CN102485246A - 一种治疗妇科炎症的中药组合物凝胶剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗妇科炎症的中药组合物凝胶剂的制备方法，所述中药组合物由以下重量份的原料药制成：椿皮35-45、苦参23-35、乳香25-35、牡丹皮25-35、冰片0.8-1.2；所述制备方法主要包括如下步骤：1)椿皮水提；2)苦参水提醇沉精制或醇提；3)乳香水提；4)水蒸气法提取牡丹皮中的丹皮酚。本发明的方法制得的中药组合物具有清热除湿、止带止痒、祛腐生肌、收敛止血等效果，广泛用于细菌、真菌、原虫、衣原体、支原体等致病原所引起的妇科炎症。

Description

一种治疗妇科炎症的中药组合物凝胶剂的制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，具体地说，涉及一种治疗妇科炎症的中药组合物凝胶剂的制备方法。

背景技术

宫颈炎是临床常见的一组临床症候。宫颈糜烂是慢性宫颈炎中的最为主要的局部病变，是妇科的常见病、多发病。其发病率占妇科疾病的50％以上。经研究表明，宫颈糜烂与宫颈癌的发生有着重要关系。宫颈糜烂患者的宫颈癌变率为2.5％，较非宫颈糜烂患者高6倍。

西医认为，宫颈糜烂是慢性宫颈炎的最常见的临床表现。其病因多为长期慢性机械性刺激与损伤，如分娩、流产或手术损伤等为主根诱因，致使病原体侵入而引起，急性感染期不积极治疗，渐渐形成慢性宫颈炎，使宫颈主要产生糜烂的病理变化。宫颈糜烂病理上认为主要是宫颈表面的鳞状上皮脱落，为柱状上皮所代替，上皮下血管显露的结果。近年来的研究又表明宫颈糜烂与全身的免疫机制、有着极大的关系。结果表明：人乳头瘤病毒16型(HPV-16)、人疱疹病毒2型(HSV-2)巨细胞病毒(CMV)和沙眼衣原体(CT)的感染与宫颈糜烂的发生关系密切。当病毒感染机体细胞后，可以直接对机体免疫产生影响，此影响包括两方面：一是免疫抑制，二是免疫促进，且以免疫抑制为主。

西医治疗宫颈糜烂，首选物理疗法，其次为外用药物。长期应用物理疗法可产生很多副作用，且疗后易复发，同时又有禁忌证；西药外用药多为腐蚀性药物，对比较表浅、面积比较小的病灶有一定的作用，但治疗多不彻底，长期用药与物理治疗可引起诸多副作用，且撤停后易复发。

祖国医学认为宫颈糜烂形成原因是湿毒内侵和湿热互结流注下焦，致任脉不固，带脉失约，胞脉气血失和，宫颈局部气血阻滞，邪瘀致腐。经现代中医研究表明，宫颈糜烂病因复杂，但其主要是湿邪为主，病位在胞宫，与脾肾二脏关系密切，病机主要为湿邪损伤任、带二脉，胞脉气血失和，日久子门局部则湿热瘀积、热毒壅滞、血瘀致腐。同时现代也有专家认为宫颈糜烂与肝也有一定的关系。肝经湿热下注，可直接损伤任带经脉，而致本病。综上可见，湿邪在宫颈糜烂的发病过程中有着重要的作用，所以宫颈糜烂的治疗务在祛湿。近年来，中医工作者对中医药治疗宫颈糜烂的有效性进行了大量的观察，结果表明，中药对于宫颈糜烂有较好的治疗作用，而且能减少物理疗法的副作用和疾病复发率，中医治疗宫颈糜烂由此而已成为临床上普遍采用的方法之一。

由于其病位比较特殊，内服药物作用比较缓慢，不易于直达病位，所以近年来的中医对宫颈糜烂的治疗多为外治法。归纳近年来的文献报道，常用的外治宫颈糜烂的中药大致分为以下几类：①收湿、消肿、敛疮、祛腐、生肌药；②清热、解毒、燥湿、凉血药；③活血、化瘀、散肿药。剂型多为散剂、栓剂、丸剂、片剂、膏剂、糊剂等。由此可见，治疗宫颈糜烂用药要以燥湿或祛湿药为主，并辅以活血凉血，生肌敛疮药为主。

本发明提供一种能够治疗妇科炎症、尤其是宫颈疾病的中药组合物及其制备方法。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明要解决的技术问题是精选少数几种针对性治疗妇科炎症的中药药味，简化中药组合物制剂的制备方法，同时保证药物的疗效。

