CN102227436A - 作为丙型肝炎病毒抑制剂的大环化合物 - Google Patents

作为丙型肝炎病毒抑制剂的大环化合物 Download PDF

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Abstract

公开具有通式(I)的丙型肝炎病毒抑制剂。还公开包含该化合物的组合物和采用该化合物抑制HCV的方法。

Description

作为丙型肝炎病毒抑制剂的大环化合物
相关申请的交叉引用
本申请要求2008年9月29日提交的美国临时申请系列号61/100,901的权益。
本公开一般涉及抗病毒化合物，且更具体地涉及抑制由丙型肝炎病毒(HCV)编码的NS3蛋白酶(本文也称为“丝氨酸蛋白酶”)的功能的化合物、包含这类化合物的组合物和抑制NS3蛋白酶功能的方法。
HCV是主要的人病原体，感染全世界约1.7亿人-大致上是受人免疫缺陷1型病毒感染的数量的5倍。这些HCV的大部分感染的个体发展成严重的进行性肝病，包括肝硬化和肝细胞癌。
目前，最有效的HCV疗法是采用α-干扰素和利巴韦林的组合，对40％患者产生持续效果。近来的临床结果表明，聚乙二醇化的α-干扰素优越于作为单一疗法的未修饰的α-干扰素。然而，即使用涉及聚乙二醇化的α-干扰素和利巴韦林的组合的实验性治疗方案，大部分患者的病毒载荷量并未持续减少。因此，存在显然和未满足的开发有效疗法以治疗HCV感染的需求。
HCV是正链RNA病毒。根据推断出的氨基酸序列的比较和在5’未转译区域的大量相似性，在黄病毒科中已经将HCV分为单独的属。黄病毒科的所有成员都具有包膜病毒体，它们含有通过单一、连续的开放阅读框的转译来编码所有已知的病毒特异性蛋白的正链RNA基因组。
在遍及HCV基因组的核苷酸和编码氨基酸序列中发现相当大的异质性。6种主要基因型已经被特征鉴定，超过50个亚型已经被描述。HCV的主要基因型在全世界的分布不同，尽管就基因型对发病机理和治疗的可能作用的研究有许多，但HCV的遗传异质性的临床意义始终难以确定。
单链HCV RNA基因组的长度约为9500个核苷酸并具有一个编码约3000个氨基酸的单一大的多聚蛋白的单一可读框(ORF)。在感染细胞中，该多聚蛋白在多个位点上被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶切割，产生结构蛋白和非结构(NS)蛋白。就HCV而言，成熟的非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的生成是通过两种病毒蛋白酶实现的。一般认为，第一种在NS2-NS3接点进行切割；第二种是包含在NS3的N末端区内的丝氨酸蛋白酶并且介导NS3下游所有的后续切割，在NS3-NS4A切割位点为顺式，这两者在其余NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位点则为反式。NS4A蛋白似乎有多种功能，起NS3蛋白酶辅因子的作用，并可能协助NS3和其它病毒复制酶组分进行膜定位。NS3蛋白与NS4A的复合物的形成对促进在全部位点的蛋白水解裂解的有效的多蛋白处理是非常重要的。NS3蛋白还显示出核苷三磷酸酶和RNA解旋酶活性。NS5B是参与HCV复制的依赖于RNA的RNA聚合酶。
本公开提供可抑制例如，与NS4A蛋白酶结合的NS3蛋白酶的功能的肽化合物。此外，本公开描述给予患者的联合疗法，由此可与具有抗HCV活性的的其它化合物一起给予有效抑制HCV NS3蛋白酶的根据本公开的化合物。
在其第一个方面，本公开提供式(I)化合物
Figure BPA00001375035800021
或其药学上可接受的盐，其中
n和n’各自独立为0、1、2或3；
R1选自羟基和-NHSO2R6；
R2选自氢、链烯基、烷基和环烷基，其中的链烯基、烷基和环烷基各自任选被1、2、3或4个卤代取代；
R3选自氢、烷氧基、烷基硫烷基、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基(sulfoxyl)和羟基；
各R4和R4’独立选自烷氧基、烷基、氰基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NRaRb；
R5选自氢、链烯基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基和杂环基烷基；其中的烷基和环烷基各自任选被选自烷氧基、卤代烷氧基、卤代、卤代烷基、氰基和二烷基氨基的一个基团取代；
R6选自烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基和-NRaRb；其中的烷基和环烷基各自任选被选自烷基、烷氧基、卤代、卤代烷基、氰基、氰基烷基和卤代烷氧基的一个基团取代；
Ra和Rb独立选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、卤代烷基、杂环基和杂环基烷基；
Q是C4-8饱和或不饱和链，其中的链任选被独立选自烷基、卤代和卤代烷基的1、2、3或4个基团取代，其中的烷基和卤代烷基可任选形成带有它们所连接的碳原子的3-7元环；和
Z选自O、CH2和NRz，其中Rz选自氢和烷基。
在第一方面的第一个实施方案中，本公开提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是-NHSO2R6。在第一方面的第二个实施方案中，n和n′各为0或1。在第一方面的第三个实施方案中，Q是C4-7饱和未取代链和Z是O。在第一方面的第四个实施方案中，R3是烷氧基。在第一方面的第五个实施方案中，R2选自链烯基、被两个卤代基取代的烷基和未取代的环烷基。在第一方面的第六个实施方案中，R5是烷基。
在第一方面的第七个实施方案中，本公开提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1是-NHSO2R6；
R2选自链烯基、被两个卤代基取代的烷基和未取代的环烷基；和
R5是烷基。
在第一方面的第八个实施方案中，本公开提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中
n和n′各为0或1；
R1为-NHSO2R6；其中R6是环烷基；
R2选自链烯基、被两个卤代基取代的烷基和未取代的环烷基；
R3是烷氧基；
R5是烷基；
Q是C4-7饱和未取代的链；和
Z是O。
在第二方面，本公开提供包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的组合物。在第二方面的第一个实施方案中，所述组合物进一步包含具有抗HCV活性的至少一种其它化合物。在第二方面的第二个实施方案中，至少一种其它化合物是干扰素或利巴韦林。在第二方面的第三个实施方案中，干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合α干扰素、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素τ。
在第二方面的第四个实施方案中，本公开提供包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的载体和具有抗HCV活性的至少一种其它化合物的组合物，其中至少一种其它化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、促进1型辅助T细胞响应发生的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫德、利巴韦林、肌苷5′-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
在第二方面的第五个实施方案中，本公开提供包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的载体和具有抗HCV活性的至少一种其它化合物的组合物，其中至少一种其它化合物有效抑制选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入(entry)、HCV组装、HCV排出(egress)、HCV NS5A蛋白和IMPDH的靶目的功能，以用于治疗HCV感染。
在第三个方面，本公开提供包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐、具有抗HCV活性的1、2、3、4或5种其它化合物和药学上可接受的载体的组合物。在第三方面的第一个实施方案中，组合物包含具有抗HCV活性的的3或4种其它化合物。在第三方面的第二个实施方案中，组合物包含具有抗HCV活性的1或2种其它化合物。
在第四方面，本公开提供治疗患者的HCV感染的方法，包括给予患者治疗有效量的式(I)或其药学上可接受的盐。在第四方面的第一个实施方案中，该方法进一步包括在给予式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予具有抗HCV活性的至少一种其它化合物。在第四方面的第二个实施方案中，至少一种其它化合物是干扰素或利巴韦林。在第四方面的第三个实施方案中，干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合α干扰素、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素τ。
在第四方面的第四个实施方案中，本公开提供治疗患者的HCV感染的方法，包括在给予式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予患者治疗有效量的式(I)或其药学上可接受的盐和具有抗HCV活性的至少一种其它化合物，其中至少一种其它化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、促进1型辅助T细胞响应发生的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫德、利巴韦林、肌苷5′-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
在第四方面的第五个实施方案中，本公开提供治疗患者的HCV感染的方法，包括在给予式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予患者治疗有效量的式(I)或其药学上可接受的盐和具有抗HCV活性的至少一种其它化合物，其中至少一种其它化合物有效抑制选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV排出、HCVNS5A蛋白和IMPDH的靶标的功能，以用于治疗HCV感染。
在第五方面，本公开提供治疗患者的HCV感染的方法，包括在给予式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予患者治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和具有抗HCV活性的1、2、3、4或5种其它化合物。在第五个方面的第一个实施方案中，该方法包括给予具有抗HCV活性的3或4种其它化合物。在第五个方面的第二个实施方案中，该方法包括给予具有抗HCV活性的1或2种其它化合物。
本发明的其它方面可包括本文所公开的各实施方案的适用的组合。
在本文提供的描述中仍可发现其它各方面和各实施方案。
本公开在本文中的描述应当解释为与化学成键的定律和原则一致。在某些情况下，为了在任何给定位置容纳取代基，可能必需去掉氢原子
应该理解，本公开所包括的化合物为用作药物时适当稳定的化合物。
意欲使在分子特定位置上的任何取代基或变量的定义独立于该分子在其它位置上的定义。例如，当u为2时，两个R1基团的每一个可以相同或者不同。
本说明书中所引用的所有专利、专利申请和参考文献都通过引用其全部结合到本文中。在不一致的情况下，以本公开(包括定义)为准
本文所用的单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数范围，除非文中另有明确说明。
术语“链烯基”，如本文中所用的那样，指含有至少一个碳-碳双键的具有2-6个碳原子的直链或支链基团。
术语“烷氧基”，如本文中所用的那样，指通过氧原子连接母体分子部分的烷基。
术语“烷基”，如本文中所用的那样，指衍生自含有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃的基团。
术语“烷基硫烷基”，如本文中所用的那样，指通过硫原子连接母体分子部分的烷基。
含有1-6个碳原子的支链饱和烃。
术语“烷基磺酰基(sulfaonyl)”，如本文中所用的那样，指通过磺酰基连接母体分子部分的烷基。
含有1-6个碳原子的支链饱和烃。
术语“烷基亚磺酰基”，如本文中所用的那样，指通过亚磺酰基连接于母体分子部分的烷基。
术语“芳基”，如本文中所用的那样，指苯基或双环稠合环系统，其中一个或两个环是苯基。双环稠合环系统由稠合到4-6元芳族或非芳族碳环的苯基组成。本发明的芳基可通过基团中任何可取代的碳原子连至母体分子部分。芳基的代表性实例包括，但不限于，茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。
术语“芳基烷基”，如本文中所用的那样，指被1、2或3个芳基取代的烷基。
术语“氰基”，如本文中所用的那样，指-CN。
术语“氰基烷基”，如本文中所用的那样，指被1、2或3个氰基取代的烷基。
术语“环烷基”，如本文中所用的那样，指具有3-7个碳原子和0个杂原子的饱和单环或双环烃环系统。环烷基的代表性实例包括，但不限于，环丙基、环丁基和环戊基。
术语“(环烷基)烷基”，如本文中所用的那样，指被1、2或3个环烷基取代的烷基。
术语“二烷基氨基”，如本文中所用的那样，指-NRpRq，其中Rp和Rq是烷基。烷基可相同或不同。
术语“卤代”和“卤素”，如本文中所用的那样，指F、Cl、Br和I。
术语“卤代烷氧基”，如本文中所用的那样，指通过氧原子连接于母体分子部分的卤代烷基。
术语“卤代烷基”，如本文中所用的那样，指被1、2、3或4个卤原子取代的烷基。
术语“杂环基”，如本文中所用的那样，指含有独立选自氮、氧和硫的1、2或3个杂原子的5-、6-或7-元环。5元环具有0-2个双键，6和7元环具有0-3个双键。术语“杂环基”还包括双环基团，其中的杂环基环稠合至苯基、单环的环烯基、单环的环烷基或另一个单环的杂环基；和三环基团，其中双环系统稠合至苯基、单环的环烯基、单环的环烷基或另一个单环的杂环基。本发明的杂环基可通过基团中的碳原子或氮原子连接母体分子部分。杂环基的实例包括，但不限于，苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异噻唑基、异唑基、吗啉基、
Figure BPA00001375035800082
唑基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、噻唑基、噻吩基和硫代吗啉基。
术语“杂环基烷基”，如本文中所用的那样，指被1、2或3个杂环基取代的烷基。
术语“羟基”，如本文中所用的那样，指-OH。
术语“-NRaRb”，如本文中所用的那样，指通过氮原子连接于母体分子部分两个基团，Ra和Rb。Ra和Rb独立选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、卤代烷基、杂环基和杂环基烷基。
本公开的化合物可作为药学上可接受的盐存在。本文所用的术语“药学上可接受的盐”表示本公开的化合物的盐或两性离子形式，它们是水溶性或油溶性的，或是可分散的，它们在合理的医学判断范围内，适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、变态反应或者其它问题或并发症，此与合理的利益/风险比相称，并有效用于其既定用途。可在化合物最终的分离和纯化期间制备其盐，或者可单独使合适的氮原子与合适的酸反应来制备化合物的盐。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐；二葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐(hemisulfate)、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲基苯磺酸盐(mesitylenesulfonate)、甲磺酸盐、亚萘基磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑姆酸盐(palmoate)、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。可用于形成药学上可接受的加成盐的酸的实例包括无机酸及有机酸，无机酸有例如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，有机酸有例如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。
可以在化合物最终的分离和纯化期间通过使羧基与合适的碱(例如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)反应或者与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺反应来制备碱加成盐。药学上可接受的盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁和铝，以及无毒的季铵阳离子例如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己胺、普鲁卡因、二苄胺、N，N-二苄基苯乙胺和N，N’-二苄基乙二胺。用于形成碱加成盐的其它代表性的有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
如本文中所用的那样，术语“抗HCV活性”意指有效治疗HCV病毒的化合物。
术语“本公开化合物”和等同表述，打算涵盖式(I)化合物及其药学上可接受的对映异构体、非对映异构体和盐。同样，对于中间体，在上下文允许的情况下，打算涵盖它们的盐。
术语“患者”包括人和其它哺乳动物。
术语“药用组合物”意指根据给药方式的类型和剂型的性质，包含与至少一种其它药物载体，即，佐剂、赋形剂或介质，诸如稀释剂、防腐剂、填料、流动调节剂、崩解剂、湿润剂、乳化剂、助悬剂、增甜剂、矫味剂、芳香剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂组合的本公开化合物的组合物。例如，可采用列于Remington’s制药学，18版，Mack Publishing Company，Easton，PA(1999)的各种成分。
本文所用的短语“药学上可接受的”是指这样的化合物、原料、组合物和/或剂型，它们在合理医学判断的范围内，适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、变态反应或其它问题和并发症，此与合理的利益/风险比相称。
术语″磺酰基″，如本文中所用的那样，指-SO2-。
术语″亚磺酰基″，如本文中所用的那样，指-S(O)-。
术语“治疗有效量”是指足以显示出有意义的患者益处(例如病毒负荷持续减少)的各活性组分的总量。当用于单独的活性成分单独给药时，该术语仅指该成分。当组合应用时，该术语则是指不论依次或同时联合给药时，引起治疗效果的活性成分的合并量。。
术语“治疗”和“处理”指：(i)防止可能易患疾病、障碍和/或病症但仍未被诊断出患有所述疾病的患者以免患上疾病、障碍或病症；(ii)抑制疾病、障碍或病症，即，阻止其发展；和/或(iii)缓解疾病、障碍或病症，即，使疾病、障碍和/或病症消退。
在用于本公开命名化合物的情况下，标号(designations)P1’、P1、P2、P2*、P3和P4，如本文中所用的那样，标出与天然肽裂解底物的结合相比较的蛋白酶抑制剂结合的氨基酸残基的相对位置。天然底物中的裂解发生在P1和P1’之间，其中非主要位点(nonprime positions)标明氨基酸自肽天然裂解位点的C-末瑞开始，向N-末端延伸；然而，主要位点自裂解位点标记的N-末端起始，并向C-末端延伸。例如，P1’指远离裂解位点C-末端的右手端的第一个位点(即，N-末端第一个位点)；而P1从C-末瑞裂解位点，P2的左手侧开始编号：自C-末端的第二个位点，等)。(参见Berger A.& Schechter I.，Transactions of the Royal Society London series(1970)，B257，249-264]。
不对称中心存在于本公开化合物中。例如，化合物可包括下式的P1环丙基成分
Figure BPA00001375035800111
其中C1和C2各表示环丙基环的1和2位的不对称碳原子。
