CN102702346A

CN102702346A - 一种从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白的方法及所得到的产品

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Publication number: CN102702346A
Application number: CN2012102055635A
Authority: CN
Inventors: 周鹏; 李天成; 区杨; 梁丽; 刘小鸣
Original assignee: Jiangnan University
Current assignee: Jiangnan University
Priority date: 2012-06-20
Filing date: 2012-06-20
Publication date: 2012-10-03
Anticipated expiration: 2032-06-20
Also published as: CN102702346B

Abstract

本发明涉及一种从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白的方法以及采用所述方法得到的酸溶性胶原蛋白产品。该方法包括除去鱼皮杂蛋白、除去鱼皮脂肪、提取酸溶性胶原蛋白、透析与冷冻干燥等步骤。采用本发明方法得到的酸溶性胶原蛋白保持了完整结构，无降解；变性温度与大型陆生动物来源的胶原蛋白相近，可以作为其替代品，具有潜在的应用价值。

Description

一种从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白的方法及所得到的产品

【技术领域】

本发明属于食品技术领域。更具体地，本发明涉及一种从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白的方法，还涉及采用所述方法得到的酸溶性胶原蛋白产品。

【背景技术】

胶原蛋白(Collagen)是一种具有三螺旋结构的结构蛋白，并广泛用于食品、药品、生物医药和化妆品行业中。传统上，牛和猪的皮、骨是胶原蛋白的主要来源，但随着疯牛病(Bovine spongiform encephalopathy，BSE)和口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)的爆发，使人们对这些大型陆生动物来源的胶原蛋白及其相关产品的安全性产生担忧。另外，从猪和非宗教性宰杀牛获得的胶原蛋白在伊斯兰教传统上也是不可接受的。由于这种安全性和宗教性上的考虑，人们开始将目光投向水生动物，从鱼皮、鱼鳞、鱼骨和鱼鳔中提取胶原蛋白，从而克服上述缺点，并满足食品、化妆品等行业对胶原蛋白的需求。

例如，CN 200510047408公开一种酸溶性鱼皮胶原蛋白，其提取方法是以海鱼皮为原料，经切碎、NaCl溶液浸泡去杂质、乙醇丙酮脱脂的处理，进而用柠檬酸和醋酸混合液浸泡提取后离心分离得酸溶性鱼皮胶原溶液，再经NaCl固体盐析得酸溶性鱼皮胶原蛋白沉淀，最后将酸溶性鱼皮胶原蛋白沉淀溶解于醋酸溶液中，在Na₂HPO₄(pH8.6)中透析，或经分子量大于6万的醋酸纤维中空纤维膜进行超滤处理,透析或超滤得到的固体真空冷冻干燥得到其产品。胶原蛋白制品纯度达≥97%。胶原蛋白中含有丰富的甘氨酸、脯氨酸及羟脯氨酸，其水解产物中还有生理活性肽,胶原蛋白分子量大于60000。CN 200710024384开了一种淡水鱼皮胶原蛋白的制备方法。该方法包括用含有0.005%-2%(V/V)双氧水的0.001-0.2M碱液浸泡3-48h；再用有机试剂清洗、浸泡；然后用含有0.01%-2%(M/V)胃蛋白酶的pH1.0-5.0酸液提取12-64h，再用30-100mm膜过滤，接着用1-30mm膜过滤；最后向滤液中加入5M NaCl溶液至0.8-2.0M，离心所得沉淀用0.001-0.1M乙酸溶解，蒸馏水透析，冷冻干燥，得到胶原蛋白固体。CN 200910131265以鱼皮为原料料，并利用生物酶切技术用脂肪酶脱脂，并利用生物酶切技术用蛋白酶酶解从鱼皮中提取鱼胶原蛋白。该方法在除脂和提取时将温度升到70℃和90℃，这样会导致胶原蛋白降解，生成胶原蛋白肽。CN 201010513190公开了一种利用鱼皮提取胶原蛋白的方法，该方法包括原料处理，异丙醇脱脂，氯化钠去除非胶原蛋白，醋酸浸提同时加酸性蛋白酶酶解，离心浓缩，干燥，得到鱼皮胶原蛋白。CN 201010170443公开了一种从鱼皮中提取鱼胶原蛋白的方法，该方法包括(1)胶原蛋白提取：将鱼皮加入蛋白酶进行酶解，然后灭酶，得到胶原蛋白粗提取液；(2)脱色：在得到的胶原蛋白粗提取液中，加入净活性炭搅拌进行脱色脱腥，过滤得到胶原蛋白清液；(3)除重金属：将得到的胶原蛋白清液流过除砷树脂，然后用纯化水冲除砷树脂交换柱，收集洗脱液；(4)成品：将洗脱液蒸发浓缩，喷雾干燥，得到分子量为2000～3000道尔顿的鱼皮胶原蛋白，它应该是胶原蛋白肽。CN201010248083公开了一种低温提取高品质胶原蛋白的方法，该方法包括取新鲜或干燥的鱼鳞等，在温度4～49℃下用酶解液进行酶解处理，然后将酶解液过滤得到胶原蛋白液体，经干燥得到胶原蛋白粉末。该方法使用各种酶混合物，各种酶的酶切位点必然不一样，而且酶解处理时温度达到49℃，得到的产物应该是胶原蛋白片段。这些方法都采用了酶处理方法，如果在提取过程中只加入一种酶，例如胃蛋白酶，也可以得到具有较完整空间结构和一级结构的胶原蛋白大分子，但与酸溶性胶原蛋白相比，将会缺少端肽，也就是酶会有轻微的降解作用。

