CN102459295A - 2’-o-岩藻糖基乳糖的合成 - Google Patents
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Abstract
Description
发明领域
本发明涉及三糖的提高的合成,用于该合成中的新的中间体和所述中间体的制备。
发明背景
近年来,由于包括分泌的寡糖的复合糖在有生命的生物中发生的大量生物学过程中的作用,对其合成的商业化尝试已经明显增加。分泌的寡糖如人乳寡糖正在成为营养和治疗工业的重要商业靶标。然而,这些寡糖的合成和纯化以及它们的中间体对于科学仍然是一个有挑战性的任务。一个最重要的人乳寡糖是2’-O-岩藻糖基乳糖(α-L-吡喃岩藻糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖,″2’-FL″),发现其在母乳中浓度最高。
方案1.2’-O-岩藻糖基乳糖的结构
已经提出了2’-O-岩藻糖基乳糖的一些生物学作用,包括但不限于其益生元作用、抗菌作用、抗病毒作用、免疫系统增强作用、脑发育增强作用等作用,使其成为营养和治疗工业大规模生产/分离/纯化的有吸引力的靶标。已经通过化学和酶促方法合成了2’-O-岩藻糖基乳糖,但是由于缺乏有效的纯化和合成方法尚未开发出有商业价值的生产工艺。根据现有的科学知识,2’-O-岩藻糖基乳糖不是结晶三糖,这使适合于生产高纯度2’-O-岩藻糖基乳糖的大规模/低成本生产技术的开发成为一项有挑战性的任务。
可以通过使用分离、化学合成、酶促合成和生物技术方法的四种不同的方法来获得2’-O-岩藻糖基乳糖。
在文献中首次提及HMO’s出现在20世纪50年代。此时,通过使用复杂的色谱方法将特定的人乳寡糖从人乳中分离出来。然而,这些早期分离的样品的纯度相当不确定,这是因为在母乳中存在许多人乳寡糖异构体。例如2’-O-岩藻糖基乳糖和3-O-岩藻糖基乳糖都在人乳中存在,并且它们的色谱分离已经在数十年后得以解决。已经发现,来自其他哺乳动物的乳也包含这些寡糖中的一些,但是浓度极低并且比率与人乳不同。在最近数年,已经通过化学、酶促和生物技术方法取得了2’-O-岩藻糖基乳糖生产的巨大进展。然而,在以有吸引力的商业价格范围提供批量2’-O-岩藻糖基乳糖的大规模生产中,这些方法中的大部分尚未取得成功。
在最近十年,通过使用酶克隆/突变技术已经有效地开发了2’-O-岩藻糖基乳糖的酶促合成。一个具体的方法已经将岩藻糖苷酶转化为1,2-α-L-岩藻糖合酶(fucosynthase),这有利于同时合成糖苷键并避免这些的水解。不幸的是,1,2-α-L-岩藻糖合酶不能大量商购获得,并且因此到目前为止不适合于生产技术开发。第二个酶促方法使用α-(1→2)岩藻糖基转移酶,α-(1→2)-L-半乳糖基转移酶来产生糖苷间的键。这些酶是相当敏感的,并且实际上不适合于大规模的制备。另外,这些酶需要糖核苷酸类型的给体,这是相当难获得的并且是非常昂贵的。第三个酶促方法基于使用保留α-L-岩藻糖苷酶,但是获得的选择性和产率通常是相对较低的。
将遗传改造的微生物或哺乳动物用于合成2’-O-岩藻糖基乳糖的生物技术方法。这样的技术使用复杂的酶促系统,有利于前体的生物合成和需要的糖基化作用。到目前为止,于使用了遗传改造的生物和非天然寡糖的潜在污染,这些方法面临严峻的管理机构认可的障碍由。
到目前为止,化学合成仍旧是生产2’-O-岩藻糖基乳糖最经济有效的方法。大规模化学合成的障碍是低立体选择性、低总体产率、使用复杂和昂贵的纯化方法如柱色谱法,并且使用不适合于食品/治疗产品开发的毒性剂。
在现有技术中,所有的合成使用乳糖受体和完全被保护的L-岩藻糖给体作为基本的结构单元进行。方法之间的差异涉及不同的保护基策略,糖基化作用方法和最终的纯化策略。根据我们最全面的知识,2’-O-岩藻糖基乳糖的首次化学合成在1981年发表[1],并且自那以后已经发表了四种另外的化学合成方法[2-5]和一种化学酶促合成[6]方法。
2’-O-岩藻糖基乳糖的首次化学合成由K.L.Matta及其同事在1981年发表[1],其中使用6-O-苯甲酰化的乳糖受体和三-O-苄基化的α吡喃岩藻糖基溴化物给体,随后进行保护基的连续去除(方案2)。合成包括在中间体阶段中的一些色谱纯化步骤以得到最终的中间体E,其仅包含苯甲基保护基。对化合物E进行色谱法并且将纯化的样品作为二水合物从甲醇-醚中结晶出来。然而,已经证实这种二水合物对于最后的脱保护(催化氢解)步骤是相当不便的,这是因为其难以溶解。因此,使用化合物E在冰醋酸中的稀释溶液来进行还原。在去除催化剂后,蒸发滤液并将其与甲醇、甲苯和无水乙醇一起共同蒸发数次从而提供作为白色无定形固体的粗制2’-FL1。
方案2.
在1986年,M.Martin-Lomas[2]及同事公开了制备异亚丙基-保护的最终2’-FL中间体的2’-O-岩藻糖基乳糖的合成。最终的脱保护步骤是使用20%乙酸水溶液的环状酮缩醇水解。合成策略是使用难以大量制备的非常稀有的乳糖二醇受体。实际上,前体本身使该方法对于大规模的技术开发没有竞争性。此外,需要多次色谱纯化来进行中间体分离并且该方法并未提供这样的结晶中间体,其可能有利于通过结晶进行的廉价纯化选择方案。最终的脱保护是环状酮缩醇水解,这是由于L-岩藻糖残基的酸不稳定性导致的精细步骤。环状酮缩醇的水解裂解条件必须相当温和以防止副产物形成。然而,温和的水解条件终止时,在反应混合物中会存在未水解的环状酮缩醇。因此,粗制2’-O-岩藻糖基乳糖产物需要另外的色谱纯化。由于上述缺陷,该方法不适合制备技术发展。
K.L.Matta和同事公开了另外的两种合成[3,4]选择保护基策略,其有利于最终的2’-FL中间体的三氟乙酸辅助的水解。两种合成都使用相同的受体,但是使用不同的4-甲氧基苄基化的给体分子。一种方法使用由IDCP活化的正戊烯基糖苷,而第二种方法基于硫葡糖苷活化。使用具有IDCP助催化剂的戊烯基糖苷本身阻止了生产技术发展,这是由于给体有限的利用度和活化剂的较高价格。在硫葡糖苷活化的情形中,岩藻糖基化步骤提供(9:1)比率的α/β-混合物,并且需要相当难的色谱纯化以从不需要的β-产物中分离需要的立体异构体。因此,这些方法中没有一种具有以几吨(multi-ton)规模生产2’-O-岩藻糖基乳糖的潜力。
在1997年,H.Hashimoto和同事开发了使用在受体和给体分子(异亚丙基和4-甲氧基苄基)上的酸/氧化不稳定保护基的合成策略,其通过硝酸铈铵处理在三糖中间体中进行去除[5]。该方法提供非常难以处理并被大量铈铵盐污染的极性产物。2’-O-岩藻糖基乳糖和无机杂质都是水溶性物质,因此需要O-乙酰化作用之后进行Zemplén脱保护作为合成的基本纯化步骤。该方法具有许多缺陷如使用IDCP作为偶联剂,使用CAN(昂贵和有毒的)去除p-甲氧基苄基基团和在存在碱性敏感的终产物时使用甲醇钠对最终的2’-FL中间体进行O-脱乙酰作用。一般地,当用强碱处理还原糖时,不能产生高纯度的2’-O-岩藻糖基乳糖。
在2001年,L.Lay和同事引入了使用酶促和化学方法二者来合成2’-O-岩藻糖基乳糖[6]。在该方法中,使用以区域选择性方式设置正交保护基的酶促操作来合成β-苄基乳糖苷衍生的受体。合成策略的最后部分由三个步骤组成,即岩藻糖基化、O-脱乙酰作用和氢解。不成功的是,该方法从未产生商业利益,这是由于脂肪酶辅助的酰化作用的相对低产率,毒性和爆炸性肼衍生物的使用和缺少结晶中间体所导致的。在合成中自始至终出现的多次色谱步骤阻止了生产技术的发展。
简言之,分离技术从未能够提供大量的包括2’-O-岩藻糖基乳糖的人乳寡糖,这是由于在人乳中存在的大量寡糖导致的。另外,特征在于极度类似的结构的区域异构体的存在也使分离技术不成功。酶促方法遭遇下列瓶颈:酶的低利用度、非常高的糖核苷酸给体价格和由于使用遗传修饰的生物产生的酶导致的制定规章的难度。由于可能会形成一些非天然的糖基化产物,通过生物技术制备人乳寡糖具有巨大的规章障碍。到目前为止,关于合成2’-O-岩藻糖基乳糖所开发的所有的化学方法具有一些缺陷,这些缺陷阻止了制备稳定的克数量级规模的2’-O-岩藻糖基乳糖。化学方法的最严重的缺陷是缺少结晶中间体的设计以有利于低成本纯化方法并增加按比例扩大机会。因此开发适合于生产2’-O-岩藻糖基乳糖的有效合成方法的需求正在增加。
本发明提供了适合于大规模生产和大规模纯化2’-O-岩藻糖基乳糖的方法。本发明基于利用新的保护的2’-O-岩藻糖基乳糖中间体的O-苄基/取代的O-苄基结构部分的氢解作用。另外,本发明还有一个重要的特征,即上述新的O-苄基化/取代的O-苄基化2’-O-岩藻糖基乳糖中间体具有辅助有效纯化方法的较好结晶性质。例如,2’-O-岩藻糖基乳糖衍生物的高结晶性质的实现允许使用产物/中间体纯化的完全结晶来开发有效的生产方法。更重要的是,引入本发明提供的新的2’-O-岩藻糖基乳糖中间体对按比例放大可选方案展现了新的有利机会。在本发明之前,复杂的反应顺序必需以连续的方式进行,这是因为缺少廉价纯化的可选方法。新的结晶2’-O-岩藻糖基乳糖中间体允许彼此分离的化学步骤,提供按比例放大开发的现实有利机会。因此,本发明提供的结晶新的中间体为适合于提供批量的高纯度营养和药物工业的2’-O-岩藻糖基乳糖的首次2’-O-岩藻糖基乳糖生产技术。
发明概述
在第一个方面,本申请涉及通式1的化合物用于制备2’-O-岩藻糖基乳糖的应用,其特征在于使通式1的化合物或其水合物或溶剂化物在包含水、或一个或多个C1-C6醇或其混合物的介质中进行催化氢解作用
(其中R1和R2,彼此独立地是可通过氢解作用去除的基团并且R3是可通过氢解作用去除的基团或H)。
在第二个方面,本发明提供新的通式1的化合物或其水合物或溶剂化物
(其中R1和R2,彼此独立地是可通过氢解作用去除的基团并且R3是可通过氢解作用去除的基团或H),条件是排除O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖二水合物。
在第三个方面,本发明涉及用于制备一组根据第二个方面所述的新的通式1的化合物或其水合物或溶剂化物的方法,
(其中R1和R2,彼此独立地是可通过氢解作用去除的基团并且R3是可通过氢解作用去除的基团或H,条件是当R3为H时,那么R1和R2基团中的至少一个不同于未取代的苄基),其特征在于通式2的化合物或其水合物或溶剂化物进行酸催化的温和水解
(其中R1和R2,彼此独立地是可通过氢解作用去除的基团,R4是可通过氢解作用去除的基团,乙缩醛型基团,甲硅烷基或H,R是烷基或两个成对的R-基团与它们所连接的碳原子形成C3-C6环烷基环,R’是烷基,条件是当R4指乙缩醛型基团,甲硅烷基或H时,则R1和R2基团中的至少一个不同于未取代的苄基)。
本申请的第四个方面涉及用于制备属于根据本申请第二个方面的通式1的化合物的不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖的方法,所述方法包括下述步骤:
a)通式2’的化合物或其水合物或溶剂化物,的酸催化的温和水解,
(其中R’4是乙缩醛型基团,甲硅烷基或H,R是烷基或两个成对的R-基团与它们所连接的碳原子一起形成C3-C6环烷基环并且R’是烷基)
b)收集直接从反应混合物中沉淀的产物,
c)从C1-C6醇或C1-C6醇混合物再结晶。
本申请的第五个方面涉及用于制备属于根据本申请的第二个方面所述的通式1的化合物的不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖的另一种方法,所述方法包括下述步骤:
a)通式2’的化合物或其水合物或溶剂化物的酸催化的温和水解
(其中R’4是乙缩醛型基团,甲硅烷基或H,R是烷基或两个成对的R-基团与它们所连接的碳原子一起形成C3-C6环烷基环并且R’是烷基),
b)将获得的物质溶解在极性较小的非质子溶剂中,
c)用水萃取,
d)分离产物,
e)从C1-C6醇或C1-C6醇的混合物再结晶。
本申请的第六个方面涉及制备属于根据本申请的第二个方面所述的通式1的化合物不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖的另一种方法,所述方法包括下述步骤::
a)将根据第四个方面步骤a-b)或根据第五个方面步骤a-d)获得的粗制产品溶解于极性较高的非质子溶剂中,
b)用极性较小的非质子溶剂稀释,
c)用水萃取和
d)结晶。
本申请的第七个方面涉及用于制备2’-O-岩藻糖基乳糖的方法,其特征在于使通式1的化合物或其水合物或溶剂化物在包含水、或一种或多种C1-C6醇或其混合物的介质中进行催化氢解作用
(其中R1和R2彼此独立地是可通过氢解作用去除的基团并且R3是可通过氢解作用去除的基团或H)。
附图简述
本发明将参考附图在下文进行更详细地描述,其中:
图1显示不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖的X-射线粉末衍射图谱。
图2显示不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖的IR光谱。
图3显示不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖的DSC记录。
本发明详细内容
贯穿本申请的说明书,术语“烷基”意为具有1-20个碳原子的直链或支链饱和的烃基,优选地具有1-6个碳原子,如甲基,乙基,正丙基,异丙基,正丁基,异丁基,仲丁基,叔丁基,正己基等。术语“任选地取代的烷基”意欲指可以携带1,2,3,4或5个取代基或可以未被取代的烷基链。可能的取代基,彼此独立地选自卤素,羟基,任选地取代的烷氧基,硝基,氨基,任选地取代的烷基氨基,任选地取代的二烷基氨基,任选地取代的酰基,任选地取代的酰基氨基,羧基,任选地取代的烷氧基羰基,氨基甲酰基,任选地取代的N-烷基氨基甲酰基,任选地取代的N,N-二烷基氨基甲酰基,任选地取代的N-芳基氨基甲酰基,硫醇,任选地取代的烷基硫烷基,任选地取代的芳基,任选地取代的芳氧基和任选地取代的芳氧基羰基。要强调的是,将苄基视为取代的烷基(即苯基甲基)的成员。任选地取代的苄基意欲指与甲基连接的任选地取代的苯基(见下文),如4-甲基苄基,3-苯基苄基,4-甲氧基苄基等。
在本申请中,术语“芳基”,单独地或当与另一个原子或基团连接时,指同芳香性基团如苯基或萘基。如果这些基团是“任选地取代的”,它们可以是未被取代的或可以携带1,2,3,4或5个基团,包括-彼此独立地-任选地取代的烷基,任选地取代的烷氧基,卤素,硝基,氨基,任选地取代的烷基氨基,任选地取代的二烷基氨基,任选地取代的酰基,任选地取代的酰基氨基,羧基,任选地取代的烷氧基羰基,氨基甲酰基,任选地取代的N-烷基氨基甲酰基,任选地取代的N,N-二烷基氨基甲酰基,硫醇,任选地取代的烷基硫烷基和任选地取代的苯基。
在本发明的说明书中,术语“酰基”指R”-C(=O)-基团,其中R”可以是H,烷基(见上)或芳基(见上),如甲酰基,乙酰基,丙酰基,丁酰基,新戊酰基,苯甲酰基,等。在“任选地取代的酰基”的情形中,所述烷基或芳基残基可以是未被取代的或可以被取代(见下页),提供酰基基团,如氯乙酰基,三氯乙酰基,4-氯苯甲酰基,4-硝基苯甲酰基,4-苯基苯甲酰基,4-苯甲酰氨基苯甲酰基,4-(苯基氨基甲酰基)-苯甲酰基等。如果R意为H或烷基,那么该基团也称为“烷酰基”,并且如果R是芳基,那么该基团被称为芳酰基。
术语“烷基氧基(alkyloxy)”或“烷氧基(alkoxy)”意为通过氧原子连接于母体分子结构部分的烷基基团(见上),如甲氧基,乙氧基,叔丁氧基等。“任选地取代的烷氧基基(alkyloxy)”或“任选地取代的烷氧基(alkoxy)”指烷氧基基团,其可以未被取代或可以如上定义在烷基部分上被取代,如三氟甲氧基,2,2,2-三氯乙氧基等。
“C3-C6环烷基”意为环丙基,环丁基,环戊基或环己基。
“C1-C6醇”指具有1-6个碳原子的羟基或二羟基-烷烃,如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、仲丁醇、叔丁醇、戊醇、正己醇、乙二醇、丙二醇等.