Figure BPA00001375035800112
应理解，本公开涵盖所有立体化学形式或它们的混合物，其具有抑制HCV蛋白酶的能力。
本公开的某些化合物还可以不同的稳定构象形式存在，这类构象形式是可分离的。由于不对称单键周围阻碍旋转(例如因空间位阻或环张力)所致的扭转不对称性，可以使不同的构象异构体分离开来。本公开包括这些化合物的每一种构象异构体及其混合物。
某些本公开化合物可以两性离子形式存在，本公开包括这些化合物及其混合物的各种两性离子形式。
当可用于治疗时，治疗有效量的式(I)化合物及其药学上可接受的盐可作为未加工的化学药品给予，还可作为药物组合物的活性成分提供。因此，本公开还提供药物组合物，该药物组合物包括治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。式(I)化合物及其药学上可接受的盐如上所述。载体、稀释剂或赋形剂在其与制剂其它成分相容以及对其接受者无害的意义上来讲，必需是可接受的。根据本公开的另一个方面，还提供用于制备药物制剂的方法，该方法包括将式(I)化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。
药物制剂可呈单位剂型，每个单位剂量含有预定量的活性成分。本公开的化合物的剂量水平介于约0.01-约150毫克/千克(“mg/kg”)体重/天之间，优选介于约0.05-约100mg/kg体重/天之间，常常以单一疗法用于预防或治疗HCV介导的疾病。本公开的药物组合物通常将按每天约1次至约5次或者作为连续输注给予。这类给药法可用作长期或短期疗法。可与载体材料混合以制备单一剂型的活性成分的量将根据待治疗的疾病、病情的严重程度、给药时间、给药途径、所用化合物的排泄速率、疗程和患者年龄、性别、体重和身体状况而改变。优选的单位剂型制剂是含有本文上述活性成分的日剂量或分剂量或其适宜分数的单位剂型制剂。一般来说，治疗可用明显低于化合物最佳剂量的小剂量开始。此后，以较小的增量来加大剂量直到在这类情况下达到最佳效果。一般而言，最理想地给予化合物的浓度水平是通常可在抗病毒方面提供有效结果而又不致于引起任何有害或有毒的副作用。
当本公开组合物包含本公开化合物和一种或多种其它治疗和/或预防药的组合时，化合物和其它药物都可以少于或等于单一治疗方案中通常给予的剂量呈现。本公开的组合物可与一种或多种其它治疗或预防药共同配制，例如，单片和/或双/多层片剂形式，或者可将各治疗剂或预防剂分开给予。
药物制剂可适合于通过任何合适的途径给药，例如通过口服(包括口颊或舌下含服)、直肠、鼻、局部(包括口颊、舌下或经皮)、阴道或胃肠外(包括皮下、皮内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内(intralesional)、静脉内或者真皮内注射或输注)途径。这类制剂可按药剂学领域的任何已知方法制备，例如通过将活性成分与载体或赋形剂混合。
适合于口服给药的药物制剂可按独立的单位提供，例如胶囊剂或片剂；散剂或颗粒剂；水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用泡沫制剂或起泡制剂(whips)；或水包油乳液剂或油包水乳液剂。
举例来说，对于以片剂或胶囊剂形式的口服给药，活性药物组分可与药学上可接受的口服无毒惰性载体(例如乙醇、甘油、水等)相混合。通过将化合物粉碎成合适的微细尺寸，并与被同样粉碎的药用载体(例如淀粉或甘露醇等可食用的碳水化合物)混匀来制备散剂。还可存在矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
通过制备如上所述的粉状混合物，并装填到成形的明胶壳内，来制备胶囊剂。在装填操作之前，可将助流剂和润滑剂(例如胶态二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固态聚乙二醇)加到粉状混合物中。还可加入崩解剂或增溶剂(例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠)以改善胶囊剂摄入后的药物利用度。
此外，需要或必需时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺到混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成树胶(例如阿拉伯树胶、西黄蓍胶或藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、皂土、黄原胶等。例如，通过制成粉状混合物，制粒或预压片(slugging)，添加润滑剂和崩解剂，压制成片，从而制成片剂。将适当粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基料，并任选与粘合剂(例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮)、溶液阻滞剂(例如石蜡)、吸收加速剂(例如季盐)和/或吸收剂(例如皂土、高岭土或磷酸二钙)混合，来制备粉状混合物。可用粘合剂(例如糖浆、淀粉浆、阿拉伯胶浆(acadia mucilage)或者纤维素材料或聚合材料溶液)润湿后加压过筛，将粉状混合物制粒。制粒的一个替代方法是，可将粉状混合物通过压片机，结果是将成形不佳的团块再击碎制成颗粒。可通过添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油使颗粒润滑以防止粘到片剂成形冲模上。然后将经润滑的混合物压制成片剂。本公开的化合物还可与自由流动的惰性载体混合，无需通过制粒或预压片步骤便可直接压制成片剂。可提供透明或不透明的由虫胶密封衣、糖衣或聚合材料衣和蜡质抛光衣(polish coating of wax)组成的保护性包衣材料。可将染料加到这些包衣材料中以区别不同的单位剂量。
口服液体例如溶液剂、糖浆剂和酏剂可以剂量单位形式制备，从而使给定量含有预定量的化合物。糖浆剂可通过将化合物溶于适当调味的含水溶液中来制备，而酏剂可通过使用无毒溶媒制备。还可加入增溶剂和乳化剂(例如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、矫味添加剂(例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人造甜味剂)等。
如果适当的话，可将用于口服给药的剂量单位制剂微胶囊化。也可将制剂制成延时或持续释放，例如通过将微粒材料包衣或包埋在聚合物、蜡等中。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐还可以脂质体递药系统给予，例如小单层脂质体、大单层脂质体和多层脂质体。脂质体可由多种磷脂(例如胆固醇、十八烷基胺或磷脂酰胆碱)构成。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可通过使用单克隆抗体作为单独的载体(化合物分子与之偶联)递药。化合物也可与作为可靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。这类聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚或被棕榈酰残基取代的聚氧化乙烯聚赖氨酸。此外，化合物可与一类生物可降解的聚合物偶联，用于达到药物的控释，这类聚合物为例如聚乳酸、聚ε-己内酯(polepsilon caprolactone)、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联共聚物或两亲性嵌段共聚物。
适于经皮给药的药物制剂可作为离散的贴剂(discrete patches)存在，以在长时间段内保持与接受者表皮密切接触。例如，活性成分可由贴剂通过离子电渗疗法传递，一般如在Pharmaceutical Research，3(6)，318(1986)中所述。
适合于局部给药的药物制剂可制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、散剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。
为了治疗眼或其它外部组织(例如口和皮肤)，所述制剂优选作为局部软膏剂或乳膏剂来使用。当配制成软膏剂时，活性成分可以与石蜡族或水可混溶的软膏剂基料一起使用。或者，活性成分可以与水包油乳膏剂基料或油包水基料一起制成乳膏剂。
适合于眼局部给药的药物制剂包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮于合适的载体、尤其是水性溶剂中。
适合于口腔内局部给药的药物制剂包括糖锭剂、软锭剂和漱口剂。
适合于直肠给药的药物制剂可作为栓剂或作为灌肠剂呈现。
适合于经鼻给药的药物制剂(其中载体为固体)包括粗粉剂，其通过以鼻吸入方式给药，即通过从接近鼻子的粉剂容器中通过鼻通道快速吸入。用于作为鼻腔喷雾剂或滴鼻剂给药的合适制剂(其中载体为液体)包括活性成分的水性溶液剂或油性溶液剂。
适合于通过吸入给药的药物制剂包括微细粒子粉剂(dusts)或细雾剂(mists)，其可用不同类型计量的剂量压缩气溶胶、雾化吸入器或吹入器制备。
适合于阴道给药的药物制剂可以阴道栓、阴道塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂提供。
适于胃肠外给药的药物制剂包括水性和非水性无菌注射溶液剂及水性和非水性无菌混悬剂，水性和非水性无菌注射溶液剂可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂，并使制剂与待接受者血液等渗的溶质；水性和非水性无菌混悬剂可包括悬浮剂和增稠剂。制剂可以单位剂量或多剂量容器提供，例如密封的安瓿和小瓶，并可保存在冷冻-干燥(冻干)条件下，只需在临用前即刻加入无菌液体载体例如注射用水。临用时配制的注射溶液剂和混悬剂可由无菌粉针剂、颗粒剂和片剂制备。
应该理解，除了以上特别提到的成分以外，制剂还可包括与所述制剂类型有关的本领域常用的其它成分，例如适合于口服给药的这类制剂可包括矫味剂
下表1中列出了一些可与本公开的化合物一起给药的示例性化合物的实例。在联合疗法中，本公开的化合物可与其它抗HCV活性化合物共同或分开给药，或者将化合物掺到组合物中。
表1
Figure BPA00001375035800161
Figure BPA00001375035800171
Figure BPA00001375035800181
Figure BPA00001375035800201
Figure BPA00001375035800211
本公开的化合物还可用作实验室试剂。化合物可在为设计病毒复制实验、验证动物实验系统和结构生物学研究提供研究工具方面发挥作用，以进一步加深对HCV疾病机制的认识。此外，本公开的化合物可用于通过例如竞争性抑制来建立或确定其它抗病毒化合物的结合位点。
本公开的化合物还可用来处理或防止病毒污染材料，从而降低接触这类材料的实验室人员或医务人员或患者感染病毒的风险，所述材料为例如血液、组织、手术器械和衣物、实验室仪器和衣物及采血或输血设备和材料。
当通过合成方法制备，或者通过代谢过程(包括发生在人或动物身体内(体内)的那些过程)或者体外发生过程产生时，本公开意欲包括具有式(I)的化合物。
现在结合某些实施方案，对本公开进行描述，所述实施方案并不限制本公开的范围。相反，本公开涵盖所有可包括在权利要求书范围内的替代、修改和等同内容。因此，下列实施例，包括具体实施方案，将说明本公开的一种实践，要了解的是，实施例的目的是用于说明某些实施方案，并相信是以最有用和最易理解的方式对其方法和构思方面进行描述。
溶液百分数表示重量与体积关系，溶液比表示体积与体积关系，除非另有说明。核磁共振(NMR)谱用Bruker 300、400或500MHz分光计记录；化学位移(δ)用百万分之几报告。按照Still快速色谱技术(J.Org.Chem.1978，43，2923)，在硅胶(SiO2)上进行快速色谱法。
用于本申请的缩写，包括特别在下列示例性流程和实施例中的缩写为本领域技术人员所熟知。所使用的一些缩写如下：Ph指苯基；PPh3指三苯膦；DME指1，2-甲氧基乙烷；EtOAc指乙酸乙酯；Et3N指三乙胺；TMS指三甲基甲硅烷基；DCM指二氯甲烷；Me指甲基；DMF指N，N-二甲基甲酰胺；TBAF指氟化四丁基铵；THF指四氢呋喃；Hex指己烷；TFA指三氟乙酸；HATU对O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲
Figure BPA00001375035800221
磷酸盐；DCE指1，2-二氯乙烷；MeOH指甲醇；MeOD指CD4OD；pTSA或pTsoH指对甲苯磺酸；和DIEA指二异丙基乙胺。
用来合成本公开化合物的初始原料为本领域技术人员所知，并易于制备或由商业途径得到。
下面展示的以下方法只用于说明用途，并不打算限制本权利要求书的范围。应意识到，可能有必要制备这样的化合物，其中采用常规保护基保护官能团，然后除去保护基得到本公开的化合物。就本公开的保护基的使用的详情为本领域技术人员所知。
中间体1的制备：
Figure BPA00001375035800231
将1，4-二溴苯(4.56g，19.33mmol)、碳酸钾(6.16g，44.6mmol)和2-乙烯基苯基硼酸(2.2g，14.87mmol)的DME(75mL)和水(15mL)(在压力容器中)溶液用氮气鼓泡15min。将四(三苯膦)钯(0)(0.859g，0.743mmol)加至容器和用氮气鼓泡15min。再加热反应至90℃过夜。冷却反应至r.t.并部分浓缩。使残余部分稀释于EtOAc中并先后用水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(100％己烷)纯化，得到呈透明油的4′-溴-2-乙烯基联苯(中间体1，2.43g，63％得率)。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 5.22(dd，J＝10.99，1.22Hz，1H)5.71(dd，J＝17.40，1.22Hz，1H)6.67(dd，J＝17.40，10.99Hz，1H)7.20-7.25(m，3H)7.31-7.40(m，2H)7.52-7.58(m，2H)7.62-7.67(m，1H).
中间体2的制备：
步骤1：
将碳酸2，5-二氧吡咯烷-1-基酯2-(三甲基甲硅烷基)乙基酯(11.73g，45.2mmol)加至(2S，4R)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸甲基酯、HCl盐(9.86g，54.3mmol)和三乙胺(18.9mL，136mmol)的乙腈(240mL)溶液并于r.t.下搅拌过夜。用水和乙醚猝灭反应。先后用1.0M HCl(2x)和盐水洗涤有机层。然后使其经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到产物。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.05(s，9H)0.95(t，J＝8.70Hz，1H)0.98-1.13(m，1H)1.83(d，J＝16.79Hz，1H)2.11(ddd，J＝13.20，7.86，4.88Hz，1H)2.20-2.39(m，1H)3.58-3.71(m，1H)3.75(d，J＝11.60Hz，3H)4.08-4.27(m，2H)4.41-4.60(m，2H).
步骤2：
于-78℃下，将草酰氯(8.9ml，93mmol)逐滴加至二甲亚砜(13.2ml，186mmol)的DCM(180ml)溶液中。于该温度下搅拌所形成的溶液30min。于-78℃下，加入(2S，4R)-2-甲基1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)4-羟基吡咯烷-1，2-二羧酸酯(12.25g，42.3mmol)的DCM(30mL)溶液。于-78℃下，在逐滴加入三乙胺(29.5ml，212mmol)前，搅拌所形成的浆状物1hr。室温下搅拌该溶液30分钟。再用1M HCl和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并蒸发。残余的浅棕色油经Biotage(0-33％EtOAc在己烷中)快速层析法纯化，得到呈橙色油的4-氧代吡咯烷-1，2-二羧酸(S)-2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(中间体2，9.5g，78％得率)。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm-0.04-0.12(m，9H)0.91-1.09(m，2H)2.61(dd，J＝18.77，2.59Hz，1H)2.87-3.04(m，1H)3.77(s，3H)3.92(br.s.，2H)4.19-4.26(m，2H)4.86(d，J＝10.07Hz，1H).
中间体3的制备：
Figure BPA00001375035800251
步骤1：
在氮气下，于圆底烧瓶中搅拌镁(0.110g，4.58mmol)屑30分钟。在镁表面产生刮痕。将10mL THF加至镁屑中并另外搅拌30min。在剧烈搅拌的回流下，逐滴加入THF(30mL)中的4′-溴-2-乙烯基联苯(中间体1，1.13g，4.36mmol)。0℃下，将Grignard溶液(40mL)加至(S)-4-氧代吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(中间体2，1.0g，3.53mmol)的甲苯(30mL)溶液中，并搅拌1hr，再用饱和NH4Cl溶液猝灭。含水层经DCM萃取。合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(20-33％EtOAc：Hex)的快速层析法纯化，得到呈黄色油的(2S，4R)-4-羟基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(0.5g，30％得率)。LCMS：rt＝1.92min.[M+Na]+＝490；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.然后保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.06(s，9H)0.88-1.14(m，2H)2.38-2.50(m，1H)2.74(dd，J＝13.58，10.22Hz，1H)3.89(d，J＝11.60Hz，2H)3.76-3.84(m，1H)3.86(s，3H)4.00(dd，1H)4.23(s，1H)4.24-4.28(m，1H)4.55-4.66(m，1H)5.20(dd，J＝10.99，1.22Hz，1H)5.71(dd，J＝17.55，1.07Hz，1H)6.70(dd，J＝17.40，10.99Hz，1H)7.28(dd，1H)7.34(dd，J＝7.17，1.68Hz，1H)7.37(d，J＝8.55Hz，2H)7.54(d，J＝8.24Hz，2H)7.65(d，J＝7.32Hz，1H).
步骤2：
于0℃下，将氢化钠(60％在油中)(0.08g，1.925mmol)加至(2S，4R)-4-羟基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(0.5g，1.069mmol)和甲基碘(0.12mL，1.925mmol)的DMF溶液中。于0℃下搅拌3hrs。再用饱和NH4Cl溶液和乙醚猝灭反应。用盐水洗涤乙醚层，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(20-40％EtOAc在己烷中)的快速层析法纯化，得到呈透明油的(2S，4R)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(160mg，31％得率)。LCMS：rt＝2.11min.[M+Na]+＝504；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm-0.04-0.13(m，9H)0.95-1.02(m，1H)1.03-1.08(m，1H)2.55(dd，J＝13.12，8.85Hz，1H)2.76-2.89(m，1H)3.00(s，3H)3.68-3.77(m，1H)3.78(s，3H)3.96-4.09(m，1H)4.20-4.31(m，2H)4.64(dd，J＝8.70，1.98Hz，1H)5.22(d，J＝11.90Hz，1H)5.72(d，J＝17.40Hz，1H)6.69(ddd，J＝17.40，10.99，2.44Hz，1H)7.29(d，J＝7.32Hz，1H)7.32-7.45(m，6H)7.66(d，J＝7.32Hz，1H).
