CN102428075B

CN102428075B - 结晶三肽环氧酮蛋白酶抑制剂

Info

Publication number: CN102428075B
Application number: CN201080021879.8A
Authority: CN
Inventors: P.菲亚西丰萨; L.C.塞尔
Original assignee: Proteolix Inc
Current assignee: Onyx Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2009-03-20
Filing date: 2010-03-22
Publication date: 2016-05-11
Anticipated expiration: 2030-03-22
Also published as: RS53746B1; US8604215B2; KR20110132577A; PL2408758T3; US20120077855A1; IL215174A; HRP20161654T1; SMT201700068B; PE20120645A1; HRP20150014T1; HK1204952A1; PT2813241T; HUE032430T2; BRPI1009369A2; EP2408758A1; EP2813241A1; EA024672B1; CO6430433A2; ZA201601686B; SG2014011373A

Abstract

本发明涉及结晶三肽酮环氧化物化合物、它们的制备方法和相关的药物组合物。

Description

结晶三肽环氧酮蛋白酶抑制剂

相关申请

本申请要求享有2009年3月20日提交的美国临时申请系列No.61/162,196和2009年5月22日提交的美国临时申请系列No.61/180,561的优先权权益。上述申请说明书的全部内容都在此引入作为参考。

发明背景

在真核生物中，蛋白质降解主要通过泛素通道介导，在所述通道中，被靶向破坏的蛋白质被连接到76氨基酸多肽泛素上。一旦被靶定，泛肽化蛋白质就充当26S蛋白酶体（一种多相催化蛋白酶）的基质，所述蛋白酶通过它的三种主要蛋白水解活性作用将蛋白质裂解成短肽链。虽然在胞内蛋白质转换中具有一般职能，蛋白酶体-介导的降解还在多种过程中起着关键作用，比如主要组织相容性复合体（MHC）类型I抗原呈递、细胞程序死亡、细胞生长调节作用、NF-κB活化作用、抗原加工和前炎性信号的转导作用。

20S蛋白酶体是一种由组织成四个环的28个亚单位组成的700kDa的圆柱形多相催化蛋白酶配合物。在酵母和其他真核生物中，7种不同的α亚单位形成外环和7种不同的β亚单位包含内环。所述α亚单位充当19S（PA700）和11S（PA28）调节配合物的结合位点以及由两个β亚单位环形成的内部蛋白水解室的物理障碍。由此，在体内，蛋白酶体被认为是以26S颗粒（“26S蛋白酶体”）的形式存在。体内试验已经表明，20S形式的蛋白酶体的抑制作用可以轻易地与26S蛋白酶体的抑制作用相联系。在颗粒形成期间，β亚单位的氨基末端前序列的裂解暴露于充当催化亲核物质的氨基末端苏氨酸残基。由此，在蛋白酶体中对催化活性负责的亚单位具有氨基末端亲核残基，并且这些亚单位属于N-末端亲核物质（Ntn）水解酶家族（其中亲核N-末端残基为，例如Cys、Ser、Thr和其他亲核部分）。该家族包括，例如青霉素G酰基转移酶（PGA）、盘尼西林V酰基转移酶（PVA）、谷氨酰胺PRPP酰氨基转移酶（GAT）和细菌糖基天门冬酰胺酶。除了普遍存在的被表达的β亚单位之外，高级脊椎动物还具有三个干扰素-γ-可诱导的β亚单位（LMP7、LMP2和MECLl），这些亚单位分别替换它们的正常对应物（counterparts）β5、β1和β7，由此改变蛋白酶体的催化活性。通过使用不同的肽基质，对于真核生物20S蛋白酶体已经限定了三种主要的蛋白水解活性：胰凝乳蛋白酶-类似活性（CT-L），其在大的疏水残基之后裂解；胰蛋白酶-类似活性（T-L），其在碱性残基之后裂解；和肽基谷氨酰基肽水解活性（PGPH），其在酸性残基之后裂解。两种另外的较少表征的活性同样归于蛋白酶体：BrAAP活性，其在支链氨基酸之后裂解；和SNAAP活性，其在小的中性氨基酸之后裂解。所述的主要蛋白酶体蛋白水解活性似乎由不同的催化部位促进，因为抑制剂、β亚单位中的点突变和γ干扰素-诱发的β亚单位的交换不同程度的改变了这些活性。

因此需要改进的组合物和制备与配制蛋白酶体抑制剂的方法。

发明概述

本发明的一方面涉及具有式（I）结构的晶体化合物或者其药学上可接受的盐，

I

其中

X为O、NH或者N-烷基，优选O；

Y为N、S或者C(R⁸)₂，优选NH；

Z为NH、N-烷基、O、S或者C(R⁸)₂，优选S；

R¹、R²和R³为氢；

R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸各自独立地选自氢、C_1-6烷基、C_1-6羟基烷基、C_1-6烷氧基烷基、芳基和C_1-6芳烷基，它们各自任选被选自烷基、酰胺、胺、羧酸或者其药学上可接受的盐、羧酸酯、硫醇和硫醚的基团取代，优选R⁴、R⁵和R⁶独立地选自C_1-6硫醚、C_1-6羟基烷基和C_1-6芳烷基，和R⁷为C_1-6烷基，更优选R⁴和R⁵为C_1-6硫醚和R⁷为C_1-6烷基。

附图简要说明

图1显示了晶体化合物1的DSC（差示扫描量热法）温谱图。

图2显示了晶体化合物1的XRPD（X-射线粉末衍射）图案。

图3显示了晶体化合物1的TG温谱图。

图4显示了无定形化合物1的调节温谱图，可逆热流（底部）和不可逆热流（顶部）。

图5显示了根据实施例2（中间）、实施例3（顶部）和实施例4（底部）制备的晶体化合物1的DSC温谱图的对比。

图6显示了同根据实施例2（顶部）、实施例3（从底部第2个）和实施例4（从顶部第2个）制备的晶体化合物1的XRPD图案相比，根据实施例1（底部）的无定形化合物1的XRPD图案。

图7显示了无定形化合物1的TG温谱图。

发明详述

在某些实施方案中，本发明涉及具有式（I）结构的晶体化合物或者其药学上可接受的盐，

I

其中

X为O、NH或者N-烷基，优选O；

Y为NH、N-烷基、O、S或者C(R⁸)₂，优选NH；

Z为NH、N-烷基、O、S或者C(R⁸)₂，优选S；

R¹、R²和R³为氢；

R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸各自独立地选自氢、C_1-6烷基、C_1-6羟基烷基、C_1-6烷氧基烷基、芳基和C_1-6芳烷基，它们各自任选被选自烷基、酰胺、胺、羧酸或者其药学上可接受的盐、羧酸酯、硫醇和硫醚的基团取代，优选R⁴、R⁵和R⁶独立地选自C_1-6硫醚、C_1-6羟基烷基和C_1-6芳烷基，和R⁷为C_1-6烷基，更优选R⁴和R⁵为C_1-6硫醚和各个R⁷为C_1-6烷基。

在某些实施方案中，本发明涉及式（II）的晶体化合物

(II)。

在某些实施方案中，本发明涉及制备式（I）或者（II）晶体化合物的方法，包括一个或多个以下步骤：（i）制备无定形化合物，例如，根据美国专利申请No.11/595,804制备；（ii）将无定形化合物溶解在有机溶剂中；（iii）使溶液达到过饱和；（iv）分离晶体，例如，通过过滤晶体、通过将流体从晶体中倾析出来或者通过任何其它适宜的分离工艺分离晶体；和（v）洗涤晶体。在某些实施方案中，制备方法进一步包括诱发结晶。在某些实施方案中，制备方法进一步包括干燥，优选在减压下干燥，比如在真空压力下干燥。

在某些实施方案中，可以将无定形化合物溶于选自乙腈、乙酸乙酯、庚烷、己烷、乙酸异丙酯、甲醇、甲乙酮、四氢呋喃、甲苯和水或者其任意组合的溶剂中。在某些实施方案中，可以将式（II）的无定形化合物溶于选自乙腈、庚烷、己烷、甲醇、四氢呋喃和甲苯或者其任意组合的有机溶剂中。在某些优选的实施方案中，所述有机溶剂为甲苯、四氢呋喃或者乙腈，优选乙腈或者甲苯。

在某些实施方案中，使溶液达到过饱和的步骤包括：缓慢加入反溶剂（比如水、庚烷、己烷或者另一种可与有机溶剂混溶的极性或非极性液体）、使溶液冷却（向溶液中加入或者不加入晶种）、减少溶液体积或者其任意组合。在某些实施方案中，使溶液达到过饱和包括：加入反溶剂、将溶液冷却至环境温度或者更低温度和减少溶液体积，例如，通过从溶液中蒸发溶剂减少溶液体积。在某些实施方案中，使溶液冷却可以是被动的（例如，将溶液保持在环境温度）或者主动的（例如，在冰浴或者致冷器中冷却溶液）。

在某些实施方案中，所述方法进一步包括诱发沉淀或者结晶。在某些实施方案中，诱发沉淀或者结晶包括二次成核，其中成核现象在种晶或者与环境相互作用（结晶器器壁、搅拌转子、超声处理等等）存在下发生。

在某些实施方案中，洗涤晶体包括用选自反溶剂、乙腈、庚烷、己烷、甲醇、四氢呋喃、甲苯、水或者其组合的液体洗涤。在某些实施方案中，晶体用反溶剂和有机溶剂的组合洗涤。在某些实施方案中，反溶剂是水，然而在其它实施方案中，它是烷烃溶剂（比如己烷或者戊烷）或者芳烃溶剂（比如苯、甲苯或者二甲苯）。

在某些实施方案中，洗涤晶体包括用四氢呋喃和烷烃溶剂（比如己烷或者庚烷）的混合物或者用乙腈和水的混合物洗涤式（II）的晶体化合物。在某些实施方案中，洗涤晶体包括用甲苯洗涤式（II）的晶体化合物。在优选的上述实施方案中，在洗涤之前对甲苯进行冷却。

在某些实施方案中，式（II）的晶体化合物基本上是纯的。在某些实施方案中，式（II）的晶体化合物的熔点在约135～约160℃、约140～约155℃、约145～约150℃或者甚至约147～约149℃的范围内，例如，约149℃。