“卤素”意为氟,氯,溴或碘。
“氨基”指-NH2基团。
“烷基氨基”意为通过-NH-基团连接于母体分子结构部分的烷基基团(见上),如甲基氨基,乙基氨基等。“任选地取代的烷基氨基”指这样的烷基氨基基团,其可以未被取代或可以如上定义在烷基部分上被取代。
“二烷基氨基”意为通过氮原子连接于母体分子结构部分的相同或不同的两个烷基基团(见上),如二甲基氨基,二乙基氨基等。“任选地取代的二烷基氨基”指这样的二烷基氨基,其中烷基部分的至少一个可以未被取代或可以如上定义被取代。
“酰基氨基”指通过-NH-基团连接于母体分子结构部分的酰基基团(见上),如乙酰基氨基(乙酰氨基),苯甲酰基氨基(苯甲酰氨基)等。“任选地取代的酰基氨基”是这样的酰基氨基基团,其可以未被取代或可以如上定义在酰基部分上被取代。
“羧基”指-COOH基团。
“烷氧基羰基”意为通过-C(=O)-基团连接于母体分子结构部分的烷氧基基团(见上),如甲氧基羰基,叔丁氧基羰基等。“任选地取代的烷氧基羰基”是这样的烷氧基羰基基团,其可以未被取代或可以如上定义在烷基部分上被取代,如苄氧基羰基等。
“氨基甲酰基”是H2N-C(=O)-基团。
“N-烷基氨基甲酰基”意为通过-HN-C(=O)-基团连接于母体分子结构部分的烷基基团(见上),如N-甲基氨基甲酰基等。“任选地取代的N-烷基氨基甲酰基”是这样的N-烷基氨基甲酰基基团,其可以未被取代或可以如上定义在烷基部分上被取代。
“N,N-二烷基氨基甲酰基”意为通过>N-C(=O)-基团连接于母体分子结构部分的相同或不同的两个烷基基团(见上),如N,N-甲基氨基甲酰基等。“任选地取代的N,N-二烷基氨基甲酰基”是这样的N,N-二烷基氨基甲酰基基团,其中烷基部分的至少一个可以未被取代或可以如上定义被取代。
“N-芳基氨基甲酰基”是通过-HN-C(=O)-基团连接于母体分子结构部分的芳基基团(见上),如N-苯基氨基甲酰基等。“任选地取代的N-芳基氨基甲酰基”是这样的N-芳基氨基甲酰基基团,其可以未被取代或可以如上定义在芳基部分上被取代。
“硫醇”指-SH基团。
“烷基硫烷基”或“烷硫基”意欲指通过硫原子连接于母体分子结构部分的烷基基团(见上),如甲基硫烷基(甲硫基),乙基硫烷基(乙硫基)等。“任选地取代的烷基硫烷基”指这样的烷基硫烷基基团,其可以未被取代或可以如上定义在烷基部分上被取代。
“芳氧基”意为通过氧原子连接于母体分子结构部分的芳基基团(见上),如苯氧基,萘氧基等。“任选地取代的芳氧基”指这样的芳氧基基团,其可以未被取代或可以如上定义在芳基部分上被取代,如4-甲氧基苯氧基,4-甲基苯氧基等。
“芳氧基羰基”意为通过-C(=O)-基团连接于母体分子结构部分的芳氧基基团(见上),如苯氧基羰基等。“任选地取代的芳氧基羰基”是这样的芳氧基羰基基团,其可以未被取代或可以如上定义在芳基部分上被取代。
“叠氮基”意为-N3基团。
复合糖如2’-O-岩藻糖基乳糖的合成遵循利用保护和脱保护策略的多个步骤的合成途径。尽管寡糖合成存在多样的中间体结构,最终的合成靶标通常是特征在于限制水溶性(exclusive water solubility)的未受保护的寡糖本身。通常用于合成生产工艺的有机溶剂不适合寡糖合成中较为靠后阶段的反应。氢解作用代表在保护基化学工艺中的例外,其中可以将水用作溶剂。氢解作用本身是适合于在防止副产物形成的极度温和条件下以几乎定量的方式从寡糖支架去除O-苄基/取代的O-苄基结构部分的有效脱保护工艺。氢解作用作为在复杂的合成途径中的最终去封闭方法还有一个优势,即只需要催化量的试剂来完成反应,其中仅提供甲苯或取代的甲苯衍生物作为副产物。甚至在多吨规模上,甲苯和取代的甲苯衍生物也可以容易地通过蒸发和/或萃取工艺从水溶性寡糖产物中去除。
已经在以前的科学文献中描述了大量过-O-苄基化的寡糖的制备,但是这些寡糖衍生物是油、浆状物或非晶形的固体,而不是结晶的固体。然而,本发明提供许多实施例,其中甚至简单的O-苄基化的新寡糖也能提供结晶的固体,这是由于精细的结构设计,如控制异头纯度和/或通过将多个O-苄基结构部分引入最高级的寡糖中间体来产生非极性分子区域所导致的。另一方面,本发明还利用寡糖中间体的高结晶性质,其用选定的取代O-苄基保护基进行修饰。
利用高度结晶的O-苄基化和/或取代的O-苄基化寡糖中间体的氢解作用的组合产生可能的寡糖生产技术的基础。
如上指出,许多寡糖提供的油或浆状物将生产纯化技术限于昂贵的色谱技术。不受保护的寡糖的高度水溶解度和低有机溶剂溶解度进一步将纯化技术的范围限制到高成本的反相分离。本发明提供一种备选的制备高纯度的未保护的寡糖的低成本纯化方法,该方法首先将粗制寡糖混合物转化为结晶的O-苄基化/取代的O-苄基化寡糖,在第二个阶段使用结晶作为低成本的纯化方法,在最终的阶段去除O-苄基/取代的O-苄基保护基。
事实上,本发明组合了氢解作用的高度有利的特征以及O-苄基化/取代的O-苄基化寡糖中间体的高度结晶性质。
本发明的第一个方面涉及通式1的化合物用于制备2’-O-岩藻糖基乳糖的应用,其特征在于使通式的化合物1或其水合物或溶剂化物,在包含水、或一种或多种C1-C6醇或其混合物的介质中进行催化氢解作用
(其中R1和R2,彼此独立地是可通过氢解作用去除的基团并且R3是可通过氢解作用去除的基团或H)。
术语“可通过氢解作用去除的基团”指这样的基团,其偶联于氧的键容易地通过在存在钯、阮内镍或适合的金属催化剂时加入氢裂解,导致被保护的一个或多个OH-基团的再生。这种保护基是本领域技术人员公知的,它们中的许多被P.G.M.Wuts和T.W.Greene:Protective groups in organicsynthesis(有机合成中的保护基)John Wiley & Sons(2007)提及,包括但不限于:苄基,二苯基甲基(二苯甲基),1-萘基甲基,2-萘基甲基,苄氧基甲基,苄氧基羰基或三苯基甲基(三苯甲基)基团,它们中的全部都可以在芳香环上由下述任选地取代:一个或多个烷基,烷氧基,苯基,氨基,酰基氨基,烷基氨基,二烷基氨基,硝基,羧基,烷氧基羰基,氨基甲酰基,N-烷基氨基甲酰基,N,N-二烷基氨基甲酰基,叠氮基,卤素烷基或卤素。
术语“在包含水、一种或多种C1-C6醇或其混合物的介质中的催化氢解作用”意欲指在存在催化剂时用氢还原,所述还原典型地在水中,在C1-C6醇中或在C1-C6醇的混合物中,或在水与一种或多种C1-C6醇的混合物中发生。反应环境可以包含有机酸(如乙酸、甲酸、丙酸、氯乙酸、二氯乙酸、三氟乙酸等)和/或可部分或完全与有机酸、C1-C6醇或水混溶的非质子溶剂(如THF、二噁烷、乙酸乙酯等)。反应介质的水含量可以是0-100%,优选地2-50%,更优选地3-10%。醇可以以0-100%,优选地50-98%,更优选地90-97%的范围存在。将水、醇、水-醇混合物或水-醇-乙酸混合物优选地作为溶剂体系。通常将以1-50g/100ml,优选地3-33g/100ml,更优选地6-12g/100ml浓度包含碳水化合物衍生物的溶液用于反应中,但是也可以应用混悬液。将反应混合物在10-100℃温度范围,优选地在20-50℃的温度范围,在1-50bar的氢气氛下,在存在催化剂如钯、阮内镍或任何其它适合的金属催化剂,优选地2-10%钯碳或钯黑时搅拌,直到达到反应完全。基于碳水化合物的重量,催化剂金属浓度通常范围是0.1%到5.0%。优选地,催化剂浓度范围是0.15%-2.50%,更优选地是0.25%-1.25%。还可以进行转移氢化,此时氢在原位从环己烯,环己二烯,甲酸或甲酸铵产生。氢解作用混合物的pH优选地是中性的,但是还可以将有机或无机碱/酸和/或碱性和/或酸性离子交换树脂用于改善氢解作用的动力学。当在前体的取代的苄基结构部分上存在卤素取代基时,尤其优选碱性物质的应用。当必需从前体去除多个苄基基团时,将乙酸有利地用作共溶剂,其范围是0.1-5.0v/v%,优选地0.5-3.0v/v%,更优选地0.75-1.25v/v%。优选的有机碱包括,但不限于三乙胺,二异丙基乙胺,氨水,氨基甲酸铵,二乙胺等。建议的条件允许使用较少的溶剂以较少的体积进行还原,并且使研究按比例放大方法和开发用于生产2’-FL的工业方法成为可能。此外,可以应用简单、方便和精细的溶剂去除,以优越的产率和高纯度提供2’-FL。
在一个优选的实施方案中,可以将由本发明的方法生产的2’-O-岩藻糖基乳糖通过冷却或加入醚从水/有机溶剂/水溶液中沉淀而作为非晶形的固体分离,所述醚包括但不限于MTBE,二乙醚,二异丙基醚等和/或C1-C6醇。备选地,还可以通过冷冻干燥和喷雾干燥分离2’-O-岩藻糖基乳糖。
在另一个优选的实施方案中,特征在于通式1的化合物的氢解作用使用水或水-醇混合物作为溶剂,2-10%的钯碳或钯黑作为催化剂,在1-10atm的氢压下,在20-60℃的温度进行。在完成氢解作用后,过滤反应混合物并且优选地将其通过去除有机溶剂组分进行浓缩并进行沉淀,喷雾干燥,冷冻干燥,以受控的方式产生无水和/或水合2’-O-岩藻糖基乳糖(水含量0-20%)。
在另一个优选的实施方案中,特征在于通式1的化合物的氢解作用使用水或水-醇混合物作为溶剂,2-10%的钯碳或钯黑作为催化剂,在1-10atm的氢气氛压力下,在20-60℃的温度进行。在完成氢解作用后,过滤反应混合物并且优选地将其进行浓缩,产生2’-O-岩藻糖基乳糖水溶液/浆状物,2’-O-岩藻糖基乳糖的浓度为10-95%。
根据本发明优选的实践方案,将通式1的化合物,其中R1=R2=苄基并且R3是H用于氢解作用,所述通式1的化合物以水合形式或水合形式和无结晶水形式的混合物存在。
在另一个优选的实施方案中,采用通式1的化合物,其中R1=R2=苄基并且R3是H,不含结晶水。令人惊奇的是,该无水衍生物在热甲醇(3体积)中与二水合物(其仅部分溶解于10体积的热甲醇中)相比具有优越的溶解性,这允许使用较少的溶剂以较少的体积进行还原。此外,可以简单、方便和精巧地去除溶剂,从而以优良的产量和高纯度提供2’-FL。
本发明提供的2’-O-岩藻糖基乳糖的固体形式如非晶形/冷冻干燥/喷雾干燥/的固体形式和2’-O-岩藻糖基乳糖的液体形式如水溶液/浆状物具有适合于婴幼儿营养应用的高2’-FL纯度,所述婴幼儿营养应用包括但不限于婴幼儿配方、婴幼儿谷类食品、临床婴幼儿营养产品等。一般地,由本发明的方法产生的2’-O-岩藻糖基乳糖的固体形式和液体形式适合于婴幼儿、初学走路的孩子、儿童、成年人和老年人的一般营养应用。由本发明提供的固体和液体形式的2’-O-岩藻糖基乳糖还可以用作食品添加剂、食品添加物、醇和非醇饮料如软饮料、果汁、瓶装水、葡萄酒、啤酒等的成分。还可以将本发明提供的固体和液体形式的2’-O-岩藻糖基乳糖用作广泛治疗应用领域的治疗剂,包括但不限于预防细菌和病毒感染以避免腹泻,增强免疫系统和脑发育等。还可以将本发明提供的固体和液体形式的2’-O-岩藻糖基乳糖用在兽医应用中,包括但不限于针对家养动物的感染性疾病。还可以将本发明提供的2’-O-岩藻糖基乳糖用作制备聚合的/聚合物封固产品的关键单体,提供对于细菌和病毒的多价结合。还可以将本发明提供的2’-O-岩藻糖基乳糖通过应用化学和/或酶促方法用于制备其它的人乳寡糖,所述化学和/或酶促方法包括,但不限于:进一步的岩藻糖基化,进一步的唾液酰化,通过N-乙酰基乳糖胺基化/N-乙酰基异乳糖胺化进一步延伸核心结构等的简单结构修饰。
本发明的第二个方面提供新的三糖,其特征在于通式1或其水合物或溶剂化物
其中R1和R2,彼此独立地是可通过氢解作用去除的基团并且R3是可通过氢解作用去除的基团或H,条件是O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖二水合物被排除在外。
要重点强调的是,可以将特征在于通式1的新的衍生物视为单一化学实体,如α或β端基异构体或甚至α和β异构体的端基异构混合物。通式1的新的2’-O-岩藻糖基乳糖中间体可以表征为结晶固体、油、浆状物、沉淀的非晶形物质或喷雾干燥的产品。如果是结晶的,通式1的化合物可以以无水形式存在或可以通过在其结晶结构中结合一个或数个水分子以水合的结晶形式存在。类似地,特征在于通式1的新的化合物可以作为在其结晶结构中结合配体如有机分子和/或离子的结晶物质存在。
在一个优选的实施方案中,新的三糖特征在于通式1,其中R1和R2彼此独立地是苄基,4-甲基苄基,苄氧基羰基,萘基甲基,3-苯基苄基,4-氯苄基,4-甲氧基苄基,3,4-二甲氧基苄基,2,4,6-三甲基苄基或2,3,4,5,6-五甲基苄基,更优选地是苄基或4-甲基苄基并且R3是H。
甚至更优选的化合物是O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖,其不含结晶水,
根据本发明所述的不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖包含在20.96±0.202Θ的X-射线衍射反射,更优选地包含在20.96±0.20 2Θ和16.95±0.20 2Θ的X-射线衍射反射,甚至更优选地包含在20.96±0.20 2Θ,16.95±0.20 2Θ和4.58±0.20 2Θ的X-射线衍射反射,最优选地包含在20.96±0.20 2Θ,16.95±0.20 2Θ,4.58±0.20 2Θ和17.40±0.20 2Θ的X-射线衍射反射,具体地包含在下表列出的一个或多个2Θ角度±0.20的X-射线衍射反射:
将XRPD图谱显示在图1中。
根据本发明所述的不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖具有在1078cm-1的特征性IR峰,优选地具有在1078和1044cm-1的特征性IR峰,更优选地具有在1078,1044和3375cm-1特征性IR峰,甚至更优选地具有在1078,1044,3375和1384cm-1的特征性IR峰,具体地在选自3375,2929,1462,1454,1402,1384,1078,1044cm-1的一个或多个波数具有特征性IR峰。
将IR光谱显示在图2中。
根据本发明所述的不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖在DSC研究中显示吸热反应,其峰值温度在212±5℃,更优选地在212±4℃,甚至更优选地在212±3℃,最优选地在212±2℃,具体地在212±1℃。
将DSC温谱图显示在图3中。
可以将本发明提供的新的通式1的化合物用于通过使用本领域已知的化学/酶促方法制备2’-O-岩藻糖基乳糖本身和其它2’-O-岩藻糖基乳糖衍生物。还可以将通式1的新的化合物用作高级前体/中间体,以生产/制备多种人乳寡糖。还可以将通式1的新的化合物用作有价值的中间体来合成适合于治疗/营养应用的复合寡糖/复合糖。