CN 200910036677公开了一种鲟鱼皮胶原蛋白的提取方法，其步骤如下：(1)取鲟鱼皮切块，先用碱溶液浸泡，漂洗后再用酸溶液浸泡，然后取出漂洗；(2)经前处理的鲟鱼皮加水在45℃～55℃下浸提，过滤，去除杂质，得胶原蛋白提取液。(3)胶原蛋白提取液经冷冻离心得鲟鱼皮胶原蛋白粉末。该鲟鱼皮胶原蛋白粉末应该是明胶，不是胶原蛋白。

因此，本发明人在总结现有技术的基础上，经过大量实验研究，终于完成了本发明。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白的方法。

本发明的另一个目的是由所述方法得到的酸溶性胶原蛋白。

[技术方案]

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白的方法。

该提取方法的步骤如下：

步骤A：除去鱼皮杂蛋白

按照以克计鱼皮与以毫升计氢氧化钠水溶液的比1～5：20～40，所述鱼皮用0.05～0.5M氢氧化钠水溶液在温度4～20℃下处理32～40小时，得到除去杂蛋白的鱼皮；

步骤B：除去鱼皮脂肪

按照以克计除杂蛋白鱼皮与以毫升计除脂溶液的比1～5：10～20，将步骤A）得到的鱼皮接着在温度4～20℃下使用选自0.05～0.2M氢氧化钠水溶液、正己烷、以体积计8～12%正丁醇水溶液、无水乙醇或无水乙醚的除脂溶液处理20～28小时，得到除脂肪鱼皮；

步骤C：提取酸溶性胶原蛋白

按照以克计除脂肪鱼皮与以毫升计醋酸水溶液的比1～5：40～80，将步骤B)得到的除脂肪鱼皮在温度4～20℃下用0.1～1.0M醋酸水溶液处理鱼皮65-80小时，然后进行离心得到胶原蛋白粗提取液；接着，该提取液在搅拌下用氯化钠晶体进行盐析，静置过夜，离心得到酸溶性胶原蛋白；

步骤D：透析

步骤C得到的酸溶性胶原蛋白用0.4～0.8M醋酸水溶液溶解，其以克计酸溶性胶原蛋白与以毫升计醋酸水溶液的比1：4～6，得到一种酸溶性胶原蛋白溶液，然后装入透析袋，分别用0.05～0.2M醋酸与超纯水进行透析8～12小时；

步骤E：冷冻干燥

将步骤D）得到的透析液进行冷冻干燥，得到酸溶性胶原蛋白产品。

根据本发明的一种优选实施方式，在步骤A)用氢氧化钠水溶液处理过程中，每处理11～13小时就更换一次氢氧化钠水溶液。

根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤B)用除脂溶液处理过程中，每处理11～13小时就更换一次所述的除脂溶液。

根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤C)，使用氯化钠晶体进行盐析至2.0M。

根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤C)，在盐析后得到的盐析液再在温度4℃与离心力10000g的条件下离心18～25分钟，得到一种粗酸溶性胶原蛋白。