步骤3：
于室温下，将氟化四丁基铵(0.830mL，0.830mmol)加至(2S，4R)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(100mg，0.208mmol)的THF(2mL)溶液中并于该温度下搅拌过夜。反应物用EtOAc稀释，并先后用水和盐水洗涤。收集有机层，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到(2S，4R)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(中间体3，630mg，100％得率)，它无需纯化直接用于后面的步骤。LCMS：rt＝1.14min.[M+Na]+＝360；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 2.51(dd，J＝13.58，9.61Hz，1H)2.71(dt，J＝13.73，2.44Hz，1H)2.99(s，3H)3.09(d，J＝12.21Hz，1H)3.30-3.43(m，1H)3.56(dd，J＝12.21，2.14Hz，1H)3.81(s，3H)3.97(dd，J＝9.77，2.75Hz，1H)5.21(dd，J＝10.99，1.22Hz，1H)5.72(dd，J＝17.70，1.22Hz，1H)6.71(dd，J＝17.70，10.99Hz，1H)7.27-7.31(m，1H)7.33-7.42(m，6H)7.60-7.72(m，1H).
中间体4的制备：
Figure BPA00001375035800271
步骤1：
将HATU(139mg，0.365mmol)加至(S)-2-((己-5-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸(128mg，0.498mmol)、DIEA(0.174mL，0.996mmol)和(2S，4R)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(112mg，0.332mmol)的DCM(5mL)溶液中。于室温下搅拌过夜反应。反应物经蒸发，并经Biotage(10-40％EtOAc在己烷中)纯化，得到呈透明油的(2S，4R)-1-((S)-2-((己-5-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(151mg，79％得率)。LCMS：rt＝2.05min.[M+Na]+＝599；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤2：
使(2S，4R)-1-((S)-2-((己-5-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(151mg，0.262mmol)溶解于DCE(26mL)并用氮气鼓泡15min。加入Hoveyda-Grubbs催化剂(16mg，0.026mmol)并于80℃的油浴中加热2小时，再用旋转蒸发器浓缩。粗产物经Biotage(10-50％EtOAc在己烷中)纯化，得到呈白色泡沫的产物(121mg，84％得率)。LCMS：rt＝1.91min.[M+Na]+＝571；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤3：
于室温下，将2.0M氢氧化锂(0.33mL，0.662mmol)加至来自步骤2的产物(121mg，0.221mmol)的THF(2mL)和甲醇(2mL)溶液中并搅拌过夜。反应物经乙醚稀释，用1M HCl和盐水洗涤。收集有机层，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。LCMS：rt＝1.69min.[M+Na]+＝557；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤4：
将10％披钯碳(25mg，0.023mmol)加至EtOAc(3mL)中的来自步骤的产物3(124mg，0.232mmol)中，并在氢气氛围下搅拌过夜。反应物通过Millipore millex-HV 0.45um玻璃料过滤并蒸发，得到中间体4(121mg，97％得率)。LCMS：rt＝1.68min.[M+Na]+＝559；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
化合物1的制备：
Figure BPA00001375035800291
将HATU(63mg，0.164mmol)加至中间体4(80mg，0.149mmol)、Hunig’s碱(0.078mL，0.447mmol)和(1R，2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷甲酰胺、对甲苯磺酸盐(90mg，0.224mmol)的DCM(2mL)溶液中。于室温下搅拌反应物过夜。蒸发粗产物，经制备型HPLC(Sunfire Prep C18 OBD 5u(30x100mm)纯化；流速＝42mL/min；溶剂梯度70∶30-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))，得到呈白色固体的化合物1(32mg，29％得率)。LCMS：rt＝1.91min.[M+Na]+＝771；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1HNMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.94-1.01(m，2H)1.04(s，9H)1.10-1.22(m，2H)1.12-1.23(m，1H)1.12-1.23(m，3H)1.28-1.37(m，4H)1.39-1.50(m，2H)1.95(t，J＝6.78Hz，1H)2.09(br.s.，1H)2.51(br.s.，1H)2.61-2.71(m，2H)2.95(br.s.，1H)3.10(s，3H)3.65(d，J＝10.29Hz，1H)3.73-3.87(m，1H)4.05(d，J＝10.29Hz，1H)4.17(d，J＝10.54Hz，1H)4.43(d，J＝9.79Hz，1H)4.48-4.62(m，1H)4.88(d，J＝9.03Hz，1H)5.19(d，J＝8.78Hz，1H)5.31(d，J＝17.32Hz，1H)5.77(d，J＝10.29Hz，2H)7.15-7.34(m，5H)7.34-7.49(m，3H).
化合物2的制备：
Figure BPA00001375035800301
将HATU(32mg，0.082mmol)加至中间体4(40mg，0.075mmol)、Hunig’s碱(0.039mL，0.224mmol)和(1S，2R)-2-氨基-N-(环丙基磺酰基)双(环丙烷)-2-甲酰胺、HCl盐(31mg，0.112mmol)的DCM(1.5mL)溶液中。于室温下搅拌反应物过夜。蒸发粗产物，经制备型HPLC(Sunfire Prep C18 OBD 5u(30x100mm)纯化；流速＝42mL/min；溶剂梯度70∶30-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))，得到呈白色固体的化合物2(26mg，44％得率)。LCMS：rt＝1.94min.[M+Na]+＝785；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220nm.1HNMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.33(d，J＝9.29Hz，1H)0.36-0.45(m，1H)0.50-0.67(m，2H)0.75-0.87(m，1H)0.89(t，J＝6.78Hz，2H)1.04(s，9H)1.11-1.21(m，4H)1.21-1.31(m，4H)1.31-1.46(m，4H)1.41-1.52(m，1H)1.79(dd，J＝7.91，5.65Hz，1H)2.42-2.59(m，1H)2.59-2.68(m，2H)2.68-2.79(m，1H)2.89-3.04(m，1H)3.06(s，3H)3.15(d，1H)3.61(d，J＝10.29Hz，1H)3.75-3.85(m，1H)3.93(d，1H)4.04(d，J＝10.29Hz，1H)4.15(d，J＝10.04Hz，1H)4.40(d，J＝10.29Hz，1H)4.49-4.57(m，1H)7.15-7.34(m，5H)7.34-7.48(m，3H).
化合物3的制备：
Figure BPA00001375035800311
将中间体5(用类似于合成中间体4的程序制备)(100mg，0.177mmol)、DIEA(0.093mL，0.531mmol)和HATU(74mg，0.195mmol)加至(1S，2R)-2-氨基-N-(环丙基磺酰基)双(环丙烷)-2-甲酰胺、TFA盐(79mg，0.221mmol)的DCM(2mL)溶液中。于室温下搅拌反应3天。蒸发粗产物，经制备型HPLC(Sunfire Prep C18 OBD 5u(30x100mm)纯化；流速＝42mL/min；溶剂梯度70∶30-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))，得到呈白色固体的化合物3(66mg，0.079mmol，45％得率)。LCMS：rt＝2.05min.[M+Na]+＝813；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220nm.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm0.15-0.29(m，2H)0.39-0.54(m，2H)0.59-0.72(m，2H)0.79(s，3H)0.81(s，3H)0.90-0.95(m，2H)0.98(s，9H)1.02-1.20(m，6H)1.20-1.33(m，2H)1.46-1.54(m，1H)1.54-1.62(m，1H)2.27-2.39(m，1H)2.40-2.47(m，2H)2.88-2.99(m，1H)3.02(s，3H)3.75(td，J＝10.45，5.04Hz，1H)3.88(d，J＝10.38Hz，1H)3.99(t，J＝8.24Hz，1H)4.02-4.13(m，1H)4.33(d，J＝9.77Hz，1H)4.40(d，J＝10.68Hz，1H)7.19(d，1H)7.26(td，J＝6.64，2.90Hz，2H)7.28-7.32(m，2H)7.33-7.39(m，4H)7.54(d，J＝9.77Hz，1H)8.49(br.s.，1H)10.35(s，1H).
化合物4的制备：
Figure BPA00001375035800321
将中间体5(用类似于合成中间体4的程序制备)(70mg，0.124mmol)、DIEA(0.065mL，0.372mmol)和HATU(52mg，0.136mmol)加至(1R，2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷甲酰胺、pTSA盐(74.8mg，0.186mmol)的DCM(2mL)溶液中。于室温下搅拌反应3天。蒸发粗产物，经制备型HPLC(Sunfire Prep C18OBD 5u(30x100mm)纯化；流速＝42mL/min；溶剂梯度70∶30-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))，得到呈白色固体的化合物4(26mg，0.032mmol，26％得率)。LCMS：rt＝2.03min.[M+Na]+＝799；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220nm.1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.71(br.s.，3H)0.84(d，J＝6.41Hz，3H)0.87-0.95(m，1H)0.98-1.05(m，2H)1.08(d，J＝5.49Hz，9H)1.21(br.s.，1H)1.26(s，1H)1.29-1.40(m，2H)1.40-1.49(m，2H)1.94(dd，J＝8.09，5.95Hz，1H)2.04-2.13(m，1H)2.34-2.45(m，1H)2.52(br.s.，1H)2.57-2.67(m，2H)2.69-2.79(m，1H)2.93(br.s.，1H)3.14(s，3H)3.20-3.27(m，1H)3.65(d，J＝9.16Hz，1H)3.78-3.91(m，2H)3.92-4.03(m，1H)4.03-4.10(m，1H)4.11-4.20(m，1H)4.23-4.34(m，1H)4.43-4.58(m，1H)4.88(d，J＝8.24Hz，1H)5.09-5.22(m，1H)5.27(br.s.，1H)5.64-5.83(m，1H)7.23(br.s.，1H)7.28-7.31(m，3H)7.33(d，J＝10.07Hz，2H)7.41-7.50(m，2H).
化合物5的制备：
Figure BPA00001375035800331
将(1S，2R)-2-氨基-N-(环丙基磺酰基)双(环丙烷)-2-甲酰胺、TFA盐(0.111g，0.111mmol)、DIEA(0.046mL，0.266mmol)和HATU(37mg，0.097mmol)加至中间体6(用类似于合成中间体4的程序制备)(50mg，0.089mmol)的DCM(1mL)溶液中。于室温下搅拌反应3天。蒸发粗产物，经制备型HPLC(Sunfire Prep C18 OBD 5u(30x100mm)纯化；流速＝42mL/min；溶剂梯度70∶30-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))，得到呈白色固体的化合物5(15mg，0.017mmol，20％得率)。LCMS：rt＝2.04min.[M+Na]+＝813；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.25-0.37(m，2H)0.59(d，J＝8.85Hz，2H)0.77(s，3H)0.80(s，2H)0.88(s，3H)1.03(s，9H)1.06(br.s.，2H)1.17(br.s.，2H)1.28(dd，J＝9.31，5.65Hz，1H)1.40(d，J＝4.58Hz，2H)1.84(dd，J＝7.93，5.80Hz，1H)2.41(br.s.，1H)2.59-2.69(m，1H)2.69-2.78(m，1H)2.97(br.s.，1H)3.11(s，3H)3.17-3.25(m，1H)3.20(d，J＝10.68Hz，1H)3.41(d，J＝10.68Hz，1H)3.67(s，1H)3.85(d，J＝11.60Hz，1H)3.98(d，J＝10.38Hz，1H)4.13(d，J＝10.07Hz，1H)4.27-4.43(m，3H)4.91(s，1H)5.35(br.s.，1H)6.81(s，1H)7.19-7.24(m，2H)7.28-7.46(m，6H)9.95(br.s.，1H).
化合物6的制备：
Figure BPA00001375035800341
将中间体6(用类似于合成中间体4的程序制备)(15mg，0.027mmol)、DIEA(0.014mL，0.080mmol)和HATU(11mg，0.029mmol)加至(1R，2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷甲酰胺、pTSA盐(16mg，0.040mmol)的DCM(0.5mL)溶液中。于室温下搅拌反应3天。蒸发粗产物，经制备型HPLC(Sunfire Prep C18 OBD 5u(30x100mm)纯化；流速＝42mL/min；溶剂梯度70∶30-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))，得到呈白色固体的化合物6(8.5mg，0.011mmol，40％得率)。LCMS：rt＝2.03min.[M+Na]+＝799；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.76(s，3H)0.78(s，1H)0.87(s，3H)0.92(br.s.，1H)1.02(br.s.，4H)1.03(s，9H)1.14-1.21(m，2H)1.30-1.40(m，2H)1.47-1.53(m，1H)1.88-2.01(m，1H)2.05-2.22(m，1H)2.35-2.46(m，1H)2.47-2.56(m，1H)2.56-2.64(m，1H)2.68-2.78(m，2H)2.90(br.s.，1H)3.11(s，3H)3.19(d，J＝10.68Hz，1H)3.46(s，1H)3.65(br.s.，1H)3.79-4.18(m，1H)4.26-4.38(m，2H)4.41(d，J＝10.38Hz，1H)5.16(d，J＝10.99Hz，1H)5.28(d，J＝17.09Hz，1H)5.47(br.s.，1H)6.87(br.s.，1H)7.23(d，J＝8.85Hz，2H)7.28(br.s.，2H)7.31-7.48(m，4H).
化合物7的制备：
Figure BPA00001375035800351
将中间体6(用类似于合成中间体4的程序制备)(15mg，0.027mmol)、DIEA(0.014mL，0.080mmol)和HATU(11mg，0.029mmol)加至(1R，2R)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-(二氟甲基)环丙烷甲酰胺、HCl盐(11mg，0.040mmol)的DCM(0.5mL)溶液中。于室温下搅拌反应3天。蒸发粗产物，经制备型HPLC(Sunfire Prep C18 OBD 5u(30x100mm)纯化；流速＝42mL/min；溶剂梯度70∶30-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))，得到呈白色固体的化合物7(9mg，0.010mmol，37％得率)。LCMS：rt＝2.03min.[M+Na]+＝823；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.78(s，3H)0.82(br.s.，2H)0.90(s，3H)0.98-1.03(m，1H)1.06(s，9H)1.16-1.28(m，2H)1.32-1.48(m，3H)1.63-1.73(m，1H)1.87-1.98(m，1H)2.14(br.s.，1H)2.38-2.46(m，1H)2.46-2.56(m，1H)2.64-2.81(m，2H)2.93(br.s.，1H)3.12(s，3H)3.22(d，J＝10.07Hz，1H)3.68(br.s.，1H)4.02(d，J＝10.99Hz，1H)4.12-4.29(m，1H)4.32-4.40(m，1H)4.40-4.46(m，1H)5.34(br.s.，1H)5.76-6.16(m，1H)6.66(br.s.，1H)7.16-7.27(m，2H)7.28-7.33(m，2H)7.37(m，4H)7.42(s，1H).
中间体7的制备：
Figure BPA00001375035800361
步骤1：
使4-溴-2-甲基联苯(5g，20.23mmol)悬浮于吡啶(23mL)和水(35mL)中。经20min时间分批加入高锰酸钾(16g，101mmol)。彻夜回流混合物。冷却反应混合物，滤去MnO2。将浓HCl加至滤液中直到产物沉淀。产物经DCM萃取，用水和盐水洗涤，收集，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发，得到呈白色固体的4-溴联苯-2-羧酸(5g，18.04mmol，89％得率)。LCMS：rt＝1.39min.；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤2：
使4-溴联苯-2-羧酸(5.71g，20.61mmol)溶解于THF(50mL)并冷却至0℃。经15min.逐滴加入1.0M硼烷四氢呋喃复合物(41.2mL，41.2mmol)并加热至室温过夜。反应物经EtOAc稀释，先后用水、饱和氯化铵和盐水洗涤。收集有机层，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物。粗产物经Biotage的快速层析法纯化(5-35％EtOAc：Hex)，得到呈浅橙色油的(4-溴联苯-2-基)甲醇(3.5g，13.30mmol，65％得率)。LCMS：rt＝1.43min.；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 4.60(d，J＝5.77Hz，2H)7.15(d，J＝8.28Hz，1H)7.29-7.35(m，2H)7.36-7.46(m，3H)7.48(dd，J＝8.28，2.01Hz，1H)7.75(d，J＝2.01Hz，1H).
步骤3：
将IBX(7.45g，26.6mmol)加至DMSO(40mL)中的(4-溴联苯-2-基)甲醇(3.5g，13.30mmol)中并于60℃下搅拌2小时。在冰浴中冷却反应，用水和乙醚稀释。用盐水洗涤醚层，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到呈橙色油的4-溴联苯-2-甲醛(3.32g，12.71mmol，96％得率)。LCMS：rt＝1.66min.；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 7.29-7.39(m，3H)7.43-7.58(m，3H)7.76(dd，J＝8.16，2.13Hz，1H)8.15(d，J＝2.01Hz，1H)9.91(s，1H).
步骤4：
将氢化钠(2.034g，50.9mmol)加至甲基溴化三苯基
Figure BPA00001375035800371
(9.1g，25.4mmol)的THF(60mL)溶液。0℃下搅拌混合物1hr。0℃下，逐滴加入4-溴联苯-2-甲醛(3.32g，12.71mmol)的THF(60mL)溶液。从0℃至室温搅拌该混合物过夜。反应经过滤并蒸发。残余物经乙醚稀释，先后用水和盐水洗涤。醚层经干燥(MgSO4)，过滤并蒸发，得到粗制物质。产物经Biotage(100％Hex)的快速层析法纯化，得到呈浅橙色液体的4-溴-2-乙烯基联苯(中间体7，2.5g，9.65mmol，76％得率)。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 5.24(d，J＝11.90Hz，1H)5.71(d，J＝17.40Hz，1H)6.64(dd，J＝17.40，10.99Hz，1H)7.17(d，J＝8.24Hz，1H)7.29-7.34(m，2H)7.34-7.39(m，1H)7.42(d，J＝7.63Hz，2H)7.45(dd，J＝8.09，1.98Hz，1H)7.77(d，J＝1.83Hz，1H).
