CN102417540A - 一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂hm-3及其应用 - Google Patents

一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂hm-3及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN102417540A
CN102417540A CN2011103705299A CN201110370529A CN102417540A CN 102417540 A CN102417540 A CN 102417540A CN 2011103705299 A CN2011103705299 A CN 2011103705299A CN 201110370529 A CN201110370529 A CN 201110370529A CN 102417540 A CN102417540 A CN 102417540A
Authority
CN
China
Prior art keywords
polypeptide
group
gly
tumor
mpeg
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2011103705299A
Other languages
English (en)
Inventor
徐寒梅
常海民
康志安
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Pharmaceutical University
Original Assignee
China Pharmaceutical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Pharmaceutical University filed Critical China Pharmaceutical University
Priority to CN2011103705299A priority Critical patent/CN102417540A/zh
Publication of CN102417540A publication Critical patent/CN102417540A/zh
Priority to US14/359,462 priority patent/US20140329759A1/en
Priority to KR1020147016557A priority patent/KR20140096373A/ko
Priority to IN4482CHN2014 priority patent/IN2014CN04482A/en
Priority to PCT/CN2012/084788 priority patent/WO2013075600A1/zh
Priority to EP12851929.5A priority patent/EP2784093B1/en
Priority to KR1020197020874A priority patent/KR102106485B1/ko
Priority to AU2012343020A priority patent/AU2012343020B2/en
Priority to US15/332,539 priority patent/US20170100489A1/en
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
    • C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
    • C07K17/04—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel, hollow fibre
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
    • C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
    • C07K17/08—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制肿瘤血管生成、具有整合素亲和性和结合能力的一种整合素阻断剂HM-3及其应用，此阻断剂是一种多肽，此多肽经过了聚乙二醇修饰，该修饰后的整合素阻断剂多肽可用于实体肿瘤的治疗。该整合素阻断剂在制备治疗肿瘤药物中的应用，其中所述的整合素阻断剂的序列和结构为mPEG-SC20k-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp，说明本发明设计的整合素阻断剂多肽科学、合理、可行有效，能作为制备治疗人类实体肿瘤的治疗药物，其极大拓展了该整合素阻断剂的治疗谱，为将来药物开发提供了新的思路和前景，具有显著的社会价值和市场价值。