在某些实施方案中，式（II）晶体化合物的DSC在约147℃下具有急剧吸热最大值，例如，源于结晶形式的熔化和分解的吸热最大值，如图1中所示。

在某些实施方案中，式（II）晶体化合物的X射线粉末图谱如图2中所示，为（θ-2θ°）：8.94；9.39；9.76；10.60；11.09；12.74；15.27；17.74；18.96；20.58；20.88；21.58；21.78；22.25；22.80；24.25；24.66；26.04；26.44；28.32；28.96；29.65；30.22；30.46；30.78；32.17；33.65；34.49；35.08；35.33；37.85；38.48。

在某些实施方案中，式（II）晶体化合物的TG温谱图在25～125℃的温度范围内表现出0.0～0.3%的重量减轻，如图3中所示。

在某些实施方案中，式（II）的晶体化合物未被溶剂化（例如，晶格不包含溶剂分子）。在某些替代实施方案中，式（II）的晶体化合物得到了溶剂化。

在某些实施方案中，本发明涉及制备式（II）的晶体化合物的方法，

(II)

包括（i）使式（III）化合物

(III)

其中X为任何适宜的抗衡离子，与式（IV）化合物在有机溶剂中反应

;

(IV)

（ii）制备在有机溶剂中的式（II）化合物的溶液；（iii）使溶液达到过饱和，从而使得晶体形成；和（iv）分离晶体从而提供式（II）的晶体化合物，例如通过过滤晶体、通过倾析或者通过任何其它适宜的分离工艺分离晶体。

在某些实施方案中，在制备在有机溶剂中的溶液之前，式（II）化合物没有通过色谱法进行纯化。

在某些实施方案中，制备方法进一步包括诱发结晶。在某些实施方案中，制备方法进一步包括洗涤晶体，例如，用溶剂或者非溶剂流体洗涤晶体。在某些实施方案中，制备方法进一步包括干燥，优选在减压下干燥，比如在真空压力下干燥。

在某些实施方案中，X是抗衡离子，选自氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、甲苯磺酸盐、丙二酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐和2-羟基乙磺酸盐等等的离子。（参见，例如，Berge等人（1977）“PharmaceuticalSalts“，J.Pharm.Sci.66:1-19.）在某些实施方案中，X选自三氟乙酸盐、甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、乙酸盐、氯化物和溴化物的离子，优选三氟乙酸盐的离子。

在某些实施方案中，有机溶剂选自乙腈、乙酸乙酯、庚烷、己烷、乙酸异丙酯、甲醇、甲乙酮、四氢呋喃、甲苯和水或者其任意组合。在某些实施方案中，可以将式（II）的无定形化合物溶于选自乙腈、庚烷、己烷、甲醇、四氢呋喃和甲苯或者其任意组合的有机溶剂中。在某些优选的实施方案中，所述有机溶剂为甲苯、四氢呋喃或者乙腈，优选乙腈或者甲苯。

在某些实施方案中，制备方法进一步包括洗涤式（II）的晶体。在某些实施方案中，洗涤晶体包括用选自反溶剂、乙腈、庚烷、己烷、甲醇、四氢呋喃、甲苯、水或者其组合的液体洗涤。在某些实施方案中，晶体用反溶剂和有机溶剂的组合洗涤。在某些实施方案中，反溶剂是水，然而在其它实施方案中，它是烷烃溶剂（比如己烷或者戊烷）或者芳烃溶剂（比如苯、甲苯或者二甲苯）。

在某些实施方案中，制备方法进一步干燥式（II）的两者的晶体，优选在减压下干燥，比如在真空压力下。

在某些实施方案中，本发明涉及包含式（II）的晶体化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。在某些实施方案中，药物组合物选自片剂、胶囊和注射剂。

晶体三肽环氧酮的应用

有序的蛋白质降解对于保持正常的细胞功能是至关重要的，并且蛋白酶体对于蛋白质降解过程是必要的。蛋白酶体控制对于正常和恶性细胞的细胞-周期进程和细胞程序死亡非常重要的蛋白质；例如，细胞周期蛋白、凋亡蛋白酶、BCL2和nF-kB的水平（Kumatori等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA（1990）87:7071-7075；Almond等人，Leukemia（2002）16:433-443）。由此，取决于所涉及的细胞，抑制蛋白酶体活性可以转化为治疗学应用以处置多种疾病状态并不令人惊讶，所述疾病状态比如恶性、非恶性和自身免疫疾病。

体外和体内模型都表明恶性细胞通常都对蛋白酶体的抑制作用敏感。事实上，蛋白酶体抑制作用已经被证实为一种处置多发性骨髓瘤的治疗学策略。这可能是部分由于高度增殖的恶性细胞依赖于蛋白酶体系统以迅速除去蛋白质（Rolfe等人，J.Mol.Med.（1997）75:5-17；Adams，Nature（2004）4:349-360）。因此，本发明的某些实施方案涉及治疗癌症的方法，包括给予需要所述治疗的对象有效量的在本文中公开的蛋白酶体抑制剂化合物。在本文中使用的术语“癌症“包括但不限于血液传播肿瘤和实体肿瘤。癌症是指血液、骨骼、器官、皮组织和血管系统疾病，包括但不限于膀胱、血液、骨骼、大脑、乳腺、宫颈、胸腔、结肠、子宫内膜、食道、眼睛、头部、肾、肝、肺、淋巴结、口、颈、卵巢、胰腺、前列腺、直肠、肾、皮肤、胃、睾丸、喉管和子宫的癌症。具体的癌症包括但不限于，血癌（急性淋巴细胞性白血病（ALL）、急性髓性白血病（AML）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、慢性粒细胞性白血病（CML）、毛细胞白血病）、成熟B细胞肿瘤（小淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞型幼淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤（比如华氏巨球蛋白血症）、脾边缘区淋巴腺瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、单克隆免疫球蛋白沉积疾病、重链疾病、结外边缘区B细胞淋巴腺瘤（MALT淋巴腺瘤）、结点边缘区B细胞淋巴腺瘤（NMZL）、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥散性B细胞淋巴瘤、纵隔的（胸腺）大B细胞淋巴腺瘤、血管内大B细胞淋巴腺瘤、原发性渗透淋巴腺瘤和伯基特淋巴瘤/白血病）、成熟T细胞和自然杀伤（NK）细胞肿瘤（T细胞幼淋巴细胞白血病、T细胞大粒状淋巴细胞性白血病、攻击性NK细胞白血病、成人T细胞白血病/淋巴腺瘤、结外NK/T细胞淋巴腺瘤、肠病-型T细胞淋巴腺瘤、肝脾T细胞淋巴瘤、原始NK细胞淋巴腺瘤、蕈样真菌病（西泽里综合征）、伯发性皮肤还原成形术大细胞淋巴腺瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、未明确的外周T细胞淋巴腺瘤和还原成形术大细胞淋巴腺瘤）、Hodgkin’s淋巴腺瘤（结节硬化症、mixedcelluarity、淋巴细胞富集、淋巴细胞耗尽或者未耗尽、结节淋巴细胞-支配）、骨髓瘤（多发性骨髓瘤、惰性骨髓瘤、冒烟型骨髓瘤）、慢性骨髓增生殖性疾病、骨髓增生异常/骨髓增生性疾病、脊髓发育不良综合症、免疫缺陷-相关的淋巴组织增生病症、组织细胞和树状细胞肿瘤、肥大细胞病、软骨肉瘤、尤因肉瘤、纤维肉瘤、恶性巨细胞瘤、骨髓瘤骨骼疾病、骨肉瘤、乳腺癌（激素依赖型、激素无关型）、妇科癌症（颈部、子宫内膜、输卵管、妊娠期滋养层疾病、卵巢、腹膜、子宫、阴道和外阴）、基底细胞癌（BCC）、鳞状细胞癌（SCC）、恶性黑色素瘤、隆凸性皮肤纤维肉瘤、默克尔细胞癌、卡波济氏肉瘤、星形细胞瘤、纤维性星形细胞瘤、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤、少枝胶质瘤、室管膜瘤、多形性胶质母细胞瘤、混合性胶质细胞瘤、oligoastrocytomas、成神经管细胞瘤、成视网膜细胞瘤、成神经细胞瘤、胚组织瘤、畸态瘤、恶性间皮瘤（腹膜间皮细胞瘤、心包间皮瘤、胸膜间皮瘤）、胃-肠-胰腺或者胃肠胰腺神经内分泌肿瘤（GEP-NET）、类癌瘤、胰腺内分泌肿瘤（PET）、结肠直肠腺癌、结肠癌、攻击性神经内分泌肿瘤、平滑肌肉瘤、粘液腺癌、环状细胞腺癌、肝细胞癌、胆管细胞癌、肝胚细胞瘤、血管瘤、肝脏腺瘤、局灶性结节性增生症（结节再生性增殖、错构瘤）、非小细胞肺癌（NSCLC）（鳞状上皮细胞肺癌、腺癌、大细胞肺癌）、小细胞肺癌、甲状腺癌、前列腺癌症（激素难治疗的、不受雄激素约束的、受雄激素约束的、对激素不敏感的前列腺癌症）、肾细胞癌和软组织肉瘤（纤维肉瘤、恶性纤维性hystiocytoma、皮肤纤维肉瘤、脂肉瘤、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、血管肉瘤、滑膜肉瘤、恶性周围神经鞘肿瘤/神经纤维肉瘤、骨外骨肉瘤）。

许多造血和淋巴组织的肿瘤的特征都在于细胞增殖提高或者某种具体的细胞类型。慢性骨髓增生性疾病（CMPDs）都是无性系造血干细胞病症，它们的特征在于一种或者多种脊髓系中的骨髓增殖，从而导致周围血液中的粒性细胞、红血球和/或血小板的数量增加。因而，蛋白酶体抑制剂治疗所述疾病的应用是诱人并且正在进行考察中（Cilloni等人，Haematologica（2007）92:1124-1229）。CMPD可以包括慢性骨髓性血癌、慢性非嗜血性血癌、慢性嗜酸性血癌、真性红细胞增多、慢性突发性骨髓纤维化、必需血小板增多和未能归类的慢性骨髓增生性疾病。本发明的一方面是治疗CMPD的方法，包括给予需要所述治疗的对象有效量的在本文公开的蛋白酶体抑制剂化合物。