中间体8的制备：
Figure BPA00001375035800381
步骤1：
于0℃下，将通过使中间体7与1eq.镁屑在THF中回流制备的溴化(2-乙烯基联苯-4-基)镁(2.66g，9.38mmol)溶液加至(S)-4-氧吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(2.7g，9.38mmol)的甲苯(75mL)溶液中，并搅拌1hr，再用饱和NH4Cl溶液猝灭。含水层经DCM萃取，合并的有机物经干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(20-33％EtOAc：Hex)的快速层析法纯化，得到(2S，4R)-4-羟基-4-(2-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(800mg，1.711mmol，18％得率)。LCMS：rt＝1.85min.[M+Na]+＝490；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤2：
于0℃下，将NaH(60％在油中)(0.239g，5.97mmol)加至(2S，4R)-4-羟基-4-(2-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(1.55g，3.31mmol)和甲基碘(0.373mL，5.97mmol)的DMF溶液中并在该温度下搅拌3hrs。再用饱和NH4Cl溶液和乙醚猝灭反应。用盐水洗涤醚层，干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(20-40％EtOAc在己烷中)的快速层析法纯化，得到呈透明油的(2S，4R)-4-甲氧基-4-(2-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(0.5g，1.038mmol，31％得率)。LCMS：rt＝2.11min.[M+Na]+＝504；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤3：
将TBAF(1.0M在THF中，4.1mL，4.1mmol)加至(2S，4R)-4-甲氧基-4-(2-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(500mg，1.038mmol)的THF(5mL)溶液，并于r.t.下搅拌过夜。反应物经EtOAc稀释，先后用水和盐水洗涤。收集有机层，经MgSO4干燥，过滤和用旋转蒸发器蒸发，得到(2S，4R)-4-甲氧基-4-(2-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(中间体8，360mg，1.067mmol，100％得率)。LCMS：rt＝2.03min.[M-MeOH]＝305；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
中间体9的制备：
Figure BPA00001375035800401
步骤1：
将(S)-2-((丁-3-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸(117mg，0.511mmol)、DIEA(0.179mL，1.022mmol)和HATU(143mg，0.375mmol)加至(2S，4R)-4-甲氧基-4-(2-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(115mg，0.341mmol)的DCM(4mL)溶液中。于室温下搅拌反应物过夜。反应物经蒸发，用Biotage的快速层析法(0-40％EtOAc：Hex)纯化，得到呈白色泡沫的(2S，4R)-甲基1-((S)-2-((丁-3-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基-4-(2-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸酯(150mg，0.273mmol，80％得率)。LCMS：rt＝1.89min.[M+Na]+＝571；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤2：
使(2S，4R)-1-((S)-2-((丁-3-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基-4-(2-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(150mg，0.273mmol)溶解于DCE(29mL)，并用氮气鼓泡15min。加入Hoveyda-Grubbs催化剂(二代)(17mg，0.027mmol)并于80℃的油浴中加热2小时。粗产物经Biotage(10-50％EtOAc/Hex)的快速层析法纯化，得到呈白色泡沫的产物(123mg，0.236mmol，86％得率)。LCMS：rt＝1.78min.[M+Na]+＝543；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤3：
用10％披钯碳(25mg，0.024mmol)处理乙酸乙酯(4mL)中的来自步骤2的产物(123mg，0.236mmol)，在氢气球下搅拌过夜。反应物通过Millipore millex-HV 0.45um塞过滤并蒸发，得到产物(113mg，0.216mmol，92％得率)。LCMS：rt＝1.83min.[M+Na]+＝545；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤4：
将2.0M氢氧化锂溶液(0.324mL，0.649mmol)加至来自步骤3的产物(113mg，0.216mmol)的THF(1mL)和MeOH(1.000mL)溶液并于r.t.下搅拌过夜。反应物经EtOAc稀释，和先后用1M HCl、盐水洗涤。收集有机层，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到中间体9(103mg，0.203mmol，94％得率)。LCMS：rt＝1.60min.[M+Na]+＝531；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
化合物8的制备：
Figure BPA00001375035800421
将中间体9(15mg，0.029mmol)、DIEA(0.015mL，0.088mmol)和HATU(12mg，0.032mmol)加至(1R，2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷甲酰胺、pTSA盐(14mg，0.035mmol)的DCM(1mL)的溶液中。于室温下搅拌反应物过夜。蒸发粗产物，经制备型HPLC(Sunfire Prep C18 OBD 5u(30x100mm)纯化；流速＝42mL/min；溶剂梯度70∶30-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))，得到呈白色固体的化合物8(7mg，9.29μmol，32％得率)。LCMS：rt＝1.80min.[M+Na]+＝743；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1HNMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.99-1.07(m，2H)1.11(s，9H)1.13-1.19(m，1H)1.26-1.34(m，2H)1.35-1.40(m，2H)1.48(dd，J＝8.85，5.49Hz，2H)1.74-1.86(m，1H)1.96(dd，J＝7.78，5.65Hz，1H)2.00-2.07(m，1H)2.29-2.42(m，1H)2.60(s，1H)2.86(br.s.，1H)2.90-2.97(m，1H)3.12(s，3H)3.67-3.73(m，1H)3.77(d，J＝10.38Hz，2H)4.70(d，J＝10.68Hz，1H)4.95(s，1H)5.01-5.10(m，1H)5.13(d，J＝10.38Hz，1H)5.22(d，J＝17.09Hz，1H)5.53(br.s.，1H)5.70-5.88(m，1H)6.44(br.s.，1H)7.24(d，J＝7.63Hz，2H)7.28-7.32(m，2H)7.34-7.40(m，2H)7.40-7.45(m，2H).
化合物9的制备：
Figure BPA00001375035800431
向(1R，2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷甲酰胺、pTSA盐(14mg，0.034mmol)的DCM(1mL)溶液加入中间体10(用类似于合成中间体9的方法制备)(15mg，0.029mmol)、DIEA(0.015mL，0.086mmol)和HATU(12mg，0.032mmol)。于R.t.下搅拌反应物过夜。蒸发粗产物，经制备型HPLC(Sunfire Prep C18 OBD 5u(30x100mm)纯化；流速＝42mL/min；溶剂梯度70∶30-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))，得到呈白色固体的化合物9(8.5mg，10.99μmol，38％得率)。LCMS：rt＝1.82min.[M+Na]+＝757；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.99-1.07(m，2H)1.11(s，9H)1.13-1.19(m，1H)1.26-1.34(m，2H)1.35-1.40(m，2H)1.48(dd，J＝8.85，5.49Hz，2H)1.74-1.86(m，1H)1.96(dd，J＝7.78，5.65Hz，1H)2.00-2.07(m，1H)2.29-2.42(m，1H)2.60(s，1H)2.86(br.s.，1H)2.90-2.97(m，1H)3.12(s，3H)3.67-3.73(m，1H)3.77(d，J＝10.38Hz，2H)4.70(d，J＝10.68Hz，1H)4.95(s，1H)5.01-5.10(m，1H)5.13(d，J＝10.38Hz，1H)5.22(d，J＝17.09Hz，1H)5.53(br.s.，1H)5.70-5.88(m，1H)6.44(br.s.，1H)7.24(d，J＝7.63Hz，2H)7.28-7.32(m，2H)7.34-7.40(m，2H)7.40-7.45(m，2H).
中间体11的制备：
Figure BPA00001375035800441
步骤1：
用氮气使1，4-二溴苯(5.11g，21.67mmol)、碳酸钾(6.91g，50.0mmol)和2-甲酰-4-甲氧基苯基硼酸(3g，16.67mmol)的DME(75mL)和水(15mL)(在压力容器中)的溶液鼓泡15min。加入Pd(Ph3P)4(0.578g，0.500mmol)，然后加热反应至90℃过夜。冷却反应至r.t.并用旋转蒸发器蒸发。用EtOAc稀释残余物，并先后用水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(5-15％EtOAc：Hex)的快速层析法纯化，得到呈白色固体的4′-溴-4-甲氧基联苯-2-甲醛(2.72g，9.34mmol，56％得率)。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 3.91(s，3H)7.18-7.26(m，3H)7.34(d，J＝8.24Hz，1H)7.52(d，J＝2.75Hz，1H)7.54-7.70(m，2H)9.94(s，1H).
步骤2：
将氢化钠(60％在油中，1.5g，37.4mmol)加至甲基溴化三苯基
Figure BPA00001375035800442
(6.67g，18.69mmol)的THF(30mL)溶液中。于0℃下搅拌混合物1hr。于0℃下，逐滴加入4′-溴-4-甲氧基联苯-2-甲醛(2.72g，9.34mmol)的THF (30mL)溶液。从0℃至室温搅拌该混合物过夜。反应经过滤并蒸发。残余物经乙醚稀释，用水和盐水洗涤。收集乙醚层，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(5-15％EtOAc：Hex)的快速层析法纯化，得到呈透明油的4′-溴-4-甲氧基-2-乙烯基联苯(中间体11，2.35g，8.13mmol，87％得率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 3.88(s，3H)5.23(dd，J＝10.92，1.13Hz，1H)5.70(dd，J＝17.44，1.13Hz，1H)6.66(dd，J＝17.44，10.92Hz，1H)6.90(dd，J＝8.41，2.63Hz，1H)7.16(d，J＝2.51Hz，1H)7.17-7.22(m，3H)7.49-7.57(m，2H).
化合物10：
Figure BPA00001375035800451
用类似于制备化合物4的程序制备化合物10。LCMS：rt＝1.99min.[M+Na]+＝829；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.71(br.S.，3H)0.79-0.91(m，3H)0.92-1.00(m，2H)1.09(s，9H)1.21(d，J＝8.24Hz，1H)1.31-1.39(m，3H)1.42(br.S.，2H)1.93(t，J＝6.87Hz，1H)2.07(q，J＝8.55Hz，1H)2.34-2.44(m，1H)2.50(br.S.，1H)2.54-2.66(m，1H)2.67-2.77(m，1H)2.85-2.99(m，1H)3.10(s，2H)3.16(s，2H)3.18-3.27(m，1H)3.64(d，J＝10.68Hz，1H)3.85(s，3H)3.92-4.01(m，1H)4.04-4.14(m，1H)4.17(d，J＝10.38Hz，1H)4.25-4.34(m，1H)4.45-4.58(m，1H)4.87(d，J＝8.55Hz，1H)5.08-5.21(m，1H)5.21-5.34(m，1H)5.54(d，J＝8.85Hz，1H)5.64-5.83(m，1H)6.75-6.90(m，2H)7.18(dd，J＝18.31，8.55Hz，1H)7.28-7.33(m，2H)7.36-7.46(m，2H)9.92(br.S.，1H).
化合物11：
Figure BPA00001375035800461
用类似于制备化合物3的程序制备化合物11。LCMS：rt＝2.02min.[M+Na]+＝843；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.30(br.s.，2H)0.50-0.62(m，2H)0.69(br.s.，3H)0.81(d，J＝9.16Hz，6H)0.91-1.01(m，3H)1.05(s，9H)1.09-1.22(m，2H)1.10-1.15(m，1H)1.32-1.40(m，2H)1.41-1.48(m，1H)1.77(br.s.，1H)2.42-2.62(m，4H)3.03(s，2H)3.11(s，1H)3.84(s，3H)3.85-3.93(m，2H)4.04-4.21(m，2H)4.38-4.51(m，1H)6.67-6.86(m，2H)7.06-7.21(m，1H)7.25-7.31(m，5H)7.39(br.s.，2H)9.91(br.s.，1H).
化合物12：
Figure BPA00001375035800462
用类似于制备化合物7的程序制备化合物12。LCMS：rt＝1.98min.[M+Na]+＝829；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1H NMR(500MHz，氯仿-d)
Figure BPA00001375035800471
ppm 0.77(s，3H)0.88(s，3H)1.00-1.01(m，2H)1.04(s，9H)1.16-1.24(m，2H)1.16-1.23(m，2H)1.33-1.40(m，2H)1.52(dd，J＝9.46，5.80Hz，1H)1.88-2.05(m，1H)2.05-2.23(m，1H)2.32-2.43(m，1H)2.53-2.63(m，1H)2.64-2.76(m，1H)2.79(dd，J＝12.82，7.02Hz，1H)2.89-3.00(m，1H)3.11(s，3H)3.15(s，1H)3.20(d，J＝10.38Hz，1H)3.58-3.73(m，1H)3.86(s，3H)4.00(d，J＝10.38Hz，1H)4.29-4.39(m，2H)4.42(d，J＝10.07Hz，1H)5.15-5.24(m，1H)5.27-5.38(m，1H)5.58-5.69(m，1H)5.75-5.86(m，1H)6.76-6.86(m，1H)6.81(s，1H)6.99(br.s.，1H)7.16(d，J＝8.55Hz，1H)7.30(s，1H)7.32(s，1H)7.38(d，J＝8.24Hz，2H)7.41-7.45(m，1H)9.85(br.s.，1H).
化合物13的制备：
Figure BPA00001375035800472
用类似于制备化合物5的程序制备化合物13。LCMS：rt＝2.02min.[M+Na]+＝843；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.24-0.45(m，2H)0.51-0.65(m，2H)0.78(s，3H)0.78-0.82(m，2H)0.88(s，3H)0.96-1.02(m，2H)1.01-1.05(m，9H)1.08-1.21(m，2H)1.27(dd，J＝9.46，5.80Hz，1H)1.34-1.45(m，2H)1.84(dd，J＝7.93，6.10Hz，1H)2.32-2.55(m，1H)2.56-2.68(m，1H)2.68-2.80(m，1H)2.92-3.05(m，1H)3.10(s，3H)3.21(d，J＝10.38Hz，1H)3.86(s，3H)3.94-4.17(m，1H)4.22-4.37(m，2H)4.41(d，J＝10.07Hz，1H)4.78-5.41(m，2H)5.34(br.s.，1H)6.76-6.86(m，3H)7.16(d，J＝8.55Hz，1H)7.21-7.27(m，2H)7.28-7.44(m，5H)9.77(br.s，1H).