Description

一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂HM-3及其应用
技术领域
本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制肿瘤血管生成、具有整合素亲和性和结合能力的一种整合素阻断剂，此阻断剂是一种聚乙二醇修饰多肽，该整合素阻断剂聚乙二醇修饰多肽可用于实体肿瘤的治疗。
背景技术
研究表明，实体瘤的生长依赖于新生血管生成，新生血管不仅可以提供肿瘤所需要的营养和氧气，排泄代谢产物，而且是远处转移的途径。因此，阻断新生血管形成可能成为阻止肿瘤生长和转移的手段，从而激发了对促血管生成分子和抗血管生成分子的广泛研究。
相比传统肿瘤治药物疗，肿瘤血管生成抑制剂最大优点在于：①选择性作用于血管内皮细胞，全身毒副作用小；②靶细胞为血管内皮细胞，药物易从血液中到达与之接触发生作用；③血管内皮细胞无或少突变，不易产生耐药性，可长期用药；④可与放化疗方法联合应用并减轻后者的毒副反应。
目前，国际上开发出的整合素阻断剂已进入II期临床。而我国尚未有相似或同类产品进入市场，非常有必要开发我国自主知识产权的此类药物。ZL2005100403785高效抑制血管生成多肽及其制备方法和应用，介绍几种整合素抑制剂，其一为整合素阻断剂多肽序列为：Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp，该序列包含了整合素配体序列(Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp)和新生血管抑制序列(Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro)，其中整合素配体序列中含有RGD序列(Arg-Gly-Asp)，整合素阻断剂多肽序列可以有效地结合于肿瘤特异性表达的整合素亚型，并且该序列中含有新生血管抑制序列，从而抑制肿瘤新生血管形成，进而达到抑制肿瘤生长和转移的效果。前期研究表明其作用靶点为整合素αvβ3和α5β1，但主要的结合靶点仍为整合素αvβ3。该多肽经反复体内外活性评价证实具有较好的抑瘤效果，能够显著抑制内皮细胞迁移、抑制肿瘤新生血管生成，从而抑制肿瘤的生长。然而上述多肽的半衰期短，拟用临床人的给药是每天静脉滴注，这给患者带来了一定的痛苦。
文献报道中，对分子结构进行修饰或改造是解决半衰期较短、需连续给药问题的常用方法，其中以化学修饰应用最为广泛，常用的化学修饰剂有聚乙二醇(polye thyleneglycol，PEG)、葡聚糖、聚氨基酸、聚酸酐等。PEG具有无毒、无免疫原性、水溶性好的特点，被美国食品与药物管理局(FDA)认可作为药品的辅助原料和修饰剂。蛋白质类药物经PEG修饰后，分子量增加，肾小球的滤过率减少，PEG的屏障作用保护了蛋白质不易被蛋白水解酶水解，同时减少了中和抗体的产生，这些均有助于蛋白质类药物生物半衰期的延长。目前已有多种PEG修饰的蛋白质类药物上市销售。但PEG修饰同时也可能影响蛋白质的生物学活性，其影响大小与修饰剂、修饰条件及蛋白质本身的性质有关。对于具体的蛋白质，其最佳修饰需通过制备PEG修饰的蛋白质及生物活性研究来决定。合成小分子多肽的PEG修饰研究起步较晚，但已引起不少研究者的关注。
发明内容
发明目的
本发明针对mPEG-SC-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp做了进一步研究，发现其在降低给药频率的情况下对多种肿瘤有治疗作用。
技术方案
一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂HM-3，其中整合素阻断剂的序列为mPEG-SC-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp，其特征在于所述的mPEG-SC的分子量范围为500-20000。
作为一种优化方式所述的一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂HM-3，其特征在于所述的mPEG-SC(单甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺碳酸酯)的分子量为20000。
一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂HM-3在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于所述的肿瘤为起源于人的胃部、皮肤、头颈部、甲状腺、胰腺、肺脏、食管、乳腺、肾脏、胆囊、结肠/直肠、卵巢、子宫、子宫颈、前列腺、膀胱、睾丸的原发/继发的癌或肉瘤。
有益效果
1、为了延长多肽Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp的半衰期，我们采用不同分子量的聚乙二醇(PEG)对此多肽进行了修饰，发现mPEG-SC20k-HM-3具有延长了HM-3半衰期，但又不影响其体内外活性的特点。一个多肽的修饰产物属于一个新型分子，往往与修饰前的分子在活性上产生不同的效果。本发明针对上述整合素阻断剂mPEG-SC20k-HM-3对多种肿瘤有治疗作用进行了大量的体内外活性研究，发现给药频率降低的情况下，mPEG-SC20k-HM-3对抑制多种肿瘤生长保持了很好的活性，拓展了其社会价值和经济价值。
2、研究发现，序列Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro具有抑制肿瘤血管生成的作用。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列是整合素的一个重要配体，因此，含有RGD序列的多肽Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp也能够特异性的识别整合素。本发明的整合素阻断剂多肽是在具有抑制血管生成作用的序列Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro的C端连接上与整合素家族具有亲和性和结合能力的含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)的Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp序列，构建了一种与整合素有亲和性和结合能力的多肽。同时，在该整合素阻断剂多肽的N端特别优化进行了聚乙二醇修饰，最终优化的序列为：mPEG-SC20k-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp，其含有PEG和18个氨基酸的多肽，分子中RGD序列具有整合素亲和性和结合能力，研究表明其起作用靶点为整合素αvβ3和α5β1结合，但主要的结合靶点仍为整合素αvβ3，并且该序列中含有新生血管抑制序列，从而抑制肿瘤新生血管形成，进而达到抑制肿瘤生长和转移的效果。聚乙二醇(PEG)是一类具有独特理化性质的大分子聚合物，它具有良好的生物相容性，无毒、无抗原性。蛋白质或多肽药物经PEG修饰后，其主要的生物学功能保持不变，并且经PEG修饰能赋予蛋白质和多肽类药物多种优良性能：(1)增加稳定性，延长血浆半衰期；(2)降低免疫原性和抗原性；(3)降低毒副作用；(4)减小被水解酶降解的可能性、降低被肾脏清除的速率；(5)改善药物体内分布和动力学行为等。
聚乙二醇(mPEG-SC20k)修饰后多肽的靶点不变，延长多肽分子的体内半衰期、清除率低、降低了免疫原性和抗原性，并且抗肿瘤活性保持不变，但是降低了给药频率，修饰后由原来每天给药一次，变为每2-3天给药一次。
发明人经过大量实验获知该整合素阻断剂体内实验具有明显的抗肿瘤效果，并且副作用少，用量少成本低。说明本发明设计的聚乙二醇修饰的整合素阻断剂多肽科学、合理、可行有效，能作为制备治疗人类实体肿瘤的治疗药物，为将来药物开发提供了新的思路和前景，具有显著的社会价值和市场价值。
修饰前多肽HM-3的半衰期为0.46h，经mPEG-SC20k修饰后的半衰期为20.13h。如下表：
表1mPEG-SC20k-HM-3和HM-3的半衰期比较(t1/2β为半衰期)
Figure BSA00000616625500031
附图说明
附图1流式细胞实验检测整合素阻断剂多肽与靶点的结合，其中a为第一次实验-，b为重复实验；
附图2整合素阻断剂多肽与HM-3免疫原性比较；
附图3整合素阻断剂多肽对人食管癌Ec109裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图4整合素阻断剂多肽对人鼻咽癌CNE裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图5整合素阻断剂多肽对人甲状腺癌SW-579裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图6整合素阻断剂多肽对人胃癌MGC803裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图7整合素阻断剂多肽对人胰腺癌SW-1990裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图8整合素阻断剂多肽对人肺癌H460裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图9整合素阻断剂多肽对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图10整合素阻断剂多肽对人胆囊癌GBC-SD裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图11整合素阻断剂多肽对人肾癌A498裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图12整合素阻断剂多肽对人结肠癌HT-29裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图13整合素阻断剂多肽对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图14整合素阻断剂多肽对人子宫内膜癌HHUA裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图15整合素阻断剂多肽对人宫颈癌HeLa裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图16整合素阻断剂多肽对人宫颈癌HeLa裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用剖取的肿瘤实物图；
附图17整合素阻断剂多肽对人前列腺癌DU-145裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图18整合素阻断剂多肽对人膀胱癌HT1376裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图19整合素阻断剂多肽对人膀胱癌HT1376裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用剖取的肿瘤实物图；
附图20整合素阻断剂多肽对人睾丸癌5637裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
附图21整合素阻断剂多肽对肉瘤HT-1080裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；
具体实施方式
实施例1整合素阻断剂HM-3
Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp的固相合成方法，其以Fmoc-Ile-wang resin或Fmoc-Ile-CTC resin为起始原料，然后用保护氨基酸依次接二肽至十八肽，接肽工作完成后充分洗涤，然后切肽、后处理即得HM-3粗品。将粗品进行纯化，首先溶解，然后用制备型高效液相经过两次纯化，最后浓缩冻干得到纯品。
具体步骤如下：
一、合成：
称取Fmoc-Ile-Wang resin14.7g，倒入1L的玻璃砂芯反应柱中，加入CH2Cl2147ml使树脂充分膨胀。
