R6a和R6b独立地选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R7选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；
R8a和R8b各独立地选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；或
R8a和R8b与它们所连接的碳一起形成任选被取代的3-至8-元环烷基；
W1选自-OR9a和-NR9bR9c；
R9a为氢；
R9b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO2R9d和-CONR9eR9f；
R9c选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R9b和R9c与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
R9d选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；
R9e和R9f各独立地选自氢、任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或
R9e和R9f与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
W2选自-OR10和-NR11aR11b；
条件是当W1为-OR9a和W2为-OR10时，R7、R8a和R8b的至少一个不为氢；
R10为氢；或
R9a和R10中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；
R11a选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO2R11c和-CONR11dR11e；
R11b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R11a和R11b与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
R11c选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；
R11d和R11e各独立地选自氢、任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或
R11d和R11e与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
n为1、2、3、4或5；
各R12a、R12b、R12c和R12d独立地选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R13选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R14选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；
Z选自-OR15和-NR16aR16b；或
Z和R14一起形成羰基，即C=O基团；
R15选自氢和可代谢裂解的基团；
R16a选自-SO2R16c和-CONR16dR16e；
R16b选自氢和任选被取代的烷基；
R16c选自任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；
R16d和R16e各独立地选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R16d和R16e与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环；
o为1、2或3；
p为0、1、2或3；
各R17a、R17b、R17c和R17d独立地选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R18选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R19选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；
R20选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；
R21a和R21b各为氢；或
R21a和R21b中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；
q为0、1、2或3；
r为1、2或3；
各R22a、R22b、R22c和R22d独立地选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R23选自氢和任选被取代的C1-C6烷基；
R24选自-SO2R24a和-CONR24bR24c；
R24a选自任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；
R24b和R24c各独立地选自氢、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R24b和R24c与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环；
s和t各独立地为1、2或3；
X选自O、S和NR'；
Y选自O、S和NR"；
R'选自氢、任选被取代的烷基、芳烷基和任选被取代的环烷基；
R"选自氢、任选被取代的烷基、芳烷基和任选被取代的环烷基；和代表单键或双键，
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，或具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
在一些实施方案中，对于所述式I化合物，代表单键或双键。
在一些实施方案中，所述式I化合物为立体异构体的混合物，例如非对映异构体和/或对映异构体的混合物，例如外消旋混合物。在另一所述实施方案中，所述化合物为非对映异构体的混合物。在另一所述实施方案中，所述化合物为对映异构体的混合物。在具体的实施方案中，所述化合物为单一对映异构体。
在一些实施方案中，R5选自R5-1和R5-2。在具体的实施方案中，R5为R5-2和Z为-OH。
在一些实施方案中，提供式Ia化合物：
其中R1a、R1b、R1c、R1d、R2、R3、R4、R5、X和Y具有如上面式I所述的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
在一些实施方案中，提供式Ib化合物：
其中R1a、R1b、R1c、R1d、R2、R3、R4、R5、X和Y具有如上面式I所述的含义，或其互变异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
在一些实施方案中，提供式II-XVII化合物：
其中R1a、R1b、R1c、R1d、R2、R3、R4、R5、X和Y具有如上面式I所述的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
在一些实施方案中，提供式II化合物，其中R1a、R1b、R1c、R1d、R2、R3、R4、R5、X和Y具有上述与式I相关的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
在一些实施方案中，提供式I-XVII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中：
a)R1a、R1b、R1c和R1d独立地选自氢，氟和氯；
b)R1a和R1d为氢；R1b选自氢和氟；和R1c选自氟和氯；
c)R2为任选被取代的苯基；
d)R3选自任选被取代的烷基、任选被取代的(环烷基)烷基和任选被取代的环烷基；
e)R4为氢；
f)X为NH；
g)X为O；
h)X为S；
i)Y为O；
j)Y为S；
k)Y为NH；或
l)X和Y为NH；
或其任意组合。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5为R5-1；R6a和R6b为氢；R7为C1-C4烷基；R8a和R8b为氢；W为-OR10，R9和R10为氢；和n为2。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5为R5-1；R6a和R6b为氢；R7为C1-C4烷基；R8a和R8b为氢；W为-NR11aR11b，R9为氢；和n为2。
在一些实施方案中，所述提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5为R5-1；R6a和R6b为氢；R7为C1-C4烷基；R8a和R8b为氢；W为-OR10，R9和R10中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；和n为2。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5为R5-2；R12a、R12b、R12c和R12d各为氢；R13为氢；Z为-OR15和R15为氢；o为1或2；和p为1或2。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5为R5-2；R12a、R12b、R12c和R12d各为氢；R13为氢；Z为-NR16aR16b；o为1或2；和p为1或2。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5为R5-2；R12a、R12b、R12c和R12d各为氢；R13为氢；Z为-OR15且R15为可代谢裂解的基团；o为1或2；和p为1或2。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5为R5-3；R17a、R17b、R17c和R17d各为氢；R18、R19和R20为氢；R21a和R21b为氢；和q和r为1。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5为R5-3；R17a、R17b、R17c和R17d各为氢；R18、R19和R20为氢；R21a和R21b中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；和q和r为1。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R2为任选被取代的芳基，其具有式R2-1：
且R25a、R25b、R25c、R25d和R25e各独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、氨基、氰基、烷氧基、任选被取代的烷基、卤代烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基。在具体的实施方案中，R25a选自氢和氟；R25b为氯；R25c选自氢和氟；和R25d和R25e为氢。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5选自：
包括其立体异构体，例如其对映异构体，其中：
R7为任选被取代的C1-C4烷基；
R9a和R10各为氢；或
R9a和R10中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；
R9b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO2R9d和-CONR9eR9f；
R9c选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R9b和R9c与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
R9d选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；
R9e和R9f各独立地选自氢、任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或
R9e和R9f与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
R11a选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO2R11c和-CONR11dR11e；
R11b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R11a和R11b与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
R11c选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；
R11d和R11e各独立地选自氢、任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或
R11d和R11e与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
R14选自氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基；
R15为氢或可代谢裂解的基团；
R16a选自-SO2R16c和-CONR16dR16e；
R16b选自氢和任选被取代的烷基；
R16c选自任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；
R16d和R16e各独立地选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R16d和R16e与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环；
R19选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；
R20选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；
R21a和R21b各为氢；或
R21a和R21b中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；
R24选自-SO2R24a和-CONR24bR24c；
R24a选自任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；和
R24b和R24c各独立地选自氢、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基，或
R24b和R24c与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环。
在一些实施方案中，R5选自R5-5、R5-6、R5-10、R5-11、R5-12、R5-13和R5-14。
在一些实施方案中，R5选自R5-10和R5-12，且R14为氢或甲基，且R15为氢。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5选自：
其中：
R7选自甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；和
R8a和R8b各独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5选自：
其中：
R7选自甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；
R8a和R8b各独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；
R9d选自甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；和
R11c选自甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5选自：
其中：
R7选自甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；
R8a和R8b各独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；
R9e选自甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；和
R11d选自甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5选自：
其中：
R14选自甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；和
R19和R20各独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5选自：
其中：
R14选自甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；和
R16c选自甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。
在一些实施方案中，提供式II化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R5选自：
其中：
R14选自甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；和
R16d选自甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。
在另一实施方案中，提供式XVIIIa化合物：
其中：
R1b和R1c独立地选自氢、氟和氯；
R3选自任选被取代的烷基、任选被取代的(环烷基)烷基和任选被取代的环烷基；
R26a、R26b和R26c独立地选自氢、氟和氯；和
R27选自：
其中：
R7为任选被取代的C1-C4烷基；
W2选自-OR10和-NR11aR11b；
R9a和R10各为氢；或
