CN103936819A - 丙型肝炎病毒抑制剂 - Google Patents
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Abstract
公开了具有以下通式的丙型肝炎病毒抑制剂。还公开了包含所述化合物的组合物以及使用所述化合物抑制HCV的方法。
Description
本申请是申请号为200980121437.8(国际申请号为PCT/US2009/039993)、申请日为2009年4月9日、发明名称为“丙型肝炎病毒抑制剂”的中国专利申请的分案申请。
本申请要求2009年4月6日提交的非临时申请USSN12/418,677和2008年4月16日提交的临时申请USSN61/045,434的权益。
技术领域
本发明公开一般地涉及抗病毒化合物，更特别地涉及抑制通过丙型肝炎病毒(HCV)编码的NS3蛋白酶(在本文中亦称为“丝氨酸蛋白酶”)的功能的化合物，包含此类化合物的组合物，以及抑制NS3蛋白酶的功能的方法。
背景技术
HCV是一种重要的人类病原体，据估计在世界范围内感染170百万人——是1型人类免疫缺陷病毒所感染的数目的约五倍。这些HCV感染个体中相当大的部分发展成严重进行性肝病，包括肝硬化和肝细胞癌。
目前，最有效的HCV疗法采用α-干扰素与利巴韦林的组合、在40％之患者中产生持续功效。最近临床结果证实作为单一疗法，聚乙二醇化α-干扰素优于未经修饰的α-干扰秦。然而，甚至对于涉及聚乙二醇化α-干扰素与利巴韦林的组合的实验性治疗方案，相当大部分的患者亦下具有病毒负荷的持续减少。因此，存在开发用于治疗HCV感染的有效治疗剂的明显且未获满足的需要。
HCV为正链RNA病毒。基于推导氨基酸序列的比较以及5’-未转译区域中的广泛相似性，已将HCV归类为黄病毒家族中的独立属类。黄病毒家族的所有成员均具有包膜病毒粒子，该包膜病毒粒子含有经由翻译单一、未中断、开放阅读框架来编码所有已知的病毒特异性蛋白质的正链RNA基因组。
在整个HCV基因组中的核苷酸和编码氨基酸序列内发现相当大的异质性。已表征六种主要基因型，并且已描述超过50个亚型。HCV的主要基因型在世界范围内的分布存在差异，尽管存在基因型对于发 病机制和疗法的可能效应的许多研究，但HCV的遗传异质性的临床意义仍难于定义。
单链HCV RNA基因组为约9500个核苷酸长且具有编码约3000个氨基酸的单个大聚合蛋白的单一开放阅读框(ORF)。在受感染细胞中，此聚合蛋白在多个位点处通过细胞和病毒蛋白酶分解以产生结构性和非结构性(NS)蛋白质。在HCV的情况下，成熟非结构性蛋白质(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的产生是通过两种病毒蛋白酶实现的。第一种病毒蛋白酶在NS2-NS3接合处分解；第二种病毒蛋白酶为含于NS3的N末端区域内的丝氨酸蛋白酶，并且介导NS3下游以顺式方式在NS3-NS4A分解位点处，以及以反式方式其余NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位点处的所有后续分解。NS4A蛋白质似乎提供多种功能，充当NS3蛋白酶的共辅因子，并且可能辅助NS3和其他病毒复制酶组份的膜定位。NS3蛋白质与NS4A的复合物形成对于有效聚合蛋白处理、增强所有位点处的蛋白水解分解是必下可少的。NS3蛋白质还显示出核苷三磷酸酶和RNA解螺旋酶活性。NS5B是与HCV复制有关的RNA依赖性RNA聚合酶。
发明内容
本发明公开提供了可抑制NS3蛋白酶例如与NS4A蛋白酶组合起作用的肽化合物。此外，本发明公开描述了将组合疗法施用于患者，由此可将有效抑制HCV NS3蛋白酶的根据本发明公开的化合物与一种或两种具有抗HCV活性的其他化合物一起施用。
在第一方面，本发明公开提供了式(I)化合物
或其药学可接受的盐，其中
m是1、2或3；
n是0、1、2、3、或4；
p是0、1、2、3、4或5；
A是5-或6-元饱和或不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；
D是5-至8-元饱和或不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；其中所述5-至8-元环任选稠合于第二个5-至8-元饱和或不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；
X是O、S、SO、SO2、OCH2、CH2O或NH；
R1选自羟基和-NHSO2R7；其中R7选自烷基、芳基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基和-NRaRb，其中该烷基、该环烷基和该(环烷基)烷基的环烷基部分任选被1、2或3个选自下列的取代基取代：链烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、环烯基、(环烷基)烷基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和(NReRf)羰基；
R2选自氢、链烯基、烷基和环烷基，其中该链烯基、烷基和环烷基任选被卤素取代；
R3选自链烯基、烷氧基烷基、烷氧基羰基烷基、烷基、芳基烷基、羧基烷基、氰基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、卤代烷氧基、卤代烷基、(杂环基)烷基、羟基烷基、(NRcRd)烷基和(NReRf)羰基烷基；
R4选自芳基、芳基烷基和杂环基；
各个R5独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基(alkylsulfanyl)、芳基、羧基、氰基、环烷基、环烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、杂环基、羟基、-NRcRd、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基和氧代；条件是当A是6-元取代的环时，该环上的所有R5除了其中R5是氟的那些以外必需是在相对于与母体分子部分连接的环位点的间位和/或对位；
各个R6独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基、烷基磺酰基、芳基、芳氧基、芳基磺酰基、羧基、氰基、环烷基、环烷氧基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、-NRcRd、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基和氧代；
Ra和Rb独立地选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基和杂环基烷基；或者Ra和Rb与它们连接的氮原子一起形成4至7元单环状杂环；
Rc和Rd独立地选自氢、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基烷基、芳基羰基、卤代烷氧基烷基、卤代烷氧基羰基、卤代烷基和(NReRf)羰基；和
Re和Rf独立地选自氢、烷基、芳基、芳基烷基和杂环基；其中该芳基、该芳基烷基的芳基部分和该杂环基任选被1、2、3、4或5个独立地选自烷氧基、烷基和卤素的取代基取代。
在第一方面的第一实施方案中，本发明公开提供了式(I)化合物或其药学可接受的盐，其中m是l。
在第一方面的第二实施方案中，本发明公开提供了式(I)化合物或其药学可接受的盐，其中R1是-NHSO2R7。
在第一方面的第三实施方案中R7是环烷基。
在第一方面的第四实施方案中，本发明公开提供了式(I)化合物或其药学可接受的盐，其中X是O。
在第一方面的第五实施方案中，本发明公开提供了式(I)化合物或其药学可接受的盐，其中R4是杂环基。
在第一方面的第六实施方案中该杂环基是异喹啉基。
在第一方面的第七实施方案中，本发明公开提供了式(I)化合物或其药学可接受的盐，其中
m是l；
R1是-NHSO2R7；
R7是环烷基；
X是O；和
R4是杂环基。
在第一方面的第八实施方案中该杂环基是异喹啉基。
在第一方面的第九实施方案中，本发明公开提供了式(I)化合物或其药学可接受的盐，其中
m是l；
R1是-NHSO2R7；
R7是环烷基；
X是O；和
R4是杂环基，其中该杂环基选自任选取代的异喹啉基和喹啉基。
在第一方面的第十实施方案中，本发明公开提供了式(I)化合物或其药学可接受的盐，其中
m是1、2或3；
n是0、1、2、3、或4；
p是1、2、3、4或5；
A是5-或6-元饱和或不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；
D是5-至8-元饱和或不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；其中所述5-至8-元环任选稠合于第二个5-至8-元饱和或不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；
X是O、S、SO、SO2、OCH2、CH2O或NH；
R1选自羟基和-NHSO2R7；其中R7选自烷基、芳基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基和-NRaRb，其中该烷基、该环烷基和该(环烷基)烷基的环烷基部分任选被1、2或3个选自下列的取代基取代：链烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、环烯基、(环烷基)烷基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和(NReRf)羰基；
R2选自氢、链烯基、烷基和环烷基，其中该链烯基、烷基和环烷基任选被卤素取代；
R3选自链烯基、烷氧基烷基、烷氧基羰基烷基、烷基、芳基烷基、羧基烷基、氰基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、卤代烷氧基、卤代烷基、(杂环基)烷基、羟基烷基、(NRcRd)烷基和(NReRf)羰基烷基；
R4选自芳基、芳基烷基和杂环基；
各个R5独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基、芳基、羧基、氰基、环烷基、环烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、杂环基、羟基、-NRcRd、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基和氧代；条件是当A是6-元取代的环时，该环上的所有R5除了其中R5是氟的那些以外必需是在相对于与母体分子部分连接的环位点的间位和/或对位；
一个R6是芳基或杂环基，并且当存在时其它的独立地选自烷氧 基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基、烷基磺酰基、芳基、芳氧基、芳基磺酰基、羧基、氰基、环烷基、环烷氧基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、-NRcRd、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基和氧代；
Ra和Rb独立地选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基和杂环基烷基；或者Ra和Rb与它们连接的氮原子一起形成4至7元单环状杂环；
Rc和Rd独立地选自氢、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基烷基、芳基羰基、卤代烷氧基烷基、卤代烷氧基羰基、卤代烷基和(NReRt)羰基；和
Re和Rf独立地选自氢、烷基、芳基、芳基烷基和杂环基；其中该芳基、该芳基烷基的芳基部分和该杂环基任选被1、2、3、4或5个独立地选自烷氧基、烷基和卤素的取代基取代。
在第一方面的第十一实施方案中，本发明公开提供了式(I)化合物或其药学可接受的盐，其中
m是1、2或3；
n是0、1、2、3、或4；
p是0、1、2、3、4或5；
A是5-或6-元饱和或不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；
D是5-至8-元饱和或不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；其中所述5-至8-元环任选稠合于第二个5-至8-元饱和或不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；
X是O、S、SO、SO2、OCH2、CH2O或NH；
R1选自羟基和-NHSO2R7；其中R7选自烷基、芳基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基和-NRaRb，其中该烷基、该环烷基和该(环烷基)烷基的环烷基部分任选被1、2或3个选自下列的取代基取代：链烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、环烯基、(环烷基)烷基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和(NReRf)羰基；
R2是被卤素取代的烷基；
R3选自链烯基、烷氧基烷基、烷氧基羰基烷基、烷基、芳基烷基、 羧基烷基、氰基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、卤代烷氧基、卤代烷基、(杂环基)烷基、羟基烷基、(NRcRd)烷基和(NReRf)羰基烷基；
R4选自芳基、芳基烷基和杂环基；
各个R5独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基、芳基、羧基、氰基、环烷基、环烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、杂环基、羟基、-NRcRd、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基和氧代；条件是当A是6-元取代的环时，该环上的所有R5除了其中R5是氟的那些以外必需是在相对于与母体分子部分连接的环位点的间位和/或对位；
各个R6独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基、烷基磺酰基、芳基、芳氧基、芳基磺酰基、羧基、氰基、环烷基、环烷氧基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、-NRcRd、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基和氧代；
Ra和Rb独立地选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基和杂环基烷基；或者Ra和Rb与它们连接的氮原子一起形成4至7元单环状杂环；
Rc和Rd独立地选自氢、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基烷基、芳基羰基、卤代烷氧基烷基、卤代烷氧基羰基、卤代烷基和(NReRf)羰基；和
Re和Rf独立地选自氢、烷基、芳基、芳基烷基和杂环基；其中该芳基、该芳基烷基的芳基部分和该杂环基任选被1、2、3、4或5个独立地选自烷氧基、烷基和卤素的取代基取代。
在第二方面，本发明公开提供了式(II)化合物
或其药学可接受的盐，其中
n是0、1、2、3、或4；
p是0、1、2、3、4或5；
A是5-或6-元的部分或完全不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；
D是5-至8-元的部分或完全不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；其中该5-至8-元环任选稠合于第二个5-至8-元的部分或完全不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；
R2选自氢、链烯基、烷基和环烷基，其中该链烯基、烷基和环烷基任选被卤素取代；
R3是烷基；
R4是杂环基；
各个R5独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基、芳基、羧基、氰基、环烷基、环烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、杂环基、羟基、-NRcRd、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基和氧代；条件是当A是6-元取代的环时，该环上的所有R5除了其中R5是氟的那些以外必需是在相对于与母体分子部分连接的环位点的间位和/或对位；
