CN102395559A - 制备n-烷氧羰基叔亮氨酸的方法 - Google Patents

Abstract

通过在使用碱性试剂将溶液pH控制在9～13范围内的同时，相对于叔亮氨酸，使0.90倍摩尔以上1.00倍摩尔以下的N-烷氧羰化剂在水存在下与叔亮氨酸作用来制备N-烷氧羰基叔亮氨酸，可用简便的操作、良好的产率稳定地制备高品质的N-烷氧羰基叔亮氨酸。另外，通过用不与水混合的溶媒从N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的碱性水溶液进行提取之际使羟基化物与该碱性水溶液共存，就可以温和的条件、良好的效率进行提取。而且，通过调整结晶时的水量，就可控制具有2种多晶型的N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的晶型，从而可在工业上稳定地制备该化合物。

Description

制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法

技术领域

本发明是关于作为医药品或农药的中间体很有用的N-烷氧羰基叔亮氨酸的制备方法的发明。

背景技术

将L-叔亮氨酸(2S-氨基-3，3-二甲基丁酸)的氨基进行烷氧羰基化得到的N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸作为各种医药品或农药的中间体很有用。特别是有报告说N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸作为丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂的原料非常有用(专利文献1、2)。

作为制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法，到目前为止已知的有如下方法。

1)使用过量的N-烷氧羰化剂，在保持pH11～13的同时，制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法(专利文献3)。

2)在事先添加了过量氢氧化钠的叔亮氨酸的强碱性水溶液中加入1.00当量的N-烷氧羰化剂，由此制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法(专利文献4)。

另外，在专利文献5、6中还记载了通过在L-叔亮氨酸中混合二碳酸二叔丁酯得到N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO2009/008913

专利文献2：WO2009/005677

专利文献3：日本专利特开2004-175703

专利文献4：日本专利特表2001-501216

专利文献5：日本专利特开2003-146962

专利文献6：日本专利特开2008-125364

发明内容

发明所要解决的问题

N-烷氧羰基化反应是在碱性条件下进行的反应，但随着反应的进行氨基被保护起来，而且伴随着酸性化合物例如盐酸和碳酸等副产物的产生，通常反应液pH显示了降低的倾向。因此，为了保持氨基的反应性，有必要通过并用碱来管理反应pH。

作为在管理pH的同时制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法，已知的例如有专利文献3的方法。然而，使用该专利文献3的方法有必要将pH管理在11～13较窄的范围内，如果偏离该pH范围，产率和品质就会发生急剧下降。

而且，将pH管理在较窄范围内并非易事，这在医药品或农药等要求高品质的领域中进行稳定生产方面是一个很大的问题。

另外，关于在专利文献4中报告的通过事先添加过量的碱将溶液pH保持在强碱性的同时使用理论当量的N-烷氧羰化剂来制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法，根据本申请发明人的探讨结果，发现操作方法虽然简便，但由于N-烷氧羰化剂在强碱性条件下发生分解，造成反应不完全、收率变低，因此不能说是一个有效率的制备方法。

就反应后的提取而言，在专利文献5中，从溶液中提取N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸时，从提取操作容易性等方面考虑使用了以芳香烃溶媒为代表的低极性溶媒。

然而，使用这样的低极性溶媒进行提取时，在20～30℃的室温附近基本上不能回收N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸。为了以良好的产率进行回收，有必要加热到40℃以上。然而，根据本申请发明人的探讨结果，发现N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的热分解开始温度在100℃附近，容易发生热分解。在工业规模的生产中，由于热效率一般比较差，所以受热经历较多，使得通过提取等进行回收时进行这样的加热处理的制备方法不能适用于N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的工业生产。

而且，发明人在对上述提取法进行探讨的过程中，发现N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸至少存在2种多晶型。关于N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸，到目前为止还不知道其存在多晶型，当然也不知道其控制方法。多晶型对稳定性、形态(外观)、溶解性、吸湿性、是否容易混入杂质等都有影响，在使用物质时的操作性和品质管理上是一个非常重要的因素。特别是在医药品领域中，有时晶型的不同会导致体内吸收性的不同。控制物质的多晶型，不仅在医药品领域，从以工业规模稳定制备该物质的观点出发也非常重要。

解决问题的手段

本申请的发明人对这些技术问题进行了深入探讨，结果发现：在制备N-烷氧羰基叔亮氨酸时，N-烷氧羰化剂的用量与杂质的产生有密切关系。另外，还意外发现：该N-烷氧羰化剂用量的效果在通过添加碱性试剂将pH范围保持在9～13时得到发挥。也就是说，通过将N-烷氧羰化剂的用量控制在理论当量以下且用碱性pH调整剂将pH管理在9～13范围内，就可用简便的操作、以高产率和高品质来制备N-烷氧羰基叔亮氨酸。

也就是说，本发明是关于一种制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法，其特征在于，在使用碱性试剂将溶液pH控制在9～13范围内的同时，相对于叔亮氨酸，使0.90倍摩尔以上1.00倍摩尔以下的N-烷氧羰化剂在水存在下与叔亮氨酸作用。

本申请的发明人还意外发现：在使用不与水混合的溶媒从N-烷氧羰基叔亮氨酸的碱性水溶液中提取N-烷氧羰基叔亮氨酸时，通过使高水溶性的用通式(1)：

ROH  (1)

表示的羟基化物(下面有时记作羟基化物(1))与该碱性水溶液共存，N-烷氧羰基叔亮氨酸的提取效率可得到飞跃式的提高，其结果就可在温和的条件下以良好效率回收N-烷氧羰基叔亮氨酸。

另外还发现：可通过结晶时调整水量来控制N-烷氧羰基叔亮氨酸的晶型；特别是N-叔丁氧羰基叔亮氨酸至少存在2种多晶型(结晶A、结晶B)，可控制这些晶型。

也就是说，本发明是关于一种制备N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的方法，其特征在于，在相对于N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸共存了0.01～5倍重量的用下式(1)：