本发明的第三个方面提供用于制备一组根据第二个方面的特征在于通式1的化合物或其水合物或溶剂化物的方法,其中R1和R2,彼此独立地是可通过氢解作用去除的基团并且R3是可通过氢解作用去除的基团或H,条件是当R3意为H时,那么R1和R2基团中的至少一个不同于未取代的苄基-,所述方法特征在于使通式2的化合物或其水合物或溶剂化物进行酸催化的温和水解
其中R1和R2,彼此独立地是可通过氢解作用去除的基团,R4是可通过氢解作用去除的基团,乙缩醛型基团,甲硅烷基或H,R是烷基或两个成对的R-基团与它们所连接的碳原子一起形成C3-C6环烷基环,R’是烷基,条件是当R4为乙缩醛型基团,甲硅烷基或H时,那么R1和R2基团中的至少一个不同于未取代的苄基。
术语“乙缩醛型基团”意为这样的保护基,其与待保护的羟基基团的氧原子形成具有两个连接于同一碳原子的单键氧的结构,其特征在于下述通式结构:
待保护的OH-基团
其中Ra,Rb和Rc是与碳键合的基团。这种基团是本领域技术人员公知的,它们中的许多由P.G.M.Wuts和T.W.Greene:Protective groups in organicsynthesis(在有机合成中的保护基)John Wiley & Sons(2007)提及,包括,但不限于甲氧基甲基,叔丁氧基甲基,2-甲氧基-乙氧基甲基,苄氧基甲基,四氢吡喃基,四氢呋喃基,1,4-二噁烷-2-基,1-甲基-1-甲氧基乙基,1-甲基-1苯氧基乙基等。乙缩醛型保护基在温和酸性条件下是不稳定的。
术语“甲硅烷基团”意为这样的保护基,其包含共价结合于待保护的羟基基团的氧原子的硅原子(甲硅烷基醚)。这种基团是本领域技术人员公知的,它们中的许多由P.G.M.Wuts和T.W.Greene:Protective groups in organicsynthesis(在有机合成中的保护基)John Wiley & Sons(2007)提及,包括但不限于三甲基甲硅烷基,三异丙基甲硅烷基,叔丁基二甲基甲硅烷基,叔丁基二苯基甲硅烷基等。所述甲硅烷基醚在温和酸性条件下是不稳定的。
术语“酸催化的温和水解”指这样的化学反应,其中水在pH>2的酸存在下与另一种具有酸不稳定性保护基的物质反应以再生被保护的官能团。在本发明中,酸不稳定性保护基可以是伯羟基或仲羟基的保护基(以无环乙酸醛或甲硅烷基醚的形式存在),1,2-二醇系统的保护基(以环状乙缩醛的形式存在)或甲酰基基团(以乙缩醛的形式存在)。起始化合物可以具有一个以上的酸不稳定性保护基,其可以同时或顺序被去除。此外,糖苷间键也可以对酸敏感。技术人员完全理解糖苷间键可以仅通过强烈的酸性水解(pH<2)分解。技术人员能够区分哪种脱保护条件影响乙缩醛和/或甲硅烷基团,同时保持糖苷间键完整。水(其必需作为试剂存在于反应环境中)还可以作为溶剂或共溶剂。可以将在酸性条件下稳定并且可与水完全或部分混溶的有机质子或非质子溶剂(如C1-C6醇、丙酮、THF、二噁烷、乙酸乙酯、乙腈等)或其混合物用在与水的混合物中。所用的酸通常是质子酸,其选自但不限于:乙酸,三氟乙酸,HCl,甲酸,硫酸,过氯酸,草酸,对甲苯磺酸,苯磺酸,阳离子交换树脂等,其可以以催化量到过量较多存在。水解可以在20℃到回流的温度进行,直到反应完成,取决于温度、浓度和pH需约2小时到3天。优选地,有机酸包括但不限于乙酸、甲酸、氯乙酸、草酸等的水溶液,在40-75℃使用。
备选地,无水C1-C6醇(包括但不限于甲醇,乙醇,丙醇,丁醇等),也可以用于通过酸催化的反式-缩醛化作用/反式-缩酮化作用过程进行无环/环状乙缩醛/酮缩醇结构部分的需要的裂解。可以将催化量的氯化氢、硫酸、过氯酸、对甲苯磺酸、乙酸、草酸、樟脑磺酸、强酸性离子交换树脂等在20℃到回流的温度用于本发明的目的。优选地,在存在强有机磺酸如对甲苯磺酸或樟脑磺酸时,使用甲醇-乙腈2∶1的混合物。
在优选的实施方案中,酸催化的温和水解在40-75℃的乙酸水溶液中进行。
在另一个优选的实施方案中,使用这样的化合物,其特征在于通式2,其中R和R’是甲基,R1和R2基团中的一个或R1和R2基团同时为4-甲基苄基并且R4是H。
本发明的第四个方面提供制备不含结晶水并且属于根据第二个方面所述的新的通式1化合物的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖的方法,
所述方法包括下述步骤:
a)通式2’的化合物或其水合物或溶剂化物的酸催化的温和水解,
其中R’4是乙缩醛型基团,甲硅烷基或H,R是烷基或两个成对的R-基团与它们所连接的碳原子一起形成C3-C6环烷基环并且R’是烷基,
b)收集直接从反应混合物沉淀的产物,
c)从C1-C6醇或C1-C6醇的混合物再结晶。
在优选的实施方案中,将特征在于通式2’的化合物用于水解,其中R和R’是甲基并且R’4是H。
在完成水解后,取决于温度、所用的溶剂混合物和浓度,脱保护的三糖可以从反应混合物沉淀。优选地,沉淀从包含乙酸乙酯/乙腈/水的三元溶剂体系发生,其中乙酸乙酯的比率是超过40-45v/v%,或从酸性THF水溶液中发生,其中所述酸是强无机酸如约0.5-1M浓度的HCl、硫酸或过氯酸的水溶液。接着,收集的固体可以从C1-C6醇,优选地从甲醇、乙醇和异丙醇,最优选地从甲醇中再结晶以产生不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖。用于再结晶的C1-C6醇的体积相对于待再结晶的三糖的风干质量是约2-8倍,优选地2-5倍,更优选地2.5-3.5倍。可以通过加入晶种来促进再结晶。
本申请的第五个方面涉及用于制备属于根据本申请的第二个方面所述的通式1的化合物且不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖的另一种方法,所述方法包括下述步骤:
a)通式2’的化合物或其水合物或溶剂化物的酸催化的温和水解:
其中R’4是乙缩醛型基团,甲硅烷基或H,R是烷基或两个成对的R-基团与它们所连接的碳原子一起形成C3-C6环烷基环并且R’是烷基,
b)将获得的物质溶解于极性较小的非质子溶剂,
c)用水萃取,
d)产物的分离,
e)从C1-C6醇或C1-C6醇的混合物再结晶。
“极性较小的非质子溶剂”意欲指极性非-供质子(其不能充当质子给体)溶剂,其介电常数少于约15,如氯仿、乙酸正丁酯、氯苯、乙酸乙酯、正丁基氯化物、二氯甲烷、1,4-二氯苯、二氯乙烷、甲基异丁酮、四氢呋喃、吡啶等。
由于酸催化的分解作用,直接从反应混合物沉淀的目标三糖可以包含极性单糖或二糖,主要是乳糖。分解过程后可以进行TLC,并且分解的副产物与目标三糖的比率可以通过TLC研究来估计。如果沉淀的固体由于相对更大量的极性副产物而不能从C1-C6醇再结晶,将该固体再次溶解于极性较小的非质子溶剂中如酯型溶剂如乙酸乙酯、乙酸正丁酯等,或如氯化溶剂如DCM、氯仿、二氯化乙烯、正丁基氯化物、氯苯等,优选地,酯型溶剂,更优选地乙酸乙酯,用水进行洗涤从而去除极性污染物。接着,产物从有机相沉淀或结晶出来,其可以从C1-C6醇中,优选地从甲醇,乙醇和异丙醇中,最优选地从甲醇中再结晶出来以提供不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖。用于再结晶的C1-C6醇的体积相对于待再结晶的三糖的风干质量是约2-8倍,优选地2-5倍,更优选地2.5-3.5倍。可以通过加入晶种来促进再结晶。
在结束水解后,脱保护的三糖可以通过蒸发溶剂作为粗制的油或浆状物从反应混合物中获得,其可以再次溶解于极性较小的非质子溶剂中,诸如酯型溶剂(如乙酸乙酯,乙酸正丁酯等),或如氯化溶剂如DCM、氯仿、二氯化乙烯、正丁基氯化物、氯苯等,优选地酯型溶剂,更优选地乙酸乙酯,并用水洗涤从而去除极性污染物。接着,该产物从有机相中沉淀或结晶出来,其可以从C1-C6醇,优选地从甲醇、乙醇和异丙醇,最优选地从甲醇中再结晶以得到不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖。用于再结晶的C1-C6醇的体积相对于待再结晶的三糖的风干质量是约2-8倍,优选地2-5倍,更优选地2.5-3.5倍。可以通过加入晶种来促进再结晶。
根据更优选的实施方案,将特征在于通式2’的化合物用乙酸水溶液在60-75℃进行处理,优选地用60-75%乙酸水溶液进行处理,蒸发溶剂以获得油性残余物,将其再次溶解于4-6体积的乙酸乙酯中,用水萃取一次或两次,将从有机相中沉淀的晶体从甲醇中再结晶以获得不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖。
本申请的第六个方面涉及用于制备属于根据本申请的第二个方面所述的通式1的化合物的不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖的另一种方法,所述方法包括下述步骤:
a)将根据第四个方面步骤a-b)或根据第五个方面步骤a-d)获得的粗制产物溶解于极性较高的非质子溶剂中,
b)用极性较小的非质子溶剂稀释,
c)用水萃取和
d)结晶。
“极性较高的非质子溶剂”意欲指极性非供质子(不能充当质子供体)溶剂,其介电常数超过约15,如甲乙酮、丙酮、N-甲基吡咯烷酮、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、乙腈、DMSO、六甲基磷酰胺、硝基苯、硝基甲烷等。
在优选的实施方案中,将特征在于其中R和R’是甲基并且R’4是H的通式2’化合物用于水解。
可以将根据本发明的第四个方面或第五个方面所述的从极性较小的非质子溶剂获得的粗制化合物再溶解于极性较高的非质子溶剂中,优选地DMSO,DMF,二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷酮,更优选地DMSO。所用的极性较高的非质子溶剂的体积相对于三糖的风干质量优选地是0.8-1.2倍。将获得的溶液用极性较小的非质子溶剂如酯型溶剂(如乙酸乙酯、乙酸正丁酯等),或如氯化溶剂如DCM、氯仿、二氯化乙烯、正丁基氯化物、氯苯等,优选地酯型溶剂,更优选地乙酸乙酯进行稀释。所用的极性较小的非质子溶剂的体积相对于所用的极性较高的非质子溶剂优选地是2-7倍,更优选地是3-5倍。接着,将在极性较小和极性较高的非质子溶剂中的三糖溶液用水萃取数次,优选地1-2次。在静置后,晶体更易于沉淀,接着将其过滤,用所用的冷极性较小的非质子溶剂洗涤,并干燥以提供不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖。
根据优选的实施方案,将特征在于通式2’的化合物用乙酸水溶液在60-75℃,优选地用60-75%的乙酸水溶液进行处理,将溶剂蒸发以获得油性残余物,将其再溶解于乙酸乙酯中,用水萃取一次或两次,并将从乙酸乙酯沉淀的晶体再溶解于DMSO中,用乙酸乙酯稀释,用水洗涤,并将不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖从有机相中结晶。
特征在于通式2或2’的化合物可以通过标准方法来产生(方案3)。将L-岩藻糖进行过酰化,接着将L-岩藻糖四乙酸酯在存在Lewis酸时用苯硫酚进行硫化以提供苯基2,3,4-三-O-乙酰基-1-硫代-β-L-吡喃岩藻糖苷。乙酰基的去除在Zemplén条件下实现,并将得到的三醇用二甲氧基-丙烷/酸处理以形成3,4-丙酮化合物。接着,将在2nd位置的游离OH-基团用NaH进行脱质子化,并使醇化物与R1-卤化物反应,其中R1如上定义,以提供通式3的化合物。通过酸性水解来去除异亚丙基-乙缩醛,并将释放的OH-基团通过NaH/R2-卤化物体系进行保护,其中R2如上定义,以产生通式4的化合物。当以苯基1-硫代-β-L-吡喃岩藻糖苷进行相同的反应时,可以获得通式4的化合物,其中R1=R2。将通式4的化合物用作糖基化反应中的糖基给体。
方案3
糖基受体5可以在两个步骤中从乳糖合成。在存在酸如对甲苯磺酸时,在回流下用对称酮的二烷氧基酮缩醇处理乳糖,得到2,3:5,6-二-O-亚烷基-4-O-(3,4-O-亚烷基-β-D-吡喃半乳糖基)-D-葡萄糖二烷基乙缩醛。乳糖酮化合物二醇的伯羟基基团的选择性6’-O-取代可以例如用碱催化的反应(包括R1-卤化物)实现以提供通式5的化合物,其中R6是可通过氢解作用去除的基团。无机和有机碱(包括但不限于氢化钠、叔丁醇钾、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钾、二异丙基乙胺、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯)适合于催化这样的乳糖酮化合物二醇的选择性6’-O-取代过程。这样的反应可以使用溶剂如DMF,THF,二噁烷等在均一溶液中或在水相转移烷基化条件中进行。优选地,在20-80℃,在二噁烷或DMF中应用NaH或叔丁醇钾。可以在存在吡啶、三乙胺、二异丙基乙胺时,使用有机溶剂如DCM、氯仿、THF,二噁烷、乙腈等或其混合物,在-20-80℃用传统的酰化剂如酰基卤、酸酐、活化酯等进行选择性6-O-酰基化以产生通式5的化合物,其中R6是任选取代的酰基。在存在三乙胺、吗啉、二异丙基乙胺、吡啶等时用例如甲氧基甲基,叔丁氧基甲基,2-甲氧基乙基,苄氧基甲基,2-四氢呋喃基卤化物等或在存在有机溶剂如DMF,THE,二噁烷,乙腈等中的酸时,用例如二氢吡喃,1,4-二氢二氧芑,二氢呋喃,2-甲氧基丙烯,2-苯氧基丙烯等在0-60℃的温度进行乳糖丙酮化合物二醇在6’-位置上的选择性无环乙缩醛形成,以提供通式5的化合物,其中R6是乙缩醛型基团。在室温,在存在胺碱(如咪唑,三乙胺等)时乳糖丙酮化合物二醇与甲硅烷基氯化物的选择性伯羟基甲硅烷基化反应或在低温乳糖丙酮化合物二醇与具有受阻胺碱(例如,2,6-二甲基吡啶)的甲硅烷基三氟甲磺酸盐的选择性伯羟基甲硅烷基化反应可以提供通式5的化合物,其中R6是甲硅烷基。