骨髓增生异常/骨髓增生性疾病，比如慢性粒单核细胞白血病、非典型慢性粒细胞性白血病、新生粒单核细胞白血病和未能归类的骨髓增生异常/骨髓增生性疾病，其特征在于由于一种或者多种脊髓系内的增殖而导致的骨髓细胞过多。利用本文中所描述的化合物或者组合物抑制蛋白酶体可以，可以通过向需要所述治疗的对象提供有效量的化合物或者组合物而用来治疗这些骨髓增生异常/骨髓增生性疾病。

脊髓发育不良综合症（MDS）是指一组造血干细胞病症，其特征在于一种或者多种主要骨髓细胞系内的造血细胞发育异常和生成无效的造血细胞。在这些血液学恶性肿瘤中利用蛋白酶体抑制剂靶向NF-kB诱发细胞程序死亡，从而杀死恶性细胞（Braun等人，CellDeathandDifferentiation（2006）13:748-758）。本发明的另一实施方案是治疗MDS的方法，包括给予需要所述治疗的对象有效量的在本文中公开的化合物。MDS包括难治性贫血、伴成环铁粒幼红细胞的难治性贫血、伴多系发育异常的难治性血细胞减少症、伴原始细胞增多的难治性贫血、未能归类的脊髓发育不良综合症和与分离的del（5q）染色体异常相关的脊髓发育不良综合症。

肥大细胞病是肥大细胞增殖和它们随后在一种或者多种器官系统中累积导致的疾病。肥大细胞病包括但不限于，皮肤肥大细胞病、惰性系统肥大细胞病（ISM）、伴有相关的无性系血液学非肥大细胞-系疾病的系统肥大细胞病（SM-AHNMD）、攻击性系统肥大细胞病（ASM）、肥大细胞白血病（MCL）、肥大细胞肉瘤（MCS）和真皮外肥大细胞瘤。本发明的另一实施方案是治疗肥大细胞病的方法，包括给予诊断患有肥大细胞病的对象有效量的在本文中公开的化合物或者组合物。

蛋白酶体调节NF-κB，而NF-κB反过来调节在免疫和炎性响应中所涉及的基因。例如，为了表达免疫球蛋白轻链κ基因、IL-2受体α-链基因、类别I主要组织相容性复合体基因和多种细胞因子基因，都需要NF-κB，其中细胞因子基因例如是编码IL-2、IL-6、粒性细胞集群-刺激因子和IFN-β的细胞因子基因（Palombella等人，Cell（1994）78:773-785）。由此，在某些实施方案中，本发明涉及影响IL-2、MHC-I、IL-6、TNFα、IFN-β或者任何其他先前提及的蛋白质的表达水平的方法，各方法都包括给予对象有效量的在本文中公开的蛋白酶体抑制剂化合物或者组合物。在某些实施方案中，本发明包括在哺乳动物中治疗自身免疫病的方法，包括给予治疗有效量的在本文中公开的化合物或者组合物。“自身免疫病”在本文中是源自于并且针对个体自身组织的疾病或者病症。自身免疫疾病或者病症的实例包括但不限于，炎性反应，比如炎性皮肤病（包括牛皮癣和皮炎（例如特异性皮炎））；系统性硬皮病和硬化症；与炎症性肠病相关的反应（比如克罗恩氏病和溃疡性结肠炎）；呼吸困难综合症（包括成人呼吸窘迫综合征；ARDS）；皮炎；脑膜炎；脑炎；葡萄膜炎；结肠炎；肾小球肾炎；过敏性状况，比如湿疹和哮喘以及其他涉及T细胞渗透和慢性炎性反应的状况；动脉粥样硬化症；白细胞粘着缺陷；风湿性关节炎；系统性红斑狼疮（SLE）；糖尿病（例如，I型糖尿病或者胰岛素依赖型糖尿病）；多发性脑硬化；Reynaud's综合症；自身免疫甲状腺炎；变应性脑脊髓炎；Sjogren's综合症；少年发作糖尿病；和与急性和迟发过敏性相关的免疫反应，所述过敏由一般在肺结核、肉样瘤病、多肌炎、肉芽肿病和血管炎中发现的细胞因子和T-胸腺依赖性细胞介导；恶性贫血（阿狄森氏病）；涉及白细胞血细胞渗出的疾病；中枢神经系统（CNS）炎性病症；多器官损伤综合症；溶血性贫血（包括但不限于cryoglobinemia或者Coombs阳性贫血）；重症肌无力；抗原抗体复合物介导的疾病；抗肾小球的基底膜疾病；抗磷脂综合症、过敏性神经炎；格雷夫斯氏病；Lambert-Eaton无力综合症；类天疱疮；天疱疮；自身免疫多内分泌腺疾病；莱特尔氏病；全身肌强直综合征；Beheet疾病；巨细胞性动脉炎；免疫复合物性肾炎；IgA肾病；IgM多发性神经病；免疫血小板减少性紫癜（ITP）或者自身免疫血小板减少症。

免疫系统筛选已经被病毒感染、已经经受致癌性转化或者在其表面上存在不熟悉的肽的自体细胞。胞内蛋白质水解生成用于呈递T-胸腺依赖性细胞以诱发MHC类别I-介导的免疫反应的小肽。由此，在某些实施方案中，本发明涉及将化合物用作在细胞中抑制或者改变抗原呈递的免疫调节剂的方法，包括使细胞暴露于（或者给予对象）在本文中所述的化合物。具体实施方案包括在哺乳动物中治疗移植或者移植-相关疾病的方法，比如移植物抗宿主病疾病或者主体抗移植物疾病，包括给予治疗有效量的在本文中所述的化合物。在此使用的术语“移植”是指来源于给体的用于移植给受者的生物材料。移植物包括各种不同的材料，例如，分离细胞，比如胰岛细胞；组织，比如新生内胎膜、骨髓、造血前体细胞和眼睛组织，比如角膜组织；和器官，比如皮肤、心脏、肝、脾、胰腺、甲状腺、肺、肾、管状器官（例如肠、血管或者食道）。管状器官可用于替换食道、血管或者胆管的受损伤部分。皮肤移植物不仅可以用于烧伤治疗，而且可以用作受损伤的肠的覆盖物或者用于终结某些缺陷（比如膈疝）的覆盖物。移植物可以源自于任何的哺乳动物源，包括人类，无论是来自于尸体或者有生命的给体。在一些情形中，给体和受者是相同的哺乳动物。优选移植物为骨髓或者器官，比如心脏，和移植物的给体和主体的HLA类别II抗原匹配。

组织细胞和树状细胞肿瘤源自于吞噬细胞和辅助细胞，它们在将抗原治疗和呈递给胸腺依赖性细胞中具有重要作用。已经表明，在树状细胞中消耗尽蛋白酶体可以改变它们的抗原-诱发的反应（Chapatte等人，CancerRes.（2006）66:5461-5468）。由此，本发明的另一实施方案包括将有效量的在本文中公开的化合物或者组合物给药至患有组织细胞或者树状细胞肿瘤的对象。组织细胞和树状细胞肿瘤包括组织细胞肉瘤、朗氏细胞组织细胞增多症、朗氏细胞肉瘤、交错树状细胞肉瘤/肿瘤、毛囊树状细胞肉瘤/肿瘤和未明确的树状细胞肉瘤。

已经表明，对蛋白酶体的抑制作用有益于治疗细胞类型增殖和免疫病症的疾病；由此，本发明的实施方案包括治疗与伯发性免疫病症（PID）相关的淋巴组织增生疾病（LPD），包括给予需要其的对象有效量的本公开化合物。与升高的淋巴组织增生病症（包括B细胞和T细胞肿瘤和淋巴腺瘤）的发生相关的免疫缺陷的最常规临床背景为伯发性免疫缺陷综合症和其他伯发性免疫病症、人类免疫缺陷性病毒（HIV）感染、已经接纳实体器官或者骨髓异源移植的患者医原性免疫抑制和与甲氨蝶呤治疗相关的医原性免疫抑制。其它通常与LPDs有关的PIDs为，但不限于运动失调性毛细血管扩张症（AT）、维一奥二氏综合症（WAS）、常规可变性免疫缺陷（CVID）、重度联合免疫缺损（SCID）、X-连接的淋巴组织增生病症（XLP）、Nijmegen断裂综合症（NBS）、高IgM综合症和自身免疫淋巴组织增生综合症（ALPS）。

本发明另外的实施方案涉及影响癌基因蛋白质的蛋白酶体-依赖性调节的方法和治疗或者抑制癌症生长的方法，各个方法都包括将细胞暴露于（体内，例如，在对象内，或者体外）在本文中公开的蛋白酶体抑制剂组合物。HPV-16和HPV-18-起源的E6蛋白质刺激天然网织红细胞裂解物中p53的ATP-和泛素-依赖型结合和降解。已经表明，隐性致癌基因p53在非允许温度下在细胞系中积累，具有突变的热不稳定E1。升高的p53水平可能会导致细胞程序死亡。由泛素系统降解的原癌基因蛋白质的实例包括c-Mos、c-Fos和c-Jun。在某些实施方案中，本发明涉及处理p53-相关的细胞程序死亡的方法，包括给予对象有效量的在本文中公开的蛋白酶体抑制剂组合物。

本发明的另一方面涉及在本文中公开的蛋白酶体抑制剂组合物用于治疗神经变性疾病和病症的用途，神经变性疾病和病症包括但不限于中风、神经系统的缺血性损伤、神经创伤（例如，撞击性脑损伤、脊髓损伤和神经系统的外伤性损伤）、多发性脑硬化和其他免疫-介导的神经病（例如，Guillain-Barre综合症及其变体、急性运动轴索型神经病、急性炎性脱髓鞘多发性神经病和Fisher综合症）、HIV/AIDS痴呆病集合、axonomy、糖尿病性神经病变、帕金森氏病、亨廷顿氏病、多发性脑硬化、细菌性、寄生虫性、真菌性和病毒性脑膜炎、脑炎、脉管痴呆病、多梗塞痴呆病、Lewy躯体痴呆病、额叶痴呆病（比如Pick’s病）、皮质下痴呆病（比如亨廷顿或者渐进性核上瘫痪）、病灶性皮层萎缩综合症（比如伯发性失语症）、新陈代谢-中毒痴呆病（比如慢性甲状腺机能减退或者B12缺乏）和由感染引起的痴呆病（比如梅毒或者慢性脑膜炎）。