ROH  (1)

(R表示可具有取代基的碳数为1～6的烷基)

表示的羟基化物中的至少一种的N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的碱性水溶液中，加入酸和不与水混合的溶媒，用不与水混合的溶媒提取N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸。

本发明还关于一种N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的结晶(结晶A)，该结晶在粉末X射线(Cu-Kα)衍射中，在11.0°、12.6°、15.1°、16.3°、18.6°、19.4°、21.3°以及22.2°的衍射角(2θ±0.1)处具有峰值。本发明还关于一种N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的结晶(结晶B)，该结晶在粉末X射线(Cu-Kα)衍射中，在8.6°、14.4°、15.9°、17.3°、19.0°、21.9°以及22.3°的衍射角(2θ±0.1)处具有峰值。

发明效果

根据本发明的方法，可用简便的操作、以高产率和高品质制备N-烷氧羰基叔亮氨酸。因此，本发明的方法可适用于工业生产。而且，根据本发明的方法，可以温和的条件和良好的产率将N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸从其溶液中提取出来。由此，即使在工业规模的生产中，也不会使其发生热分解，而是以良好的效率获得N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸。另外，可在将具有多晶型的N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸，特别是N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸控制在所希望的晶型的同时，在工业上稳定制备。

附图说明

图1是结晶A的代表性的粉末X射线衍射数据

图2是结晶B的代表性的粉末X射线衍射数据

具体实施方式

首先，对简便、高产率且高品质地制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法(第一个发明方式)进行说明。

可使用市售的L-叔亮氨酸，也可使用根据已知技术另行获得的L-叔亮氨酸。例如，可使用日本专利特开平10-72419号公报中报告的合成反应和日本专利特表平9-504304号公报中报告的生物反应等已知技术。在各个方法中，对叔亮氨酸的使用形态没有特别限制，可使用结晶，也可使用水溶液等溶液。

对本发明中使用的叔亮氨酸的光学纯度没有特别限制，可为光学活性体，也可为消旋体，还可将L体和D体以任意比例进行混合。另外，根据本发明的方法，通常可保持获得的N-烷氧羰基叔亮氨酸的光学纯度。

将L-叔亮氨酸进行N-烷氧羰基化的反应只要是在水存在下进行的就没有特别限制，只有水、由水和与水相溶的有机溶媒组成的混合系、由水和不与水相溶的有机溶媒组成的二相系中的任何一种都可适用。

对有机溶媒没有特别限制，例如可列举如下溶媒：戊烷、己烷、庚烷、辛烷等脂肪烃类溶媒；苯、甲苯、二甲苯等芳香烃类溶媒；二氯甲烷、氯苯、氯仿、1，1，1-三氯乙烷等卤类溶媒；四氢呋喃、1，4-二氧杂环己烷、二乙醚、甲基叔丁基醚、二丁醚等醚类溶媒；醋酸乙酯、醋酸正丙酯、醋酸异丙酯、醋酸正丁酯、醋酸叔丁酯等酯类溶媒；丙酮、甲基乙基酮、甲基异丁基酮等酮类溶媒；甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇类溶媒；乙腈等腈类溶媒；N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等酰胺类溶媒；其他的如二甲基亚砜等。

另外，这些有机溶媒以及水可分别单独使用，也可以任意比率混合2种以上的溶媒使用。混合顺序也没有限制。其中，由于作为氨基酸的L-叔亮氨酸在水中或在与水混合的溶媒中溶解性高，为了以少的溶媒量获得合适的反应性和反应液流动性等，优选水和/或与水混合的有机溶媒。另外，在使用二碳酸二叔丁酯等脂溶性高的烷氧羰化剂时，与单独使用水相比，通过并用有机溶媒，特别是其中与水混合的有机溶媒可获得更合适的反应性。

作为与水混合的有机溶媒，在上述列举的溶媒中，例如可列举四氢呋喃、1，4-二氧杂环己烷、丙酮、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、乙腈。从通用性和低毒性方面来讲，优选丙酮、甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇。

对使用的溶媒量也没有特别限制，可在叔亮氨酸完全溶解的状态实施反应，也可在不完全溶解的状态进行反应，二者均可。而且，也不一定非要使用只能用来完全溶解生成的N-烷氧羰基叔亮氨酸的溶媒量。但为了得到合适的反应性和反应液流动性，相对于叔亮氨酸，溶媒量优选为1.0倍重量以上50.0倍重量以下，更优选为1.0倍重量以上20.0倍重量以下，更加优选为2.0倍重量以上20.0倍重量以下，特别优选为2.0倍重量以上15.0倍重量以下。

另外，从共存物的观点来看，除了有机溶媒，也可共存无机盐。作为可共存的无机盐，可以列举氯化钠、氯化铵、氯化钾、硫酸钠、硫酸铵、溴化铵、碳酸氢钠等，但并不限于这些无机盐。能否共存，可通过简单的实验容易地判断。

对反应温度没有特别限制，一般在溶液的凝固点～沸点范围内进行选择，优选-20℃到90℃，更优选-10℃到50℃，更加优选0℃到30℃。

另外，溶液的沸点一般依赖于压力。反应时的压力除了常压之外，还可选择在减压下、加压下进行。这些都可通过简单的实验容易地设定。

用于反应的N-烷氧羰化剂只要是能将氨基酸的氨基进行N-烷氧羰基化的化合物就没有特别限制。但优选氯甲酸烷基酯或二碳酸二烷基酯，更优选烷基碳数为1～10的氯甲酸烷基酯或二碳酸二烷基酯。另外，在本发明中，将芳烷基也包含在烷基中。作为具体的化合物，可以列举氯甲酸甲酯、氯甲酸乙酯、氯甲酸苄酯、二碳酸二叔丁酯、二碳酸二甲酯。另外，N-烷氧羰化剂可直接使用，也可作为有机溶媒的溶液使用，二者均可。