给体4和受体5的偶联在非质子溶剂中,优选地在二氯甲烷、DMF、THF、甲苯、乙腈中或在其混合物中进行,更优选地在二氯甲烷/DMF混合物中,在-78-0℃的温度,在存在亲硫性(thiofilic)活化剂如汞(II)盐,Br2,I2,NBS,NIS,三氟甲磺酸,三氟甲磺酸盐,BF3·Et2O,TMSOTf,DMTST,苯基氢硒基三氟甲磺酸盐,IDPC,四丁基溴化铵或其混合物,优选地Br2/TBAB时进行。在(1α→2)-糖苷键专一形成下,用完全的非对映立体选择性进行糖基化反应。在典型的实验中,将溴(1.2eq.)在DCM中的混合物逐滴加入给体4(1.0eq.)在DCM中的冰冷溶液中。将受体5(1.0eq.)和TBAB(0.1eq.)在DMF中的混合物滴入反应混合物中。在室温持续搅拌直到完成反应。在萃取后处理后,将产物通过结晶或通过快速色谱法进行纯化以提供通式2和2’的化合物,其中R1和R2彼此独立地是可通过氢解作用去除的基团,R4和R’4是可通过氢解作用去除的基团,乙缩醛型基团,甲硅烷基或任选地取代的酰基,R是烷基或两个成对的R-基团与它们所连接的碳原子一起形成C3-C6环烷基环并且R’是烷基。在温和酸性水解前,将酰基衍生物(其中R4和R’4是任选地取代的酰基)转化为相应的伯醇(其中R4和R’4是H)。脱酰的方式可以是碱催化的酯交换脱保护,即在存在醇化物如NaOMe,NaOEt,KOtBu等时,在20-100℃温度,在醇溶剂(如甲醇,乙醇,丙醇,叔丁醇等)中去除羟基的酰基保护基。醇和醇化物应该匹配。应用甲苯或二甲苯的共溶剂可能对于控制产品的粒度和避免凝胶形成是有利的。在优选的实施方案中,在40-60℃将催化量的NaOMe用在甲醇中或甲醇-甲苯混合物中(Zemplén脱酰作用)。另一种脱酰的方式可以是碱性水解,其通常意为在从0-100℃变化的温度,在均一或不均一的反应条件下,在水、醇或水-有机溶剂混合物(优选地水-甲醇)中的碱催化的水解。选择的碱通常是强碱,例如LiOH,NaOH,KOH,Ba(OH)2,K2CO3,碱性离子交换树脂,氢氧化四烃基铵等。还可以将该碱以水溶液的形式使用。在优选的实施方案中,该碱是NaOH并且溶剂是甲醇。脱酰作用的备选方式可以是氨解作用(基于N-酰基转移的脱保护),这意味着在20-120℃的温度,用在水、醇或水-有机溶剂混合物中的氨水、肼、取代的肼、乙二胺或伯胺进行处理。在上述脱酰条件下,酸不稳定性保护基或糖苷间键不受影响。
本申请的第七方面涉及用于制备2’-O-岩藻糖基乳糖的方法,所述方法特征在于使通式1的化合物或其水合物或溶剂化物,在包含水、或一种或多种C1-C6醇,或其混合物的介质中进行催化氢解作用
其中R1和R2,彼此独立地是可通过氢解作用去除的基团并且R3是可通过氢解作用去除的基团或H。
在一个优选的实施方案中,可以将由本发明的方法生产的2’-O-岩藻糖基乳糖通过冷却或加入醚从水/有机溶剂/水溶液中沉淀而作为非晶形的固体分离,所述醚包括但不限于MTBE,二乙醚,二异丙基醚等和/或C1-C6醇。备选地,还可以通过冷冻干燥和喷雾干燥分离2’-O-岩藻糖基乳糖。
在另一个优选的实施方案中,特征在于通式1的化合物的氢解作用使用水或水-醇混合物作为溶剂,2-10%的钯碳或钯黑作为催化剂,在1-10atm的氢压下,在20-60℃的温度进行。在完成氢解作用后,过滤反应混合物并且优选地将其通过去除有机溶剂组分进行浓缩并进行沉淀,喷雾干燥,冷冻干燥,以受控的方式产生无水和/或水合2’-O-岩藻糖基乳糖(水含量0-20%)。
在另一个优选的实施方案中,特征在于通式1的化合物的氢解作用使用水或水-醇混合物作为溶剂,2-10%的钯碳或钯黑作为催化剂,在1-10atm的氢气氛压力下,在20-60℃的温度进行。在完成氢解作用后,过滤反应混合物并且优选地将其进行浓缩,产生2’-O-岩藻糖基乳糖水溶液/浆状物,2’-O-岩藻糖基乳糖的浓度为10-95%。
根据本发明优选的实践方案,将通式1的化合物用于氢解作用,其中R1=R2=苄基并且R3是H,所述通式1的化合物以水合形式或水合形式和无结晶水形式的混合物存在。
在另一个优选的实施方案中,采用通式1的化合物,其中R1=R2=苄基并且R3是H,不含结晶水。令人惊奇的是,该无水衍生物在热甲醇(3体积)中与二水合物(其仅部分溶解于10体积的热甲醇中)相比具有优越的溶解性,这允许使用较少的溶剂以较少的体积进行还原。此外,可以简单、方便和精巧地去除溶剂,从而以优良的产量和高纯度提供2’-FL。
在下述示例性实施方案的描述过程中本发明的其它特征将显而易见,将示例性实施方案用于举例说明本发明并且不意欲限制本发明的范围。
实验
实施例1
4-O-(3,4-O-环亚己基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-环亚己基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
将乳糖(1.15g)悬浮在环己酮二甲氧基酮缩醇(10ml)中。加入对甲苯磺酸(45mg),并将反应混合物加热到85℃达21/2h。接着,通过加入Et3N来中和混合物,将溶剂在真空中浓缩,并将残余物溶解在DCM(60ml)中,将有机相用H2O(2×50ml)和饱和NaHCO3(50ml)洗涤。通过快速色谱法(EtOAc/庚烷6:4)进行进一步的纯化,得到作为白色泡沫的产物(1.35g,64%)。
1H NMR(300MHz,CDCl3):δ=4.54(dd,1H,J=6.6,7.9),4.42(d,1H,J=8.3),4.35(m,1H),4.34(d,1H,J=6.6),4.26(dd,1H,J=5.3,8.7),4.09-3.92(5H),3.87(dd,1H,J=1.3,7.9),3.80(m,1H),3.65(m,1H),3.49(m,1H),3.48和3.47(2s,每个3H),1.69-1.26(m,30H).
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ=110.9,110.3,108.9,107.2,103.4,79.0,77.8,77.5,75.6,75.1,74.7,74.4,73.1,63.9,62.4,57.4,54.4,37.8,36.4,35.8,35.4,34.9,33.1,25.2-23.6.
实施例2
4-O-(6-O-乙酰基-3,4-O-环亚己基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-环亚己基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
将实施例1的化合物(0.526g,0.83mmol)溶解于无水DCM(5ml)中。加入吡啶(0.4ml,5.0mmol),并将混合物冷却到-30℃。将溶解于DCM(0.5ml)中的乙酰氯(0.07ml,0.98mmol)在10分钟内加入。将混合物在-20℃搅拌1小时。加入MeOH(1ml)并使混合物加温到室温。加入DCM(20ml),并将混合物用H2O(50ml),冷HCl水溶液(0.5M,30ml),H2O(30ml),NaHCO3(30ml)洗涤,接着干燥(Na2SO4),过滤并在真空中蒸发。通过快速色谱法纯化(庚烷/EtOAc,6:4),得到作为白色泡沫的产物(0.47g,85%)。
1H NMR(CDCl3,300MHz)δ:4.43-4.26(6H,未解析的),4.17(1H,dd,J=7.1,8.6),4.13(1H,dd,J=1.7,1.7),4.09-4.00(3H,未解析的),3.93(1H,ddd,J=1.8,4.6,7.7),3.85(1H,dd,J=1.5,7.5),3.61(1H,br s,OH),3.51(1H,dd,J=6.6,8.3,H-2′),3.42(6H,s,2×CH 3O),2.08(3H,s,CH 3CO),1.81-1.25(30H,未解析的,环己基).
13C NMR(CDCl3,75MHz)δ:170.82(CO),110.9,110.6,108.9(3×(CH3)2 C),105.3,103.7(C-1,C-1′),78.5,77.6,77.6,76.3,74.7,74.6,72.8,71.5(C-2,C-3,C-4,C-5,C-2′,C-3′,C-4′,C-5′),64.3,63.6(C-6,C-6′),56.1,53.3(2×OCH3),37.7-33.9,25.1-23.6(环己基).
实施例3
4-O-(6-O-三苯甲基-3,4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
将3’,4’:2,3:5,6-三-O-异亚丙基-乳糖二甲基乙缩醛(5.52g,10.9mmol)溶解于无水吡啶(100ml)中。将三苯甲基氯(6.0g,21.5mmol)与DMAP(0.30g)一起加入,并将该混合物加热到65℃,历时4小时。将混合物在真空中蒸发,与甲苯(3×30ml)共同蒸发。将残余物溶解于EtOAc(50ml),用H2O(50ml)洗涤,干燥(Na2SO4),过滤并在真空中蒸发。通过快速色谱法纯化(己烷/EtOAc,8:2,接着4:6),得到作为油的产物(3.0g,37%)。
1H NMR(CDCl3,500MHz)δ:7.45-7.22(15H,3×Ph),4.38(1H,d,J=8.5,H-1′),4.38(1H,m),4.36(1H,dd,J=6.5,7.7),4.27(1H,d,J=6.1,H-1),4.26(1H,m),4.14(1H,dd,J=6.4,8.8),4.08(1H,dd,J=5.6,7.1),4.00-3.97(2H,未解析的),3.85(1H,dd,J=1.0,7.6),3.817(1H,ddd,J=1.8,5.3,7.7),3.56-3.52(2H,未解析的),3.25(1H,dd,J=5.3,8.5),3.22(3H,s,CH 3O),3.09(3H,s,CH 3O),1.52,1.50,1.42,1.34,1.33,1.32(6×C(CH 3)2).
13C NMR(CDCl3,75MHz)δ:143.8,128.6,127.7,127.0(Ph),110.1,109.8,108.2(3×(CH3)2 C),104.5,103.9(C-1,C-1′),86.7(C(Ph)3),78.9,77.9,77.8,76.1,74.3,74.2,73.3,72.5(C-2,C-3,C-4,C-5,C-2′,C-3′,C-4′,C-5′),64.5,62.0(C-6,C-6′),55.7,52.2(2×OMe),28.2,27.1,26.3,26.3,25.5,24.2(6×C(CH3)2).
实施例4
4-O-(6-O-新戊酰基-3,4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
将3’,4’:2,3:5,6-三-O-异亚丙基-乳糖二甲基乙缩醛(10g,19.7mmol)溶解于DCM(80ml)和吡啶(8ml,98.9mmol)中,并冷却到0℃。逐滴加入新戊酰氯(8ml,39mmol),并将混合物在室温搅拌20小时。加入DCM(50ml),并将混合物用H2O(80ml),HCl水溶液(1M,80ml),H2O(80ml),饱和NaHCO3(80ml)洗涤,干燥(Na2SO4),过滤,蒸发并与甲苯一起共同蒸发。将残余物通过快速色谱法纯化(己烷/EtOAc,3:2),以得到作为白色泡沫的产物(7.1g,61%)。
1H NMR(CDCl3,300MHz)δ:4.435(1H,d,J=8.2,H-1′),4.411(1H,dd,J=6.0,7.3,H-2),4.361(1H,d,J=6.03,H-1),4.312(1H,dd,J=6.8,11.2,H-6′),4.277(1H,m),4.243(1H,dd,J=6.3,11.1,H-6′),4.173-4.034(4H,未解析的),3.997(1H,dd,J=6.8,8.8,H-6),3.950(1H,ddd,J=2.2,6.3,6.4),3.905(1H,dd,J=1.6,7.3),3.547(1H,dd,J=7.1,8.1,H-2′),3.428,3.416(6H,2×OMe),1.500,1.479,1.374,1.366,1.318,1.313(6×3H,s,6×C(CH 3)2),1.200(9H,s,C(CH 3 )3).
13C NMR(CDCl3,75MHz)δ:178.02(CO),110.11,110.07,108.19(3×C(CH3)2),104.99(C-1),103.44(C-1′),78.76,77.79,77.69,75.93,74.93,74.07(C-2′),72.99,64.53(C-6′),62.69(C-6),56.20,53.05(2×OCH3),38.62(C(CH3)3),28.02,27.13,27.01(C(CH3)3),26.34,26.11,25.55,24.347(6×CH3).
实施例5
使用适合的酰化剂根据实施例4合成通式5的化合物。
a)4-O-(6-O-(4-硝基苯甲酰基)-3,4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
收率:98%,油
1H NMR(CDCl3,300MHz):δ=8.30-8.23(m,4H),4.65(dd,1H,J=4.5,11.8),4.58(dd,1H,J=7.3,11.8),4.44(d,1H,J=8.3),4.42(dd,1H,J=6.2,7.8),4.27(d,1H,J=6.1),4.27(ddd,1H,J=6.7,6.7,2.3),4.18(dd,1H,J=5.5,2.2),4.16-4.10(4H),4.01(dd,1H,J=6.7,8.8),3.87(dd,1H,J=1.5,7.8),3.79(s,1H),3.60(dd,1H,J=7.8,7.8),3.36,3.35(s,2×3H),1.52,1.49,1.36,1.35,1.34,1.33(s,6×3H).
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ=164.5,150.6,135.1,131.0,123.5,110.5,110.1,108.3,105.8,103.9,78.9,77.8,77.8,76.6,75.6,74.2,73.3,71.4,64.8,64.7,56.6,54.3,28.1,27.2,26.4,26.3,25.6,24.7.
b)4-O-(6-O-(4-苯基苯甲酰基)-3,4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
收率:48%,无色的油
1H NMR(CDCl3,300MHz)δ:8.14-7.15(9H,芳香性)4.64(1H,dd,J=4.9,11.6,H-6a′),4.55(1H,dd,J=7.1,11.6,H-6b′),4.48(1H,dd,J=5.9,7.8,H-2),4.48(1H,d,J=8.1,H-1′),4.27(1H,d,J=6.1,H-1),4.27(1H,m),4.22(1H,dd,J=5.5,2.3),4.19-4.10(4H,未解析的),4.02(1H,dd,J=6.8,8.8,H-6b),3.91(1H,dd,J=1.5,7.7,H-3),3.63(1H,s,OH),3.61(1H,dd,J=7.0,6.9,H-2′),3.35,3.34(2×3H,s,OCH 3),1.54,1.50,1.40,1.37,1.36,1.33(6×3H,s,6×C(CH 3)2).