脱帽：加入六氢吡啶/DMF的脱帽液25ml，密封后放入振荡器中反应5分钟，温度控制在室温，5分钟后将脱帽液抽干，中间用DMF洗涤一次，然后再加入一次20％的脱帽液25ml反应15分钟；
洗涤：将脱帽液抽干，用DMF洗涤树脂6次，抽干，取20颗树脂在小试管内，加入验色剂，在115℃加热3分钟。
缩合：称取保护氨基酸和HOBt 2.025g，溶于15ml DMF和2.33ml DIC，然后倒入反应釜中反应1.5左右小时，温度控制在34℃左右。
洗涤：将反应液抽干，用DMF洗涤树脂3次，抽干，取10-20颗树脂在小试管内，加入验色剂，在115℃加热3-5分钟。
切肽：把抽干的树脂装入500mL的圆底烧瓶中，加入300mL90％的切割液(按体积比比计三氟乙酸∶苯酚∶苯甲硫醚∶EDT＝90∶3∶3∶2∶2)，密封反应2小时，用砂芯漏斗将树脂与多肽分离。
后处理：先加无水乙醚到切割液中将多肽析出，然后离心，把清液倒掉，然后再用无水乙醚洗涤多肽6次，抽干得多肽粗品9.5g。
二、纯化：
溶解：精密称取ID-18粗品，加入适当的纯化水配置成10g/l的溶液，超声搅拌至无颗粒状澄清溶液。
过滤：将ID-18的溶液用沙芯过滤器0.45um的混合滤膜过滤.
制备：
一次纯化
平衡：制备柱用5％乙腈+95％三氟乙酸水溶液，流速80ml/min冲洗10min。
上样：用输液泵上样，流速80ml/min，并采集基线，收取在紫外波长220nm吸收大于200mv的溶液，检测是否有样品冲出。
洗脱：
洗脱梯度：
Figure BSA00000616625500061
收取在紫外波长220nm吸收大于200mv的溶液，检测纯度大于95％的合并作为峰顶，待做二次分离纯化。
二次纯化
平衡：制备柱用5％乙腈+95％醋酸水溶液，流速80ml/min冲洗10min
上样：将一次收到的峰顶旋转蒸发掉有机溶剂后用输液泵上样，流速80ml/min，并采集基线，收取在紫外波长220nm吸收大于200mv的溶液，检测是否有样品冲出。
洗脱：
洗脱梯度：
收取在紫外波长220nm吸收大于200mv的溶液，通过检测纯度大于99％的作为合格。浓缩、过滤、冻干：将合格溶液用旋转蒸发仪37℃减压浓缩，除去残留溶剂和注射用水。最后用0.22um滤膜过滤，滤液装入冻干盘中，用冷冻干燥机进行冷冻干燥，得纯品。
实施例2聚乙二醇修饰多肽的步骤
mPEG-SC20K与HM-3的反应
分别称取2gmPEG-SC20K和106.24mgHM-3(摩尔比为1.5∶1)置于40m1-100ml配好的pH 5-8.5的PBS缓冲溶液中，在4℃条件下过夜，使其进行反应。PEG-SC500-20000都可按实施例2进行连接反应合成修饰多肽。
实施例3分离纯化步骤
一、分离
对反应后的样品应用半制备型高效液相(HPLC，BIO-RAD)进行纯化，纯化条件为：
流动相：ACN(+0.1％TFA)、H2O(+0.1％TFA)；ACN线性梯度：40％-95％；
流速：2ml/min；运行时间：12min；
上样量：1.0ml；检测波长：220nm。
半制备色谱柱：YMC，250mm×10mm(5μm填料)。
在目的峰出峰过程中，用离心管收集产物。
二、纯化
将经过HPLC收集的产物首先于-70℃低温冰箱预冻过夜，之后于提前遇冷的冷冻干燥机冻干，直到目测全为白色粉末为止(30h左右)。收获冻干产物，称量并记录产物重量后于-20℃冰箱保存，并进行鉴定。
1.产物的纯度分析
将冻干后的产物，通过分析型高效液相色谱分析纯度，分析条件为：
流动相：ACN(+0.1％TFA)、H2O(+0.1％TFA)；ACN线性梯度：10％-100％；
流速：1ml/min；运行时间：15min；
上样量：20μl；检测波长：220nm。
分析型色谱柱：北京创新通恒，250mm×4.6mm(5μm填料)。
2.修饰产物SDS-PAGE分析
基本操作参考《分子克隆(第二版)》。浓缩胶浓度为5％，分离胶浓度为10％，浓缩电压80伏，分离电压120伏。电泳结束后样品条带先进行BaI2.染色，对含有PEG的部分进行染色；marker用考马斯亮兰R250对蛋白部分染色。染色完毕放入脱色液中至本底透明后扫描分析。
下面的实施例以mPEG20000修饰的整合素阻断剂多肽(mPEG-SC20k-HM-3)为例，进行说明。实施例中所说的整合素阻断剂多肽即是mPEG20000修饰的整合素阻断剂多肽
实施例4
mPEG-SC20k-HM-3在大鼠体内药代动力学研究
SD大鼠，随机分为6组，雌雄各半。取3组尾静脉分别给予整合素阻断剂多肽高剂量52mg/kg(折合HM-34.2mg/kg)，中剂量26mg/kg(折合HM-32.1mg/kg)，低剂量13mg/kg(折合HM-31.05mg/kg)，另外3组分别注射HM-3高剂量4.2mg/kg，中剂量2.1mg/kg，低剂量1.05mg/kg，各组大鼠分别于给药后0.5h、1h、2h、3h、6h、12h、24h、48h、72h、96h、108h、132h由眼眶静脉丛采血，每点采全血0.5ml，肝素抗凝，12000rpm/2min离心分离血浆，吸取上清血浆各200μl与80℃预热的PBS(0.05M pH7.4)缓冲液600μl混匀，80℃水浴30min，12000rpm离心2min，取上清液，-20℃低温保存备用。待室温溶解后，用ELISA方法测定整合素阻断剂多肽血药浓度。
表1mPEG-SC20k-HM-3和HM-3在SD大鼠体内的药代动力学参数比较(t1/2β为半衰期，CL为血浆清除率，AUC为曲线下面积，MRT为平均滞留时间)
  药物   t1/2β(min)   CL(L/h/kg)   AUC0-∞(mg/L/h)   MRT0-∞(min)
 mPEG-SC20k-HM-3   1207.80±38.40   0.0071±0.0012   4391.22±3562.89   921.18±64.29
 HM-3   27.66±7.37   1.38±0.15   25.63±9.76   2.17±0.13
由表1可知，mPEG-SC20k-HM-3与HM-3相比，半衰期有显著延长，血浆清除率明显降低。以上实验数据均证明PEG修饰能够显著改善蛋白多肽药物在大鼠体内的药代动力学特征。
实施例5
流式细胞试验分析mPEG-SC20k-HM-3与靶点的结合
(1)肿瘤细胞Bel-7402和MCF-7在24孔板中培养至80％的融合后，胰酶消化收集，用冰预冷的PBS洗2次，在标记前将细胞用含1％BSA的PBS重悬30min。
(2)用2μl鼠抗人αvβ3功能阻断单克隆抗体(1.0μg/μl，1∶200)和2μl鼠抗人α5β1功能阻断单克隆抗体(1.0μg/μl，1∶200)与细胞悬液在4℃孵育1.5h。
(3)标记后将细胞收集，并用冰预冷的PBS洗涤2次，之后用100μl FITC标记的修饰多肽mPEG-SC20k-HM-3(2mg/ml)与细胞悬液在4℃孵育1.5h。
(4)标记后，将细胞收集并用冰预冷的PBS洗涤2次，之后用400μl PBS重悬，用流式细胞仪分析，FITC荧光用FL1通道检测荧光强度。
由图1显示，mPEG-SC20k-HM-3能够和整合素αvβ3和α5β1结合，但主要的结合靶点仍为整合素αvβ3。表明，经PEG修饰后HM-3的主要作用靶点未发生改变，活性位点未被PEG所覆盖。
实施例6
mPEG-SC20k-HM-3和HM-3免疫原性检测
BALB/c白鼠，随机分为2组，雌雄各半，尾静脉分别给予36mg/kg的mPEG-SC20k-HM-3和3.0mg/kg的HM-3。连续给药8周，于1-12周眼眶静脉丛定点取血每周一次，12000rpm离心2min，分离血浆取上清液，-20℃低温保存备用。待室温溶解后，取0.1ml上清液间接ELISA检测血清中抗体滴度。
组别设置：
第一组有效给药剂量的HM-33.0mg/kg，给药：1天1次，6只动物雌雄各半；
第二组有效给药剂量的mPEG-SC20k-HM-336mg/kg，给药：2天1次，6只动物雌雄各半。
由图2显示，HM-3组给药第3周便有抗体产生，而mPEG-SC20k-HM-3组给药第5周才检测到较低滴度的抗体。且各时间点整合素阻断剂多肽组抗体滴度明显低于HM-3组，停药后抗体滴度逐渐下降，到第12周整合素阻断剂多肽组抗体已检测不到。说明PEG修饰可显著降低HM-3体内免疫原性。
实施例7
mPEG-SC20k-HM-3对人食管癌Ec109裸小鼠异种移植肿瘤生长抑制试验
取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧皮下。小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。实验组尾静脉注射多肽，每三天1次，阴性组同时给等量生理盐水。肿瘤体积计算公式：
TV＝0.52×a×b2
其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：
T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％
TRTV：治疗组RTV；CRTV：阴性对照组RTV
表2.mPEG-SC20k-HM-3对人食管癌Ec109裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
Figure BSA00000616625500091
Figure BSA00000616625500101
结果：见表2和图3，紫杉醇组10mg/kg，对人食管癌Ec109裸小鼠移植瘤的抑瘤率为70.19％；恩度组2.5mg/kg，对人食管癌Ec109裸小鼠移植瘤的抑瘤率为35.0％；HM-3组1.5mg/kg，对人食管癌Ec109裸小鼠移植瘤的抑瘤率为60.57％；多肽高、中、低剂量组对人食管癌Ec109裸小鼠移植瘤的抑瘤率达62.24％，55.66％，50.16％。
mPEG-SC20k-HM-3对人食管癌Ec109裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人食管癌Ec109移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例8
mPEG-SC20k-HM-3对人鼻咽癌CNE裸小鼠异种移植肿瘤生长抑制试验
取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧皮下。小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。实验组尾静脉注射多肽，每三天1次，阴性组同时给等量生理盐水。肿瘤体积计算公式：
TV＝0.52×a×b2
其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：
T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％
TRTV：治疗组RTV；CRTV：阴性对照组RTV
表3.mPEG-SC20k-HM-3对人鼻咽癌CNE裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
Figure BSA00000616625500111
结果：见表3和图4，顺铂组10mg/kg，对人鼻咽癌CNE裸小鼠移植瘤的抑瘤率为73.36％，但对实验动物的体重具有显著性的影响；恩度组2.5mg/kg，对人鼻咽癌CNE裸小鼠移植瘤的抑瘤率为37.01％；HM-3组1.5mg/kg，对人鼻咽癌CNE裸小鼠移植瘤的抑瘤率为61.03％；多肽高、中、低剂量组对人鼻咽癌CNE裸小鼠移植瘤的抑瘤率为68.22％，66.19％，55.32％，对实验动物体重无显著性影响。
mPEG-SC20k-HM-3对人鼻咽癌CNE裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人鼻咽癌CNE移植瘤的生长有显著性的抑制作用；与阳性对照顺铂组相比，对实验动物的体重没有影响，未见明显的毒副反应。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例9
mPEG-SC20k-HM-3对人甲状腺癌SW-579裸小鼠异种移植肿瘤生长抑制试验
取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧皮下。小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。实验组尾静脉注射多肽，每三天1次，阴性组同时给等量生理盐水。肿瘤体积计算公式：
TV＝0.52×a×b2
其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：