不言而喻，N-烷氧羰基叔亮氨酸的烷氧羰基反映了使用的N-烷氧羰化剂的结构。烷氧羰基中烷基的碳数为1～10，具体而言为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环戊基、环己基、苯基、苄基以及萘基，更优选甲基、乙基、异丙基、叔丁基、环戊基以及苄基，特别优选甲基、乙基、叔丁基以及苄基。

在本发明中，将N-烷氧羰化剂的用量控制在理论当量以下且将pH控制在9～13之间对于制备高产率和高品质的N-烷氧羰基叔亮氨酸来讲是最重要的因素。下面对其进行详细说明。

在本发明的方法中，将反应时的pH控制在9～13的范围。如果pH低于9，不仅叔亮氨酸的反应性显著下降而使得反应无法完成，而且即使限定了N-烷氧羰化剂的用量，也会显著发生副反应，从而造成N-烷氧羰基叔亮氨酸产率和品质的下降。另一方面，即使反应pH保持在9以上，但如果pH超过13，N-烷氧羰化剂的分解显著，反应仍然无法完成。从容易获得更稳定的制品的观点来看，优选9～11。另外，在商业规模的生产中，最好以10～11为中心对pH进行控制，但即使偏移到该范围以外，只要是在本发明条件下就不会对品质和产率产生影响，都可稳定进行生产。

对将pH调整、保持在上述范围的方法没有特别限制，通常可用碱性试剂将随着反应的进行而降低的pH适时调整到上述范围。如果反应可在上述pH范围内完成，也可将反应开始时的pH调整到上述范围内的高pH处，然后根据反应情况对pH进行管理。如果可保持pH，对这些试剂的添加顺序、添加速度、连续添加还是间歇添加等添加方式都没有特别限制。

用于调整pH的碱性试剂可使用无机碱或3级胺类，但从通用性的观点来看特别适合使用无机碱。

使用无机碱时，可使用的化合物可列举：氢氧化钠、氢氧化钾等碱金属氢氧化物；碳酸钠、碳酸钾等碱金属碳酸盐；碳酸氢钠、碳酸氢钾等碱金属碳酸氢盐等。从碱性强的观点来看，优选氢氧化钠、氢氧化钾等碱金属氢氧化物；碳酸钠、碳酸钾等碱金属碳酸盐。另外，使用3级胺类时，可列举三乙胺和三异丙胺、吡啶等。

这些碱类可以直接使用，也可溶解于水或有机溶媒中使用。但为了能让添加的碱迅速分散在反应液中，优选使用溶液状态，优选将固体碱性试剂溶解于水或有机溶媒中使用。另外，不言而喻，也可将液体的碱性试剂溶解于水或有机溶媒中使用。

作为溶解碱性试剂的有机溶媒，从化学性质的观点来看，优选与碱性试剂不发生反应、在碱性条件下与叔亮氨酸和N-烷氧羰化剂反应性差的溶媒，但对其沸点和熔点等物理性质没有特别限制。能否使用，可通过简单的实验容易地判断。作为可使用的溶媒，例如可列举乙腈、丙酮、四氢呋喃、甲苯。

将碱性试剂溶解于水或有机溶媒中使用时，对其浓度没有特别限制，但从制备效率的观点出发，优选高浓度。特别是氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾易溶于水，可以作为高浓度的水溶液使用，在该种情况下优选使用30重量％以上50重量％以下的浓度。

对为保持pH而添加碱性试剂的方法没有特别限制。例如可从开始添加N-烷氧羰化剂时起，一边通过适时添加碱性试剂将pH保持在所述范围内一边等待反应完成。也可交互添加N-烷氧羰化剂和碱性试剂，还可同时添加N-烷氧羰化剂和碱性试剂。

下面，对另外一个需要控制的因素即N-烷氧羰化剂的用量进行说明。

在本发明的方法中，相对于叔亮氨酸，使用0.90倍摩尔以上1.00倍摩尔以下、优选0.95倍摩尔以上0.99倍摩尔以下的N-烷氧羰化剂进行反应。如果N-烷氧羰化剂比叔亮氨酸过量存在，即使将反应pH控制在上述9～13范围内，副反应也会发生，N-烷氧羰基叔亮氨酸的产率和品质容易下降。另外，过量的N-烷氧羰化剂和N-烷氧羰化剂的分解物容易作为杂质混入。另一方面，如果N-烷氧羰化剂的用量较少，这些杂质的产生就可得到抑制，但当用量比理论当量少非常多时，产率就会降低。而且，产率降低会导致混入未反应的叔亮氨酸，在品质面上也不利。

对于N-烷氧羰化剂的添加速度，只要是能控制pH的速度就没有特别限制。但从制备效率的观点来看，优选50小时以内，更优选为1小时以上20小时以内。

对于反应时的搅拌速度，只要使N-烷氧羰化剂和碱性试剂等不在局部发生过量的搅拌即可。

关于N-烷氧羰化剂添加后的搅拌时间，只要为完成反应设定了足够的时间就没有特别限制。但从制备效率的观点来看，优选50小时以内，更优选1小时以上20小时以内。

可根据需要，将由此得到的含N-烷氧基叔亮氨酸的反应液在合适的pH条件下供给于使用有机溶媒的提取操作，从而除去反应液中的无机盐、叔亮氨酸、水溶性有机化合物等。

另外，通过将得到的反应液或提取液供给于已知的结晶操作，就可以高纯度结晶分离出N-烷氧基叔亮氨酸。作为分离结晶的操作，例如可列举如下方法：将生成的N-烷氧基叔亮氨酸在酸性条件下、以加温状态提取到芳香烃溶剂中，然后将之浓缩、冷却结晶。

下面，对在温和条件下以良好产率将N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸从其溶液(N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的碱性水溶液)中进行提取的方法(第二个发明方式)进行说明。