根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤D)，所述的醋酸与超纯水透析分别进行3～6次。

根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤E)，在步骤D）得到的透析液在温度-10℃~-32℃的条件下进行冷冻干燥。

本发明还涉及采用所述方法得到的酸溶性胶原蛋白产品。所述产品的酸溶性胶原蛋白含量是以所述产品总重量计97%以上，所述酸溶性胶原蛋白的分子量是390,000~400,000道尔顿。

下面将更详细地描述本发明。

本发明涉及一种从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白的方法。

该提取方法的步骤如下：

新鲜草鱼、鲤鱼、鲶鱼、鲢鱼或鲫鱼等鱼在冷室内宰杀并剥皮，并将皮上残留的鱼肉剔除干净。然后，用冰水将鱼皮洗净，剪成小块并置于冰箱内备用。

步骤A：除去鱼皮杂蛋白

按照以克计鱼皮与以毫升计氢氧化钠水溶液的比1～5：20～40，所述鱼皮用0.05～0.5M氢氧化钠水溶液在温度4～20℃下处理32～40小时，得到除去杂蛋白的鱼皮。

在处理过程中应该不断地搅拌其氢氧化钠水溶液，其搅拌速度一般控制在100～150rpm。

以克计鱼皮与以毫升计氢氧化钠水溶液的比优选地是1～4：25～35。

更优选地，以克计鱼皮与以毫升计氢氧化钠水溶液的比是2～3：28～32。

如果使用低于0.05M氢氧化钠水溶液处理所述鱼皮时，则无法有效地除去鱼皮杂蛋白；如果使用高于0.5M氢氧化钠水溶液处理所述鱼皮时，则会使胶原蛋白降解。因此，氢氧化钠水溶液浓度0.05～0.5M是合适的。

在用氢氧化钠水溶液处理的过程中，每处理11～13小时就需要更换一次氢氧化钠水溶液，其目的在于有效地除去鱼皮杂蛋白。

本发明人采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯胺凝胶电泳(Laemmli,U.K.，Cleavage of structural proteins during assembly of head of bacteriophage T4.《Naure》,227,680-685(1970))检测碱处理液中是否有胶原蛋白降解物，双缩脲法(Gornall,A.G.,Bardawill,C.J.,&David,M.M.，Determination ofserum protein by means of the biuret reaction，《Jounal of biological Chemistry》，177(2)，751-766(1949))和Woessner法(Woessner J.F.，The determination ofhydroxyproline in tissue and protein samples containing small proportions ofthis imino acid，《Archives of biochemistry and biophysics》，93，440-447(1961))检测碱处理液中蛋白质含量和羟脯氨酸含量；同时，我们也使用同样的方法检测按照上述条件处理后提取得到的胶原蛋白，观察其是否有降解，并确定纯度。

步骤B：除去鱼皮脂肪

在用氢氧化钠水溶液处理之后接着需要除去鱼皮脂肪。

按照以克计除杂蛋白鱼皮与以毫升计除脂溶液的比1～5：10～20，将步骤A）得到的鱼皮接着在温度4～20℃下使用选自0.05～0.2M氢氧化钠水溶液、正己烷、以体积计8～12%正丁醇水溶液、无水乙醇或无水乙醚的除脂溶液处理20～28小时，得到除脂肪鱼皮。

鱼皮的脂肪一般是由棕榈酸、油酸、二十碳五烯酸(EPA)组成的。针对鱼皮脂肪的特性，本发明可以采用多种除脂溶液进行处理，使其鱼皮脂肪含量明显降低。这样处理既有助于实现提取酸溶性胶原蛋白，又能够克服在现有技术中因使用各种酶除脂带来的一些技术缺陷。

使用上述除脂溶液进行处理的时间可以是2～4小时。

在这个步骤用除脂溶液处理过程中，每处理11～13小时就需要更换一次所述的除脂溶液。

在本发明中，所述的鱼皮脂肪含量是采用索氏抽提方法(AOAC Method963.15,Association of Official Chemists,USA,1990)测定。

步骤C：提取酸溶性胶原蛋白

按照以克计除脂肪鱼皮与以毫升计醋酸水溶液的比1～5：40～80，将步骤B)得到的除脂肪鱼皮在温度4～20℃下用0.1～1.0M醋酸水溶液处理鱼皮65-80小时，然后进行离心得到胶原蛋白粗提取液；接着，该提取液在搅拌下用氯化钠晶体进行盐析，静置过夜，离心得到酸溶性胶原蛋白。