各个R6独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基、烷基磺酰基、芳基、芳氧基、羧基、氰基、环烷基、环烷氧基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、-NReRd、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基和氧代；烷基羰基、烷基硫烷基，
R7是环烷基；
Ra和Rb独立地选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基和杂环基烷基；或者Ra和Rb与它们连接的氮原子一起形成4至7元单环状杂环；
Rc和Rd独立地选自氢、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基烷基、卤代烷氧基烷基、卤代烷氧基羰基、卤代烷基和(NReRf)羰基；和
Re和Rf独立地选自氢、烷基、芳基、芳基烷基和杂环基；其中该芳基、该芳基烷基的芳基部分和该杂环基任选被1个或2个独立地选 自烷氧基、烷基和卤素的取代基取代。
在第二方面的第一实施方案中，本发明公开提供了式(II)化合物或其药学可接受的盐，其中
n是0或1；
p是0、1、2、3、4或5；
A是5-或6-元的部分或完全不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；
D是5-至8-元的部分或完全不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；其中该5-至8-元环任选稠合于第二个5-至8-元的部分或完全不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；
R2是链烯基；
R3是烷基；
R4是杂环基；
各个R5独立地选自烷氧基、烷基和芳基；条件是当A是6-元取代的环时，该环上的所有R5基团必需是在相对于与母体分子部分连接的环位点的间位和/或对位；
各个R6独立地选自烷氧基、烷基、烷基磺酰基、芳基氧基、羧基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基和-NRcRd；
R7是环烷基；和
Rc和Rd各自是烷基。
在第二方面的第三实施方案中，R4是杂环基，其中该杂环基是异喹啉基。
在第二方面的第四实施方案中，本发明公开提供了式(II)化合物
或其药学可接受的盐，其中
n是0、1、2、3、或4；
p是0、1、2、3、4或5；
A是5-或6-元的部分或完全不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；
D是5-至8-元的部分或完全不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；其中该5-至8-元环任选稠合于第二个5-至8-元的部分或完全不饱和环，其任选含有1、2、3或4个选自氮、氧和硫的杂原子；
R2选自氢、链烯基、烷基和环烷基，其中该链烯基、烷基和环烷基任选被卤素取代；
R3是烷基；
R4是杂环基；
各个R5独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基、芳基、羧基、氰基、环烷基、环烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、杂环基、羟基、-NRcRd、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基和氧代；条件是当A是6-元取代的环时，该环上的所有R5除了其中R5是氟的那些以外必需是在相对于与母体分子部分连接的环位点的间位和/或对位；
各个R6独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基、烷基磺酰基、芳基、芳氧基、羧基、氰基、环烷基、环烷氧基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、-NRcRd、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基和氧代；烷基羰基、烷基硫烷基，
R7是环烷基；
Ra和Rb独立地选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基和杂环基烷基；或者Ra和Rb与它们连接的氮原子一起形成4至7元单环状杂环；
Rc和Rd独立地选自氢、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基烷基、卤代烷氧基烷基、卤代烷氧基羰基、卤代烷基和(NReRf)羰基；和
Re和Rf独立地选自氢、烷基、芳基、芳基烷基和杂环基；其中该芳基、该芳基烷基的芳基部分和该杂环基任选被1个或2个独立地选 自烷氧基、烷基和卤素的取代基取代。
在第三方面，本发明公开提供了一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学可接受的盐以及药学可接受的载体。在第三方面的第一实施方案中该组合物进一步包含至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。在第三方面的第二实施方案中至少一种的该其它化合物是干扰素或利巴韦林。在第三方面的第三实施方案中该干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合干扰素(consensus interferon)、干扰素α2A和成淋巴细胞样(lymphoblastiod)干扰素τ。
在第三方面的第四实施方案中，本发明公开提供了一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学可接受的盐、药学可接受的载体、以及至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中至少一种的该其它化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、增强1型T辅助细胞应答的发生的化合物、干扰RNA(interfering RNA)、反义RNA、咪喹莫特(Imiqimod)、利巴韦林、肌苷5’-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
在第三方面的第五实施方案中，本发明公开提供了一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学可接受的盐、药学可接受的载体、以及至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中至少一种的该其它化合物能有效抑制选自下列的靶功能：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV流出、HCV NS5A蛋白和用于治疗HCV感染的IMPDH。
在第四方面，本发明公开提供了一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学可接受的盐，1、2、3、4或5种具有抗HCV活性的其它化合物以及药学可接受的载体。在第四方面的第一实施方案中该组合物包含3或4种具有抗HCV活性的其它化合物。在第四方面的第二实施方案中该组合物包含1或2种具有抗HCV活性的其它化合物。
在第五方面，本发明公开提供了治疗患者HCV感染的方法，该方法包括给该患者施用治疗有效量的式(I)或其药学可接受的盐。在第五方面的第一实施方案中该方法进一步包括在式(I)化合物或其药学可接受的盐之前、之后或同时施用至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。在第五方面的第二实施方案中至少一种的该其它化合物是干扰素或利巴韦林。在第五方面的第三实施方案中该干扰素选自干扰素 α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合干扰素、干扰素a2A和成淋巴细胞样干扰素τ。
在第五方面的第四实施方案中，本发明公开提供了治疗患者HCV感染的方法，该方法包括给该患者施用治疗有效量的式(I)或其药学可接受的盐，以及在该式(I)化合物或其药学可接受的盐之前、之后或同时施用至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中至少一种的该其它化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、增强1型T辅助细胞应答的发生的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、肌苷5’-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
在第五方面的第五实施方案中，本发明公开提供了治疗患者HCV感染的方法，该方法包括给该患者施用治疗有效量的式(I)或其药学可接受的盐，以及在该式(I)化合物或其药学可接受的盐之前、之后或同时施用至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中至少一种的该其它化合物能有效抑制选自下列的靶功能：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV流出、HCV NS5A蛋白和用于治疗HCV感染的IMPDH。
在第六方面，本发明公开提供了治疗患者HCV感染的方法，该方法包括给患者施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学可接受的盐，以及在该式(I)化合物或其药学可接受的盐之前、之后或同时施用1、2、3、4或5种具有抗HCV活性的其它化合物。在第六方面的第一实施方案中，该方法包括施用3或4种具有抗HCV活性的其它化合物。在第六方面的第二实施方案中，该方法包括施用1或2种具有抗HCV活性的其它化合物。
本发明公开的其它方面可包括本文公开的实施方案的适宜组合。
再其它方面和实施方案可见于本文提供的说明。
具体实施方式
本发明公开的说明应当理解为符合化学键的法则和原理。在某些情况下，有必要排除氢原子以便在任一给定位置提供取代基。
应当理解，本发明公开包括的化合物是适合作为药剂使用的那些。
期望的是，在分子中的特定位置的任何取代基或变量的定义将与 其在该分子中其它位置的定义无关。例如，当n是2时，两个R5基团的每一个可以相同或不同。
在本发明公开中，R2选自氢、链烯基、烷基和环烷基，其中该链烯基、烷基和环烷基任选被卤素取代。应当理解，当该链烯基、烷基或环烷基被取代进，它们被一个至最大数目的允许的卤素取代。在一个实施方案中，该链烯基、烷基和环烷基任选被1、2或3个卤素基团取代。在另一实施方案中，该链烯基、烷基和环烷基任选被1或2个卤素基团取代。
全部专利、专利申请、说明书中引用的参考文献均以其分部内容通过引用并入本文。在矛盾时，将以本发明公开包括定义为准。
如用于本文的，单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数指代，除非上下文另有明确说明。
术语“链烯基”，如本文使用的，是指含有至少一个碳-碳双键的2至6个碳原子的直链或支链基团。
术语“烷氧基”，如本文使用的，是指通过氧原子连接到母体分子部分的烷基基团。
术语“烷氧基烷基”，如本文使用的，是指被1、2或3个烷氧基基团取代的烷基基团。
术语“烷氧基羰基”，如本文使用的，是指通过羰基基团连接到母体分子部分的烷氧基基团。
术语“烷氧基羰基烷基”，如本文使用的，是指被1、2或3个烷氧基羰基基团取代的烷基基团。
术语“烷基”，如本文使用的，是指含有1至10个碳原子的得自直链或支链饱和烃的基团。
术语“烷基羰基”，如本文使用的，是指通过羰基基团连接到母体分子部分的烷基基团。
术语“烷基硫烷基”，如本文使用的，是指通过硫原子连接到母体分子部分的烷基基团。
术语“烷基磺酰基”，如本文使用的，是指通过磺酰基基团连接到母体分子部分的烷基基团。
术语“芳基”，如本文使用的，是指苯基基团，或者双环稠合环系统其中所述环中的一个或两个是苯基基团。双环稠合环系统包括与4- 至6-元芳族或非芳族碳环稠合的苯基基团。本发明公开的芳基基团可以通过该基团中的任意可取代碳原子连接到母体分子部分。芳基基团的典型实例包括但不限于茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。本发明公开的芳基基团任选被1、2、3、4或5个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、另一个芳基基团、羧基、环烷基、环烷氧基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、硝基、-NRcRd、(NRcRd)羰基和氧代；其中该另一个芳基基团和该杂环基进一步任选被1、2、3、4或5个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
术语“芳基烷基”，如本文使用的，是指被1、2或3个芳基基团取代的烷基基团。
术语“芳基羰基”，如本文使用的，是指通过羰基基团连接到母体分子部分的芳基基团。
术语“芳氧基”，如本文使用的，是指通过氧原子连接到母体分子部分的芳基基团。
术语“芳基磺酰基”，如本文使用的，是指通过磺酰基连接到母体分子部分的芳基基团。
术语“羰基”，如本丈使用的，是指-C(O)-。
术语“羧基”，如本文使用的，是指-CO2H。
术语“羧基烷基”，如本丈使用的，是指被1、2或3个羧基取代的烷基基团。
术语“氰基”，如本文使用的，是指-CN。
术语“氰基烷基”，如本文使用的，是指被1、2或3个氰基取代的烷基基团。
术语“环烯基”，如本文使用的，是指非芳族的特别是不饱和单环、双环或三环的环系统，其具有3-14个碳原子和0个杂原子。环烯基的典型实例包括但不限于环己烯基、十氢萘和降冰片烯基(norbornylenyl)。
术语“环烷基”，如本丈使用的，是指饱和的单环或双环状烃环系统，其具有3-10个碳原子和0个杂原子。环烷基的典型实例包括但不限于环丙基、环丁基和环戊基。
术语“(环烷基)烷基”，如本丈使用的，是指被l、2或3个环烷基取 代的烷基基团。
术语“环烷基氧基”，如本文使用的，是指通过氧原子连接到母体分子部分的环烷基。
术语“卤素”和“卤原子”如用于本文的是指F、Cl、Br和I。
术语“卤代烷氧基”，如本文使用的，是指通过氧原子连接到母体分子部分的卤代烷基。
术语“卤代烷基”，如本文使用的，是指被1、2、3或4个卤原子取代的烷基基团。
术语“杂环基”，如本文使用的，是指含有1、2或3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-、6-或7-元环。5-元环具有0-2个双键，6-和7-元环具有0-3个双键。术语“杂环基”还包括双环基团，其中该杂环基环与4-至6-元芳族或非芳族碳环或者另一单环状杂环基稠合。本发明公开的杂环基可通过该基团中的碳原子或氮原子连接到母体分子部分。杂环基基团的实例包括但不限于苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、吲哚啉基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异唑基、吗啉基、 唑基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、噻唑基、噻吩基和硫吗啉基。本发明公开的杂环基基团任选被1、2、3、4或5个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、羧基、环烷基、环烷氧基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、另一个杂环基基团、羟基、硝基、-NRcRd、(NRcRd)羰基和氧代；其中该芳基和该另一个杂环基基团进一步任选被1、2、3、4或5个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
术语“杂环基烷基”，如本文使用的，是指被1、2或3个杂环基取代的烷基基团。
术语“羟基”，如本文使用的，是指-OH。
术语“羟基烷基”，如本丈使用的，是指被1、2或3个羟基取代的烷基基团。
术语“硝基”，如本文使用的，是指-NO2。
术语“-NRaRb”，如本丈使用的，是指两个基团Ra和Rb，它们通过氮原子连接到母体分子部分。Ra和Rb独立地选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基和杂环基烷基；或 者Ra和Rb与它们连接的氮原子一起形成5或6-元单环状杂环。