首先，对本发明中使用的N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的碱性水溶液进行说明。

N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的碱性水溶液是指作为羧酸的N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸在碱性条件下与碱形成盐而溶解形成的溶液。

N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的碱性水溶液优选使用上述方法获得的碱性水溶液，但并不限定于此，例如也可为通过第5版实验化学讲座16卷第224页(丸善社出版)记载的对氨基酸进行烷氧羰基化的一般方法所获得的碱性水溶液。

在一般的N-烷氧羰基化反应中，反应时的pH优选偏碱性一侧，下限为7以上，优选为7.5以上，更优选为8.0以上。虽然对上限没有特别限制，但由于在强碱性一侧易发生消旋化和夹杂物分解等副反应，所以优选13.0以下，更优选12.0以下，特别优选11.0以下。另外，在对反应不产生影响的例如非常短的时间内，反应pH也可处于上述范围之外。

对一般的N-烷氧羰基化反应中的N-烷氧羰化剂的用量比没有特别限制。然而，当N-烷氧羰化剂相对于L-叔亮氨酸较少时，不言而喻其产率下降，而较多时，过量的N-烷氧羰化剂和该化合物中的夹杂物诱发副反应等，与反应后的杂质增加相关，所以均不优选。为了使制备效率最大化，N-烷氧羰化剂相对于L-叔亮氨酸的用量为0.9倍摩尔以上3倍摩尔以下，更优选为0.95倍摩尔以上2倍摩尔以下，更加优选为0.95倍摩尔以上1.5倍摩尔以下。

由此得到的反应混合物具有上述反应pH那样的碱性，作为羧酸的N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸与使用的碱形成盐而溶解到溶液中。如果水溶媒中共存有无机盐，N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的盐有时会通过盐析效果游离出来发生分层。在本发明的提取操作中，无论有无分层均可使用全量的反应混合物，也可只使用分层了的含有N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的溶液层。另外，还可使用如下溶液：将另行制备的精制体N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸与上述碱所形成的盐溶解于水中或溶解于水和上述与水混合的溶媒的混合液中而获得的溶液；提取后转溶得到的碱性水溶液。

接下来，对用不与水混合的溶媒从N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的碱性水溶液中提取N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的方法进行说明。

通常在N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的碱性水溶液中加入酸将溶液酸化后，再加入不与水混合的溶媒进行提取。此时，用下式(1)：

ROH  (1)

表示的羟基化物与该碱性水溶液共存，就可不用加热，在温和条件下进行提取。

在羟基化物(1)中，R表示可具有取代基的碳数为1～6的烷基。

作为碳数为1～6的烷基，无论直链、支链、环状或非环状，都没有特别限制。可列举甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、环戊基、正己基以及环己基等。作为取代基，可列举卤原子、氢氧基、氨基、羧基、醚基等。

其中，R优选碳数为1～4的烷基，更优选甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基以及叔丁基，更加优选甲基、乙基、异丙基。

羟基化物(1)可单独使用，也可2种以上组合使用。

羟基化物(1)的量(2种以上使用时其总量)相对于N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸为0.01～5倍重量，优选为0.1～4倍重量，更优选为0.3～3倍重量，特别优选为0.4～2倍重量。另外，当制备N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的反应中使用的溶媒为羟基化物(1)时，包括反应溶媒在内，使羟基化物(1)在该数值范围。

另外，虽然使用少量的羟基化物(1)就可充分达到其目的，但由于较多使用时可让提取液中的水量向增加的方向运作，因此如后所述的那样可以说是用结晶操作获得结晶B的合适方法。

作为不与水混合的溶媒，可以列举：戊烷、己烷、环己烷、甲基环己烷、庚烷、辛烷等脂肪烃类溶媒；苯、甲苯、二甲苯等芳香烃类溶媒；二氯甲烷、氯苯、氯仿、1，1，1-三氯乙烷等卤类溶媒；二乙醚、甲基叔丁基醚、二丁醚等醚类溶媒；醋酸乙酯、醋酸正丙酯、醋酸异丙酯、醋酸正丁酯、醋酸叔丁酯等酯类溶媒；甲基异丁基酮等酮类溶媒；丁醇等醇类溶媒。从通用性等观点来看，优选其中的戊烷、己烷、庚烷、环己烷、甲基环己烷、甲苯、醋酸乙酯、醋酸异丙酯、甲基异丁基酮。

相对于N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸，不与水混合的溶媒的量为0.1～30倍重量，优选为0.5～20倍重量，更优选为1～10倍重量。另外，这些溶媒可单独使用，也可2种以上组合使用。

用于酸化的酸无论是有机酸还是矿酸都没有特别限制。有机酸可列举三氯醋酸、三氟醋酸、甲磺酸、对甲基苯磺酸。矿酸可列举盐酸、硫酸、磷酸、硝酸。从通用性和经济性的观点来看，优选矿酸，特别优选其中的盐酸、硫酸。

从本发明的目的来看，提取时的温度不优选高温条件，合适在-20℃～50℃实施提取，优选其中的-10℃～40℃，更优选0～35℃。

提取操作也没有特别限制，可将碱性水溶液酸化之后加入不与水混合的溶媒以及羟基化物(1)进行提取，也可在加入不与水混合的溶媒以及羟基化物(1)之后进行酸化。对于羟基化物(1)，也可从反应阶段开始预先使用，当反应溶媒单独为水时，从反应阶段开始使用倒使得反应进行顺利，更为优选。

通过提取操作得到的含不与水混合的溶媒的溶液(下面记作“提取液”)可直接供给于结晶操作，也可根据需要通过水洗除去水溶性的夹杂物，还可将溶液碱化后再一次将目的物转溶到水层中除去夹杂物。

下面，对从提取液中分离N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的方法(第三个发明方式)进行说明。