(二)技术方案

本发明涉及一种治疗妇科炎症的中药组合物凝胶剂的制备方法，所述中药组合物由以下重量份的原料药制成：椿皮35-45、苦参23-35、乳香25-35、牡丹皮25-35、冰片0.8-1.2；优选地，所述中药组合物由以下重量份的原料药制成：椿皮40、苦参30、乳香30、牡丹皮30、冰片1；

所述中药组合物凝胶剂的制备方法包括如下步骤：

1)用水提取椿皮，得到椿皮浸膏；

2)提取苦参的有效成分，得到苦参浸膏，与椿皮浸膏合并，浓缩得到椿皮和苦参的混合清膏；

3)用水提取乳香的挥发油；

4)水蒸气法提取牡丹皮中的丹皮酚，得到丹皮酚结晶；

5)取药用羧甲基纤维素钠、药用甘油加入到椿皮和苦参的混合清膏中，搅匀，放置，使充分溶胀；

6)取冰片、丹皮酚结晶用50-85％乙醇溶解，加入羟苯乙酯和聚山梨酯-80，搅拌使溶解，加入乳香的挥发油，然后加入到步骤5)得到的溶胀的溶液中，加3-6倍量水混匀，放置12-36小时使充分溶胀，搅拌均匀，分装即得凝胶剂。

优选地，步骤1)为：取椿皮，加2-9倍量水，煎煮1-3次，每次1-2.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60℃时的相对密度为1.05-1.10的椿皮浸膏。

优选地，步骤2)为：取苦参，加6-12倍量水，煎煮1-3次，第一次煎煮前浸泡0.5-1.5小时，每次煎煮0.5-3小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃时的相对密度为1.10-1.15的苦参浸膏，放冷，加乙醇使含醇量达60-70％，静置8-24小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味；与椿皮浸膏合并，浓缩至60℃时的相对密度为1.05-1.10的清膏。

为了达到较佳的提取效果，本发明人发现可选地，步骤2)为：取苦参，加6-10倍量的60-70％乙醇，加热回流提取1-3次，第一次提取前浸泡0.5-1.5小时，每次提取0.5-3小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味；与椿皮浸膏合并，浓缩至60℃时的相对密度为1.05-1.10的清膏。

为了达到更好的提取效果，本发明人还发现可选地，步骤2)为：取苦参，加8-15倍量的60-70％乙醇，浸泡0.5-1.5小时，索氏提取3-6小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味；与椿皮浸膏合并，浓缩至60℃时的相对密度为1.05-1.10的清膏。

优选地，步骤3)为：取乳香加6-10倍量水，蒸馏5-9小时，收集挥发油。

优选地，步骤4)为：取牡丹皮，用水蒸气蒸馏法蒸馏，收集质量为4-8倍药材量的蒸馏液，放置析晶，滤过，丹皮酚结晶另置；水溶液重蒸馏，收集质量为2-4倍药材量的蒸馏液，放置析晶，滤过，合并丹皮酚结晶。

步骤5)所述的羧甲基纤维素钠、药用甘油的用量分别是冰片重量的0.6-1.5倍。

步骤6)所述的羟苯乙酯和聚山梨酯-80的用量分别是冰片重量的0.01-0.1倍。

步骤6)所得凝胶剂为所用中药原料药总重量的0.1-0.2倍，优选0.15倍。

(三)有益效果

本发明的中药组合物是用中医理论组方的中药复方制剂，既可克服化学药的诸多不足，又可发挥化学药无法比拟的多方面的治疗作用(如清热除湿、止带止痒、祛腐生肌、收敛止血等等)，可广泛用于细菌、真菌、原虫、衣原体、支原体等致病原所引起的妇科炎症，同时，复方中药制剂还具有pH缓冲剂的作用，通过调节阴道pH，使阴道自洁功能得以恢复，通过自洁系统抑制病原微生物或原虫的生长繁殖，中药对病毒的综合抑制作用要远远好于西药，因此，在治疗妇科炎症方面，开发疗效确切，剂型新颖的纯中药制剂具有广阔的市场前景。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1凝胶剂的制备

1)取椿皮40kg，加6倍量水，煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度(60℃)为1.05-1.10的椿皮浸膏；

2)取苦参30kg，加9倍量水，煎煮2次，第一次煎煮前浸泡1小时，每次煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度(60℃)为1.10-1.15的苦参浸膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，静置20小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味；与椿皮浸膏合并，浓缩至相对密度(60℃)为1.05-1.10的清膏；

