CN103789381B - 一种鱼胶原蛋白快速提取的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鱼胶原蛋白快速提取的方法，在鱼胶原蛋白的前期脱脂处理和提取过程中，均采用酶解法，缩短了生产时间。提取过程绿色环保，快速方便，鱼胶原蛋白得率高，杂质少。
Description
技术领域
本发明属于生物制品制备技术领域，特别涉及一种鱼胶原蛋白快速提取的方法。
背景技术
胶原蛋白是结缔组织中一种具有丰富生理功能的重要结构蛋白，它具有的独特的大分子螺旋结构和聚集态结构，使其具有一定的热稳定性和很高的机械韧性和强度，赋予了它用于食品、医药品、包装材料的独特之处。胶原蛋白具有很强的亲水、保湿性能，其在食品中可用作添加剂，以改善食品的风味、提高食品的保藏稳定期，可用作食品的胶凝剂、稳定剂、乳化剂、增稠剂、发泡剂、粘合剂、澄清剂等。胶原蛋白作为天然的生物资源，目前在食品、医药、化妆品、营养保健品等高附加值工业中的应用越来越广泛，越来越受到人们的重视。胶原蛋白所特有的极低的抗原性、极高的可生物降解性、生物吸收性、止血功能和促进细胞生长的功能，近几年来在医药工业、临床医学和临床治疗中也有广泛的应用。根据临床要求的不同，对胶原进行相应的加工处理，可制备成胶原注射液、胶原止血粉剂、止血纤维、止血海绵、手术缝合材料、心脏瓣膜修复材料，外科敷料、皮肤移植材料，以及以管状形式的血管、食管和气管的替代材料等。这些材料被广泛用于创伤和烧伤的修复、整形和美容，皮肤及神经生长，以及血管、瓣膜手术等，展现出良好的应用前景。
传统的胶原蛋白提取方法是从猪、牛的皮和骨，以及禽类组织中提取。但近年来因疯牛病、口蹄疫、禽流感等疾病的爆发，使人们对牲畜与禽类胶原制品安全性产生疑虑。另外，由于宗教和习俗等原因，从猪皮牛皮中提取胶原蛋白受到很大限制，因此，寻找胶原蛋白的新来源显得愈来愈迫切。从海水或淡水鱼体废弃物提取安全性高、吸收率高、生物活性更强的胶原蛋白将成为胶原蛋白产品提取的主要来源。
现有的鱼胶原蛋白提取方法在前期处理时往往忽略了鱼体废弃物中脂肪的去除问题，使脂肪混入胶原蛋白中影响胶原蛋白的纯度，并制约了其在下游领域的应用。此外，脂肪脱除方法一般采用酸、碱溶液或有机溶剂法，这些方法不但成本较高，脱脂不彻底，且化学试剂的使用容易使胶原蛋白变性，降低产品得率。传统的胶原蛋白提取方法采用酸或碱降解胶原蛋白提取，这些方法会在降解过程中导致部分氨基酸破坏，产品安全性差，生物活性损失，生产中的废液对环境造成污染；采用低温生物酶解技术，不添加其他物质，可以提高产品品质（如CN102533914A），避免环境污染，但所需时间较长，产品分子量较低。
为了提高鱼胶原蛋白的产品品质，加快产品生产周期，降低生产成本，本专利在鱼胶原蛋白的前期脱脂处理和提取过程中，均采用酶解法，尤其在鱼胶原蛋白提取过程中采用高压低温超声酶解技术，大大提高了提取效率，缩短了生产时间。提取过程绿色环保，快速方便，鱼胶原蛋白得率高，杂质少，可作为原材料应用于营养保健品、化妆品、食品及医用领域。
发明内容
本发明的目的是提供一种鱼胶原蛋白快速提取的方法。本发明的制备过程简单易行、操作方便、成本低，制备的鱼胶原蛋白得率高，杂质少，可作为原材料应用于营养保健品、化妆品、食品及医用领域。
本发明所述的鱼胶原蛋白快速提取的方法，包括以下步骤：
（1）将干净的鱼体废弃物剪切成50～200目的鱼粉。将鱼体废弃物加工成细小的颗粒，可以提高后续步骤（酶解脱脂和酶解提取）的效率，提高最终鱼胶原蛋白的得率。
（2）酶解去除脂肪：在鱼粉中加入为鱼粉重量3～5倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.01～0.2%的脂肪酶，控制温度为30～50℃，搅拌20～40min，过滤去除滤液。酶解去除脂肪是利用脂肪酶的酶解作用，在适宜的温度和搅拌速率下，脂肪酶可以迅速将甘油三酯的酯键水解成为甘油和脂肪酸。
（3）清洗：将酶解脱脂过滤后的滤渣依次分别与质量分数为1～3%的碳酸氢钠溶液、质量分数为2～5%的氯化钠溶液以及蒸馏水混合，每次混合均搅拌20min后过滤去除滤液，最后得到的滤渣为脱脂鱼粉。清洗步骤的目的主要是将脂肪酶解后的甘油、脂肪酸去除，同时去除原料中非胶原蛋白的杂蛋白。甘油可以溶于水，脂肪酸与弱碱性的碳酸氢钠溶液反应生成皂盐，水溶性的杂蛋白和盐溶性的杂蛋白可以通过与氯化钠溶液混合而除去。