13C NMR(CDCl3,75MHz)δ:166.2(CO),145.9,139.8,130.3-125.2(芳香性C),110.4,110.1,108.3(3×C(CH3)2),105.0,103.7(C-1,C-1′),78.9,77.8,77.8,76.4,75.0,74.2,73.4,71.6(C-2,C-3,C-4,C-5,C-2′,C-3′,C-4′,C-5′),64.6,64.0(C-6,C-6′),56.3,53.2(2×OCH3),28.1,27.2,26.4,26.3,25.6,24.5(6×CH3).
c)4-O-(6-O-丙酰-3,4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
收率:81%,无色的油
1H NMR(CDCl3,300MHz):δ=4.42(dd,1H,J=6.2,7.5),4.40(d,1H,J=8.2),4.35(d,1H,J=6.1),4.32-4.24(3H),4.16-4.03(4H),3.99(dd,1H,J=6.8,8.8),3.93(ddd,1H,J=2.1,5.2,7.2),3.88(dd,1H,J=1.6,7.5,H-3),3.54(dd,1H,J=8.0,8.0,H-2′),3.41,3.41(s,2×3H),2.34(q,2H),1.49,1.47,1.37,1.36,1.31,1.31(s,6×3H),1.13(t,3H).
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ=174.1,110.3,110.2,108.3,105.0,103.6,78.9,77.9,77.8,76.3,74.9,74.1,73.2,71.4,64.6,63.2,56.1,53.0,28.0,27.3,27.2,26.3,26.2,25.6,24.4,8.95.
d)4-O-(6-O-(4-氯苯甲酰基)-3,4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
白色泡沫
1H NMR(CDCl3):δ=8.10和7.42(2m,每个2H),4.55(2ABq,每个1H,J=4.6,7.4,11.7),4.45(d,1H,J=8.3),4.43(m,1H),4.27(d,1H,J=5.9),4.11(m,2H),3.37和3.34(2s,每个3H),1.52,1.48,1.38,1.36,1.36和1.34(6s,每个3H).
13C NMR(CDCl3):δ=165.4,139.6,131.2,128.7,128.2,110.4,110.1,108.3,105.2,103.8,78.9,77.8,77.8,76.5,75.2,74.2,73.3,71.5,64.6,64.2,56.4,53.5,28.07,27.2,26.3,26.2,25.6,24.6.
e)4-O-(6-O-(4-苯基氨基甲酰基-苯甲酰基)-3,4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.33(s,3H),1.35(s,3H),1.37(s,3H),1.38(s,3H),1.50(s,3H),1.53(s,3H),3.33(s,3H),3.35(s,3H),3.58-3.64(m,1H),3.70(d,1H,J=1.1),3.89(dd,1H,J=7.7,1.4),4.02(dd,1H,J=8.8,6.8),4.10-4.15(m,3H),4.18-4.22(m,1H),4.26-4.30(m,2H),4.43-4.48(m,2H),4.54-4.67(m,2H),7.17(t,1H,J=7.4),7.39(t,2H,J=7.6),7.65(d,2H,J=7.6),7.94(d,3H,J=8.5),8.17(d,2H,J=8.4).
f)4-O-(6-O-(4-(4-溴苯基氨基甲酰基)-苯甲酰基)-3,4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.33(s,3H),1.34(s,3H),1.36(s,3H),1.37(s,3H),1.49(s,3H),1.53(s,3H),3.32(s,3H),3.35(s,3H),3.5(d,1H,J=4.5),3.6(t,1H,J=7.9),3.86-3.89(m,1H),3.98-4.04(m,1H),4.08-4.13(m,3H),4.18-4.21(m,1H),4.27-4.30(m,2H),4.39-4.47(m,2H),4.57-4.64(m,2H),7.48(d,2H,J=8.8),7.56(d,2H,J=8.8),7.91(d,2H,J=8.3),8.01(s,1H),8.15(d,2H,J=8.3).
g)4-O-(6-O-(4-苯甲酰氨基苯甲酰基)-3,4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.33(s,3H),1.35(s,3H),1.37(s,3H),1.39(s,3H),1.50(s,3H),1.53(s,3H),3.33(s,3H),3.37(s,3H),3.60(t,1H,J=7.8),3.89(dd,1H,J=7.7,1.4),4.01(dd,1H,J=8.7,6.8),4.09-4.22(m,5H),4.26-4.32(m,2H),4.46-4.64(m,4H),7.50-7.58(m,3H),7.76(d,2H,J=8.7),7.88(d,2H,J=7.9),8.05(s,1H),8.08(d,2H,J=8.7).
13C-NMR(75MHz,CDCl3):δ=24.52,25.63,26.27,26.38,27.21,28.11,53.10,56.34,63.89,64.64,71.59,73.37,74.26,74.99,76.35,77.85,78.93,103.73,104.98,108.27,110.16,110.38,119.14,125.37,127.04,128.90,131.09,132.26,134.42,142.36,165.77.
h)4-O-(6-O-(4-(4-硝基苯甲酰氨基)-苯甲酰基)-3,4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.33(s,3H),1.34(s,3H),1.37(s,3H),1.38(s,3H),1.49(s,3H),1.51(s,3H),3.33(s,3H),3.37(s,3H),3.60(t,1H,J=7.8Hz),3.89(dd,1H,J1=7.7,1.4Hz),4.01(dd,1H,J1=8.7,6.8Hz),4.08-4.26(m,5H),4.26-4.37(m,2H),4.40-4.63(m,4H),7.77(d,2H,J=8.7Hz),8.04-8.09(m,4H),8.31-8.34(m,3H).
13C-NMR(75MHz,CDCl3):δ=24.47,25.59,26.23,26.34,27.18,28.06,53.09,56.30,63.98,64.59,71.51,73.33,74.27,74.97,76.35,77.78,77.87,78.90,103.67,105.04,108.26,110.15,110.38,119.48,123.98,125.22,126.01,128.15,128.39,128.96,131.08,139.96,141.72,149.81,163.82,165.62.
i)4-O-(6-O-(3,5-二硝基苯甲酰基)-3,4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
收率:84%,浅黄色泡沫
13C NMR(CDCl3):162.57,148.92(two carbons),133.83,129.80(twocarbons),122.64,110.88,110.37,108.53,106.05,104.19,79.26,78.01,77.82,77.14,76.10,74.38,73.49,71.36,65.71,64.89,57.09,54.77,28.32,27.26,26.55,26.50,25.93,24.84.
J)4-O-(6-O-(萘-2-基乙酰基)-3,4-O-异亚丙基-B-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
收率:89%,白色泡沫
13C NMR(CDCl3):171.48,133.64,132.70,131.47,128.52,128.22,127.88,127.84,127.45,126.46,126.13,110.526,110.50,108.51,105.53,103.93,79.14,78.20,78.07,76.67,75.47,74.38,73.30,71.40,64.84,63.75,56.47,53.72,41,49,28.30,27.51,26.64,26.39,25.88,24.66.
实施例6
4-O-(6-O-(4-氨基苯甲酰基)-3,4-O-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
将根据实施例5a的化合物(400mg,608μmol)溶解于10ml的THF,并加入Pd/C(50mg)。将混悬液在H2气氛下搅拌3天直到所有的起始物质被消耗(TLC系统:甲苯-丙酮4:1和10%MeOH-DCM)。将催化剂通过C盐过滤,并将残余物通过色谱法分离(5:1甲苯-丙酮),其为白色泡沫,89%收率(341mg)。
13C NMR(CDCL3):166.56,151.12,132.04(两个碳),119.51,114.11(两个碳),110.55,110.35,108.51,104.98,103.98,79.19,78.07,78.04,76.55,75.12,74.53,73.66,71.94,64.91,63.59,56.47,53.12,28.36,27.44,26.63,26.51,25.90,24.75.
实施例7
四-O-乙酰基-L-岩藻糖
将吡啶(295ml,3.65mol)冷却到0℃并在搅拌过程中加入L-岩藻糖(100g,609mmol)。在3小时内逐滴加入Ac2O(287ml,3.04mol)。将反应混合物在0℃搅拌2小时,在室温搅拌24小时。逐滴加入甲醇(25ml,618mmol),并将反应混合物搅拌30分钟。接着,将反应混合物用甲苯(400ml)稀释,用水(3x300ml)洗涤。合并水相,并用甲苯(300ml)萃取。合并有机相并用1N HCl(3x500ml),水(2x500ml)和饱和NaHCO3溶液(300ml)洗涤。将有机相干燥并浓缩到干燥,提供197g(98%)的作为无色浆状物的产物。
实施例8
苯基2,3,4-三-O-乙酰基-1-硫代-β-L-吡喃岩藻糖苷
向实施例7的化合物(196g,590mmol)在甲苯(200ml)中的溶液中加入苯硫酚(76ml,737mmol),并将该混合物冷却到0℃。将BF3Et2O(112ml,885mmol)在60分钟内逐滴加入,接着,将反应混合物在0℃搅拌3小时,在5℃搅拌12小时,并在室温搅拌2小时。将获得的混合物用水(500ml),水/盐水(1:1)混合物(700ml),1N NaOH/盐水(1:1)混合物(400ml),水/盐水(1:1)混合物(700ml)和盐水(300ml)洗涤。将合并的和干燥的有机相在70℃蒸发到干燥以提供224g的标题化合物(99%)。
实施例9
苯基1-硫代-β-L-吡喃岩藻糖苷
将实施例8的化合物(224g)溶解于甲醇(500ml)并加入NaOMe(2g,37mmol)。将反应混合物在40℃搅拌21/2h。蒸馏去甲醇(250ml),并将CO2鼓泡通过余下的溶液,历时5分钟,达到pH=7。蒸发反应混合物,并加入乙酸异丁酯(450ml)。蒸发50ml的溶剂,并通过使其在室温达24小时来将得到的混合物进行结晶。过滤形成的白色的结晶固体并用叔丁基甲醚(200ml)洗涤,在干燥后提供110g(73%)的产物。
实施例10
苯基3,4-O-异亚丙基-1-硫代-β-L-吡喃岩藻糖苷
将实施例9的化合物(150g,0.58mol)悬浮在2,2-二甲氧基丙烷(550ml,4.5mol)中并加入催化量的p-TsOH(1.19g,6.2mmol)。在室温搅拌混合物12小时后,将Et3N(6ml)缓慢加入以中和该酸。蒸发溶液到干燥(174g),并将残余物溶解于二乙醚(250ml)中并冷却到0℃,接着将己烷(250ml)在剧烈搅拌过程中逐滴加入混合物中。将混合物保持在冰箱(5℃)中达2天,过滤沉淀的白色固体,并用己烷(200ml)洗涤以提供145.48g的化合物(85%)。蒸发母液,将残余物溶解于Et2O(25ml)并将己烷(25ml)逐滴加入其中以结晶11,51g的第二次收获的产物。合并的收率:91.5%.M.p.:81℃,[α]D=-28.15(1.03,MeOH)。
实施例11
苯基2,3,4-三-O-苄基-1-硫代-β-L-吡喃岩藻糖苷
a)在冷却下(0-5℃),将实施例9的化合物(78g)在DMF(70ml)中的溶液逐滴加入NaH的溶液(54.6g,55-65%油性混悬液)和苄基溴(159ml)在DMF(400ml)中的溶液中。使反应混合物加温到室温,搅拌4小时,接着冷却到0℃,并将甲醇(94ml)加入其中。搅拌持续3小时,并将混合物用乙酸乙酯(11)稀释,用水洗涤(2x500ml)。分离有机相并将产物通过加入甲醇(1.21)和水(300ml)进行结晶以提供白色晶体(110g)。物理特征与报道的那些[7]十分一致。
b)将实施例9的化合物(50g)和四丁基硫酸氢铵(19.9g)在DCM中的混悬液加温直到获得均一溶液。向该溶液中加入苄基氯(101ml),随后加入250ml的50%(w/w)NaOH-溶液。在剧烈搅拌下,将浓稠的乳状液进行回流。1.5小时后,加入12ml的MeOH,并将反应混合物另外回流过夜。冷却后,将其用200ml的DCM稀释,并用水(400ml)和盐水(100ml)进行洗涤。蒸发DCM以提供黄色的油(~150g),向其中缓慢加入230ml的MeOH。将得到的混悬液在4℃搅拌过夜,过滤沉淀物,用200ml的正庚烷洗涤,i.v.干燥以产生68g的白色粉末。物理特征与报道的那些[7]十分一致。
实施例12
苯基2,3,4-三-O-(4-甲基苄基)-1-硫代-β-L-吡喃岩藻糖苷
将3.0g(11.9mmol)的实施例9的化合物和1.22g(3.6mmol,0.3eq.)的四丁基硫酸氢铵悬浮在20ml的二氯甲烷中。将该混悬液在剧烈搅拌下回流,直到获得均一的溶液。向该溶液中,加入对甲基苄基氯(7.23ml,53.6mmol,4.5eq),随后加入5ml的50%(w/w)NaOH溶液。将浓稠的乳状液回流3小时,同时剧烈搅拌,接着加入8ml的MeOH,并将反应混合物另外回流一夜。冷却后,加入DCM和水。分离相,并将水相用DCM洗涤。用盐水洗涤合并的有机相,并蒸发溶剂。通过柱色谱法纯化粗制的产物。收集最纯的级分,并将该产物从MeOH再结晶以产生2.0g的白色固体。M.p.:84-85℃.
13C NMR(CDCl3):137.60,137.58,137.31,135.93,135.63,135.61,134.76,131.68,129.33,129.22,129.04,128.93,128.71,128.35,127.94,127.09,87.85,84.64,77.45,76.44,75.65,74.83,74.54,72.98,21.45,17.55.
实施例13
苯基2,3,4-三-O-(2,4,6-三甲基苄基)-1-硫代-β-L-吡喃岩藻糖苷
用在矿物油乳状液中的6.6g(152mmol)的氢化钠(55%)填充干燥的250ml烧瓶。加入无水二甲基甲酰胺(10ml),并将该混合物冷却到0℃。向该混合物中,加入在无水DMF(20ml)中的溴甲基均三甲基苯(32.4g,152mmol)。将实施例9的化合物(10g,39mmol)溶解于无水DMF(20mL)中并在40分钟内完全加入上述混合物中。在另外的1小时后,去除冰浴并将反应在室温搅拌21小时。加入甲醇(15ml)以猝灭,并将反应混合物再搅拌1小时,接着将其用乙酸乙酯(200ml)稀释,并用饱和NaHCO3(200ml),1N HCl(200ml),水(200ml)和盐水(200ml)萃取。在柱色谱法纯化和结晶后获得标题化合物。
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.33(d,3H,J=5.7Hz),2.25(s,6H),2.28(s,9H),2.29(s,3H),2.33(s,3H),2.37(s,6H),3.52-3.59(m,3H),3.93(t,1H,J=8.9Hz),4.45(dd,2H,J=9.9Hz,J=16Hz),4.53-4.57(m,2H),4.85(d,1H,J=11.3Hz),5.02(d,1H,J=9.8Hz),5.16(d,1H,J=13.7Hz),6.80(d,4H,J=4.5Hz),6.89(s,2H),7.04-7.18(m,3H),7.51(d,2H,J=8.2Hz).
13C-NMR(75MHz,CDCl3):δ=17.36,19.67,19.79,20.95,20.97,21.0,67.31,68.89,69.82,74.43,77.39,77.95,85.39,87.49,126.45,128.52,128.59,128.65,128.86,130.68,131.66,131.86,132.10,134.59,137.14,137.34,137.36,137.82,137.99,138.01.