3)取乳香30kg，加8倍量水，蒸馏7小时，收集挥发油；

4)取牡丹皮30kg，用水蒸气蒸馏法蒸馏，收集质量为6倍药材量的蒸馏液，放置析晶，滤过，丹皮酚结晶另置；水溶液重蒸馏，收集质量为3倍药材量的蒸馏液，放置析晶，滤过，合并丹皮酚结晶；

5)取药用羧甲基纤维素钠1kg、药用甘油1kg，加入到椿皮和苦参的混合清膏中，搅匀，放置，使充分溶胀；

6)取冰片1kg、丹皮酚结晶用70％乙醇1L溶解后，加入羟苯乙酯0.05kg和聚山梨酯-80 0.05kg，搅拌使溶解，再加入乳香的挥发油，加入到步骤5)得到的溶胀的溶液中，加1L水混匀，放置24小时使充分溶胀，搅拌均匀，分装成4克/支凝胶剂即得。

实施例2凝胶剂的制备

1)取椿皮35kg，加5倍量水，煎煮3次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度(60℃)为1.05-1.10的椿皮浸膏；

2)取苦参23kg，加6倍量的70％乙醇，加热回流提取3次，第一次提取前浸泡1小时，每次提取2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味；与椿皮浸膏合并，浓缩至相对密度(60℃)为1.05-1.10的清膏；

3)取乳香25kg，加6倍量水，蒸馏8小时，收集挥发油；

4)取牡丹皮25kg，用水蒸气蒸馏法蒸馏，收集质量为4倍药材量的蒸馏液，放置析晶，滤过，丹皮酚结晶另置；水溶液重蒸馏，收集质量为2倍药材量的蒸馏液，放置析晶，滤过，合并丹皮酚结晶；

5)取药用羧甲基纤维素钠0.7kg、药用甘油0.7kg，加入到椿皮和苦参的混合清膏中，搅匀，放置，使充分溶胀；

6)取冰片0.8kg、丹皮酚结晶用50％乙醇1.2L溶解后，加入羟苯乙酯0.03kg和聚山梨酯-80 0.03kg，搅拌使溶解，再加入乳香的挥发油，加入到步骤5)得到的溶胀的溶液中，加1.2L水混匀，放置12小时使充分溶胀，搅拌均匀，分装成4克/支凝胶剂即得。

实施例3凝胶剂的制备

1)取椿皮90kg，加8倍量水，煎煮2次，每次2.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度(60℃)为1.05-1.10的椿皮浸膏；

2)取苦参70kg，加12倍量的60％乙醇，浸泡1小时，索氏提取5小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味；与椿皮浸膏合并，浓缩至相对密度(60℃)为1.05-1.10的清膏；

3)取乳香50kg，加8倍量水，蒸馏6小时，收集挥发油；

4)取牡丹皮50kg，用水蒸气蒸馏法蒸馏，收集质量为8倍药材量的蒸馏液，放置析晶，滤过，丹皮酚结晶另置；水溶液重蒸馏，收集质量为4倍药材量的蒸馏液，放置析晶，滤过，合并丹皮酚结晶；

5)取药用羧甲基纤维素钠1.5kg、药用甘油1.5kg，加入到椿皮和苦参的混合清膏中，搅匀，放置，使充分溶胀；

6)取冰片1.2kg、丹皮酚结晶用85％乙醇0.8L溶解后，加入羟苯乙酯1kg和聚山梨酯-80 1kg，搅拌使溶解，再加入乳香的挥发油，加入到步骤5)得到的溶胀的溶液中，加1L水混匀，放置36小时使充分溶胀，搅拌均匀，分装成4克/支凝胶剂即得。

实验例1

试验材料：

1.试验动物：

豚鼠50只，体重250-300g，雌性，江西医学院动物室提供。合格证号：021-9602。

小鼠昆明种18-22g，♀♂兼用，江西中医学院实验动物中心提供，合格证号：021-9601。

大鼠SD雌性，体重为200-280克左右，江西医学院动物室提供，合格证号：021-9602。

家兔：雌雄兼用，体重(2.5±0.2)kg，江西医学院动物室提供，合格证号：021-9603。

2.药物与试剂：

(1)本发明中药组合物的凝胶剂(简称椿乳)，规格：21.83g生药/ml，批号：020424；由中南大学湘雅二医院临床药学研究室提供。

赋形剂：0.4％羧甲基纤维素钠，临用前用蒸馏水配成0.4％羧甲基纤维素钠，由中南大学湘雅二医院临床药学研究室提供。

豚鼠的给药剂量为：

椿乳高剂量：实施例1制备的10ml椿乳原液加基质(0.4％羧甲基纤维素钠)至20ml即可，浓度为10.92g生药/ml；椿乳中剂量：5ml椿乳原液加基质至20ml即可，浓度为5.46g生药/ml；椿乳低剂量：2.5ml椿乳原液加基质至20ml即可，浓度为2.73g生药/ml；