R9a和R10中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；
R11a选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO2R11c和-CONR11dR11e；
R11b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R11a和R11b与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
R11c选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；
R11d和R11e各独立地选自氢，任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或
R11d和R11e与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
R14选自氢、任选被取代的C1-C4烷基和任选被取代的环烷基；
Z选自-OR15和-NR16aR16b；
R15选自氢和可代谢裂解的基团；
R16a选自-SO2R16c和-CONR16dR16e；
R16b选自氢和任选被取代的烷基；
R16c选自任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；
R16d和R16e各独立地选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R16d和R16e与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环；
R19选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；
R20选自氢、任选被取代的C1-C6烷基和任选被取代的环烷基；
R21a和R21b各为氢；或
R21a和R21b中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
在另一实施方案中，提供式XVIIIb化合物：
其中R1b、R1c、R3、R26a、R26b、R26c和R27具有如式XVIIIa所述的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
在另一实施方案中，提供式XVIIIc化合物：
其中R1b、R1c、R3、R26a、R26b、R26c和R27具有如式XVIIIa所述的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
在一些实施方案中，R27选自R27-2、R27-3、R27-5、R27-6、R27-8、R27-9、R27-11、R27-12、R27-14、R27-15、R27-16、R27-17、R27-19、R27-20、R27-21、R27-22、R27-24、R27-25、R27-27、R27-29、R27-30、R27-31和R27-32。在一些实施方案中，R27选自R27-2、R27-3、R27-5和R27-6、R27-8、R27-9、R27-14、R27-15、R27-16和R27-17。在一些实施方案中，R27为羟基环烷基。
在一些实施方案中，R9a为氢；W2为OH；Z为OH；R7为C1-C4烷基，例如甲基、乙基、丙基或异丙基，或环丙基；R14、R19和R20各独立地为氢、C1-C4烷基，例如甲基、乙基、丙基或异丙基或环丙基；和R21a和R21b各为氢。
在一些实施方案中，R9a为氢，R7为氢、C1-C4烷基、或环丙基；W2为-NHR11a；R11a为C1-C4烷基，例如甲基、三氟甲基、乙基、丙基或异丙基或环丙基；R14为氢、C1-C4烷基，例如甲基、乙基、丙基或异丙基或环丙基；Z为-NHSO2R16c或-NHCONHR16d；和R16c和R16d各独立地为任选被取代的C1-C4烷基，例如甲基、三氟甲基、乙基、丙基或异丙基或环丙基。
在一些实施方案中，提供式XIX-XXXIV化合物：
其中R1b、R1c、R3、R26a、R26b、R26c和R27具有上述与式XVIIIa相关的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
在一些实施方案中，提供式XIX化合物，其中R1b、R1c、R3、R26a、R26b、R26c和R27具有上述与式XVIIIa相关的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
在一些实施方案中，提供式XIX化合物，其中R27选自：
其中：
R7为C1-C4烷基；
R9a和R10为氢；或
R9a和R10中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；
R11a和R11b各独立地选自氢、任选被取代的C1-C4烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R11a和R11b与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
R14选自氢和C1-C4烷基；
R15为氢或可代谢裂解的基团；和
R16a选自-SO2R16c和-CONR16dR16e；
R16c选自任选被取代的C1-C4烷基或环丙基；
R16d和R16e各独立地选自氢、任选被取代的C1-C4烷基或环丙基；或
R16d和R16e与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环,
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
在一些实施方案中，提供式XIX化合物，其中R27选自：
其中：
R7为任选被取代的C1-C4烷基；
W2选自-OR10和-NR11aR11b；
R9a和R10各为氢；或
R9a和R10中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；
R11a选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO2R11c和-CONR11dR11e；
R11b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或
R11a和R11b与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
R11c选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；
R11d和R11e各独立地选自氢、任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或
R11d和R11e与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
在一些实施方案中，提供式XIX化合物，其中R27选自：
在一些实施方案中，提供式XIX化合物，其中R27选自：
其中R11a和R11b与它们所连接的氮一起形成任选被取代的5-或6-元杂环。
在一些实施方案中，提供式XIX化合物，其中R27选自：
其中：
R14选自氢和C1-C4烷基；和
R15为可代谢裂解的基团。
在一些实施方案中，提供式II和XIX化合物，其中R15为可代谢裂解的基团，其选自：
其中：
各R28a和R28b独立地选自氢、任选被取代的烷基和芳烷基；
R29a和R29b各选自氢和任选被取代的烷基；
v为1、2、3或4；和
R30a和R30b各选自氢、任选被取代的烷基、芳烷基、任选被取代的芳基和药学上可接受的一价阳离子；或
与R30a和R30b一起代表药学上可接受的二价阳离子或任选被取代的亚烷基。
在一些实施方案中，R15为天然或非天然氨基酸的残基。在其他实施方案中，R15为以下氨基酸的残基：甘氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、赖氨酸、天冬氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、色氨酸、缬氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸、精氨酸和组氨酸。
在一些实施方案中，提供式II和XIX化合物，其中R3为C1-C10烷基。
在一些实施方案中，提供式II和XIX化合物，其中R3选自-CH2C(CH3)3、-CH2C(CH3)2CH2CH3、-CH2C(CH3)2CH2CH2CH3、-CH2C(CH3)2CH2CH2CH2CH3、-CH2C(CH2CH3)2CH3和-CH2C(CH3)2CH2-CH(CH3)2。在一些实施方案中，R3为-CH2C(CH3)3。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的式I化合物：
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药("Ms"=-SO2CH3)。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的式I化合物：
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药("Ms"=-SO2CH3)。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的式I化合物，其包括可代谢裂解的氨基酸酯或磷酸酯作为前药：
或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
本文提供的化合物和方法，结合以下的合成反应方程式将得到更好的理解，这些反应方程式例示了可制备本文提供的化合物的方法。起始原料可从市售来源获得，或可通过本领域技术人员已知的文献中的公知方法制备。本领域技术人员将理解，上述化合物可通过替换下表所示合成中适当的试剂和物质而制备。
其中Y为NH的式Ia化合物能够如公开于反应方程式2和3中的方法合成。
反应方程式2
反应方程式3
式Ia化合物可通过本领域公知的手性拆分方法制备，例如手性柱色谱，以得到式II-XVII化合物。用于手性拆分的合适的手性柱包括例如，DaicelOD-H，DaicelAD-H和Regis TechnologiesULMO手性柱。其他手性拆分方法也是可能的。式II-XVII化合物还可通过不对称合成的方法合成。例如，其中Y为NH的式II化合物可通过使用不对称1,3-偶极环化加成作为关键步骤合成，如先前的文献所公开(参见美国专利No.7,759,383B2和7,737,174B2和Ding等人，J.Am.Chem.Soc.127:10130-10131(2005))(反应方程式4)。
反应方程式4
试剂和条件：a)CH2Cl2-CH3CN,KF-Al2O3,微波，或甲醇、哌啶回流；b)分子筛，甲苯，70℃；c)HNR4R5，室温；d)Pb(OAc)4,CH2Cl2-MeOH(1:1),0℃，或硝酸铈(IV)铵(CAN),CH3CN,K2CO3,室温。
简言之，化合物A与醛B反应得到C。化合物C与醛E和化合物D反应得到F(其中R"为芳烷基的式I化合物)。用Pb(OAc)4或CAN处理F，得到其中Y为NH的式II化合物。
方法
在一些实施方案中，本文提供的化合物诱导细胞周期终止和/或细胞凋亡，并有单独作用或响应于其他细胞凋亡诱导信号诱导细胞周期终止和/或细胞凋亡的潜力。因此，认为这些化合物使细胞对诱导细胞周期终止和/或细胞凋亡敏感，所述细胞包括耐受所述诱导刺激物的细胞。通过抑制p53或p53相关蛋白与MDM2或MDM2相关蛋白的相互作用，本文提供的化合物可用于在任何通过诱导细胞凋亡而治疗、改善或预防的病症中诱导细胞凋亡。在一个实施方案中，所述抑制剂可用于诱导包含功能性p53或p53相关蛋白的细胞的细胞凋亡。
在另一实施方案中，本发明涉及用本文提供的化合物与一种或多种其他细胞凋亡调节剂组合来调节细胞凋亡。细胞凋亡调节剂的实例包括但不限于Fas/CD95、TRAMP、TNF RI、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、FADD、RIP、TNFα、Fas配体、TRAIL、针对TRAIL-R1或TRAIL-R2的抗体、Bcl-2、p53、BAX、BAD、Akt、CAD、PI3激酶、PP1和半胱天冬酶蛋白。还包括参与细胞凋亡的起始、决定(decision)和降解期的其他物质。细胞凋亡调节剂的实例包括其活性、存在或浓度的改变能够在受试者中调节细胞凋亡的物质。细胞凋亡调节剂包括细胞凋亡诱导剂，例如TNF或TNF相关配体，特别是TRAMP配体、Fas/CD95配体、TNFR-1配体或TRAIL。
在一些实施方案中，本文提供的组合物和方法在动物(例如哺乳动物患者，包括但不限于人和牲畜)中用于治疗患病的细胞、组织、器官或病理症状和/或疾病状态。在这方面，多种疾病和病理适于使用本发明的方法和组合物治疗或预防。这些疾病和病症的非限制性示例性清单包括但不限于：乳腺癌(breast cancer)、前列腺癌(prostate cancer)、淋巴癌、皮肤癌、胰腺癌(pancreatic cancer)、结肠癌、黑色素瘤、恶性黑色素瘤、卵巢癌(ovarian cancer)、脑癌、原发性脑肿瘤、头颈癌(head-neck cancer)、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、肝癌、膀胱癌(bladder cancer)、非小细胞肺癌、头颈癌(head or neckcarcinoma)、乳腺癌(breast carcinoma)、卵巢癌(ovarian carcinoma)、肺癌、小细胞肺癌、维尔姆斯氏肿瘤(Wilms'tumor)、宫颈癌、睾丸癌、膀胱癌(bladdercarcinoma)、胰腺癌(pancreatic carcinoma)、胃癌、结肠癌、前列腺癌(prostaticcarcinoma)、泌尿生殖系统癌、甲状腺癌、食管癌、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、肾上腺癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、恶性胰腺胰岛瘤、恶性类癌瘤、绒毛膜癌、蕈样肉芽肿、恶性高血钙症、颈椎增生、白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL、包括B-CLL)、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、神经母细胞瘤、肉瘤例如脂肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、平滑肌肉瘤和横纹肌肉瘤、卡波西氏肉瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、软组织肉瘤例如脂肪瘤和恶性神经鞘瘤、骨肉瘤、原发性巨球蛋白血症和视网膜母细胞瘤等、T和B细胞介导的自身免疫疾病、炎性疾病、感染、过度增殖性疾病；艾滋病；退行性疾病、血管疾病等。在一些实施方案中，所治疗的癌细胞是转移性的。在其他实施方案中，所治疗的癌细胞耐受其他抗癌剂。
在一些实施方案中，本文提供的组合物和方法用于治疗表达功能性或野生型p53或p53相关蛋白的癌症。在一些实施方案中，本文提供的组合物和方法用于治疗表达MDM2或MDM2相关蛋白水平升高的癌症。
在一些实施方案中，本文提供的方法、化合物和组合物可用于治疗肉瘤患者，所述肉瘤包括例如，脂肪肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤。在一些实施方案中，本文提供的方法、化合物和组合物可用于治疗治疗软组织肿瘤患者，所述软组织肿瘤包括例如，尤因氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪瘤、恶性神经鞘瘤。在一些实施方案中，本文提供的方法、化合物和组合物可用于治疗肺癌、乳腺癌、肝癌或结肠癌患者。在一些实施方案中，本文提供的方法、化合物和组合物可用于治疗B细胞慢性淋巴细胞性白血病和急性髓细胞性白血病患者。
在一些实施方案中，适于用本文提供的组合物和方法治疗的感染包括但不限于由病毒、细菌、真菌、支原体、朊病毒等引起的感染。
在一些实施例中，提供给药有效量的本文提供的化合物和至少一种其他治疗剂的方法(所述其他治疗剂包括但不限于化疗抗肿瘤物质、细胞凋亡调节剂、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂和抗炎药物)和/或治疗技术(例如外科手术和/或放射治疗)。在一个具体实施方案中，所述其他治疗剂为抗癌剂。
很多合适的治疗剂或抗癌剂适用于本文提供的方法中。事实上，本文提供的方法包括但不限于给予多种治疗剂，例如：细胞凋亡诱导剂；多核苷酸(例如反义、核酶、siRNA)；多肽(例如酶和抗体)；生物模拟物(例如棉酚或BH3模拟物)；与Bcl-2家族蛋白例如Bax结合(例如与之寡聚或络合)的物质；生物碱类；烷化剂；抗肿瘤抗生素；抗代谢剂；激素；铂化合物；单克隆或多克隆抗体(例如与抗癌物质、毒素、防御素结合的抗体)，毒素；放射性核素；生物反应调节剂(如干扰素(例如IFN-α)和白细胞介素(如IL-2))；过继免疫治疗剂；造血生长因子、诱导肿瘤细胞分化的物质(例如，全反式维甲酸)；基因治疗试剂(例如，反义治疗剂和核苷酸)；肿瘤疫苗；血管生成抑制剂、蛋白酶抑制剂：NF-кB调节剂；抗CDK化合物；HDAC抑制剂等。治疗剂的很多其他的实例(例如化学治疗化合物)和抗癌治疗，适于与本领域技术人员已知的公开化合物共同给予。