T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％
TRTV：治疗组RTV；CRTV：阴性对照组RTV
表4.mPEG-SC20k-HM-3对人甲状腺癌SW-579裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
Figure BSA00000616625500121
结果：见表4和图5，5-Fu(5-氟尿嘧啶)组10mg/kg，对人甲状腺癌SW-579裸小鼠移植瘤的抑瘤率为74.50％，但5-Fu毒性较大，动物体重下降，实验过程中动物有死亡；恩度组2.5mg/kg，对人甲状腺癌SW-579裸小鼠移植瘤的抑瘤率为32.20％；HM-3组1.5mg/kg，对人甲状腺癌CNE裸小鼠移植瘤的抑瘤率为57.70％；多肽高、中、低剂量组对人甲状腺癌SW-579裸小鼠移植瘤的抑瘤率达67.63％，60.56％，58.42％，对裸鼠体重没有显著性影响。
mPEG-SC20k-HM-3对人甲状腺癌SW-579裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人甲状腺癌SW-579移植瘤的生长有显著性的抑制作用；与阳性对照5-Fu组相比，对实验动物的体重没有影响，未见明显的毒副反应。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例10
mPEG-SC20k-HM-3对人胃癌MGC803裸小鼠异种移植肿瘤生长抑制试验
取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧皮下。小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。实验组尾静脉注射多肽，每三天1次，阴性组同时给等量生理盐水。肿瘤体积计算公式：
TV＝0.52×a×b2
其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：
T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％
TRTV：治疗组RTV；CRTV：阴性对照组RTV
表5.mPEG-SC20k-HM-3对人胃癌MGC803裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
Figure BSA00000616625500131
结果：见表5和图6，紫杉醇组10mg/kg，对人胃癌MGC803裸小鼠移植瘤的抑瘤率为74.12％；恩度组2.5mg/kg，对人胃癌MGC803裸小鼠移植瘤的抑瘤率为30.29％；HM-3组1.5mg/kg，对人胃癌MGC803裸小鼠移植瘤的抑瘤率为70.40％；多肽高、中、低剂量组对人胃癌MGC803裸小鼠移植瘤的抑瘤率达73.42％，69.86％，59.57％。
mPEG-SC20k-HM-3对人胃癌MGC803裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人胃癌MGC803移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例11
mPEG-SC20k-HM-3对人胰腺癌SW-1990裸小鼠异种移植肿瘤生长抑制试验
取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧皮下。小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。实验组尾静脉注射多肽，每三天1次，阴性组同时给等量生理盐水。肿瘤体积计算公式：
TV＝0.52×a×b2
其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：
T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％
TRTV：治疗组RTV；CRTV：阴性对照组RTV
表6.mPEG-SC20k-HM-3对人胰腺癌SW-1990裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
Figure BSA00000616625500141
结果：见表6和图7，5-Fu组10mg/kg，对人胰腺癌SW-1990裸小鼠移植瘤的抑瘤率为76.68％；恩度组2.5mg/kg，对人胰腺癌SW-1990裸小鼠移植瘤的抑瘤率为32.71％；HM-3组1.5mg/kg，对人胰腺癌SW-1990裸小鼠移植瘤的抑瘤率为57.94％；多肽高、中、低剂量组对人胰腺癌SW-1990裸小鼠移植瘤的抑瘤率达67.76％，64.55％，50.40％。
mPEG-SC20k-HM-3对人胰腺癌SW-1990裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人胰腺癌SW-1990移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例12
mPEG-SC20k-HM-3对人肺癌H460裸小鼠异种移植肿瘤生长抑制试验
取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧皮下。小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。实验组尾静脉注射多肽，每三天1次，阴性组同时给等量生理盐水。肿瘤体积计算公式：
TV＝0.52×a×b2
其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：
T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％
TRTV：治疗组RTV；CRTV：阴性对照组RTV
表7.mPEG-SC20k-HM-3对人肺癌H460裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
Figure BSA00000616625500152
结果：见表7和图8，紫杉醇组10mg/kg，对人肺癌H460裸小鼠移植瘤的抑瘤率为68.77％；恩度组2.5mg/kg，对人肺癌H460裸小鼠移植瘤的抑瘤率为31.20％；HM-3组1.5mg/kg，对人肺癌H460裸小鼠移植瘤的抑瘤率为65.42％；多肽高、中、低剂量组对人肺癌H460裸小鼠移植瘤的抑瘤率达66.45％，55.37％，54.28％。
mPEG-SC20k-HM-3对人肺癌H460裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人肺癌H460移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例13
mPEG-SC20k-HM-3对人乳腺癌MDA-MB-231裸小鼠异种移植肿瘤生长抑制试验
取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧皮下。小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。实验组尾静脉注射多肽，每天1次，阴性组同时给等量生理盐水。肿瘤体积计算公式：
TV＝0.52×a×b2
其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：
T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％
TRTV：治疗组RTV；CRTV：阴性对照组RTV
表8.mPEG-SC20k-HM-3对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
Figure BSA00000616625500171
结果：见表8和图9，紫杉醇组10mg/kg，对人乳腺癌MDA-MB-231裸小鼠移植瘤的抑瘤率为73.05％；恩度组2.5mg/kg，对人乳腺癌MDA-MB-231裸小鼠移植瘤的抑瘤率为35.57％；HM-3组1.5mg/kg，对人乳腺癌MDA-MB-231裸小鼠移植瘤的抑瘤率为57.14％；多肽高、中、低剂量组对人乳腺癌MDA-MB-231裸小鼠移植瘤的抑瘤率达63.05％，59.11％，51.01％。
mPEG-SC20k-HM-3对人乳腺癌MDA-MB-231裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人乳腺癌MDA-MB-231移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例14
mPEG-SC20k-HM-3对人胆囊癌GBC-SD裸小鼠异种移植肿瘤生长抑制试验
取对数生长期的人胆囊癌GBC-SD细胞株，在无菌条件下后制备成5×107/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以6，3，1.5mg/kg，每天给药1次。给药结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。
表9.mPEG-SC20k-HM-3对人胆囊癌GBC-SD裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
Figure BSA00000616625500181
结果：见表9和图10，紫杉醇组10mg/kg，对人胆囊癌GBC-SD裸小鼠移植瘤的抑瘤率为78.13％；恩度组2.5mg/kg，对人胆囊癌GBC-SD裸小鼠抑制瘤的抑瘤率为31.39％；HM-3组1.5mg/kg，对人胆囊癌GBC-SD裸小鼠移植瘤的抑瘤率为57.59％；多肽高、中、低剂量组对人胆囊癌GBC-SD裸小鼠移植瘤的抑瘤率为61.45％，50.59％，40.32％。
mPEG-SC20k-HM-3多肽对人胆囊癌GBC-SD小鼠移植瘤的抑瘤率的试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人胆囊癌GBC-SD移植瘤的生长有显著性抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例15
mPEG-SC20k-HM-3对人肾癌A498裸小鼠异种移植肿瘤生长抑制试验
取对数生长期的人肾癌A498细胞株，在无菌条件下后制备成5×107/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以6，3，1.5mg/kg，每天给药1次。给药结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。
表10.mPEG-SC20k-HM-3对人肾癌A498裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
Figure BSA00000616625500191
结果：见表10和图11，紫杉醇组10mg/kg，对人肾癌A498裸小鼠移植瘤的抑瘤率为84.32％；恩度组2.5mg/kg，对人肾癌A498裸小鼠移植瘤的抑瘤率为30.51％；HM-3组1.5mg/kg，对人肾癌A498裸小鼠移植瘤的抑瘤率为54.77％；多肽高、中、低剂量组对人肾癌A498裸小鼠移植瘤的抑瘤率达55.11％，46.95％，39.00％。
mPEG-SC20k-HM-3对人肾癌A498裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人肾癌A498移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例16
mPEG-SC20k-HM-3对人结肠癌HT-29裸小鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验
取对数生长期的人结肠癌HT-29细胞株，在无菌条件下后制备成5×107/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以6，3，1.5mg/kg，每天给药1次。给药结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。