术语“-NRcRd”，如本文使用的，是指两个基团Rc和Rd，它们通过氮原子连接到母体分子部分。Rc和Rd独立地选自氢、烷氧基羰基、烷基和烷基羰基。
术语“(NRcRd)烷氧基”，如本文使用的，是指通过氧原子连接到母体分子部分的(NRcRd)烷基基团。
术语“(NRcRd)烷基”，如本文使用的，是指被1、2或3个-NRcRd基团取代的烷基基团。
术语(NRcRd)羰基”，如本文使用的，是指通过羰基基团连接到母体分子部分的-NRcRd基团。
术语“-NReRf”，如本文使用的，是指两个基团Re和Rf，它们通过氮原子连接到母体分子部分。Re和Rf独立地选自氢、烷基、芳基和芳基烷基。
术语“(NReRf)羰基”，如本文使用的，是指通过羰基基团连接到母体分子部分的-NReRf基团。
术语“(NReRf)羰基烷基”，如本文使用的，是指通过烷基基团连接到母体分子部分的(NReRf)羰基基团。
术语“(NReRf)磺酰基”，如本文使用的，是指通过磺酰基基团连接到母体分子部分的-NReRf基团。
术语“氧代”，如本文使用的，是指＝O。
术语“磺酰基”，如本文使用的，是指-SO2-。
术语″前药”，如本文使用的，表示通过在血液中水解在体内迅速转化成母体化合物。本发明公开的前药包括母体分子上的羟基基团的酯、母体分子上的羧基基团的酯、以及母体分子上的胺类的酰胺。
本发明公开的化合物可以以药学可接受的盐存在。术语“药学可接受的盐”，如本文使用的，表示本发明公开的化合物的盐或两性离子型，其是水溶性或油溶性的或者可分散的，其在合理的医学判断范围内适用于与患者的组织接触而无过度的毒性、刺激性、过敏反应或其它问题，或者同量的并发症，具有合理的利益风险比，并且对于它们的应用是有效的。该盐可以在化合物的最终分离和纯化期间制备，或者分别地通过使适宜的碱性官能团与适宜的酸反应。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、已二酸盐、藻酸盐、枸橼酸盐、天冬氨酸盐、苯甲 酸盐、苯磺酸盐、酸式硫酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐；二葡萄糖酸盐、磷酸甘油盐、磷酸甘油、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、氢氯化物、氢溴化物、氢碘化物、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲基苯磺酸盐、甲磺酸盐、亚萘基磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、巴莫酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一酸盐。可用于形成药学可接受的加成盐的酸的实例包括无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及有机酸例如草酸、马来酸、琥珀酸和枸橼酸。
碱加成盐可在化合物的最终分离和纯化期间通过使酸性基团与合适的碱(例如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，或氨或有机伯、仲或叔胺)反应来制备。药学可接受的盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁和铝，以及无毒季胺阳离子，例如铵、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己胺、普鲁卡因(procaine)、二苄胺、N，N-二苄基苯乙胺和N，N-二苄基乙二胺。适用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
如用于本文的，术语“抗HCV活性”表示化合物处理HCV病毒是有效的。
术语“本发明公开的化合物”和等效表述意欲包涵式(I)化合物及其药学可接受的对映异构体、非对映异构体和盐。类似地，在上下文允许的情况下，提及中间体意欲包涵其盐。
术语“患者”包括人类和其它哺乳动物。
术语“药物组合物”表示一种组合物，其包含本公开内容的化合物以及至少一种另外的药用载体，即辅助剂、赋形剂或载体，例如稀释剂、防腐剂、填充剂、流动调节剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、混悬剂、甜味剂、矫味剂、芳香剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂，这取决于施用方式和剂型的性质。例如，可以使用罗列于Remington’s Pharmaceutical Sciences，18thed.，Mack Publishing Company，Easton，PA(1999)中的成分。
本文中使用词组“药学可接受的”是指在可靠的医学判断范围内与 合理风险/益处比相匹配而适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。
术语“治疗有效量”表示足以显示有意义的患者益处(例如病毒负荷的持续减少)的每一活性组份的总量。当应用于单独施用的个别活性成份时，该术语系指该成份本身。当应用于组合时，该术语指连续或者同时地以组合方式施用，产生治疗效应的活性成份的组合量。
术语“治疗”和“治疗”是指：(i)预防可能易感染疾病、病症和/或病状但尚未诊断为患有该疾病、病症和/或病状的患者出现该疾病、病症和/或病状；(ii)抑制该疾病、病症或病状，亦即阻止其发展；和/或(iii)减轻该疾病、病症或病状，亦即导致该疾病、病症和/或病状消退。
在用于命名本发明公开的化合物的情况下，如本文中所用的名称P1’、P1、P2、P2*、P3和P4将相对于天然肽分解底物的结合，对蛋白酶抑制剂结合的氨基酸残基的相对位置定位。分解出现于天然底物中P1和P1’之间，其中非主要位置指定从肽天然分解位点的C末端开始、朝向N末端延伸的氨基酸；而主要位置从分解位点名称的N末端发出并朝向C末端延伸。例如，P1’是指远离分解位点的C末端的右手端的第一位置(亦即N末端第一位置)；而P1从C末端分解位点的左手侧开始编号，P2：从C末端的第二位置开始编号，等等。(参见Berger A.&Schechter I.，Transactions of the Royal Society London series(1970)，B257，249-264)。
下图显示本发明公开的化合物的名称。
不对称中心存在于本发明公开的化合物中。例如，该化合物可包括下式的P1环丙基要素：
其中C1和C2各自表示环丙基环的位置1和2处的不对称碳原子。
应了解，本发明公开涵盖具有抑制HCV蛋白酶的能力的所有立体化学形式或其混合物。
本发明公开的某些化合物亦可以可分离的不同稳定构形形式存在。归因于例如由于位阻或环应力而围绕不对称单键的限制性旋转的 扭转不对称性可允许分离不同构象异构体。本发明公开包括这些化合物的每一构形异构体及其混合物。
本发明公开的某些化合物可以两性离子形式存在，并且本发明公开包括这些化合物的每一两性离子形式及其混合物。
当有可能将治疗有效量的式(I)化合物以及其药学可接受的盐作为化学原料投药以用于疗法中时，有可能以药物组合物形式提供活性成份。因此，本发明公开进一步提供包括治疗有效量的式(I)化合物或其药学可接受的盐以及一种或多种药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。式(I)化合物及其药学可接受的盐是如上所述的。载体、稀释剂或赋形剂必须在与调配物的其它成份相容且对其接受者无害的意义上可接受的。根据本发明公开的另一方面，还提供制备药物制剂的方法，其包括将式(I)化合物或其药学可接受的盐与一种或多种药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。
药物制剂可以每单位剂量含有预定量的活性成份的单位剂量形式提供。每天每公斤体重约0.01至约250毫克(“mg/kg”)、优选每天每公斤体重约0.05至约100mg/kg的本发明公开的化合物的剂量水平在预防和治疗HCV介导的疾病的单一疗法中是典型的。通常，本发明公开的药物组合物每天将施用约1至约5次，或者以连续输注方式施用。该施药可用作慢性或急性疗法。可与载体物质组合以产生单一剂型的活性成份的量将根据所治疗的病状、病状的严重程度、施用时间、施用途径、所用化合物的排泄率、治疗持续时间以及患者的年龄、性别、体重和健康状况而变化。优选的单位剂型是含有活性成份的如上文所述的日剂量或亚剂量或其合适分剂量的那些。一般地，治疗以基本上少于化合物的最佳剂量的小剂量起始。此后，以小增量增加剂量直至达到该情况下的最佳效应。一般而言，化合物最期望以通常将提供抗病毒有效结果而不会导致任何有害或不利副作用的浓度水平施用。
当本发明公开的组合物包含本发明公开的化合物与一种或多种其它治疗剂或预防剂的组合时，该化合物及其它药剂通常以一般在单一疗法方案中投与的剂量的约10至150％之间，并且更优选约10至80％之间的剂量水平存在。
药物制剂可适于通过任何合适途径给药，例如通过经口(包括颊内 或舌下、)、直肠、经鼻、局部(包括颊内、舌下或经皮)、阴道或胃肠外(包括皮下、皮内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或皮内注射或输注)途径给药。此类制剂可由药剂学技术中己知的任何方法(例如，通过将活性成份与载体或赋形剂结合)来制备。
适于经口施用的药物制剂可以离散单位形式提供，例如胶囊剂或片剂；散剂或颗粒剂；水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；可食用发泡体或发泡剂：或水包油型液体乳液或油包水型乳液。
例如，对于以片剂或胶囊剂的形式经口给药，可将活性药物组份与经口、无毒、药学可接受的惰性载体(例如乙醇、甘油、水及类似物)组合。通过将化合物粉碎至合适的精细尺寸且与同样经粉碎的医药载体(例如可食用碳水化合物，例如淀粉或甘露醇)混合来制备散剂。亦可存在调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
通过制备如上所述的粉末混合物并填充成形明胶外壳来制造胶囊剂。在填充操作之前，可将例如胶状二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇的助流剂和润滑剂添加至粉末混合物中。亦可添加例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠的崩解剂或增溶剂以改良摄取胶囊时药物的利用率。
此外，期望或需要时，亦可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。合适粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成胶(例如阿拉伯胶、西黄蓍胶或海藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇及类似物。用于这些剂型中的润滑剂包括油酸钠、氯化钠及类似物。崩解剂包括(但不限于)淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄胞胶及类似物。例如，通过制备粉末混合物、粒化或干压、添加润滑剂和崩解剂并压成片剂来配制片剂。粉末混合物通过将适当粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质混合并任选与粘合剂(例如羧甲墓纤维紊、海藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮)、溶液迟延剂(例如石蜡)、再吸收加速剂(例如四级盐)及/或吸收剂(例如膨润土、高岭土或磷酸氢钙)混合来制备。可通过以粘合剂(例如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶浆(acadia mucilage)或纤维素或聚合物质的溶液)润湿并迫使其穿过筛网来使粉末混合物制粒。作为制粒的替代方法，可使粉末混合物穿过压片机并且结果为不完全成形的干压物破裂为颗粒。可借助于添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油来润滑颗粒 以防止粘住成片模具。随后，将经润滑的混合物压缩成片剂。在不经过制粒或干压步骤的情况下，还可将本发明公开的化合物与自由流动性惰性载体组合并直接压缩成片剂。可提供由虫胶的密封涂层、糖或聚合物质的涂层以及蜡的抛光涂层组成的透明或不透明保护涂层。可将染料添加至这些涂层中以区分不同单位剂量。
可以单位剂量形式制备例如溶液、糖浆及酏剂的口服液体以使得给定量含有预定量的化合物。糖浆可通过将化合物溶解于经适当调味的水溶液中来制备，而酏剂是通过使用无毒介质来制备。亦可添加增溶剂和乳化剂(例如乙氧基化异十八醇类和聚氧化乙烯山梨糖醇醚)、防腐剂、调味添加剂(例如薄荷油或天然甜味剂，或糖精或其它人工甜味料及类似物。
适当时，用于经口施用的剂量单位剂型可以被微囊化。亦可(例如)通过涂布或包埋颗粒物质于聚合物、蜡或类似物中来制备制剂以延长或持续释放。
式(I)化合物及其药学可接受的盐亦可以脂质体传递系统(例如单层小微脂粒、单层大微脂粒和多层微脂粒)的形式施用。脂质体可由多种磷脂(例如胆固醇、十八胺或磷脂酰胆碱)形成。
式(I)化合物及其药学可接受的盐亦可通过使用单克隆抗体作为与化合物分子偶合的个别载体来投递。该化合物亦可与作为靶向药物载体的可溶性聚合物偶合。此类聚合物可包括聚乙烯吡咯啶酮、吡喃复聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺酚、聚羟基乙基天冬酰胺酚或经棕榈酰基残基取代的聚氧化乙烯聚赖氨酸。此外，该化合物可与一类适用于达到药物受控释放的生物可降解聚合物偶合，该聚合物例如聚乳酸、聚ε己内酯(polepsilon caprolactone)、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯以及水凝胶的交联或两性嵌段共聚物。
适于经皮给药的药物制剂可以意欲保持与接受者的表皮紧密接触较长时段的离散贴片形式提供。例如，活性成份可通过如一般性地描述于Pharmaceutical Research，3(6)，318(1986)中的离子导入疗法从贴片中传递。
适于局部给药的药物制剂可配制成软膏剂、乳膏剂、悬浮液、洗剂、散剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。
为治疗眼或其它外部组织(例如口腔和皮肤)，优选以局部软膏剂或乳膏形式应用该制剂。当配制成软膏剂时，活性成份可与石蜡或水混溶性软膏基质一起使用。或者，可将活性成份与水包油型乳膏基质或油包水型基质一起配制成乳膏。
适于局部施用于眼睛的药物制剂包括滴眼剂，其中活性成份溶解或悬浮于合适的载体尤其是水性溶剂中。
适于局部施用于口腔中的药物制剂包括口含剂、锭剂和漱口剂。
适于经直肠施用的药物制剂可以栓剂形式或以灌肠剂形式提供。
适于经鼻施用的药物制剂(其中载体为固体)包括粒度(例如)介于20至500微米范围中的粗粉末，其以用鼻吸气的方式施用，亦即通过从贴近鼻保持的粉末容器通过鼻孔快速吸入来施药。用于以经鼻喷雾剂或滴鼻剂形式施用的合适的制剂(其中载体为液体)包括活性成份的水溶液或油溶液。
适于通过吸入给药的药物制剂包括细粒粉剂或雾状物，其可借助于多种类型的定剂量加压气雾剂、雾化器或吹入器而产生。
适于阴道施用的药物制剂可以阴道栓剂、棉塞剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、发泡剂或喷雾剂制剂形式提供。
适于胃肠外施用的药物制剂包括可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂以及使得制剂与预定接受者的血液等渗的溶质的水性量非水性无菌注射溶液；以及可包括悬浮剂和增稠剂的水性和非水性无菌悬浮液。
制剂可以在单位剂量或多剂量容器(例如密封安瓿和小瓶)中提供，并且可储存于冷冻干燥(冻干)条件下，仅需要在使用之前即刻添加无菌液体载体(例如注射用水)。临时注射溶液和悬浮液可从无菌粉末、颗粒和片剂来制备。
应了解，除以上特别提及的成份以外，考虑到所讨论制剂的类型，该制剂还可包括本领域已知的其它药剂，例如适于经口施用的那些制剂可包括调味剂。
下表1列举可与本发明公开的化合物一起施用的化合物的一些说明性实例。本发明公开的化合物可在组合疗法中与其他抗HCV活性化合物一起施用(共同地或独立地)，或可通过将该化合物组合为组合物来施用该化合物。
表1
本发明公开的化合物亦可用作试验室试剂。化合物可以是试验地提供研究工具以用于设计病毒复制分析检定、动物检定系统的变异以及结构生物研究以进一步增进对HCV疾病机制的认识。此外，本发明公开的化合物可用于建立或测定其它抗病毒化合物例如通过竞争抑制的结合位置。