小鼠用给药剂量为：

椿乳高剂量：10ml椿乳原液加基质至20ml即可，浓度为10.92g生药/ml；椿乳中剂量：5ml椿乳原液加基质至20ml即可，浓度为5.46g生药/ml；椿乳低剂量：2.5ml椿乳原液加基质至20ml即可，浓度为2.73g生药/ml；

大鼠用给药剂量为：

椿乳高剂量：20ml椿乳原液加基质至40ml即可，浓度为10.92g生药/ml；椿乳中剂量：10ml椿乳原液加基质至40ml即可，浓度为5.46g生药/ml；椿乳低剂量：5ml椿乳原液加基质至40ml即可，浓度为2.73g生药/ml；

家兔用药剂量为：

椿乳高剂量：50ml椿乳原液加基质至100ml即可，浓度为10.92g生药/ml；椿乳中剂量：25ml椿乳原液加基质至100ml即可，浓度为5.46g生药/ml；椿乳低高剂量：12.5ml椿乳原液加基质至100ml即可，浓度为2.73g生药/ml。

(2)冰乙酸：500ml/瓶，AR，株洲市九州化学试剂厂，批号：990114

0.6％醋酸：取0.6ml冰醋酸加生理盐水至100ml，

(3)杜冷丁：规格：50mg×1ml，青海制药厂，批号：010408，取杜冷丁1支，加基质至50ml，即为1mg/ml，20mg/Kg；

(4)复方黄松洗液：广西源安堂药业有限公司，250ml/瓶，外洗用，批号：200204162，使用时用其原液；

(5)磷酸组胺：5克/瓶，中科院上海生化所东风生化技术公司，批号：9303044；用时精密称取磷酸组胺0.05g，加蒸馏水至50ml，配成0.1％磷酸组胺50ml；

取0.1％磷酸组胺1，2，3...8，9ml，加蒸馏水至10ml，为0.01％-0.09％磷酸组胺。

(6)二甲苯，CA，湖北大学化工厂，批号：960818

(7)强的松：5mg×100片，浙江仙居制药有限公司生产，批号020502；

(8)金葡菌液：来源于江西省妇幼保健院，病人阴道分泌物新近培养，临用前配成10⁸个/L；

(9)白色念珠菌：来源于江西省妇幼保建院从阴道分泌物中新近分离，临用前挑起少许菌苔进行接种；

(10)表皮葡萄球菌、大肠埃希氏菌、变形杆菌、绿脓杆菌、乙型链球菌、淋球菌：均来源于江西省妇幼保建院从阴道分泌物中新近分离；

(11)葡萄糖酚红肉汤配方：肉汤100ml(PH7.6)；葡萄糖1g；1％酚红溶液0.5ml，用于金葡菌、表葡菌、大肠埃希氏菌、变形杆菌和绿脓杆菌培养；

(12)血清肉汤配方：肉汤100ml(PH7.6)；葡萄糖1g；1％酚红溶液0.5ml，兔无菌血清1ml，用于乙型链球菌和淋球菌培养；

(13)沙保弱氏液体培养基配方：蛋白胨1g，葡萄糖4g，蒸馏水100ml，用于白色念珠菌的培养。

3.给药容量：家兔阴道给药为0.5ml/Kg；豚鼠足背涂药容量为0.2ml/每只；小鼠阴道给药容量为0.2ml/每只，大鼠阴道给药容量为0.2ml/每只。

4.仪器与设备

722分光光度计：上海第三分析仪器厂；

OLYMPUS显微镜：台湾生产；

数显恒温水浴锅，江苏金坛市医疗仪器厂；

PYX-DSH-40×50型隔水式电热恒温培养箱，上海跃进医疗器械厂；

YXQ.SG41.020型电热手提式压力蒸汽灭菌器，上海医用核子仪器厂；

SWCG-1C型洁净工作台，苏净集团苏州安泰空气技术有限公司。

5.统计处理

实验数据用SPSS系统进行统计处理，根据数据的分布情况用t检验(正态)，或t’(非正态)检验，以得出相应结论。

试验方法与结果：

一、本发明中药组合物凝胶剂(椿乳)对磷酸组胺所致豚鼠致痒阈的影响

试验方法与结果：

1.动物分组：随机分为5组，每组10只，即椿乳凝胶剂低剂量组(2.73g生药/ml)、中剂量组(5.46g生药/ml)、高剂量组(10.92g生药/ml)，复方黄松洗液组(原液)和基质组(0.4％羧甲基纤维素钠)。