化合物14的制备
步骤1：
将HATU(248mg，0.652mmol)加至(2S，4R)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(200mg，0.593mmol)，(S)-3，3-二甲基-2-((戊-4-烯基氧基)羰基氨基)丁酸(180mg，0.741mmol)和DIEA(0.311mL，1.778mmol)的DCM(8mL)溶液中并于r.t.下搅拌60小时。反应物经蒸发，并经Biotage(10-40％EtOAc：Hex)纯化，得到呈白色固体的产物(2S，4R)-1-((S)-3，3-二甲基-2-((戊-4-烯基氧基)羰基氨基)丁酰基)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(251mg，0.446mmol，75％得率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.96-1.00(m，1H)1.04-1.10(m，1H)1.11-1.21(m，7H)1.64-1.79(m，2H)2.06-2.20(m，2H)2.52(dd，J＝13.30，8.78Hz，1H)2.83-3.04(m，4H)3.72-3.82(m，3H)3.96-4.12(m，3H)4.15-4.21(m，1H)4.31-4.41(m，1H)4.86-5.10(m，3H)5.19-5.30(m，1H)5.41(d，J＝9.79Hz，1H)5.67-5.87(m，2H)6.61-6.76(m，1H)7.28-7.44(m，7H)7.61-7.71(m，1H).LCMS：r.t.＝2.18min.，[M+H]+＝563Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
步骤2：
用氮气对(2S，4R)-甲基1-((S)-3，3-二甲基-2-((戊-4-烯基氧基)羰基氨基)丁酰基)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸酯(251mg，0.446mmol)的DCE(100mL)溶液鼓泡30min.再加入Hoveyda-Grubbs催化剂(二代)(28mg，0.045mmol)，反应被密封并加热至100℃18小时。浓缩反应物，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(10-40％EtOAc在己烷中)的快速层析法纯化，得到呈白色固体的产物(196mg，0.367mmol，82％得率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.07(s，9H)1.63(dd，J＝12.17，8.66Hz，1H)1.88-2.02(m，1H)2.20-2.30(m，2H)2.33(dd，J＝12.42，10.92Hz，1H)3.05(s，3H)3.07-3.16(m，1H)3.72(d，J＝10.54Hz，1H)3.76-3.81(m，3H)3.91(dt，J＝10.35，3.73Hz，1H)4.20-4.30(m，1H)4.37(dd，J＝10.79，8.03Hz，1H)4.55(d，J＝9.79Hz，1H)4.87(d，J＝10.54Hz，1H)5.34(d，J＝9.79Hz，1H)5.96-6.06(m，1H)6.34(d，J＝15.81Hz，1H)7.29-7.36(m，3H)7.39-7.46(m，2H)7.48-7.58(m，3H).LCMS：r.t.＝2.13min.，[M+H]+＝535Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
步骤3：
在氢气氛围下搅拌来自步骤2的产物(196mg，0.367mmol)和10％Pd/C(39mg，0.037mmol)的EtOAc(10mL)溶液16小时。反应经尼龙玻璃料过滤并浓缩，得到呈白色固体的粗产物(194mg，0.361mmol，99％得率)。LCMS：r.t.＝2.08min.，[M+H]+＝537Phenomenex Luna S 10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
步骤4：
将2.0M氢氧化锂(0.90mL，1.80mmol)加至来自步骤3的产物(194mg，0.361mmol)的THF(3.00mL)和MeOH(3mL)溶液中并搅拌3小时。反应经乙醚和1.0M HCl稀释。有机层经干燥，过滤并蒸发，得到粗产物(180mg，0.344mmol，95％得率)。LCMS：r.t.＝1.85min.，[M+H]+＝523Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
步骤5：
将HATU(98mg，0.258mmol)加至(1S，2R)-2-氨基-N-(环丙基磺酰基)双(环丙烷)-2-甲酰胺、HCl盐(58mg，0.207mmol)、来自步骤4的产物(90mg，0.172mmol)和Hunig′s碱(0.090mL，0.517mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中并于r.t.下搅拌16小时。反应物经浓缩并经HPLC(XbridgeC1810u (30x100mm)纯化；流速＝42ml/min；溶剂梯度＝95∶5-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))。产物流分经浓缩，得到呈白色固体的化合物14(40mg，0.053mmol，31％得率)。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.27-0.39(m，2H)0.48-0.62(m，2H)0.81-0.93(m，1H)1.03(s，9H)1.06-1.21(m，6H)1.22-1.30(m，3H)1.41(br.s.，2H)1.51(br.s.，2H)1.76(dd，J＝8.03，5.52Hz，1H)2.28-2.38(m，1H)2.43-2.55(m，2H)2.93-3.02(m，2H)3.05(s，3H)3.59(br.s.，1H)3.91(d，J＝10.29Hz，1H)4.26-4.41(m，3H)4.45(d，J＝10.04Hz，1H)7.15-7.25(m，2H)7.28(d，J＝3.51Hz，2H)7.34(m，J＝8.03Hz，2H)7.56(m，J＝8.03Hz，2H).LCMS：r.t.＝1.99min.，[M+H]+＝749Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
化合物15的制备
将HATU(98mg，0.258mmol)加至(1R，2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷甲酰胺、TsOH盐(83mg，0.207mmol)、来自制备化合物14的步骤4的产物(90mg，0.172mmol)和Hunig′s碱(0.090mL，0.517mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中，并于r.t.下搅拌16小时。反应物经浓缩并经HPLC纯化(Xbridge C18 10u(30x100mm)；流速＝42ml/min；溶剂梯度＝95∶5-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))。产物流分经浓缩，得到呈白色固体的化合物15(676mg，0.090mmol，52％得率)。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.99-1.11(m，11H)1.11-1.27(m，4H)1.30-1.55(m，5H)1.88(dd，J＝8.03，5.52Hz，1H)2.16-2.27(m，1H)2.37(dd，J＝12.42，9.41Hz，1H)2.43-2.58(m，2H)2.88-3.05(m，2H)3.07(s，3H)3.59(t，J＝10.54Hz，1H)3.93(d，J＝10.29Hz，1H)4.30-4.39(m，2H)4.43(d，J＝10.54Hz，1H)5.12(dd，J＝10.29，1.76Hz，1H)5.29(dd，J＝17.19，1.38Hz，1H)5.78(ddd，J＝17.19，10.29，8.91Hz，1H)7.16-7.26(m，2H)7.28(d，J＝3.26Hz，2H)7.35(d，J＝8.03Hz，2H)7.58(d，J＝8.03Hz，2H).LCMS：r.t.＝1.97min.，[M+H]+＝735 Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
化合物16的制备
Figure BPA00001375035800521
步骤1：
将HATU(248mg，0.652mmol)加至(2S，4R)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(200mg，0.593mmol)、(S)-2-((2，2-二甲基戊-4-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸(201mg，0.741mmol)和DIEA(0.311mL，1.778mmol)的DCM(8mL)溶液，并于r.t.下搅拌60小时。反应物经蒸发，并经Biotage(10-40％EtOAc：Hex)纯化，得到呈白色固体的(2S，4R)-1-((S)-2-((2，2-二甲基戊-4-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(235mg，0.398mmol，67％得率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.83-0.94(m，6H)0.97-1.02(m，1H)1.06-1.10(m，1H)1.12-1.19(m，7H)1.95-2.07(m，2H)2.46-2.59(m，1H)2.88(d，J＝12.80Hz，1H)2.92-3.03(m，3H)3.65-3.74(m，1H)3.74-3.79(m，3H)3.79-3.86(m，1H)4.00-4.09(m，1H)4.14-4.21(m，1H)4.31-4.42(m，1H)4.85-4.92(m，1H)4.95-5.09(m，2H)5.17-5.26(m，1H)5.38-5.49(m，1H)5.67-5.84(m，2H)6.60-6.75(m，1H)7.25-7.30(m，1H)7.30-7.42(m，6H)7.61-7.68(m，1H).LCMS：r.t.＝2.25min.，[M+H]+＝591 Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
步骤2：
用氮气对(2S，4R)-甲基1-((S)-2-((2，2-二甲基戊-4-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸酯(235mg，0.398mmol)的DCE(100mL)溶液鼓泡30min.，再加入Hoveyda-Grubbs催化剂(二代)(25mg，0.040mmol)，反应被密封并加热至100℃18小时。浓缩反应物，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(10-40％EtOAc在己烷中)的快速层析法纯化，得到呈白色固体的产物(177mg，0.315mmol，79％得率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.95-1.01(m，3H)1.02-1.05(m，3H)1.05-1.10(m，9H)1.82-1.92(m，1H)2.26-2.44(m，2H)3.03-3.07(m，3H)3.14(ddd，J＝12.61，8.09，1.63Hz，1H)3.45(dd，J＝10.04，1.25Hz，1H)3.68-3.74(m，1H)3.76-3.81(m，3H)4.01(d，J＝10.04Hz，1H)4.39(dd，J＝10.79，8.03Hz，1H)4.52(d，J＝10.04Hz，1H)4.85(dd，J＝10.79，1.51Hz，1H)5.33(d，J＝10.04Hz，1H)6.16(ddd，J＝15.56，10.79，4.77Hz，1H)6.29-6.39(m，1H)7.29-7.36(m，3H)7.37-7.45(m，2H)7.47-7.53(m，2H)7.54-7.60(m，1H).LCMS：r.t.＝2.20min.，[M+H]+＝563Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
步骤3：
在氢气氛围下搅拌来自步骤2的产物(177mg，0.315mmol)和10％Pd/C(33mg，0.031mmol)的EtOAc(10mL)溶液16小时。反应经尼龙玻璃料过滤并浓缩，得到呈白色固体的粗产物(176mg，0.312mmol，99％得率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.79(s，3H)0.92-0.95(m，3H)1.02-1.11(m，9H)1.221.35(m，1H)1.38-1.49(m，2H)2.26-2.41(m，2H)2.48-2.58(m，1H)3.06(s，3H)3.07-3.12(m，1H)3.15(d，J＝10.79Hz，1H)3.76-3.81(m，4H)4.36(d，J＝10.54Hz，1H)4.44(d，J＝10.04Hz，1H)4.48(dd，J＝10.54，8.03Hz，1H)4.62-4.69(m，1H)5.30(d，J＝9.79Hz，1H)7.22(d，J＝2.01Hz，1H)7.24(d，J＝2.51Hz，1H)7.28-7.32(m，2H)7.32-7.37(m，3H)7.47(d，J＝8.28Hz，2H).LCMS：r.t.＝2.13min.，[M+H]+＝565Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
步骤4：
将2.0M氢氧化锂(0.78mL，1.56mmol)加至来自步骤3的产物(176mg，0.312mmol)的THF(2.000mL)和MeOH(2mL)溶液中并搅拌3小时。反应经乙醚和1.0M HCl稀释。有机层经干燥，过滤并蒸发，得到粗产物(160mg，0.291mmol，93％得率)。LCMS：r.t.＝1.92min.，[M+H]+＝551Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
步骤5：
将HATU(83mg，0.218mmol)加至(1S，2R)-2-氨基-N-(环丙基磺酰基)双(环丙烷)-2-甲酰胺、HCl盐(49mg，0.174mmol)、来自步骤4的产物(80mg，0.145mmol)和Hunig′s碱(0.076mL，0.436mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中并于r.t.下搅拌16小时。反应物经浓缩并经HPLC纯化(Xbridge C1810u(30x100mm)；流速＝42ml/min；溶剂梯度＝95∶5to 5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))。产物流分流分经浓缩，得到呈白色固体的化合物16(35mg，0.044mmol，30％得率)。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.33-0.44(m，2H)0.54-0.72(m，2H)0.86(s，3H)0.88-0.95(m，1H)1.04(s，3H)1.10(s，9H)1.12-1.23(m，4H)1.24-1.39(m，4H)1.41-1.54(m，2H)1.85(dd，J＝8.03，5.52Hz，1H)2.30(t，J＝11.80Hz，1H)2.35-2.46(m，1H)2.47-2.59(m，1H)3.01-3.10(m，2H)3.13(s，3H)3.24(d，J＝10.29Hz，1H)3.89(d，J＝10.54Hz，1H)4.25(dd，J＝10.79，7.28Hz，1H)4.37(d，J＝10.29Hz，1H)4.53(d，J＝10.04Hz，1H)4.80(d，J＝10.54Hz，1H)6.90(d，J＝10.04Hz，1H)7.20-7.31(m，2H)7.31-7.38(m，2H)7.41(d，J＝8.28Hz，2H)7.60-7.68(m，2H).LCMS：r.t.＝4.05min.，[M-OMe]+＝745Phenomenex Luna C18，50x 2，3u；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度＝0％-100％溶剂B经4min.，再保持1min.；0.8ml/min；注入体积＝3ul；波长＝220nm.
化合物17的制备
Figure BPA00001375035800551
将HATU(83mg，0.218mmol)加至(1R，2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷甲酰胺、TsOH盐(69.8mg，0.174mmol)、来自制备化合物16的步骤4的产物(80mg，0.145mmol)和Hunig′s碱(0.076mL，0.436mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中并于r.t.下搅拌16小时。反应物经浓缩并经HPLC(Xbridge C18 10u(30x100mm)纯化；流速＝42ml/min；溶剂梯度＝95∶5-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))。产物流分经浓缩，得到呈白色固体的化合物17(52mg，0.064mmol，44％得率)。1HNMR(400MHz，MeOD)δppm 0.85(s，3H)0.99-1.06(m，4H)1.06-1.17(m，12H)1.22-1.35(m，3H)1.40-1.55(m，3H)1.93(dd，J＝8.03，5.27Hz，1H)2.20-2.30(m，1H)2.31-2.45(m，2H)2.49-2.61(m，1H)2.93-3.02(m，1H)3.08-3.16(m，4H)3.23(d，J＝10.29Hz，1H)3.87-3.99(m，1H)4.29(dd，J＝10.92，7.40Hz，1H)4.34(d，J＝10.54Hz，1H)4.48-4.55(m，1H)4.77(d，J＝10.54Hz，1H)5.16(dd，J＝10.42，1.63Hz，1H)5.33(dd，J＝17.07，1.25Hz，1H)5.85(ddd，J＝17.13，10.23，9.03Hz，1H)7.21-7.30(m，2H)7.31-7.36(m，2H)7.37-7.44(m，2H)7.63(d，J＝8.28Hz，2H).LCMS：r.t.＝4.23min.，[M-OMe]+＝731Phenomenex Luna C18，50x 2，3u；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度＝0％-100％溶剂B经4min.，再保持1min.；0.8ml/min；注入体积＝3ul；波长＝220nm.
化合物18的制备
Figure BPA00001375035800571
步骤1：
将HATU(248mg，0.652mmol)加至(2S，4R)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(200mg，0.593mmol)、(S)-2-((庚-6-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸(201mg，0.741mmol)和DIEA(0.311mL，1.778mmol)的DCM(8mL)溶液中，并于r.t.下搅拌60小时。反应物经蒸发，并经Biotage(10-40％EtOAc：Hex)纯化，得到呈白色固体的(2S，4R)-甲基1-((S)-2-((庚-6-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸酯(260mg，0.440mmol，74％得率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.96-1.00(m，1H)1.06-1.10(m，1H)1.11-1.19(m，7H)1.30-1.47(m，4H)1.55-1.64(m，2H)1.99-2.10(m，2H)2.49-2.55(m，1H)2.89(d，J＝13.05Hz，1H)2.93-3.04(m，3H)3.73-3.80(m，3H)3.92-4.10(m，3H)4.11-4.20(m，1H)4.31-4.41(m，1H)4.87-5.05(m，3H)5.23(dd，J＝10.92，1.13Hz，1H)5.38-5.42(m，1H)5.68-5.75(m，1H)5.75-5.86(m，1H)6.62-6.76(m，1H)7.28-7.43(m，7H)7.63-7.69(m，1H).LCMS：r.t.＝2.25min.，[M+H]+＝591Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
步骤2：
用氮气对(2S，4R)-1-((S)-2-((庚-6-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基-4-(2′-乙烯基联苯-4-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(260mg，0.440mmol)的DCE(100mL)溶液鼓泡30min.，再加入Hoveyda-Grubbs催化剂(27mg，0.044mmol)，反应被密封并加热至100℃18小时。浓缩反应物，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(10-40％EtOAc在己烷中)的快速层析法纯化，得到呈白色固体的产物(232mg，0.412mmol，94％得率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.08-1.15(m，9H)1.32-1.41(m，2H)1.42-1.59(m，3H)1.69(d，J＝2.76Hz，1H)2.06-2.19(m，J＝14.18，9.60，4.80，4.80Hz，1H)2.29-2.40(m，1H)2.50(t，J＝11.42Hz，1H)2.68(dd，J＝11.92，7.40Hz，1H)3.08(s，3H)3.75(s，3H)3.77-3.84(m，2H)4.25(dd，J＝10.29，7.53Hz，1H)4.52(d，J＝10.29Hz，1H)4.59(td，J＝10.54，4.02Hz，1H)4.83(d，J＝10.29Hz，1H)5.35(d，J＝10.04Hz，1H)5.98-6.12(m，1H)6.39(d，J＝15.56Hz，1H)7.28-7.33(m，3H)7.40-7.46(m，2H)7.46-7.52(m，2H)7.56(d，J＝7.03Hz，1H).LCMS：r.t.＝2.20min.，[M+H]+＝563Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
步骤3：
在氢气氛围下搅拌来自步骤2的产物(232mg，0.412mmol)和10％Pd/C(44mg，0.041mmol)的EtOAc(10mL)溶液16小时。反应经尼龙玻璃料过滤并浓缩，得到呈白色固体的产物(207mg，0.367mmol，89％得率)。LCMS：r.t.＝2.18min.，[M+H]+＝565Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
步骤4：
将2.0M氢氧化锂(0.92mL，1.84mmol)加至来自步骤3的产物(208mg，0.368mmol)的THF(2mL)和MeOH(2mL)溶液中并搅拌3小时。反应经乙醚和1.0M HCl稀释。有机层经干燥，过滤并蒸发，得到产物(200mg，0.363mmol，99％得率)。LCMS：r.t.＝2.01min.，[M+H]+＝551Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
步骤5：
将HATU(104mg，0.272mmol)加至(1S，2R)-2-氨基-N-(环丙基磺酰基)双(环丙烷)-2-甲酰胺、HCl盐(61mg，0.218mmol)、来自步骤4的产物(100mg，0.182mmol)和Hunig′s碱(0.095mL，0.545mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中并于r.t.下搅拌64小时。反应物经浓缩并经HPLC(Xbridge C1810u(30x100mm)纯化；流速＝42ml/min；溶剂梯度＝95∶5-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))。产物流分经浓缩，得到呈白色固体的化合物18(71mg，0.085mmol，46.8％得率)。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 0.32-0.43(m，2H)0.53-0.68(m，2H)0.85-0.95(m，1H)1.10-1.24(m，13H)1.24-1.41(m，8H)1.49-1.72(m，4H)1.80(dd，J＝8.03，5.27Hz，1H)2.49-2.68(m，4H)3.01-3.09(m，1H)3.13(s，3H)3.72-3.84(m，1H)4.04(d，J＝10.54Hz，1H)4.17(t，J＝8.16Hz，1H)4.47-4.59(m，2H)4.66(d，J＝10.54Hz，1H)7.21-7.31(m，2H)7.35(d，J＝3.76Hz，2H)7.40-7.46(m，2H)7.64(d，J＝7.78Hz，2H).LCMS：r.t.＝2.13min.，[M-OMe]+＝745Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
化合物19的制备
Figure BPA00001375035800601
将HATU(104mg，0.272mmol)加至(1R，2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷甲酰胺、TsOH盐(87mg，0.218mmol)、来自制备化合物18的步骤4的产物(100mg，0.182mmol)和Hunig′s碱(0.095mL，0.545mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中并于r.t.下搅拌16小时。反应物经浓缩并经HPLC(Xbridge C18 10u(30x100mm)纯化；流速＝42ml/min；溶剂梯度＝95∶5-5∶95水/乙腈(含10mM醋酸铵))。产物流分经浓缩，得到呈白色固体的化合物19(67mg，0.083mmol，46％得率)。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 1.06-1.15(m，2H)1.18(s，9H)1.29(br.s.，4H)1.30(d，J＝4.52Hz，4H)1.45-1.70(m，5H)1.86-1.98(m，1H)2.18-2.29(m，1H)2.49-2.72(m，4H)2.94-3.06(m，1H)3.14(s，3H)3.71-3.85(m，1H)4.06(d，J＝10.54Hz，1H)4.21(t，J＝8.03Hz，1H)4.47-4.59(m，2H)4.64(d，J＝10.54Hz，1H)5.13-5.22(m，1H)5.27-5.40(m，1H)5.82(ddd，J＝17.19，10.29，8.91Hz，1H)7.21-7.32(m，2H)7.35(d，J＝3.51Hz，2H)7.43(d，J＝8.28Hz，2H)7.65(d，J＝8.03Hz，2H).LCMS：r.t.＝2.08min.，[M-OMe]+＝731Phenomenex Luna S10(3x50mm)；溶剂A＝95％水-5％甲醇-10mM醋酸铵，溶剂B＝5％水-95％甲醇-10mM醋酸铵；梯度＝0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4ml/min；注入体积＝10ul；波长＝220nm.