表11mPEG-SC20k-HM-3对人结肠癌HT-29裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
结果：见表11和图12，紫杉醇组10mg/kg，对人结肠癌HT-29裸小鼠移植瘤的抑瘤率为69.11％；恩度组2.5mg/kg，对人结肠癌HT-29裸小鼠移植瘤的抑瘤率为33.48％；HM-3组1.5mg/kg，对人结肠癌HT-29裸小鼠移植瘤的抑瘤率为52.59％；多肽高、中、低剂量组对人结肠癌HT-29裸小鼠移植瘤的抑瘤率为55.98％，45.45％，37.05％
因此，mPEG-SC20k-HM-3对人结肠癌HT-29裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人结肠癌HT-29移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例17
mPEG-SC20k-HM-3对人卵巢癌SK-OV-3裸小鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验
取对数生长期的人卵巢癌SK-OV-3细胞株，在无菌条件下后制备成5×107/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；顺铂组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以6，3，1.5mg/kg，每天给药1次。给药结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。
表12.mPEG-SC20k-HM-3对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
Figure BSA00000616625500211
结果：见表12和图13，顺铂组10mg/kg，对人卵巢癌SK-OV-3裸小鼠移植瘤的抑瘤率为76.13％；恩度组2.5mg/kg，对人卵巢癌SK-OV-3裸小鼠移植瘤的抑瘤率为31.98％；HM-3组1.5mg/kg，对人卵巢癌SK-OV-3裸小鼠移植瘤的抑瘤率为49.49％；多肽高、中、低剂量组对人卵巢癌SK-OV-3裸小鼠移植瘤的抑瘤率为50.40％，44.62％，42.33％。
因此，整合素阻断剂多肽对人卵巢癌SK-OV-3裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人卵巢癌SK-OV-3移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例18
mPEG-SC20k-HM-3对人子宫内膜癌HHUA裸小鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验
取对数生长期的人子宫内膜癌HHUA细胞株，在无菌条件下后制备成5×107/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以6，3，1.5mg/kg，每天给药1次。给药结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。
表13.mPEG-SC20k-HM-3对人子宫内膜癌HHUA裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
结果：见表13和图14，紫杉醇组10mg/kg，对人子宫内膜癌HHUA裸小鼠移植瘤的抑瘤率为75.55％；恩度组2.5mg/kg，对人子宫内膜癌HHUA裸小鼠移植瘤的抑瘤率为34.98％；HM-3组1.5mg/kg，对人子宫内膜癌HHUA裸小鼠移植瘤的抑瘤率为54.49％；多肽高、中、低剂量组对人子宫内膜癌HHUA裸小鼠移植瘤的抑瘤率为62.47％，53.65％，51.38％。.
因此，mPEG-SC20k-HM-3对人子宫内膜癌HHUA裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人子宫内膜癌HHUA移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例19
mPEG-SC20k-HM-3对人宫颈癌HeLa裸小鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验
取对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞株，在无菌条件下后制备成5×107/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以6，3，1.5mg/kg，每天给药1次。给药结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。
表14mPEG-SC20k-HM-3.对人宫颈癌HeLa裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
Figure BSA00000616625500231
结果：见表14和图15、16，紫杉醇组10mg/kg，对人宫颈癌HeLa裸小鼠移植瘤的抑瘤率为65.37％；恩度组2.5mg/kg，对人宫颈癌HeLa裸小鼠移植瘤的抑瘤率为35.57％；HM-3组1.5mg/kg，对人宫颈癌HeLa裸小鼠移植瘤的抑瘤率为57.25％；多肽高、中、低剂量组对人宫颈癌HeLa裸小鼠移植瘤的抑瘤率为82.07％，74.11％，63.32％。.
因此，mPEG-SC20k-HM-3对人宫颈癌HeLa裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人宫颈癌HeLa移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例20
mPEG-SC20k-HM-3对人前列腺癌DU-145裸小鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验
取对数生长期的人前列腺癌DU-145细胞株，在无菌条件下后制备成5×107/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；顺铂组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以6，3，1.5mg/kg，每天给药1次。给药结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。
表15.mPEG-SC20k-HM-3对人前列腺癌DU-145裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
结果：见表15和图17，顺铂组10mg/kg，对人前列腺癌DU-145裸小鼠移植瘤的抑瘤率为70.60％；恩度组2.5mg/kg，对人前列腺癌DU-145裸小鼠移植瘤的抑瘤率为31.25％；HM-3组1.5mg/kg，对人前列腺癌DU-145裸小鼠移植瘤的抑瘤率为56.36％；多肽高、中、低剂量组对人前列腺癌DU-145裸小鼠移植瘤的抑瘤率为77.46％，67.48％，57.87％。
因此，mPEG-SC20k-HM-3对人前列腺癌DU-145裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人前列腺癌DU-145移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例21
mPEG-SC20k-HM-3对人膀胱癌HT1376裸小鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验
取对数生长期的人膀胱癌HT1376细胞株，在无菌条件下后制备成5×107/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以6，3，1.5mg/kg，每天给药1次。给药结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。
表16.mPEG-SC20k-HM-3对人膀胱癌HT1376裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
Figure BSA00000616625500251
结果：见表16和图18、19，紫杉醇组10mg/kg，对人膀胱癌HT1376裸小鼠移植瘤的抑瘤率为67.88；恩度组2.5mg/kg，对人膀胱癌HT1376裸小鼠移植瘤的抑瘤率为31.43％；HM-3组1.5mg/kg，对人膀胱癌HT1376裸小鼠移植瘤的抑瘤率为50.49％；多肽高、中、低剂量组对人膀胱癌HT1376裸小鼠移植瘤的抑瘤率为63.42％，54.24％，46.39％。
因此，整合素阻断剂多肽对人膀胱癌HT1376裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人膀胱癌HT1376移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例22
mPEG-SC20k-HM-3对人睾丸癌5637裸小鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验
取对数生长期的人睾丸癌5637细胞株，在无菌条件下后制备成5×107/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；顺铂组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以6，3，1.5mg/kg，每天给药1次。给药结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。
表17.mPEG-SC20k-HM-3对人睾丸癌5637裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制用
Figure BSA00000616625500261
结果：见表17和图20，顺铂组10mg/kg，对人睾丸癌5637裸小鼠移植瘤的抑瘤率为70.74％；恩度组2.5mg/kg，对人睾丸癌5637裸小鼠移植瘤的抑瘤率为30.02％；HM-3组1.5mg/kg，对人睾丸癌5637裸小鼠移植瘤的抑瘤率为39.40％；多肽高、中、低剂量组对人睾丸癌5637裸小鼠移植瘤的抑瘤率为60.20％，51.32％，50.99％。
因此，mPEG-SC20k-HM-3对人睾丸癌5637裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对人睾丸癌5637移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
实施例25
mPEG-SC20k-HM-3对肉瘤HT-1080裸小鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验
取对数生长期的肉瘤HT-1080细胞株，在无菌条件下后制备成5×107/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；环磷酰胺组15mg/kg，每周给药1次；多肽以3mg/kg，每天给药1次。给药结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。
表18.mPEG-SC20k-HM-3对肉瘤HT-1080裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
Figure BSA00000616625500271
结果：见表18和图21，环磷酰胺组10mg/kg，对肉瘤HT-1080裸小鼠移植瘤的抑瘤率为74.15％；HM-3组1.5mg/kg，对人肉瘤HT-1080裸小鼠移植瘤的抑瘤率为59.24％；多肽组对肉瘤HT-1080裸小鼠移植瘤的抑瘤率为65.04％。
因此，mPEG-SC20k-HM-3对肉瘤HT-1080裸小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽36.7mg/kg组对HT-1080移植瘤的生长有显著性的抑制作用。*P＜0.05(和阴性组比较有显著性差异)
Figure ISA00000616625700011