2.对照组豚鼠、复方黄松洗液组豚鼠、椿乳低、中、高剂量组豚鼠右后足背剃毛、并涂以相应药物1次，剃毛面积约为1cm²，涂药容量为0.2ml左右，用小鼠灌胃针头均匀地涂在去毛皮肤表面，用纱布包裹胶布固定接触4小时；第二天对照组、复方黄松洗液组、椿乳低、中、高剂量组豚鼠右后足背均用粗砂纸擦伤，以渗血为度(擦伤者没有参与分组，不知道豚鼠的组别)，并涂以相应药物1次，涂药容量为0.2ml左右，用小鼠灌胃针头均匀地涂在去毛皮肤表面；30分钟后，洗净创面，用纱布轻轻擦干患处，以0.01％、0.02％、0.03％...递增浓度，每隔三分钟一次，每次均为0.05ml/只，直至出现豚鼠舔后足时，记录给予的磷酸组胺总量为致痒阈，各组豚鼠致痒阈见表1：

表1：千金椿乳凝胶剂对磷酸组胺所致小鼠致痒阈的影响

采用t检验，与基质组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

从上表可以看出，除椿乳凝胶剂低剂量组外，中、高剂量组的椿乳凝胶剂及复方黄松洗液组均能提高磷酸组胺所致豚鼠致痒阈，说明此药有明显的止痒作用。

二、对金葡菌所致大鼠细菌性阴道炎的影响

试验目的：通过损伤大鼠阴道壁再加上接种金葡菌造成大鼠阴道炎模型，给予药物，观察药物对动物的整体状况、阴道充血水肿、阴道涂片检查白细胞和细菌、及病理检查结果的改变，来衡量药物对细菌性阴道炎的治疗作用。

1.动物分组：动物随机分为6组，每组10只，即椿乳凝胶剂低、中、高剂量组，复方黄松洗液组、模型组和正常对照组。

2.观察指标：各组大鼠均用7号磨钝针头在阴道壁上由内到外每只鼠划30次，由一人操作，以保证力度均匀一致，除对照组外，其他各组均注入108个/L金葡菌液0.2ml，用凡士林封住阴道口；第二天除对照组外，其余各组镜下均见明显WBC增多，涂片中有大量金葡菌，阴道分泌物增多，阴道粘膜充血、肿胀，表面覆盖有白色物；第三天起，对照组给予0.4％羧甲基纤维素钠，其他各组均阴道给予相应药物0.2ml，用凡士林封闭阴道口；每天肉眼观察各组动物的整体状态、阴道有无充血肿胀，并涂片检查其阴道分泌物中炎症细胞和细菌，第七天给药5小时后做阴道分泌物涂片，看WBC和金葡菌；脱颈椎处死大鼠，取出其阴道，观察其阴道粘膜有无充血、水肿情况，再将阴道放入Bolin氏固定液中，送做病理切片检查；

3制定阴道炎疗效评价以阴道组织的病变大体观察为判定标准，见表2。

表2金葡菌性阴道炎大鼠评分标准

4、结果：

(1)一般观察：实验大鼠造型后除1例大鼠出现死亡外，其余状态尚可，饮食及排泄正常，毛色光滑。

(2)阴道局部病变肉眼观察：大鼠造型后第1-3天阴道出现明显的充血、肿胀，分泌物大量增加，表面覆盖大量白色粘性分泌物。在第1-3天阴道分泌物涂片，可见有大量的炎细胞及金葡菌，模型建立各组间综合分值没有明显差异。于造模第三天开始给药，大、中剂量组于给药第三天开始，阴道局部充血、水肿、分泌物、粘膜糜烂减轻，于4-5天有轻微的充血肿胀，第七天阴道病变除个别有轻度充血肿胀其余均恢复正常，综合分值与模型组、赋形剂组比较有极显著差异。小剂量组和阳性药组于给药4-5天时病变也明显减轻，在第7天，阴道局部病变多数基本恢复正常，综合分值与模型组、正常对照组比较也有检显著性差异，具体见表3。

(3)阴道涂片检查：各组造型后阴道分泌物涂片均呈阳性，可见有大量的金葡菌和脱落上皮细胞和炎细胞。给药后第7天，模型组10例、正常对照组0例涂片可见有金葡菌及大量炎细胞和坏死脱落上皮细胞。给药组除椿乳凝胶小剂量组3例和阳性药可见有金葡菌外，椿乳凝胶大中剂量组仅有1和2例有金葡菌，仅见有少量炎细胞和脱落的上皮细胞，具体情况见表4。