（4）酶解：在密闭容器中加入脱脂鱼粉和为脱脂鱼粉重量3～5倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.1～1%的蛋白酶，并调节pH值为4～10，在高压、超声处理下控制温度为40～70℃，搅拌0.5～2h，过滤去除杂质。本发明中为了加快酶解效率，在酶解过程中调节pH值至蛋白酶酶解的合适范围并采用高压和超声处理的方法，同时由于原料已被加工成细小颗粒，在酶解过程中使蛋白酶能够快速接触并催化蛋白质中的肽键水解，从而得到鱼胶原蛋白溶液。
（5）将（4）酶解步骤中得到的滤液经灭酶、浓缩、干燥得到鱼胶原蛋白。
其中，上述的方法中，所述的（3）清洗步骤中的碳酸氢钠溶液用量为步骤（2）所得
鱼粉重量的5～10倍、氯化钠溶液用量为经碳酸氢钠清洗后所得鱼粉重量的5～10倍，蒸馏水用量为经氯化钠清洗后所得鱼粉重量的5～10倍。
进一步地，上述的方法中，所述的（4）酶解步骤中的蛋白酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶或胃蛋白酶中的一种或几种。
进一步地，上述的方法中，所述的（4）酶解步骤中的高压是指控制密闭容器中的压力在1.5～3个标准大气压；所述的超声处理是指采用超声波发生器使密闭容器中的物质处于15～25kHz的超声处理。高压以及超声处理可以有效提高蛋白酶的催化速率，在超声处理中，控制超声的频率和时间，可以避免处理过度使蛋白质变性。
进一步地，上述的方法中，步骤（5）中所述的灭酶是指将酶解后的滤液加热至80～90℃，搅拌20～40min，然后滤液经活性碳过滤器得到澄清透明的鱼胶原蛋白溶液。一般提高体系温度一段时间就可以使蛋白酶失去活性，达到灭酶效果。使用活性碳过滤目的在于使胶原蛋白溶液脱色脱腥。
进一步地，上述的方法中，步骤（5）中所述的浓缩是指将灭酶后的鱼胶原蛋白溶液经蒸发浓缩至原体积的10～20%，所述的干燥是指浓缩后的溶液经冷冻干燥，得到鱼胶原蛋白。
进一步地，上述的方法中，所述的鱼体废弃物是来源于鲟鱼、鳙鱼、鲈鱼或鲫鱼的一种或几种。
进一步地，上述的方法中，所述的鱼体废弃物选自鱼皮、鱼鳞和鱼鳔中的一种或几种。
申请人出人意料的发现，采用碱性蛋白酶：胰蛋白酶重量比为2:3，占浆液重量百分含量为0.5%，酶解pH值为8时，提取效果最好，提取率最高。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明在提取鱼胶原蛋白的前期脱脂处理和提取过程中，均采用酶解法，尤其在鱼胶原蛋白提取过程中采用高压低温超声酶解技术，大大提高了提取效率，缩短了生产时间。提取过程绿色环保，快速方便，鱼胶原蛋白得率高，杂质少，可作为原材料应用于营养保健品、化妆品、食品及医用领域。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1：
（1）将来源于鲟鱼并去除表面杂质的干净鱼皮、鱼鳞、鱼鳔剪切成小块，用破碎机切成200目的鱼粉；
（2）酶解去除脂肪：鱼粉中加入重量为鱼粉重量5倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.2%的脂肪酶，控制温度为30℃，搅拌40min，过滤去除滤液；
（3）清洗：将酶解脱脂过滤后的鱼粉首先与为鱼粉重量10倍的质量分数为3%的碳酸氢钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；然后将过滤后的鱼粉与为鱼粉重量9倍质量分数为2%的氯化钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；最后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量10倍的蒸馏水混合，搅拌20min后过滤去除滤液，得到的滤渣为脱脂鱼粉；
（4）酶解：在密闭容器中加入脱脂鱼粉和重量为脱脂鱼粉重量5倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为1%的木瓜蛋白酶，并调节pH值为7，在压力为3个标准大气压、25kHz的超声处理下控制温度为60℃，搅拌0.5h，过滤去除杂质；