Claims (3)

1.一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂HM-3，其中整合素阻断剂的序列为mPEG-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp，其特征在于所述的mPEG-SC的分子量范围为500-20000。
2.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂HM-3，其特征在于所述的mPEG-SC的分子量为20000。
3.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂HM-3在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于所述的肿瘤为起源于人的胃部、皮肤、头颈部、甲状腺、胰腺、肺脏、食管、乳腺、肾脏、胆囊、结肠/直肠、卵巢、子宫、子宫颈、前列腺、膀胱、睾丸的原发/继发的癌或肉瘤。
CN2011103705299A 2011-11-21 2011-11-21 一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂hm-3及其应用 Pending CN102417540A (zh)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2011103705299A CN102417540A (zh) 2011-11-21 2011-11-21 一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂hm-3及其应用
US14/359,462 US20140329759A1 (en) 2011-11-21 2012-11-17 Polyethylene glycol-modified integrin blocker hm-3 and use thereof
KR1020147016557A KR20140096373A (ko) 2011-11-21 2012-11-17 폴리에틸렌글리콜이 수식된 인테그린 차단제 hm-3 및 그 응용
IN4482CHN2014 IN2014CN04482A (zh) 2011-11-21 2012-11-17
PCT/CN2012/084788 WO2013075600A1 (zh) 2011-11-21 2012-11-17 一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂hm-3及其应用
EP12851929.5A EP2784093B1 (en) 2011-11-21 2012-11-17 Polyethylene glycol-modified integrin blocker hm-3 and use thereof
KR1020197020874A KR102106485B1 (ko) 2011-11-21 2012-11-17 폴리에틸렌글리콜이 수식된 인테그린 차단제 hm-3 및 그 응용
AU2012343020A AU2012343020B2 (en) 2011-11-21 2012-11-17 Polyethylene glycol-modified integrin blocker HM-3 and use thereof
US15/332,539 US20170100489A1 (en) 2011-11-21 2016-10-24 Polyethylene glycol-modified integrin blocker hm-3 and use thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2011103705299A CN102417540A (zh) 2011-11-21 2011-11-21 一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂hm-3及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102417540A true CN102417540A (zh) 2012-04-18

Family

ID=45942198

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2011103705299A Pending CN102417540A (zh) 2011-11-21 2011-11-21 一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂hm-3及其应用

Country Status (7)

Country Link
US (2) US20140329759A1 (zh)
EP (1) EP2784093B1 (zh)
KR (2) KR20140096373A (zh)
CN (1) CN102417540A (zh)
AU (1) AU2012343020B2 (zh)
IN (1) IN2014CN04482A (zh)
WO (1) WO2013075600A1 (zh)

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013075600A1 (zh) * 2011-11-21 2013-05-30 Xu Hanmei 一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂hm-3及其应用
CN103623394A (zh) * 2013-12-11 2014-03-12 南京安吉生物科技有限公司 一种peg-hm-3和铂类、紫杉醇类或他滨类药物在制备实体瘤药物中的用途
CN103656615A (zh) * 2013-12-11 2014-03-26 南京安吉生物科技有限公司 一种hm-3和铂类、紫杉醇类或他滨类药物在制备实体瘤药物中的用途
CN103720667A (zh) * 2014-01-09 2014-04-16 中国药科大学 Ap-25多肽冻干粉针制剂及其制备方法和用途
CN103739673A (zh) * 2013-12-31 2014-04-23 罗瑞雪 一种聚乙二醇修饰的抑制白介素-6多肽及其应用
CN103739669A (zh) * 2013-12-31 2014-04-23 罗瑞雪 一种抑制白介素-6多肽及其应用
CN103736078A (zh) * 2014-01-09 2014-04-23 南京安吉生物科技有限公司 mPEG-HM-3多肽冻干粉针制剂及其制备方法和用途
CN103739671A (zh) * 2013-12-31 2014-04-23 罗瑞雪 一种聚乙二醇修饰的抑制核因子－κB多肽及其应用
CN103819542A (zh) * 2014-02-28 2014-05-28 中国药科大学 一种聚乙二醇修饰及蛋白质融合表达的整合素阻断剂ap-25及其应用
CN104127378A (zh) * 2014-08-11 2014-11-05 中国药科大学 mPEG-SC20K-HM-3多肽注射液及其制备方法和用途
CN105622721A (zh) * 2015-12-16 2016-06-01 李斯文 一种聚乙二醇修饰的血管生成抑制剂hs-1及其应用
CN105646667A (zh) * 2016-04-06 2016-06-08 南京安吉生物科技有限公司 聚乙二醇修饰的血管生成抑制剂hm-1及其应用
CN107857800A (zh) * 2017-11-09 2018-03-30 北京赛升药业股份有限公司 一种长效整合素抑制剂及其应用
CN108623693A (zh) * 2017-03-20 2018-10-09 徐寒梅 一种融合蛋白及其制备方法和其在制备治疗眼科疾病、抗炎、抗肿瘤药物中的应用
WO2019052405A1 (zh) * 2017-09-14 2019-03-21 南京安吉生物科技有限公司 马来酰亚胺基团修饰的血管生成抑制剂hm-1及其应用
WO2019109819A1 (zh) 2017-12-06 2019-06-13 天士力生物医药股份有限公司 一种hm-3融合蛋白及其应用
CN111855876A (zh) * 2020-07-10 2020-10-30 北京赛升药业股份有限公司 一种安替安吉肽有关物质的检测方法
CN114230676A (zh) * 2021-12-22 2022-03-25 天士力生物医药股份有限公司 重组hm-3融合蛋白及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1699408A (zh) * 2005-06-03 2005-11-23 中国药科大学 高效抑制血管生成多肽及其制备方法和应用

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5595756A (en) * 1993-12-22 1997-01-21 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents
US6521593B1 (en) * 1999-02-01 2003-02-18 Childrens Hospital Los Angeles Methods for inhibiting brain tumor growth
EP1569678A4 (en) * 2002-11-25 2008-01-02 Attenuon Llc PEPTIDES, THE TUMOR AND ENDOTHEL CELL CONTROLS, COMPOSITIONS AND ITS USES
KR100863060B1 (ko) * 2006-06-02 2008-10-10 베이징 선바이오 바이오테크, 코오퍼레이션, 리미티드 암 억제 활동을 하는 재조합 단백질, 그 암호화 유전자 및 재조합 단백질을 활성성분으로 포함하는 암치료용 약학적 조성물
CN102145161A (zh) * 2011-04-07 2011-08-10 中国药科大学 整合素阻断剂在制备治疗肿瘤药物中的应用
CN102178656B (zh) * 2011-05-12 2012-08-22 内蒙古奇特生物高科技（集团）有限公司 Hm-3多肽冻干粉制剂及其制备方法
CN102205110B (zh) * 2011-05-18 2014-03-26 中国药科大学 整合素阻断剂在制备治疗新生血管性眼病药物中的应用
CN102417540A (zh) * 2011-11-21 2012-04-18 中国药科大学 一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂hm-3及其应用
CN104127378A (zh) * 2014-08-11 2014-11-05 中国药科大学 mPEG-SC20K-HM-3多肽注射液及其制备方法和用途

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1699408A (zh) * 2005-06-03 2005-11-23 中国药科大学 高效抑制血管生成多肽及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《International Journal of Molecular Sciences》 20110419 Zhendong Liu "In Vivo Anti-Tumor Activity of Polypeptide HM-3 Modified by Different Polyethylene Glycols (PEG)" 摘要 1-3 , 第12期 *
《J. Biochem.》 20100629 Beili Zhu "Site-specific modification of anti-angiogenesis peptide HM-3 by polyethylene glycol molecular weight of 20 kDa" 摘要，344页左栏首段 1-3 第148卷, 第3期 *
BEILI ZHU: ""Site-specific modification of anti-angiogenesis peptide HM-3 by polyethylene glycol molecular weight of 20 kDa"", 《J. BIOCHEM.》, vol. 148, no. 3, 29 June 2010 (2010-06-29), pages 344 *
ZHENDONG LIU: ""In Vivo Anti-Tumor Activity of Polypeptide HM-3 Modified by Different Polyethylene Glycols (PEG)"", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES》, no. 12, 19 April 2011 (2011-04-19) *