使用醋酸水溶液处理鱼皮的作用在于使鱼皮中的酸溶性胶原蛋白溶解，游离于其醋酸水溶液中，同时鱼皮中的其它成分，例如色素、酶或前期可能未除净的杂蛋白等也被溶解于醋酸水溶液中，因此，醋酸水溶液处理鱼皮得到的胶原蛋白粗提取液需要进行盐析。盐析技术是化工化学技术领域里通常采用的一种分离技术，本发明使用氯化钠晶体进行盐析，使用氯化钠晶体在低温搅拌条件下进行盐析至2.0M。盐析液静置过夜后，再在温度4℃与离心力10000g的条件下离心18～25分钟，得到一种粗酸溶性胶原蛋白。

步骤D：透析

步骤C得到的酸溶性胶原蛋白用0.4～0.8M醋酸水溶液溶解，其以克计酸溶性胶原蛋白与以毫升计醋酸水溶液的比1：4～6，得到一种酸溶性胶原蛋白溶液，然后装入透析袋，分别用0.05～0.2M醋酸与超纯水进行透析8～12小时。

所述的透析袋是目前市场上销售的产品，为上海绿鸟科技发展有限公司销售的型号为RS-34-7K的透析袋。

所述的透析是在低温搅拌的条件下分别用0.05～0.2M醋酸与超纯水进行的。

优选地，所述的醋酸与超纯水透析分别进行3～6次。

步骤E：冷冻干燥

使用目前市场上销售的冷冻干燥箱对所述透析液在温度-10℃～-32℃的条件下进行冷冻干燥，干燥直至其酸溶性胶原蛋白产品恒重。

本发明还涉及采用本发明方法所得到的酸溶性胶原蛋白产品。

采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法，测定了所述产品酸溶性胶原蛋白的分子量是390,000~400,000道尔顿。

采用Wossener法测定了所述产品的羟脯氨酸含量从而换算出胶原蛋白含量，再使用双缩脲法测定产品中总蛋白含量，从而确定产品浓度。通过计算，本发明提取酸溶性胶原蛋白产品的纯度高达97%以上。

根据下述公式计算：

得率=最终冻干产品重/鱼皮重(湿基)×100%

采用本发明方法提取酸溶性胶原蛋白的提取率是达到18-20%。比现有技术的提取率一般高3-5%。

本发明产品酸溶性胶原蛋白可以用作絮凝剂、粘合剂、胶原蛋白海绵、胶原蛋白纤维、固定化酶材料和人工皮肤。

[有益效果]

本发明是提供一种从淡水鱼鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白的技术方案。此方案能够更安全，更经济地从鱼皮中提取胶原蛋白以用于食品、化妆品和生物医药领域，为淡水鱼资源的综合利用提供一种新的途径。

【具体实施方式】

通过下述实施例将会更好地理解本发明。

实施例1：从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白

新鲜草鱼在冷室内宰杀并剥皮，并将皮上残留的鱼肉剔除干净。然后，用冰水将鱼皮洗净，剪成小块并置于冰箱内备用。

该实施步骤如下：

步骤A：除去鱼皮杂蛋白

按照以克计鱼皮与以毫升计氢氧化钠水溶液的比1：20，所述鱼皮用0.05M氢氧化钠水溶液在温度4℃下处理35小时，得到除去杂蛋白的鱼皮。

步骤B：除去鱼皮脂肪

按照以克计除杂蛋白鱼皮与以毫升计除脂溶液的比1：10，将步骤A）得到的鱼皮接着在温度4℃下用正己烷除脂溶液处理20小时，得到除脂肪鱼皮。

步骤C：提取酸溶性胶原蛋白

按照以克计除脂肪鱼皮与以毫升计醋酸水溶液的比1：40，将步骤B)得到的除脂肪鱼皮在温度4℃下用0.1M醋酸水溶液处理鱼皮65小时，然后进行离心得到胶原蛋白粗提取液；接着，该提取液在搅拌下用氯化钠晶体进行盐析至2.0M，盐析液静置过夜，在温度4℃与离心力10000g的条件下离心18分钟，得到酸溶性胶原蛋白。