在一些实施方案中，抗癌剂包括诱导或刺激细胞凋亡的物质。诱导或刺激细胞凋亡的物质包括例如与DNA相互作用或修饰DNA的物质，其例如通过嵌入、交联、烷化，或者破坏或在化学上修饰DNA。诱导细胞凋亡的物质包括但不限于放射(例如X射线、γ射线、UV)；肿瘤坏死因子(TNF)相关因子(例如TNF家族受体蛋白、TNF家族配体、TRAIL、针对TRAIL-R1或TRAIL-R2的抗体)；激酶抑制剂(如表皮生长因子受体(EGFR)激酶抑制剂。其他抗癌药物包括：血管内皮生长因子受体(VGFR)激酶抑制剂、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)激酶抑制剂、血小板衍生的生长因子受体(PDGFR)激酶抑制剂、Bcr-Abl激酶抑制剂(如格列卫(GLEEVEC)))；反义分子；抗体(例如，HERCEPTIN、RITUXAN、ZEVALIN和AVASTIN)；抗雌激素药物(如雷洛昔芬和他莫昔芬)；抗雄激素药物(如氟他胺、比卡鲁胺、非那雄胺、氨鲁米特、酮康唑、皮质类固醇);环氧合酶-2(COX-2)抑制剂(如塞来昔布、美洛昔康、NS-398和非甾体抗炎药(NSAID))；抗炎药物(例如布他唑立丁、地卡特隆、去氢可的松、地塞米松(dexamethasone、dexamethasone intensol、DEXONE、HEXADROL)、羟氯喹、METICORTEN、ORADEXON、ORASONE、羟布宗、PEDIAPRED、保泰松、PLAQUENIL、泼尼松龙、泼尼松、PRELONE和TANDEARIL)；和癌症化学治疗药物(例如伊立替康(CAMPTOSAR)、CPT-11、氟达拉滨(FLUDARA)、达卡巴嗪(DTIC)、地塞米松、米托蒽醌、MYLOTARG、VP-16、顺铂、卡铂、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、多柔比星、吉西他滨、硼替佐米、吉非替尼、贝伐单抗、泰索帝或紫杉醇)；细胞信号分子，神经酰胺和细胞因子；十字孢碱等。
在其他实施方案中，本文提供的组合物和方法包括一种或多种本文提供的化合物和至少一种抗过度增殖性或抗肿瘤物质，其选自烷化剂，抗代谢剂，以及天然产物(例如草药和其他植物和/或动物衍生的化合物)。
适用于本发明的组合物和方法的烷化剂包括但不限于：1)氮芥类(例如氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、马法兰(左旋沙可来新)和苯丁酸氮芥)；2)乙烯亚胺和甲基蜜胺(如六甲蜜胺和塞替派)；3)烷基磺酸盐(如白消安)；4)亚硝基脲(例如，卡莫司汀(卡氮芥)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(甲基-CCNU)；链佐星(链唑霉素))；和5)三氮烯类(例如达卡巴嗪(DTIC；二甲基三氮烯咪唑甲酰胺(dimethyltriazenoimidazolecarboxamide)))。
在一些实施方案中，适用于本发明的组合物和方法的抗代谢剂包括但不限于：1)叶酸类似物(例如甲氨蝶呤(氨甲蝶呤))；2)嘧啶类似物(例如氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶；5-FU)，氟尿嘧啶脱氧核苷(去氧氟尿嘧啶；FudR)和阿糖胞苷(cytarabine，cytosine arabinoside))；和3)嘌呤类似物(例如巯嘌呤(6-巯嘌呤；6-MP)、硫鸟嘌呤(6-硫鸟嘌呤；TG)和喷司他丁(2’-脱氧柯福霉素))。
在其他实施方案中，适用于本发明组合物和方法的化学治疗剂包括但不限于：1)长春花生物碱(例如长春碱(VLB)、长春新碱)；2)鬼臼毒素(例如依托泊苷和替尼泊苷)；3)抗生素(例如更生霉素(放线菌素D)、柔红霉素(道诺霉素；正定霉素)、多柔比星、博来霉素、普卡霉素(光辉霉素)和丝裂霉素(丝裂霉素C))；4)酶(例如L-天冬酰胺酶)；5)生物反应调节剂(例如干扰素α)；6)铂配位复合物(例如顺铂(顺式DDP)和卡铂)；7)蒽二酮类(例如米托蒽醌)；8)被取代的脲(例如羟基脲)；9)甲基肼衍生物(例如丙卡巴肼(N-甲基肼；MIH))；10)肾上腺皮质抑制剂(例如米托坦(o,p’-DDD)和氨鲁米特)；11)肾上腺皮质类固醇类(例如泼尼松)；12)黄体酮(例如羟基己酸黄体酮、醋酸甲羟孕酮和醋酸甲地孕酮)；13)他莫昔芬(例如己烯雌酚和乙炔雌二醇)；14)抗雌激素药物(例如他莫昔芬)；15)雄激素(例如丙酸睾酮和氟甲睾酮)；16)抗雄激素药物(例如氟他米特)；和17)黄体生成素释放激素类似物(例如亮丙瑞林)。
常规用于癌症治疗中的任一何溶瘤细胞剂可用于本发明组合物和方法中。例如，美国食品和药物管理局(U.S.F.D.A)保有经批准在美国使用的溶瘤细胞剂的处方。U.S.F.D.A.的国际同等机构保有相似的处方。表1显示了经批准在美国使用的示例性抗肿瘤剂的名册。本领域技术人员理解，所有在美国经批准的化学治疗剂的“产品标签”均公开了所述示例性药物经批准的适应症、剂量信息、毒性数据等。
表1
抗癌剂还包括已证实具有抗癌活性的化合物。实例包括但不限于3-AP、12-O-十四烷酰法波醇-13-乙酸酯、17AAG、852A、ABI-007、ABR-217620、ABT-751、ADI-PEG 20、AE-941、AG-013736、AGRO100、阿拉诺新、AMG706、抗体G250、抗癌肽类、AP23573、阿替莫德、APC8015、阿替莫德、ATN-161、阿曲生坦、阿扎胞苷、BB-10901、BCX-1777、贝伐单抗、BG00001、比卡鲁胺、BMS 247550、硼替佐米、苔藓抑素1、布舍瑞林、骨化三醇、CCI-779、CDB-2914、头孢克肟、西妥昔单抗、CG0070、西仑吉肽、氯苯吩嗪、磷酸考布他汀A4、CP-675,206、CP-724,714、CpG 7909、姜黄素、地西他滨、DENSPM、度骨化醇、E7070、E7389、海鞘素743、乙法昔罗、依氟鸟氨酸、EKB-569、enzastaurin、厄洛替尼、依昔舒林、芬维A胺、黄酮吡醇、氟达拉滨、氟他米特、福莫司汀、FR901228、G17DT、加利昔单抗、吉非替尼、染料木素、葡磷酰胺、GTI-2040、组氨瑞林、HKI-272、高三尖杉酯碱、HSPPC-96、hu14.18-白介素-2融合蛋白、HuMax-CD4、伊洛前列素、咪喹莫特、英夫利昔单抗、白介素-12、IPI-504、伊罗夫文、伊沙匹隆、拉帕替尼、来那度胺、来他替尼、醋酸亮丙瑞林、LMB-9免疫毒素、洛那法尼、鲁昔单抗、马磷酰胺、MB07133、MDX-010、MLN2704、单克隆抗体3F8、单克隆抗体J591、莫特沙芬、MS-275、MVA-MUC1-IL2、尼鲁米特、硝基喜树碱、二盐酸诺拉曲塞、诺瓦得士、NS-9、O6-苄基鸟嘌呤、奥利默森钠、ONYX-015、奥戈伏单抗、OSI-774、帕尼单抗、铂尔定、PD-0325901、培美曲塞、PHY906、吡格列酮、吡非尼酮、匹杉琼、PS-341、PSC 833、PXD101、吡唑并吖啶、R115777、RAD001、豹蛙酶、蝴蝶霉素类似物、rhu血管他丁蛋白、rhuMab 2C4、罗格列酮、卢比替康、S-1、S-8184、沙铂、SB-15992、SGN-0010、SGN-40、索拉非尼、SR31747A、ST1571、SU011248、辛二酰苯胺异羟肟酸、苏拉明、talabostat、他仑帕奈、他立喹达、temsirolimus、TGFa-PE38免疫毒素、沙立度胺、胸腺法新、替吡法尼、替拉扎明、TLK286、他比特啶、葡萄糖醛酸三甲曲沙、TroVax、UCN-1、丙戊酸、长春氟宁、VNP40101M、伏洛昔单抗、伏立诺他、VX-680、ZD1839、ZD6474、齐留通和唑喹达三盐酸。
对于抗癌剂和其他治疗剂更详细的阐述，本领域技术人员可参考任何指导性手册，包括但不限于：Physician's Desk Reference，以及Goodman和Gilman的"Pharmaceutical Basis of Therapeutics"，第10版，Hardman等人编辑，2002。
在一些实施方案中，本发明提供的方法包括伴随放射治疗给药一种或多种本文提供的化合物。本发明提供的方法不限于用于向动物递送治疗剂量的放射的类型、量或递送和给药系统。例如，所述动物可接受光子放射治疗，粒子束放射治疗，其他类型的放射治疗及其组合。在一些实施方案中，使用线性加速器对动物进行放射。在其他实施方案中，使用伽马刀进行所述放射。
放射源可在动物体外或体内。外部放射治疗最为常见，且其涉及通过皮肤将高能放射导向肿瘤位点，其使用，例如，线性加速器。尽管放射束定位于肿瘤位点，仍几乎不可能避免正常、健康的组织暴露于其中。然而，外部放射通常可很好地被动物耐受。内部放射治疗涉及在体内肿瘤部位或其附近植入放射-发射源，例如珠、线、丸、胶囊、颗粒等，并且包括特异于靶癌细胞的递送系统的使用(例如使用连接至癌细胞结合配体的颗粒)。所述植入可在治疗后移除，或无活性地留在体内。内部放射治疗的类型包括但不限于近距离放射疗法，间质照射，腔内照射，放射免疫治疗等。
动物可任选地接受放射增敏剂(例如甲硝唑、米索硝唑、动脉内溴尿嘧啶脱氧核苷(Budr)、静脉内碘代脱氧尿嘧啶(IudR)、硝基咪唑、5-取代的-4-硝基咪唑、2H-异吲哚二酮、[[(2-溴乙基)-氨基]甲基]-硝基-1H-咪唑-1-乙醇、硝基苯胺衍生物、DNA-亲和性缺氧选择性细胞毒素、卤代DNA配体、1,2,4-苯并三嗪氧化物、2-硝基咪唑衍生物、含氟硝基唑衍生物、苯甲酰胺、烟酰胺、吖啶-插入剂、5-硫代四唑衍生物、3-硝基-1,2,4-三唑、4,5-二硝基咪唑衍生物、羟基化德克萨斯卟啉(texaphrin)、顺铂、丝裂霉素、替拉扎明、亚硝基脲、巯嘌呤、甲氨喋呤、氟尿嘧啶、博来霉素、长春新碱、卡铂、表柔比星、多柔比星、环磷酰胺、长春地辛、依托泊苷、紫杉醇、热(过热)等)、辐射防护药物(例如巯乙胺、氨基烷基二氢磷硫酰、氨磷汀(WR 2721)、IL-1、IL-6等)。放射增敏剂增强了肿瘤细胞的杀灭。辐射防护药物保护健康组织免遭放射的有害作用。
可将任何类型的放射给予动物，只要放射的剂量被动物所耐受，且无难以接受的不良副作用。放射治疗合适的类型包括例如，离子化(电磁)放射治疗(例如X射线或γ射线)或粒子束放射治疗(例如高线能量放射)。离子化放射定义为以下的放射：包含具有足以产生离子化作用(即得到或失去电子)的能量的颗粒或光子(如以下文献公开：例如，U.S.5,770,581，在此整体引入作为参考)。放射的作用可至少部分地通过临床医生来控制。在一个实施方案中，对放射的剂量进行分割，以达到最大靶细胞暴露和毒性降低。
在一个实施方案中，所述给予动物的放射总剂量为约.01戈瑞(Gy)至约100Gy。在另一实施方案中，在整个治疗过程中给予约10Gy至约65Gy(例如约15Gy、20Gy、25Gy、30Gy、35Gy、40Gy、45Gy、50Gy、55Gy或60Gy)。尽管在一些实施方案中在一天的时间里可给予完整剂量的放射，更理想的是将总剂量分割并在数日内给予。有利地，放射治疗经至少约3天的时间给予，例如至少5、7、10、14、17、21、25、28、32、35、38、42、46、52或56天(约1-8周)。因此，每天放射剂量将包含大约1-5Gy(例如约1Gy、1.5Gy、1.8Gy、2Gy、2.5Gy、2.8Gy、3Gy、3.2Gy、3.5Gy、3.8Gy、4Gy、4.2Gy或4.5Gy)或1-2Gy(例如1.5-2Gy)。每天放射剂量应足以诱导靶细胞的破坏。若将该周期延长，在一个实施方案中，放射不会每天给予，从而使得动物得以休息，并实现所述治疗作用。例如，对于每周的治疗，放射有利地给予连续5天和不给予2天，从而每周休息2天。然而，根据动物的应答性和任何潜在的副作用，放射可给予1天/周、2天/周、3天/周、4天/周、5天/周、6天/周或给予全部7天/周。放射治疗可在治疗周期中的任何时间开始。在一个实施方案中，放射在第1周或第2周开始和在治疗周期中余下的时间内给予。例如，在治疗为期6周的治疗周期中，在第1-6周或第2-6周给予放射，以治疗例如实体瘤。或者，在治疗为期5周的治疗周期中，在第1-5周或第2-5周给予放射。然而，这些示例性放射治疗给予时间表并非意在限制本文提供的方法。
抗微生物治疗剂可用作与本文提供的化合物组合的治疗剂。任何能够杀灭、抑制或减弱微生物机体的物质，以及被认为具有所述活性的任何物质均是可用的。抗微生物剂包括但不限于天然和合成的抗生素、抗体、抑制蛋白(例如防御素)、反义核苷酸、膜破坏剂等，或单独使用或组合使用。事实上，任何类型的抗生素均是可用的，包括但不限于抗菌剂量、抗病毒剂、抗真菌剂等。
在本文提供的方法的一些实施方案中，在一种或多种以下条件下将一种或多种本文提供的化合物和一种或多种治疗剂或抗癌剂给予动物：以不同周期、经不同时间、以不同浓度、通过不同给予途径等等。在一些实施方案中，在治疗剂或抗癌剂之前给予所述化合物，例如在给予治疗剂或抗癌剂之前0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小时，1、2、3、4、5或6天，或1、2、3或4周给予所述化合物。在一些实施方案中，在治疗剂或抗癌剂之后给予所述化合物，例如在给予所述抗癌剂之后0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小时，1、2、3、4、5或6天，或1、2、3或4周给予所述化合物。在一些实施方案中，根据不同时间表并行给予所述化合物与所述治疗剂或抗癌剂，例如每天给予所述化合物，同时每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次给予治疗剂或抗癌剂。在其他实施方案中，给予所述化合物每周一次，同时每天、每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次给予治疗剂或抗癌剂。
在一些实施方案中，本文提供的组合物包含有效量的一种或多种本文提供的化合物，以达到其预定目的。尽管个体需要变化，各成分有效量最佳范围的确定属于本领域技术。通常，相对于接受所述响应于细胞凋亡所诱导病症的治疗的动物的体重，所述化合物每天可以以0.0025至50mg/kg的口服剂量给予哺乳动物，例如人，或给予等量的其药学上可接受的盐，在一个实施方案中，口服给予约0.01至约25mg/kg以治疗、改善或防止所述病症。对于肌内注射，剂量通常约为口服剂量的一半。例如，合适的肌内剂量应为约0.0025至约25mg/kg，或约0.01至约5mg/kg。
单位口服剂量可包含约0.01至约1000mg，例如约0.1至约100mg的所述化合物。所述单位剂量可每天给予一次或多次，以一个或多个各包含约0.1至约10mg的片剂或胶囊，方便地约0.25至50mg的所述化合物或其溶剂合物。
在局部制剂中，所述化合物可以以每克载剂约0.01至100mg的浓度存在。在一个实施方案中，所述化合物以约0.07-1.0mg/ml，例如约0.1-0.5mg/ml的浓度存在，且在一个实施方案中，以约0.4mg/ml的浓度存在。
除了给予粗化学品形式的所述化合物，本文提供的化合物可作为药用制剂的一部分给予。在一些实施方案中，所述药用制剂能包括一种或多种药学上可接受的载剂、赋形剂和/或辅剂。在一些实施方案中，所述一种或多种载剂、赋形剂和辅剂促进了将所述化合物制成可药用制剂的过程。所述制剂，特别是给予可口服或局部给予、用于一种给予方式(例如片剂、糖衣剂、缓释锭剂和胶囊、口腔清洗剂和口腔洗剂、凝胶剂、液体混悬剂、洗发剂、发胶、洗发香波以及能够直肠给予的制剂(例如栓剂)，以及适合通过静脉内输注、注射、局部或口服给予的溶液)的制剂，含有约0.01至99%的活性化合物，在一个实施方案中含有约0.25至75%的活性化合物，以及一种或多种载剂、赋形剂和/或辅剂。
本文提供的药物组合物可给予可能经历本文提供的化合物的有益作用的任何患者。所述患者首先是哺乳动物，例如人，尽管本文提供的方法和组合物并非意在受此限制。其他患者包括牲畜(牛、羊、猪、马、狗、猫等)。
所述化合物及其药物组合物可通过达到其预定目的的任何手段给予。例如，可通过肠胃外、皮下、静脉内、肌内、腹腔内、经皮、口含、鞘内、颅内、鼻内或局部途径给予。或者，可通过口服途径并行给予。所给予剂量将依赖于受者的年龄、健康和体重，并行治疗(若存在)的类型，治疗频率和所需效果的性质。
本文提供的药用制剂通过常规的混合，制粒，制糖衣，溶解或冻干操作的手段制备。因此，用于口服的药用制剂可通过以下操作获得：将活性化合物与固体赋形剂混合，在加入合适的辅剂后，若需要或必要，任选地研磨所得混合物和处理所述混合物颗粒，以得到片剂或糖衣剂核芯。
合适的赋形剂具体为：填充剂(例如糖类，例如乳糖或蔗糖、甘露醇或山梨醇，纤维素制剂和/或磷酸钙，例如磷酸三钙、磷酸氢钙)，以及粘合剂(如淀粉糊，其使用例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉，明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮)。若需要，可加入崩解剂，例如上述淀粉以及羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐，如海藻酸钠。辅剂可为合适的流动调节剂和润滑剂。合适的辅剂包括例如，二氧化硅、滑石、硬脂酸或其盐，例如硬脂酸镁或硬脂酸钙和/或聚乙二醇。糖衣剂核芯提供有适当的包衣，若需要，则该包衣耐受胃液。出于该目的，可使用浓糖溶液，其可任选地含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛，漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了制成耐受胃液的包衣，使用合适的纤维素制剂溶液，例如邻苯二甲酸醋酸纤维素或邻苯二甲酸羟丙基甲基-纤维素。染料或色素可加入所述片剂或糖衣剂包衣中，例如用于鉴别或为了表征活性化合物剂量的组合。
其他可口服使用的药用制剂包括明胶制成的推入适配胶囊(push-fitcapsule)，以及明胶和增塑剂(例如甘油或山梨糖醇)制成的密封软胶囊。所述推入适配胶囊可含有颗粒形式的所述活性化合物，其可与填充剂例如乳糖，粘合剂例如淀粉和/或润滑剂例如滑石或硬脂酸镁以及任选地稳定剂混合。在软胶囊中，所述活性化合物在一个实施方案中溶解或混悬于合适的液体，例如脂肪油或液状石蜡中。此外可加入稳定剂。
可以用于直肠给药的药用制剂包括例如由一种或多种所述活性化合物与栓剂基质组成的栓剂。合适的栓剂基质为例如天然或合成的甘油三酯或石蜡烃。此外，也可能使用由所述活性化合物与基质的组合组成的明胶直肠胶囊。可能的基质材料包括例如，液体甘油三酯、聚乙二醇或石蜡烃。
适合肠胃外给药的制剂包括水溶形式的所述活性化合物的水溶液，例如，水溶性盐和碱溶液。此外，可给药所述活性化合物的混悬液作为适当的油性注射混悬液。合适的亲脂溶剂或载体包括脂肪油，例如，芝麻油，或合成的脂肪酸酯，例如，油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400。水性注射混悬液可含有增加混悬液的粘度的物质，包括例如，羧甲基纤维素钠，山梨糖醇和/或葡聚糖。任选地，所述混悬液也可含有稳定剂。
