CN103893300A - 一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物及制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明具体涉及一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物及制备方法和应用。它是由丹参、连翘、黄连及红花按比例组成，其制备工艺是：按所述重量份计其配比称取中药材饮片，加15倍量水，煎煮1.5小时，过滤，药渣再加10倍量水，煎煮1小时，将2次滤液合并，减压浓缩至每毫升药液中含生药1克，过滤，分装，流通蒸汽灭菌即可，其使用方法是：奶牛子宫内灌注，隔天1次，每次100毫升，连用3～5次。本发明治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物，具有显著抗菌抗炎作用，可有效控制奶牛子宫内膜炎的发生和发展，开发利用前景广阔。

Description

一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物及制备方法和应用

一、技术领域：

本发明具体涉及一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物及制备方法和应用。

二、背景技术：

奶牛子宫内膜炎是引起奶牛不孕症的重要原因，患病奶牛因配种困难或长期不孕，使养殖效率降低，甚至提前淘汰。我国奶牛子宫内膜炎的发病率为20%～30%，给养殖业造成巨大经济损失。引起奶牛子宫内膜炎的病原性细菌主要为葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌等。研究表明，母牛产后子宫受环境中细菌的感染率达90%～100%，且有1/3感染母牛可发生子宫内膜炎，因此，在母牛产后，应及早采取抗菌抗炎的治疗方法，现阶段普遍采用的抗生素类药物对其治疗有效，但此类药物的大量使用，易引起耐药性，形成抗生素奶，对人类健康造成潜在危害。中药化学成分多样，病原不易产生耐药性，且中药多数来自天然，毒性较低，不易残留，应用中药治疗具有明显优势。根据中兽医学理论，子宫内膜炎属于带症范畴，病因为湿热，病机为瘀血，治宜清热燥湿、活血化瘀，组方以清热燥湿药为主药，并辅以活血化瘀药。目前，临床应用中药复方治疗子宫内膜炎取得一定效果，也公开了一些相关制剂，但仍存在不足之处，如药物类型单一，不能适应复杂病情需要，或组方用药与病证不尽相符，疗效欠佳。

三、发明内容：

本发明为了解决上述背景技术中的不足之处，提供一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物及制备方法和应用，其以清热燥湿、活血化瘀类中药为原料组成的中药组合物，其抗菌抗炎效果显著，对急性子宫内膜炎疗效显著，开发利用前景广阔。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为 ：一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物，其特征在于：所述的中药组合物由以下重量份原料组成：丹参15～45份、连翘20～30份、黄连15～30份、红花15～30份。

所述的中药组合物由以下重量份原料组成：丹参30～40份，连翘25～30份，黄连20～30份，红花20～30份。

所述的中药组合物由以下重量份原料组成：丹参35份，连翘30份，黄连25份，红花20份。

所述一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物制备方法，其特征在于：所述的制备方法为：按所述重量份计其配比称取各原料，加原料总量的15倍量蒸馏水，在室温为10～30℃的温度下浸泡1小时后煎煮1.5小时，然后过滤，得第1次煎煮液；药渣再加10倍量蒸馏水，煎煮1小时，然后过滤，得第2次煎煮液；将两次煎煮液合并，在温度为4℃条件下静置沉淀12小时，再经3500转/分钟的离心机离心15分钟，然后过滤，收集药液；将药液在真空度为0.087～0.095MPa，水浴温度98～100℃下减压浓缩至每毫升含原生药材1克，灌装每瓶100毫升，流通蒸汽灭菌30分钟。

所述的中药组合物作为制备牛子宫内膜炎药物中的应用。

与现有技术相比，本发明具有的优点和效果如下：本发明治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物，具有显著抗菌抗炎作用，可有效控制奶牛子宫内膜炎的发生和发展，开发利用前景广阔。

四、具体实施方式：

以下结合具体实施例来进一步说明本发明产品及具体制备方法。

实施例一：一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物由以下重量份原料组成：丹参15份，连翘20份，黄连15份，红花15份。

制备方法：按所述重量份计其配比称取各中药饮片（原料），加原料总量的15倍量蒸馏水，室温（10～30℃）浸泡1小时后煎煮1.5小时，然后过滤，得第1次煎煮液；药渣再加10倍量蒸馏水，煎煮1小时，然后过滤，得第2次煎煮液；将两次煮煮液合并，在温度4℃条件下静置沉淀12小时，再经3500转/分钟的离心机离心15分钟，然后过滤，收集药液；将药液减压浓缩（循环水真空泵减压，真空度0.087～0.095MPa，水浴温度98～100℃）至每毫升含原生药材1克（原药材重量与药液体积比1∶1），灌装每瓶100毫升，流通蒸汽灭菌30分钟，即得本发明中药组合物产品1。

实施例2：一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物由以下重量份原料组成：丹参35份，连翘30份，黄连25份，红花20份。

制备方法：同实施例1制备方法相同，得本发明中药组合物产品3。

实施例3  一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物由以下重量份原料组成：丹参45份，连翘30份，黄连30份，红花30份。