实施例14
苯基2,3,4-三-O-(2,3,4,5,6-四甲基苄基)-1-硫代-β-L-吡喃岩藻糖苷
用7.2g(164mmol)氢化钠作为矿物油乳状液(55%)填充干燥的250ml烧瓶。将五甲基苄基溴(39.6g,164mmol)溶解于无水DMF(90ml)中并加入氢化钠。将混合物用冰浴冷却到0℃,并加入在无水DMF(60ml)中的实施例9的化合物(10g,39mmol)。在完全加入后,出现浓厚的沉淀物。将反应混合物用50ml的THF稀释,并加热到70℃达13小时。接着,加入甲醇(50ml),并在剧烈搅拌下将混合物倾入甲醇(400ml)中。过滤该混合物,用甲醇、水、甲醇/水1:1和两倍甲醇洗涤。将固体在油泵上干燥。重量:26.9g(94%收率).
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.36(d,3H,J=6.3Hz),2.15(s,3H),2.16(s,3H),2.17(s,6H),2.19(s,6H),2.22(s,3H),2.23(s,3H),2.26(s,3H),2.27(s,6H),2.31(s,3H),2.35(s,9H),3.61-3.65(m,3H),4.00(t,1H,J=9.2Hz),4.46-4.70(m,4H),5.00(d,1H,J=11.5Hz),5.09(d,1H,J=10.2Hz),5.34(d,1H,J=9.5Hz),6.97-7.14(m,3H),7.50-7.53(m,2H).
13C-NMR(75MHz,CDCl3):δ=16.26,16.48,16.55,16.62,16.69,16.97,16.99,17.01,17.51,67.43,68.46,69.82,71.07,74.42,77.28,77.57,85.87,87.57,126.34,128.46,130.73,131.56,131.98,132.02,132.17,132.27,132.35,133.46,133.66,133.82,134.43,134.68,134.72.
实施例15
获得通式2或2’的化合物的典型糖基化方法,其中R4或R’4是可通过氢解作用去除的基团,任选地取代的酰基,乙缩醛型基团或甲硅烷基
将给体4(1.2eq.相对于受体)溶解于3-5体积的DCM中并用冰浴冷却。在0-5℃,向该冷溶液中加入溴(0.5-1.2eq.相对于给体)。5分钟后,接着加入环己烯(0.5-1.5eq.相对于Br2),直到颜色变为浅黄色。将给体5和TBAB(10mol%相对于受体)在DMF(1.4-2.1体积,相对于受体)中的预先制备的溶液逐滴加入给体,并将反应混合物在冰冷下搅拌直到冰融化,随后置于室温,共24-72小时。加入三乙胺(0.5-1eq.相对于Br2),并将得到的混悬液用二异丙基醚、叔丁基二甲醚或甲苯(5-15体积,相对于理论收率)稀释,并用饱和NaHCO3(3-10体积,相对于理论收率)萃取2次,用1N HCl(3-10体积,相对于理论收率)萃取1次,用饱和NaHCO3(3-10体积,相对于理论收率)萃取2次并用盐水(3-10体积,相对于理论收率)萃取一次。将有机层在真空中浓缩以提供粗制产物,将其接着通过结晶、沉淀或柱色谱法纯化。收率范围在65-80%(基于受体计算)。
a)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-(4-氯苯甲酰基)-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3):δ=8.00,7.45-7.25(2m,19H),5.61(d,1H,J=3.1),4.99和4.66(ABq,2H,J=11.6),4.89和4.75(ABq,2H,J=11.9),4.75(s,2H),4.71(d,1H,J=8.0),4.54(m,2H),4.51(dd,1H,J=6.1,7.6),4.35(d,1H),4.25(m,1H),4.19(m,1H),4.12(m,1H),4.07和3.90(2m,每个1H),4.05(m,5H),3.73(dd,1H),3.65(br s,1H),3.47和3.34(2s,每个3H),1.49,1.43,1.37,1.37,1.31和1.27(6s,每个3H),1.12(d,1H,J=6.5).
13C NMR(CDCl3):δ=165.3,110.3,109.9,108.5,105.1,101.1,95.1,80.1,79.1,77.9,77.6,77.4,76.3,75.2,74.9,74.1,73.6,70.7,66.3,74.7,73.0,72.5,65.0,63.9,56.0,52.8,27.8,27.2,26.7,26.7,26.4,25.1,16.8.
b)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-苯甲酰基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3):δ=8.08和7.60-7.25(2m,20H),5.63(d,1H,J=3.1),5.00和4.66(ABq,2H,J=11.6),4.89和4.75(ABq,2H,J=11.9),4.77(s,2H),4.72(d,1H,J=8.0),4.55(m,2H),4.50(dd,1H),4.36(d,1H),4.24(m,1H),4.23(m,1H),4.19(m,1H),4.08和3.90(2m,每个1H),4.05(m,5H),3.76(dd,1H),3.66(br s,1H),3.37和3.34(2s,每个3H),1.50,1.44,1.37,1.37,1.34和1.28(6s,每个3H),1.12(d,1H,J=6.5).
13C NMR(CDCl3):δ=166.2,110.3,109.9,108.6,105.0,101.2,95.1,81.0,79.1,77.9,77.6,77.4,76.3,75.2,74.7,74.0,73.7,70.5,66.3,74.8,73.0,72.5,65.0,63.7,56.0,52.7,27.8,27.1,26.8,26.7,26.4,25.1,16.8.
c)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-(4-硝基苯甲酰基)-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3):δ=8.25和7.45-7.25(2m,19H),5.60(d,1H,J=3.2),5.00和4.66(ABq,2H,J=11.6),4.88和4.75(ABq,2H,J=12.0),4.76(s,2H),4.69(d,1H,J=8.4),4.60(m,2H),4.50(dd,1H,J=6.2,7.5),4.34(d,1H),4.24(m,1H),4.17(m,1H),4.11(m,1H),4.08和3.96(2m,每个1H),4.05(m,5H),3.76(dd,1H),3.68(br s,1H),3.38和3.34(2s,每个3H),1.49,1.43,1.37,1.37,1.33和1.27(6s,每个3H),1.11(d,1H,J=6.5).
13C NMR(CDCl3):δ=164.6,110.7,110.3和108.9,105.8,101.5,95.5,80.4,79.4,78.2,77.9,77.7,76.6,75.4,75.4,74.5,73.9,70.9,66.7,75.0,73.3,72.9,65.3,64.8,56.5,53.5,28.6,27.5,27.1,27.1,26.7,25.4,17.1.
d)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-(4-苯基苯甲酰基)-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3):δ=8.12,7.70-7.60和7.50-7.25(3m,24H),5.62(d,1H,J=3.1),5.00和4.65(ABq,2H,J=11.6),4.89和4.75(ABq,2H,J=11.8),4.77(s,2H),4.72(d,1H,J=7.9),4.58(m,2H),4.54(dd,1H,J=5.9,7.6),4.37(d,1H),4.27(m,1H),4.24(m,1H),4.21(m,1H),4.09和3.89(2m,每个1H),4.17-3.99(m,6H),3.77(dd,1H),3.68(br s,1H),3.39和3.36(2s,每个3H),1.51,1.44,1.38,1.38,1.35和1.27(6s,每个3H),1.11(d,1H,J=6.48).
13C NMR(CDCl3):δ=166.1,110.3,109.9,108.6,105.0,101.2,95.1,80.1,79.1,77.9,77.6,77.4,76.4,75.3,74.7,74.0,73.7,70.8,66.4,74.8,73.1,72.6,65.1,64.7,56.0,52.8,27.8,27.2,26.8,26.8,26.5,25.2,16.8.
e)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-(4-甲氧基苯甲酰基)-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3):δ=8.01,7.45-7.25和6.93(3m,19H),5.61(d,1H,J=2.9),4.99和4.66(ABq,2H,J=11.6),4.89和4.71(ABq,2H,J=11.9),4.76(s,2H),4.71(d,1H,J=8.0),4.52(m,3H),4.36(d,1H),4.25(m,1H),4.20(m,1H),4.15-3.98(m,6H),4.08和3.88(2m,每个1H),3.83(s,3H),3.76(dd,1H),3.68(br s,1H),3.38和3.35(2s,每个3H),1.50,1.44,1.37,1.37,1.33和1.27(6s,每个3H),1.11(d,1H,J=6.5).
13C NMR(CDCl3):δ=166.3,110.5,110.2,108.9,105.4,101.4,95.5,80.5,79.5,78.2,77.9,76.9,75.5,75.2,74.2,73.9,72.9,71.2,66.9,74.9,73.272.9,65.3,63.6,56.3,55.7,52.9,28.1,27.1,27.0,27.0,26.8,25.4,16.8.
f)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-(4-叔丁基苯甲酰基)-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3):δ=8.00和7.50-7.25(2m,19H),5.63(d,1H,J=2.9),5.00和4.67(ABq,2H,J=11.6),4.90和4.74(ABq,2H,J=11.9),4.77(s,2H),4.72(d,1H,J=8.2),4.58(m,3H),4.36(d,1H),4.24(m,1H),4.21(m,1H),4.16-3.99(m,6H),4.06和3.89(2m,每个1H),3.76(dd,1H),3.66(br s,1H),3.39和3.35(2s,每个3H),1.51,1.45,1.38,1.38,1.35,1.35,1.35,1.35和1.27(9s,每个3H),1.13(d,1H,J=6.5).
13C NMR(CDCl3):δ=166.5,110.5,110.2,108.9,105.2,101.5,95.4,80.4,79.4,78.2,77.9,77.8,76.7,75.5,75.1,74.3,73.9,71.1,66.6,75.0,73.4,72.8,66.6,63.4,56.2,53.10,35.3,31.3,28.1,27.5,27.1,27.1,26.7,25.4,17.1.
g)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-三氟乙酰基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3):δ=7.40-7.25(m,15H),5.55(d,1H,J=3.2),4.97和4.59(ABq,2H,J=11.8),4.86和4.74(ABq,2H,J=11.3),4.75(s,2H),4.70(d,1H,J=8.3),4.55(m,2H),4.42(m,1H),4.33(d,1H),4.22-3.99(m,8H),4.06和3.86(2m,每个1H),3.71(dd,1H),3.65(br s,1H),3.42和3.42(2s,每个3H),1.50,1.40,1.37,1.37,1.35和1.25(6s,每个3H),1.09(d,1H,J=6.5).
13C NMR(CDCl3):δ=165.7,110.6,110.2,108.8,105.2,101.2,95.2,79.9,79.4,78.4,78.0,77.9,76.2,75.9,75.1,74.3,73.9,71.1,66.3,75.0,73.5,72.5,66.6,63.4,56.2,53.1,28.1,27.2,27.1,27.1,26.7,25.4,16.4.
h)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-三氯乙酰基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3):δ=7.45-7.25(m,15H),5.58(d,1H,J=3.2),5.00和4.65(ABq,2H,J=11.6),4.87和4.75(ABq,2H,J=11.9),4.76(s,2H),4.70(d,1H,J=8.0),4.55(m,2H),4.46(dd,1H,J=6.0,7.6),4.36(d,1H),4.23-3.97(m,8H),4.04和3.97(2m,每个1H),3.74(dd,1H),3.67(br s,1H),3.44和3.44(2s,每个3H),1.49,1.43,1.38,1.36,1.31和1.28(6s,每个3H),1.11(d,1H,J=6.5).
13C NMR(CDCl3):δ=164.4,110.7,110.1,108.9,105.2,101.5,95.2,79.9,79.3,77.9,77.7,76.7,75.3,74.9,73.9,73.3,73.0,70.0,66.36,76.6,74.7,73.3,66.7,65.0,56.4,53.4,27.9,27.2,26.9,26.5,25.2,25.1,16.6.
i)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-二氯乙酰基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3):δ=7.45-7.25(m,15H),6.12(s,1H),5.57(d,1H,J=3.6),4.98和4.65(ABq,2H,J=11.6),4.88和4.70(ABq,2H,J=11.9),4.76(s,2H),4.60(d,1H,J=8.1),4.46(m,3H),4.3(d,1H),4.20-3.86(m,8H),4.08和3.84(2m,每个1H),3.71(dd,1H),3.65(br s,1H),3.47和3.45(2s,每个3H),1.46,1.42,1.37,1.36,1.31和1.28(6s,每个3H),1.10(d,1H,J=6.5).
13C NMR(CDCl3):δ=164.7,110.7,110.4,109.0,106.6,101.6,95.5,80.3,79.3,78.1,77.8,77.4,76.6,75.9,75.3,75.2,73.2,70.4,66.6,75.9,73.3,72.9,65.9,65.4,64.4,56.7,54.7,28.0,27.6,27.1,27.0,26.7,25.4,17.1.
j)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-三苯甲基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3):δ=7.50-7.20(m,30H),5.65(d,1H,J=3.4),5.00和4.65(ABq,2H,J=116),4.90和4.75(ABq,2H,J=119),4.8(ABq,2H,J=11.8),4.53(d,1H,J=8.2),4.42(dd,1H),4.32(dd,1H),4.26(d,1H,J=5.3,4.19-3.63(m,11H),4.03和3.84(2m,每个1H),3.58(dd,1H),3.10和3.05(2s,每个3H),1.49,1.44,1.43,1.33,1.30和1.27(6s,每个3H),1.09(d,1H,J=6.5).
13C NMR(CDCl3):δ=110.1,110.0,108.9,105.1,101.8,95.8,80.6,79.4,78.2,77.9,77.3,76.6,75.6,74.2,74.1,73.9,71.9,66.4,74.9,73.4,72.7,66.5,61.7,55.8,52.3,28.3,27.4,27.1,26.9,26.8,25.5,17.1.
k)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-氯乙酰基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3):δ=7.43-7.25(m,15H),5.58(d,1H,J=3.5),4.98和4.65(ABq,2H,J=11.6),4.88和4.74(ABq,2H,J=11.9),4.74(s,2H),4.61(d,1H,J=8.1),4.45(m,3H),4.32(d,1H),4.25-3.85(m,8H),4.13(d,2H),3.72(dd,1H),3.66(br s,1H),3.44和3.43(2s,每个3H),1.47,1.43,1.37,1.36,1.32和1.28(6s,每个3H),1.10(d,1H,J=6.5).
13C NMR(CDCl3):δ=167.1,110.3,110.0,108.6,105.9,101.1,95.1,80.1,79.0,77.8,77.5,77.2,76.2,75.4,75.0,74.6,73.4,70.3,66.3,74.7,73.0,72.5,65.1,64.7,56.2,53.8,40.7,28.7,27.3,26.8,26.7,26.4,25.1,16.7.
1)O-(2,3,4-三-O-(3-苯基苄基)-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-新戊酰基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3,300MHz):δ=7.68-7.26(27H),5.66(d,1H,J=2.4),5.10和4.78(ABq,2H,J=11.4),5.03和4.87(ABq,2H,J=11.7),4.87(s,2H),4.80(d,1H,J=8.1),4.50(dd,1H,J=6.0,7.5),4.39(d,1H,J=6.0),4.29-4.01(m,11H),3.95(dd,1H,J=6.6,8.4),3.86(m,1H),3.80(br s,1H),3.75(dd,1H,J=6.6,8.1),3.45,3.44(s,2×3H),1.49,1.46,1.39,1.38,1.27,1.27(6×s,每个3H),1.23(s,9H),1.15(d,3H,J=6.5).