阿尔茨海默氏病的特征在于β-淀粉状蛋白质（β-AP）在老年斑块和脑部血管中的胞外沉积。β-AP是来源于淀粉样蛋白前体（APP）的肽的39～42氨基酸片段。已知APP至少存在三种同工型（695，751，和770氨基酸）。mRNA的可变剪接生成同工型；常态过程影响β-AP序列的一部分，从而阻止β-AP的生成。人们相信，由蛋白酶体进行的异常蛋白质处理有助于阿尔茨海默大脑中β-AP的富集。大鼠中的APP-处理酶含有约十种不同的亚单位（22kDa-32kDa）。25kDa亚单位具有X-Gln-Asn-Pro-Met-X-Thr-Gly-Thr-Ser的N-末端序列，这与人类巨蛋白因子的β-亚单位相同（Kojima,S.等人，Fed.Eur.Biochem.Soc.，（1992）304:57-60）。APP-处理酶在Gln15--Lys16键处断裂；在钙离子存在下，该酶还在Met^-1--Asp¹键和Asp¹--Ala²键处断裂以释放β-AP的胞外域。

因此，本发明的一方面涉及治疗阿尔茨海默氏病的方法，包括给予对象有效量的在本文中公开的蛋白酶体抑制剂化合物或者组合物。所述治疗包括降低β-AP处理的速率、将β-AP蚀斑形成的速率降低、降低β-AP产生的速率和降低阿尔茨海默氏病的临床征象。

纤维症是源于成纤维细胞过度增殖生长的纤维性结缔组织的过度和持续形成，并且与TGF-β信号通道的活化相关。纤维症涉及胞外基质的广泛沉积，并且事实上可以在任何组织内存在或者贯穿数种不同的组织。通常，通过TGF-β刺激活化靶基因转录的胞内信号蛋白质（Smad）的水平通过蛋白酶体活性进行调节（Xu等人，2000）。然而，已经观察到，TGF-β信号组分在纤维化状况下加速降解，所述纤维化状况比如囊性纤维化、注射纤维化、心内膜心肌纤维化、特发性肺纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾原性系统纤维化。其他通常与纤维化相关的状况包括肝硬化、弥漫性肺间质疾病、输精管切除后疼痛综合症、肺结核、镰形细胞性贫血和风湿性关节炎。本发明的实施方案为治疗纤维化或者纤维化-相关的状况的方法，包括给予需要所述治疗的对象有效量的在本文中描述的组合物。

灼烧受害者的治疗通常受纤维化的阻碍。由此，在某些实施方案中，本发明涉及将本抑制剂局部或者系统给药以处置烧伤。与手术相随的伤口闭合通常与损伤外貌的疤痕相联系，所述疤痕可以通过抑制纤维化进行预防。由此，在某些实施方案中，本发明涉及预防或者减少疤痕的方法。

脂多糖（LPS）-诱发细胞因子（比如TNFα）的过量形成被认为是与脓毒性休克相联系的过程的核心。此外，通常认为，LPS活化细胞中的第一步骤是使LPS结合到特定的膜受体上。已经确定20S蛋白酶体配合物的α-和β-亚单位为LPS-结合蛋白质，这意味着LPS-诱导信号转导作用在脓毒症的治疗或者预防中可能是重要的治疗学靶体（Qureshi,N.等人，J.Immun.（2003）171:1515-1525）。因此，在某些实施方案中，蛋白酶体抑制剂组合物可以用来抑制TNFα以预防和/或治疗脓毒性休克。

局部缺血和再输灌损伤导致缺氧症，这是一种到达躯体组织的氧气不充足的状况。这种状况导致Iκ-Bα的降解升高，从而导致NF-κB被活化（Koong等人，1994）。已经证实，导致缺氧症的损伤的严重程度可以通过给予蛋白酶体抑制剂得到降低（Gao等人，2000；Bao等人，2001；Pye等人，2003）。因此，本发明的某些实施方案涉及治疗缺血性状况或者再输灌损伤的方法，包括给予需要所述治疗的对象有效量的在本文中公开的蛋白酶体抑制剂化合物。所述状况或者损伤的实例包括但不限于，急性冠状综合症（易受损坏的斑块）、动脉阻塞性疾病（心脏、脑、外周动脉和血管闭塞）、动脉粥样硬化症（冠状动脉硬化、冠状动脉病）、梗塞、心力衰竭、胰腺炎、心肌肥大、狭窄和再狭窄。

NF-κB还与HIV-增强因子/启动子特定结合。当与mac239的Nef相比时，pbj14的HIV调节蛋白Nef的差异在于在控制蛋白激酶结合的区域内的两个氨基酸。人们相信，蛋白激酶为IκB的磷酸化作用发出信号，从而通过泛素-蛋白酶体通道引发IκB降解。在降解之后，NF-κB被释放入细胞核中，由此提高HIV的转录（Cohen,J.，Science，（1995）267:960）。在某些实施方案中，本发明涉及在对象中抑制或者降低HIV感染的方法，或者降低病毒基因表达水平的方法，各个方法都包括给予对象有效量的在本文中公开的蛋白酶体抑制剂化合物或者组合物。

病毒感染促进多种疾病的病理学。心脏病症，比如在发性心肌炎和扩张性心肌病都与柯萨奇病毒B3相关。在与受感染的鼠心脏的对比全染色体组微阵列分析中，在发展患有慢性心肌炎的鼠心脏中，特定的蛋白酶体亚单位都一致地产生了上调（Szalay等人，AmJPathol168:1542-52，2006）。一些病毒在病毒进入步骤中利用泛素-蛋白酶体系统，其中病毒从核内体中被释放入胞质液中。小鼠肝炎病毒（MHV）属于冠状病毒家族，该家族还包括严重的急性呼吸综合症（SARS）冠状病毒。Yu和Lai（JVirol79:644-648，2005）证实，同未经处置的细胞相比，用蛋白酶体抑制剂处置感染MHV的细胞导致同降低的病毒效价相联系的病毒复制减少。人类乙型肝炎病毒（HBV），嗜肝病毒家族的一个成员，同样需要病毒编码的信使蛋白质以进行增殖。抑制蛋白酶体降解通道导致分泌的被膜蛋白质的数量显著减少（Simsek等人，JVirol79:12914-12920，2005）。除了HBV之外，其他肝炎病毒（A、C、D和E）还可能利用泛素-蛋白酶体降解通道以产生分泌、形态发生和病理发生。据此，在某些实施方案中，本发明涉及治疗病毒感染的方法，比如SARS或者肝炎A、B、C、D和E，包括使细胞与（或者给药对象）有效量的在本文中公开的化合物或者组合物。

在某些实施方案中，在此公开的组合物可以用于治疗寄生虫感染，比如原生动物寄生虫导致的感染。这些寄生虫的蛋白酶体被认为是主要在细胞分化和复制活性中涉及（Paugam等人，TrendsParasitol.2003，19（2）：55-59）。此外，已经表明，当暴露于蛋白酶体抑制剂时，内阿米巴类物质将损失成囊能力（Gonzales等人，Arch.Med.Res.1997，28，SpecNo:139-140）。在某些所述实施方案中，蛋白酶体抑制剂组合物的给药方案可以用于治疗由选自以下的原生动物寄生虫导致的人类寄生虫感染：疟原虫（包括导致疟疾的恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫）、锥虫（包括导致Chagas’疾病的克氏锥虫和导致非洲昏睡病的布氏锥虫）、利什曼原虫（包括L.amazonesis、杜氏利什曼原虫、婴儿利什曼原虫、墨西哥利什曼原虫等等）、卡氏肺囊虫（一种已知在AIDS和其他抑制免疫反应的患者中导致肺炎的原生动物）、龚地弓形虫、痢疾内变形虫、入侵阿米巴和肠兰伯式鞭毛虫。在某些实施方案中，在此公开的蛋白酶体抑制剂组合物可以用于治疗由原生动物寄生虫所导致的动物和家畜寄生虫感染，所述寄生虫选自hermani疟原虫、隐孢子虫、细粒棘球绦虫、柔嫩艾美球虫、梭状肉孢子虫和粗糙链孢虫。其它在寄生虫病治疗中充当蛋白酶体抑制剂的化合物描述在WO98/10779中，其全部内容引入本文中。

在某些实施方案中，所述蛋白酶体抑制剂组合物抑制寄生虫中的蛋白酶体活性，同时不在红血细胞和白血球中复原。在某些所述实施方案中，考虑到重复暴露于寄生虫下的治疗学情况，血细胞的长半衰期可以提供延长的保护。在某些实施方案中，考虑到对于未来感染的药物预防，所述蛋白酶体抑制剂组合物可以提供延长的保护。

原核生物等同于真核生物20S蛋白酶体颗粒。虽然原核生物20S颗粒的亚单位组成比真核生物的亚单位组成简单，但是它具有以类似的方式水解肽键的能力。例如，通过β-亚单位的N-末端上的苏氨酸残基，对肽键存在亲核进攻。由此，本发明的实施方案涉及治疗原核生物感染的方法，包括给予对象有效量的在本文中公开的蛋白酶体抑制剂化合物或者组合物。原核生物感染可以包括由分枝杆菌（比如肺结核、麻疯病或者Buruliulcer）或者太古细菌导致的疾病。

还已经证实，与20S蛋白酶体结合的抑制剂在骨骼器官培养中刺激骨生成。此外，当将所述抑制剂系统给药至鼠时，某些蛋白酶体抑制剂使骨骼体积和骨骼形成率提高超过70%（Garrett,I.R.等人，J.Clin.Invest.（2003）111:1771-1782），因此，这暗示着泛素-蛋白酶体工具调节成骨细胞分化和骨骼形成。因此，在此公开的蛋白酶体抑制剂化合物或者组合物可以用于与骨骼损失（比如骨质疏松症）相关的疾病的治疗和/或预防中。

由此，在某些实施方案中，本发明涉及治疗选自以下的疾病或者状况的方法：癌症、自身免疫病、移植(graft)或者移植(transplant)-相关状况、神经变性疾病、纤维化-相关的状况、缺血性-相关状况、感染（病毒、寄生虫或者原核生物感染）和与骨骼损失相关的疾病，包括给予在本文中公开的化合物或者组合物。