本文提供的局部组合物在一个实施方案中通过选择适当的载剂而制成油、霜剂、洗剂、软膏剂等。合适的载剂包括植物油或矿物油、白凡士林(白软石蜡)、支链脂肪或油、支链脂肪和高分子量醇(大于C12)。所述载剂可为所述活性成分可溶于其中的载剂。也可包括乳化剂、稳定剂、湿润剂和抗氧化剂，以及需要时也可包括赋予颜色或气味的物质。另外，经皮穿透促进剂可用于这些局部制剂中。所述促进剂的实例见于美国专利No.3,989,816和4,444,762中。
软膏剂可通过将所述活性成分在植物油(例如杏仁油)中的溶液与热的软石蜡混合并使所述混合物冷却而制成。所述软膏剂的一个典型实例是包括约30重量%的杏仁油和约70重量%的白软石蜡的软膏剂。洗剂可方便地通过将所述活性成分溶解于合适的高分子量醇(例如丙二醇或聚乙二醇)中而制成。
以下本发明提供的化合物、组合物和方法实例是示例性的，但并非限制性。为适应临床治疗中经常遇到的条件和参数而进行的其他合适的改变和变化，对本领域技术人员而言是显而易见的，并且也在本文提供的方法、化合物和组合物的精神和范围内。
MDM2抑制剂
美国专利No.7,759,383B2和7,737,174B2公开了MDM2抑制剂包括MI-219(AT-219)、MI-319和MI-147(图表1)。
图表1
为进一步评价MI-219、MI-147和MI-319作为临床研究中潜在的抗癌药物候选者，进行一系列的实验以评价它们的代谢和药代动力学性质。
用人、大鼠和狗的微粒体体外培养MI-219、MI-147和MI-319，显示这些三个化合物中的每一个的浓度均迅速下降(表2)。这些数据表明MI-219、MI-147和MI-319在体外被大鼠、狗和人微粒体迅速代谢。
雄性Sprague Dawley大鼠中MI-219的药代动力学研究(PK)显示MI-219在口服上是生物可利用的(表3-4)。例如，以25mg/kg的剂量口服给药MI-219之后，MI-219的Cmax(最大血浆浓度)和Tmax的平均±SD值分别为3751.78±1067.86μg/L，0.58±0.38小时；MI-219AUC(0-∞)(曲线下面积)和半衰期(T1/2)的平均±SD值分别为7689.94±325.86hr*μg/L和1.43±0.09小时。MI-219的血浆浓度迅速下降，从1小时的时间点的2957ng/ml下降到4小时的时间点的224ng/ml，再下降到6小时的时间点的103ng/ml。使用25mg/kg口服剂量和5mg/kg IV剂量作为参照，大鼠中所计算的MI-219口服生物利用度为65.45±2.77%。
ICR小鼠中MI-219的PK研究显示，MI-219在小鼠中口服上是生物可利用的(表5-7)。以50mg/kg的口服剂量，MI-219在2小时的时间点达到8469ng/ml的最大浓度(Cmax)且具有AUC为8469±2381hr*μg/L。在3小时、5小时和9小时，MI-219的浓度分别为3077±2296，378±128和121±133ng/ml。小鼠中所计算的MI-219的口服生物利用度(F)为54.9±19.0%。
比格犬中MI-219的PK研究显示，在狗中MI-219在口服上是生物可利用的(表8-11)。以10mg/kg的口服剂量，MI-219在1小时的时间点达到2893±726ng/ml的最大浓度(Cmax)且具有AUC为7947±2396hr*μg/L。在2、3、4、6和8小时的时间点，MI-219的浓度分别为1500±599，759±314，483±152，327±147，178±92ng/ml。狗中所计算的MI-219的口服生物利用度(F)为22.8%。
短尾猴中MI-219的PK研究显示，在猴中MI-219在口服上是生物可利用的(表12-13)。以50mg/kg的口服剂量，通过曲线拟合可知MI-219在3.3小时达到1257±837的最大浓度(Cmax)且具有AUC为8199±5717hr*μg/L。在4、6、8和24小时的时间点，MI-219的浓度分别为1121.42±951.73，796.07±703.14，341.82±273.89和17.60±7.21。猴中所计算的MI-219的口服生物利用度(F)为13.89%。
对具有SJSA-1和LnCAP人异种移植物肿瘤的小鼠口服给药MI-219，以200-300mg/kg的每天一次或两天一次的剂量持续2周时间，事实上在肿瘤生长的抑制方面是有效的(Shangary等人2008，PNAS)。SJSA-1细胞源自原发性肿瘤或诊断具有股骨原发性多源肉瘤的患者。SJSA-1细胞隐藏着MDM2基因的扩增。LnCAP细胞是对雄激素敏感的人前列腺癌细胞，其源自诊断具有前列腺癌的患者的转移性肿瘤。这些数据表明MI-219为口服活性MDM2抑制剂。
这些代谢和PK研究也表明，MI-219的代谢是迅速的。因此，MI-219为改善代谢和PK参数而进行的其他化学修饰可生成新的MDM2抑制剂，其作为以人MDM2和p53激活为靶点的治疗人癌症和其他病症的更好的候选药物。
本文提供了新的抑制p53-MDM2相互作用的化合物。本文提供的化合物尤其具有改进的代谢稳定性和/或药代动力学性质和口服生物利用度。
表2.MI-147、MI-219和MI-319的微粒体稳定性研究
表3.静脉内和口服给药MI-219后，雄性大鼠中MI-219的血浆浓度
BLQ：低于定量限；SD：标准差；NA：不适用
表4.静脉内和口服给药MI-219后，大鼠中MI-219所选择的药代动力学参数
NA：不适用
表5.小鼠中以50mg/kg单次口服给药后，血浆样品中MI-219所测得的浓度
表6.小鼠中以10mg/kg单次静脉内给药后，血浆样品中MI-219所测量的浓度
  时间   组4-7   组4-9   组4-11   平均±SD
  5分钟   14196   21792   18135   18041±3799
  15分钟   6030   6397   5042   5823±701
  30分钟   2628   4347   3735   3570±871
  45分钟   1519   2225   1449   1731±429
  1小时   1061   1285   1322   1223±141
  2小时   689   325   1328   781±508
  3小时   108   489   150   249±209
  5小时   78.5   52   38.6   56.4±20.3
  9小时   13.4   37.2   13.9   21.5±13.6
  24小时   BLQ   BLQ   BLQ
表7.小鼠中口服给药(50mg/kg)后，MI-219的PK参数
表8.以2.0mg/kg静脉给予比格犬后，MI-219的血浆浓度(ng/ml)。
表9.以10mg/kg口服给予比格犬后，MI-219的血浆浓度(ng/ml)。
  狗编号   时间(小时)
  0   0.5   1   2   3   4   6   8   12   24
  1   BLQ   2101   3560   2165   1095   603   335   216   54.68   4.05
  2   BLQ   1842   2119   1002   474   312   177   72.9   20.0   3.78
  3   BLQ   3323   2999   1333   708   535   470   245   63.8   4.48
  平均   2422   2893   1500   759   483   327   178   46.2   4.10
  SD   791   726   599   314   152   147   92   23.1   0.35
  CV%   32.7   25.1   40.0   41.3   31.5   44.8   51.8   50.0   8.6
  最小值   1842   2119   1002   474   312   177   72.9   20.0   3.78
  最大值   3323   3560   2165   1095   603   470   245   63.8   4.48
表10.以2.0mg/kg静脉内给予比格犬后，MI-219的药代动力学参数
  狗编号   T1/2   AUC0-t   AUC0-∞   MRT   Vss   CL
  小时   ng·h/ml   ng·h/ml   小时   ml/kg   ml/h/kg
  1   4.32   8490   8512   1.22   286   235
  2   3.00   3884   3889   1.81   929   514
  3   4.36   6272   6307   1.87   591   317
  平均   3.90   6216   6236   1.63   602   355
  SD   0.78   2303   2312   0.36   322   144
  最小值   3.00   3884   3889   1.22   286   235
  最大值   4.36   8490   8512   1.87   929   514
  CV%   19.9   37.1   37.1   22.0   53.5   40.4
表11.以10mg/kg口服给予比格犬后，MI-219的药代动力学参数
  狗编号   T1/2   Tmax   Cmax   AUC0-t   AUC0-∞   MRT   F
  小时   小时   ng/ml   ng·h/ml   ng·h/ml   小时   %
  1   2.77   1.0   3560   9665   9681   3.09   22.8
  2   3.03   1.0   2119   5210   5226   2.71   26.8
  3   2.81   0.5   3323   8967   8985   3.33   28.6
  平均   2.87   0.83   3001   7947   7964   3.04   26.1
  SD   0.14   0.29   773   2396   2396   0.31   3.0
  最小值   2.77   0.5   2119   5210   5226   2.71   22.8
  最大值   3.03   1.0   3560   9665   9681   3.33   28.6
  CV%   4.9   35   25.8   30.2   30.1   10.2   11.5
表12.静脉内和口服给予后，雄性短尾猴中MI-219的血浆浓度
BLQ：低于定量限；SD：标准差；NA：不适用
表13.静脉内和口服给予雄性短尾猴后，MI-219所选择的药代动力学参数
NA：不适用
在体外使用人和大鼠微粒体、在体内使用大鼠进行详细的研究以确定MI-219的代谢。
代谢物鉴定
样品制备：
肝微粒体培养中的代谢物：在37°C，在磷酸盐缓冲液中将MI-219(或其他化合物)与混合肝微粒体共同培养。在0.4ml的混合物溶液中，所述化合物HLM、β-NADPH、磷酸盐缓冲液和MgCl2的最终浓度分别为20-50μM、1mg/ml、1mM、0.1M和3.3mM。MeOH在该培养混合物的百分比保持低于0.2%(v/v)。样品培养60分钟，且反应用1.2ml的冰冷却的乙腈终止以沉淀蛋白。在蛋白沉淀后通过使用煮沸过的微粒体(100°C煮沸5分钟)或加入内标MI-219制备两种不同的对照。随后样品以14,000rpm离心5分钟。上清液通过LC/MS/MS分析。
大鼠血浆中的代谢物：以5mg/kg的剂量将MI-219静脉内注射入雄性Sprague-Dawley大鼠(n=6，重量范围为200-220g)。以5mg/kg的剂量静脉内注射MI-219。在注射后0.166、0.5、1、2、4、6、8和24小时，在轻微乙醚麻醉下，从大鼠眼眶后静脉丛将血液样品收集入含肝素作为抗凝剂的微量离心管中。通过在4°C以13000rpm离心血液5分钟收集血浆，并在-80±10°C储存直到分析。
用LC-MS/MS筛选和表征代谢物：将MI-219和其他化合物注射入质谱仪，以获得它们的MS、MS2和MS3谱。基于其质谱的异同，提出了质子化的MI-219和一些先导化合物可能的裂解途径。选择三个特征性产物离子以产生用于通过使用代谢物ID软件(Applied Biosystems)进行MRM筛选的240个离子通道，其包括40普通的生物转化过程。为寻找所有的代谢物，还使用两种其他扫描模式，即EMS全扫描和前体扫描。只有在样品中检测到并且不存在于所有对照样品中的成分才被认为是可能的代谢物。为鉴定可能的代谢物，将样品和对照进样于LC-MS中进行EPI和MS3扫描，以获得它们的MS2和MS3谱。基于代谢物的MS2、MS3谱和MI-219和其他化合物的所提出的裂解途径来表征代谢物。
图13A-D显示质子化的MI-219、MI-142、MI-63和MI-708B的MS/MS谱。基于主要产物离子的这些MS/MS谱和MS3谱，例如m/z 496、419、363、320、285、188，提出了质子化的MI-219的裂解途径(反应方程式5)。所提出裂解的支持性依据通过追踪MI-219衍生物的官能团获得。产物离子的质量偏移的存在抑或不存在提供了产物离子的结构信息。
反应方程式5.提出的质子化的MI-219的裂解途径
图14A-B显示去质子化的MI-219和MI-142的MS/MS谱。两个化合物的MS/MS谱中均检测到了产物离子m/z 306。MI-219的m/z 243的产物离子和MI-142的m/z 257的产物离子表明，MI-219的m/z 306和243的产物离子是通过吡咯烷环的裂解而产生的。暂时通过将它们的主要产物离子与MI-219的主要产物离子比较来阐释MI-219的代谢物。
图15B显示M1的MS/MS谱。m/z 419、363、320和285的存在表明代谢位点并不在母核结构上。产物离子检测为m/z 186和104，其相比于MI-219的m/z 188和106具有2Da的质量偏移，表明去氢化发生在侧链上。为确证M1的结构，通过氧化MI-219的任一羟基来合成两种酮化合物。发现这两种化合物是可互变的。图15A和15C显示，所合成的化合物表现出相同的HPLC保留时间和质谱图，表明M1是源自MI-219的一个羟基的氧化。
图16显示大鼠中MI-219和M1的血浆浓度。这两种化合物的消除速率相似。
除了M1，在色谱图上在4.76分钟检测到分子量为567Da的另一代谢物(M2)。图17显示了质子化的M2(A)和去质子化的M2(B)的MS/MS谱。M2显示相比于MI-219的质量偏移为16Da，表明该生物转化可能是羟基化。图17A中，不存在m/z 419和320表明该羟基化发生于母核结构上。图17B中m/z 306和259的存在表明，该羟基化发生于MI-219的m/z 243部分。因此，可推断该羟基化发生于3,3-二甲基丁-1-胺部分上。从m/z 568失去116Da变成m/z 452是由于羟基化的3,3-二甲基丁-1-胺基团的消除。该116Da基团的失去，在其他MI-219类似物例如MI-773、MI-519-63和MI-519-64的羟基化代谢物中也被检测到，这将在下文中讨论。预期胺的这种羟基化将促进N-C键的均裂。因此，该羟基位于吡咯烷环的胺上。
除了M1和M2，对人肝微粒体培养中的其他6个MI-219的代谢物也进行了表征。它们的可能结构、色谱保留时间、特征性产物离子和峰面积列于表14中。
表14.人肝微粒体培养中的MI-219的代谢物
因此建立了代谢研究，其中MI-219的原发代谢位点在其尾部。另外，由于其他两种有希望的MDM2抑制剂(MI-147和MI-319)也含有相同的二醇尾部，它们的尾部也容易被快速代谢。本文提供的化合物包括具有不同尾部的新的MDM2抑制剂，其可具有更佳的代谢稳定性。此外，出于药物研发的目的，高度需要获得代谢稳定性提高的并且口服生物利用度良好的新的MDM2抑制剂。
对“二醇”尾部进行直接修饰，这使得产生一系列新化合物，例如MI-519-24、MI-519-28、MI-519-29、MI-519-31和MI-758。结合实验显示这些新类似物以良好的亲和性结合于MDM2(表19A)。另外，它们也有效地在具有野生型p53的肿瘤细胞系中抑制细胞生长，并且相对于具有突变或缺失p53的肿瘤细胞系显示出特异性，这与它们的作用机理相一致。
微粒体稳定性研究显示MI-758、MI-519-24、MI-519-28和MI-519-29在大鼠肝微粒体中相对于MI-219具有提高的稳定性。MI-758和MI-519-28在人肝微粒体中相对于MI-219也具有提高的稳定性。这些数据表明对于相同的化合物，该微粒体稳定性在大鼠和人微粒体中可能颇为不同(表15)。
表15.MDM2抑制剂的微粒体稳定性研究。使用相同批次的大鼠或人肝微粒体一起评价这些化合物的微粒体稳定性
还研究了包含不同“尾部”基团的类似物(图表2)，以进一步检验何种类型的尾部在大鼠或人肝微粒体中是稳定的。对于这些类似物的微粒体稳定性数据见于表16中。微粒体稳定性数据显示MI-122和MI-126相对于MI-219具有改善的大鼠微粒体稳定性。
图表2
表16.MDM2抑制剂在大鼠肝微粒体中的微粒体稳定性
基于改善的微粒体稳定性，设计并合成了一系列新的类似物(图表3)。微粒体稳定性测试显示MI-519-40、MI-519-43和MI-763相对于MI-219具有改善的微粒体稳定性，而一些其他类似物相对于MI-219具有相当的或较低的微粒体稳定性(表17)。
图表3
表17.先前合成的MDM2抑制剂在大鼠肝微粒体中的微粒体稳定性
由于高度需要获得口服可生物利用的化合物，因此评价了几种MDM2抑制剂在大鼠中的药代动力学性质。数据见于表18中。不巧的是，相对于MI-219具有改善的微粒体稳定性的MI-122、MI-126、MI-519-24、MI-519-28和MI-519-29，在大鼠中的口服药代动力学参数比AT-219差得多。一个例外是MI-758，其显示了良好的口服生物利用度和药代动力学参数。这些数据表明，设计口服给药时微粒体稳定性改善且药代动力学性质良好的MDM2抑制剂是比较困难的。有趣的是，相比MI-219具有较差微粒体稳定性的MI-225，却具有良好的口服生物利用度。
表18.MDM2抑制剂在雄性大鼠中口服给药的药代动力学参数
基于这些数据，为了使MDM2抑制剂实现良好的口服生物利用度，优选电中性的“尾部”。另外，MI-225实现了良好的口服生物利用度，尽管其具有比MI-219差的微粒体稳定性。因此，制备了许多包含连接有羟基作为尾部的4-、5-和6-元环的化合物。