步骤D：透析

步骤C得到的酸溶性胶原蛋白用0.4M醋酸水溶液溶解，其以克计酸溶性胶原蛋白与以毫升计醋酸水溶液的比1：4，得到一种酸溶性胶原蛋白溶液，然后装入上海绿鸟科技发展有限公司型号为RS-34-7K的透析袋，分别用0.05M醋酸与超纯水在低温(4℃)搅拌条件下进行透析8小时。

步骤E：冷冻干燥

使用目前市场上销售的冷冻干燥箱对将步骤D）得到的透析液进行冷冻干燥，干燥直至其酸溶性胶原蛋白产品恒重。

得到酸溶性胶原蛋白产品采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，测定了所述产品酸溶性胶原蛋白的分子量是390,000道尔顿。

采用双缩脲法和Woessner法测定了所述产品酸溶性胶原蛋白的含量是以所述产品总重量计的98.02%。

根据下述公式计算：

得率=最终冻干产品重/鱼皮重(湿基)×100%

采用本发明方法提取酸溶性胶原蛋白的提取率是18.76%。

实施例2：从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白

新鲜鲤鱼在冷室内宰杀并剥皮，并将皮上残留的鱼肉剔除干净。然后，用冰水将鱼皮洗净，剪成小块并置于冰箱内备用。

该实施步骤如下：

步骤A：除去鱼皮杂蛋白

按照以克计鱼皮与以毫升计氢氧化钠水溶液的比4：35，所述鱼皮用0.1M氢氧化钠水溶液在温度10℃下处理32小时，得到除去杂蛋白的鱼皮。

步骤B：除去鱼皮脂肪

按照以克计除杂蛋白鱼皮与以毫升计除脂溶液的比4：16，将步骤A）得到的鱼皮接着在温度10℃下用无水乙醇除脂溶液处理26小时，得到除脂肪鱼皮。

步骤C：提取酸溶性胶原蛋白

按照以克计除脂肪鱼皮与以毫升计醋酸水溶液的比4：60，将步骤B)得到的除脂肪鱼皮在温度10℃下用0.6M醋酸水溶液处理鱼皮75小时，然后进行离心得到胶原蛋白粗提取液；接着，该提取液在搅拌下用氯化钠晶体进行盐析至2.0M，盐析液静置过夜，在温度4℃与离心力10000g的条件下离心25分钟，得到酸溶性胶原蛋白。

步骤D：透析

步骤C得到的酸溶性胶原蛋白用0.5M醋酸水溶液溶解，其以克计酸溶性胶原蛋白与以毫升计醋酸水溶液的比1：5，得到一种酸溶性胶原蛋白溶液，然后装入上海绿鸟科技发展有限公司型号为RS-34-7K的透析袋，分别用0.16M醋酸与超纯水在低温(4℃)搅拌条件下进行透析10小时。

步骤E：冷冻干燥

得到酸溶性胶原蛋白产品采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，测定了所述产品酸溶性胶原蛋白的分子量是396,000道尔顿。

采用双缩脲法和Woessner法，测定了所述产品酸溶性胶原蛋白的含量是以所述产品总重量计的97.92%。

根据下述计算公式：

得率=最终冻干产品重/鱼皮重(湿基)×100%

采用本发明方法提取酸溶性胶原蛋白的提取率是19.32%。

实施例3：从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白

该实施步骤如下：

步骤A：除去鱼皮杂蛋白

按照以克计鱼皮与以毫升计氢氧化钠水溶液的比2：32，所述鱼皮用0.2M氢氧化钠水溶液在温度15℃下处理38小时，得到除去杂蛋白的鱼皮。

步骤B：除去鱼皮脂肪

按照以克计除杂蛋白鱼皮与以毫升计除脂溶液的比2：12，将步骤A）得到的鱼皮接着在温度15℃下使用无水乙醚除脂溶液处理24小时，得到除脂肪鱼皮。

步骤C：提取酸溶性胶原蛋白

按照以克计除脂肪鱼皮与以毫升计醋酸水溶液的比2：50，将步骤B)得到的除脂肪鱼皮在温度15℃下用0.4M醋酸水溶液处理鱼皮70小时，然后进行离心得到胶原蛋白粗提取液；接着，该提取液在搅拌下用氯化钠晶体进行盐析至2.0M，盐析液静置过夜，在温度4℃与离心力10000g的条件下离心20分钟，得到酸溶性胶原蛋白。