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ=177.9,141.2-126.0,110.1,109.8,108.5,105.0,101.2,94.9,80.1,79.2,78.3,77.6,77.5,76.6,75.1,74.9,74.7,73.8,73.3,73.2,72.6,70.2,66.3,65.0,62.2,56.0,52.7,38.7,27.8-25.1,16.9.
m)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-新戊酰基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3):δ=7.45-7.25(m,15H),5.60(d,1H,J=3.2),4.98和4.65(ABq,2H,J=11.6),4.88和4.74(ABq,2H,J=11.9),4.76(s,2H),4.65(d,1H,J=8.2),4.48(dd,1H,J=6.0,7.4),4.38(d,1H),4.29(m,2H),4.24(m,1H),4.19(m,1H),4.08(m,2H),4.08和3.88(2m,每个1H),4.06(m,2H),3.98和3.91(2m,每个1H)3.72(dd,1H),3.66(br s,1H),3.43(2s,每个3H),1.48,1.42,1.37,1.36,1.31和1.28(6s,每个3H),1.21(s,9H),1.10(d,1H,J=6.5).
13C NMR(CDCl3):δ=178.2,110.4,110.1,108.8,105.3,101.6,95.3,80.4,79.4,78.2,77.8,77.8,76.6,75.6,74.2,72.8,72.8,70.6,66.6,75.0,73.6,73.4,65.3,62.6,56.3,53.0,39.0,28.1,27.5,27.4,27.4,27.3,27.1,27.0,26.6,24.6,17.1.
n)O-(2,3,4-三-O-(4-甲基苄基)-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-新戊酰基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.09(d,3H,J=6.4Hz),1.24(s,9H),1.30(s,3H),1.34(s,3H),1.37(s,3H),1.40(s,3H),1.45(s,3H),1.50(s,3H),2.35-2.37(m,9H),3.44(s,6H),3.62-3.64(m,1H),3.73(t,1H,J=7.3Hz),3.89-4.30(m,13H),4.39(d,1H,J=6.0Hz),4.48-4.51(m,1H),4.62-4.73(m,5H),4.85(d,1H,J=11.6Hz),4.95(d,1H,J=11.6Hz),5.56(d,1H,J=3.4Hz),7.12-7.33(m,12H).
13C-NMR(75MHz,CDCl3):δ=16.74,21.08,25.13,26.29,26.66,26.77,26.99,27.10,27.13,27.71,38.61,52.58,55.91,62.28,65.00,66.27,70.25,72.40,72.91,73.23,73.98,74.28,74.58,75.24,76.13,77.20,77.30,77.51,78.97,79.95,95.11,101.27,104.95,108.47,109.78,109.99,127.39,127.64,128.40,128.65,128.68,128.85,135.68,135.96,136.18,136.67,136.75,136.88,177.87.
o)O-(2,3,4-三-O-(萘-2-基甲基)-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-新戊酰基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3,300MHz):δ=7.87-7.42(21H),5.70(d,1H,J=3.3),5.15和4.89(ABq,2H,J=12.0),5.10和4.94(ABq,2H,J=12.3),4.96(s,2H),4.68(d,1H,J=8.1),4.48(dd,1H,J=6.0,7.2),4.37(d,1H,J=6.0),4.28-3.71(m,16H),3.43,3.42(2×s,每个3H),1.50,1.47,1.36,1.34,1.31,1.23(6×s,每个3H),1.22(s,9H),1.34(d,3H,J=6.3).
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ=178.0,136.8-125.8,110.1,109.9,108.5,104.9,101.3,94.8,80.1,79.3,77.9,77.7,77.6,75.1,74.8,74.7,73.7,73.3,72.9,72.9,72.6,70.3,66.4,64.9,62.3,56.0,52.7,38.7,27.8,27.1,26.8,26.7,26.4,25.1,27.1,16.9.
p)O-(2,3,4-三-O-(4-氯苄基)-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-新戊酰基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3,300MHz):δ=7.31-7.25(12H),5.59(d,1H,J=3.0),4.87和4.59(ABq,2H,J=11.7),4.79和4.66(ABq,2H,J=12.3),4.68(s,2H),4.66(d,1H,J=8.4),4.46(dd,1H,J=5.9,7.5),4.37(d,1H,J=5.9),4.29-3.90(m,16H),3.70(dd,1H,J=6.3,8.1),3.63(br s,1H),3.44,3.43(2×s,每个3H),1.48,1.42,1.38,1.36,1.31,1.28(6×s,每个3H),1.21(s,9H),1.13(d,3H,J=6.5).
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ=177.9,137.6-128.2,110.1,109.8,108.4,105.0,101.1,94.7,80.2,78.8,78.5,77.6,77.6,76.4,75.1,74.8,74.1,73.7,73.4,72.2,71.6,70.3,66.2,64.9,62.3,56.1,52.9,38.7,27.8,27.1,26.8,26.7,26.4,25.0,27.0,16.8.
q)O-(2,3,4-三-O-(3-苯基苄基)-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-苯甲酰基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3,300MHz):δ8.14-7.25(m,32H),5.67(d,1H,J=1.7Hz),5.10(d,1H,J=11.6Hz),5.03(d,1H,J=12.0Hz),4.89-4.85(m,3H),4.78(d,1H,J=11.6Hz),4.74(d,1H,J=8.0Hz),4.60-4.51(m,3H),4.37(d,1H,J=5.9Hz),4.30(m,1H),4.24-3.94(m,10H),3.80(s,1H),3.78(dd,1H,J=7.2Hz),3.38,3.35(2×s,每个3H),1.50,1.47,1.39,1.39,1.29,1.27(6×s,每个3H),1.19(d,3H,J=6.4Hz)
13C NMR(CDCl3,75.4MHz):δ166.2,141.2-126.4,110.3,109.9,108.6,105.0,101.2,95.0,80.1,79.3,78.3,77.7,77.6,76.7,75.1,74.9,74.9,73.9,73.7,73.2,72.7,70.7,66.4,65.1,63.7,56.0,52.8,27.8,27.2,26.8,26.8,26.4,25.1,16.9.
r)O-(2,3,4-三-O-(4-氯苄基)-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-苯甲酰基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3,300MHz):δ=8.20-7.32(m,17H),5.67(d,1H,J=3Hz),4.94(d,1H,J=11.7Hz),4.85(d,1H,J=12.1Hz),4.79-4.59(m,7H),4.56(dd,1H,J=6.0,7.5Hz),4.42(d,1H,J=5.9Hz),4.34(m,1H),4.26-4.03(m,9H),3.98(1H,dd,J=6.7,8.3Hz),3.80(1H,d,J=5.8,7.8Hz),3.70(1H,br s),3.44,3.42(2×s,每个3H),1.56,1.49,1.44,1.44,1.40,1.34(6×s,每个3H),1.20(d,3H)
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ=166.3,137.6-128.3,110.4,109.9,108.6,105.0,101.1,94.8,80.3,78.9,78.5,77.6,76.4,75.2,75.0,74.2,73.8,73.8,72.3,71.7,70.8,66.3,65.0,63.6,56.1,52.9,27.9,27.1,26.8,26.7,26.5,25.0,16.8.
s)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-(4-苯甲酰氨基苯甲酰基)-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H-NMR(CDCl3,300MHz):δ=1.11(d,3H,J=6.4),1.28(s,3H),1.34(s,3H),1.37(s,6H),1.44(s,3H),1.50(s,3H),3.36(s,3H),3.38(s,3H),3.68(br s,1H),3.76(t,1H,J=7.2),3.87-3.93(m,1H),4.01-4.10(m,7H),4.16-4.29(m,3H),4.36(d,1H,J=5.9),4.51-4.55(m,3H),4.68-4.76(m,5H),4.89(d,1H,J=11.9),4.99(d,1H,J=11.6),5.61(d,1H,J=2.9),7.26-7.42(m,15H),7.47-7.59(m,3H),7.77(d,2H,J=8.6),7.88(d,2H,J=7.3),8.06(d,2H,J=8.6),8.09(s,1H).
13C-NMR(CDCl3,75MHz):δ=17.1,25.4,26.7,27.0,27.1,27.5,28.1,53.0,56.4,63.9,65.3,66.6,71.1,72.8,73.4,74.0,74.3,75.0,75.1,75.5,76.6,77.5,77.9,78.2,79.4,80.4,95.4,101.5,105.3,108.9,110.2,110.6,119.4,125.7,127.3,127.53,127.57,127.63,127.7,127.9,128.4,128.5,128.6,129.2,131.3,132.5,134.7,139.0,139.2,139.5,142.6,166.0,166.1.
t)O-(2,3,4-三-O-(2,4,6-三甲基苄基)-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-新戊酰基-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.19(d,3H,J=6.5Hz),1.23(s,9H),1.26(s,3H),1.29(s,3H),1.41(s,6H),1.45(s,3H),1.47(s,3H),2.21(s,3H),2.23(s,15H),2.26(s,3H),2.33(s,6H),3.44(s,3H),3.35(s,3H),3.62(bs,1H),3.73(dd,1H,J=5.6Hz,J=7.7Hz),3.91-4.15(m,10H),4.26-4.35(m,4H),4.38-4.40(m,1H),4.47-4.52(m,2H),4.62-4.66(m,2H),4.73-4.82(m,2H),5.03(d,1H,J=9.4Hz),5.56(d,1H,J=3.0Hz),6.75(s,2H),6.76(s,2H),6.80(s,2H).
13C-NMR(75MHz,CDCl3):δ=178.06,138.30,137.81,137.60,137.14,136.96,136.91,132.31,132.21,131.98,128.62,128.48,110.12,109.81,108.61,105.02,101.55,94.59,79.95,79.52,78.73,78.38,77.59,74.69,74.24,74.13,73.31,70.32,69.30,68.27,66.45,66.44,65.11,62.40,56.07,52.77,50.17,38.72,27.74,27.10,26.95,26.89,26.28,25.27,22.67,20.97,20.94,20.92,19.68,19.57,19.51,16.86.
u)O-(2,3,4-三-O-(2,4,6-三甲基苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-(4-苯甲酰氨基苯甲酰基)-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.21(d,3H,J=6.4Hz),1.27(s,3H),1.29(s,3H),1.41(s,3H),1.42(s,3H),1.47(s,3H),1.49(s,3H),2.21(s,3H),2.22(s,3H),2.24(s,12H),2.25(s,3H),2.33(s,6H),3.39(s,3H),3.40(s,3H),3.63(bs,1H),3.77(dd,1H,J=6.7Hz,J=7.5Hz),3.98-4.17(m,10H),4.27-4.40(m,3H),4.47-4.57(m,4H),4.63-4.83(m,4H),5.04(d,1H,J=9.3Hz),5.58(d,1H,J=2.9Hz),6.75(s,2H),6.76(s,2H),6.80(s,2H),7.49-7.62(m,3H),7.78(d,2H,J=8.7Hz),7.89(d,2H,J=7.0Hz),8.02(bs,1H),8.09(d,2H,J=8.6Hz).
13C-NMR(75MHz,CDCl3):δ=165.75,142.33,138.30,137.81,137.58,137.14,136.98,136.91,134.39,132.31,131.98,131.03,128.92,128.63,128.48,127.03,125.49,119.14,110.30,109.86,108.64,105.04,101.48,94.61,79.96,79.51,78.71,78.39,77.63,74.82,74.32,74.10,73.68,70.75,68.26,66.47,66.43,65.14,63.64,56.13,52.83,31.85,27.74,27.17,26.95,26.90,26.37,25.25,22.67,20.94,20.92,19.68,19.57,19.51,16.87,14.10.
v)O-(2,3,4-三-O-(2,3,4,5,6-五甲基苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(6-O-(4-苯甲酰氨基苯甲酰基)-3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.23(d,3H,J=6.3Hz),1.28(s,6H),1.42(s,3H),1.44(s,3H),1.47(s,3H),1.49(s,3H),2.16(s,12H),2.20(s,18H),2.24(s,3H),2.25(s,6H),2.29(s,6H),3.39(s,3H),3.41(s,3H),3.72(bs,1H),3.77-3.81(m,1H),4.01-4.21(m,10H),4.28-4.32(m,1H),4.39-4.43(m,2H),4.54-4.59(m,4H),4.72-4.79(m,3H),4.88(d,1H,J=10.7Hz),5.23(d,1H,J=9.5Hz),5.58(d,1H,J=3.0Hz),7.50-7.63(m,3H),7.78(d,2H,J=8.1Hz),7.90(d,2H,J=8.2Hz),8.03(bs,1H),8.10(d,2H,J=8.1Hz).
实施例16
通式2或2’的化合物的一般脱酰方法,其中R4或R’4是任选地取代的酰基,获得通式2或2’的化合物,其中R4或R’4是H
将根据实施例15所述的6’-O-酰基化合物(1.0eq.)溶解于MeOH,并将NaOMe(1.5eq.)在室温加入其中。将混合物在室温和40℃之间搅拌3小时到过夜。接着,用安伯莱特IR 120(H+)离子交换树脂中和该碱并滤去。浓缩滤液,并将粗制产物通过结晶或快速色谱法纯化(己烷/EtOAc)以提供通式2或2’的化合物,其中R4或R’4是H。
根据备选的方法,将起始物质溶解于MeOH和DCM的混合物中。将NaOMe(1.5eq.)在室温加入,将混合物在室温到40℃搅拌3小时到过夜。接着,将碱用安伯莱特IR 120(H+)离子交换树脂中和并滤去。将DCM和盐水加入滤液中,并分离各相。将有机相干燥、过滤并在真空中浓缩。
收率范围在60和80%之间。
a)O-(2,3,4-三-O-(3-苯基苄基)-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3,300MHz):δ=7.70-7.31(27H),5.12和4.80(ABq,2H,J=11.4),5.05和4.89(ABq,2H,J=12.0),4.88(s,2H),4.66(dd,1H,J=7.2,7.8),4.60(d,1H,J=8.1),4.39(d,1H,J=6.9),4.29(m,1H),4.22(dd,1H,J=5.7,6.3),4.19-3.64(14H),3.52(s,2×3H),1.49,1.49,1.42,1.41,1.29,1.28(s,6×3H),1.20(d,3H,J=6.6).
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ=141.2-125.9,110.4,109.7,108.6,107.5,101.4,95.0,80.7,79.2,78.3,77.9,77.3,76.6,75.4,74.9,74.8,74.4,74.2,73.9,73.1,72.6,66.3,64.9,62.4,57.7,53.9,27.9,27.1,26.9,26.6,26.4,25.0,16.9.
b)O-(2,3,4-三-O-(4-甲基苄基)-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.07(d,3H,J=6.4Hz),1.30(s,3H),1.32(s,3H),1.37(s,3H),1.39(s,3H),1.44(s,3H),1.46(s,3H),2.34(s,6H),2.36(s,3H),3.50(s,6H),3.60-3.72(m,4H),3.77-3.85(m,2H),3.90-4.08(m,8H),4.20-4.24(m,2H),4.36(d,1H,J=7.0Hz),4.53(d,1H,J=8.2Hz),4.60-4.73(m,5H),4.84(d,1H,J=11.7Hz),4.94(d,1H,J=11.6Hz),5.54(d,1H,J=3.6Hz),7.10-7.17(m,6H),7.22-7.25(m,2H),7.28-7.32(m,4H).
13C-NMR(75MHz,CDCl3):δ=136.96,136.86,136.81,136.16,135.89,135.72,128.92,128.76,128.71,128.43,127.76,127.44,110.38,109.63,108.73,107.56,101.42,95.31,80.67,78.96,77.83,77.46,76.07,75.65,74.70,74.46,74.41,74.30,73.84,72.90,72.49,66.25,65.03,62.41,57.67,54.00,27.84,27.08,26.95,26.50,26.45,25.12,21.14,16.80.
c)O-(2,3,4-三-O-(2-萘基甲基)-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3,300MHz):δ=7.87-7.41(21H),5.69(d,1H,J=3.3),5.15和4.89(ABq,2H,J=12.0),5.11和4.95(ABq,2H,J=11.4),4.97(s,2H),4.63(dd,1H,J=7.0,7.8),4.59(d,1H,J=8.4),4.36(d,1H,J=6.9),4.25-3.65(16H),3.50(s,2×3H),1.48,1.48,1.38,1.36,1.31,1.22(s,6×3H),1.14(d,3H,J=6.3).