（5）将酶解后的滤液加热至90℃，搅拌20min，然后滤液经活性碳过滤器得到澄清透明的鱼胶原蛋白溶液。鱼胶原蛋白溶液经蒸发浓缩至原体积的20%，然后经冷冻干燥，得到鱼胶原蛋白。
实施例2：
（1）将来源于鳙鱼并去除表面杂质的干净鱼皮、鱼鳞、鱼鳔剪切成小块，用破碎机切成50目的鱼粉；
（2）酶解去除脂肪：鱼粉中加入重量为鱼粉重量3倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.01%的脂肪酶，控制温度为50℃，搅拌20min，过滤去除滤液；
（3）清洗：将酶解脱脂过滤后的鱼粉首先与重量为鱼粉重量5倍的质量分数为1%的碳酸氢钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；然后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量6倍质量分数为3%的氯化钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；最后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量9倍的蒸馏水混合，搅拌20min后过滤去除滤液，得到的滤渣为脱脂鱼粉；
（4）酶解：在密闭容器中加入脱脂鱼粉和重量为脱脂鱼粉重量3倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.1%的菠萝蛋白酶，并调节pH值为8，在压力为1.5个标准大气压、15kHz的超声处理下控制温度为55℃，搅拌2h，过滤去除杂质；
（5）将酶解后的滤液加热至80℃，搅拌40min，然后滤液经活性碳过滤器得到澄清透明的鱼胶原蛋白溶液。鱼胶原蛋白溶液经蒸发浓缩至原体积的10%，然后经冷冻干燥，得到鱼胶原蛋白。
实施例3：
（1）将来源于鲈鱼并去除表面杂质的干净鱼皮、鱼鳞、鱼鳔剪切成小块，用破碎机切成100目的鱼粉；
（2）酶解去除脂肪：鱼粉中加入重量为鱼粉重量4倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.05%的脂肪酶，控制温度为40℃，搅拌30min，过滤去除滤液；
（3）清洗：将酶解脱脂过滤后的鱼粉首先与重量为鱼粉重量6倍质量分数为2%的碳酸氢钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；然后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量8倍质量分数为4%的氯化钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；最后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量8倍的蒸馏水混合，搅拌20min后过滤去除滤液，得到的滤渣为脱脂鱼粉；
（4）酶解：在密闭容器中加入脱脂鱼粉和重量为脱脂鱼粉重量4倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.3%的碱性蛋白酶，并调节pH值为9，在压力为2个标准大气压、20kHz的超声处理下控制温度为50℃，搅拌1h，过滤去除杂质；
（5）将酶解后的滤液加热至90℃，搅拌30min，然后滤液经活性碳过滤器得到澄清透明的鱼胶原蛋白溶液。鱼胶原蛋白溶液经蒸发浓缩至原体积的15%，然后经冷冻干燥，得到鱼胶原蛋白。
实施例4：
（1）将来源于鲫鱼并去除表面杂质的干净鱼皮、鱼鳞、鱼鳔剪切成小块，用破碎机切成150目的鱼粉；
（2）酶解去除脂肪：鱼粉中加入重量为鱼粉重量5倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.1%的脂肪酶，控制温度为32℃，搅拌40min，过滤去除滤液；
（3）清洗：将酶解脱脂过滤后的鱼粉首先与重量为鱼粉重量7倍质量分数为1%的碳酸氢钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；然后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量5倍质量分数为5%的氯化钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；最后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量10倍的蒸馏水混合，搅拌20min后过滤去除滤液，得到的滤渣为脱脂鱼粉；