中间体12的制备：
Figure BPA00001375035800611
步骤1：
用氮气对1，4-二溴苯(8.3g，35.3mmol)、碳酸钾(11.3g，81mmol)和5-氯-2-甲酰苯基硼酸(5g，27.1mmol)的DME(150mL)和水(30mL)溶液(在压力容器中)鼓泡15min。加入Pd(PPh3)4(0.94g，0.814mmol)，将反应物加热至80℃过夜。冷却反应至r.t.并用旋转蒸发器蒸发。使残余部分稀释于EtOAc中并先后用水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(0-15％EtOAc：Hex)的快速层析法纯化，得到呈白色固体的4′-溴-5-氯联苯-2-甲醛(4.17g，14.11mmol，52％得率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 7.18-7.28(m，2H)7.42(d，J＝2.01Hz，1H)7.50(ddd，J＝8.41，2.01，0.88Hz，1H)7.59-7.69(m，2H)7.98(d，J＝8.53Hz，1H)9.92(s，1H).
步骤2：
将BuLi(2.5M在己烷中，11.3mL，28.2mmol)加至甲基溴化三苯基
Figure BPA00001375035800621
(10.1g，28.2mmol)的THF(65mL)溶液。于0℃下搅拌混合物1hr。于0℃下逐滴加入4′-溴-5-氯联苯-2-甲醛(4.2g，14.11mmol)的THF(65mL)溶液。从0℃至室温搅拌该混合物过夜。反应经过滤并蒸发。残余物经乙醚稀释，用水和盐水洗涤。收集乙醚层，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(5-15％EtOAc：Hex)纯化，得到呈透明油的4′-溴-5-氯-2-乙烯基联苯(3.43g，11.68mmol，83％得率)。
1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 5.22(d，J＝10.99Hz，1H)5.67(dd，J＝17.40，1.22Hz，1H)6.57(dd，J＝17.40，10.99Hz，1H)7.16-7.21(m，2H)7.24(d，J＝2.14Hz，1H)7.31(dd，J＝8.39，2.29Hz，1H)7.50-7.58(m，3H).
步骤3：
在氮气下在圆底烧瓶中搅拌镁(0.298g，12.27mmol)15min，使镁屑表面产生划痕。将10mL THF加至镁屑中并另外搅拌30min。在剧烈搅拌的回流下逐滴加入THF(60mL)中的4′-溴-5-氯-2-乙烯基联苯(3.43g，11.68mmol)。于r.t.下将Grignard溶液加至(S)-4-氧代吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(3.35g，11.67mmol)的DCM(60mL)溶液中并搅拌1hr，再用饱和NH4Cl溶液猝灭。含水层经DCM萃取，合并的有机物经干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(10-40％EtOAc：Hex)的快速层析法纯化，得到呈黄色油的(2S，4R)-4-(5′-氯-2′-乙烯基联苯-4-基)-4-羟基吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(800mg，1.593mmol，14％得率)。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.04(s，9H)1.03(dd，J＝9.46，7.63Hz，2H)2.30-2.48(m，1H)2.63-2.79(m，1H)3.77-3.80(m，1H)3.82-3.86(m，3H)3.95-4.05(m，1H)4.16-4.26(m，2H)4.51-4.67(m，1H)5.20(d，J＝11.90Hz，1H)5.67(d，J＝17.40Hz，1H)6.61(dd，J＝17.40，10.99Hz，1H)7.26-7.35(m，4H)7.49-7.58(m，3H).
步骤4：
于0℃下，将NaH(60％在油中)(106mg，2.65mmol)加至(2S，4R)-4-(5′-氯-2′-乙烯基联苯-4-基)-4-羟基吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(740mg，1.474mmol)和甲基碘(0.166mL，2.65mmol)的DMF溶液中，于该温度下搅拌并加热至室温过夜。再用饱和NH4Cl溶液和乙醚猝灭反应。用盐水洗涤醚层，干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(5-40％EtOAc在己烷中)的快速层析法纯化，得到呈透明油的半纯化产物(2S，4R)-4-(5′-氯-2′-乙烯基联苯-4-基)-4-甲氧基吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(333mg，0.645mmol，44％得率)。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.04(s，9H)1.01-1.06(m，2H)2.52(dd，J＝13.12，8.85Hz，1H)2.78-2.87(m，1H)2.97(d，J＝5.19Hz，3H)3.65(s，1H)3.67-3.75(m，3H)3.77(d，J＝8.85Hz，3H)3.96-4.08(m，1H)5.21(d，J＝10.99Hz，1H)5.68(d，J＝17.40Hz，1H)6.59(ddd，J＝17.47，11.06，2.29Hz，1H)7.26(d，J＝2.14Hz，1H)7.29-7.35(m，3H)7.35-7.40(m，2H)7.56(d，J＝8.24Hz，1H).
步骤5：
将TBAF(2.58mL，2.58mmol)加至(2S，4R)-4-(5′-氯-2′-乙烯基联苯-4-基)-4-甲氧基吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(333mg，0.645mmol)的THF(6mL)溶液中并于r.t.下搅拌2小时。反应经水稀释并经EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥，过滤和用旋转蒸发器蒸发，得到呈黄色油的(2S，4R)-4-(5′-氯-2′-乙烯基联苯-4-基)-4-甲氧基吡咯烷-2-羧酸甲基酯(中间体12，215mg，0.578mmol，90％得率)。LCMS：rt＝1.49min.[M-MeOH]+＝340；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
化合物20的制备：
Figure BPA00001375035800641
步骤1：
将(S)-2-((己-5-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸(186mg，0.723mmol)、DIEA(0.303mL，1.735mmol)和HATU(242mg，0.636mmol)加至(2S，4R)-4-(5′-氯-2′-乙烯基联苯-4-基)-4-甲氧基吡咯烷-2-羧酸甲基酯(215mg，0.578mmol)的DCM(7mL)溶液中。于室温下搅拌反应物过夜。反应物经蒸发，并经Biotage(10-50％EtOAc：Hex)纯化，得到呈无色油的(2S，4R)-4-(5′-氯-2′-乙烯基联苯-4-基)-1-((S)-2-((己-5-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-羧酸甲基酯(123mg，0.201mmol，35％得率)。LCMS：rt＝2.58min.[M+H]+＝612；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤2：
使(2S，4R)-4-(5′-氯-2′-乙烯基联苯-4-基)-1-((S)-2-((己-5-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-羧酸甲基酯(123mg，0.201mmol)溶解于DCE(25mL)中，并用氮气鼓泡15min。加入Hoveyda-Grubbs催化剂(13mg，0.020mmol)并于80℃油浴中加热2小时。反应物经蒸发，和粗产物经Biotage(10-50％EtOAc/Hex)的快速层析法纯化，得到呈白色泡沫的产物(95mg，0.163mmol，81％得率)。LCMS：rt＝2.44min.[M+H]+＝584和[M-MeOH]+＝551；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤3：
将来自步骤2的产物(95mg，0.163mmol)溶解于乙酸乙酯(3mL)并用10％披钯碳(17mg，0.016mmol)处理，在氢气囊下搅拌过夜。反应物通过Millipore millex-HV 0.45um玻璃料过滤并蒸发，得到产物(90mg，0.154mmol，94％得率)。LCMS：rt＝2.40min.[M+H]+＝586和[M-OMe]+＝553；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤4：
将2M氢氧化锂(0.23mL，0.46mmol)加至来自步骤3的产物(90mg，0.154mmol)的THF(1mL)和甲醇(1mL)溶液中并于r.t.下搅拌18hrs。反应再经5mL 1M HCl稀释并经EtOAc萃取。先后用水和盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥，过滤再蒸发，得到呈白色固体的产物(74mg，0.130mmol，84％得率)。LCMS：rt＝2.19min.[M+H]+＝572；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤5：
将DIEA(0.068mL，0.389mmol)、HATU(54mg，0.143mmol)和(1S，2R)-2-氨基-N-(环丙基磺酰基)双(环丙烷)-2-甲酰胺、HCl盐(44mg，0.155mmol)加至来自步骤4的产物(74mg，0.130mmol)的DCM(2mL)的溶液中。于室温下搅拌反应物过夜。反应物经蒸发，经制备型HPLC纯化，得到呈浅白色固体的化合物20(52mg，0.065mmol，50％得率)。1HNMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.24-0.34(m，1H)0.40(br.s.，1H)0.56(t，J＝6.41Hz，2H)0.92(d，J＝12.51Hz，2H)1.01(s，9H)1.05-1.16(m，4H)1.16-1.21(m，1H)1.30-1.40(m，2H)1.39-1.49(m，1H)1.73-1.81(m，1H)2.47(br.s.，1H)2.52-2.64(m，2H)2.64-2.78(m，1H)2.90-3.01(m，1H)3.03(s，3H)3.10-3.21(m，1H)3.60(d，J＝10.38Hz，1H)3.72-3.83(m，1H)3.92(d，J＝10.38Hz，1H)3.98-4.08(m，1H)4.13(d，J＝10.07Hz，1H)4.37(d，J＝9.77Hz，1H)4.44(t，J＝7.32Hz，1H)4.47-4.56(m，1H)4.86(d，J＝8.85Hz，1H)5.45(br.s.，1H)5.76(br.s.，1H)7.10-7.21(m，2H)7.24(s，1H)7.28-7.33(m，1H)7.37(d，J＝7.63Hz，1H)7.41(d，J＝5.19Hz，2H)9.95(br.s.，1H).LCMS：rt＝2.44min.[M-OMe]+＝765；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
中间体13的制备：
Figure BPA00001375035800671
步骤1：
用氮气对1，3-二溴苯(5.3mL，43.9mmol)、碳酸钾(14.0g，101mmol)和3-乙烯基苯基硼酸(5g，33.8mmol)的DME(100mL)和水(20mL)(在压力容器中)溶液鼓泡15min。加入Pd(PPh3)3(1.17g，1.014mmol)，然后加热反应至80℃过夜。冷却反应至r.t.并用旋转蒸发器蒸发。使残余部分稀释于EtOAc中并先后用水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(0-5％EtOAc：Hex)的快速层析法纯化，得到呈透明液体的3-溴-3′-乙烯基联苯(5.21g，20.10mmol，60％得率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 5.33(d，J＝10.79Hz，1H)5.84(dd，J＝17.57，0.75Hz，1H)6.80(dd，J＝17.57，10.79Hz，1H)7.32(t，J＝7.78Hz，1H)7.38-7.48(m，3H)7.51(dddd，J＝13.24，7.84，1.76，1.00Hz，2H)7.56-7.61(m，1H)7.76(t，J＝1.88Hz，1H).
步骤2：
在氮气下在圆底烧瓶中搅拌镁(0.513g，21.11mmol)30min。使镁屑表面产生划痕。将10mL THF加至镁屑中并另外搅拌30min。在剧烈搅拌的回流下逐滴加入THF(100mL)中的3-溴-3′-乙烯基联苯(5.21g，20.10mmol)。0℃下，将Grignard溶液加至(S)-4-氧代吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(5.78g，20.11mmol)的DCM(110mL)溶液并搅拌1hr，再用饱和NH4Cl溶液猝灭。含水层经DCM萃取，合并的有机物经干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(5-40％EtOAc：Hex)的快速层析法纯化，得到呈黄色泡沫的(2S，4R)-4-羟基-4-(3′-乙烯基联苯-3-基)吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(2.9g，6.20mmol，31％得率)。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.05(d，J＝2.44Hz，9H)0.99(dd，J＝9.77，7.32Hz，1H)1.04(dd，J＝9.61，7.17Hz，1H)1.27(t，J＝7.17Hz，1H)2.38-2.53(m，1H)2.66-2.82(m，1H)3.67-3.83(m，1H)3.82-3.89(m，3H)3.96-4.09(m，1H)4.17-4.32(m，2H)4.52-4.69(m，1H)5.32(d，J＝10.99Hz，1H)5.83(d，J＝17.40Hz，1H)6.80(dd，J＝17.55，10.83Hz，1H)7.39-7.46(m，2H)7.46-7.52(m，3H)7.55(ddd，J＝4.58，2.14，1.83Hz，1H)7.61(br.s.，1H)7.73(s，1H).LCMS：rt＝2.32min.[M+H]+＝468；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤3：
于0℃下，将NaH(60％在油中)(0.446g，11.16mmol)加至(2S，4R)-4-羟基-4-(3′-乙烯基联苯-3-基)吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(2.9g，6.20mmol)和甲基碘(0.698mL，11.16mmol)的DMF溶液中并在该温度下搅拌3hrs。再用饱和NH4Cl溶液和乙醚猝灭反应。用盐水洗涤醚层，干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(5-45％EtOAc在己烷中)的快速层析法纯化，得到呈透明油的(2S，4R)-4-甲氧基-4-(3′-乙烯基联苯-3-基)吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(2.3g，4.78mmol，77％得率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm-0.04-0.11(m，9H)0.89-1.12(m，2H)2.56(dd，J＝13.18，8.91Hz，1H)2.86(t，J＝12.67Hz，1H)2.99(d，J＝3.01Hz，3H)3.66-3.92(m，1H)3.79(d，J＝7.03Hz，3H)3.99-4.12(m，1H)4.18-4.29(m，2H)4.44-4.70(m，1H)5.33(d，J＝10.79Hz，1H)5.84(d，J＝16.82Hz，1H)6.80(dd，J＝17.57，11.04Hz，1H)7.34(d，J＝7.53Hz，1H)7.39-7.52(m，4H)7.53-7.59(m，3H).LCMS：rt＝2.49min.[M+H]+＝482；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤4：
将TBAF(1.0M在THF中，19mL，19mmol)加至(2S，4R)-4-甲氧基-4-(3′-乙烯基联苯-3-基)吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(2.3g，4.78mmol)的THF(30mL)溶液中并于r.t.下搅拌过夜。反应物经EtOAc稀释，先后用水和盐水洗涤。收集有机层，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到呈黄色油的(2S，4R)-4-甲氧基-4-(3′-乙烯基联苯-3-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(1.75g，5.19mmol，100％得率)。LCMS：rt＝1.42min.[M-OMe]+＝306；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
化合物21的制备：
Figure BPA00001375035800691
步骤1：
将(S)-2-((丁-3-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸(255mg，1.111mmol)、DIEA(0.40mL，2.223mmol)和HATU(310mg，0.815mmol)加至(2S，4R)-甲基4-甲氧基-4-(3′-乙烯基联苯-3-基)吡咯烷-2-羧酸酯(250mg，0.741mmol)的DCM(3mL)的溶液中。于室温下搅拌反应2hrs。反应物经蒸发，用Biotage(10-40％EtOAc：Hex)的快速层析法纯化，得到呈白色泡沫的(2S，4R)-1-((S)-2-((丁-3-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基-4-(3′-乙烯基联苯-3-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(277mg，0.505mmol，68％得率)。LCMS：rt＝2.31min.[M+H]+＝549；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤2：
使(2S，4R)-1-((S)-2-((丁-3-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基-4-(3′-乙烯基联苯-3-基)吡咯烷-2-羧酸甲基酯(277mg，0.505mmol)溶解于DCE(75mL)并用氮气鼓泡15min。加入Hoveyda-Grubbs催化剂二代(32mg，0.050mmol)并于80℃油浴中加热2hrs。反应物经冷却，蒸发并经Biotage(5-50％EtOAc/Hex)纯化，得到呈白色泡沫的最终产物(140mg，0.269mmol，53％得率)。LCMS：rt＝2.17min.[M+H]+＝521；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min，，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤3：
用10％披钯碳(29mg，0.027mmol)处理乙酸乙酯(3mL)中的来自步骤2的产物(140mg，0.269mmol)并在氢气囊下搅拌过夜。反应物通过Millipore millex-HV 0.45um玻璃料过滤并蒸发，得到产物(139mg，0.266mmol，99％得率)。LCMS：rt＝2.22min.[M+H]+＝523；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤4：
将2M氢氧化锂(0.40mL，0.80mmol)加至来自步骤3的产物(139mg，0.266mmol)的THF(1.5mL)和甲醇(1.5mL)溶液中并于r.t.下搅拌18hrs。反应物再经5mL 1M HCl稀释并经EtOAc萃取。先后用水和盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥，过滤再蒸发，得到呈白色固体的产物(130mg，0.256mmol，96％得率)。LCMS：rt＝1.98min.[M+H]+＝509；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤5：
将DIEA(0.134mL，0.767mmol)、HATU(107mg，0.281mmol)和(1S，2R)-2-氨基-N-(环丙基磺酰基)双(环丙烷)-2-甲酰胺、HCl盐(86mg，0.307mmol)加至来自步骤4的产物(130mg，0.256mmol)的DCM(2.5mL)溶液中。于室温下搅拌反应2小时。反应物经蒸发，经制备型HPLC纯化，得到呈浅白色固体的化合物21(63mg，0.084mmol，33％得率)。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.13-0.26(m，2H)0.43-0.57(m，2H)0.79-0.89(m，2H)0.94-1.01(m，2H)1.04(s，9H)1.20(dd，J＝9.77，5.49Hz，1H)1.23-1.28(m，1H)1.29-1.37(m，1H)1.53-1.73(m，2H)1.73-1.84(m，2H)2.30(dd，J＝12.36，6.87Hz，1H)2.51-2.69(m，2H)2.71-2.81(m，1H)2.82-2.95(m，1H)3.16(s，3H)3.78(td，J＝7.40，3.81Hz，1H)3.97(dd，J＝9.31，6.87Hz，1H)4.02(d，J＝10.38Hz，1H)4.50(d，J＝9.77Hz，1H)4.62-4.71(m，1H)4.73(d，J＝10.38Hz，1H)5.75(d，J＝9.77Hz，1H)6.52(s，1H)7.15(d，J＝7.02Hz，1H)7.29-7.42(m，4H)7.43-7.58(m，3H).LCMS：rt＝2.23min.[M+H]+＝735；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
中间体14的制备：
Figure BPA00001375035800721
步骤1：
用氮气对2-溴-5-硝基苯甲酸甲基酯(6g，23.07mmol)、碳酸钾(9.6g，69.2mmol)和4-溴苯基硼酸(6.02g，30.0mmol)的DME(120mL)和水(24mL)(在压力容器中)溶液鼓泡15min。加入Pd(PPh3)3(0.80g，0.692mmol)，然后加热反应至80℃过夜。冷却反应至r.t.并蒸发。使残余物稀释于EtOAc中并先后用水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(0-15％EtOAc：Hex)的快速层析法纯化，得到呈浅黄色固体的4′-溴-4-硝基联苯-2-羧酸甲基酯(7.2g，21.42mmol，93％得率)。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 3.75(s，3H)7.19(m，2H)7.52(d，J＝8.55Hz，1H)7.58(m，2H)8.37(dd，J＝8.24，2.44Hz，1H)8.71(d，J＝2.44Hz，1H).