本发明公开的化合物亦可用于治疗或预防病毒污染的物质并因此减小会与此类物质例如血液、组织、手术器械和衣服、试验室仪器 和衣服、以及血液收集品或输液器和物质的试验室或医学人员或患者的病毒感染的风险。
本发明公开将包括式(I)化合物，当通过合成方法或通过生物方法制备时包括人或动物体(体内)出现的那些或者体外方法出现的那些。
用于本申请的缩写(特别是包括以下说明性流程和实施例中的那些)是本领域技术人员公知的。所用缩写的一些实例如下：THF是四氢呋喃；DBU是1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯；CDI是1，1’-羰基二咪唑；Boc或BOC是叔丁氧基羰基；TFA是三氟乙酸；HATU是O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲脲磷酸盐；PyBOP是苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷基-六氟磷酸盐；MeI是甲基碘；MOtBu是叔丁醇钾、钠或锂；TBME或MTBE是叔丁基甲基醚；DMF是N，N-二甲基甲酰胺；DMSO是二甲基亚砜；DEAD是二乙基偶氮二碳酸酯；Ph是苯基；POPd是[(t-Bu)2POH]2PdCl2；NaOBu是叔丁醇钠；OAc是乙酸盐；MeOH是甲醇；DCM是二氯甲烷；t-BuOK是叔丁醇钾；PyBrop是溴代-三-吡咯烷基六氟磷酸盐；NMO是N-甲基吗啉-N-氧化物；NMM是N-甲基吗啉；HBTU是O-苯并三唑-N，N，N’，N’-四甲基-脲六氟磷酸盐；DIEA、DIPEA或iPr2EtN是二异丙基乙胺；HOBt或HOBT是N-羟基苯并三唑；n-BuLi是正丁基锂；t-BuLi或tBuLi是叔丁基锂；DCM是二氯甲烷；4-DMAP或DMAP是4-N，N-二甲基氨基吡啶；DCE是1，2-二氯乙烷；HOAt是1-羟基-7-氮杂苯并三唑；Fmoc是9-芴基甲氧基羰基；PVP是聚乙烯吡咯烷酮；NBS是N-溴琥珀酰胺；(i-PrO)3B是三异丙氧基硼烷；TMSCHN2是三甲基甲硅烷基重氮甲烷；RT或rt是室温或保留时间(上下文会指明)；MeCN是乙腈；和EtOAc是乙酸乙酯。
用于合成本发明公开的化合物的起始物质是本领域已知的，并且可以容易地制备或者是商业可得的。
提供下面描述的以下方法以用于说明性的目的并且不是要限制权利要求的范围。应当认识到，有必要制备一种化合物，其中的官能团使用常规保护基团保护，然后除去该保护基团，得到本发明公开的化合物。关于符合本发明公开的保护基团的使用的细节是本领域已知的。
流程I显示了一般性的方法过程，其中式(I)化合物是通过三肽羧 酸中间体(1)与P1’磺酰胺偶合而构成的。所述偶合反应要求羧酸(1)用偶合剂例如羰基二咪唑在溶剂例如THF中处理，可以在碱例如DBU存在下、在溶剂例如THF或二氯甲烷中，将其加热回流，接着添加形成的(1)的衍生物至P1’磺酰胺中。
流程I
构建式(I)化合物的备选方法显示于流程II。其中P1`磺酰胺部分偶合于P1部分，该偶合使用了用于流程1的方法。得到的P1-P1`部分可以随后在其氨基末端脱保护。在此一般性实例中，使用Boc保护基团，但是本领域技术人员将理解，一些适宜的氨基保护基团可用于此方法。可以使用酸例如三氟乙酸、在溶剂例如二氯乙烷中除去该Boc保护基团，得到脱保护的胺，其为TFA盐。所述TFA胺盐可以直接用于后续的偶合反应，或者作为备选的TFA胺盐可以首先转化成HCl胺盐，再将此HCl胺盐用于所述偶合反应，如流程II所示。所述HCl胺盐(3)与P4-P3-P2中间体的羧基末端的偶合可能使用偶合剂例如HATU、在溶剂例如二氯甲烷中而完全，得到式(I)化合物(4)。
流程II
构建式(I)化合物的备选方法显示于流程III。在此，使P1-P1`末端胺(1)的盐酸盐偶合到P2部分的羧基基团，该偶合使用偶合剂例如PyBOP、在碱例如二异丙胺存在下、在溶剂例如二氯甲烷中进行。可以在两个步骤方法中使所得P2-P1-P1`中间体转化成式(I)化合物，其中第一步骤是使用酸例如TFA、在溶剂例如二氯甲烷中使P2胺末端脱保护。使用标准偶合剂例如PyBop、在碱例如二异丙基胺存在下并使用溶剂例如二氯甲烷，所得三氟乙酸盐可以与P4-P3部分的羧基末端偶合，得到式(I)化合物(4)。
流程III
用于以上流程中的P4-P3-P2中间体可以如前文所述与流程IV所示方法的进一步描述来构建。P4-P3中间体(1)的游离羧基末端可以与P2部分的氨基末端偶合，得到P4-P3-P2二肽(2)。P4-P3-P2中间体的羧基末端可以通过酯基的皂化来脱保护，得到P4-P3-P2为游离羧酸(3)。中间体如(3)可以使用本文描述的方法转化成式(I)化合物。
流程IV
在式(I)化合物的构建中，使用上文所列和下文更详细描述的一个一般性方法中，使P1`末端掺入到该分子中。在一些实施例中，P1` 部分(其为环烷基或烷基磺酰胺类)是商业可得的，或者可以从相应的烷基-或环烷基磺酰氯通过用氨处理该磺酰氯来制备。或者，这些磺酰胺类可以使用流程V所示一般性方法来合成。可以将商业可得的3-氯丙基磺酰氯(1)转化成适当保护的磺酰胺，该转化例如通过用叔丁胺处理。然后通过用2当量的碱例如丁基锂、在溶剂例如THF中、在低温下处理，将获得的磺酰胺(2)转化成相应的环烷基磺酰胺。通过用酸处理，可以将所得环烷基磺酰胺脱保护，得到需要的未保护的环烷基氨磺酰。
流程V
例如上述操作的修饰方法，取代的环烷基磺酰胺类还可以掺入到式(I)化合物中。例如，流程VI的中间体2可以用2当量的碱例如丁基锂处理，再使所得反应混合物用亲电子试剂例如碘甲烷处理，得到取代的环烷基磺酰胺(3)。此中间体(3)可以在N-末端脱保护，再使所得化合物(4)用作制备式(I)化合物的中间体。
流程VI
用于产生式(I)化合物的P1`中间体在某些情况下得自磺酰胺衍生物。在此情况下，该磺酰胺中间体是通过若干合成路线得到的，例如，通过列于流程VII中的路线。
流程VII
通过在溶剂将水(例如，1当量)加至在溶剂例如THF中的氯磺酰基异氰酸酯1(例如，1当量)中，同时维持在低温例如-20℃下，可以原位制备氨磺酰氯(2)。然后使所得溶液温热至0℃。向此溶液中加入碱例如无水三乙胺(例如，1当量)，接着加入胺(例如，1当量)。然后使反应混合物温热至室温，过滤，再将滤液浓缩，得到需要的磺酰胺(3)。通过若干方法，例如通过以下流程VIII中确定的合成路线，可以将该磺酰胺渗入到式(I)化合物中。羧酸P1部分(1)用活化剂例如CDI处理。在另一烧瓶中，将强碱加至上述磺酰胺的溶液中，再使所得反应混合物搅拌几小时，此后将该反应混合物加至含有活化的羧酸的烧瓶中，得到酰基磺酰胺衍生物(2)。中间体如2可以转化成本文所述的式(I)化合物。
流程VIII
用于产生式(I)化合物的P1部分在有些情况下是商业可得的，但在另外一些情况下是使用本文所述方法合成并接着使用本文所述方法掺入到式(I)化合物中的。取代的P1环丙基氨基酸可以根据流程IX所列一般方法来合成。
商业可得的或容易合成的亚胺(1)用1，4-二卤代丁烯(2)在碱存在 下处理，得到所得的亚胺(3)。然后3酸水解，得到4，其具有与羧基基团呈顺式的烯丙基取代基，作为一种主要产物。4的胺部分可以使用Boc基团来保护，得到完全保护的氨基酸5。此中间体是一种外消旋化合物，其可以通过酶方法拆分，其中5的酯部分通过蛋白酶裂解，得到相应的羧酸。不受任何特别理论的束缚，据信此反应是选择性的，选择性在于，对映体之一经历比其镜像更大的速度的反应，得到动力学拆分的中间体外消旋物。在本文所述实例中，整合在式(I)化合物中的更优选的立体异构体是5a，其具有(1R，2S)立体化学。在酶存在下，此对映体不经历酯裂解，从而此对映体5a从反应混合物中回收。然而，较低优选的对映体5b，其具有(1S，2R)立体化学经历酯裂解，即水解，得到游离的酸6。在此反应完成后，通过常规方法例如水萃取法或色谱法，酯5a可以与酸产物6分离。
流程IX
用于制备P2中间体和式(I)化合物的方法显示于以下流程。应当指出，在许多情况下，仅针对中间体的一个位置描绘反应。然而，应当理解，此反应可用于进行此中间体中其它位置的修饰。此外，在具体实施例中给出的所述中间体、反应条件和方法广泛适用于具有其它取代模式的化合物。一般实例和特别实例均不受限制。
Rz是氢或者是列于术语“杂环基”定义中的取代基。各个Rz是独立地，表示其在一个位置的定义与其在其它位置的定义是独立的。
流程X
流程X显示了N-保护的C4-羟基脯氨酸部分与杂环偶合，形成中间体(4)，接着通过如本文所述肽延长方法使所述中间体(4)修饰成式(I)化合物。应当指出，在第一步骤中，即在C4-羟基脯氨酸基团与杂芳基部分偶合中，使用一种碱。本领域技术人员理解，此偶合可以使用碱例如叔丁醇钾或氢化钠、在溶剂例如DMF或DMSO或THF中来进行。与异喹啉环系统的偶合发生在C1位置(针对显示于流程XI中间体2中的异喹啉环系统的编号)并且指向氯基，其在此方法中被置换。应当指出，另选的离去基团可以用于此位置(例如氟)，如该流程所示。所述氟中间体(3)是使用本文所述文献方法从相应的氯化合物获得的。
用于使C4-羟基脯氨酸与异喹啉核偶合的上述方法的备选方案提供于流程XI步骤1所述的Mitsunobu反应。在此一般性反应流程中，C4-羟基脯氨酸衍生物与异喹啉环系统偶合。此反应在非质子溶剂例如THF或二氧杂环己烷中使用试剂例如三苯膦和DEAD(二乙基偶氮二羧酸酯)来进行，并且可以用于形成杂芳基醚。注意，在此偶合反应的过程中，C4-羟基脯氨酸衍生物中的C4手性中心的立体化学是反向的，因而其需要使用在C4位置具有(S)立体化学的C4-羟基脯氨酸衍生物作为起始物质(如流程XI所示)。应当指出，Mitsunobu反应的许多修饰和改进已描述于文献中，这些文献的教导并入本文中。
流程XI
在本文的实例中，使异喹啉类掺入到最终化合物中特别是掺入到所述化合物的P2区域。本领域技术人员理解，许多一般性的方法对于异喹啉类的合成是有用的。此外，通过这些方法产生的异喹啉类可以使用本文所述方法容易地掺入到最终化合物中。合成异喹啉类的一个一般性方法显示于流程XII，其中显示于结构(2)的一般形式中的肉桂酸衍生物在四个步骤过程中被转化成1-氯异喹啉类。该氯异喹啉类可以接着被用于如本文所述与C4-羟基脯氨酸衍生物的偶合反应。肉桂酸到氯喹啉类的转化是用烷基氯甲酸酯在碱存在下处理肉桂酸开始的。然后使所得的酐用叠氮化钠处理，导致酰叠氮(3)的形成，如流程所示。另选方法可用于从羧酸类形成酰叠氮类，例如所述羧酸可以用二苯基磷酰基叠氮化物、在疏质子溶剂例如二氯甲烷中、在碱存在下处理。在该反应序列的下面的步骤中，在加热至约190℃的温度下，在高沸点溶剂例如二苯基甲烷中，酰叠氮(3)转化成相应的异喹诺酮。此反应是一般性的，并且从相应的肉桂酸衍生物提供中到良好的取代的异喹诺酮的产率。应当指出，所述肉桂酸衍生物是商业可得的，或者可以通过直接与丙二酸或其衍生物缩合并且还通过应用Wittig反应而得自相应的苯甲醛(1)衍生物。通过用氧磷酰氯处理，流程XII的中间体异喹诺酮(4)可以转化成相应的1-氯异喹啉。此反应是一般性的并且可用于本文所示的异喹诺酮类。
流程XII
合成异喹啉环系统的备选方法是Pomeranz-Fritsh法。这种一般性的方法描述于流程XIII。该方法以苯甲醛衍生物(1)到官能化亚胺(2)的转化开始。然后通过在高温下用酸处理，将该亚胺转化成异喹啉环系统。流程XIII的异喹啉合成是一般性的，并且应当指出，此方法在获得异喹啉中间体中是特别有用的，该中间体在C8位置被取代。在显示的两个步骤谅吉，中间体异喹啉类(3)可以转化成相应的1-氯喹啉类(5)。此序列中的第一步骤是通过疏质子溶剂例如二氯甲烷中用间氯过氧苯甲酸处理异喹啉(3)而形成异喹啉N-氧化物(4)。通过在回流氯仿中用氧磷酰氯处理，中间体(4)可以被转化成相应的1-氯喹啉。注意，这两个步骤过程对于从异喹诺酮类形成氯异喹啉类而言是一般性的。
流程XIII
合成异喹啉环系统的另一方法显示于流程XIV。在此方法中，将邻位-烷基苯甲酰胺(1)用强碱例如叔丁基锂、在溶剂例如THF中、在 低温下处理。然后向此反应混合物中加入腈衍生物，其经历与得自(1)去质子化的阴离子的加成反应，导致形成(2)。此反应是一般性的，并且可用于形成取代的异喹啉类。通过本文所述方法，流程XIV的中间体(2)可以转化成相应的1-氯喹啉。
流程XIV
合成异喹啉类的另一方法显示于流程XV。中间体(1)使用叔丁基锂脱质子化描述于上文。然而，在本方法中，该中间体阴离子被酯捕获，导致形成中间体(2)，如下文所示。在后续的反应中，在高温下酮(2)与乙酸铵缩合，造成喹诺酮(3)的形成。此反应是一般性的，并且可用于构建取代的异喹诺酮类，其随后可以转化成相应的1-氯异喹啉类，如本文所述。
流程XV
构建异喹啉类的另一方法见于流程XVI。在此方法的第一步骤中，邻位-烷基芳基亚胺衍生物例如(1)经历脱质子化条件(仲丁基锂，THF)，再使所得阴离子通过添加活化的羧酸衍生物例如Weinreb酰胺来猝灭。通过在高温下与乙酸铵缩合，可以使所得酮亚胺(2)转化成相应的异喹啉。此方法是一般性的，并且可用于合成取代的异喹啉类。通过本文描述的方法，该异喹啉类可以转化成相应的1-氯喹啉。
流程XVI
本文所述并且可以掺入式(I)化合物中的异喹啉类可以进一步被官能化。对于本领域技术人员显而易见的是，所述杂环类的其它官能化可以在将这些官能团掺入到式(I)化合物中之前或者之后进行。以下流程描述了这一点。例如，流程XVII显示了通过在醇溶剂中用烷基氧化物钠或钾种类处理(1)，使1-氯-6-氟-异喹啉转化成相应的1-氯-6-烷氧基-异喹啉种类，该烷基氧化物是在室温下从该醇溶剂中得到的。在一些情况下，有必要对反应加热以促使其完成。可以使用本文所述技术使该氯喹啉掺入到式(I)化合物中。
流程XVII
流程XVIII提供了通过应用钯介导的偶合反应修饰本文所定义的异喹啉类的一般实例。该偶合可用于在环系统的各个位置使杂环官能化，只要该环适合于活化或官能化，例如与氯，如流程中所示的。此序列以1-氯异喹啉(1)开始，其在用间氯过氧苯甲酸处理时会转化成相应的N-氧化物(2)。通过在回流氯仿中用氧磷酰氯处理，中间体(2)可以转化成相应的1，3-二氯异喹啉(3)。通过本文所述方法，中间体(3)可以与N-Boc-4-羟基脯氨酸偶合，得到中间体(5)，如该流程所示。在钯催化剂和碱存在下，在溶剂例如THF或甲苯或DMF中，中间体(5)可以与芳基硼酸进行Suzuki偶合，得到C3-芳基异喹啉中间体(6)。杂芳基硼酸亦可用于此钯介导的偶合过程，得到C3-杂芳基异喹啉类。通过本文所述方法可以使中间体(6)转化成最终的式(I)化合物。
流程XVIII
异喹啉系统与芳基或杂芳基部分的钯介导的偶合亦可用于后面构建式(I)化合物的合成阶段，如流程XIX所示。使用前述操作方法使三肽酰基磺酰胺中间体(1)与1-氯-3-溴异喹啉(2)偶合，得到中间体(3)。(1)和(2)的偶合在催化剂例如氯化镧存在下是最有效的，如本文所述。中间体(3)的异喹啉环系统可进一步通过应用Suzuki偶合(方法1：在钯催化剂例如四三苯膦钯和碱例如碳酸铯存在下在溶剂例如DMF中，使(3)经受杂芳基或芳基硼酸)或者Stille偶合(方法2：在钯催化剂例如四三苯膦钯在溶剂例如甲苯中，使(3)经受杂芳基或芳基锡衍生物)而被官能化。
流程XIX
实施例
本发明公开现在结合一些实施方案进行说明，这些实施方案不是用于限制本发明范围。相反，本发明公开涵盖所有备选方案、修饰和等同物，如在权利要求的范围内所包括的。因此，以下实施例，其包括具体实施方案，将理解为本发明公开的一个实施，应理解，所述实施例是为了说明某些实施方案，并且提供它们据认为是最有用和最容易理解其操作方法和概念方面的说明。
溶液的百分数是以重量/体积关系表示，溶液比表示为体积比体积关系，除非另有说明。核磁共振(NMR)光谱是在Bruker300、400或500MHz光谱仪上记录的；化学位移(δ)是百万分之一表示。快速色谱法是在硅胶(SiO2)上根据Still氏快速色谱技术(J.Org.Chem.1978，43，2923)进行的。
制备外消旋(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯：
流程1
步骤1：
将甘氨酸乙酯盐酸盐(304g，2.16mol)混悬于叔丁基甲基醚(1.6L)中。加入苯甲醛(231g，2.16mol)和无水硫酸钠(155g，1.09mol)，再使用冰-水浴使该混合物冷却至0℃。经30分钟滴加三乙胺(455mL，3.26mol)，再在室温下将该混合物搅拌48小时。然后通过添加冰冷的水(1L)将反应猝灭，分离有机层。水相用叔丁基甲基醚(0.5L)萃取，合并有机相，再用饱和NaHCO3水溶液(1L)和盐水(1L)的混合物洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤，再在真空中浓缩，得到392.4g的N-苄基亚胺产物为粘稠黄色油状物，其直接用于下一步骤。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.32(t，J＝7.1Hz，3H)，4.24(q，J＝7.1Hz，2H)， 4.41(d，J＝1.1Hz，2H)，7.39-7.47(m，3H)，7.78-7.81(m，2H)，8.31(s，1H)。