将提取液供给于一般所知的结晶操作，即冷却结晶、浓缩结晶、添加贫溶媒的结晶，就可将N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸作为结晶分离出来。此时，可通过调整提取液中的水量来控制晶型。特别是在N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸中至少存在2种多晶型(结晶A、结晶B)，通过调整提取液中的水量，就可控制这些晶型。另外，在分离N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸时，“提取液”可为通过上述提取操作得到的溶液，也可为将事先得到的结晶溶解于所定溶媒调制得到的溶液。此时，对使用的结晶的晶型种类不加限制。

对于调整提取液中水量的方法没有特别限制，可通过浓缩和添加等简便操作进行调整。

对浓缩方法没有特别限制，可根据需要在加压条件下实施。对温度也没有特别限制，N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸不分解的温度就可以，例如-20～90℃，优选为-10～70℃，更优选为0～60℃。

水量相对于N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸调整为小于0.1w/w％或0.1w/w％以上。在N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸中，如果水量调整为小于0.1w/w％，容易得到结晶A；如果调整为0.1w/w％以上，则容易得到结晶B。

N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的结晶A在粉末X射线(Cu-Kα)衍射中，在衍射角(2θ±0.1)11.0°、12.6°、15.1°、16.3°、18.6°、19.4°、21.3°以及22.2°处具有峰值。该结晶(结晶A)的干燥物在常温常压下稳定，在避免阳光直射和高温多湿等一般考虑的基础上，长期保管也不会转变为另外一种晶型(结晶B)。而且，与结晶B相比，具有难溶于有机溶媒、容易在结晶操作中进行回收的优点。为得到结晶A，相对于N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸，水量为小于0.1w/w％，优选为0.05w/w％以下，更优选为0.02w/w％以下。

N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的结晶B在粉末X射线(Cu-Kα)衍射中，在衍射角(2θ±0.1)8.6°、14.4°、15.9°、17.3°、19.0°、21.9°以及22.3°处具有峰值。该结晶(结晶B)的干燥物在常温常压下稳定，在避免阳光直射和高温多湿等一般考虑的基础上，长期保管也不会转变为另外一种晶型(结晶A)。而且，由于结晶B与结晶A相比易溶于有机溶媒，所以具有例如作为溶液使用时可高浓度化等使用方面上的优点。为得到结晶B，相对于N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸，水量为0.1w/w％以上，优选为0.5w/w％以上，更优选为1.0w/w％以上。

从上述溶液中将N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸进行结晶化可通过冷却、再浓缩、加入贫溶媒等一般的方法形成N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的过饱和状态而进行。通过冷却进行结晶化时，对其冷却速度没有特别限制，优选每小时1～50℃，从操作效率的观点来看更优选5～30℃。

添加贫溶媒进行结晶化时，只要在该贫溶媒中N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的溶解度足够低，就对该贫溶媒没有特别限制，戊烷、己烷、庚烷、辛烷、环己烷、甲基环己烷等均可适合使用。

在上述任何一种情形下结晶化都是自然发生的。但也可根据需要，在N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的过饱和域内加入所希望的晶型的结晶作为晶种进行结晶化。

另外，为了以良好收率得到N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的结晶，也可使用在结晶化之后进行浓缩高浓度化、进一步冷却、加入贫溶媒等方法作为进一步降低溶解度的手段，还可使用任意组合了这些方法的方法。

对于结晶操作中的N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的浓度，可根据选定的使用溶媒和结晶方法进行适当调整，没有特别限制。但从生产性和溶液流动性等观点来看，N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的浓度为1～85wt％，优选为5～80wt％，更优选为10～70wt％。

另外，不管结晶方法如何，通过调整水量均可获得各个结晶。但为了以良好的效率得到各个结晶，在结晶A的情况下使用结合了冷却以及贫溶媒结晶法的方法，在结晶B的情况下使用下面说明的中和结晶法。

下面，对获得结晶B的方法之一的中和结晶法进行说明。

中和结晶法通常是将作为与碱所成的盐溶解于水中的N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸用酸中和进行结晶化的方法。该方法可构建一个例如从在水中获得的反应混合物中通过中和获得结晶的非常简单的过程，属于一个经济的、在工业上非常有利的结晶获得方法。不言而喻，在该种情形下，由于结晶化时的水量较多，就可得到结晶B。另外，N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的溶液可为反应混合物，也可为从反应混合物中提取后在碱性条件下转溶入水层的溶液。还可以将事先得到的结晶与碱形成盐后溶解于水中进行调制。此时对使用的结晶晶型种类没有限制。

中和结晶法中的碱多数情况下与反应时使用的碱共通，但并不特别限定于此。例如作为可使用的碱，可列举：氢氧化钠、氢氧化钾等碱金属氢氧化物；氢氧化镁、氢氧化钙等碱土金属氢氧化物；碳酸钠、碳酸钾等碱金属碳酸盐；碳酸氢钠、碳酸氢钾等碱金属碳酸氢盐；吡啶、三乙胺等有机碱。从价格便宜和容易操作等方面来看，优选其中的无机碱，更优选碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐。中和时所用的酸也同样没有特别限制，加入盐酸和硫酸等通用的酸将溶液进行酸化即可。

由上述方法对N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸进行结晶化得到的浆液可供给于离心分离、加压过滤、减压过滤等一般的固液分离方法进行结晶分离。得到的结晶还可进一步根据需要，例如通过减压干燥(真空干燥)获得干燥结晶。

本发明中的2种晶型并不限定于完全是一种结晶，也可相互含有一部分对方的结晶。其比率为，副成分在30％以下，优选在20％以下，更优选在10％以下。

烷氧羰基是N-保护基，通过供给于适当的脱保护反应，可得到原料L-叔亮氨酸。通过利用该保护-脱保护反应，就可得到更高纯度的L-叔亮氨酸。

作为代表性的脱保护反应，可以列举如下反应：将叔丁氧羰基在酸性条件下供给的反应、将甲氧羰基等在碱性条件下供给的反应、将苄氧羰基供给于加氢反应的反应。

N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的提取液也可用于脱保护反应，对分离出的结晶不论晶型如何都可使用。