（4）酶解：在密闭容器中加入脱脂鱼粉和重量为脱脂鱼粉重量5倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.5%的中性蛋白酶，并调节pH值为7.5，在压力为2.5个标准大气压、22kHz的超声处理下控制温度为40℃，搅拌1.5h，过滤去除杂质；
（5）将酶解后的滤液加热至80℃，搅拌30min，然后滤液经活性碳过滤器得到澄清透明的鱼胶原蛋白溶液。鱼胶原蛋白溶液经蒸发浓缩至原体积的10%，然后经冷冻干燥，得到鱼胶原蛋白。
实施例5：
（1）将来源于鲟鱼和鳙鱼并去除表面杂质的干净鱼皮、鱼鳞、鱼鳔剪切成小块，用破碎机切成50目的鱼粉；
（2）酶解去除脂肪：鱼粉中加入重量为鱼粉重量4倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.15%的脂肪酶，控制温度为35℃，搅拌35min，过滤去除滤液；
（3）清洗：将酶解脱脂过滤后的鱼粉首先与重量为鱼粉重量8倍质量分数为2%的碳酸氢钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；然后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量10倍质量分数为2%的氯化钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；最后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量5倍的蒸馏水混合，搅拌20min后过滤去除滤液，得到的滤渣为脱脂鱼粉；
（4）酶解：在密闭容器中加入脱脂鱼粉和重量为脱脂鱼粉重量4倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.7%的胰蛋白酶，并调节pH值为10，在压力为3个标准大气压、18kHz的超声处理下控制温度为50℃，搅拌0.5h，过滤去除杂质；
（5）将酶解后的滤液加热至90℃，搅拌20min，然后滤液经活性碳过滤器得到澄清透明的鱼胶原蛋白溶液。鱼胶原蛋白溶液经蒸发浓缩至原体积的15%，然后经冷冻干燥，得到鱼胶原蛋白。
实施例6：
（1）将来源于鲈鱼和鲫鱼并去除表面杂质的干净鱼皮、鱼鳞、鱼鳔剪切成小块，用破碎机切成100目的鱼粉；
（2）酶解去除脂肪：鱼粉中加入重量为鱼粉重量3倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.2%的脂肪酶，控制温度为45℃，搅拌25min，过滤去除滤液；
（3）清洗：将酶解脱脂过滤后的鱼粉首先与重量为鱼粉重量9倍质量分数为3%的碳酸氢钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；然后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量7倍质量分数为3%的氯化钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；最后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量7倍的蒸馏水混合，搅拌20min后过滤去除滤液，得到的滤渣为脱脂鱼粉；
（4）酶解：在密闭容器中加入脱脂鱼粉和重量为脱脂鱼粉重量3倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为1%的胃蛋白酶，并调节pH值为4，在压力为2.5个标准大气压、24kHz的超声处理下控制温度为70℃，搅拌1h，过滤去除杂质；
（5）将酶解后的滤液加热至80℃，搅拌40min，然后滤液经活性碳过滤器得到澄清透明的鱼胶原蛋白溶液。鱼胶原蛋白溶液经蒸发浓缩至原体积的18%，然后经冷冻干燥，得到鱼胶原蛋白。
实施例7：
（1）将来源于鲟鱼、鳙鱼、鲈鱼和鲫鱼并去除表面杂质的干净鱼皮、鱼鳞、鱼鳔剪切成小块，用破碎机切成200目的鱼粉；