生物学测试显示，羟基的构型对于细胞活性起到了意想不到的重要作用。例如，在多种具有野生型p53的癌细胞系细胞生长的抑制方面(表19A)，MI-519-60比其差向异构体MI-519-63更有效力，且MI-519-64比其差向异构体MI-519-65更有效力。
微粒体稳定性研究显示，尽管在人和大鼠肝微粒体中MI-519-51的稳定性比MI-219差，然而在人肝微粒体中MI-773比MI-219更稳定且MI-519-63具有与MI-219相当的微粒体稳定性(表21-24)。
对MI-519-51和MI-773进行了药代动力学研究，且数据见于表25-26中。PK数据显示，尽管在静脉内和口服途径给药中MI-519-51具有比MI-219差的总体PK参数，然而在静脉内和口服途径给药中MI-773具有比MI-219改善的PK参数。例如，在两种给药途径中，MI-773的AUC值比相同剂量的MI-219高两倍。这些数据表明，MI-773在大鼠静脉内和口服途径给药中具有良好的药代动力学分布，且具有良好的口服生物利用度。另外，MI-519-51和MI-773的药代动力学参数的主要不同是不能根据它们的化学结构预测的。
为了促进新的MDM2抑制剂的设计，以进一步提高它们的总体PK分布，对MI-773和MI-519-63进行了代谢研究。
表征了MI-773在人肝微粒体中培养的主要代谢物。图18A-D显示质子化的MI-773和MI-773的三个代谢物(M1、M2和M3)的MS/MS谱。如M1和M2的MS/MS谱所示，m/z 419和320的存在表明去氢化和羟基化并不发生于母核结构上。m/z 114(相对于质子化的MI-773的m/z 116质量偏移为2Da)的存在表明，代谢位点在环己烷侧链上。图表4显示MI-773和M1的化学结构。
图表4.提出的M1的化学结构
研究了MI-519-63在人肝微粒体中培养的生物转化途径。在质子化的MI-519-63和M1的MS/MS谱中(图19A-C)均检测到m/z419、363、320和285，表明去氢化发生于环丁烷侧链上，其通过M1的m/z112的产物离子(相对于MI-519-63的m/z114的产物离子显示质量偏移为2Da)的检测而进一步确定。M2的MS/MS谱显示了与MI-773-M3和MI219-M2的MS/MS谱十分相似的图样。推测该羟基化发生于吡咯烷环的胺上。提出的MI-519-63的生物转化见于图表5中。
图表5.MI-519-63在人肝微粒体中培养的生物转化途径
本文提供的化合物包括螺-吲哚酮MDM2抑制剂，其基于MI-773和MI-519-63的这些代谢研究而设计。
结合和细胞研究显示，尽管MI-519-64和MI-519-65高亲和性地结合至人MDM2蛋白并且有效地抑制具有野生型p53的癌细胞系的癌细胞生长，MI-519-64比MI-519-65有效数倍。
微粒体稳定性研究显示MI-519-64相对于MI-519-63(表22-24)具有改善的微粒体稳定性。
由于MI-773和MI-519-63中的羟基能够被代谢为酮，研究表明用磺酰胺基替换该羟基是产生具有提高的微粒体稳定性和/或良好的口服生物利用度的MDM2抑制剂的一种手段(参见MI-771和MI-772)。
结合和细胞研究显示，尽管MI-771和MI-772均高亲和性地结合至人MDM2蛋白并且有效地抑制具有野生型p53的癌细胞系的细胞生长，MI-772比MI-771有效数倍。
微粒体稳定性研究显示MI-772十分稳定，比MI-773以及MI-219稳定得多(表21和23)。令人吃惊的是，MI-771具有很差的微粒体稳定性(表21和23)。MI-772及其差向异构体MI-771的微粒体稳定性数据显示，-NHSO2Me基团的构型对这些化合物的微粒体稳定性具有意想不到的实质性影响。
大鼠中的药代动力学研究显示，MI-772在静脉内和口服途径给药的大鼠中具有较长的半衰期(表25和26)，且具有适中的口服生物利用度。与之相比，在静脉内和口服途径给药中，MI-771具有非常差的药代动力学分布。因此，MI-771和MI-772中-NHSO2Me基团的构型对于它们的药代动力学分布具有实质性影响。
实施例1
化合物的分析数据
MI-219-M1(b)-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.72(d，J=8.5Hz，1H)，7.32-7.21(m，3H)，7.08(d，J=7.7Hz，1H)，6.87(d，J=6.0Hz，1H)，5.25(d，J=11.2Hz，1H)，4.50-4.47(m，1H)，4.11(d，J=11.2Hz，1H)，4.05-3.97(m，2H)，3.67-3.38(m，2H)，2.61-2.56(m,2H)，1.92(dd，J=15.5，8.2Hz，1H)，1.20(dd，J=15.5，2.0Hz，1H)，0.92(s，9H)；MS(ESI)m/z550[M+H]+。
MI-519-24-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.70(m，1H)，7.31-7.02(m，4H)，6.88-6.83(m，1H)，5.28(d，J=11.3Hz，1H)，4.48-4.45(m，1H)，4.18-4.13(m，1H)，3.75-3.72(m，2H)，3.36-3.31(m，1H)，3.05-3.03(m，1H)，2.83-2.76(m，1H)，1.92(dd，J=15.4，8.4Hz，1H)，1.65-1.53(2H)，1.36(s，9H)，1.17(d，J=15.4Hz，1H)，0.92(s，9H)；MS(ESI)m/z607[M+H]+。
MI-519-27-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.68(d，J=8.5Hz，1H)，7.32-7.20(m，3H)，7.08(d，J=7.7Hz，1H)，6.87(d，J=6.0Hz，1H)，5.20(d，J=11.2Hz，1H)，4.38(d，J=7.8Hz，1H)，4.24-4.20(m，2H)，4.08(d，J=11.2Hz，1H)，2.19-2.12(m，1H)，1.90-1.70(m，3H)，1.53-1.48(m，2H)，1.39-1.31(m，1H)，1.20-1.16(m，1H)，0.91(s，9H)；MS(ESI)m/z548[M+H]+。
MI-519-29-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.70(d，J=8.5Hz，1H)，7.33-7.21(m，3H)，7.09(d，J=7.6Hz，1H)，6.87(d，J=6.0Hz，1H)，5.27(d，J=11.2Hz，1H)，4.56(s，1H)，4.46-4.44(m，1H)，4.15(d，J=11.2Hz，1H)，3.75-3.65(4H)，3.42-3.28(m，2H)，3.15(m，3H)，2.30-2.05(m，2H)，1.90(dd，J=15.4，8.5Hz，1H)。
MI-519-30-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.55(d，J=8.7Hz，1H)，7.23-7.14(m，2H)，7.08(s，1H)，7.02-6.99(m，1H)，6.85(d，J=6.2Hz，1H)，4.87(d，J=11.0Hz，1H)，4.27-4.24(m，1H)，4.11-4.06(m，1H)，3.50-3.47(m，1H)，3.40-3.32(m，2H)，3.19-3.16(m，1H)，1.58-1.48(m，3H)，1.12-1.04(m，4H)，0.92(s，9H)；MS(ESI)m/z566[M+H]+。
MI-519-35-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.68(d，J=8.5Hz，1H)，7.31-7.20(m，3H)，7.10-7.08(m，1H)，6.86(d，J=6.0Hz，1H)，5.26(d，J=11.2Hz，1H)，5.10-5.03(m，1H)，4.50(m，1H)，4.40-4.37(m，1H)，4.16(d，J=11.2Hz，1H)，3.63-3.51(m，4H)，3.44-3.32(m，3H)，2.21-2.18(m，1H)，2.01-1.95(m，1H)，1.89(dd，J=15.4，8.6Hz，1H)，1.18-1.03(m，1H)，0.92(s，9H)；MS (ESI)m/z577[M+H]+。
MI-519-36-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.53(m，1H)，7.27-7.17(m，2H)，7.07(s，1H)，7.00-6.98(m，1H)，6.86(d，J=6.2Hz，1H)，4.98(d，J=12.4Hz，1H)，4.45-4.41(m，1H)，4.10(d，J=12.4Hz，1H)，3.85-3.81(m，1H)，3.28-3.22(m，1H)，3.04-2.96(m，1H)，2.33-2.29(m，1H)，1.74(dd，J=15.2，7.3Hz，1H)，1.64-1.51(m，2H)，1.30-1.21(m，3H)，0.90(s，9H)；MS(ESI)m/z578[M+H]+。
MI-519-37-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.71(d，J=8.5Hz，1H)，7.33-7.22(m，3H)，7.08(d，J=7.6Hz，1H)，6.87(d，J=6.0Hz，1H)，5.26(d，J=11.3Hz，1H)，4.49-4.46(m，1H)，4.10(d，J=11.3Hz，1H)，3.85-3.78(m，2H)，3.33-3.22(m，1H)，3.00-2.93(m，1H)，2.31-2.28(m，1H)，1.92(dd，J=15.5，8.2Hz，1H)，1.60-1.52(m，2H)，1.28-1.18(m，3H)，0.92(s，9H)；MS(ESI)m/z578[M+H]+。
MI-519-41-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.68(d，J=8.5Hz，1H)，7.33-7.24(m，3H)，7.10(d，J=7.7Hz，1H)，6.87(d，J=6.0Hz，1H)，5.28(d，J=11.2Hz，1H)，4.44(m，1H)，4.11(d，J=11.2Hz，1H)，1.90(dd，J=15.5，8.3Hz，1H)，1.20(dd，J=15.5，2.0Hz，1H)，0.92(s，9H)；MS(ESI)m/z464[M+H]+。
MI-519-43-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.57-7.54(m，2H)，7.46-7.40(m，1H)，7.22-7.14(m，2H)，6.81(d，J=1.8Hz，1H)，5.34(d，J=11.4Hz，1H)，4.66(d，J=11.4Hz，1H)，4.55-4.52(m，1H)，3.60(m，2H)，3.32-3.26(m，2H)，3.03-2.93(m，4H)，2.11-1.81(m，7H)，1.15(dd，J=15.4，1.7Hz，1H)，0.90(s，9H)；MS(ESI)m/z575[M+H]+。
MI-519-44-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.63-7.57(m，2H)，7.46-7.41(m，1H)，7.23-7.14(m，2H)，6.81(m，1H)，5.30(d，J=11.3Hz，1H)，4.64(d，J=11.3Hz，1H)，4.50(d，J=8.3Hz，1H)，3.43-3.19(m，4H)，2.94-2.75(m，4H)，1.95-1.71(m，8H)，1.53-1.43(m，1H)，1.14(d，J=15.2Hz，1H)，0.92(s，9H)；MS(ESI)m/z589[M+H]+。
MI-519-49-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.60-7.55(m，2H)，7.44-7.39(m，1H)，7.20-7.15(m，2H)，6.80(d，J=1.8Hz，1H)，5.33(d，J=11.4Hz，1H)，4.64(d，J=11.4Hz，1H)，4.48(d，J=7.1Hz，1H)，3.72-3.64(m，1H)，3.55-3.52(m，5H)，3.38-3.30(m，6H)，2.95(s，3H)，1.93(dd，J=15.3，8.6Hz，1H)，1.13(d，J=15.3Hz，1H)，0.90(s，9H)；MS(ESI)m/z654[M+H]+。
MI-519-50-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.58-7.55(m，2H)，7.45-7.39(m，1H)，7.22-7.14(m，2H)，6.80(d，J=1.8Hz，1H)，5.29(d，J=11.3Hz，1H)，4.60(d，J=11.3Hz，1H)，4.50(dd，J=8.6，1.9Hz，1H)，1.88(dd，J=15.4，8.4Hz，1H)，1.15(dd，J=15.4，1.9Hz，1H)，0.90(s，9H)；MS(ESI)m/z464[M+H]+。
MI-519-51-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.54(d，J=8.1Hz，1H)，7.36-7.31(m，1H)，7.15-7.12(m，1H)，7.02-6.91(m，2H)，6.81-6.80(m，1H)，4.98(d，J=11.9Hz，1H)，4.47(d，J=11.8Hz，1H)，4.41-4.37(m，1H)，4.22-4.19(m，2H)，2.18-2.08(m，1H)，1.85-1.49(m，5H)，1.37-1.33(m，1H)，1.14(dd，J=15.2，3.6Hz，1H)，0.91(s，9H)；MS(ESI)m/z548[M+H]+。
MI-519-51-epi-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.63-7.56(m，2H)，7.45-7.40(m，1H)，7.21-7.14(m，2H)，6.82(m，1H)，5.19(d，J=11.3Hz，1H)，4.59(d，J=11.3Hz，1H)，4.54-4.51(m，1H)，4.35-4.32(m，1H)，4.24-4.21(m，1H)，2.02-1.85(m，3H)，1.73-1.63(m，2H)，1.51(m，1H)，1.19-1.14(m，1H)，1.09-1.04(m，1H)，0.90(s，9H)；MS(ESI)m/z548[M+H]+。
MI-519-60-TFA盐
(MI-519-63的差向异构体)
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.61-7.56(m，1H)，7.41-7.36(m，1H)，7.23-7.18(m，1H)，6.88(m，1H)，6.80-6.76(m，1H)，6.66-6.60(m，1H)，4.82-4.77(m，1H)，4.43-4.15(m，2H)，4.05-3.80(m，2H)，3.75-3.51(m，3H)，2.35-2.09(m，1H)，1.88(dd，J=15.0，8.0Hz，1H)，1.24-1.18(m，1H)，0.82(s，9H)；MS(ESI)m/z 534[M+H]+。
MI-519-56-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.63-7.57(m，2H)，7.44-7.39(m，1H)，7.21-7.15(m，2H)，6.81(m，1H)，5.26(d，J=10.9Hz，1H)，4.75-4.73(m，1H)，4.64(d，J=11.4Hz，1H)，4.52-4.50(m，1H)，3.98-3.94(m，1H)，3.75-3.60(m，1H)，3.55-3.52(m，1H)，3.46-3.42(m，1H)，3.31-3.13(m，1H)，2.31-2.20(m，1H)，1.95-1.87(m，3H)，1.80-1.50(m，1H)，1.18-1.13(m，1H)，0.90(s，9H)；MS(ESI)m/z593[M+H]+。
MI-519-62-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.57-7.53(m，1H)，7.41-7.38(m，1H)，7.22-7.17(m，1H)，6.87-6.82(m，3H)，5.02(d，J=10.1Hz，1H)，4.44(d，J=10.1Hz，1H)，4.11(dd，J=7.4，2.8Hz，1H)，3.41-3.36(m，1H)，3.12-3.07(m，1H)，1.97(dd，J=15.2，7.5Hz，1H)，1.32(dd，J=15.2，2.9Hz，1H)，1.07(s，3H)，0.98(s，3H)，0.90(s，9H)；MS(ESI)m/z536[M+H]+。
MI-519-63-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.55-7.51(m，1H)，7.43-7.38(m，1H)，7.24-7.18(m，1H)，6.88(m，1H)，6.81(m，1H)，6.79-6.73(m，1H)，4.93(d，J=9.7Hz，1H)，4.40(d，J=9.7Hz，1H)，4.11(dd，J=7.7，2.7Hz，1H)，3.98-3.93(m，1H)，3.87-3.32(m，1H)，2.72-2.56(m，2H)，2.03-1.87(m，2H)，1.77-1.71(m，1H)，1.25(dd，J=15.4，2.6Hz，1H)，0.89(s，9H)；MS(ESI)m/z534[M+H]+。
MI-519-68-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.58-7.55(m，1H)，7.38-7.35(m，1H)，7.21-7.16(m，1H)，6.87(s，1H)，6.82-6.78(m，2H)，5.08(d，J=10.0Hz，1H)，4.45(d，J=10.0Hz，1H)，4.17-4.07(m，2H)，3.78(s，2H)，2.68-2.58(m，2H)，2.44-2.40(m，1H)，2.30-2.27(m，1H)，1.98(dd，J=15.4，7.7Hz，1H)，1.58(s，1H)，1.26(dd，J=15.4，2.5Hz，1H)，0.82(s，9H)；MS(ESI)m/z464[M+H]+。