此时，作为使用的溶媒，优选溶解N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的有机溶媒，该有机溶媒基本上与上述提取中使用的溶媒相同。

例如，将叔丁氧羰基在酸性条件下进行脱保护时，用于反应的酸无论是有机酸还是矿酸，只要具有显示足够反应性的酸强度就没有特别限制。有机酸可列举三氯醋酸、三氟醋酸、甲磺酸、对甲基苯磺酸。矿酸可列举盐酸、硫酸、磷酸、硝酸。从通用性和经济性的观点来看，优选矿酸，特别优选其中的盐酸、硫酸。

另外，可在N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的溶液中添加酸，也可在酸中添加N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的溶液，对添加顺序和其添加速度没有特别限制。

反应温度只要是溶媒和使用的酸不发生沸腾的温度就没有特别限制，通常为0～90℃，优选其中的10～80℃，特别优选15～70℃。

反应后，L-叔亮氨酸与酸形成盐，通常在有机溶媒中特别是在不与水混合的溶媒中作为固体析出，在水和/或与水混合的溶媒中则溶解。在得到L-叔亮氨酸与酸形成的盐时，在前者的情况下，将析出的固体直接进行分离就可得到目的化合物。在后者的情况下，通过调整与水混合的溶媒的比率和温度就可获得与酸形成盐的L-叔亮氨酸。为了单独得到L-叔亮氨酸，即在没有反离子的状态下得到L-叔亮氨酸，只要在反应混合物中加入碱进行中和即可。作为碱，只要不伴随副反应的发生就没有特别限制，可使用的碱例如可列举：氢氧化钠、氢氧化钾等碱金属氢氧化物；氢氧化镁、氢氧化钙等碱土金属氢氧化物；碳酸钠、碳酸钾等碱金属碳酸盐；碳酸氢钠、碳酸氢钾等碱金属碳酸氢盐；吡啶、三乙胺等有机碱。

可通过使用离心分离、加压过滤、减压过滤等一般的固液分离方法从与酸形成的盐或者中和得到的浆液中得到结晶。得到的结晶还可进一步根据需要，例如通过减压干燥(真空干燥)得到干燥结晶。

实施例

下面记载了本发明的实施例，但本发明不受这些实施例的限制。另外，在实施例中，溶液中的N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸是通过下述条件的HPLC分析进行定量的。

HPLC条件

柱：Waters Symmetry C18(3.5μm、150mm×4.6mm i.d.)

柱温：35℃

检测器：UV检测器(波长210nm)

流动相：0.1重量％的磷酸水溶液作为A液、乙腈作为B液，采用下述表1所示的时间程序。

流速：1.0mL/min.

[表1]

另外，L-叔亮氨酸的定量分析使用CAPCELLPAKSCX(250mm×4.6mmi.d.)作为柱，使用磷酸缓冲液(pH＝3.3)和乙腈以容量比95∶5混合的溶液作为流动相，流速为1.0mL/min，柱温为35℃，检测器为示差折光率仪进行分析。

实施例中的产率使用下述计算式进行计算。

产率(％)＝(生成的N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸全量)×100/(使用的L-叔亮氨酸全量)。

另一方面，反应选择率是指得到的N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸相对于被反应消耗的L-叔亮氨酸的比例。反应选择率越高，表示来源于叔亮氨酸的杂质越得到抑制。反应选择率用下述计算式进行计算。

反应选择率(％)＝(产率)×100/((使用的L-叔亮氨酸全量)-(残留的L-叔亮氨酸量))。

(实施例1)

在含有L-叔亮氨酸(13.2g、0.10mol)的水溶液(72.4g)中加入15重量％的氢氧化钠水溶液调整到pH13.0以后，在将温度控制在25℃以下的同时，慢慢加入氯甲酸甲酯(9.52g、0.10mol、1.00当量)。此时，随着氯甲酸甲酯的添加pH下降，通过同时添加15重量％的氢氧化钠水溶液将溶液pH保持在10.0-12.8。添加完氯甲酸甲酯后，搅拌2小时，之后用HPLC对产率和品质进行分析。

产率：98％、反应选择率：100％

(实施例2)

将含有L-叔亮氨酸(30.03g、0.23mol)的水溶液(303.37g)冷却至10℃，然后在使用30重量％的氢氧化钠水溶液将溶液pH控制在9.0-9.5的同时，慢慢加入氯甲酸甲酯(21.63g、0.23mol、1.00当量)。添加结束后，继续在10℃下搅拌12小时，之后用HPLC对产率和杂质的副反应量进行分析。

产率：97％、反应选择率：99％

(实施例3～6)

除了将pH控制在9.5-10.0、10.0-10.5、10.5-11.0、9.0-13.0以外，与实施例2同样地进行反应。

[表2]

实施例	反应pH	产率	反应选择率
				3	9.5-10.0	98％	99％
4	10.0-10.5	98％	99％
				5	10.5-11.0	98％	99％
6	9.0-13.0	98％	99％

(实施例7)

除了将含有L-叔亮氨酸的水溶液冷却到20℃以外，与实施例6同样地进行反应。

产率：97％、反应选择率：99％

(实施例8)

除了将L-叔亮氨酸替代成D-叔亮氨酸以外，与实施例6同样地进行反应。

D-叔亮氨酸的分析与L-叔亮氨酸同样地进行实施。

产率：97％、反应选择率：99％

(实施例9)

除了将L-叔亮氨酸替代成消旋体叔亮氨酸以外，与实施例6同样地进行反应。

消旋体叔亮氨酸的分析与L-叔亮氨酸同样地进行实施。

产率：97％、反应选择率：98％

(比较例1)

将L-叔亮氨酸(85.0g、0.65mol)溶解于15质量％的氢氧化钠水溶液(191.7g)中，在保持在5～15℃的同时，将氯甲酸甲酯(68.9g、0.73mol、1.13当量)历经1小时滴入反应液中。此时，一边适当添加15质量％的氢氧化钠将反应液pH保持在9.0～9.5，一边进行反应。滴完氯甲酸甲酯后，在20℃继续搅拌1小时。