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ=136.8-125.7,110.5,109.7,108.7,107.5,101.4,95.0,80.7,79.3,78.0,77.9,76.6,75.5,74.8,74.4,74.2,73.9,73.3,72.7,66.4,64.9,62.4,57.7,53.9,27.9,27.1,26.9,26.6,26.5,25.0,16.9.
d)O-(2,3,4-三-O-(4-氯苄基)-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
1H NMR(CDCl3,300MHz):δ=7.28-7.24(12H),5.56(d,1H,J=3.0),4.86(d,1H,J=11.7),4.78(d,1H,J=12.1),4.72-4.53(6H),4.35(d,1H,J=6.9),4.24(m,1H),4.16-3.80(4H),3.69(dd,1H,J=6.9,8.2),3.64-3.60(m,3H),3.49(s,2×3H),1.46,1.42,1.38,1.36,1.29,1.28(s,6×3H),1.11(d,3H,J=6.6).
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ=137.6-128.3,110.5,109.7,108.6,107.5,101.3,94.9,80.7,78.7,78.5,77.9,77.4,76.3,75.4,74.9,74.5,74.1,74.1,73.9,72.2,71.7,66.2,64.8,62.4,57.7,54.0,27.9,27.0,26.8,26.6,26.5,25.0.
e)O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛
非晶形白色固体
1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ=1.10(d,3H,J=6.5Hz),1.29(s,3H),1.31(s,3H),1.37(s,3H),1.39(s,3H),1.44(s,3H),1.46(s,3H),3.62-3.85(m,6H),3.90-4.09(m,8H),4.19-4.25(m,2H),4.36(d,1H,J=7.0Hz),4.55(d,1H,J=8.2Hz),4.61-4.77(m,4H),4.88(d,1H,J=12.0Hz),4.98(d,1H,J=11.6Hz),5.58(d,1H,J=3.4Hz),7.26-7.42(m,15H).
13C-NMR(75MHz,CDCl3):δ=139.15,138.87,138.72,128.29,128.25,128.08,128.07,127.65,127.39,127.33,127.27,110.41,109.65,108.72,107.56,101.38,95.16,80.68,78.98,77.95,77.86,77.14,76.26,75.58,74.76,74.69,74.43,74.31,73.87,73.00,72.55,66.25,64.95,62.39,57.69,54.04,27.86,27.06,26.90,26.54,26.45,25.09,16.80.
实施例17
O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖(二水合物和脱水物的混合物)
a)将实施例16e的化合物(2.3g)溶解于75%乙酸(15ml)中并在75℃保持6小时。浓缩反应混合物,将其吸收在乙酸乙酯(15ml)中,用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤。在缓慢搅拌下,将有机相冷却到4℃,产物结晶提供1.0g的白色固体(55%)。
b)将实施例16e的化合物(2.3g)溶解于乙酸乙酯/CH3CN/水4∶4∶1混合物(15ml)中,并加入pTsOH一水合物(0.15eq)。将反应混合物在35℃搅拌20小时。产物从反应混合物结晶,提供1.1g的白色固体(62%)。
c)将实施例16e的化合物(2.3g)溶解于THF/1M HCl 2:1混合物(15ml)中,并将其在35℃搅拌44小时。将产物从反应混合物结晶出来,提供1.1g的白色固体(62%)。
d)将给体4(实施例11,10.0g)溶解于40ml的DCM中,并用冰浴冷却。在0-5℃向该冷溶液中,加入溴(0.5ml)。5分钟后,接着加入环己烯(0.5ml)直到颜色变得稍黄。将粗制受体5(实施例5g,11.6g,81%纯度)和TBAB(10mol%相对于受体)在DMF(20ml)中的预先制备的溶液逐滴加入给体中,并将反应混合物在冰冷下搅拌直到冰融化并随后置于室温38小时。将反应混合物用甲苯(150ml)稀释并用饱和NaHCO3(100ml)萃取3次,用1NHCl(100ml)萃取1次,用饱和NaHCO3(100ml)萃取3次,用盐水(100ml)萃取1次。将有机层在真空中浓缩以提供黄橙色的油,将其溶解于TBME(35ml)中。将三糖通过加入庚烷(255ml)进行沉淀,提供15.4g的白色粉末,将其溶解于MeOH(60ml)中。向该溶液中,逐滴加入NaOH/MeOH(0.32g在15ml中)的混合物。18小时后,滤去白色固体,并将溶液用甲苯(150ml)稀释。将有机相用1M HCl(150ml),NaHCO3(150ml)和H2O/盐水4:1(150ml)进行洗涤,随后蒸发溶剂并干燥过夜。将粗制产物溶解于MeCN/EtOAc/H2O(75ml)中,并加入pTsOH一水合物(0.6g)。在40℃搅拌19小时后,将混合物用EtOAc(75ml)稀释并用NaHCO3(饱和)(90ml)和盐水(90ml)洗涤。将合并的水相用EtOAc(2x 20ml)再次洗涤2次。将合并的有机相在4℃缓慢搅拌过夜,并滤去白色晶体以提供需要的三糖(5.34g,45%基于受体)。
实施例18
O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖(不含结晶水)
a)将根据实施例17的化合物(8g)溶解于7ml的DMSO并将其用乙酸乙酯(30ml)稀释。将该有机溶液用水(2x30ml)进行洗涤。在静置后,白色晶体从有机相中沉淀,收集该晶体,提供7.05g的产物。通过HPLC的纯度:98.1%.
b)在5-10℃,向根据实施例11的化合物在DCM(2000ml)中的溶液中,加入73ml在DCM(200ml)中的溴。10分钟后,在相同的温度加入环己烯(130ml)。将实施例4的化合物(600g)和TBAB(25g)在DMF(1200ml)中的溶液在冷却下滴入上述溶液中。将反应混合物在室温搅拌48小时,接着将其用甲苯(201)稀释并用饱和NaHCO3和水(每个301)洗涤。将有机相浓缩以提供17l黄色的油,将其溶解于甲醇(1.81)中,并加入120g的NaOMe,将该混合物在室温搅拌18小时。在用安伯莱特IR 120H+(600g)中和后,将树脂滤去并将滤液在减压下浓缩,提供约11的黄色半固体物质,将其吸收在60%乙酸水溶液(2.51)中,并将该溶液在65℃搅拌3天。蒸发溶剂,将残余的物质溶解于乙酸乙酯(31)中,将该溶液用水(2x41)萃取,将水相用乙酸乙酯(500ml)反萃取。将合并的有机相贮存在冰箱中2天。过滤形成的白色固体,用冷乙酸乙酯洗涤并从甲醇(750ml)再结晶以产生210g的白色晶体化合物。
1H-NMR(200MHz,DMSO-d6)(α/β的混合物)δ:1.05(m,3H),2.98(m,1H),3.10-3.90(m,13H),4.05-5.00(m,16H),5.54(br s,1H),6.38(d,0.6H),6.72(d,0.4H),7.05-7.20(m,15H).
IR光谱显示在3375,2929,1462,1454,1402,1384,1078,1044cm-1的特征峰(见图2)。
X-射线粉末衍射
用Philips PW 1830/PW1050仪器以透射几何学,使用通过石墨单色仪由单色造成的CuKα辐射进行XRPD研究。基于的波长,从2Θ值计算D-间距。作为一般规律,2Θ值具有±的误差率。图1显示图谱,并且下表包含峰值列表。
DSC分析
在SETARAM labsys Evo TG-DSC热分析仪上,在流动的高纯度(6.0)氦气氛中(流速20ml/min),在30-300℃的温度范围内,恒定加热速率10K/min,使用标准100μl铂坩锅来进行测量。称重10.4mg的样品。温谱图显示于图3中。
实施例19
O-(2,3,4-三-O-(4-甲基苄基)-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖
将实施例16b的化合物(0.28g,0.29mmol)溶解于60%乙酸(5ml)中并在50℃搅拌70小时。将混合物在真空中浓缩,吸收于EtOAc(20ml)中并用饱和NaHCO3(10ml),水(10ml)和盐水(10ml)萃取。在MgSO4上干燥后,将混合物在真空中浓缩并由EtOAc/庚烷结晶剩余的残留物以给出白色的结晶固体,mp:112-117℃。
1H-NMR(300MHz,CDCl3/d4-MeOH5:3):δ=1.06(d,3H,J=5.1Hz),2.30(s,6H),2.33(s,3H),3.18-3.25(m,1H),3.43-3.87(m,14H),3.87-4.06(m,2H),4.18-4.42(m,1H),4.45(d,0.5H,J=7.8Hz),4.68-4.74(m,4H),4.85(d,1H,J=11.3Hz),5.10(d,0.5H,J=3.6Hz),5.25(d,0.5H,J=3.6Hz),5.29(d,0.5H,J=3.6Hz),7.07-7.19(m,8H),7.22-7.27(m,4H).
实施例20
2’-O-岩藻糖基乳糖
a)温和加热在甲醇/异丙醇/乙酸(100ml:50ml:5ml)混合物中的根据实施例18所述的化合物(10.0g)的混悬液以得到清亮溶液,向其中加入水(10m1)中的10%钯碳(1.0g)混悬液。将混合物在氢气氛下(6bar)于室温搅拌12小时。过滤催化剂,浓缩滤液并通过加入MTBE(25ml)沉淀产物以给出6.6g的白色非晶形固体。通过HPLC测量的纯度为:99.7%。HPLC-MS:ESI+511.2[M+Na]+,527.2[M+K]+;ESI-487.4[M-H]-,523.2[M+Cl]-,577.3[M2+H]-.
1H-NMR(600MHz,D2O)δ:α-D-葡萄糖H-1 5.22d,H-2 3.59dd,H-3*3.80dd,H-4 3.71dd,H-5 3.91m,H-6x 3.90m,H-6y 3.80m;β-D-葡萄糖H-1 4.63d,H-2 3.29dd,H-3 3.58dd,H-4 3.72dd,H-5 3.47ddd,H-6x 3.94dd,H-6y 3.76dd;D-半乳糖H-1 4.52d,H-2 3.66dd,H-3 3.88m,H-4 3.90m,H-5 3.81m,H-6x 3.81m,H-6y 3.74m;L-岩藻糖H-1 5.30d,H-2*3.80m,H-3*3.80m,H-4 3.82d,H-5 4.22,4.25qd,CH3 1.22d.
13C-NMR(150MHz,D2O)δ:α-D-葡萄糖C-1 94.5,C-2 74.0,C-3* 72.3,C-4 77.9,C-5 73.1,C-6 62.7;β-D-葡萄糖C-1 98.6,C-2 76.6,C-3 77.0,C-478.5,C-5 78.0,C-6 62.9;D-半乳糖C-1 102.9,C-2 79.0,C-3 76.3,C-4 71.9,C-5 74.0,C-6 63.8;L-岩藻糖C-1 102.0,C-2* 72.4,C-3* 70.9,C-4 74.4,C-569.6,CH3 18.0.(*可交换的归属)
b)向甲醇(1000ml)中根据实施例17的化合物(100g)的混悬液中加入10%钯碳(8.3g)。将混合物在氢气氛(5atm)下,在35℃搅拌5小时。滤去催化剂,浓缩滤液并将产物沉淀以提供61.8g的白色非晶形固体。
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缩写列表
Ac 乙酰基
Bn 苄基
Bz 苯甲酰基
CAN 硝酸铈铵
DCM 二氯甲烷
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DSC 差示扫描热量法
ESI 电喷雾离子化
EtOAc 乙酸乙酯
2’-FL 2’-O-岩藻糖基乳糖
IDCP 碘鎓二(对称-三甲基吡啶)过氯酸酯
Me 甲基
MeCN 乙腈
MTBE 甲基叔丁醚
Ph 苯基
Piv 新戊酰基
TBAB 四丁基溴化铵
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
Tr 三苯甲基
XRPD X-射线粉末衍射
Claims (22)
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于所述催化氢解作用在钯碳或钯黑的存在下,在水中,在一种或多种C1-C6醇中,在水和一种或多种C1-C6醇的混合物中,或在水、一种或多种C1-C6醇和乙酸的混合物中进行。
3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于以水合形式,以不含结晶水的形式或以水合形式和不含结晶水的形式的混合物使用通式1的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖。
5.根据权利要求4所述的化合物,其中R1和R2彼此独立地是指苄基,4-甲基苄基,苄氧基羰基,萘基甲基,3-苯基苄基,4-氯苄基,4-甲氧基苄基,3,4-二甲氧基苄基,2,4,6-三甲基苄基或2,3,4,5,6-五甲基苄基,更优选地是苄基或4-甲基苄基并且R3是H。
6.根据权利要求4或5所述的化合物,其是不含结晶水的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖
7.用于制备一组根据权利要求4所述的通式1的化合物或其水合物或溶剂化物的方法
在所述通式1的化合物中R1和R2彼此独立地是可通过氢解作用去除的基团并且R3是可通过氢解作用去除的基团或H,条件是当R3是指H时,则R1和R2基团中的至少一个不同于未取代的苄基-,其特征在于使通式2的化合物或其水合物或溶剂化物进行酸催化的温和水解
在所述通式2的化合物中R1和R2彼此独立地是可通过氢解作用去除的基团,R4是可通过氢解作用去除的基团,乙缩醛型基团,甲硅烷基或H,R是烷基或两个成对的R-基团与它们所连接的碳原子一起形成C3-C6环烷基环,R’是烷基,条件是当R4是乙缩醛型基团、甲硅烷基或H时,则R1和R2基团中的至少一个不同于未取代的苄基-。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于所述酸催化的温和水解在乙酸水溶液中进行。
9.根据权利要求7或8所述的方法,其特征在于应用通式2的化合物,其中R和R’是甲基,R1和R2基团中的一个或R1和R2基团同时是4-甲基苄基并且R4是H。
11.根据权利要求10所述的方法,其特征在于在乙酸乙酯/乙腈/水中进行所述酸催化的温和水解,其中所述乙酸乙酯的比例超过40v/v%。
12.根据权利要求10或11所述的方法,其特征在于所述再结晶在甲醇、乙醇或异丙醇,优选地在甲醇中进行。
14.根据权利要求13所述的方法,其特征在于在乙酸水溶液中进行所述酸催化的温和水解。
15.根据权利要求13或14所述的方法,其特征在于所述极性较小的非质子溶剂是酯型溶剂,优选地是乙酸乙酯,并且所述再结晶在甲醇、乙醇或异丙醇,优选地在甲醇中进行。
16.用于制备根据权利要求6所述的化合物的方法,所述方法包括下述步骤:
a)将根据权利要求10步骤a-b)或权利要求13步骤a-d)获得的粗制产物溶解于极性较高的非质子溶剂,
b)用极性较小的非质子溶剂稀释,
c)用水萃取和
d)结晶。
17.根据权利要求16所述的方法,其特征在于在乙酸水溶液中进行所述酸催化的温和水解。
18.根据权利要求16或17所述的方法,其特征在于所述极性较高的非质子溶剂是DMSO,并且极性较小的非质子溶剂是酯型溶剂,优选地是乙酸乙酯。
19.根据权利要求10-18所述的方法,其特征在于使O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-(3,4-异亚丙基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2,3:5,6-二-O-异亚丙基-D-葡萄糖二甲基乙缩醛进行酸催化的温和水解。
21.根据权利要求20所述的方法,其特征在于所述催化氢解作用在钯碳或钯黑的存在下,在水中,在一种或多种C1-C6醇中,在水和一种或多种C1-C6醇的混合物中,或在水、一种或多种C1-C6醇和乙酸的混合物中进行。
22.根据权利要求20或21所述的方法,其特征在于以水合形式,以不含结晶水的形式或以水合形式和不含结晶水的形式的混合物应用通式1的O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→2)-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-D-葡萄糖。
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