(4)组织学检查：基质组各层组织结构正常，上皮无破损，糜烂，粘膜未见充血及水肿，粘膜下层及肌层未见异常；模型组阴道粘膜下层及肌层出现明显充血水肿，上皮可见部分残缺；低剂量组粘膜及粘膜下层充血水肿减轻，有1例上皮残缺；中剂量组部分大鼠阴道粘膜可见充血肿胀，部分组织结构恢复正常；高剂量组大鼠部分阴道粘膜有轻度充血水肿，部分组织结构完全恢复正常；阳性药组大鼠部分阴道粘膜有轻度充血水肿，部分组织结构完全恢复正常。

表3椿乳凝胶剂对金葡菌性阴道炎病变综合分值的影响(X±SD)

结果采用t检验，与正常对照组比较，^ΔP＜0.05，^ΔΔP＜0.01，^ΔΔΔP＜0.001；与模型组比较，^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01，^▲▲▲P＜0.001。

表4对阴道分泌物涂片(WBC和金葡菌)的影响

结果采用卡方检验，与生理盐水组比较，^ΔP＜0.05，^ΔΔP＜0.01，^ΔΔΔP＜0.001；与模型组比较，^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01，^▲▲▲P＜0.001。

三、对白色念珠菌所致家兔霉菌性阴道炎的影响

试验目的：通过损伤家兔阴道壁再加上接种白色念珠菌造成家兔霉菌性阴道炎模型，给予药物，观察药物对动物的整体状况、阴道充血水肿、阴道涂片检查白细胞和细菌、及病理检查结果的改变，来衡量药物对霉菌性阴道炎的治疗作用。

试验方法与结果：

1.动物分组：动物随机分为7组，每组8只，即椿乳凝胶剂低、中、高剂量组，复方黄松洗液组、模型组和正常对照组和空白对照组(只划痕不接种霉菌)。

2.观察指标：各组家兔均用用接种针在家兔阴道壁上轻轻划痕，以有损伤但不出血为度，划30下，用接种环挑起少许白色念珠菌接种于损伤处，其中空白对照只划痕不接种白色念珠菌；第二天起除空白对照组外，其余各组镜下均见明显WBC增多，涂片中有大量白色念珠菌，阴道分泌物增多，阴道粘膜充血、水肿，表面覆盖有白色物；其中空白对照组也有阴道轻度充血，涂片中也有白细胞但未有白色念珠菌；第三天起，空白对照组和模型组给予0.9％生理盐水，其他各组均阴道给予相应药物0.2ml，用凡士林封闭阴道口；每天观察各组动物的整体状态、阴道有无充血肿胀，并涂片检查其阴道分泌物中炎症细胞和霉菌，第六天给药5小时后做阴道分泌物涂片，看WBC和白色念珠菌；空气栓塞处死大鼠，取出其阴道，观察其阴道粘膜有无充血、水肿情况，再将阴道放入Bolin氏固定液中，送做病理切片检查；

3.制定阴道炎疗效评价以阴道组织的病变大体观察为判定标准，见表5。

表5霉性阴道炎家兔评分标准

4.结果：

(1)一般观察：实验家兔造型后除对空白照组外，其余各组较差，饮食及排泄正常，给药后能恢复正常。

(2)阴道局部病变肉眼观察：实验家兔造型后第1-3天阴道出现明显的充血、肿胀，分泌物大量增加，表面覆盖大量白色粘性分泌物，呈豆腐渣样。在第1-3天阴道分泌物涂片，可见有大量的炎细胞及白色念珠菌，模型建立各组间综合分值没有明显差异。而空白组(划痕未接种霉菌组)在第三天时阴道充血肿胀基本消失，说明未接种霉菌者轻度的损伤可以自己恢复，造模组出现的一系列表现是由于感染霉菌所致。于造模第三天开始给药，高、中、低剂量组及阳性药组于给药第二天开始，阴道局部充血、水肿减轻，分泌物减少，于4-5天有轻微的充血肿胀，第6天阴道病变除个别有轻度充血肿胀其余均恢复正常，综合分值与模型组、基质组比较有极显著差异，具体情况见表6。

(3)阴道涂片检查：各组造型后阴道分泌物涂片均呈阳性，可见有大量的白色念珠菌和脱落上皮细胞和炎细胞。给药后第6天，模型组8例、基质组8例、正常对照组0例涂片可见有白色念珠菌及较多炎细胞。给药组除椿乳凝胶低剂量组2例和阳性药2例可见有白色念珠菌外，椿乳凝胶高中剂量组仅有1例有白色念珠菌，仅见有少量炎细胞，具体情况见表7。