产率：90％、反应选择率：90％

(比较例2)

除了将pH控制在10.0-10.5以外，与比较例1同样地进行反应。

产率：93％、反应选择率：93％

(比较例3)

除了将pH控制在13.5-14.0以外，与比较例1同样地进行反应。

产率：82％、反应选择率：97％

(比较例4)

在29.3g含有L-叔亮氨酸(2.18g、0.017mol)和氢氧化钠(2.35g、0.059mol)的水溶液中加入9.1ml二氧杂环己烷后，在室温下慢慢添加氯甲酸甲酯(1.57g、0.017mol、1.00当量)。添加结束后，升温到60℃，搅拌14小时。得到的溶液用HPLC进行分析，结果发现N-甲氧羰基叔亮氨酸的生成量只有1.0g。另外，得到的溶液的pH在30℃显示为pH13.9。而且，反应开始时的pH也超过了14。

产率：33％、反应选择率：63％

(实施例10)

将含有L-叔亮氨酸(10.36g、0.079mol)的水溶液(101.06g)冷却至5℃，然后在使用48重量％的氢氧化钠水溶液将溶液pH控制在9.0-9.5的同时，慢慢加入氯甲酸苄酯(13.49g、0.079mol、1.00当量)。添加结束后，继续在20℃下搅拌14小时，之后用HPLC对产率和杂质的副产量进行分析。

产率：96％、反应选择率：97％

(实施例11、12)

除了将反应时的pH控制在10.0-10.5、9.0-13.0以外，与实施例10同样地进行反应。

[表3]

实施例	反应pH	产率	反应选择率
				11	10.0-10.5	97％	98％
12	9.0-13.0	97％	97％

(实施例13)

除了将含有L-叔亮氨酸的水溶液冷却至20℃以外，与实施例12同样地进行反应。

产率：97％、反应选择率：98％

(实施例14)

除了将L-叔亮氨酸替代成D-叔亮氨酸以外，与实施例12同样地进行反应。

产率：97％、反应选择率：98％

(实施例15)

除了将L-叔亮氨酸替代成消旋体叔亮氨酸以外，与实施例12同样地进行反应。

产率：97％、反应选择率：99％

(比较例5)

除了将氯甲酸甲酯替代成氯甲酸苄酯以外，与比较例1同样地进行反应。

产率：90％、反应选择率：90％

(比较例6)

除了将反应时的pH保持在10.0-10.5以外，与比较例5同样地进行反应。

产率：94％、反应选择率：94％

(比较例7)

除了将反应时的pH保持在14.0以上以外，与实施例10同样地进行反应。

产率：86％、反应选择率：95％

(实施例16)

除了将氯甲酸甲酯替代成氯甲酸乙酯以外，与实施例6同样地进行反应。

产率：97％、反应选择率：98％

(实施例17)

将含有L-叔亮氨酸(20.5g、0.16mol)的水溶液(250.5g)冷却至7℃，然后向其中加入16.5g的48重量％的氢氧化钠后，在将溶液pH保持在9.4-10.8的同时，慢慢加入二碳酸二叔丁酯(34.92g、0.16mol、1.00当量)。添加结束后，继续在20℃下搅拌14小时，之后用HPLC对产率和杂质的副产量进行分析。

产率：96％、反应选择率：98％

(实施例18)

除了将L-叔亮氨酸替代成D-叔亮氨酸以外，与实施例17同样地进行反应。

产率：97％、反应选择率：97％

(实施例19)

除了将L-叔亮氨酸替代成消旋体叔亮氨酸以外，与实施例17同样地进行反应。

产率：96％、反应选择率：98％

(比较例8)

除了将氯甲酸甲酯替代成二碳酸二叔丁酯、温度保持在20℃到30℃以外，与比较例1同样地进行反应。

产率：89％、反应选择率：89％

(比较例9)

除了将反应时的pH保持在10.0-10.5以外，与比较例8同样地进行反应。

产率：92％、反应选择率：92％

(实施例20)

使用30重量％的氢氧化钠，在搅拌下将1150g含有100g L-叔亮氨酸(762mmol)的水溶液的pH调整为9。之后，添加160g异丙醇。在25℃下，在用30重量％的氢氧化钠将pH保持在8.5～9.5的同时，向其中加入174.7g(800mmol)二碳酸二叔丁酯。搅拌约3小时后，对得到的反应混合物进行分析，结果发现生成了175gN-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸(产率99％)。

在25℃下加入600g甲苯，用35重量％的盐酸将pH调整为3。对在相同温度下分离得到的有机层进行分析，结果发现含有174g的化合物(1)(提取产率99％)。与专利文献3中的用芳香烃溶媒在20～30℃的室温附近基本上不能回收化合物(1)的记载相比，可确认到本发明的显著效果。

将上述提取液用300g水洗涤2次后，将液量浓缩到约300g。添加200g甲苯，只浓缩添加量部分，重复2次该操作，然后将液量最终调整为270g。此时，相对于N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸，水分为0.01w/w％。

向在45℃获得的浆液中加入570g正己烷。之后冷却到0℃，保持1小时后分离结晶。干燥溶媒，得到161gN-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的白色结晶(总产率91％)。

将得到的结晶进行粉末X射线(Cu-Kα)衍射测定，确认为结晶A(图1)。粉末X射线(Cu-Kα)衍射中的主要衍射角(2θ±0.1)：11.0°、12.6°、15.1°、16.3°、18.6°、19.4°、21.3°以及22.2°。

(实施例21)

将6.17g结晶B在50℃下溶解于由12.33g甲苯、0.02g叔丁醇组成的溶媒中，添加25g正己烷使之结晶化。相对于结晶B，水分量为0.005w/w％。冷却至室温，分离、干燥结晶，得到4.94g结晶(产率90％)。