步骤2：
将氯化铵(11.5g，214mmol)和锌(14.0g，214mmol)加至4′-溴-4-硝基联苯-2-羧酸甲基酯(7.2g，21.42mmol)的MeOH(110mL)溶液，并于室温下搅拌1小时。固体经过滤，滤液经蒸发。使残余物溶解于乙醚，过滤并浓缩，得到4-氨基-4′-溴联苯-2-羧酸甲基酯(7.8g，25.5mmol，119％得率)。LCMS：rt＝1.54min.[M+H]+＝305和307；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤3：
将硫酸二甲酯(7.30mL，76mmol)加至4-氨基-4′-溴联苯-2-羧酸甲基酯(7.8g，25.5mmol)和碳酸钾(10.9g，79mmol)在丙酮(150mL)中的混合物中并回流加热过夜。冷却反应，加入水(10mL)并持续搅拌1hr，以破坏过量硫酸二甲酯。反应混合物经过滤并蒸发，然后将残余物置于DCM中并用水洗涤。有机物经干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(0-20％EtOAc：Hex)纯化，得到呈橙色油的4′-溴-4-(二甲基氨基)联苯-2-羧酸甲基酯(1.9g，5.69mmol，22％得率)。1HNMR(400MHz，氯仿-d)δppm 3.03(s，6H)3.66(s，3H)6.87(dd，J＝8.66，2.89Hz，1H)7.12-7.18(m，3H)7.21(d，J＝8.53Hz，1H)7.46-7.51(m，2H).LCMS：rt＝1.86min.[M+H]+＝335；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤4：
将2M氢氧化锂(8.5mL，17.0mmol)加至4′-溴-4-(二甲基氨基)联苯-2-羧酸甲基酯(1.9g，5.69mmol)的THF(20mL)和甲醇(20mL)溶液中并于r.t.下搅拌18hrs。反应再经1M HCl稀释并经EtOAc萃取。先后用水和盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥，过滤再蒸发，得到呈白色固体的4′-溴-4-(二甲基氨基)联苯-2-羧酸(1.34g，4.19mmol，74％得率)。LCMS：rt＝1.54min.[M+H]+＝319和321；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤5：
将THF(40mL)中的4′-溴-4-(二甲基氨基)联苯-2-羧酸(1.34g，4.19mmol)冷却至0℃。经15min逐滴加入硼烷四氢呋喃复合物(8.37mL，8.37mmol)，加热至室温过夜。反应物经EtOAc稀释，先后用水、饱和氯化铵和盐水洗涤。有机层经MgSO4干燥、过滤并蒸发，得到呈白色固体的(4′-溴-4-(二甲基氨基)联苯-2-基)甲醇(1.25g，4.08mmol，98％得率)。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 2.93-3.05(m，6H)4.58(s，2H)6.72(dd，J＝8.55，2.75Hz，1H)6.90(d，J＝2.75Hz，1H)7.14(d，J＝8.55Hz，1H)7.21-7.25(m，2H)7.44-7.55(m，2H).
步骤6：
将IBX(3.29g，11.76mmol)加至(4′-溴-4-(二甲基氨基)联苯-2-基)甲醇(1.8g，5.88mmol)的DMSO(50mL)溶液中，并开40℃下搅拌3小时。反应经水稀释并用乙醚萃取。醚层经MgSO4干燥、过滤并蒸发，得到粗制物质。粗产物经Biotage(5-20％EtOAc：Hex)纯化，得到呈黄色固体的4′-溴-4-(二甲基氨基)联苯-2-甲醛(1.25g，4.11mmol，70％得率)。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 2.95-3.13(m，6H)7.01(dd，J＝8.55，3.05Hz，1H)7.22(m，2H)7.28-7.33(m，2H)7.57(m，2H)9.96(s，1H).
步骤7：
将BuLi(2.5M在己烷中，2.96mL，7.40mmol)加至甲基溴化三苯基(2.94g，8.22mmol)的THF(20mL)溶液中。于0℃下搅拌混合物1hr。于0℃下，逐滴加入4′-溴-4-(二甲基氨基)联苯-2-甲醛(1.25g，4.11mmol)的THF(20mL)溶液。从0℃至室温搅拌该混合物过夜。反应经过滤并蒸发。残余物经乙醚稀释，用水和盐水洗涤。醚层经(MgSO4)干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(5-15％EtOAc：Hex)纯化，得到呈黄色固体的4′-溴-N，N-二甲基-2-乙烯基联苯-4-胺(725mg，2.399mmol，58％得率)。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm 2.97-3.07(m，6H)5.20(d，J＝10.99Hz，1H)5.69(d，J＝17.40Hz，1H)6.70(dd，J＝17.40，10.99Hz，1H)6.76(dd，J＝8.55，2.75Hz，1H)6.95(d，J＝2.44Hz，1H)7.16(d，J＝8.55Hz，1H)7.21(m，J＝8.24Hz，2H)7.50(m，J＝8.55Hz，2H).
步骤8：
在N2下，圆底烧瓶中搅拌镁(62mg，2.55mmol)15min。使镁屑表面产生划痕。将10mL THF加至镁屑并额外搅拌30min。在剧烈搅拌的回流下，逐滴加入THF(20mL)中的4′-溴-N，N-二甲基-2-乙烯基联苯-4-胺(735mg，2.432mmol)。于r.t.下，将Grignard溶液加至(S)-4-氧吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(699mg，2.432mmol)的DCM(20mL)溶液中，并搅拌1hr，再用饱和NH4Cl溶液猝灭。含水层经DCM萃取，合并的有机物经干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(10-40％EtOAc：Hex)的快速层析法纯化，得到呈黄色泡沫的(2S，4R)-4-(4′-(二甲基氨基)-2′-乙烯基联苯-4-基)-4-羟基吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(330mg，0.646mmol，27％得率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.04(s，9H)0.99-1.11(m，2H)2.34-2.52(m，1H)2.62-2.81(m，1H)3.00-3.07(m，6H)3.68-3.81(m，1H)3.82-3.89(m，3H)4.17-4.34(m，3H)4.49-4.68(m，1H)5.19(dd，J＝11.04，1.25Hz，1H)5.70(dd，J＝17.57，1.25Hz，1H)6.67-6.80(m，2H)6.96(d，J＝2.26Hz，1H)7.16-7.22(m，1H)7.34(m，2H)7.49(m，J＝8.28Hz，2H).LCMS：rt＝1.71min.[M+H]+＝511；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤9：
于0℃下，将NaH(60％在油中)(46mg，1.163mmol)加至(2S，4R)-4-(4′-(二甲基氨基)-2′-乙烯基联苯-4-基)-4-羟基吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(330mg，0.646mmol)和甲基碘(0.073mL，1.163mmol)的DMF溶液中，于该温度下搅拌并加热至室温过夜。再用饱和NH4Cl溶液和乙醚猝灭反应。用盐水洗涤醚层，干燥，过滤并蒸发，得到粗制物质。粗制物质经Biotage(5-45％EtOAc在己烷中)的快速层析法纯化，得到呈透明油的半纯化(2S，4R)-4-(4′-(二甲基氨基)-2′-乙烯基联苯-4-基)-4-甲氧基吡咯烷-1，2-二羧酸2-甲基酯1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯(231mg，0.440mmol，68％得率)。LCMS：rt＝1.86min.[M+H]+＝525；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤10：
将TBAF(1.0M在THF中，1.7mL，1.7mmol)加至(2S，4R)-2-甲基1-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)4-(4′-(二甲基氨基)-2′-乙烯基联苯-4-基)-4-甲氧基吡咯烷-1，2-二羧酸酯(231mg，0.440mmol)的THF(5mL)溶液中，并于r.t.下搅拌1hr。反应物经蒸发，得到呈橙色油的粗(2S，4R)-4-(4′-(二甲基氨基)-2′-乙烯基联苯-4-基)-4-甲氧基吡咯烷-2-羧酸甲基酯(167mg，0.439mmol，100％得率)，无须纯化直接用于后面各步骤。LCMS：rt＝1.01min.[M-OMe]+＝349；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
化合物22的制备：
Figure BPA00001375035800771
步骤1：
将(S)-2-((2，2-二甲基己-5-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸(62mg，0.217mmol)、DIEA(0.076mL，0.434mmol)和HATU(61mg，0.159mmol)加至(2S，4R)-甲基4-(4′-(二甲基氨基)-2′-乙烯基联苯-4-基)-4-甲氧基吡咯烷-2-羧酸酯(55mg，0.145mmol)的DCM(3mL)溶液中。于室温下搅拌反应2hrs。反应物经蒸发，并经Biotage(10-45％EtOAc：Hex)纯化，得到呈黄色油的(2S，4R)-4-(4′-(二甲基氨基)-2′-乙烯基联苯-4-基)-1-((S)-2-((2，2-二甲基己-5-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-羧酸甲基酯(61mg，0.094mmol，65％得率)。LCMS：rt＝2.00min.[M-OMe]+＝616和[M+H]＝648；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤2：
使(2S，4R)-4-(4′-(二甲基氨基)-2′-乙烯基联苯-4-基)-1-((S)-2-((2，2-二甲基己-5-烯基氧基)羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-羧酸甲基酯(61mg，0.094mmol)溶解于DCE(15mL)并用氮气鼓泡15min。加入HoVeyda-Grubbs催化剂(6mg，9.42μmol)并在油浴中加热至80℃过夜。反应经冷却，蒸发并经Biotage(10-45％EtOAc/Hex)的快速层析法纯化，得到呈透明油的半纯化产物(53mg，0.086mmol，91％得率)。LCMS：rt＝1.80min.[M+H]＝620；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤3：
使MeOH(3mL)中的来自步骤2的产物(53mg，0.086mmol)通过10％披钯碳柱并于90巴的H2下，在H-Cube机中氢化。反应物经蒸发，得到产物(30mg，0.048mmol，56％得率)。LCMS：rt＝1.74min.[M+H]+＝622；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤4：
将2.0M氢氧化锂(0.072mL，0.145mmol)加至来自步骤3的产物(30mg，0.048mmol)的THF(1mL)和MeOH(1mL)溶液中并于r.t.下搅拌过夜。反应经1M HCl稀释，并经EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到浅白色泡沫的产物(26mg，0.043mmol，89％得率)。LCMS：rt＝1.55min.[M+H]＝608；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
步骤5：
将DIEA(0.022mL，0.128mmol)、HATU(18mg，0.047mmol)和(1S，2R)-2-氨基N-(环丙基磺酰基)双(环丙烷)-2-甲酰胺，、HCl盐(14mg，0.051mmol)加至来自步骤4的产物(26mg，0.043mmol)的DCM(1.5mL)溶液中。于室温下搅拌反应4小时。反应物经蒸发，经制备型HPLC纯化，得到呈白色固体的化合物22(1mg，1.079μmol，2.5％得率)。1HNMR(500MHz，氯仿-d)δppm 0.29(d，J＝4.58Hz，2H)0.49-0.63(m，1H)0.77(t，J＝8.85Hz，6H)0.83-0.93(m，6H)1.02(s，9H)1.11-1.19(m，2H)1.25(d，J＝7.93Hz，4H)1.33-1.46(m，4H)1.82(d，J＝5.80Hz，1H)2.31-2.53(m，1H)2.65(br.s.，2H)2.98(s，6H)3.09(s，3H)3.89-4.04(m，1H)4.29(br.s.，1H)4.33-4.45(m，1H)5.31(br.s.，1H)6.55-6.75(m，3H)7.07-7.17(m，1H)7.28-7.32(m，4H)7.37(s，1H).LCMS：rt＝1.86min.[M+H]＝834；Phenomenex-Luna C-18(5μ)(3.0x50mm)；溶剂A＝10％乙腈-90％水-0.1％TFA，溶剂B＝90％乙腈-10％水-0.1％TFA；梯度0％-100％溶剂B经2min.，再保持1min.；4mL/min；注入体积＝5uL；波长＝220.