MI-519-69-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.62-7.57(m，1H)，7.41-7.35(m，1H)，7.22-7.17(m，1H)，6.88(s，1H)，6.79(m，2H)，5.11(d，J=10.1Hz，1H)，4.47(d，J=10.1Hz，1H)，4.19(dd，J=7.6，2.6Hz，1H)，4.07-4.02(m，1H)，3.82(s，2H)，2.87-2.74(m，2H)，2.22-2.18(m，1H)，2.07-1.96(m，2H)，1.27(dd，J=15.3，2.6Hz，1H)，0.82(s，9H)；MS(ESI)m/z591[M+H]+。
MI-519-70-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.58-7.53(m，1H)，7.44-7.39(m，1H)，7.26-7.21(m，1H)，6.90-6.89(m，1H)，6.80-6.77(m，1H)，6.60(d，J=8.1Hz，1H)，5.00(d，J=9.0Hz，1H)，4.50-4.40(m，2H)，4.08(d，J=5.5Hz，1H)，3.43-3.32(m，2H)，3.17-3.06(m，2H)，1.96(dd，J=15.2，7.9Hz，1H)，1.18(dd，J=15.2，1.9Hz，1H)，0.83(s，9H)；MS(ESI)m/z532[M+H]+。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.65(d，J=8.4Hz，1H)，7.29(d，J=7.8Hz，1H)，7.27(s，1H)，7.21(t，J=7.8Hz，1H)，7.04(d，J=7.5Hz，1H)，6.83(d，J=6.0Hz，1H)，5.27(d，J=11.4Hz，1H)，4.41(d，J=6.6Hz，1H)，4.10(d，J=11.4Hz，1H)，3.39-3.53(m，1H)，3.11-3.22(m，1H)，3.00(s，4H)，2.53(s，4H)，2.41(dd，J=6.6，12.0Hz，1H)，1.86(dd，J=8.1，15.3Hz，1H)，1.09-1.38(m，2H)，0.93(s，9H)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.66(d，J=8.4Hz，1H)，7.15-7.33(m，3H)，7.05(d，J=7.5Hz，1H)，6.81(d，J=6.0Hz，1H)，5.31(d，J=11.4Hz，1H)，4.44(dd，J=1.8，8.4Hz，1H)，4.12(d，J=11.4Hz，1H)，3.33-3.45(m，1H)，3.18(dd，J=7.5，14.7Hz，4H)，2.95-3.10(m，1H)，2.80(s，3H)，2.66(dd，J=7.5，13.8Hz，4H)，2.46(dd，J=6.6，12.6Hz，2H)，1.88(dd，J=8.4，15.3Hz，1H)，1.23-1.38(m，1H)，0.85(s，9H)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.68(d，J=8.4Hz，1H)，7.13-7.30(m，3H)，7.04(d，J=7.2Hz，1H)，6.84(d，J=6.0Hz，1H)，5.32(d，J=11.4Hz，1H)，4.41(dd，J=1.8，8.4Hz，1H)，4.11(d，J=11.4Hz，1H)，3.31-3.46(m，1H)，3.16(dd，J=7.5，14.7Hz，4H)，2.95-3.10(m，1H)，2.78(s，3H)，2.67(dd，J=7.5，14.1Hz，4H)，2.46(dd，J=6.6，12.6Hz，2H)，2.09-2.38(m，2H)，1.67-1.78(m，1H)，1.23-1.38(m，1H)，0.86(s，9H)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.70(d，J=8.4Hz，1H)，7.58(t，J=7.2Hz，1H)，7.42(t，J=7.5Hz，1H)，7.18(t，J=8.1Hz，1H)，6.88(d，J=6.0Hz，1H)，5.31(d，J=11.4Hz，1H)，4.67(d，J=11.4Hz，1H)，4.48(d，J=7.8Hz，1H)，3.52-3.80(m，2H)，3.00-3.48(m，6H)，1.95-2.30(m，4H)，1.93(dd，J=8.4，15.3Hz，1H)，1.13(d，J=15.6Hz，1H)，0.92(s，9H)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.71(d，J=8.1Hz，1H)，7.60(t，J=7.2Hz，1H)，7.45(t，J=6.9Hz，1H)，7.21(t，J=7.8Hz，1H)，6.89(d，J=6.0Hz，1H)，5.30(d，J=11.4Hz，1H)，4.66(d，J=11.4Hz，1H)，4.52(d，J=8.1Hz，1H)，3.55-3.80(m，2H)，3.18-3.46(m，2H)，2.82-3.15(m，4H)，1.74-2.33(m，7H)，1.16(d，J=15.6Hz，1H)，0.92(s，9H)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.71(d，J=8.7Hz，1H)，7.59(t，J=6.6Hz，1H)，7.44(t，J=6.9Hz，1H)，7.20(t，J=8.1Hz，1H)，6.88(d，J=6.0Hz，1H)，5.28(d，J=11.4Hz，1H)，4.65(d，J=11.4Hz，1H)，4.52(d，J=8.4Hz，1H)，3.55-3.70(m，2H)，3.08-3.27(m，4H)，2.88-3.08(m，2H)，1.98-2.28(m，5H)，1.91(dd，J=8.4，15.3Hz，1H)，1.40-1.65(m，4H)，1.15(d，J=15.3Hz，1H)，0.91(s，9H)，0.82(d，J=9.9Hz，1H)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.33(d，J=7.5Hz，1H)，7.45(t，J=6.9Hz，1H)，7.34(t，J=7.8Hz，1H)，7.15(t，J=8.7Hz，1H)，6.83(d，J=1.5Hz，1H)，6.75(dd，J=1.8，8.1Hz，1H)，6.66(d，J=8.1Hz，1H)，4.79(d，J=9.9Hz，1H)，4.32(d，J=9.6Hz，1H)，3.99(d，J=5.4Hz，1H)，3.55-3.70(m，1H)，3.05-3.20(m，1H)，2.89(s，3H)，1.78-2.06(m，4H)，1.67(d，J=12.6Hz，1H)，1.15-1.45(m，6H)，0.86(d，J=6.3Hz，1H)，0.78(s，9H)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.31(d，J=7.8Hz，1H)，7.46(t，J=6.9Hz，1H)，7.34(t，J=7.8Hz，1H)，7.15(t，J=8.7Hz，1H)，6.83(d，J=1.5Hz，1H)，6.75(dd，J=1.8，8.1Hz，1H)，6.66(d，J=8.1Hz，1H)，4.79(d，J=9.9Hz，1H)，4.32(d，J=9.6Hz，1H)，3.99(d，J=5.4Hz，1H)，3.55-3.70(m，1H)，3.05-3.20(m，1H)，2.89(s，3H)，1.78-2.06(m，4H)，1.67(d，J=12.6Hz，1H)，1.15-1.45(m，6H)，0.86(d，J=6.3Hz，1H)，0.78(s，9H)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.48(t，J=6.6Hz，1H)，7.35(t，J=6.9Hz，1H)，7.16(t，J=7.8Hz，1H)，6.83(d，J=1.8Hz，1H)，6.75(dd，J=1.8，8.1Hz，1H)，6.65(d，J=8.1Hz，1H)，4.33(d，J=9.3Hz，1H)，4.02(d，J=5.4Hz，1H)，3.70-3.88(m，1H)，3.62(d，J=12.3Hz，1H)，3.53(d，J=12.9Hz，1H)，2.77(s，3H)，2.65-2.90(m，2H)，1.79-2.06(m，2H)，1.65-1.78(m，1H)，1.47-1.63(m，1H)，1.32-1.47(m，1H)，1.10-1.24(m，1H)，0.86(d，J=6.0Hz，1H)，0.78(s，9H)，0.76(d，J=11.7Hz，1H)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.53(d，J=7.5Hz，1H)，7.55(t，J=7.5Hz，1H)，7.39(t，J=7.2Hz，1H)，7.19(t，J=8.1Hz，1H)，6.88(s，1H)，6.82(s，2H)，5.04(d，J=9.9Hz，1H)，4.46(d，J=9.9Hz，1H)，4.20(dd，J=2.7，7.2Hz，1H)，3.73-4.05(m，2H)，3.07-3.22(m，2H)，2.86(dd，J=13.8，26.1Hz，2H)，2.03(dd，J=7.2，15.3Hz，1H)，1.78-1.96(m，2H)，1.56-1.68(m，1H)，1.16-1.53(m，3H)，1.10(t，J=7.2Hz，3H)，0.90(d，J=4.5Hz，1H)，0.82(s，9H)，0.80(d，J=12.9Hz，1H)。
C027-TFA盐
1H NMR(300MHz，MeOH-d4)：7.50-7.36(m，1H)，7.24-7.10(m，2H)，6.88-6.76(m，3H)，5.12(d，J=10.17Hz，1H)，4.49(d，J=10.17Hz，1H)，4.23(dd，J=6.83，2.09Hz，1H)，3.98-3.83(m，1H)，2.49-2.36(m，1H)，2.36-2.22(m，1H)，2.10-1.96(m，2H)，1.94-1.82(m，1H)，1.35-1.28(m，1H)，1.29(s，3H)，0.80(s，9H)；13C NMR(75MHz，MeOH-d4)：108.1，166.0，145.4，136.9，127.9，126.1(t，JC-F=5.6Hz)，125.4，123.4118.8(d，JC-F=17.3Hz)，112.0，67.4，64.5，63.7，61.6，49.5，45.6，45.5，42.4，38.5，30.9，29.5，27.6；C28H33 35ClF2N3O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：532.2179，实测值：532.42。
C029-TFA盐
1H NMR(300MHz，MeOH-d4)：8.84(d，J=6.80Hz，1H)，7.58(t，J=6.80Hz，1H)，7.39(t，J=7.11Hz，1H)，7.22(t，J=7.80Hz，1H)，6.88(dd，J=9.81，7.80Hz，1H)，6.78(d，J=10.13，6.63Hz，1H)，5.11(d，J=10.37Hz，1H)，4.48(d，J=10.37Hz，1H)，4.21(d，J=10.37Hz，1H)，4.21(dd，J=7.32，2.66Hz，1H)，3.95-3.75(m，1H)，2.46-2.22(m，2H)，2.12-1.96(m，2H)，1.94-1.80(m，1H)，1.34-1.28(m，1)，1.29(s，3H)，0.81(s，9H)；13CNMR(75MHz，MeOH-d4)：180.2，169.2，132.2，128.7(d，JC-F=2.2Hz)，126.5(d，JC-F=4.6Hz)，124.7(dd，JC-F=33.5，19.2Hz)，122.6(d，JC-F=18.1Hz)，101.5(d，JC-F=23.0Hz)，67.4，64.4，63.5，61.9，49.8，45.6，45.5，42.4，38.6，30.9，29.5，27.6；C28H32 35ClF3N3O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：550.2084，实测值：550.33。
C031-TFA盐
1H NMR(300MHz，MeOH-d4)：7.68-7.54(m，1H)，7.38-7.26(m，1H)，7.22-7.12(m，1H)，6.90-6.76(m，1H)，6.70-6.60(m，1H)，6.56-6.42(m，1H)，5.30-5.20(m，1H)，4.49(d，J=10.03Hz，1H)，4.25(dd，J=71.9，2.39Hz，1H)，4.00-3.82(m，1H)，2.50-2.21(m，2H)，2.18-2.00(m，2H)，1.98-1.82(m，1H)，1.40-1.30(m，1H)，1.28(s，3H)，0.79(s，9H)；13C NMR(75MHz，MeOH-d4)：180.6，165.1(d，JC-F=246.7Hz)，166.1，157.7(d，JC-F=247.9Hz)，145.6(d，JC-F=12.0Hz)，132.0，128.6，128.2(d，JC-F=10.2Hz)，126.3(d，JC-F=4.5Hz)，125.0(d，JC-F=14.0Hz)，122.4(d，JC-F=18.4Hz)，122.3，109.8(d，JC-F=23.2Hz)，99.9(d，JC-F=27.8Hz)，67.4，64.5，63.5，61.5，49.2，45.6，45.5，42.3，38.4，30.9，29.5，27.5；C28H33 35ClF2N3O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：532.2179，实测值：532.42。
C034-TFA盐
1H NMR(300MHz，MeOH-d4)：7.28-7.10(m，5H)，6.92-6.84(m，1H)，6.80-6.76(m，1H)，5.40-5.20(m，1H)，5.08(d，J=10.96Hz，1H)，4.40-4.20(m，1H)，3.90-3.60(m，1H)，2.50-2.30(m，1H)，2.30-2.15(m，1H)，2.15-2.00(m，2H)，1.90-1.75(m，1H)，1.57(dd，J=15.3，3.71Hz，1H)，1.25(s，3H)，0.79(s，9H)；13C NMR(75MHz，MeOH-d4)：180.0，165.9，144.7，136.7，136.6，135.8，131.3，130.1，129.8，128.1，128.1，126.8，123.5，112.0，67.4，64.3，64.0，62.2，57.2，45.7，45.6，42.7，38.3，31.0，29.6，27.5；C28H34 35Cl2N3O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：530.1977，实测值：530.50。
C035-TFA盐
1H NMR(300MHz，MeOH-d4)：7.40-7.00(m，5H)，6.80-6.40(m，1H)，5.60-5.00(m，2H)，4.60-4.20(m，1H)，4.00-3.80(m，1H)，2.60-2.40(m，1H)，2.40-2.20(m，1H)，2.20-2.00(m，2H)，2.00-1.80(m，1H)，1.70-1.50(m，1H)，1.28(s，3H)，0.83(s，9H)；13C NMR(75MHz，MeOH-d4)：180.0，165.8，160.0-145.0(m，2×Csp2-F)，136.5，135.9，131.4，130.0，129.9，128.0，124.1(d，JC-F=6.3Hz)，119.1，116.7(d，JC-F=20.4Hz)，101.4(d，JC-F=23.0Hz)，67.4，64.2，63.8，62.5，57.4，45.6，45.5，42.7，38.3，31.0，29.5，27.5；C28H33 35ClF2N3O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：532.2179，实测值：532.42。
MI-519-73-TFA盐
1H NMR(300MHz，MeOH-d4)：7.50-7.30(m，2H)，7.20-7.10(m，1H)，6.90-6.70(m，3H)，5.00-4.70(m，1H)，4.36(d，J=9.76Hz，1H)，4.05-3.96(m，1H)，3.70-3.50(m，1H)，1.94(dd，J=14.98，7.30Hz，1H)，1.80-1.00(m，8H)，1.16(s，3H)，0.90-0.70(m，1H)，0.80(s，9H)；C30H37 35Cl2FN3O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：576.2196，实测值：576.58。
MI-519-74-TFA盐
1H NMR(300MHz，MeOH-d4)：7.50-7.30(m，2H)，7.25-7.10(m，1H)，6.85-6.70(m，3H)，5.00-4.70(m，1H)，4.32(d，J=9.69Hz，1H)，4.10-3.95(m，1H)，3.85-3.70(m，1H)，2.00-1.80(m，2H)，1.75-1.20(m，7H)，1.13(s，3H)，0.95-0.75(m，1H)，0.81(s，9H)；C30H37 35Cl2FN3O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：576.2196，实测值：576.58。
MI-7102-TFA盐