步骤2：
向叔丁醇锂(84.1g，1.05mol)在干燥的甲苯(1.2L)中的混悬液中经60分钟滴加甘氨酸乙酯的N-苄基亚胺(100g，0.526mol)和反式-1，4-二溴-2-丁烯(107g，0.500mol)在干燥的甲苯(0.6L)中的混合物。添加完毕后，通过添加水(1L)和叔丁基甲基醚(TBME，1L)将该深红色混合物猝灭。分离水相，再用TBME(1L)萃取第二次。合并有机相，加入1.0M HCl(1L)，再使该混合物在室温下搅拌2小时。分离有机相，再用水(0.8L)萃取。合并水相，用盐(700g)饱和，再加入TBME(1L)，使该混合物冷却至0℃。然后通过滴加10.0M NaOH使该搅拌的混合物碱化至pH＝14，分离有机层，水相用TBME(2x500mL)萃取。合并有机萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩至1L的体积。向此游离胺的溶液中加入Boc2O或二碳酸二叔丁酯(131g，0.600mol)，再在室温下将该混合物搅拌4天。将另外的二碳酸二叔丁酯(50g，0.23mol)加至反应中，再使该混合物回流3小时，然后使之冷却至室温过夜。使反应混合物用MgSO4干燥，过滤，再在真空中浓缩，得到80g的粗物质。使此残余物通过快速色谱法纯化(2.5kg的SiO2，洗脱使用1％至2％CH3OH/CH2Cl2)，得到57g(53％)的外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯为黄色油状物，其在冰箱中放置时固化：1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.26(t，J＝7.1Hz，3H)，1.46(s，9H)，1.43-1.49(m，1H)，1.76-1.82(br m，1H)，2.14(q，J＝8.6Hz，1H)，4.18(q，J＝7.2Hz，2H)，5.12(dd J＝10.3，1.7Hz，1H)，5.25(br s，1H)，5.29(dd，J＝17.6，1.7Hz，1H)，5.77(ddd，J＝17.6，10.3，8.9Hz，1H)；MSm/z254.16(M-1)。
拆分N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯：
流程2
拆分A：
向放置在12升夹套反应器中、维持于39℃并以300rpm搅拌的硫酸钠缓冲液的水溶液(0.1M，4.25升(“L”)，pH8)中加入511克的碱性蛋白酶2.4L(约425mL)(Novozymes North America Inc.)。当该混合物的温度达到39℃时，通过添加50％NaOH水溶液使pH调节至8.0。然后经40分钟时间加入外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯(85g)在850mL的DMSO中的溶液。然后使反应温度维持于40℃达24.5小时，在此期间，在1.5小时和19.5小时的时间点使用50％NaOH水溶液将该混合物的pH调节至8.0。24.5小时之后，该酯的对映体过量测定为97.2％，再使反应冷却至室温(26℃)，搅拌过夜(16小时)，此后该酯的对映体过量测得为100％。然后用50％NaOH将反应混合物的pH调节至8.5，使所得混合物用MTBE(2x2L)萃取。然后将合并的MTBE萃取物用5％NaHCO3(3x100mL)、水(3x100mL)洗涤，再在真空中浓缩，再在真空中浓缩，得到对映体纯的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯为淡黄色固体(42.55g；纯度：97％210nm，不含酸；100％对映体过量(“ee”)。
然后将来自该萃取过程的水层用50％H2SO4酸化至pH2，再用MTBE(2x2L)萃取。将该MTBE萃取物用水(3x100mL)洗涤，浓缩，得到the acid为淡黄色固体(42.74g；纯度：99％210nm，不含酯)。
拆分B：
在24孔板(容量：10mL/孔)中，向0.5mL100mM Heps·Na缓冲液(pH8.5)中，加入0.1mL的Savinase16.0L(蛋白酶来自Bacillus clausii)(Novozymes North America Inc.)以及外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯(10mg)在0.1mL的DMSO中的 溶液。将板密封，再以250rpm在40℃下孵育。18小时以后，按如下测定该酯的对映体过量为44.3％：移出0.1mL的反应混合物，再与1mL乙醇充分混合；离心之后，用手性HPLC分析10微升(“μL”)的上清液。向剩余的反应混合物中加入0.1mL的DMSO，使板以250rpm在40℃下孵育3天，此后向孔中加入4mL的乙醇。离心之后，用手性HPLC分析10μL的上清液，酯的对映体过量测定为100％。
拆分C：
向在24孔板(容量：10mL/孔)孔中的0.5mL100mM Heps·Na缓冲剂(pH8.5)中加入0.1mL的Esperase8.0L(蛋白酶来自Bacillus halodurans)(Novozymes North America Inc.)和外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯(10mg)在0.1mL的DMSO中的溶液。将板密封，再以250rpm在40℃下孵育。18小时以后，按如下测定该酯的对映体过量为39.6％：移出0.1mL的反应混合物，再与1mL乙醇充分混合；离心之后，用手性HPLC分析10μL的上清液。
向剩余的反应混合物中加入0.1mL的DMSO，使板以250rpm在40℃下孵育另外3天，此后向孔中加入4mL的乙醇。离心之后，用手性HPLC分析10μL的上清液，酯的对映体过量测定为100％。
以以下方式进行样品分析：
1)样品制备：使约0.5mL的反应混合物与10体积乙醇充分混合。离心之后，将10μL的上清液注入到HPLC柱中。
2)转化测定：
柱子：YMC ODS A，4.6x50mm，S-5μm
溶剂：A，1mM HCl/水；B，CH3CN
梯度：30％B达1min；30％至45％B经0.5min；45％B达1.5min；45％至30％B经0.5分钟。
流速：2mL/min
UV检测：210nm
保留时间：酸1.2min；酯2.8分钟。
3)酯的对映体过量测定：
柱子：CHIRACEL OD-RH，4.6x150mm，S-5μm
流动相：CH3CN/50mM HClO4/水(67/33)
流速：0.75mL/min。
UV检测：210nm。
保留时间：
(1S，c2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸5.2min；
外消旋物(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯18.5分钟和20.0min；
(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯18.5分钟。
拆分D：
使5L的0.3M硫酸钠缓冲液(pH8)在38℃下维持于20升夹套反应器中，以130rpm搅拌。向反应器中加入4升碱性蛋白酶2.4L(Novozymes North America Inc.)和1升的DI水。当该混合物的温度接近38℃时，用10N NaOH调节pH至7.8。经1小时通过加样漏斗将外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯(500克)在5升DMSO中的溶液加至反应器中。然后使反应温度调节至48℃。21小时以后，酯的对映体过量达到99.3％。在24小时时中止加热，再使反应缓缓冷却至室温(约25℃)并搅拌过夜。用10N NaOH将反应混合物的pH调节至8.5，再将该混合物用MTBE(2x4L)萃取。将合并的MTBE萃取物用5％NaHCO3(3x400mL)和水(3x400mL)萃取，浓缩，得到对映体纯的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯为淡黄色结晶(259g；纯度：96.9％210nm，不含酸；100％ee)。
拆分E：
使10L的0.1M硫酸钠缓冲液(pH8)在40℃下维持于20升夹套反应器中，以360rpm搅拌。将1.5升的碱性蛋白酶2.4L(Novozymes North America Inc.)加至反应器中。当该混合物的温度接近38℃时，用10N NaOH调节pH至8.0。将外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯(200克)在2升DMSO中的溶液经1小时时间经加样漏斗加至反应器中。然后使反应温度调节至40℃。3小 时以后，用10N NaOH调节pH至8.0。21小时以后，使反应冷却至25℃，用10N NaOH调节反应混合物的pH至8.5，再将该混合物用MTBE(2x5L)萃取。将合并的MTBE萃取物用5％NaHCO3(3x500mL)和水(3x200mL)洗涤，浓缩，得到110g的黄色油状物。使该油在室温和室内真空下放置，得到对映体纯的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯为无色长棒状结晶(101g；纯度：97.9％210nm，不含酸；100％ee)。
结晶结构对映体纯的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯通过单晶分析表征(X-射线NB#：52795-093，代码：634592N1)。因缺乏已知手性中心或重原子而未确定绝对构型。沿着结晶图a-轴的链结构是通过酰胺基与羰基氧原子之间的分子内氢链形成的
N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯的结构：
拆分F：
5L的0.2M硼酸钠缓冲剂(pH9)在45℃下维持于20升夹套反应器中，以400rpm搅拌。将3升的DI水和4升的Savinase16L，EX类(Novozymes North America Inc.)加至反应器中。当该混合物的温度接近45℃时，用10N NaOH调节pH至8.5。将外消旋N-Boc-(1R，2S)/(1S，2R)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯(200克)在2升DMSO中的溶液经40分钟时间经加样漏斗加至反应器中。然后使反应温度调节至48℃。2小时以后，用10N NaOH调节pH至9.0。18小时时，酯的对映体过量达到72％，用10N NaOH调节pH至9.0。24小时时，使温度降到35℃。42小时时，使温度升到48℃，用10N NaOH调节pH至9.0。在48小时时停止加热，再使反应缓缓冷却到室温(约25℃)并搅拌过夜。在66小时时，反应混合物的pH为8.6。将混合物用MTBE(2x4L)萃取。将合并的MTBE萃取物用5％NaHCO3(6x300mL)和水(3x300mL)洗涤，浓缩，得到对映体纯的N-Boc-(1R，2S)/-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯为淡黄色结晶(101A g；纯度：95.9％210nm，不含酸；98.6％ee)。
制备手性(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯盐酸盐：
在氮气氛下，使(1R，2S)N-Boc-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯(8.5g，33.3mmol)与200mL的4N HCl/二氧杂环己烷(Aldrich)在室温下搅拌3小时。在减压并保持温度低于40℃下除去溶剂。这样得到6.57g(～100％)的(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸乙酯盐酸盐为 淡褐色固体。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.31(t，J＝7.0Hz，3H)，1.69-1.82(m，2H)，2.38(q，J＝8.8Hz，1H)，4.29(q，J＝7.0Hz，2H)，5.22(d，J＝10.3Hz，1H)，5.40(d，J＝17.2Hz，1H)，5.69-5.81(m，1H).MS m/z156(M++1)。
制备N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-环丙基环丙烷甲酸乙酯：
使N-Boc-(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸(255mg，1.0mmol)在二乙基醚(10mL)中的溶液用乙酸钯(5mg，0.022mmol)处理。使该橙色/红色溶液在氮气氛下放置。经1小时的时间滴加过量的重氮甲烷/二乙基醚。使所得溶液在室温下搅拌18小时。使用氦气流除去过量的重氮甲烷，再通过旋转蒸发使所得溶液浓缩，得到粗产物。快速色谱法(10％乙酸乙酯/己烷)得到210mg(78％)的(1R，2S)-N-Boc-1-氨基-2-环丙基环丙烷甲酸乙酯为无色油。MS m/z270(M++H)。
制备P1’-P1中间体：
制备P1P1’：
流程1
步骤1：
向1(R)-叔丁氧基羰基氨基-2(S)-乙烯基-环丙烷甲酸乙酯(3.28g，13.2mmol)在THF(7mL)和甲醇(7mL)中的溶液中加入LiOH(1.27g，53.0mmol)在水(14mL)中的混悬液。使该混合物在室温下搅拌过夜。向该混合物中加入1.0M NaOH(15mL)、水(20mL)和乙酸乙酯(20mL)。振摇该混合物，相分离，有机相再次用20mL0.5M NaOH萃取。将合并的水相用1.0M HCl酸化至pH＝4，再用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，得到需要的产物为白色固体(2.62g，87％)。1H NMR：(DMSO-d6)δ1.22-1.26(m，1H)，1.37(s，9H)，1.50-1.52(m，1H)，2.05(q，J＝9Hz，1H)，5.04(d，J＝10Hz，1H)，5.22(d，J＝17Hz，1H)，5.64-5.71(m，1H)，7.18，7.53(s，NH(旋转异构体)，12.4(br s，1H))；LC-MS MSm/z228(M++H)。
步骤2：
使步骤1的产物(2.62g，11.5mmol)和CDI(2.43g，15.0mmol)在THF(40mL)中的溶液在回流和氮气下加热50分钟。使该溶液冷却至室温，再通过套管转移到环丙基磺酰胺(1.82g，15.0mmol)在THF(10mL)中的溶液中。向所得溶液中加入DBU(2.40mL，16.1mmol)，再连续搅拌20小时。将该混合物用1.0M HCl猝灭至pH＝1，再在真空下蒸发THF。将该混悬液用乙酸乙酯(2x50mL)萃取，合并有机萃取物，干燥(Na2SO4)。过滤，浓缩，通过从己烷-乙酸乙酯(1：1)中重结晶纯化，得到需要的产物(2.4g)为白色固体。母液通过快速柱色谱法纯化(SiO2用9％丙酮/二氯甲烷洗脱)，得到第二批需要的产物(1.1g)。将两批料合并(总收率92％)。1H NMR：(DMSO-d6)δ0.96-1.10(m，4H)，1.22(dd，J＝5.5，9.5Hz，1H)，1.39(s，9H)，1.70(t，J＝5.5Hz，1H)，2.19-2.24(m，1H)，2.90(m，1H)，5.08(d，J＝10Hz，1H)，5.23(d，J＝17Hz，1H)，5.45(m，1H)，6.85，7.22(s，NH(旋转异构体))；LC-MS，MSm/z331(M++H)。
步骤3：
将步骤2的产物(3.5g，10.6mmol)在二氯甲烷(35mL)和TFA(32 mL)中的溶液在室温下搅拌1.5小时。在真空下除去挥发性物质，再使该残余物混悬于1.0M HCl/二乙基醚(20mL)中，在真空下浓缩。重复此过程一次。使所得混合物与戊烷研磨，过滤，得到标题化合物为吸湿性的灰白色固体(2.60g，92％)。1H NMR(DMSO-d6)δ1.01-1.15(m，4H)，1.69-1.73(m，1H)，1.99-2.02(m，1H)，2.38(q，J＝9Hz，1H)，2.92-2.97(m，1H)，5.20(d，J＝11Hz，1H)，5.33(d，J＝17Hz，1H)，5.52-5.59(m，1H)，9.17(br s，3H)；LC-MS，MSm/z231(M++H)。
制备P1-P1’磺酰胺衍生物：