晶体三肽环氧酮的给药

如本领域中所周知，取决于意欲治疗的病症和患者的年龄、状况和体重，如本文中所述制备的化合物可以以多种形式给药。例如，当化合物意欲通过口服给药时，可以将它们配制成片剂、胶囊、粒剂、粉剂或者糖浆剂；或者对于胃肠外给药，可以将它们配制成注射剂（静脉内、肌内或者皮下注射剂）、点滴输灌制剂或者栓剂。对于通过眼用粘膜路线应用，可以将它们配制成滴眼剂或者眼膏。这些制剂可以通过常规方法进行制备，并且，如果期望，可以将活性成分与任何常规的添加剂或者赋形剂混合，所述添加剂或者赋形剂比如粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫正剂、增溶剂、悬浮辅助剂、乳化剂、包覆剂、环糊精和/或缓冲液。虽然剂量将取决于患者的症状、年龄和体重以及意欲进行治疗或者预防的病症的严重程度、给药途径和药物的形式进行改变，但是，通常而言，对于成年人患者，推荐每日0.01～2000mg的化合物日剂量，并且该剂量可以以单一剂量或者分开的剂量给药。可以与载体联合以形成单一剂型的活性成分的量通常为产生治疗学效果的化合物的量。

在给定的患者中，在治疗学效力方面，产生最有效效果的精确给药时间和/或组合物的量将取决于特定化合物的活性、药物动力学和生物利用度以及患者的生理情况（包括年龄、性别、疾病类型和阶段、总的身体状态、对给定剂量的反应和药物类型）、给药途径等。然而，以上准则可以用作微调治疗的基础，例如，确定给药的最优时间和/或最佳量，这仅仅需要不超过监测对象和调节剂量和/或定时组成的常规试验。

在此使用的短语“药学上可接受的”是指在有效药物判断范围内、适于与人类或者动物组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或者其它问题或者并发症并同时具有合理益处/危险比例的那些配体、材料、组分和/或剂型。

在此使用的短语“药学上可接受的载体”是指药学上可接受的材料、组分或者介质，比如液体或者固体填料、稀释剂、赋形剂、溶剂或者封装材料。在与制剂中的其它成分相容并且对患者无害的意义上，各种载体都必须是“可接受的”。可以充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：（1）糖，比如乳糖、葡萄糖和蔗糖；（2）淀粉，比如玉米淀粉、马铃薯淀粉和取代或者未被取代的β-环糊精；（3）纤维素及其衍生物，比如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和纤维素乙酸酯；（4）粉末化的西黄蓍胶；（5）麦曲；（6）凝胶；（7）滑石；（8）赋形剂，比如可可脂和栓剂蜡；（9）油类，比如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；（10）二醇，比如丙二醇；（11）多元醇，比如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；（12）酯，比如油酸乙酯和月桂酸乙酯；（13）琼脂；（14）缓冲剂，比如氢氧化镁和氢氧化铝；（15）藻酸；（16）无热原水；（17）等渗盐水；（18）Ringer’s溶液；（19）乙醇；（20）磷酸盐缓冲液；和（21）其它用于药物制剂中的无毒性相容物质。在某些实施方案中，本发明的药物组合物为非致热性的，即，当给药至患者时不会诱发明显的温度升高。

术语“药学上可接受的盐”是指抑制剂的相对无毒的、无机和有机酸加成盐。这些盐可以在抑制剂的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过分别使其游离碱形式的纯化抑制剂与适宜的有机或者无机酸反应，并且分离由此形成的盐制备。代表性的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐、甲磺酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖酸盐、月桂基磺酸盐和氨基酸盐等。（参见，例如，Berge等人（1977）“PharmaceuticalSalts”，J.Pharm.Sci.66:1-19.）。

在其它情形中，可用于本发明方法中的抑制剂可以含有一个或者多个酸性官能团，并且因此能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。在这些情形中，术语“药学上可接受的盐”是指抑制剂的相对无毒的无机和有机碱加成盐。这些盐同样可以在抑制剂的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过分别使其游离酸形式的纯化抑制剂与适宜的碱（比如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或者碳酸氢盐）、与氨或者与药学上可接受的有机伯、仲或者叔胺反应制备。代表性的碱金属或者碱土金属盐包括锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等。可以用于形成碱加成盐的代表性的有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等（参见，例如，Berge等人，参见上述）。

润湿剂、乳化剂和润滑剂（比如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁）以及着色剂、分离剂、包覆剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂以及抗氧化剂同样可以存在于组合物中。

药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：（1）水溶性抗氧化剂，比如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等等；（2）油溶性抗氧化剂，比如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基苯甲醚（BHA）、丁基化羟基甲苯（BHT）、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等等；和（3）金属螯合剂，比如柠檬酸、乙二胺四乙酸（EDTA）、山梨醇、酒石酸、磷酸等等。

适于口服给药的制剂可以为胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂（使用芳香基体，通常为蔗糖和阿拉伯胶或者西黄蓍胶）、粉剂、粒剂或者在含水或者非水液体中的溶液或者悬浮液、或者为水包油或油包水液体乳剂、或者为酏剂或者糖浆剂、或者为软锭剂（利用惰性基体，比如凝胶和甘油或者蔗糖和阿拉伯胶）和/或为漱口药等形式，各自含有预定量的抑制剂作为活性成分。组合物还可以给药为弹丸、药糖剂或者糊剂的形式。

在用于口服给药的固体剂型（胶囊、片剂、丸剂、糖锭、粉剂、粒剂等等）中，活性成分可以与一种或者多种药学上可接受的载体混合，比如柠檬酸钠或者磷酸氢钙和/或任何以下物质：（1）填料或者膨胀剂，比如淀粉、环糊精、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；（2）粘合剂，比如，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、凝胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；（3）湿润剂，比如甘油；（4）崩解剂，比如琼脂、碳酸钙、马铃薯或者木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；（5）溶解阻滞剂，比如煤油；（6）吸收促进剂，比如季铵化合物；（7）润湿剂，比如，例如乙酰基醇和单硬脂酸甘油酯；（8）吸收剂，比如高岭土和皂土；（9）润滑剂，比如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和其混合物；和（10）着色剂。在胶囊、片剂和丸剂的情形中，药物组合物还可以包含缓冲剂。类似形式的固体组合物还可以在使用比如乳糖(lactose)或者乳(milk)糖的赋形剂以及高分子量聚乙二醇等的软和硬填充明胶胶囊中用作填料。在某些实施方案中，所述晶体三肽环氧酮以胶囊的形式被给药至哺乳动物。在另一实施方案中，该晶体三肽环氧酮为式（I）化合物。在更优选的实施方案中，晶体三肽环氧酮为式（II）化合物。

片剂可以通过压缩或者模塑进行制备，任选与一种或者多种助剂成分一起。压缩片剂可以利用粘合剂（例如，明胶或者羟丙基甲基纤维素）、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂（例如羟基乙酸淀粉钠或者交联羧甲基纤维素钠）、表面活性剂或者分散剂进行制备。模塑片剂可以通过在适宜的设备中模塑用惰性液体稀释剂湿润的粉化抑制剂的混合物进行制备。

片剂和其他固体剂型（比如糖锭、胶囊、丸剂和粒剂）可以任选进行刻痕或者配制有包衣和壳，比如肠溶衣以及其它药物配制领域熟知的包衣。还可以对它们进行配制以提供其中活性成分的缓慢释放或者控制释放，例如，利用不同比例的羟丙基甲基纤维素以提供期望的释放曲线、利用其它聚合物基体、微脂粒和/或微球。可以通过以下方式对它们进行灭菌，例如，通过将其滤过细菌保留过滤器，或者通过加入可以在使用之前即时溶于无菌水或者其他无菌可注射介质的无菌固体组合物形式的杀菌剂。这些组合物任选还可以含有遮光剂，并且可以为仅仅或者优选在胃肠道的特定部分、任选以延迟的方式释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物和石蜡。活性成分还可以为微胶囊密封的形式，适当时，具有一种或者多种上述赋形剂。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了活性成分之外，所述液体剂型可以含有本领域通常应用的惰性稀释剂，比如，例如为水或者其它溶剂、增溶剂和乳化剂，比如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油（特别是棉籽油、花生油、玉米油、芽孢油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油）、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物。

除了惰性稀释剂之外，口服组合物还可以包括助剂，比如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。

除了活性抑制剂之外，混悬剂中还可以含有助悬剂，比如，例如为乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化（metahydroxide）铝、皂土（bentonite）、琼脂、西黄蓍胶及其混合物。

用于直肠或者阴道给药的制剂可以以栓剂的形式存在，其可以通过以下方式进行制备：混合一种或者多种抑制剂与一种或者多种适宜的无刺激性的赋形剂或者载体，所述赋形剂或者载体包括，例如，可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或者水杨酸盐（酯），所述栓剂在室温下为固体但是在体温下为液体并且因此将在直肠或者阴道腔内熔化和释放活性剂。

适于阴道给药的制剂还包括适当时含有所述本领域已知的载体的阴道栓剂、棉塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫或者喷雾剂制剂。

用于局部或者透皮给药抑制剂的剂型包括粉剂、喷雾剂、膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液剂、贴片和吸入剂。活性组分可以在无菌条件下与药学上可接受的载体，以及与任何可能需要的防腐剂、缓冲液或者发射剂混合。

除了抑制剂之外，膏剂、糊剂、乳膏剂和凝胶剂还可以含有赋形剂，比如动物和植物脂肪、油、蜡、煤油、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、皂土、硅酸、滑石和氧化锌或者其混合物。

除了抑制剂之外，粉剂和喷雾剂还可以含有赋形剂，比如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或者这些物质的混合物。喷雾剂可以另外含有常规的发射剂，比如氯氟代烃类和挥发性的未被取代的烃类，比如丁烷和丙烷。

另外地，抑制剂可以通过气雾剂给药。这可以通过制备含有该组合物的含水气雾剂、脂质体制剂或者固体颗粒得到实现。可以使用非水（例如，氟代烃推进剂）悬浮液。优选声波喷雾器，因为它们使暴露试剂于剪切（可以导致化合物降解）的最少化。

一般地，含水气雾剂通过与常规的药学上可接受的载体和稳定剂一起配制试剂的含水溶液或者悬浮液进行制备。载体和稳定剂随着需要的具体组合物要求而变化，但是一般包括非离子型表面活性剂（Tweens、Pluronics、脱水山梨糖醇酯、卵磷脂、Cremophors）、药学上可接受的共溶剂（比如聚乙二醇）、无毒蛋白质（比如血清白蛋白）、油酸、氨基酸（比如甘氨酸）、缓冲液、盐、糖或者糖醇。气雾剂通常由等渗溶液制备。