1H NMR(300MHz，MeOH-d4)：7.36-7.25(m，1H)，7.24-7.11(m，2H)，6.86(d，J=1.8Hz，1H)，6.80(dd，J=1.8，8.1Hz，1H)，6.72(d，J=8.1Hz，1H)，4.82(d，J=9.6Hz，1H)，4.36(d，J=9.6Hz，1H)，4.04(dd，J=2.4，7.4Hz，1H)，3.74-3.56(m，1H)，3.56-3.40(m，1H)，2.05-1.78(m，5H)，1.75-1.59(m，1H)，1.43-1.04(m，5H)，0.81(s，9H)；C29H35ClF2N3O3(M+H)+的ESI-MS计算值为546.23，实测值为546.58。
MI-7103-TFA盐
1H NMR(300MHz，MeOH-d4)：8.38(d，J=7.7Hz，1H)，7.54(t，J=6.7Hz，1H)，7.40(d，J=7.1Hz，1H)，7.20(t，J=7.9Hz，1H)，6.93(d，J=6.1Hz，1H)，6.86(d，J=8.7Hz，1H)，4.45(d，J=10.3Hz，1H)，4.13(dd，J=2.8，7.5Hz，1H)，3.77-3.55(m，1H)，3.55-3.42(m，1H)，2.09-1.71(m，4H)，1.70-1.56(m，1H)，1.45-1.02(m，5H)，0.82(s，9H)；C29H34Cl2F2N3O3(M+H)+的ESI-MS计算值为580.19，实测值为580.67。
MI-7104-TFA盐
1H NMR(300MHz，MeOH-d4)：7.49(t，J=7.2Hz，1H)，7.45-7.38(m，1H)，7.22(t，J=8.0Hz，1H)，6.85-6.68(m，2H)，4.80(d，J=9.8Hz，1H)，4.36(d，J=9.9Hz，1H)，4.01(dd，J=2.4，7.6Hz，1H)，3.74-3.57(m，1H)，3.55-3.39(m，1H)，2.04-1.77(m，4H)，1.74-1.59(m，1H)，1.44-1.04(m，5H)，0.90(d，J=4.5Hz，1H)，0.82(s，9H)；C29H34ClF3N3O3(M+H)+的ESI-MS计算值为564.22，实测值为564.58。
MI-7105-TFA盐
1H NMR(300MHz，MeOH-d4)：7.49(t，J=7.2Hz，1H)，7.45-7.38(m，1H)，7.22(t，J=8.0Hz，1H)，6.85-6.68(m，2H)，4.80(d，J=9.8Hz，1H)，4.36(d，J=9.9Hz，1H)，4.01(dd，J=2.4，7.6Hz，1H)，3.74-3.57(m，1H)，3.55-3.39(m，1H)，2.04-1.77(m，4H)，1.74-1.59(m，1H)，1.44-1.04(m，5H)，0.90(d，J=4.5Hz，1H)，0.82(s，9H)；C29H35ClF2N3O3(M+H)+的ESI-MS计算值为546.23，实测值为546.58。
MI-7106-TFA盐
1H NMR (300MHz，MeOH-d4)：8.36(d，J=7.0Hz，1H)，7.59(d，J=8.1Hz，1H)，7.41-7.11(m，4H)，7.04(d，J=7.6Hz，1H)，6.78(d，J=1.8Hz，1H)，5.19(d，J=11.3Hz，1H)，4.44(J=8.1Hz，1H)，4.07(d，J=11.3Hz，1H)，3.74-3.53(m，1H)，3.53-3.37(m，1H)，2.08-1.83(m，3H)，1.83-1.69(m，1H)，1.61-1.44(m，1H)，1.44-1.08(m，4H)，1.07-0.72(m，1H)，0.88(s，9H)；C29H36Cl2N3O3(M+H)+的ESI-MS计算值为544.21，实测值为544.67。
MI-7108-TFA盐
1H NMR(300MHz，MeOH-d4/DMSO-d6)：10.15(s，1H)，7.76(d，J=8.2Hz，1H)，7.22(s，1H)，7.17-7.00(m，3H)，6.94(d，J=7.1Hz，1H)，6.81(d，J=6.0Hz，1H)，4.42(d，J=8.3Hz，1H)，4.09(d，J=3.0Hz，1H)，3.79(d，J=8.3Hz，1H)，3.73-3.49(m，2H)，3.35(d，J=9.5Hz，1H)，2.10-1.84(m，4H)，1.52-1.11(m，5H)，0.87(s，9H)；13C NMR(75MHz，MeOH-d4/DMSO-d6)：177.1，172.4，153.6(d，JC-F=242.7Hz)，138.7，138.5(d，JC-F=2.4Hz)，133.2，129.0，127.544，127.541(d，JC-F=6.7Hz)，126.8，126.5，119.7(d，JC-F=19.2Hz)，111.3，110.4(d，JC-F=24.1Hz)，68.4，66.6，65.7，64.0，58.6，46.8，42.2，33.26，33.20，30.4，30.2，29.7，29.5；C29H35Cl2FN3O3(M+H)+的ESI-MS计算值为562.20，实测值为562.67。
MI-7109-TFA盐
1H NMR(300MHz，MeOH-d4)：7.47(t，J=6.7Hz，1H)，7.42-7.33(m，1H)，7.18(t，J=7.7Hz，1H)，6.87(d，J=1.8Hz，1H)，6.78(dd，J=1.8，8.1Hz，1H)，6.70(d，J=8.1Hz，1H)，4.40(d，J=9.7Hz，1H)，4.11(dd，J=2.5，7.6Hz，1H)，2.77-2.65(m，1H)，1.99(dd，J=7.6，15.3Hz，1H)，1.24(dd，J=2.5，15.3Hz，1H)，0.92-0.62(m，2H)，0.81(s，9H)，0.56-0.30(m，2H)；C26H29Cl2FN3O2(M+H)+的ESI-MS计算值为504.16，实测值为504.58。
B049-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)：7.597(d，J=8.73Hz，1H)，7.30-7.10(m，3H)，7.10-7.00(m，1H)，6.84(d，J=6.14Hz，1H)，5.35(d，J=12.85Hz，1H)，4.40(dd，J=7.62，3.80Hz，1H)，4.15(d，J=12.92Hz，1H)，1.71(dd，J=15.32，7.68Hz，1H)，1.12(dd，J=15.32，3.79Hz，1H)，0.92(s，9H)；C23H24 35Cl2FN2O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：465.1148，实测值：465.50。
B053-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)：7.67(d，J=8.41Hz，1H)，7.35-7.18(m，3H)，7.10-7.00(m，1H)，6.87(d，J=6.03Hz，1H)，5.62(d，J=12.10Hz，1H)，4.42(dd，J=8.54，1.92Hz，1H)，4.30-4.15(m，2H)，4.23(d，J=12.00Hz，1H)，1.96(dd，J=15.44，8.61Hz，1H)，1.24-1.15(m，1H)，1.13(t，J=7.13Hz，3H)，0.91(s，9H)；C25H28 35Cl2FN2O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：493.1461，实测值：493.30。
B059-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)：7.45-7.34(m，1H)，7.26-7.12(m，1H)，7.04-6.93(m，1H)，6.90(d，J=1.80Hz，1H)，6.65(dd，J=8.08，1.80Hz，1H)，4.41(d，J=9.25Hz，1H)，3.96(五重峰，J=8.13Hz，1H)，2.51-2.07(m，2H)，2.40-2.20(m，2H)，1.88(dd，J=14.20，9.91Hz，1H)，1.32(s，3H)，1.20-0.80(m，1H)，0.88(s，9H)；13C NMR(75MHz，CD3OD)：181.3，172.9(d，JC-F=266.9Hz)，168.6，162.7，145.3，135.8，131.7，130.7(d，JC-F=38.6Hz)，126.2(d，JC-F=4.5Hz)，126.1，123.6，122.9，122.7，111.4，78.4，67.7，63.4，46.0，45.8，44.3，38.0，31.4，30.2，27.6；C28H31 35Cl2FN3O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：546.1727，实测值：546.50。
B066-15-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)：7.60-7.45(m，1H)，7.45-7.35(m，1H)，7.22(t，J=7.96Hz，1H)，6.90(d，J=1.80Hz，1H)，6.75(dd，J=8.14，1.92Hz，1H)，6.41(d，J=8.13Hz，1H)，5.07(d，J=8.40Hz，1H)，4.39(d，J=8.40Hz，1H)，4.01(dd，J=7.76，2.17Hz，1H)，1.95(dd，J=15.35，7.83Hz，1H)，1.12(dd，J=15.35，2.17Hz，1H)，0.82(s，9H)；C23H24 35Cl2FN2O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：465.1148，实测值：465.42。
MI-519-72-TFA盐
C28H32 35Cl2F3N4O2[M+H]+的ESI-MS计算值为：583.1854，实测值：583.42。
MI-519-75-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)：7.64-7.54(m，1H)，7.42-7.60(m，1H)，7.26-7.18(m，1H)，6.88(s，1H)，6.80-6.70(m，1H)，6.50-6.40(m，1H)，5.20-5.00(m，1H)，4.80-4.30(m，4H)，4.30-4.10(m，2H)，4.10-4.00(m，1H)，3.98(s，3H)，1.90(dd，J=14.96，7.33Hz，1H)，1.11(d，J=14.96Hz，1H)，0.81(s，9H)；C27H32 35Cl2FN4O2[M+H]+的ESI-MS计算值为：533.1886，实测值：533.58。
MI-519-76-TFA盐
C28H33 35Cl2F2N4O2[M+H]+的ESI-MS计算值为：565.1949，实测值：565.42。
MI-519-77-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)：7.50-7.40(m，1H)，7.40(m，1H)，7.20-7.10(m，1H)，6.85(d，J=1.40Hz，1H)，6.84-6.72(m，2H)，5.00-4.80(m，1H)，4.45(d，J=10.10Hz，1H)，4.02(t，J=6.61Hz，1H)，3.90(五重峰，J=8.07Hz，1H)，2.50-2.25(m，2H)，2.10-1.82(m，3H)，1.81-1.31(m，8H)，1.30(s，3H)，1.10-0.91(m，1H)，0.91-0.81(m 1H)；C29H33 35Cl2FN3O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：560.1883，实测值：560.50。
MI-519-78-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)：7.45-7.31(m，2H)，7.20-7.11(m，1H)，6.86-6.82(m，1H)，6.81-6.78(m，2H)，4.90-4.80(m，1H)，4.45(d，J=10.33Hz，1H)，4.10-3.95(m，1H)，3.70-3.60(m，1H)，3.50-3.40(m，1H)，2.10-1.05(m，17H)，1.05-0.95(m，1H)，0.95-0.80(m，1H)；C30H35 35Cl2FN3O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：574.2040，实测值：574.58。
MI-519-79-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)：7.78(d，J=6.92Hz，1H)，7.56-7.42(m，2H)，6.90(d，J=1.89Hz，1H)，6.68(dd，J=8.15，1.84Hz，1H)，6.03(dd，J=8.13，3.66Hz，1H)，4.80-4.70(m，1H)，4.58(d，J=5.51Hz，1H)，4.10-3.70(m，7H)，3.54(dt，J=15.10，5.20Hz，2H)，3.40-3.20(m，3H)，1.79(ddd，J=14.60，8.49，1.59Hz，1H)，1.00-0.80(m，1H)，0.81(s，9H)；C29H36 35Cl3N4O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：593.1853，实测值：593.75。
MI-519-80-TFA盐
1H NMR(300MHz，CD3OD)：7.80-7.72(m，1H)，7.50-7.38(m，2H)，6.87(d，J=1.81Hz，1H)，6.71(dd，J=8.16，1.81Hz，1H)，6.52-6.40(m，1H)，4.96-4.80(m，1H)，4.62(d，J=8.69Hz，1H)，4.10-3.95(m，1H)，3.70-3.55(m，1H)，3.50-3.45(m，1H)，2.00-1.80(m，3H)，1.80-1.60(m，1H)，1.40-1.00(m，5H)，0.95-0.85(m，1H)，0.80(s，9H)；C29H35 35Cl3N3O3[M+H]+的ESI-MS计算值为：578.1744，实测值：578.75。
实施例2
荧光偏振MDM2结合分析
使用优化、灵敏和基于定量荧光偏振(基于FP)的结合分析确定MDM2抑制剂的结合亲和性，该分析使用重组人His标记的MDM2蛋白(残基1-118)和荧光标记的基于p53的肽。
荧光探针的设计是基于先前报导的高亲和性的基于p53的肽模拟物化合物(5-FAM-βAla-βAla-Phe-Met-Aib-pTyr-(6-Cl-LTrp)-Glu-Ac3c-Leu-Asn-NH2(SEQ ID NO：1)，García-Echeverría等人，J.Med.Chem.43：3205–3208(2000))。该标记的肽称为PMDM6-F。通过饱和曲线确定PMDM6-F与重组MDM2蛋白的Kd值。在Dynex 96孔黑色圆底板中连续双倍稀释MDM2蛋白，且以1nM的浓度添加PMDM6-F肽。该分析在缓冲液(100mM磷酸钾，pH 7.5；100μg/mL牛血清丙种球蛋白；0.02%叠氮化钠，0.01%Triton X-100)中进行，且在3小时的培养后使用ULTRA READER (Tecan U.S.Inc.，ResearchTriangle Park，NC)测量偏振值。通过将S形剂量-响应曲线(可变斜率)中的mP值以非线性回归拟合获得IC50值，且该值确定为1.40nM±0.25。使用以下等式计算Kd值：Kd值=IC50–L0/2。L0/2为游离配体(PMDM6-F)的浓度。由于使用终浓度为1nM的PMDM6-F，故L0/2为0.5nM。
用所测试化合物在DMSO中的系列稀释液进行剂量依赖的竞争性结合实验。将5μL所测试化合物的样品，以及预培养的MDM2蛋白(10nM)与PMDM6-F肽(1nM)在分析缓冲液(100mM磷酸钾，pH 7.5；100μg/mL牛血清丙种球蛋白；0.02%叠氮化钠，0.01%Triton X-100)中的溶液加入Dynex 96孔黑色圆底板中，形成终体积为125μL。对于各分析，对照包括了MDM2蛋白和PMDM6-F(相当于0%抑制)，单独PMDM6-F肽(相当于100%抑制)。在3小时的培养后测量偏振值。使用非线性最小二乘法分析曲线来确定IC50值，即50%的结合肽被置换的抑制剂浓度。使用GRAPHPAD PRISM软件(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)进行曲线拟合。如表19A-D所示，本文提供的化合物是有效的MDM2拮抗剂。表19A-D所示的游离碱化合物，既作为游离碱也作为CF3CO2H(TFA)或HCl盐来测试。通常，预期化合物的游离碱形式和盐形式将出现相当的分析响应。
实施例3
细胞生长分析
同源的HCT-116结肠癌细胞系来自Bert Vogelstein教授(Johns Hopkins，Baltimore，MD)的赠予，且保持于包含10%的FBS的McCoy's 5A培养基中。所有其他细胞系均获自ATCC(Manassas，VA)且保持于包含10%FBS的RPMI-1640培养基中。
以2-3×103细胞/孔的密度将细胞与化合物接种于96孔平底细胞培养板中并培养4天。用浓度渐增的所测试化合物处理后，通过WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺苯基)-2H-四唑单钠盐(DojindoMolecular Technologies Inc.，Gaithersburg，Maryland)测定细胞生长抑制的速率。以终浓度为10%将WST-8加入各孔中，然后在37°C培养该板2-3小时。在450nm使用TECAN ULTRA读数器测定样品的吸光度。通过使用GraphPad Prism软件(GraphPad Software，La Jolla，CA 92037，USA)比较未处理的细胞与经所述化合物处理的细胞，测定抑制50%细胞生长的化合物浓度(IC50)。该分析的结果见于表19A-D中。
实施例4
细胞死亡分析