Cited By (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013075600A1 (zh) * 2011-11-21 2013-05-30 Xu Hanmei 一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂hm-3及其应用
CN103623394A (zh) * 2013-12-11 2014-03-12 南京安吉生物科技有限公司 一种peg-hm-3和铂类、紫杉醇类或他滨类药物在制备实体瘤药物中的用途
CN103656615A (zh) * 2013-12-11 2014-03-26 南京安吉生物科技有限公司 一种hm-3和铂类、紫杉醇类或他滨类药物在制备实体瘤药物中的用途
CN103656615B (zh) * 2013-12-11 2017-01-04 南京安吉生物科技有限公司 一种hm-3和铂类、紫杉醇类或他滨类药物在制备实体瘤药物中的用途
CN103739671A (zh) * 2013-12-31 2014-04-23 罗瑞雪 一种聚乙二醇修饰的抑制核因子－κB多肽及其应用
CN103739673A (zh) * 2013-12-31 2014-04-23 罗瑞雪 一种聚乙二醇修饰的抑制白介素-6多肽及其应用
CN103739669B (zh) * 2013-12-31 2015-08-26 浙江元太生物科技有限公司 一种抑制白介素-6多肽及其应用
CN103739669A (zh) * 2013-12-31 2014-04-23 罗瑞雪 一种抑制白介素-6多肽及其应用
CN103720667A (zh) * 2014-01-09 2014-04-16 中国药科大学 Ap-25多肽冻干粉针制剂及其制备方法和用途
CN103736078A (zh) * 2014-01-09 2014-04-23 南京安吉生物科技有限公司 mPEG-HM-3多肽冻干粉针制剂及其制备方法和用途
CN103720667B (zh) * 2014-01-09 2016-04-13 中国药科大学 Ap-25多肽冻干粉针制剂及其制备方法和用途
CN103819542A (zh) * 2014-02-28 2014-05-28 中国药科大学 一种聚乙二醇修饰及蛋白质融合表达的整合素阻断剂ap-25及其应用
CN104127378A (zh) * 2014-08-11 2014-11-05 中国药科大学 mPEG-SC20K-HM-3多肽注射液及其制备方法和用途
CN105622721A (zh) * 2015-12-16 2016-06-01 李斯文 一种聚乙二醇修饰的血管生成抑制剂hs-1及其应用
US10869931B2 (en) 2016-04-06 2020-12-22 Nanjing Anji Biological Technology Co., Ltd Polyethylene glycol-modified angiogenesis inhibitor HM-1 and application thereof
CN105646667A (zh) * 2016-04-06 2016-06-08 南京安吉生物科技有限公司 聚乙二醇修饰的血管生成抑制剂hm-1及其应用
WO2017173905A1 (zh) * 2016-04-06 2017-10-12 南京安吉生物科技有限公司 聚乙二醇修饰的血管生成抑制剂hm-1及其应用
CN108623693B (zh) * 2017-03-20 2022-03-25 徐寒梅 一种融合蛋白及其制备方法和其在制备治疗眼科疾病、抗炎、抗肿瘤药物中的应用
CN108623693A (zh) * 2017-03-20 2018-10-09 徐寒梅 一种融合蛋白及其制备方法和其在制备治疗眼科疾病、抗炎、抗肿瘤药物中的应用
WO2019052405A1 (zh) * 2017-09-14 2019-03-21 南京安吉生物科技有限公司 马来酰亚胺基团修饰的血管生成抑制剂hm-1及其应用
CN107857800B (zh) * 2017-11-09 2020-05-05 北京赛升药业股份有限公司 一种长效整合素抑制剂及其应用
CN107857800A (zh) * 2017-11-09 2018-03-30 北京赛升药业股份有限公司 一种长效整合素抑制剂及其应用
CN109879969A (zh) * 2017-12-06 2019-06-14 天士力生物医药股份有限公司 一种hm-3融合蛋白及其应用
WO2019109819A1 (zh) 2017-12-06 2019-06-13 天士力生物医药股份有限公司 一种hm-3融合蛋白及其应用
US11655308B2 (en) 2017-12-06 2023-05-23 Tasly Biopharmaceuticals Co., Ltd. HM-3 fusion protein and application thereof
CN109879969B (zh) * 2017-12-06 2024-04-09 天士力生物医药股份有限公司 一种hm-3融合蛋白及其应用
CN111855876A (zh) * 2020-07-10 2020-10-30 北京赛升药业股份有限公司 一种安替安吉肽有关物质的检测方法
CN111855876B (zh) * 2020-07-10 2023-05-02 北京赛升药业股份有限公司 一种安替安吉肽有关物质的检测方法
CN114230676A (zh) * 2021-12-22 2022-03-25 天士力生物医药股份有限公司 重组hm-3融合蛋白及其应用
CN114230676B (zh) * 2021-12-22 2024-06-11 天士力生物医药股份有限公司 重组hm-3融合蛋白及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
IN2014CN04482A (zh) 2015-09-04
US20170100489A1 (en) 2017-04-13
AU2012343020A1 (en) 2014-06-12
EP2784093B1 (en) 2019-10-09
KR20140096373A (ko) 2014-08-05
KR102106485B1 (ko) 2020-05-04
WO2013075600A1 (zh) 2013-05-30
US20140329759A1 (en) 2014-11-06
EP2784093A4 (en) 2015-08-05
KR20190090872A (ko) 2019-08-02
EP2784093A1 (en) 2014-10-01
AU2012343020B2 (en) 2016-05-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102417540A (zh) 一种聚乙二醇修饰的整合素阻断剂hm-3及其应用
AU2017234460B2 (en) Multi-functional fusion polypeptide, preparation method thereof, and application of same
CN102266288A (zh) 一种基于胆固醇修饰的还原敏感性肿瘤靶向脂质体
CN104530199B (zh) 一种抗肿瘤多肽及其制备方法和应用
CN102746382A (zh) 心脏型脂肪酸结合蛋白b细胞表位肽及其抗体和应用
CN102850443B (zh) 整合素阻断剂多肽及其应用
CN104059132A (zh) 整合素阻断剂多肽及其制备方法和用途
CN105646667A (zh) 聚乙二醇修饰的血管生成抑制剂hm-1及其应用
CN102746380B (zh) 血管生成抑制剂多肽在制备治疗肿瘤及类风湿性关节炎药物中的应用
CN102372770B (zh) 一种抑血管生成素、纯化方法及含有它们的药物组合物
CN103524628A (zh) 重组灵芝免疫调节蛋白与人血清白蛋白融合蛋白及其制备方法与应用
CN104193828A (zh) 同时阻断her2和vegfr信号通路的重组融合蛋白
CN101538331A (zh) 靶向EGFR的单链抗体-力达霉素融合蛋白ER(Fv-LDP)
CN108727583A (zh) 多臂靶向抗癌偶联物
CN101503473A (zh) 一种用于肺癌体内外诊断或治疗的靶向性多肽及其应用
CN105622721A (zh) 一种聚乙二醇修饰的血管生成抑制剂hs-1及其应用
CN109535247A (zh) 聚乙二醇修饰的藻蓝蛋白及其制备方法与制药应用
CN104119444B (zh) 抗肿瘤融合蛋白及其制备方法和用途
CN105693864A (zh) 一种三聚体trail蛋白及其应用
CN103819542A (zh) 一种聚乙二醇修饰及蛋白质融合表达的整合素阻断剂ap-25及其应用
CN107857800A (zh) 一种长效整合素抑制剂及其应用
CN103172745A (zh) 包含免疫球蛋白Fc片段的长效人内皮抑素
US9879052B2 (en) Integrin-blocking polypeptides and uses thereof
CN101054418B (zh) 一种融合多肽及其在制备烫伤药物中的应用
CN104513293A (zh) 一种多肽疫苗的盐及其制备方法和含有该盐的药物制品

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20120418