（2）酶解去除脂肪：鱼粉中加入重量为鱼粉重量5倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.18%的脂肪酶，控制温度为48℃，搅拌20min，过滤去除滤液；
（3）清洗：将酶解脱脂过滤后的鱼粉首先与重量为鱼粉重量5倍质量分数为1%的碳酸氢钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；然后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量6倍质量分数为4%的氯化钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；最后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量10倍的蒸馏水混合，搅拌20min后过滤去除滤液，得到的滤渣为脱脂鱼粉；
（4）酶解：在密闭容器中加入脱脂鱼粉和重量为脱脂鱼粉重量5倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.5%的碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3，并调节pH值为8，在压力为3个标准大气压、25kHz的超声处理下控制温度为55℃，搅拌0.5h，过滤去除杂质；
（5）将酶解后的滤液加热至90℃，搅拌40min，然后滤液经活性碳过滤器得到澄清透明的鱼胶原蛋白溶液。鱼胶原蛋白溶液经蒸发浓缩至原体积的12%，然后经冷冻干燥，得到鱼胶原蛋白。
实施例8：
实验条件筛选：
（1）将来源于鲟鱼并去除表面杂质的干净鱼皮、鱼鳞、鱼鳔剪切成小块，用破碎机切成150目的鱼粉；
（2）酶解去除脂肪：鱼粉中加入重量为鱼粉重量4倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.1%的脂肪酶，控制温度为40℃，搅拌30min，过滤去除滤液；
（3）清洗：将酶解脱脂过滤后的鱼粉首先与重量为脱脂鱼粉重量7倍质量分数为2%的碳酸氢钠溶液混合，搅拌15min后过滤去除滤液；然后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量6倍质量分数为4%的氯化钠溶液混合，搅拌20min后过滤去除滤液；最后将过滤后的鱼粉与重量为鱼粉重量10倍的蒸馏水混合，搅拌20min后过滤去除滤液，得到的滤渣为脱脂鱼粉；
（4）酶解：在密闭容器中加入脱脂鱼粉和重量为脱脂鱼粉重量4倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入蛋白酶，并调节pH值，在压力为2个标准大气压、20kHz的超声处理下控制温度为55℃，搅拌1h，过滤去除杂质；
（5）将酶解后的滤液加热至90℃，搅拌40min，然后滤液经活性碳过滤器得到澄清透明的鱼胶原蛋白溶液，将鱼胶原蛋白溶液经蒸发浓缩至原体积的12%，然后经冷冻干燥，得到鱼胶原蛋白。
具体操作时，以蛋白酶的含量、蛋白酶的种类和酶解pH中一个为变量（参见表一、二、三），并通过如下公式计算提取率，确定最佳实验条件。
胶原蛋白含量测定（以羟脯氨酸含量计）及纯度、提取率计算，按照IS03496：1978（E）方法，测定羟脯氨酸含量。胶原蛋白含量等于羟脯氨酸含量乘以系数11.1。
胶原纯度=11.1m1/m2×100%
其中，m1——测定的羟脯氨酸质量（g），m2——测定羟脯氨酸时称取的胶原质量（g）。
胶原蛋白提取率=（胶原纯度×M1/M2）100%
其中，M1——成品胶原的质量（g），M2——鱼体废弃物的质量（g）。
表一改变蛋白酶的种类
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| pH值 | 7 | 7 | 7 | 7 | 7 | 7 | 7 | 7 | 7 |
| 蛋白酶 | 木瓜蛋白酶 | 菠萝蛋白酶 | 碱性蛋白酶 | 中性蛋白酶 | 胰蛋白酶 | 胃蛋白酶 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 胰蛋白酶：胃蛋白酶=4:3 | 木瓜蛋白酶：菠萝蛋白酶=1：3 |
| 蛋白酶占浆液重量 | 0.3% | 0.3% | 0.3% | 0.3% | 0.3% | 0.3% | 0.3% | 0.3% | 0.3% |