(4)组织学检查：模型组和赋形剂组阴道粘膜表面有脱落、不整齐，各层充血水肿、粘膜下炎细胞浸润，腔内充满炎细胞及白色念珠菌。除低剂量组织粘膜下层轻度充血、水肿，少量炎细胞外，其他阴道粘膜上皮细胞与正常阴道组织无区别。

表6椿乳凝胶剂对白色念珠菌性阴道炎病变综合分值的影响(X±SD)

结果采用t检验，与正常对照组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01，ΔΔΔP＜0.001；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001。

表7对阴道白色念珠菌和白细胞的影响

结果采用卡方检验，与生理盐水组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01，ΔΔΔP＜0.001；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001。

四、体外抑菌试验

试验目的：采用一定的培养基对新近分离的阴道细菌或霉菌进行培养，观察药物的体外抑菌作用。

(一)致病菌培养基的选择及菌液的选择及菌液的制备

1、乙型溶血性链球菌用1％血清(新鲜脱纤维兔血清)肉汤培养基，传代二次实验菌斜面(血琼脂)用接菌环均匀刮取菌苔移种于1ml血清肉汤培养基中，置恒温箱37℃培养18小时。再用血清肉汤培养基按1∶10稀释备用。

2、白色念球菌传代二次新鲜斜面接种于沙保弱氏氏培养基、放置37℃恒温培养6小时，备用。

3、其它菌均用葡萄糖酚红营养肉汤培养基，将实验菌斜面用接种环均匀刮取菌苔移种于葡萄糖酚红营养肉汤培养基中置37℃培养6小时，以上除溶血性链球菌外再用营养肉汤按1∶1000稀释备用。

(二)受试药采用试管二倍稀释法测定药物最低抑菌浓度(MIC)

用相应的培养基按倍数稀释各受试药物(1∶4-1∶1024)每一株菌都做平行试验，每管1ml接种试验菌液0.1ml，充分混匀后置37℃培养箱18h取出，观察细菌生长情况，再做无菌试验，每管用接种环取培养液接种于营养琼脂(血、沙氏)平板上置37℃培养18h后无细菌生长可判定该管细菌被药物全部杀死，此管药物浓度作为该药物对该菌的最低杀菌浓度(MBC)。

结果：椿乳凝胶对金葡菌、表葡菌、大肠杆菌、白色念珠菌MIC为1.36g生药/ml；对变形杆菌MIC为5.46g生药/ml；对绿脓杆菌无作用；对乙型溶血性链球菌MIC为2.73g生药/ml；基质(0.4％羧甲基纤维素钠)对细菌生长无作用(见表8)；复方黄松洗液对金葡菌的MIC为1∶32原液；对表葡、白念的MIC为1∶16原液；对大肠、变形为1∶16原液，对乙型溶血性链球菌的MIC为1∶4(见表9)。

表8椿乳凝胶对7种菌株体外抑菌作用的结果

注：^*有药无菌的药物对照，^**有菌无药的细菌对照

-表示无菌生长，+表示有菌生长

表9复方黄松洗液对7种菌株体外抑菌作用的结果

注：^*有药无菌的药物对照，^**有菌无药的细菌对照

-表示无菌生长，+表示有菌生长

结论

1、本发明的椿乳凝胶剂(5.46g生药/ml、10.92g生药/ml)对于磷酸组胺所致的豚鼠致痒阈有升高的作用，说明其有较好的止痒作用；

2、本发明的椿乳凝胶剂低(2.73g生药/ml)、中(5.46g生药/ml)、高剂量药物(10.92g生药/ml)对于金葡菌所致的大鼠阴道炎有明显的抑制作用，可明显减轻金葡菌所致的大鼠阴道充血、肿胀、可减少或消除阴道局部的金葡菌和炎症细胞，并可改善金葡菌所致的阴道炎大鼠阴道病理状态；

3、本发明的椿乳凝胶剂低(2.73g生药/ml)、中(5.46g生药/ml)、高剂量药物(10.92g生药/ml)对于白色念珠菌所致的家兔阴道炎有明显的抑制作用，可明显减轻白色念珠菌所致的家兔阴道充血、肿胀、可减少或消除阴道局部的金葡菌和炎症细胞，可改善白色念珠菌所致的阴道炎家兔阴道病理状态；