制备方法：同实施例1制备方法相同，得本发明中药组合物产品2。

上述中药组合物作为制备牛子宫内膜炎药物中的应用。

以下结合具体试验例来进一步阐述本发明所述的中药组合物的抗菌抗炎效果及对奶牛子宫内膜炎的治疗效果。

1.材料与方法

（1）试验材料：丹参、连翘、黄连、红花等中药材，购自陕西杨凌华仁堂大药房，中药组合物以重量份计其配比为：丹参35、连翘30、黄连25、红花20。金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、大肠杆菌，分离自子宫内膜炎病牛的子宫分泌物。昆白小鼠，体重20±2g；购自西安交通大学实验动物中心。营养琼脂、蛋白胨、牛肉膏，北京奥博星生物技术有限责任公司，琼脂，北京索莱宝科技有限公司；MH肉汤，北京陆桥技术有限责任公司。SW-CJ-IF型超净工作台，苏州净化设备厂；DP060型恒温培养箱，上海实验仪器厂有限公司；RE-52A旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；BSA224S-CW型电子天平，赛多利斯科学仪器有限公司。

（2）中药组合物的体外抗菌试验：①抑菌圈直径测定：在表面均匀涂布供试菌液的琼脂平板上打孔，孔径6 mm，每板3孔，孔间距>20mm，将含生药量1g/mL的中药组合物提取液加于孔中，其中接种金黄色葡萄、球菌大肠肝菌的琼脂平板，在37℃恒温培养箱中培养18h，链球菌培养24h，观察结果，试验重复3次。抑菌直径≧20mm为极度敏感，15～19mm为高度敏感，10～14mm为中度敏感，10mm以下为低度敏感。②最小抑菌浓度和最小杀菌浓度测定：取灭菌试管10支，于第1～9管中各加入无菌肉汤培养基或血清肉汤2mL（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌接种于肉汤培养基，链球菌接种于血清肉汤），然后于第1管中加入1g/mL中药组合物提取液2mL，混匀后取出2mL加入第2管，依此类推，直到第8管中取出2mL弃去，第9管为肉汤对照，第10管为药液对照。分别于第1～9管加入供试菌液0.1mL，摇匀，置37℃恒温箱中培养18h，不出现浑浊的最高药物稀释倍数为该药的最小抑菌浓度（MIC）。将所有清晰无菌生长的试管培养液接种于普通琼脂平板或血平板，37℃培养24 h，以菌落数不超过5个的最低药物浓度为该药物的最小杀菌浓度（MBC）。

（3）中药组合物的抗炎试验：①小鼠耳廓肿胀抑制试验：健康昆白小鼠50只，随机分为5组，每组10只。在正常饲养的基础上，其中第1、2、3组分别为中药组合物低、中、高浓度组，给药剂量分别为10、20、40g/kg，每天灌胃1次，连续4d，第4组为阳性药物对照组，腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液，剂量为5mg/kg，第4组空白对照组，灌服等体积生理盐水。在末次给药后0.5h，每只小鼠右耳涂布二甲苯0.05mL，左耳不涂作为正常对照，致炎30min后处死小鼠，用6.0mm的打孔器在小鼠左右耳对称位置打下相同大小的耳片，于电子天平上称重，以两耳重量差作为肿胀度，并计算给药组的耳肿胀抑制率，即：耳肿胀抑制率（%）=（对照组平均肿胀度－给药组平均肿胀度）/对照组平均肿胀度×100%，其中，肿胀度=致炎侧耳片重－非致炎侧耳片重。②小鼠足趾肿胀抑制试验：试验分组及给药方案与“中药组合物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀抑制试验”相同。在末次给药后0.5h，每只小鼠右足趾皮下注射1%甲醛0.05mL，左足趾不注射作为正常对照，致炎3h后脱颈处死小鼠，齐踝关节切下两足趾于电子天平上称重，以左右足趾重量差为肿胀度，并计算给药组的足趾肿胀抑制率。即：足趾肿胀抑制率（%）=（对照组平均肿胀度－给药组平均肿胀度）/对照组平均肿胀度×100%，其中，肿胀度=致炎侧足趾重－非致炎侧足趾重。

（4）中药组合物对奶牛子宫内膜炎的治疗效果：①试验动物及分组：选择临床患急性子宫内膜炎的病牛80头，患病牛产后表现体温升高，食欲下降，拱背，努责，阴道、子宫颈外口黏膜充血肿胀，子宫颈稍开张，从阴门排出少量恶臭分泌物，直肠检查，子宫角比正常产后期大，子宫收缩反应减弱。将病牛随机分为2组，每组40头，A组为中药组合物组，子宫内灌注中药组合物，隔天1次，每次100毫升，连用3次。B组为阳性药物对照组，10%土霉素注射液用灭菌生理盐水稀释至浓度5%，隔天1次，每次100毫升，连用3次。②疗效判定标准：用药后临床症状消失，子宫机能恢复正常，分泌物正常，判为治愈；症状明显减轻，判为有效；症状无好转甚至死亡，判为无效，并计算治愈率、有效率和无效率。治愈率=（各组治愈奶牛数/各组试验奶牛数）×100%；有效率=（各组治愈的奶牛数+有效的奶牛数/各组试验的奶牛数）×100%；无效率=（各组无效的奶牛数/各组试验的奶牛数）×100%。