透皮贴片具有附加的优点：提供抑制剂向身体的控制递送。所述剂型可以通过将试剂溶解或者分散在适当介质中得到生产。还可以使用吸收增强剂以增加抑制剂透过皮肤的流动。所述流动的速率可以通过或者提供速率控制膜片或者将抑制剂分散在聚合物基体或凝胶上进行控制。

适于胃肠外给药的本发明药物组合物包含与一种或者多种药学上可接受的无菌含水或者无水溶液、分散体、悬浮液或者乳剂，或者仅仅在使用之前可以重构成无菌可注射溶液或者分散体的无菌粉末联合使用的一种或者多种抑制剂，所述药物组合物可以含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂、使得制剂与目的受者的血液等渗的溶质、或者悬浮剂或者增稠剂。

可以用于本发明药物组合物中的适宜含水或者无水载体的实例包括水、乙醇、多元醇（比如甘油、丙二醇、聚乙二醇等）及其适宜的混合物、植物油（比如橄榄油）和可注射有机酯（比如油酸乙酯）。适当的流动性可以通过以下方式得到保持，例如，通过使用包衣材料（比如卵磷脂）、在分散体的情形中通过保持所需的粒径和通过使用表面活性剂。

这些组合物还可以含有助剂，比如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。对微生物作用的预防可以通过加入多种抗菌和抗真菌剂得到确保，例如帕拉贝、氯代丁醇和苯酚山梨酸等。还可以合意地向组合物中加入强壮-调节剂，比如糖和氯化钠等。此外，可注射药物形式的延长吸收可以通过包括延迟吸收的试剂而得以产生，比如包括单硬脂酸铝和明胶。

在一些情形中，为了延长药物的效果，放慢皮下或者肌肉注射的药物吸收是期望的。例如，胃肠外给药的药物形式的延迟吸收可以通过将药物溶解或者悬浮在油类载体中得到实现。

可注射存储形式可以通过在可生物降解的聚合物中成形抑制剂的微封装基体进行生产，所述聚合物比如聚交酯-聚乙交酯。取决于药物与聚合物的比例以及使用的具体聚合物的性质，药物释放的速度可以进行控制。其它可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。可注射存储制剂还可以通过将药物收集在与身体组织相容的脂质体或者微乳剂中而进行制备。

试剂的制剂可以口服、胃肠外、局部或者直肠给药。当然，它们以适于各自给药途径的形式提供。例如，它们以片剂或者胶囊形式给药，通过注射剂、吸入剂、洗眼液、膏剂、栓剂、灌输给药；通过洗剂或者膏剂局部给药；和通过栓剂直肠给药。优选口服给药。

在本文中使用的短语“胃肠外给药”和“胃肠外给药的”是指非肠内和局部给药的给药模式，通常通过注射给药，并且包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射以及输液。

在本文中使用的短语“系统给药”、“系统地给药”、“外周给药”和“外周地给药”是指并非将配体、药物或者其他材料直接给药入中枢神经系统，从而使得其进入患者系统和由此经过代谢作用以及其他类似的进程，例如，皮下给药。

这些抑制剂可以通过任何适宜的给药途径给药至人类和其他动物进行治疗，包括口服、经鼻（例如，通过喷雾剂）、直肠、阴道内、胃肠外、脑池内和局部（例如，通过粉剂、膏剂或者滴剂，包括向颊和舌下给药）给药。

无论选择的给药途径如何，都可以通过本领域技术人员已知的常规方法将可以以适宜的水合形式应用的抑制剂和/或本发明的药物组合物配制成药学上可接受的剂型。

本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以改变，以便对于特定患者、组合物和给药模式，获得有效实现期望的治疗学响应而对患者无毒的活性成分的量。

药学上可接受的混合物中所述公开化合物的浓度将依赖于数种因素进行改变，包括意欲给药的化合物的剂量、使用的化合物的药物动力学特性和给药途径。通常，对于胃肠外给药，可以提供本发明组合物的含水溶液，其中含有约0.1-10%w/v的在本文中公开的化合物以及其他物质。典型的剂量范围为每天约0.01～约50mg/kg体重，分为1-4次分开的剂量。各个分开的剂量可以含有相同或者不同的本发明化合物。该剂量为取决于数种因素的有效量，所述因素包括患者的总体健康状况以及选择的化合物的制剂和给药途径。

定义

术语“C_x-y烷基”是指取代或者未被取代的饱和烃基，包括在链上含有x到y个碳的直链烷基和支链烷基，包括卤代烷基，比如三氟甲基和2,2,2-三氟乙基，等等。C₀烷基表示在末端位置上时基团是氢，如果在内部则为一个键。术语“C_2-y烯基”和“C_2-y炔基”是指取代或者未被取代的不饱和脂族基团，其在长度和可能的取代上类似于如上所述的烷基，但是分别含有至少一个双键或者三键。

术语“烷氧基”是指具有连接在其上的氧的烷基。代表性的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基和叔丁氧基等等。“醚”是通过氧共价连接的两个烃。据此，使得烷基成为醚的烷基取代基为或者类似于烷氧基。

术语“C_1-6烷氧基烷基”是指由烷氧基取代的C_1-6烷基，从而形成醚。

在此使用的术语“C_1-6芳烷基”是指由芳基取代的C_1-6烷基。

术语“胺”和“氨基”是本领域认可的术语，并且是指未被取代和被取代的胺及其盐，例如，可以由以下通式表示的部分：

其中R⁹、R¹⁰和R¹⁰’各自独立地表示氢、烷基、烯基、-(CH₂)_m-R⁸，或者R⁹和R¹⁰与它们连接的N原子合起来形成在环结构中具有4～8个原子的杂环；R⁸表示芳基、环烷基、环烯基、杂环基或者多环基团；和m为零或者1～8的整数。在优选的实施方案中，R⁹或者R¹⁰中仅有一个可以为羰基，例如，R⁹、R¹⁰和氮合起来不形成酰亚胺。在更优选的实施方案中，R⁹和R¹⁰（和任选的R¹⁰’）各自独立地表示氢、烷基、烯基或者-(CH₂)_m-R⁸。在某些实施方案中，氨基是碱性的，意味着其质子化形式的pKa>7.00。

术语“酰胺”和“酰氨基”是本领域认可的氨基-取代的羰基，并且包括可以由以下通式表示的部分：

其中R⁹、R¹⁰如上所定义。酰胺的优选实施方案将不包括可能不稳定的酰亚胺。

在此使用的术语“芳基”包括5-、6-和7-元取代或者未被取代的单环芳香基团，其中各个环原子为碳。术语“芳基”还包括具有两个或者更多个环状环的多环系统，其中两个或者更多个碳原子为两个邻接环所共有，其中至少一个环为芳香环，例如，其它环状环可以为环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。芳基包括苯、萘、菲、苯酚和苯胺等。

在此使用的术语“碳环”和“碳环基”是指非芳香的取代环或者未被取代的环，其中各个环原子为碳。术语“碳环”和“碳环基”还包括具有两个或者更多个环状环的多环系统，其中两个或者更多个碳为两个邻接的环所共有，其中至少一个环为碳环，例如，其它环状环可以为环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。

术语“羰基”是本领域所认可的，并且包括可以由以下通式表示的部分：

其中X为一个键或者表示氧或硫，和R¹¹表示氢、烷基、烯基、-(CH₂)_m-R⁸或者药学上可接受的盐，R¹¹’表示氢、烷基、烯基或者-(CH₂)_m-R⁸，其中m和R⁸如上所定义。当X为氧和R¹¹或者R¹¹’不是氢时，该式表示“酯”。当X为氧，和R¹¹是氢时，该式表示“羧酸”。

术语“杂芳基”包括取代或者未被取代的芳香5-～7-元环状结构，更优选5-～6-元环，它们的环状结构包括1～4个杂原子。术语“杂芳基”还包括具有两个或者更多个环状环的多环系统，其中两个或者更多个碳原子为两个相邻的环所共有，其中至少一个环为杂芳香环，例如，其它环状环可以为环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。杂芳基包括，例如吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、异唑、唑、噻唑、三唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等等。

在此使用的术语“杂原子”是指不是碳和氢的任何元素的原子。优选杂原子为氮、氧、磷和硫。

术语“杂环基”或者“杂环基团”是指取代或者未被取代的非芳香3-～10-元环状结构，更优选3-～7-元环，它们的环状结构包括1～4个杂原子。术语“杂环基”或者“杂环基团”还包括具有两个或者更多个环状环的多环系统，其中两个或者更多个碳原子为两个邻接的环所共有，其中至少一个环为杂环基，例如，其它环状环可以为环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。杂环基包括，例如四氢呋喃、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、内酯和内酰胺等等。

在此使用的术语“C_1-6杂环烷基”是指被杂环基取代的C_1-6烷基。

术语“C_1-6羟基烷基”是指被羟基取代的C_1-6烷基。

在此使用的术语“抑制剂”用于描述阻滞或者降低酶的活性的化合物（例如，抑制标准荧光肽基质（比如suc-LLVY-AMC、Box-LLR-AMC和Z-LLE-AMC）的蛋白水解裂解，抑制20S蛋白酶体的各种催化活性）。抑制剂可以以竞争、无竞争或者非竞争性抑制的方式起作用。抑制剂可以可逆或者不可逆地结合，并且由此该术语包括为酶的自杀底物的化合物。抑制剂可以改性一个或者多个酶活性部位或者临近位置的位置，或者它可以使得酶上的其他地方发生构象变化。

在此使用的术语“口服可生物获得的”用于描述化合物以40mg/kg或者更低量、20mg/kg或者更低量或者甚至10mg/kg或者更低量给药至鼠，其中在口服给药一小时之后，在血液中，所述化合物对蛋白酶体CT-L活性显示出至少约50%、至少约75%或者甚至至少约90%的抑制作用。

在此使用的术语“肽”不仅包括具有标准α-取代基的标准酰胺键，还包括通常使用的拟肽、其它改性连接、非天然存在的侧链和侧链变型，如以下所详述。

术语“多环基”或者“多环”是指两个或者更多个环（例如，环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基），其中两个或者更多个碳为两个邻接的环所共有，例如，所述环为“稠环”。多环中的各个环可以被取代或者未被取代。