向(1R，2S)1-叔丁氧基羰基氨基-2-乙烯基-环丙烷甲酸(217mg，1.194mmol)在THF(5mL)中的溶夜中加入CDI(290mg，1.791mmol)，再使反应混合物加热至回流达45分钟。在另一圆底烧瓶中，将LiHMDS(1.0M的己烷溶液，2.4mL，2.4mmol)加至N-乙基甲基磺酰胺(330mg，2.388mmol)在THF(5mL)中的溶液中，使反应混合物在室温下搅拌1小时。使两份反应混合物合并，再在室温下搅拌2小时。加入水以猝灭反应，再使反应溶液用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用MgSO4干燥。过滤，浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化，得到需要的N-Boc保护的N-酰基磺酰胺。然后使该化合物溶解于4NHCl/二氧杂环己烷溶液(2mL)中并在室温下搅拌4小时以除去Boc保护基团。浓缩，得到呈棕色的油状物为HCl盐。(112mg，33％产率)。 1H NMR(400Mz，CD3OD)δ.1.16(t，J＝7.21Hz，3H)，1.68(dd，J＝10.03，7.83Hz，1H)，2.15(m，1H)，2.37(m，1H)，2.89(s，3H)，3.30(m，2H)，5.31(d，J＝10.27Hz，1H)，5.42(d，J＝17.12Hz，3H)，5.68(m，1H).LC-MS，MS m/z270(M+Na+)。
制备化合物1，实施例1：
步骤1：
向m-甲氧基苯胺(300g，2.44mol)和苯甲酰基乙酸乙酯(234.2g，1.22mol)在甲苯(2.0L)中的溶液中加入HCl(4.0N，在二氧杂环己烷中，12.2mL，48.8mmol)。使用Dean-Stark装置使所得溶液回流6.5小时(收集约56mL的水溶液)。使该混合物冷却至室温，用HCl水溶液(10％，3x500mL)、NaOH水溶液(1.0N，2x200mL)、水(3x200mL)分配多次，再将有机层干燥(MgSO4)，过滤，再在真空中浓缩，得到油状残余物(329.5g)。使用Dean-Stark装置使该粗产物在油浴(280℃)中加热80分钟(收集约85mL的水溶液)。使反应混合物冷却至室温，将该固体残余物用CH2Cl2(400mL)研磨，所得混悬液过滤，滤饼用更多的CH2Cl2(2x150mL)洗涤。将所得固体在真空中干燥(50℃；1托；1天)，得到分析纯产物为淡棕色固体(60.7g，20％总计)。1H NMR(DMSO-d6)δ3.86(s，3H)，6.26(s，1H)，6.94(dd，J＝9.0，2.4Hz，1H)，7.21(d，J＝2.4Hz，1H)，7.55-7.62(m，3H)，7.80-7.84(m，2H)，8.00(d，J＝9.0Hz，1H)，11.54(s，1H)；13C NMR(DMSO-d6)δ55.38，99.69，107.07，113.18，119.22，126.52，127.17，128.97，130.34，134.17，142.27，149.53，161.92，176.48.LC-MS(MSm/z252(M++1)。
步骤2：
使步骤1的产物(21.7g，86.4mmol)混悬于POCl3(240mL)。使该混悬液回流2小时。在真空中除去POCl3之后，使该残余物在乙酸乙酯(1L)和冷NaOH水溶液(得自1.0N200mL NaOH和20mL10.0NNaOH)之间分配，搅拌15分钟。有机层用水(2x200mL)、盐水(200mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，再在真空中浓缩，得到需要的产物(21.0g，90％)为淡棕色固体。1H NMR(DMSO-d6)δ3.97(s，3H)，7.36(dd，J＝9.2，2.6Hz，1H)，7.49-7.59(m，4H)，8.08(d，J＝9.2Hz，1H)，8.19(s，1H)，8.26-8.30(m，2H)；13C NMR(DMSO-d6)δ55.72，108.00，116.51，119.52，120.48，124.74，127.26，128.81，130.00，137.58，141.98，150.20，156.65，161.30.LC-MS(MSm/z270(M++1)。
实施例1流程2
步骤1：
使(1R，2S)和(1S，2R)的1-(叔丁氧基羰基氨基)-2-乙烯基环丙烷羧酸酯的外消旋混合物(9.39g，36.8mmol)溶解于4N HCl/二氧杂环己烷(90mL360mmol)中，再在室温下搅拌2小时。浓缩反应混合物，以定量产率得到需要的产物(7g，100％)。1H NMR(CD3OD)δ1.32(t，J＝7.1，3H)，1.72(dd，J＝10.2，6.6Hz，1H)，1.81(dd，J＝8.3，6.6Hz，1H)，2.38(q，J＝8.3Hz，1H)，4.26-4.34(m，2H)，5.24(dd，10.3，1.3Hz，1H)5.40(d，J＝17.2，1H)，5.69-5.81(m，1H)。
步骤1：
在0℃下向Boc-4R-羟基脯氨酸(16.44g，71.1mmol)在DMSO(250mL)中的混悬液中加入t-BuOK(19.93g，177.6mmol)。使所得混合物搅拌1.5小时，然后将步骤2流程1的产物(21.02g，77.9mmol)在三份在1小时内加入。使反应搅拌1天，倾入到冷水(1.5L)中，再用二乙基醚(4x200mL)洗涤。将该水溶液酸化至pH4.6，过滤，获得白色固体，再在真空中干燥，得到该产物(32.5g，98％).1H NMR(DMSO-d6)δ1.32，1.35(两个s(旋转异构体)9H)，2.30-2.42(m，1H)，2.62-2.73(m，1H)，3.76(m，2H)，3.91(s，3H)，4.33-4.40(m，1H)，5.55(m，1H)，7.15(dd，J＝9.2，2.6Hz，1H)，7.37(d，J＝2.6Hz，1H)，7.42-7.56(m，4H)，7.94-7.99(m，1H)，8.25，8.28(2s，2H)，12.53(brs，1H)；LC-MS，MSm/z465(M++1)。
步骤2A：
在0℃下，在10分钟内以三份向步骤1的产物(11.0g，23.7mmol)、步骤1流程2的产物(5.40g，28.2mmol)和NMM(20.8mL；18.9mmol)在500mL的50％CH2Cl2/THF中的溶液中加入偶合剂溴化三吡咯烷子基磷六氟磷酸盐(Pybrop)(16.0g，34.3mmol)。将该溶液在室温下搅拌1天，然后用pH4.0缓冲液(4x50mL)洗涤。有机层用饱和NaHCO3水溶液(100mL)洗涤，将该水溶液用乙酸乙酯(150mL)萃取，有机层 用pH4.0缓冲液(50mL)和饱和NaHCO3水溶液(50mL)反洗涤。使该有机溶液干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，再通过快速柱色谱法纯化(SiO2，洗脱使用50％乙酸乙酯/己烷)，得到需要的产物的(1R，2S)和(1S，2R)P1异构体的1∶1混合物总计7.5g(50％总计)，或者另外，用15％至60％乙酸乙酯/己烷梯度缓慢洗脱，得到3.54g(25％)的高Rf洗脱(1R，2S)P1异构体以及3.54g(25％)的低Rf洗脱(1S，2R)P1异构体。
(1R，2S)P1异构体的数据：1H NMR(CDCl3)δ1.21(t，J＝7Hz，3H)，1.43(s，9H)，1.47-1.57(m，1H)，1.88(m，1H)，2.05-2.19(m，1H)，2.39(m，1H)，2.88(m，1H)，3.71-3.98(m，2H)，3.93(s，3H)，4.04-4.24(m，2H)，4.55(m，1H)，5.13(d，J＝10Hz，1H)，5.22-5.40(m，1H)，5.29(d，J＝17Hz，1H)，5.69-5.81(m，1H)，7.02(brs，1H)，7.09(dd，J＝9，2Hz，1H)，7.41-7.52(m，4H)，7.95(d，J＝9Hz，1H)，8.03，8.05(2s，2H)；13CNMR(CDCl3)δ：14.22；22.83，28.25，33.14，33.58，39.92，51.84，55.47，58.32，61.30，75.86，81.27，98.14，107.42，115.00，117.84，118.27，122.63，123.03，127.50，128.72，129.26，133.39，140.06，151.23，159.16，160.34，161.35，169.78，171.68.LC-MS(MS m/z602(M++1)。
(1S，2R)P1异构体的数据：1H NMRδ1.25(t，J＝7Hz，3H)，1.44(s，9H)，1.46-1.52(m，1H)，1.84(m，1H)，2.12-2.21(m，1H)，2.39(m，1H)，2.94(m，1H)，3.82(m，2H)，3.97(s，3H)，4.05-4.17(m，2H)，4.58(m，1H)，5.15(d，J＝10.8Hz，1H)，5.33(d，J＝17Hz，1H)，5.30-5.43(m，1H)，5.72-5.85(m，1H)，7.05(s，1H)，7.13(dd，J＝9，2Hz，1H)，7.46-7.60(m，4H)，7.98(d，J＝9，1H)，8.06-8.10(m，2H).LC-MS MS m/z602(M++1)。
步骤2B：
使步骤1流程2的产物(7.5g，39.1mmol)与二异丙基乙胺(32.5mL，186mmol)在二氯甲烷(150mL)中混合。向所得混合物中加入HOBT水合物(6.85g，44.7mmol)和来自步骤1的产物(17.3g，37.3mmol)，接着加入HBTU(16.96g，44.7mol)。立即出现轻微放热，再使该混合物在室温下搅拌过夜。然后使该混合物在真空下浓缩，再溶解于乙酸乙酯(600mL)中。使该溶液用水(2x200mL)洗涤，然后用10％碳酸氢钠水溶液(2x200mL)洗涤，再用水(150mL)洗涤，最后用 盐水(150mL)洗涤。使该有机物用无水硫酸镁干燥，过滤，再将滤液在真空下干燥，得到褐色玻璃状固体。通过快速色谱法(Si02，洗脱使用66％己烷/乙酸乙酯)在多个批次(每批7g)中进行纯化，得到(1R，2S)P1异构体为初始洗脱的异构体(总计9.86g，44.0％产率)，接着洗脱(1S，2R)P1异构体为第二洗脱异构体(总计10.43g，46.5％产率)。回收总计1.97g的混合级分，得到两种非对映异构体99.3％的总转化率。
(1R，2S)P1异构体的数据：1H NMR(甲醇-d4)δ1.23(t，J＝7.2Hz，3H)，1.4(s，4H)，1.45(s，6H)，1.73(dd，J＝7.9，1.5Hz，0.4H)，1.79(dd，J＝7.8，2.4Hz，0.6H)，2.21(q，J＝8.2Hz，1H)，2.44-2.49(m，1H)，2.66-2.72(m，0.4H)，2.73-2.78(m，0.6H)，3.93-3.95(m，2H)，3.96(s，3H)，4.10-4.17(m，2H)，4.44(q，J＝7.8Hz，1H)，5.13(d，J＝10.7Hz，1H)，5.31(d，J＝17.7Hz，0.4H)，5.32(d，J＝17.4Hz，0.6H)，5.49(bs，1H)，5.66-5.82(m，1H)，7.16(dd，J＝9.2，2.5Hz，1H)，7.26(s，1H)，7.42(d，J＝2.4Hz，1H)，7.48-7.55(m，3H)，8.02-8.05(m，3H)；LC-MS(MS m/z602(M++1)。
(1S，2R)P1异构体的数据：1H NMR(甲醇-d4)δ1.23(t，J＝7.2Hz，3H)，1.40(s，3.5H)，1.43(s，6.5H)，1.8(dd，J＝7.2，5.3Hz，0.4H)，1.87(dd，J＝7.8，5.7Hz，0.6H)，2.16(q，J＝8.9Hz，0.6H)，2.23(q，J＝8.85Hz，0.4H)，2.42-2.50(m，1H)，2.67-2.82(m，1H)，3.87-3.95(m，2H)，3.96(s，3H)，4.07-4.19(m，3H)，4.41-4.47(m，1H)，5.09-5.13(m，1H)，5.30(dd，J＝17.09，0.92Hz，1H)，5.48(s，1H)，5.70-5.77(m，1H)，7.15(dd，J＝9.16，2.44Hz，1H)，7.25(s，1H)，7.41(d，J＝2.14Hz，1H)，7.48-7.55(m，3H)，8.02-8.05(m，3H)；LC-MS(MS m/z602(M++1)。
实施例1流程4
步骤1：
将步骤2流程3的(1R，2S)P1异构体(9.86g，16.4mmol)用1NNaOH(50mL，50mmol)在THF(150mL)和甲醇(80mL)的混合物中处理12小时。将该混合物在真空下浓缩，直到仅剩余水相。加入水(100mL)，再缓缓加入1N HCl直到达到pH3。然后将该混合物用乙酸乙酯(3x200mL)萃取，再将合并的有机萃取物用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液在真空中浓缩，得到需要的产物为白色粉末(9.2g，98％产率)。1H N MR(CD3OD)δ1.41(s，2H)，1.45(s，9H)，1.77(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，2.16-2.21(m，1H)，2.44-2.51(m，1H)，2.74-2.79(m，1H)，3.93-3.96(m，2H)，3.98(s，3H)，4.44(t，J＝7.9Hz，1H)，5.11(d，J＝9.5Hz，1H)，5.30(d，J＝17.1Hz，1H)，5.52(s，1H)，5.79-5.86(m， 1H)，7.22(dd，J＝9.16，2.14Hz，1H)，7.32(s，1H)，7.43(d，J＝2.14Hz，1H)，7.54-7.60(m，3H)，8.04(dd，J＝7.8，1.4Hz，2H)，8.08(d，J＝9.1Hz，1H)；LC-MS(MS m/z574(M++1)。
步骤2：
使步骤1的产物(7.54g，13.14mmol)与CDI(3.19g，19.7mmol)和DMAP(2.41g，19.7mmol)在无水THF中合并，再将所得混合物加热至回流达45分钟。使该微不透明的混合物冷却至室温，再向其中加入环丙基磺酰胺(1.91g，15.8g)。添加DBU(5.9mL，39.4mmol)后，该混合物变澄清。将该棕色溶液搅拌过夜。然后使该混合物在真空中浓缩成油状物，再使其重新溶解于乙酸乙酯(500mL)中。使该溶液用pH4缓冲液(3x200mL)洗涤，再将该合并的缓冲洗液用乙酸乙酯(200mL)反萃取。将合并的有机物用盐水(150mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩，得到褐色固体。使粗产物通过快速色谱法纯化(SiO2，洗脱使用25％己烷/乙酸乙酯)，得到需要的产物(5.85g，66％产率)。1H NMR(CD3OD)δ1.03-1.09(m，2H)，1.15-1.28(m，2H)，1.40-1.44(m，2H)，1.46(s，9H)，1.87(dd，J＝8.1，5.6Hz，1H)，2.21-2.27(m，1H)，2.36-2.42(m，1H)，2.65(dd，J＝13.7，6.7Hz，1H)，2.93-2.97(m，1H)，3.90-3.96(m，2H)，4.00(s，3H)，4.40(dd，J＝9.5，7.0Hz，1H)，5.12(d，J＝10.4Hz，1H)，5.31(d，J＝17.4Hz，1H)，5.64(s，1H)，5.73-5.80(m，1H)，7.30(dd，J＝9.2，2.1Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.47(s，1H)，7.61-7.63(m，3H)，8.04-8.05(m，2H)，8.15(d，J＝9.5Hz，1H)；LC-MS(MS m/z677(M++1)。
步骤3A：
将步骤2的产物(5.78g，8.54mmol)用4.0M HCl/1，4-二氧杂环己烷(50mL，200mmol)处理过夜。使反应混合物在真空中浓缩，再置于50℃的真空箱中达若干天。获得需要的产物为褐色粉末(5.85g，定量)。 1H NMR(甲醇-d4)δ1.03-1.18(m，3H)，1.26-1.30(m，1H)，1.36-1.40(m，2H)，1.95(dd，J＝8.2，5.8Hz，1H)，2.37(q，J＝8.9Hz，1H)，2.51-2.57(m，1H)，2.94-2.98(m，1H)，3.09(dd，J＝14.6，7.3Hz，1H)，3.98(d，J＝3.7Hz，1H)，3.99(s，1H)，4.08(s，3H)，4.80(dd，J＝10.7，7.6Hz，1H)， 5.15(dd，J＝10.2，1.4Hz，1H)，5.32(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.61-5.69(m，1H)，5.99(t，J＝3.7Hz，1H)，7.51(dd，J＝9.3，2.3Hz，1H)，7.59(d，J＝2.4Hz，1H)，7.65(s，1H)，7.72-7.79(m，3H)，8.09(dd，J＝7.0，1.5Hz，2H)，8.53(d，J＝9.2Hz，1H)；LC-MS(MS m/z577(M++1)。