将得到的结晶进行粉末X射线(Cu-Kα)衍射测定，确认为结晶A。

(实施例22)

将2.15gN-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的结晶A溶解于由12g甲基环己烷、0.46g叔丁醇和0.44g水组成的溶媒中，将液量浓缩到3.4g。加入21g甲基环己烷，将液量浓缩到2.8g。在其中加入21g甲基环己烷，得到浆液。此时的水分浓度为0.14重量％，相对于结晶A为1.5w/w％。分离、干燥结晶，得到1.83g结晶(产率80％)。

将得到的结晶进行粉末X射线(Cu-Kα)衍射测定，确认为结晶B。

(实施例23)

向1.44gN-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的结晶A中加入0.03g叔丁醇、0.03g水、2g甲苯，在50℃下使其溶解，添加6g正己烷(相对于化合物(1)的水分量为2.1w/w％)。加入1mg结晶B促进结晶化，冷却到室温后，分离结晶，得到1.00g结晶(产率69％)。

将得到的结晶进行粉末X射线(Cu-Kα)衍射测定，确认为结晶B。

(实施例24)

将2.5gN-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的结晶A混悬于15.4g水中，加入1.8g30重量％的氢氧化钠使其溶解。在用冰冷却下，添加1.4g35重量％的盐酸，在添加过程中就发生了结晶化(相对于化合物(1)的水分量为703w/w％)。搅拌1小时后，分离、干燥结晶，得到2.30g结晶(产率92％)。将该结晶进行粉末X射线(Cu-Kα)衍射测定，确认为结晶B(图2)。

粉末X射线(Cu-Kα)衍射中的主要衍射角(2θ±0.1)：8.6°、14.4°、15.9°、17.3°、19.0°、21.9°以及22.3°。

(实施例25)

在甲苯/正己烷＝1/5(w/w)的溶媒中，分别混悬N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的结晶A、B，保持4小时后，过滤浆液，比较母液浓度。在结晶A的情形下，母液浓度为0.4重量％，在结晶B的情形下，母液浓度为0.8重量％。对于混悬了结晶B的浆液，对72小时后的母液浓度进行测定，结果为0.4重量％，对72小时后得到的结晶通过粉末X射线(Cu-Kα)衍射进行测定，结果为结晶A。

(参考例)

将100g(432mmol)N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸的结晶A溶解于400g甲苯中，在室温下添加54g35％的盐酸(519mmol)。在60℃的热水浴中搅拌3小时后，扔掉有机层，得到水层。将由80g甲醇和52.6g三乙胺(520mmol)组成的溶液保持在60℃的热水浴中，向其中慢慢加入上述水层，得到浆液。之后在冰浴中冷却，保持1小时后分离、干燥结晶，得到52gL-叔亮氨酸的结晶(产率92％)。

Claims (14)

1.一种制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法，其特征在于，在使用碱性试剂将溶液pH控制在9～13范围内的同时，相对于叔亮氨酸，使0.90倍摩尔以上1.00倍摩尔以下的N-烷氧羰化剂在水存在下与叔亮氨酸作用。

2.根据权利要求1所述的制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法，其中，使叔亮氨酸和N-烷氧羰化剂进行作用时的pH为9以上11以下。

3.根据权利要求1或2所述的制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法，其中，N-烷氧羰化剂为氯甲酸烷基酯或二碳酸二烷基酯。

4.根据权利要求3所述的制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法，其中，N-烷氧羰化剂为烷基碳数为1～10的氯甲酸烷基酯或二碳酸二烷基酯。

5.根据权利要求4所述的制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法，其中，N-烷氧羰化剂为氯甲酸甲酯、氯甲酸乙酯、氯甲酸苄酯、二碳酸二叔丁酯中的任意一个。

6.根据权利要求1～5中任意一项所述的制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法，其中，在调整反应液pH时使用的碱性试剂为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾中的任意一个。

7.根据权利要求6所述的制备N-烷氧羰基叔亮氨酸的方法，其中，碱性试剂被用作30重量％以上50重量％以下的水溶液。

8.一种制备N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸的方法，其特征在于，相对于使叔亮氨酸和N-烷氧羰化剂反应得到的N-烷氧羰基叔亮氨酸的碱性水溶液，使0.01～5倍重量的用下式(2)表示的羟基化物中的至少一种与该碱性水溶液共存后，加入酸和不与水混合的溶媒，用不与水混合的溶媒提取N-烷氧羰基-L-叔亮氨酸，

ROH  (2)

R表示可具有取代基的碳数为1～6的烷基。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其中，N-烷氧羰基叔亮氨酸为N-叔丁氧羰基-L-叔亮氨酸。

10.根据权利要求8或9所述的制备方法，其中，不与水混合的溶媒为戊烷、己烷、庚烷、环己烷、甲基环己烷、甲苯、醋酸乙酯、醋酸异丙酯、甲基异丁基酮中的至少1种。

11.根据权利要求8～10中任意一项所述的制备方法，其中，将提取液中的水量相对于N-烷氧羰基叔亮氨酸调整为小于0.1w/w％之后，再进行结晶。

12.根据权利要求8～10中任意一项所述的制备方法，其中，将提取液中的水量相对于N-烷氧羰基叔亮氨酸调整为0.1w/w％以上之后，再进行结晶。

13.一种N-叔丁氧羰基叔亮氨酸的结晶，其特征在于，在Cu-Kα的粉末X射线衍射中，在11.0°、12.6°、15.1°、16.3°、18.6°、19.4°、21.3°以及22.2°的衍射角2θ±0.1处具有峰值。

14.一种N-叔丁氧羰基叔亮氨酸的结晶，其特征在于，在Cu-Kα的粉末X射线衍射中，在8.6°、14.4°、15.9°、17.3°、19.0°、21.9°以及22.3°的衍射角2θ±0.1处具有峰值。

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