在此使用的术语“蛋白酶体”意图包括免疫蛋白酶体和结构蛋白酶体。

在此使用的术语“基本上纯的”是指纯度大于90%的结晶多晶型物，这意味着含有小于10%的任何其他化合物，包括相应的无定形化合物。优选结晶多晶型物的纯度大于95%，或者纯度甚至大于98%。

术语“预防”是本领域所认可的，并且当涉及状况使用时，比如局部复发（例如，疼痛）、比如癌症的疾病、比如心力衰竭的综合症集合体或者任何其他医疗状况，在本领域是被充分理解的，和包括，与未接受组合物的对象相比，给予能降低对象的医疗状况的频率或者延迟该医疗状况发作的组合物。由此，癌症的预防包括，例如，相对于未经处理的对照人群，降低接受预防性处理的患者人群中可检测的癌症生长的数量，和/或相对于未经处理的对照人群，延迟处理人群中可检测癌症生长的出现，例如，降低和/或延迟统计学和/或临床学上的显著量。感染的预防包括，例如，同未经处理的对照人群相比，降低处理人群中感染的诊断数量，和/或同未经处理的对照人群相比，延迟处理人群中感染症状的发作。疼痛的预防包括，例如，同未经处理的对照人群相比，降低处理人群中对象感受的痛觉程度或者延迟对象感受的痛觉。

术语“前药”包括，在生理条件下转化为治疗活性剂的化合物。制备前药的常规方法是引入在生理条件下发生水解以显示出所期望分子的选定部分。在其它实施方案中，前药通过宿主动物的酶活性进行转化。

术语“预防学或者治疗学”处理是本领域所认可的，包括给予主体一种或者多种目标组合物。如果在不期望的状况（例如，主体动物疾病或者其他不期望的状态）临床呈现之前给药，那么所述处理是预防性的（即，它保护主体防止发展不期望的状况），而如果在不期望的状况呈现之后给药，那么所述处理是治疗性的（即，用于削弱、改善或者稳定已经存在的不期望状况或者其副作用）。

术语“取代的”是指具有替换骨架的一个或者多个碳上的氢的取代基的部分。应当理解，“取代”或者“被取代”包括所述取代与被取代的原子和取代基所允许的化合价相对应和取代导致形成稳定化合物的隐含条件，例如，不能自发的进行转化，例如，通过重排、环化、消除等等。在此使用的术语“取代的”还预期包括有机化合物的所有可允许的取代基。在宽泛的方面中，可允许的取代基包括有机化合物的无环和环状、支链和非支链、碳环和杂环、芳香和非芳香取代基。对于适当的有机化合物，可允许的取代基可以为一个或者多个，并且可以相同或者不同。为了本发明的目的，比如氮的杂原子可以具有氢取代基和/或任何可允许的满足杂原子化合价的在此所述的有机化合物的取代基。取代基可以包括，例如卤素、羟基、羰基（比如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或者酰基）、硫代羰基（比如硫酯、硫代醋酸酯、或硫代甲酸酯）、烷氧基、磷酰基、磷酸盐、膦酸酯、亚膦酸酯、氨基、酰氨基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸盐、磺酸盐、氨磺酰、磺酰胺基、磺酰基、杂环基、芳烷基或者芳基或者杂芳基部分。本领域熟练技术人员应当理解，如果适当，在烃链上取代的部分自身可以被取代。

对于目标治疗方法，化合物的“治疗有效量”是指，当作为期望的剂量给药方案的部分给药（至哺乳动物，优选人类）时，根据要进行治疗的病症或者状况的临床可接受标准或者美容目的（例如，适于任何医疗处理的合理益处/风险比例），减轻症状、改善状况或者减缓疾病状况发作的制剂中化合物的量。

术语“硫醚”是指具有连接在其上的硫部分的如上所定义的烷基。在优选的实施方案中，“硫醚”由-S-烷基表示。代表性的硫醚基团包括甲硫基、乙硫基等等。

在此使用的术语“治疗”包括以改善或者稳定对象状况的方式逆转、降低或者阻止症状、临床征象和潜在的（underlying）病症病理学。

实施例

实施例1

化合物1的合成

（A）的合成

在30分钟时间内，向0℃的N-Boc丝氨酸（甲基醚）（43.8g，200mmol）、三乙胺（26.5g，260mmol）和4-(二甲基氨基)吡啶的二氯甲烷（1.2L）溶液中加入氯甲酸苄基酯（41g，240mmol）的二氯甲烷（250mL）溶液。在相同温度下，将所得混合物另外搅拌3小时。将饱和碳酸氢钠水溶液（200mL）加入其中并且将有机层分离，残余的混合物用二氯甲烷提取（2x400mL）。合并的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液（200mL）和盐水（200mL）洗涤、用硫酸钠干燥并且将其滤过Celite-545。在减压下将溶剂除去，和将所得残余物通过快速色谱法（硅胶，己烷和乙酸乙酯）进行纯化。将化合物（A）（54g）分离，并且通过LC/MS进行表征（LRMS(MH)m/z:310.16）。

（B）的合成

在10分钟时间内，向0℃的化合物（A）（54g）的二氯甲烷（200mL）溶液中加入三氟乙酸（200mL），并且在相同温度下将所得混合物另外搅拌3小时。在减压下将溶剂除去，和将所得残余物置于高真空下过夜，给出化合物（B）的TFA盐，通过LC/MS对其进行表征（LRMS(MH)m/z:210.11）。

（C）的合成

在10分钟时间内，向0℃的化合物（B）（43.8g，200mmol）、N-Boc丝氨酸（甲基醚）（36.7g，167mmol）、HOBT（27g，200mmol）和HBTU（71.4g，200mmol）的四氢呋喃（1.2L）溶液中加入N,N-二乙基异丙基胺（75g，600mmol）的四氢呋喃（250mL）溶液，所得混合物的pH为～8。在室温下将混合物搅拌另外5小时。在室温下，在减压下将大多数溶剂除去，用饱和碳酸氢钠水溶液（400mL）稀释。然后用乙酸乙酯提取（3x400mL），用碳酸氢钠（100mL）和盐水（100mL）洗涤。合并的有机层用硫酸钠干燥，并且将其滤过Celite-545。在减压下将溶剂除去，和所得残余物通过快速色谱法（硅胶，己烷和乙酸乙酯）进行纯化。将化合物（C）（65g）分离，并且通过LC/MS进行表征（LRMS(MH)m/z:411.21）。

（D）的合成

在5分钟时间内，向0℃的化合物（C）（18g）的二氯甲烷（100mL）溶液中加入三氟乙酸（80mL），并且在相同温度下将所得混合物另外搅拌3小时。在减压下将溶剂除去，和将所得残余物置于高真空下过夜，给出中间体（D）的TFA盐，通过LC/MS对其进行表征（LRMS(MH)m/z:311.15）。

（E）的合成

在10分钟时间内，向0℃的2-甲基-噻唑-5-甲酸乙酯（15g，88mmol）的四氢呋喃（50mL）溶液中加入氢氧化钠水溶液（5N，50mL），并且在室温下将所得溶液另外搅拌2小时。然后用盐酸（2N）将其酸化至pH=1，用四氢呋喃提取（3x100mL）。合并的有机层用盐水（30mL）洗涤并且用硫酸钠干燥。在减压下将大多数溶剂除去并且将所得残余物冻干，从而提供化合物（E）（14g）。

（F）的合成

在5分钟时间内，向0℃的化合物（D）（41mmol）和2-甲基-噻唑-5-羧酸（E）（6.0g，42mmol）、HOBT（7.9g，50mmol）和HBTU（18.0g，50mmol）的四氢呋喃（800mL）溶液中加入N,N-二乙基异丙基胺（～50g）的四氢呋喃（200mL）溶液，直至其pH达到大约8.5。在相同的温度下将所得混合物搅拌过夜。然后，用饱和碳酸氢钠水溶液（200mL）将其猝灭，并且在减压下将大多数溶剂除去。残余的混合物用乙酸乙酯提取（3x400mL）。合并的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液（200mL）和盐水（100mL）洗涤、用硫酸钠干燥并且将其滤过Celite-545。在减压下将溶剂除去，和所得残余物通过快速色谱法（硅胶，含有2%甲醇的乙酸乙酯）进行纯化。将化合物（F）（17.1g）分离，并且通过LC/MS进行表征（LRMS(MH)m/z:436.15）。

（G）的合成

向化合物（F）（17.1g，95mmol）的甲醇（300mL）溶液中加入10%Pd/C（3g）。在1大气压氢气下，将所得混合物搅拌48小时。将混合物滤过Celite545，和所得滤饼用甲醇（～200mL）洗涤。有机层在减压下进行浓缩，并且将其置于高真空下，从而得到化合物（G），通过LC/MS对其进行表征（LRMS(MH)m/z:346.1）。

（H）的合成

N-Boc苯丙氨酸-ketoepoxide（140mg，0.46mmol）用DCM（2mL）稀释，并且将其冷却至0℃。向该溶液中加入三氟乙酸（6mL）。将冷却浴除去并且将反应搅拌1小时，此时TLC表明原料已经完全消耗。所得溶液在减压下进行浓缩并且将其置于高真空下，从而得到化合物（H）的TFA盐。

化合物1的合成

向0℃的上述化合物（H）（131mg，0.38mmol）和（J）（0.46mmol）、HOBT（75mg，0.48mmol）和HBTU（171mg，0.48mmol）的四氢呋喃（20mL）和N,N-二甲基甲酰胺（10mL）溶液中滴加加入N,N-二乙基异丙基胺（1mL）。在相同温下将混合物另外搅拌5小时。然后，用饱和碳酸氢钠水溶液（20mL）将其猝灭，并且在减压下将大多数溶剂除去。然后，残余的混合物用乙酸乙酯提取（3x40mL）。合并的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液（20mL）和盐水（10mL）洗涤、用硫酸钠干燥并且将其滤过Celite-545。在减压下将溶剂除去和残余物通过HPLC（0.02M乙酸铵水溶液和乙腈（66/34））进行纯化，从而提供化合物1（92mg），将其冻干并且通过LC/MS进行表征（LRMS(MH)m/z:533.2）。

实施例2

将无定形化合物1（50mg）溶于乙腈（1mL）中，然后将去离子水（2mL）加入其中，通过在约1-2周的时间内缓慢蒸发1mL使溶液达到过饱和。过滤所得晶体，用1mL1:2乙腈-水洗涤，并且在真空下干燥12小时，从而提供化合物1的结晶多晶型物（25mg），熔点148℃。样品的特征DSC曲线示于图1中，在TAInstruments差示扫描量热计2920记录，升温速率为10℃/分钟。