生物学研究
HCV NS3/4A蛋白酶复合物酶试验和基于细胞的HCV复制子试验被利用于本公开并被准备、处理和验证如下：
重组HCV NS3/4A蛋白酶复合物的生成
如下述般制备衍生自BMS毒株、H77毒株或J4L6S毒株的HCVNS3蛋白酶复合物。产生这些经纯化的重组蛋白以用于同类试验(homogeneous assay)(参见下文)，以提供本公开化合物在抑制HCVNS3蛋白水解活性如何有效的指标。
来自HCV-感染的患者的血清得自旧金山(San Francisco)医院的Dr.T.Wright。工程改造的HCV基因组(BMS毒株)的全长cDNA(互补脱氧核糖核酸)模板由通过血清RNA(核糖核酸)的逆转录-PCR(RT-PCR)和采用根据其它基因型各1a毒株之间的同源性所选择的引物所得到的DNA片段构建。根据Simmonds等的分类(参见P Simmonds、KA Rose、S Graham、SW Chan、F McOmish、BC Dow、EA Follett、PL Yap和H Marsden，J.Clin.Microbiol.，31(6)，1493-1503(1993))，根据对整体基因组序列的确定，将基因型1a与HCV分离株进行了对比。表明非结构区NS2-5B的氨基酸序列与HCV基因型1a(H77)的同一性为＞97％，而与基因型1b(J4L6S)的的同一性为87％。感染性克隆H77(1a基因型)和J4L6S(1b基因型)得自R.Purcell(NIH)和序列发表于Genbank(AAB67036，参见Yanagi，M.，Purcell，R.H.，Emerson，S.U.和Bukh，J.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94(16)，8738-8743(1997)；AF054247，参见Yanagi，M.，St Claire，M.，Shapiro，M.，Emerson，S.U.，Purcell，R.H.和Bukh，J.，Virology 244(1)，161-172.(1998))。
H77和J4L6S毒株用来产生重组NS3/4A蛋白酶复合物。针对这些毒株，如P.Gallinari等(参见Gallinari P，Paolini C，Brennan D，Nardi C，Steinkuhler C，De Francesco R.Biochemistry.38(17)：5620-32，(1999))描述的那样进行DNA编码重组HCV NS3/4A蛋白酶复合物(氨基酸1027-1711)。简单地说，在NS4A编码区的3′-端添加3个赖氨酸的增溶尾。NS4A-NS4B裂解位点的P1位中的半胱氨酸(氨基酸1711)被改变为甘氨酸，以避免赖氨酸标签的蛋白水解。此外，半胱氨酸向丝氨酸的突变被氨基酸位1454的PCR介导，以避免在NS3解旋酶结构域的自溶裂解。按照经修饰的P.Gallinari等描述的方案(参见Gallinari P，Brennan D，Nardi C，Brunetti M，Tomei L，Steinkuhler C，De Francesco R.，J Virol.72(8)：6758-69(1998))，在pET21b细菌表达载体(Novagen)中克隆变异体DNA片段，而NS3/4A复合物表达于大肠杆菌株BL21(DE3)(Invitrogen)。简单地说，20℃下，用0.5毫摩尔(mM)异丙基β-D-1-硫代吡喃型半乳糖苷(thiogalactopyranoside，IPTG)诱导NS3/4A蛋白酶复合物表达22小时(h)。典型的发酵(1升(L))产生约10克(g)湿细胞浆状物。4℃下，使细胞再悬浮于由25mM N-(2-羟基乙基)哌嗪-N′-(2-乙磺酸)(HEPES)、pH 7.5，20％甘油、500mM氯化钠(NaCl)、0.5％Triton X-100、1微克/毫升(″μg/mL″)溶菌酶、5mM氯化镁(MgCl2)、1μg/ml DnaseI、5mM β-巯基乙醇(βME)、无蛋白酶抑制剂-乙二胺四乙酸(EDTA)(Roche)组成的细胞溶解缓冲液(10mL/g)中，匀化并孵化20分钟(min)。于4℃下，匀浆经超声处理并经235000g下超速离心澄清1小时。将咪唑加至上清液中，使最终浓度为15mM，并调节pH至8.0。将粗蛋白提取物装至用缓冲液B(25mM HEPES，pH 8.0，20％甘油，500mM NaCl，0.5％Triton X-100，15mM咪唑，5mM βME)预平衡过的镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)柱上。以1mL/min的流速装载样品。用15个柱体积的缓冲液C(除含有0.2％Triton X-100外，与缓冲液B相同)洗涤柱。用5个柱体积的缓冲液D(除含有200mM咪唑外与缓冲液C相同)洗脱蛋白。
合并含有NS3/4A蛋白酶复合物的各流分并装载于用缓冲液D(25mM HEPES，pH 7.5，20％甘油，300mM NaCl，0.2％Triton X-100，10mM βME)预平衡过的脱盐柱Superdex-S200。以1mL/min的流速装载样品。合并含有NS3/4A蛋白酶复合物的各流分并浓缩至约0.5mg/ml。用SDS-PAGE和质谱分析判断衍生自BMS、H77和J4L6S毒株的NS3/4A蛋白酶复合物的纯度大于90％。将酶贮存于-80℃，在用于试验缓冲液前在冰上解冻并稀释。
监测HCV NS3/4A蛋白水解活性的FRET肽试验
如上所述，该体外试验的目的是测量衍生自BMS毒株、H77毒株或J4L6S毒株的HCV NS3蛋白酶复合物受到本公开化合物的抑制作用。该试验提供本公开化合物在抑制HCV NS3蛋白水解活性方面将是如何有效的指标。
为监测HCV NS3/4A蛋白酶活性，采用NS3/4A肽底物。底物是Taliani等在Anal.Biochem.240(2)：60-67(1996)中描述的RET S1(能量共振转移酯肽底物；AnaSpec，Inc.分类号22991)(FRET肽)。该肽的序列并不严格地基于针对HCV NS3蛋白酶的NS4A/NS4B天然裂解位点，除非在裂解位点存在酯键连接而不是酰胺键。肽还含有邻接肽的一端的萤光供体EDANS和邻接另一端的受体DABCYL。肽的萤光被供体和受体之间的分子间共振能量转移(RET)猝灭，但由于NS3蛋白酶裂解肽，从RET猝灭中释放产物，供体的萤光变得明显。
本公开化合物不存在或存在的情况下，用三种重组NS3/4A蛋白酶复合物之一孵化肽底物。通过采用Cytofluor Series 4000实时监测萤光反应产物的形成，确定化合物的抑制作用。
各试剂如下：HEPES和甘油(Ultrapure)得自GIBCO-BRL。二甲亚砜(DMSO)得自Sigma。β-巯基乙醇得自Bio Rad。
试验缓冲液：50mM HEPES，pH 7.5；0.15M NaCl；0.1％Triton；15％甘油；10mM βME。底物：2μM最终浓度(来自-20℃下贮存的2mM DMSO贮存溶液)。HCV NS3/4A蛋白酶型1a(1b)，2-3nM最终浓度(来自5μM的在25mM HEPES中的贮存溶液，pH 7.5，20％甘油，300mM NaCl，0.2％Triton-X100，10mM βME)。针对具有达到试验界限的效力的化合物，通过向试验缓冲液加入50μg/ml牛血清白蛋白(Sigma)并降低最终蛋白酶浓度至300pM，使试验更灵敏。
在来自Falcon的96孔聚苯乙烯黑色板中进行试验。各孔含有在试验缓冲液中的25μl NS3/4A蛋白酶复合物、10％DMSO/试验缓冲液中的50μl本公开化合物和试验缓冲液中的25μl底物。也在相同的试验板中制备对照物(无化合物)。在通过加入底物启动酶反应之前，使酶复合物与化合物或对照溶液混合1min。立即用Cytofluor Series 4000(Perspective Biosystems)对试验板读数。将仪器设定为在25℃下，于340nm发射和490nm激发波长下读数。反应通常进行约15min。
用以下方程式计算抑制百分率：
100-[(δFinh/δFcon)x100]
其中δF为整个曲线的线性范围的萤光变化。对抑制-浓度数据进行非线性曲线拟合，通过采用应用方程式y＝A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))的Excel XL拟合软件计算50％有效浓度(IC50)。
发现针对不止一种类型的NS3/4A复合物进行试验的本公开化合物具有类似的抑制性质，尽管与对1a毒株相比，化合物对1b毒株一律表现出更大的效能。
特异性试验
进行特异性试验，以表明与其它丝氨酸或半胱氨酸蛋白酶相比，本公开的化合物在抑制HCV NS3/4A蛋白酶复合物方面的体外选择性。
针对多种丝氨酸蛋白酶：人嗜中性细胞弹性蛋白酶(HNE)、猪胰弹性蛋白酶(PPE)和人胰腺糜蛋白酶和一种半胱氨酸蛋白酶：人肝组织蛋白酶B，确定本公开化合物的特异性。在所有情况下，如先前所描述(PCT专利申请号WO 00/09543)的那样，对丝氨酸蛋白酶试验作某些修饰，采用具体针对各种酶的采用萤光测量的氨基-甲基-香豆素(AMC)底物的96孔板格式方案。所有酶购自Sigma、EMDbiosciences，而底物来自Bachem、Sigma和EMDbiosciences。
根据其效力，化合物浓度为100-0.4μM不等。通过室温下将底物加至酶抑制剂中预孵化10min，并水解至如用cytofluor测定的15％转换率，各自启动酶试验。
各试验的最终条件如下：
50mM三(羟基甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)pH 8，0.5M硫酸钠(Na2SO4)，50mM NaCl，0.1mM EDTA，3％DMSO，含5μM LLVY-AMC的0.01％Tween-20和1nM糜蛋白酶。
50M Tris-HCl，pH 8.0，50mM NaCl，0.1mM EDTA，3％DMSO，0.02％吐温-20，5μM succ-AAPV-AMC和20nM HNE或8nM PPE；
100mM NaOAC(醋酸钠)pH 5.5，3％DMSO，1mM TCEP(三(2-羧乙基)膦盐酸盐)，5nM组织蛋白酶B(使用前，酶贮液在含有20mM TCEP的缓冲液中活化)和稀释于H2O的2μM Z-FR-AMC。
用下式计算抑制百分率：
[1-((UVinh-UV空白)/(UVctl-UV空白))]x100
将非线性曲线拟合应用于抑制-浓度数据，并采用Excel XL拟合软件计算50％有效浓度(IC50)。
HCV复制子的生成
如Lohmann V，Korner F，Koch J，Herian U，Theilmann L，Bartenschlager R.，Science 285(5424)：110-3(1999)描述的那样，确立HCV复制子全细胞系统。该系统使我们可以评价我们的HCV蛋白酶化合物对HCV RNA复制的作用。简单地说，采用在Lohmann论文(Assession number：AJ238799)中描述的HCV毒株1b序列，通过Operon Technologies，Inc.(Alameda，CA)合成HCV cDNA，再采用标准分子生物学技术将全长复制子装配于质粒pGem9zf(+)(Promega，Madison，WI)中。复制子由以下成分组成：(i)HCV 5’UTR融合至(fused to)衣壳蛋白的前12个氨基酸，(ii)新霉素磷酸转移酶基因(neo)，(iii)来自脑心肌炎病毒(EMCV)的IRES和(iv)HCV NS3至NS5B基因和HCV 3’UTR。用ScaI线性化质粒DNAs，采用T7 MegaScript转录试剂盒(Ambion，Austin，TX)，按照厂商的指示，体外合成RNA转录物。将cDNA转录物体外转染进人肝细胞瘤细胞系HUH-7。在可选择标记新霉素(G418)的存在下，对组成性表达HCV复制子的细胞进行选择。随着时间的过去，所生成的细胞系以正和负链RNA生成和蛋白生成为特征。
HCV复制子FRET试验
开发HCV复制子FRET试验以监测本公开中所述的化合物对HCV病毒复制的抑制作用。组成性表达HCV复制子的HUH-7细胞在含有10％胎牛血清(FCS)(Sigma)和1mg/ml G418(Gibco-BRL)的Dulbecco′s改良Eagle培养基(Dulbecco′s Modified Eagle Media，DMEM)(Gibco-BRL)中生长。前晚在96-孔组织培养无菌皿中种植细胞(1.5x104个细胞/孔)。在含有4％FCS、1∶100青霉素/链霉素(Gibco-BRL)、1∶100L-谷氨酰胺和5％DMSO的DMEM中，在稀释板(试验中0.5％DMSO最终浓度)中制备化合物和无化合物的对照物。将化合物/DMSO混合物加至细胞中并于37℃下培养4天。4天后，首先用alamar蓝(Trek Diagnotstic Systems)的CC50读数评价细胞的细胞毒性。通过将第1/10(1/10th)的体积的alamar蓝加至培养基培养的细胞中，测定化合物的毒性(CC50)。4h后，用Cytofluor Series 4000(Perspective Biosystems)以530nm激发波长和580nm发射波长读出来自各孔的萤光信号。然后用磷酸盐缓冲盐水(PBS)彻底漂洗各板(3次150μl)。用含有用蒸馏水稀释到1X的HCV蛋白酶底物(5X细胞萤光素酶细胞培养溶解试剂(Promega#E153A)的25μl细胞溶解试验试剂溶解细胞，加入NaCl至最终150mM，将FRET肽底物(如对以上酶试验所述的那样)在100％DMSO中从2mM原料稀释至最终10μM。再将板放入Cytofluor 4000仪器中，该仪器已经被设置为340nm激发/490nm发射，对21个循环的自动模式，以动力模式阅读板。如对IC50的测定所述，确定EC50。
HCV复制子萤光素酶报道基因试验
作为第二个试验，在复制子萤光素酶报道基因试验证实从复制子FRET试验确认的EC50测定值。复制子萤光素酶报道基因试验的采用首先由Krieger等描述(Krieger N、Lohmann V和Bartenschlager R，J.Virol.75(10)：4614-4624(2001))。通过插入cDNA编码的Renilla萤光素酶基因的人源化形式和直接融合至萤光素酶基因的3’-端的接头序列，修饰针对我们FRET试验所述的复制子组成。采用定位在核中的Asc1限制位点，新霉素标记基因的直接上游，将该插入物引入复制子组成。还引入在1179位的适合的突变(丝氨酸成异亮氨酸)(Blight KJ，Kolykhalov，AA，Rice，CM，Science 290(5498)：1972-1974)。如上所述，产生稳定细胞系组成性表达的该HCV复制子组成。如针对HCV复制子FRET试验所述，用以下修饰进行萤光素酶报道基因试验。在37℃/5％CO2孵化器中4天后，采用Promega Dual-Glo萤光素酶试验系统分析细胞的Renilla萤光素酶活性。自包含细胞的各孔除去培养基(100μl)。向保留的50μl培养基中加入50μl Dual-Glo萤光素酶试剂，室温下晃动各板10min至2h。再向各孔加入Dual-Glo Stop & Glo试剂(50μl)，再于室温下另外再晃动各板10min至2h。采用发光程序用Packard TopCount NXT读出各板。
采用下式计算抑制百分率：
以各值绘图，并用XL拟合分析，得到EC50值。
对本公开化合物进行试验并发现具有如下活性：IC50：A＝1nM-3nM；B＝4nM-7nM；C＝8nM-11nM；EC50：A＝5.5nM-10nM；B＝11nM-20nM；C＝21nM-30nM.
表2
  实施例编号   IC50   EC50
  1   1nM   5nM
  2   1.5nM   16nM
  3   B   C
  4   A   B
5 B B
  6   A   A
  7   A   A
  8   C   C
  9   4nM   26nM
  10   A   A
  11   A   A
  12   A   A
  13   B   --
  14   C   --
  15   B   --
  16   B   --
  18   A   --
  19   A   --
  20   A   --
  21   A   --
  22   A   --
对于本领域的技术人员而言，显然，本公开不限于前述说明性的ei think实施例，并可在不脱离其实质特性下以其它特殊形式实现。因此，就所附权利要求书而不就前述实施例而言，希望在所有方面将实施例看作示例性的而不是限制，因此，权利要求的等同含义和范围内产生的所有变化都涵盖在其中。

Claims (22)

1.一种式(I)化合物
或其药学上可接受的盐，其中
n和n’各自独立为0、1、2或3；
R1选自羟基和-NHSO2R6；
R2选自氢、链烯基、烷基和环烷基，其中的链烯基、烷基和环烷基各自任选被1、2、3或4个卤代基取代；
R3选自氢、烷氧基、烷基硫烷基、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基和羟基；
各R4和R4’独立选自烷氧基、烷基、氰基、卤代、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NRaRb；
R5选自氢、链烯基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基和杂环基烷基；其中的烷基和环烷基各自任选被选自烷氧基、卤代烷氧基、卤代、卤代烷基、氰基和二烷基氨基的一个基团取代；
R6选自烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基和-NRaRb；其中的烷基和环烷基各自任选被选自烷基、烷氧基、卤代、卤代烷基、氰基、氰基烷基和卤代烷氧基的一个基团取代；
Ra和Rb独立选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、卤代烷基、杂环基和杂环基烷基；
Q是C4-8饱和或不饱和链，其中的链任选被独立选自烷基、卤代和卤代烷基的1、2、3或4个基团取代，其中的烷基和卤代烷基可任选形成具有它们所连接的碳原子的3-7元环；和
Z选自O、CH2和NRz，其中Rz选自氢和烷基。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是-NHSO2R6。
3.权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐，其中n和n′各为0或1。
4.权利要求3的化合物或其药学上可接受的盐，其中Q是C4-7饱和的未取代链和Z为O。
5.权利要求4的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是烷氧基。
6.权利要求5的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自任选被两个卤代基取代的链烯基、烷基和未取代的环烷基。
7.权利要求6的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5是烷基。
8.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1为-NHSO2R6；
R2选自任选被两个卤代基取代的链烯基、烷基和未取代的环烷基；和
R5是烷基。
9.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中
n和n′各为0或1；
R1是-NHSO2R6；其中R6是环烷基；
R2是任选被两个卤代基取代的链烯基、烷基和未取代的环烷基烷基；
R3是烷氧基；
R5是烷基；
Q是C4-7饱和的未取代链；和
Z是O。
10.一种选自以下的化合物
Figure FPA00001375035700041
Figure FPA00001375035700051
Figure FPA00001375035700061
或其药学上可接受的盐。
11.一种组合物，其包含权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
12.权利要求11的组合物，其还包含至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。
13.权利要求12的组合物，其中至少一种其它化合物是干扰素或利巴韦林。
14.权利要求13的组合物，其中的干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合α干扰素、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素τ。
15.权利要求12的组合物，其中至少一种其它化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、促进1型辅助T细胞响应发生的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫德、利巴韦林、肌苷5′-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
16.权利要求12的组合物，其中至少一种其它化合物有效抑制选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV排出、HCV NS5A蛋白和IMPDH的靶标的功能，以用于治疗HCV感染。
17.一种治疗患者的HCV感染的方法，其包括给予患者治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。
18.权利要求17的方法，其还包括在权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予具有抗HCV活性的至少一种其它化合物。
19.权利要求18的方法，其中至少一种其它化合物是干扰素或利巴韦林。
20.权利要求19的方法，其中的干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合α干扰素、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素τ。
21.权利要求18的方法，其中至少一种其它化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、促进1型辅助T细胞响应发生的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫德、利巴韦林、肌苷5′-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
22.权利要求18的方法，其中至少一种其它化合物有效抑制选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV排出、HCV NS5A蛋白和IMPDH的靶标的功能，以用于治疗HCV感染。
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