使用锥虫蓝染色进行细胞死亡分析。在所指出的化合物存在以及不存在下处理细胞。浮动的细胞和粘附的细胞均被锥虫蓝染色。染成蓝色的细胞或形态学上不健康的细胞被记录为死细胞。显微镜下，每三个单独的区域中至少计数100个细胞。
如图1所示，在具有野生型p53的SJSA-1癌细胞中，本文提供的MDM2抑制剂诱导细胞死亡。
实施例5
蛋白印迹分析
对于蛋白印迹分析，将细胞溶于冰冷却的RIPA缓冲液中：20mMTris-HCl(pH 7.5)、150mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1%去氧胆酸钠、2.5mM焦磷酸钠、1mM b-磷酸甘油、1mM原钒酸钠和1μg/ml亮肽酶素。通过蛋白印迹分析检测全细胞溶胞产物中的蛋白，其中使用以下抗体：抗-p53(克隆DO-1)、抗-MDM2(克隆SMP-14)、抗-p21(克隆SX118)、抗-β-肌动蛋白(克隆AC-40)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH；HRP结合)。如图2-4所示，本文提供的MDM2抑制剂在该分析中是有活性的。
实施例6
体外微粒体稳定性
本文提供的MDM2抑制剂的体外稳定性使用大鼠和/或人肝微粒体确定，如表20-24所示。
表20
表22
表24
实施例7
大鼠中的药代动力学研究
在大鼠中进行对于MDM2抑制剂的药代动力学研究。为了比较，也研究了MDM2抑制剂AT-219。如图5和6、表25和26所示，本文提供的MDM2抑制剂在大鼠中具有有希望的ADME性质。具体地，MI-773呈现出高的口服生物利用度；MI-772呈现出较长的血浆半衰期。MI-774(MI-773的氨基酸酯前药)也具有良好的口服生物利用度。请注意，在MI-774的药代动力学评价之中，测量了MI-773的浓度。
表25：大鼠的静脉内给药。除MI-774外，测量母体化合物的血浆浓度。MI-774为MI-773的氨基酸酯前药。因此测量MI-773的血浆浓度用作MI-774的PK数据
表26：大鼠的口服给药。除MI-774外，测量母体化合物的血浆浓度。MI-774为MI-773的氨基酸酯前药。因此测量MI-773的血浆浓度用作MI-774的PK数据
实施例8
使用SJSA-1异种移植物模型进行体内功效研究
用胰蛋白酶(0.05%)-EDTA(0.53mM)(GIBCOTM，Invitrogen Corp.)采集SJSA-1肿瘤细胞，加入生长培养基并将细胞置于冰上。将细胞样品与锥虫蓝(GIBCOTM，Invitrogen Corp.)以1:1混合，并用血细胞计数器计数以确定活/死细胞的数量。细胞用1×PBS (GIBCOTM，Invitrogen Corp.)洗涤一次，并重新混悬于PBS中。对于Matrigel注射，在PBS中洗涤后，将细胞重新混悬于PBS和Matrigel(BD Biosciences，Invitrogen Corp.)的1:1的冰冷混合物中，使得Matrigel蛋白终浓度为5mg/ml。以每0.1ml 5x 106个细胞与Matrigel将SJSA-1肿瘤接种入C.B-17SCID小鼠中。使用27号针头将细胞皮下注射入各小鼠的胁腹部分。
使用测径器二维测量小鼠中生长肿瘤的尺寸。肿瘤体积(mm3)=(A×B2)/2，其中A和B分别为肿瘤长度和宽度(mm)。治疗中，每周测量三次肿瘤体积和体重。治疗停止后，每周至少一次测量肿瘤体积(图7、9和11)和体重(图8、10和12)。再饲养小鼠60天，以进一步观察肿瘤生长和毒性。
治疗开始前，使肿瘤生长到60-140mm3的体积，在此时血管对肿瘤的供应应已建立。将具有可接受尺寸范围的肿瘤的小鼠随机地分为8只小鼠的治疗组(用实验化合物治疗)和10只小鼠的对照组。口服给予实验化合物，每天给予一次，给予2-3周。对照组只接受载体(10%PEG 400：3%Cremophor：87%PBS)。MDM2抑制剂对SJSA-1肿瘤的体内功效分析见于表27-29中。
这些数据表明本发明的MDM2抑制剂具有良好的体内功效，特别是MI-519-63、MI-773和MI-519-64，而动物的体重无明显减少。
表27
表28
表29
实施例9
MI-519-64和MI-519-65的合成
步骤1：3-氧代环丁烷甲酸苄酯(2)
将BnBr加入化合物1和K2CO3在150mL乙腈中的混合物中。将所述混合物在室温搅拌24小时并滤出固体。除去溶剂，且通过柱色谱纯化残余物，得到化合物2。
步骤2：3-羟基-3-甲基环丁烷甲酸苄酯(3和4)
在-78°C将MeMgCl的THF溶液滴加至化合物2的乙醚溶液中，并将所述混合物在相同的温度搅拌半小时。TLC监测显示起始原料消失后，通过加入NH4Cl水溶液终止反应。水相用乙酸乙酯萃取三次，且合并的有机相用盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。滤出固体和除去溶剂。通过柱色谱纯化残余物，得到化合物3和4(基于TLC分析比例为5:1)。
步骤3：3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基环丁烷甲酸苄酯(5和6)
向化合物3和4在DMF(10mL)中的混合物中加入咪唑和TBSCl，且所得混合物在80°C搅拌30小时。冷却至室温后，加入水，且水相用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机相用盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。滤出固体和除去溶剂。通过柱色谱纯化残余物，得到化合物5和6。
步骤4：3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基环丁烷甲酸(7和8)
向化合物5和6在异丙醇中的混合物中加入Pd/C。所得混合物在1大气压的氢气下搅拌1小时。TLC显示起始原料消失，并滤出固体。除去溶剂，得到化合物7和8。
步骤5：3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基环丁基氨基甲酸苄酯(9和10)
向在0°C搅拌的化合物7和8以及Et3N在丙酮中的溶液中滴加ClCOOEt。所得混合物在0°C搅拌30分钟。加入NaN3的水溶液，且所得混合物在0°C再搅拌20分钟。加水，且水相用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机相用盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。除去溶剂，且残余物溶解于甲苯中。加入苄醇和NaHCO3。所得混合物在80°C搅拌2小时。除去全部溶剂，且通过柱色谱纯化残余物，获得两种异构体9和10，其比例为5:1。
步骤6：3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基环丁胺(11)
向主要异构体9和NaHCO3在异丙醇中的混合物中加入Pd/C，且所得混合物在1大气压的氢气下搅拌1小时。滤出固体和除去溶剂，得到化合物11。
步骤7：3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基环丁胺(12)
向次要异构体10和NaHCO3在异丙醇中的混合物中加入Pd/C，且所得混合物在1大气压的氢气下搅拌1小时。滤出固体和除去溶剂，得到化合物12。
步骤8：MI-519-64
向化合物11的THF溶液中加入化合物13，且所得溶液搅拌过夜。除去溶剂，并将由此获得的残余物溶解于CH3CN/H2O(1:1)中。加入CAN并搅拌该反应混合物30分钟。加水，且水相用乙酸乙酯萃取三次。干燥合并的有机层(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残余物，得到化合物14。将化合物14溶解于甲醇，加入12M HCl水溶液，且该反应混合物在室温搅拌1小时。除去溶剂，且残余物通过HPLC纯化，得到MI-519-64，其为TFA盐。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ7.54-7.52(m，1H)，7.42-7.38(m，1H)，7.23-7.18(m，1H)，6.88-6.75(m，3H)，5.04(d，J=9.9Hz，1H)，4.45(d，J=9.9Hz，1H)，4.19-4.16(m，1H)，3.92-3.89(m，1H)，2.42-2.11(m，2H)，2.10-1.87(m，3H)，1.32-1.24(m，4H)，0.82(s，9H)；MS(ESI)m/z548[M+H]+。
步骤9：MI-519-65
向化合物12在THF的溶液中加入化合物13，所得溶液搅拌过夜。除去溶剂，且将残余物溶解于CH3CN/H2O(1:1)中。加入CAN，并将该反应混合物搅拌30分钟。加水，且水相用乙酸乙酯萃取三次。干燥合并的有机层(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残余物，得到化合物15。将化合物15溶解于甲醇中，加入12M HCl水溶液，且将该反应混合物在室温搅拌1小时。除去溶剂，且残余物通过HPLC纯化，得到MI-519-65，其为TFA盐。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ7.50(m，1H)，7.44-7.38(m，1H)，7.24-7.20(m，1H)，6.89-6.88(m，1H)，6.80(m，1H)，6.71(m，1H)，4.91-4.88(m，1H)，4.40-4.36(m，2H)，4.10-4.06(m，1H)，2.41-2.33(m，2H)，2.07-1.87(m，3H)，1.25-1.21(m，4H)，0.82(s，9H)；MS(ESI)m/z 548[M+H]+。
实施例10
MI-758的合成
反应方程式7
步骤1：((3-甲基丁-3-烯基氧基)甲基)苯(1)
将BnBr加入在冰浴中冷却的醇和NaH在DMF中的混合物中。将所述混合物在室温搅拌过夜并滤出固体。除去溶剂，且通过柱色谱纯化残余物，得到化合物1。
步骤2：(S)-4-(苄基氧基)-2-甲基丁烷-1,2-二醇(2)
将化合物1加入冰浴冷却的AD-mix-α在tBuOH/H2O(1:1)中的溶液中。TLC监测显示起始原料消失后，通过加入Na2SO3终止该反应。水相用乙酸乙酯萃取三次，且合并的有机相用盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。滤出固体和除去溶剂。通过柱色谱纯化残余物，得到化合物2。
步骤3：(S)-4-(2-(苄基氧基)乙基)-2,2,4-三甲基-1,3-二氧杂环戊烷(3)
向化合物2和2,2-二甲氧基丙烷在DCM的混合物中加入p-TSA。TLC监测显示起始原料消失后，加入NaHCO3水溶液，然后用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机相用盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。滤出固体和除去溶剂。通过柱色谱纯化残余物，得到化合物3。
步骤4：(S)-2-(2,2,4-三甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)乙醇(4)
向化合物3的MeOH溶液中加入Pd/C。所得混合物在1大气压的氢气下搅拌过夜。TLC显示起始原料消失并滤出固体。除去溶剂，得到化合物4。
步骤5：4-甲基苯磺酸[(S)-2-(2,2,4-三甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)乙基]酯(5)
向化合物4和Et3N的DCM溶液中滴加TsCl。所得混合物在0°C搅拌30分钟。滤出固体和除去溶剂。通过柱色谱纯化残余物，得到化合物5。
步骤6：(S)-N-苄基-2-(2,2,4-三甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)乙胺(6)
将化合物5和BnNH2的THF溶液加热回流过夜。除去溶剂。通过柱色谱纯化残余物，得到化合物6。
步骤7：(S)-2-(2,2,4-三甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)乙胺(7)
向化合物6的MeOH溶液中加入Pd/C。所得混合物在1大气压的氢气下搅拌过夜。TLC显示起始原料消失，滤出固体。除去溶剂，得到化合物7。
步骤8：MI-758(11)
向化合物7的THF溶液中加入化合物8，且所得溶液搅拌过夜。除去溶剂，且将残余物溶解于CH3CN/H2O(1:1)中。加入CAN，并将该反应混合物搅拌5分钟。加入K2CO3，且水相用乙酸乙酯萃取三次。干燥合并的有机层(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残余物，得到化合物11。将化合物11溶解于二烷中，加入4M HCl的二烷溶液，并在室温将该反应混合物搅拌0.5小时。除去溶剂，且残余物通过HPLC纯化，得到MI-758，其为TFA盐。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.44(s，1H)，7.72(d，J=8.4Hz，1H)，7.19-7.36(m，3H)，7.09(d，J=7.5Hz，1H)，6.89(d，J=6.0Hz，1H)，5.28(d，J=11.1Hz，1H)，4.50(d，J=6.6Hz，1H)，4.16(d，J=11.1Hz，1H)，3.30(s，2H)，1.94(dd，J=8.4，15.3Hz，1H)，1.47-1.68(m，2H)，1.18(d，J=15.6Hz，1H)，1.07(s，3H)，0.93(s，9H)。
实施例11
MI-773的合成
反应方程式8
步骤1
向搅拌的吲哚酮1(4.19g，25mmol)在甲醇(50mL)中的溶液中加入醛2(3.96g，25mmol)和哌啶(2.45mL，25mmol)。在室温搅拌该反应混合物3小时，并收集黄色沉淀物，依次用甲醇、己烷和乙醚洗涤并干燥，得到化合物3(6.25g，产率81%)。
步骤2
向化合物3(6.25g，21mmol)的甲苯(75ml)溶液中加入化合物4(5.43g，21mmol)、化合物5(2.15g，21mmol)和分子筛(4g)。将该反应混合物加热回流过夜并过滤。将滤液蒸发，并通过硅胶快速柱色谱(正己烷/乙酸乙酯=9:1至5:1)纯化残余物，得到化合物6(8.78g，产率65%)。
步骤3
在室温搅拌化合物6(965mg，1.5mmol)和胺7(346mg，3mmol)在5ml的THF中的溶液2天，并减压除去溶剂。通过硅胶快速柱色谱(正己烷/乙酸乙酯=1:1至1:4)纯化残余物，得到化合物8(819mg，产率72%)。
步骤4
向冰浴冷却的化合物8(800mg，1.05mmol)在CH3CN(8ml)、H2O(4ml)和丙酮(4ml)中的溶液中加入CAN(硝酸铈铵)(1.15g，2.1mmol)。该反应的进行通过TLC监测。当所有起始原料消失时(约5分钟)，加入100mg的NaHCO3粉末，并用50ml的乙酸乙酯稀释该反应混合物。有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷/甲醇/三乙胺=200:1:1至200:10:1)纯化该残余物，得到(2'R,3S,4'S，5'R)-6-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-((反式-4-羟基环己基)-2'-新戊基-2-氧代螺[二氢吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(MI-773)(402mg，产率68%)。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ7.50(t，J=6.3Hz，1H)，7.39(t，J=6.9Hz，1H)，7.19(t，J=7.8Hz，1H)，6.88(d，J=1.8Hz，1H)，6.81(dd，J=1.8，8.1Hz，1H)，6.75(d，J=8.1Hz，1H)，4.40(d，J=9.6Hz，1H)，4.10(dd，J=2.7，7.5Hz，1H)，3.58-3.78(m，1H)，3.36-3.58(m，2H)，1.75-2.10(m，4H)，1.15-1.45(m，4H)，0.90(d，J=5.4Hz，1H)，0.83(s，9H)，0.81(d，J=11.4Hz，1H)。
已完整地公开了本发明提供的方法、化合物和组合物，本领域技术人员将理解，在不影响本文提供的方法、化合物和组合物或其任何实施方案的范围的情况下，能够在较宽和同等范围的条件、制剂和其他参数之下实施本发明。本文引用的所有专利、专利申请和出版物均整体引入并作参考。

Claims (13)

1.化合物或其药学上可接受的盐，其具有式XIX:
其中
R1b和R1c独立地选自氢、氟和氯；
R3为C1-C10烷基；
R26a、R26b和R26c独立地选自氢、氟和氯；和
R27选自：
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为-CH2C(CH3)3。
3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物选自：
4.权利要求3的化合物或其药学上可接受的盐，其为：
5.药物组合物，其包含权利要求1-4中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载剂。
6.权利要求1-4中任一项的化合物在制备用于治疗过度增殖性疾病的药物中的用途。
7.权利要求6的用途，其中所述过度增殖性疾病为癌症。
8.权利要求7的用途，其中所述癌症选自黑色素瘤、肺癌、肉瘤、结肠癌、前列腺癌、绒毛膜癌、乳腺癌、视网膜母细胞瘤、胃癌、淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。
9.权利要求8的用途，其中所述癌症选自脂肪肉瘤和黑色素瘤。
10.权利要求8的用途，其中所述白血病为急性髓细胞性白血病。
11.权利要求7的用途，其中所述化合物与一种或多种抗癌剂一起给药。
12.试剂盒，其包含权利要求1-4中任一项的化合物和用于将所述化合物给予患有癌症的患者的说明书。
13.权利要求12的试剂盒，其还包含一种或多种抗癌剂。
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