实施例3

将无定形化合物1（611mg）溶于四氢呋喃（5mL）中，随后加入己烷（5mL）和所得溶液用实施例2中制备的结晶多晶型化合物1进行种晶，并且通过在约17小时的时间内缓慢蒸除5mL使溶液达到过饱和。过滤所得晶体，用1mL1:1四氢呋喃-己烷洗涤，并且在真空下干燥12小时，从而提供化合物1的结晶多晶型物（150mg），熔点147℃。

实施例4

将无定形化合物1（176mg）溶于四氢呋喃（5mL）中，然后将甲苯（25mL）加入其中。所得溶液用实施例2中制备的结晶多晶型化合物1进行种晶，并且通过在约2天时间内缓慢蒸除20mL使溶液达到过饱和。过滤所得晶体，用15mL甲苯洗涤，并且在真空下干燥12小时，从而提供化合物1的结晶多晶型物（88mg），熔点149℃。

实施例5

将无定形化合物1（312mg）溶于甲苯（50mL）中，加热至约100℃以达到完全溶解，然后将己烷（50mL）加入其中，和所得溶液用实施例2制备的结晶多晶型化合物1进行种晶，并且通过在约2天的时间内缓慢蒸除60mL使溶液达到过饱和。过滤所得晶体，用10mL甲苯洗涤，并且在真空下干燥12小时，从而提供化合物1的结晶多晶型物（156mg），熔点149℃。

实施例6

将无定形化合物1（1.4g）溶于甲苯（25mL）中，加热至约50℃以完全溶解，然后通过冷却至22℃达到过饱和，并且使化合物结晶12小时。过滤所得晶体，用5mL己烷洗涤，并且在真空下干燥12小时，从而提供化合物1的结晶多晶型物（0.94g），熔点149℃。

实施例7

化合物1的合成

（H）的合成

在惰性气氛下，在3-颈圆底烧瓶中，将N-Boc苯丙氨酸-酮环氧化物（ketoepoxide）（1.0当量）溶于DCM（3L/kgN-Boc苯丙氨酸-酮环氧化物（ketoepoxide））中，并且在冰浴中对溶液进行冷却。然后，以保持内部温度低于10℃的速率加入TFA（5.0当量）。然后，将反应混合物升温至大约20℃并且搅拌1～3小时。随后，将MTBE（3.6L/kgN-Boc苯丙氨酸-ketoepoxide）加入到反应混合物中，同时保持混合物温度低于25℃。然后，将庚烷（26.4L/kgN-Boc苯丙氨酸-ketoepoxide）加入其中，将反应冷却至-5～0℃下保持2～3小时，从而使得化合物（H）结晶。过滤白色固体并且用庚烷（3L/kgN-Boc苯丙氨酸-ketoepoxide）进行冲洗。然后，在22℃下，将白色固体置于真空下12小时。获得的产率为86%，HPLC纯度99.4%。

化合物1的合成

在惰性气氛下，将化合物（H）（1.2当量）、化合物（G）（1.0当量）、HBTU（1.2当量）、HOBT（1.2当量）和N-甲基吡咯烷酮（8L/kg化合物（G））加入到干燥的烧瓶中，并且在23℃下对混合物进行搅拌从而达到完全溶解。然后，将反应冷却至-5-0℃之间，并且在15分钟时间内将二异丙基乙胺（2.1当量）加入其中，同时保持内部反应温度低于0℃。在0℃下将反应混合物搅拌12小时。

通过将反应混合物倾倒在8%碳酸氢钠（40L/kg化合物（G））上沉淀析出粗化合物1，在20-25℃将粗化合物1的悬浮液搅拌12小时，随后在0-5℃下将其搅拌1小时。过滤白色固体并且用水（5L/kg化合物（G））进行冲洗。然后，在20-25℃下，使所得白色固体再次在水（15L/kg）中成浆，用时3小时，过滤并且用水（5L/kg化合物（G））和乙酸异丙酯（2x2L/kg化合物（G））冲洗。在真空中，在45℃下将所得白色固体干燥至恒重。粗化合物1的产率为65%，HPLC纯度为97.2%。

通过在85℃下搅拌和加热，使粗化合物1完全溶解在乙酸异丙酯（20L/kg粗化合物1）中。然后，对溶液进行热过滤以除去任何颗粒物质，并且将溶液再次加热至85℃以提供澄清溶液。以每小时10℃的速率将澄清溶液冷却至65℃，然后加入种晶。以每小时10℃的速率使溶液冷却至20℃，此时发生大量的化合物1的结晶。在20℃下将悬浮液搅拌6小时，随后在0-5℃下搅拌至少2小时，并且进行过滤和用乙酸异丙酯冲洗（1L/kg粗化合物1）。在真空中，在45℃下将所得纯化的化合物1干燥至少24小时，直至恒重。化合物1的产率为87%，HPLC纯度为97.2%。

实施例8

化合物1的合成

在惰性气氛下，将化合物（H）（1.1当量）、化合物（G）（1.0当量）、HBTU（1.5当量）、HOBT（1.5当量）和DMF（8L/kg化合物（G））加入到干燥的烧瓶中，并且在23℃下对混合物进行搅拌，从而达到完全溶解。然后，将反应冷却至-5-0℃，并且在15分钟时间内将二异丙基乙胺（2.1当量）加入其中，同时保持内部反应温度低于0℃。然后，在0℃下将反应混合物搅拌3小时。

通过加入预冷藏的饱和碳酸氢钠（94L/kg化合物（G））将反应混合物猝灭，同时保持内部温度低于10℃。然后，将所得物质转入分液漏斗中。所得混合物用乙酸乙酯（24L/kg化合物（G））提取，和所得有机层用饱和碳酸氢钠（12L/kg化合物（G））和饱和氯化钠（12L/kg化合物（G））洗涤。

在小于30℃的浴温中，在减压下将有机层浓缩至15L/kg化合物（G），随后使其与乙酸异丙酯（2x24L/kgPR-022）共蒸馏。用乙酸异丙酯将最后体积调节至82L/kg化合物（G），然后加热至60℃，从而获得澄清溶液。使澄清的溶液混合物冷却至50℃，然后加入种晶。使溶液冷却至20℃，此时已经发生大量的化合物1结晶。在0℃下将悬浮液搅拌12小时，然后进行过滤和用乙酸异丙酯（2L/kg化合物1）冲洗。在真空中，在20℃下将化合物1干燥12小时，直至恒重。化合物1的产率为48%，HPLC纯度为97.4%。

等价物

本领域熟练技术人员可以认可或者至多利用常规实验就能够确定本文所描述的化合物及其应用方法的多种等价方案。所述等价方案被认为在本发明的范围之内并且包括在以下权利要求中。

所有以上引用的参考文献和出版物都在此引入作为参考。

Claims

1.具有式（II）结构的晶体化合物

(II)

其中所述晶体化合物具有以下2θ值：8.94;9.39;9.76;10.60;11.09;12.74;15.27;17.74;18.96;20.58;20.88;21.58;21.78;22.25;22.80;24.25;24.66;26.04;26.44;28.32;28.96;29.65;30.22;30.46;30.78;32.17;33.65;34.49;35.08;35.33;37.85;和38.48。

2.权利要求1的晶体化合物，其具有如图1所示的DSC温谱图。

3.权利要求1的晶体化合物，其具有140-155℃的熔点。

4.权利要求3的晶体化合物，其具有145-150℃的熔点。

5.权利要求1的晶体化合物，其具有如图2所示的XRPD图案。

6.药物组合物，其包含(a)药学上可接受的载体和(b)权利要求1-5任一项的晶体化合物。

7.权利要求6的药物组合物，其剂量范围为按给予了所述组合物的对象的重量计0.01mg/kg～50mg/kg。

8.权利要求6或7的药物组合物，其中所述组合物是可口服给药的组合物。

9.权利要求8的药物组合物，其中所述可口服给药的组合物选自片剂、胶囊、粒剂、粉剂和糖浆剂。

10.权利要求6、7和9任一项的药物组合物，其中所述晶体化合物表现出特征为在147℃的吸热峰的差示扫描量热法（DSC）温谱图。

11.权利要求6的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

12.权利要求11的用途，其中所述癌症是膀胱、血液、骨骼、大脑、乳腺、宫颈、胸腔、结肠、子宫内膜、食道、眼睛、头部、肾、肝、肺、淋巴结、口、颈、卵巢、胰腺、前列腺、直肠、肾、皮肤、胃、睾丸、喉管或子宫的癌症。

13.权利要求6的药物组合物在制备用于治疗血癌、小淋巴细胞性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤或多发性骨髓瘤的药物中的用途。

14.权利要求6的药物组合物在制备用于治疗血癌的药物中的用途。

15.权利要求14的用途，其中所述血癌是急性淋巴细胞性白血病（ALL）、急性髓性白血病（AML）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、慢性粒细胞性白血病（CML）或毛细胞白血病。

16.权利要求6的药物组合物在制备用于治疗多发性骨髓瘤的药物中的用途。

17.权利要求6的药物组合物在制备用于治疗华氏巨球蛋白血症的药物中的用途。

18.权利要求6的药物组合物在制备用于治疗选自血液癌症、华氏巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、弥散性B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、胰腺癌和肺癌的癌症的药物中的用途。

19.权利要求6的药物组合物，其中所述晶体化合物式（II）在热重分析中在25℃～125℃的温度范围内表现出0.0～0.3%的重量减轻。

20.权利要求6、10或19的药物组合物在制备用于治疗骨髓增生性疾病的药物中的用途。

21.权利要求20的用途，其中所述骨髓增生性疾病是骨髓增生异常综合征。

22.权利要求6、10或19的药物组合物在制备用于治疗造血系统恶性肿瘤的药物中的用途。

23.权利要求6或7的药物组合物，其中所述组合物是可胃肠外给药的组合物。

24.权利要求9的药物组合物，其中所述可口服给药的组合物是片剂。

25.权利要求9的药物组合物，其中所述可口服给药的组合物是胶囊。

26.权利要求9的药物组合物，其中所述可口服给药的组合物是粒剂。

27.权利要求9的药物组合物，其中所述可口服给药的组合物是粉剂。