4、本发明的椿乳凝胶剂于白色念珠菌、乙型溶血性链球菌、金葡菌、表葡菌、大肠杆菌、变形杆菌有较好的体外抑制作用。

实验例2临床试验研究

选择2002年3月～2002年12月北京中医医院门诊妇科炎症患者50例，随机分为两组，分组情况如表10所示。观察组30例，年龄：20～55岁，其中滴虫性阴道炎12例、白色念珠菌性阴道炎10例、宫颈炎8例；给予本发明实施例1的中药组合物，清洁外阴后，带线棉球沾药后塞入阴道，4小时后取出，每日一次，连用7天。对照组20例，年龄：19～54岁，其中滴虫性阴道炎8例、白色念珠菌性阴道炎6例、宫颈炎6例；给予洁尔阴泡腾片1粒，清洁外阴后塞入阴道，每日一次，连用7天。两组患者治疗前2月内未用过相关药物治疗，治疗前年龄、病情、病程等相关性比较均无显著性差异，具有可比性。结果如表11所示。

表10试验组与对照组的分组情况

各组比较P＞0.05

表11临床试验结果

经Ridit分析u＝2.16，P＜0.05，有统计学意义

从表11可以看出：试验组：痊愈率63.3％，显效率23.3％，有效率10.0％，无效率3.3％，总有效率96.7％；对照组：痊愈率35.0％，显效率20.0％，有效率35.0％，无效率10.0％，总有效率90.0％。

结果表明：两组患者治疗过程中均无不良反应发生。两组疗效比较P＜0.05，有显著性差异，结果显示试验组疗效高于对照组，试验组与对照组比较还具有无刺激、无异味、不污染衣物等特点。采用其他实施例制备的中药组合物同法实验，均得到相似的效果。说明本发明的制备方法对中药组合物的有效成分提取率高，质量稳定、可控；所制得的中药组合物凝胶剂是治疗女性阴道炎、宫颈炎、宫颈糜烂等妇科炎症的安全有效理想用药。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种治疗妇科炎症的中药组合物凝胶剂的制备方法，其特征在于，所述中药组合物由以下重量份的原料药制成：椿皮35-45、苦参23-35、乳香25-35、牡丹皮25-35、冰片0.8-1.2；所述制备方法包括如下步骤：

1)用水提取椿皮，得到椿皮浸膏；

2)提取苦参的有效成分，得到苦参浸膏，与椿皮浸膏合并，浓缩得到椿皮和苦参的混合清膏；

3)用水提取乳香的挥发油；

4)水蒸气法提取牡丹皮中的丹皮酚，得到丹皮酚结晶；

5)取药用羧甲基纤维素钠、药用甘油加入到椿皮和苦参的混合清膏中，搅匀，放置，使充分溶胀；

6)取冰片、丹皮酚结晶，用50-85％乙醇溶解，加入羟苯乙酯和聚山梨酯-80，搅拌使溶解，加入乳香的挥发油，然后加入到步骤5)得到的溶胀的溶液中，加3-6倍量水混匀，放置12-36小时使充分溶胀，搅拌均匀，分装即得凝胶剂。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)为：取椿皮，加2-9倍量水，煎煮1-3次，每次1-2.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60℃时的相对密度为1.05-1.10的椿皮浸膏。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)为：取苦参，加6-12倍量水，煎煮1-3次，第一次煎煮前浸泡0.5-1.5小时，每次煎煮0.5-3小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃时的相对密度为1.10-1.15的苦参浸膏，放冷，加乙醇使含醇量达60-70％，静置8-24小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味；与椿皮浸膏合并，浓缩至60℃时的相对密度为1.05-1.10的清膏。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)为：取苦参，加6-10倍量的60-70％乙醇，加热回流提取1-3次，第一次提取前浸泡0.5-1.5小时，每次提取0.5-3小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至无醇味；与椿皮浸膏合并，浓缩至60℃时的相对密度为1.05-1.10的清膏。

5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)为：取苦参，加8-15倍量的60-70％乙醇，浸泡0.5-1.5小时，索氏提取3-6小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味；与椿皮浸膏合并，浓缩至60℃时的相对密度为1.05-1.10的清膏。

6.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤3)为：取乳香加6-10倍量水，蒸馏5-9小时，收集挥发油。

7.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤4)为：取牡丹皮，用水蒸气蒸馏法蒸馏，收集质量为4-8倍药材量的蒸馏液，放置析晶，滤过，丹皮酚结晶另置；水溶液重蒸馏，收集质量为2-4倍药材量的蒸馏液，放置析晶，滤过，合并丹皮酚结晶。

8.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤5)所述的羧甲基纤维素钠、药用甘油的用量分别是冰片重量的0.6-1.5倍。

9.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤6)所述的羟苯乙酯和聚山梨酯-80的用量分别是冰片重量的0.01-0.1倍。

10.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤6)所得凝胶剂为所用中药原料药总重量的0.1-0.2倍，优选0.15倍。