步骤D：透析

步骤C得到的酸溶性胶原蛋白用0.6M醋酸水溶液溶解，其以克计酸溶性胶原蛋白与以毫升计醋酸水溶液的比1：6，得到一种酸溶性胶原蛋白溶液，然后装入上海绿鸟科技发展有限公司型号为RS-34-7K透析袋，分别用0.2M醋酸与超纯水在低温(4℃)搅拌条件下进行透析9小时。

步骤E：冷冻干燥

使用目前市场上销售的冷冻干燥箱对将步骤D）得到的透析液在温度进行冷冻干燥，干燥直至其酸溶性胶原蛋白产品恒重。

得到酸溶性胶原蛋白产品采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，测定了所述产品酸溶性胶原蛋白的分子量是393,000道尔顿。

采用双缩脲法和Woessner法，测定了所述产品酸溶性胶原蛋白的含量是以所述产品总重量计的98.06%。

根据下述公式计算：

得率=最终冻干产品重/鱼皮重(湿基)×100%

采用本发明方法提取酸溶性胶原蛋白的提取率是20.06%。

实施例4：从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白

新鲜鲫鱼在冷室内宰杀并剥皮，并将皮上残留的鱼肉剔除干净。然后，用冰水将鱼皮洗净，剪成小块并置于冰箱内备用。

该实施步骤如下：

步骤A：除去鱼皮杂蛋白

按照以克计鱼皮与以毫升计氢氧化钠水溶液的比5：40，所述鱼皮用0.5M氢氧化钠水溶液在温度20℃下处理40小时，得到除去杂蛋白的鱼皮。

步骤B：除去鱼皮脂肪

按照以克计除杂蛋白鱼皮与以毫升计除脂溶液的比5：20，将步骤A）得到的鱼皮接着在温度20℃下用以体积计12%正丁醇水溶液除脂溶液处理28小时，得到除脂肪鱼皮。

步骤C：提取酸溶性胶原蛋白

按照以克计除脂肪鱼皮与以毫升计醋酸水溶液的比5：80，将步骤B)得到的除脂肪鱼皮在温度20℃下用1.0M醋酸水溶液处理鱼皮80小时，然后进行离心得到胶原蛋白粗提取液；接着，该提取液在搅拌下用氯化钠晶体进行盐析至2.0M，盐析液静置过夜，在温度4℃与离心力10000g的条件下离心24分钟，得到酸溶性胶原蛋白。

步骤D：透析

步骤C得到的酸溶性胶原蛋白用0.8M醋酸水溶液溶解，其以克计酸溶性胶原蛋白与以毫升计醋酸水溶液的比1：6，得到一种酸溶性胶原蛋白溶液，然后装入上海绿鸟科技发展有限公司型号为RS-34-7K透析袋，分别用0.2M醋酸与超纯水在低温(4℃)搅拌条件下进行透析12小时。

步骤E：冷冻干燥

得到酸溶性胶原蛋白产品采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，测定了所述产品酸溶性胶原蛋白的分子量是395,000道尔顿。

采用双缩脲法和Woessner法，测定了所述产品酸溶性胶原蛋白的含量是以所述产品总重量计的98.49%。

根据下述公式计算：

得率=最终冻干产品重/鱼皮重(湿基)×100%

采用本发明方法提取酸溶性胶原蛋白的提取率是19.33%。

Claims

1.一种从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白的方法，其特征在于该方法的步骤如下：

步骤A：除去鱼皮杂蛋白

步骤B：除去鱼皮脂肪

步骤C：提取酸溶性胶原蛋白

步骤D：透析

步骤E：冷冻干燥

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤A)用氢氧化钠水溶液处理过程中，每处理11～13小时就更换一次氢氧化钠水溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤B)用除脂溶液处理过程中，每处理11～13小时就更换一次所述的除脂溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤C)，使用氯化钠晶体进行盐析至2.0M。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤C)，在盐析后得到的盐析液再在温度4℃与离心力10000g的条件下离心18～25分钟，得到一种粗酸溶性胶原蛋白。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤D)，所述的醋酸与超纯水透析分别进行3～6次。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤E)，在步骤D）得到的透析液在温度-10℃~-32℃的条件下进行冷冻干燥。

8.根据权利要求1-7中任一项权利要求所述方法得到的酸溶性胶原蛋白产品，其特征在于所述产品的酸溶性胶原蛋白含量是以所述产品总重量计97%以上，所述酸溶性胶原蛋白的分子量是390,000~400,000道尔顿。