| 提取率 | 29.1% | 29.3% | 29.8% | 29.7% | 28.9% | 29.1% | 32.6% | 30.1% | 29.8% |
表二改变蛋白酶占浆液的质量分数
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| pH值 | 7 | 7 | 7 | 7 | 7 | 7 | 7 | 7 | 76 --> |
| 蛋白酶 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 |
| 蛋白酶占浆液重量 | 0.1% | 0.2% | 0.4% | 0.5% | 0.6% | 0.7% | 0.8% | 0.8% | 1.0% |
| 提取率 | 31.8% | 32.1% | 33.0% | 35.0% | 33.4% | 33.0% | 32.7% | 32.3% | 32.0% |
表三改变酶解的pH值
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| pH值 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
| 蛋白酶 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 | 碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3 |
| 蛋白酶占浆液重量 | 0.5% | 0.5% | 0.5% | 0.5% | 0.5% | 0.5% | 0.5% |
| 提取率 | 32.0% | 32.5% | 33.1% | 35.0% | 36.4% | 35.4% | 35.0% |
由上述可知，当蛋白酶选定碱性蛋白酶：胰蛋白酶=2:3，占浆液重量0.5%，酶解pH值设定为8时，提取效果最好，提取率最高。在上述条件下，提取得到的胶原蛋白制品色泽洁白、无异味。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种鱼胶原蛋白快速提取的方法，其特征是：包括如下步骤，
（1）将干净的鱼体废弃物剪切成50～200目的鱼粉；
（2）酶解去除脂肪：在鱼粉中加入为鱼粉重量3～5倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.01～0.2%的脂肪酶，控制温度为30～50℃，搅拌20～40min，过滤去除滤液；
（3）清洗：将酶解脱脂过滤后的滤渣依次分别与质量分数为1～3%的碳酸氢钠溶液、质量分数为2～5%的氯化钠溶液以及蒸馏水混合，每次混合均搅拌20min后过滤去除滤液，最后得到的滤渣为脱脂鱼粉；
（4）酶解：在密闭容器中加入脱脂鱼粉和为脱脂鱼粉重量3～5倍的蒸馏水搅拌制成浆液，在浆液中加入占浆液质量为0.1～1%的蛋白酶，并调节pH值为8，在1.5～3个标准大气压的高压、超声处理下控制温度为40～70℃，搅拌0.5～2h，过滤去除杂质；
（5）将（4）酶解步骤中得到的滤液经灭酶、浓缩、干燥得到鱼胶原蛋白；
所述的鱼体废弃物是来源于鲟鱼、鳙鱼、鲈鱼或鲫鱼的一种或几种；所述的（4）酶解步骤中的蛋白酶质量比为2:3的碱性蛋白酶：胰蛋白酶。
2.如权利要求1所述的方法，其特征是：所述的（3）清洗步骤中的碳酸氢钠溶液用量为步骤（2）所得鱼粉重量的5～10倍、氯化钠溶液用量为经碳酸氢钠清洗后所得鱼粉重量的5～10倍，蒸馏水用量为经氯化钠清洗后所得鱼粉重量的5～10倍。
3.如权利要求1所述的方法，其特征是：所述的超声处理是指采用超声波发生器使密闭容器中的物质处于15～25kHz的超声处理。
4.如权利要求1所述的方法，其特征是：步骤（5）中所述的灭酶是指将酶解后的滤液加热至80～90℃，搅拌20～40min，然后滤液经活性碳过滤器得到澄清透明的鱼胶原蛋白溶液。
5.如权利要求1所述的方法，其特征是：步骤（5）中所述的浓缩是指将灭酶后的鱼胶原蛋白溶液经蒸发浓缩至原体积的10～20%，所述的干燥是指浓缩后的溶液经冷冻干燥，得到鱼胶原蛋白。
6.如权利要求1所述的方法，其特征是：所述的鱼体废弃物是选自鱼皮、鱼鳞和鱼鳔中的一种或几种。
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