步骤3B：
向(2S，4R)-叔丁基2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基氨基甲酰基)-4-(7-甲氧基-2-苯基喹啉-4-基氧基)吡咯烷-1-甲酸酯、步骤2的产物(3.0g，4.43mmol)在1∶1DCM(25mL)/DCE(25.00mL)中的溶液中加入三氟乙酸(25mL，324mmol)。在25℃搅拌0.5h小时以后，使所得棕色反应混合物浓缩成棕色粘稠油状物，将其重新溶解于DCE(50mL)，再次浓缩。使该残余物溶解于DCM(10mL)，再滴加至1N HCl在Et2O(50mL，50.0mmol)中的溶液中。使所得淡棕色沉淀物过滤，用1N HCl在Et2O(40mL)中的溶液洗涤，在50℃真空箱中干燥1h，得到(2S，4R)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-(7-甲氧基-2-苯基喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-甲酰胺2HCl盐(2.8g，4.31mmol，97％产率)为淡棕色固体。1H-NMR显示产物含有约0.75当量的四甲基脲副产物(2.83ppm处的信号为单峰)，但是此物质未经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.0-1.2(m，3H)，1.2-1.3(m，1H)，1.4(dd，J＝9.5，5.5Hz，2H)，1.9(dd，J＝7.9，5.8Hz，2H)，2.4(q，J＝8.7Hz，1H)，2.5-2.6(m，1H)，2.9-2.9(m，1H)，3.1(dd，J＝14.6，7.3Hz，1H)，4.0-4.0(m，2H)，4.1(s，3H)，4.8-4.9(m，1H)，5.1(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.3(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.6-5.7(m，1H)，6.0(s，1H)，7.5(dd，J＝9.3，2.3Hz，1H)，7.6(d，J＝2.4Hz，1H)，7.7(s，1H)，7.7-7.8(m，3H)，8.1(d，J＝6.7Hz，2H)，8.6(d，J＝9.2Hz，1H).LC-MS，MSm/z577.2(M++H)。
步骤4A：
向步骤3A的产物(0.671mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入DIEA(542μL，3.36mmol)、HATU(354mg，1.01mmol)、HOAt(127mg，1.01mmol)和Boc-L-Tle-OH(173mg，0.805mmol)。在室温下搅拌16h后，浓缩溶剂，再使所得棕色粘稠油状物通过快速柱色谱法纯化(SiO2， 洗脱使用95％MeOH/DCM)，得到微黄色泡沫状物(527mg，99％产率)。LC-MS(MS m/z790(M++1))。
步骤4B：
向(2S，4R)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-(7-甲氧基-2-苯基喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-甲酰胺，2HCl盐、步骤3B的产物(1.2g，1.847mmol)、N，N-二异丙基乙胺(1.126mL，6.47mmol)和Boc-L-Tle-OH(0.513g，2.217mmol)在DCM(15mL)中的溶液中加入HATU(1.054g，2.77mmol)。使所得淡棕色反应混合物在室温下搅拌13h，浓缩反应混合物，再重新溶解于EtOAc(50mL)，用1N HCl水溶液(25mL)洗涤。酸水层用EtOAc(50mL)萃取。合并有机层，再用10％Na2CO3水溶液(20mL)、盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。将所得粘稠棕色油状物通过快速柱色谱法纯化(SiO2，洗脱使用95：5DCM：MeOH)，得到tert-butyl(S)-1-((2S，4R)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基氨基甲酰基)-4-(7-甲氧基-2-苯基喹啉-4-基氧基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸酯为淡棕色泡沫状物，其足够纯，要以用于下一步骤。然而，用于NMR表征的分析样品，将此产品85mg进一步通过反相HPLC使用以下溶剂系统和条件纯化：溶剂A＝H2O，溶剂B＝MeOH，二者均含有0.1％TFA；50％B至100％B20min，维持100％B4min。将合并的HPLC级分用1N NaOH水溶液中和，浓缩，直到大部分湿份除去。使所得白色乳膏状混合物用EtOAc(2x25mL)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩，在真空下干燥，得到分析纯的白色粉末产物。1H NMR(500MHz，MeOD.)δppm0.9-1.0(m，2H)，1.0(s，9H)，1.1-1.2(m，1H)，1.2-1.2(m，3H)，1.3(s，9H)，1.4-1.4(m，1H)，1.9(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，2.2(q，J＝8.7Hz，1H)，2.3-2.3(m，1H)，2.6(dd，J＝13.9，6.9Hz，1H)，2.9-3.0(m，1H)，3.9(s，3H)，4.0-4.1(m，1H)，4.2(d，J＝9.5Hz，1H)，4.5-4.5(m，2H)，5.1(d，J＝11.0Hz，1H)，5.3(d，J＝17.1Hz，1H)，5.5(s，1H)，5.7-5.8(m，1H)，6.6(d，J＝9.5Hz，1H)，7.1(dd，J＝9.0，1.7Hz，1H)，7.2(s，1H)，7.4(d，J＝1.8Hz，1H)，7.5-7.5(m，3H)，8.0(t，J＝7.3Hz，3H).13C NMR(126MHz，MeOD.)δppm5.6，5.8，17.6，22.6，26.1，27.6，31.2，34.7，35.0，35.2，41.7，42.8，54.4，55.1， 59.5，59.9，77.2，79.5，99.2，106.4，115.5，117.6，117.9，118.4，123.3，128.0，128.8，129.7，133.3，140.1，151.0，151.1，157.1，160.2，161.0，162.3，169.8，172.5，174.0.LC-MS，MSm/z790.30(M++H)。
步骤5A：
将步骤4A的产物(950mg，1.20mmol)在DCM(75mL)中的溶液用TFA(25mL)缓缓处理以控制剧烈鼓泡的CO2气体。在室温下搅拌1.5hr后，浓缩溶剂，得到淡棕色浆状物，再加入Et2O以产生沉淀。通过真空过滤获得该淡棕色产物(1.10g，99％产率)二TFA盐，未经进一步纯化即使用。LC-MS(MS m/z690(M++1))。
步骤5B：
向(S)-1-((2S，4R)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基氨基甲酰基)-4-(7-甲氧基-2-苯基喹啉-4-基氧基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯，步骤4B的产物(1.00g，1.266mmol)在1：1DCM(5mL)和DCE(5.00mL)中的溶液中加入三氟乙酸(5mL，64.9mmol)。在25℃下搅拌15min之后，浓缩反应混合物。使所得粘稠棕色由状物重新溶解于DCM(3mL)，再滴加至剧烈搅拌的1N HCl(50mL)在Et2O中的溶液中。使所得淡棕色沉淀物过滤，用Et2O(25mL)洗涤，在50℃真空箱中干燥2h，得到(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-(7-甲氧基-2-苯基喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-甲酰胺，2HCl盐(0.907g，1.189mmol，94％产率)为淡棕色固体，其纯度足以用于下一步骤。然而，对于NMR表征的分析样品，使80mg产品进一步通过反相HPLC使用以下溶剂系统和条件纯化：溶剂A＝H2O，溶剂B＝MeOH，二者含有0.1％TFA；15％B至100％B20min，维持100％B4min。将合并的HPLC级分用1N HCl水溶液(3mL)处理，浓缩至干燥，在真空下干燥，得到二-HCl盐产物为白色粉末。 1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.0-1.1(m，4H)，1.2(s，9H)，1.2-1.3(m，2H)，1.4(s，1H)，1.9(s，1H)，2.3(d，J＝5.8Hz，1H)，2.4(s，1H)，2.8-2.9(m，1H)，2.9-3.0(m，1H)，4.1(s，3H)，4.2(s，2H)，4.6(d，J＝8.2Hz，1H)，4.8(s，1H)，5.1(d，J＝10.4Hz，1H)，5.3(d，J＝17.1Hz， 1H)，5.6-5.7(m，1H)，5.9(s，1H)，7.5(d，J＝8.2Hz，1H)，7.6-7.7(m，2H)，7.7-7.8(m，3H)，8.1(d，J＝4.0Hz，2H)，8.5(d，J＝8.5Hz，1H). 13C NMR(MeOD)δppm5.0(s)，5.8，5.8，22.4，25.9，31.3，34.6，34.9，35.0，41.8，42.8，54.7，56.1，59.5，60.5，80.4，99.8，101.5，115.1，117.9，120.9，125.8，129.2，129.8，132.3，132.9，133.1，142.7，157.2，165.6，166.8，168.2，169.4，173.2.LC-MS，MS m/z690.2(M++H)。
步骤6A：
向步骤5A产物(0.132g，0.143mmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(0.046g，0.429mmol)和Fmoc-异硫氰酸酯(0.042g，0.150mmol)。使所得棕色溶液在室温下搅拌。16hr以后，除去溶剂，再使残余物通过快速柱色谱法纯化(SiO2，洗脱使用95：5DCM：MeOH)，得到淡棕色固体产物(0.126mg，91％产率)。
步骤6B：
向(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-(7-甲氧基-2-苯基喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-甲酰胺，2HCl，步骤5B的产物(0.500g，0.656mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.343mL，1.967mmol)在DCM(8mL)中的溶液中加入Fmoc-异硫氰酸酯(0.240g，0.852mmol)。使所得棕色反应混合物在25℃下搅拌16h。使反应混合物浓缩，使残余物用EtOAc(50mL)处理，再用0.1N HCl水溶液(10mL)洗涤。水层EtOAc(25mL)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩成黄色固体粗产物，其通过快速柱色谱法纯化(SiO2，洗脱使用95：5DCM：MeOH)，得到(2S，4R)-1-((S)-2-(3-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)硫脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-4-(7-甲氧基-2-苯基喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-甲酰胺(615.4mg，0.634mmol，97％产率)为淡黄色固体，其纯度足以用于下一步骤。然而，使45mg产物进一步通过反相HPLC使用以下溶剂系统和条件纯化：溶剂A＝H2O，溶剂B＝MeOH，二者均含有0.1％TFA；50％B至100％B20min，维持100％B4min。注意：半mL的DMF和1mL的MeOH用于溶解HPLC样品，以便防止样品在HPLC柱中沉淀。使合 并的HPLC级分浓缩直到剩余大部分水后，加入1N NaOH水溶液以中和该白色乳膏状混合物，然后使其用EtOAc(2x25mL)萃取。合并有机层，用MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到分析纯的样品为白色粉末，其用于LC/MS和NMR分析。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.0-1.0(m，2H)，1.1(s，9H)，1.2-1.2(m，2H)，1.2(t，J＝7.2Hz，1H)，1.3(s，1H)，1.4(dd，J＝9.3，5.3Hz，1H)，1.9(dd，J＝8.1，5.6Hz，1H)，2.0(s，1H)，2.2(q，J＝8.7Hz，1H)，2.4-2.4(m，1H)，2.7(dd，J＝14.2，6.9Hz，1H)，2.9-2.9(m，1H)，4.0(s，3H)，4.1-4.1(m，1H)，4.2(t，J＝6.9Hz，1H)，4.4-4.5(m，2H)，4.6(dd，J＝10.7，7.0Hz，1H)，4.8(d，J＝7.3Hz，1H)，5.0(d，J＝12.2Hz，1H)，5.1(dd，J＝10.4，1.2Hz，1H)，5.3(dd，J＝17.2，1.1Hz，1H)，5.6-5.7(m，1H)，5.8(s，1H)，7.3-7.3(m，3H)，7.4(t，J＝7.5Hz，2H)，7.4(d，J＝2.1Hz，1H)，7.5(s，1H)，7.6(d，J＝7.0Hz，2H)，7.6-7.7(m，3H)，7.8(d，J＝7.6Hz，2H)，8.0(dd，J＝7.6，1.8Hz，2H)，8.2(d，J＝9.2Hz，1H)，10.3(d，J＝7.3Hz，1H).13C NMR(MeOD)δppm5.6，5.6，13.5，22.0，26.3，31.2，34.7，34.8，35.4，42.0，42.8，47.0，54.2，55.8，60.0，60.5，64.3，64.4，68.1，79.8，100.9，101.3，115.3，117.7，120.0，120.2，125.1，125.2，127.3，128.0，128.7，129.6，132.1，133.2，141.6，143.6，143.8，144.7，154.1，157.9，164.8，165.5，169.4，170.6，172.0，174.1，180.8，180.9，188.0.LC-MS，MS m/z971.18(M++H)。
步骤7：
向步骤6的产物(0.342mg，0.352mmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入哌啶(0.805mL)。使所得棕色溶液混合物在室温下搅拌过夜。使用旋转蒸发器在减压下除去溶剂和过量的哌啶，得到需要的产物以及l当量的1-((9H-芴-9-基)甲基)哌啶副产物。所得粗产物混合物未经进一步纯化即用于下一步骤。LC-MS，MSm/z749(M++H)。向来自上面的残余物(15.2mg，0.015mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入2-溴苯乙酮(6.0mg，0.30mmol)。在室温下搅拌24hr后，浓缩反应混合物，再使产物通过柱色谱法纯化，得到化合物1的单-TFA盐(1.7mg，12％，第二步产率)为淡绿色固体。1H NMR(500MHz，MeOH)δppm1.1(dd，J＝8.5，4.6Hz，2H)，1.2(s，9H)，1.2-1.3(m，2H)，1.4(dd，J＝9.5，5.5 Hz，1H)，1.9(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.2(q，J＝8.9Hz，1H)，2.4-2.4(m，1H)，2.6(dd，J＝14.0，7.0Hz，1H)，2.9-3.0(m，1H)，4.0(s，3H)，4.3(dd，J＝12.2，2.7Hz，1H)，4.6(dd，J＝10.4，7.0Hz，1H)，4.9(d，J＝13.7Hz，2H)，5.1(d，J＝11.9Hz，1H)，5.1-5.2(m，1H)，5.3(d，J＝17.1Hz，1H)，5.7-5.8(m，1H)，6.0(s，1H)，6.8(t，J＝7.3Hz，1H)，6.9(t，J＝7.5Hz，2H)，7.1(dd，J＝9.3，2.3Hz，1H)，7.3(d，J＝2.1Hz，1H)，7.5(d，J＝7.3Hz，1H)，7.6(s，1H)，7.6(d，J＝9.2Hz，1H)，7.7(t，J＝7.5Hz，2H)，7.8(q，J＝7.3Hz，1H)，8.0(d，J＝7.0Hz，1H)；LC-MS，MSm/z849(M++H)。