（5）数据处理：试验数据采用SPSS17.0软件进行Duncan^,s显著性分析和x²显著性分析。

2结果

（1）中药组合物的体外抗菌试验结果：中药组合物对金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌极度敏感或高度敏感，最小抑菌浓度分别为8、16、16g/L，最小杀菌浓度分别为16、32、32g/L，表明中药组合物对金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌均具有显著抗菌作用。

表1中药组合物的抗菌试验结果

供试菌种	抑菌圈直径(mm)	最小抑菌浓度(g/L)	最小杀菌浓度(g/L)
				金黄色葡萄球菌	21.92±0.15	8	16
链球菌	19.08±0.72	16	32
				大肠杆菌	18.04±0.91	16	32

（2）中药组合物的抗炎试验结果：中药组合物中、高剂量组小鼠耳肿胀度显著低于空白对照组（P<0.05），足趾肿胀度极显著低于空白对照组（P<0.01），与地塞米松抗炎效果相当（P>0.05）（表2和表3），表明中药组合物具有显著抗炎作用。

表2 中药组合物对小鼠耳肿胀抑制试验结果

组别	平均耳肿胀度	耳肿胀抑制率(%)
			中药组合物低剂量组	0.0136±0.0062a	20.9
中药组合物中剂量组	0.0092±0.0033b	46.5
			中药组合物高剂量组	0.0071±0.0046b	58.7
地塞米松对照组	0.0064±0.0051b	62.7
			空白对照组	0.0172±0.0054a

注：同列数据后小写字母不同者，表示差异显著（P<0.05）。

 

表3 中药组合物对小鼠足趾肿胀抑制试验结果

组别	平均足趾肿胀度	足趾肿胀抑制率(%)
			中药组合物低剂量组	0.3342±0.1252abAB	21.1
中药组合物中剂量组	0.2405±0.0429bcBC	43.2
			中药组合物高剂量组	0.1384±0.0411cC	67.3
地塞米松对照组	0.1851±0.0128cBC	56.3
			空白对照组	0.4236±0.0581aA

注：同列数据后大写字母不同者，表示差异极显著（P<0.01）；小写字母不同者，表示差异显著（P<0.05）。

（3）中药组合物对奶牛子宫内膜炎的治疗效果：中药组合物对急性奶牛子宫内膜炎治愈率85.0%，有效率92.5%，无效率7.5%，与土霉素比较，差异不显著（P>0.05）（表4），表明，中药组合物对奶牛子宫内膜炎具有显著治疗作用。

表4 中药组合物对奶牛子宫内膜炎的治疗效果

组别	病例(头)	治愈率(%)	有效率(%)	无效率(%)
					中药组合物组	40	85.0(34/40)	92.5(37/40)	7.5(3/40)
土霉素组	40	82.5(33/40)	87.5(35/40)	12.5(5/40)

3讨论

中药组合物或中药复方，是中兽医临床用药的主要形式，与单味药比较，中药组合物化学成分更加多样，能更好发挥协同作用，可适应复杂病情需要。试验结果表明，本发明中药组合物对金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌的抑菌效果达到极度敏感或高度敏感，对小鼠耳肿胀和足趾肿胀具有显著抗炎作用，对急性奶牛子宫内膜炎病例有显著治疗效果。

   

Claims (5)

1.一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物，其特征在于：所述的中药组合物由以下重量份原料组成：丹参15～45份、连翘20～30份、黄连15～30份、红花15～30份。

2.根据权利要求1所述的一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物，其特征在于：所述的中药组合物由以下重量份原料组成：丹参30～40份，连翘25～30份，黄连20～30份，红花20～30份。

3.根据权利要求1或2所述的一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物，其特征在于：所述的中药组合物由以下重量份原料组成：丹参35份，连翘30份，黄连25份，红花20份。

4.根据权利要求1所述一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药组合物制备方法，其特征在于：所述的制备方法为：按所述重量份计其配比称取各原料，加原料总量的15倍量蒸馏水，在室温为10～30℃的温度下浸泡1小时后煎煮1.5小时，然后过滤，得第1次煎煮液；药渣再加10倍量蒸馏水，煎煮1小时，然后过滤，得第2次煎煮液；将两次煎煮液合并，在温度为4℃条件下静置沉淀12小时，再经3500转/分钟的离心机离心15分钟，然后过滤，收集药液；将药液在真空度为0.087～0.095MPa，水浴温度98～100℃下减压浓缩至每毫升含原生药材1克，灌装每瓶100毫升，流通蒸汽灭菌30分钟。

5.根据权利要求1所述的中药组合物作为制备牛子宫内膜炎药物中的应用。