制备化合物2，实施例2：
化合物2是以15％产率制备的，其根据如制备化合物1所述相同操作法，不同的是将2-甲氧基苯甲酰甲基溴化物用于代替步骤7中的2-溴-苯乙酮。1H NMR(500MHz，MeOH)δppm1.0-1.1(m，3H)，1.2(s，9H)，1.3(dd，J＝7.0，4.3Hz，2H)，1.4(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.9(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.2(q，J＝8.9Hz，1H)，2.4-2.4(m，1H)，2.6(q，J＝6.7Hz，1H)，2.9-3.0(m，1H)，3.8(s，3H)，4.0(s，3H)，4.2(dd，J＝11.9，3.1Hz，1H)，4.6(dd，J＝10.4，7.0Hz，1H)，5.0(d，J＝11.9Hz，1H)，5.1(dd，J＝10.5，1.4Hz，1H)，5.3(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.7-5.8(m，1H)，6.0(s，1H)，6.6(t，J＝7.5Hz，1H)，6.7(d，J＝8.5Hz，1H)，6.9(t，J＝7.6Hz，1H)，7.1(dd，J＝9.2，2.1Hz，1H)，7.3(d，J＝2.4Hz，1H)，7.6(s，1H)，7.6(d，J＝9.2Hz，1H)，7.7-7.7(m，2H)，7.8(d，J＝7.3Hz，1H)，7.8(dd，J＝7.8，1.7Hz，1H)，8.0(d，J＝7.0Hz，2H)；LC-MS，MSm/z879(M++H)。
制备化合物3，实施例3：
化合物3是以26.9％产率制备的，其根据如制备化合物1所述相同操作法，不同的是将3-甲氧基苯甲酰甲基溴化物用于代替步骤7中的2-溴-苯乙酮。1H NMR(500MHz，MeOH)δppm1.1-1.1(m，3H)，1.2(s，9H)，1.2-1.3(m，2H)，1.4(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.9(dd，J＝8.1，5.6Hz，1H)，2.2(q，J＝8.9Hz，1H)，2.4-2.4(m，1H)，2.6(q，J＝7.6Hz，1H)，2.9-3.0(m，1H)，3.5(s，3H)，4.0(s，3H)，4.3(dd，J＝12.1，2.9Hz，1H)，4.6(dd，J＝10.5，6.9Hz，1H)，5.1(d，J＝10.4Hz，2H)，5.3(d，J＝17.4Hz，1H)，5.7-5.8(m，1H)，6.0(s，1H)，6.4(dd，J＝8.1，2.6Hz，1H)，6.8(t，J＝7.9Hz，1H)，7.0-7.0(m，2H)，7.1(d，J＝7.9Hz，1H)，7.3(d，J＝2.4Hz，1H)，7.6(d，J＝9.2Hz，1H)，7.6(s，1H)，7.7(t，J＝7.3Hz，2H)，7.8(d，J＝7.0Hz，1H)，8.0-8.0(m，2H)；LC-MS，MSm/z879(M++H)。
制备化合物4，实施例4：
化合物4是以29.5％产率制备的，其根据如制备化合物1所述相同操作法，不同的是将4-甲氧基苯甲酰甲基溴化物用于代替步骤7中的2-溴-苯乙酮。1H NMR(500MHz，MeOH)δppm1.0(t，J＝6.6Hz，1H)，1.1-1.1(m，3H)，1.2(s，9H)，1.2-1.3(m，2H)，1.4-1.5(m，1H)， 1.9(dd，J＝8.1，5.6Hz，1H)，2.2(q，J＝8.6Hz，1H)，2.4-2.4(m，1H)，2.6-2.6(m，1H)，2.9-3.0(m，1H)，3.5(s，3H)，4.0(s，3H)，4.2(dd，J＝12.2，3.1Hz，1H)，4.6(dd，J＝10.4，6.7Hz，1H)，5.1(d，J＝11.3Hz，1H)，5.1(d，J＝10.4Hz，1H)，5.3(d，J＝17.1Hz，1H)，5.7-5.8(m，1H)，6.0(s，1H)，6.5(d，J＝8.9Hz，2H)，7.1(dd，J＝9.3，2.3Hz，1H)，7.3-7.4(m，3H)，7.6-7.6(m，2H)，7.7-7.7(m，2H)，7.8(d，J＝7.3Hz，1H)，8.0-8.0(m，2H)；LC-MS，MSm/z879(M++H)。
制备化合物5，实施例5：
化合物5是以29.0％产率制备的，其根据如制备化合物1所述相同操作法，不同的是将4-氟苯甲酰甲基溴化物用于代替步骤7中的2-溴-苯乙酮。1H NMR(500MHz，MeOH)δppm1.1-1.1(m，3H)，1.2(s，9H)，1.2-1.3(m，2H)，1.4(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.9(dd，J＝8.1，5.6Hz，1H)，2.2(q，J＝8.9Hz，1H)，2.3-2.4(m，1H)，2.6-2.6(m，1H)，2.9-3.0(m，1H)，4.0(s，3H)，4.3(dd，J＝12.1，2.9Hz，1H)，4.6(dd，J＝10.5，6.9Hz，1H)，5.0(d，J＝12.5Hz，1H)，5.1(dd，J＝10.4，1.2Hz，1H)，5.3(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.7-5.8(m，1H)，6.0(s，1H)，6.6(t，J＝8.9Hz，2H)，7.1(dd，J＝9.3，2.3Hz，1H)，7.4(d，J＝2.1Hz，1H)，7.5(dd，J＝8.7，5.3Hz，2H)，7.6(d，J＝8.2Hz，2H)，7.7(t，J＝7.5Hz，2H)，7.8(d，J＝7.3Hz，1H)，8.0(d，J＝7.3Hz，2H)；LC-MS，MSm/z867(M++H)。
制备化合物6，实施例6：
实施例6流程1
步骤1：
使3-氯-6-甲基苯甲酸甲基苯甲酸(17.0g，0.10mol)在亚硫酰氯(23.5mL，0.30moi)中的浆液缓缓加热以轻微回流并维持此温度达2h。然后使反应混合物冷却至RT，再在真空中除去过量的亚硫酰氯。将残余物在DCM(50mL)处理，然后在真空下除去溶剂。(应当注意，重得此过程数次以确保除去残余的亚硫酰氯和HCl)。然后使所得产物溶解于THF(80mL)中，其直接用于下丈所述下一步反应。
步骤2：
向通过盐-冰浴冷却的30％氨水(58mL)在水(240mL)中的溶液中滴加以上步骤1产物的THF溶液。添加完毕后，使所得反应混合物(浆液)在-10℃搅拌1hr。然后使反应混合物温热至室温，倾析。然后使反应容器中的剩余固体用水(50mL)研磨。然后重复此研磨和倾析过 程。然后将剩余固体过滤，滤饼用水洗涤。然后使该固体在真空中干燥过夜，得到13.8g(82％)的需要的产物为白色结晶物质。1H NMR(DMSO-d6)δppm2.33(s，3H)，7.24-7.27(m，1H)，7.35-7.38(m，2H)，7.44(b，1H)，7.80(b，1H)；13C NMR(100MHz，DMSO-D6)δppm18.87，126.64，128.86，129.81，132.31，134.19，138.65，169.41；LC-MS，MSm/z170(M++H)。
步骤3：
使步骤2的产物(11.5g，68mmol)、DMF-乙缩醛(10.9mL，82mmol)和THF(150mL)的混合物加热至回流并维持在此温度下达2hr。然后使反应混合物冷却至室温，在真空下除去挥发物。使所得残余物从己烷(150mL)中重结晶，得到14.7g(96％)的需要的产物白色针状物。 1H NMR(DMSO-d6)δ2.49-2.51(m，3H)，3.09(s，3H)，3.20(s，3H)，7.24，7.27(d，J＝13.5Hz，1H)，7.37-7.41(dd，J1＝14Hz，J2＝4.5Hz，1H)，7.91，7.92(d，J＝4.0Hz，1H)，8.55(s，1H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δppm20.69，35.09，40.91，129.50，129.72，132.98，136.86，138.87，160.60，177.04；LC-MS，MSm/z225(M++H)。
步骤4：
使步骤3的产物和KOtBu(14.7g，131mmol)在THF(300mL)中的混合物加热至回流并维持在此温度下达2hr(加热后反应混合物变为暗色溶液)。然后通过蒸馏出约100mL的溶剂使反应混合物的体积减少。然后使所得溶液小心倾入到水(1L)中，再使所得混合物用1M HCl酸化至pH＝4。然后将该混合物过滤，收集的固体用水充分洗涤，然后在真空中干燥过夜，得到7.0g(60％)的需要的产物为灰-白色粉末。 1H NMR(400Hz，CD3OD)δppm6.66(d，J＝7.05Hz，1H)，7.18(d，J＝7.05Hz，1H)，7.66(s，1H)7.67(d，J＝2.01Hz，1H)，8.24(d，J＝2.27Hz，1H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δppm104.05，125.62，127.21，128.54，129.52，130.77，132.43，136.55，160.72；LC-MS，MSm/z180(M++H)。
步骤5：
将步骤4产物和NBS(39.747g，223.3mmol)在MeCN(500mL，无水)中的浆状物经约2h的时间缓缓加热至轻微回流，再维持此轻微回流达1.5h。(此反应可通过LC/MS监测)。然后经3h的时间使反应混合物缓缓冷却至室温，通过简单过滤除去观察到的固体。使收集的固体用MeCN(100mL x3)洗涤，得到47g的需要的产物。些物质未经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm7.46(s，1H)，7.81(dd，J＝8.40，2.00Hz，1H)，7.88(d，J＝8.8Hz，1H)，8.27(d，J＝2.00Hz，1H)；13C NMR(100MHz，DMSO-D6)δppm96.68，126.34，127.58，127.71，130.73，132.20，133.47，134.46，159.88；LC-MS，MSm/z258(M++H)。
步骤6：
经1h的时间使步骤5产物(47g，182mmol)在POCl3(200mL，2.15mol)中的不均匀溶液缓缓加热至回流。使反应混合物维持回流达4h。然后将反应混合物冷却至室温，然后冷却至室温，再在真空中浓缩以除去过量的POCl3。然后使所得残余物置于600mL的CH2Cl2中，冷却至于-35℃，然后缓缓用1N NaOH(400mL)处理直到该混合物呈微碱性(pH＝8)。分离所得有机层，用水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，在真空下浓缩。使所得残余物从EtOAc(约50mL)中结晶，得到32g的需要的产物。将收集的固体用10％EtOAc/己烷(3x50mL)洗涤。
将母液浓缩，再通过快速柱色谱法纯化(SiO2，洗脱使用16％EtOAc/己烷)，得到4g的需要的产物为固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm7.80(dd，J＝8.81，2.01Hz，1H)，8.14(d，J＝9.06Hz，1H)，8.34(d，J＝1.76Hz，1H)，8.48(s，1H)；13C NMR(100MHz，DMSO-D6)δppm118.39，125.06，127.59，128.71，133.89，134.14，134.93，143.18，148.98；LC-MS，MSm/z275(M++H)。
步骤7：
向在-78℃下的步骤6产物(22.16g，80mmol)在THF(500mL)中的浆液中经15min通过插管滴加100mL的1.6Mn-BuLi(在己烷中，160mmol)(维持内部温度＜-65℃)。使所得溶液搅拌0.5h，此后，通过注射器经10min滴加(i-PrO)3B(37mL，160mmol)(维持内部温度＜ -65℃)。使所得反应混合物搅拌0.5h。通过LC/MS检查反应完成之后，通过加样漏斗经10min滴加80mL的30％H2O2(776mmol)(添加期间内部温度升至-60℃)，接着添加80mL的1N NaOH(80mmol)。移除冷却浴，再使反应混合物温热至室温，并在室温下搅拌另外1h。通过LC/MS确认反应完毕后，再使反应混合物冷却至-40℃，再经30min以使过量H2O2猝灭的方式通过加样漏斗滴加100g的Na2SO3(0.793mol)在400mL水中的溶液(维持内部温度5-10℃)。使所得浆液用6N HCl(约50mL)在0℃下中和直到pH～6，然后用500mL的EtOAc稀释，再倾析到2L分离漏斗中。向在反应容器中的剩余固体中加入500mL水和300mL的EtOAc，然后用6N HCl(约20mL)中和。使合并的有机层用盐水(3x300mL)洗涤，然后用水(3x200mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到粗产物，使其用50mL的EtOAc研磨。通过过滤收集固体，.通过过滤收集固体，用EtOAc(3x25mL)清洗，干燥，得到需要的产物(进行2次：12.0g，70％以及13.8g，81％)。合并滤液，浓缩，再通过快速柱色谱法纯化(SiO2，洗脱使用35％EtOAc/己烷，得到2.1g的产物。总计44.4g的溴化物，得到27.9g(81％)的4-OH产物。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm4.05(s，3H)，7.4(s，1H)，7.76(dd，J＝8.8，2，Hz，1H)，8.16(d，J＝2Hz，1H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δppm123.78，124.66，125.62，127.03，127.71，130.72，133.80，137.63；148.88；LC-MS，MSm/z213(M++H)。
步骤8：
在0℃下向步骤7的产物(16g，75.5mmol)在MeOH-MeCN(30mL/300mL)中的浆液中滴加60mL的2M的TMSCHN2在己烷(120mmol)中的溶液。使反应混合物温热至室温；然后使其搅拌14h。然后将该溶液浓缩，再将所得固体从EtOAc(约50mL)中重结晶，得到8.1g的需要的产物，使其用25％EtOAc/己烷(3x20mL)洗涤。浓缩母液，再通过快速柱色谱法纯化(SiO2，洗脱使用16％EtOAc/己烷)，得到3.2g的需要的产物为固体。1H NMR(400MHz，CDC]3)δppm4.05(s，3H)，7.67(dd，J＝9.06，2.01Hz，1H)，7.80(s，1H)，8.16(d，J＝8.81Hz，1H)，8.23(d，J＝2.01Hz，1H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ ppm56.68，122.70，123.99，124.14，126.67，127.83，131.43，134.10，139.75，149.94；LC-MS，MSm/z229(M++H)。
实施例6流程2
步骤1：
使步骤8流程1实施例6的产物(0.452g，1.98mmol)、Boc-HYP-OH(0.508g，2.20mmol)和叔丁醇钾(0.672g，6.0mmol)在DMSO(20mL)中在室温下搅拌4小时。使该混合物用水猝灭，再用1.0M HCl水溶液中和。将混合物用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤该有机物，用无水 MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到粗固体(0.844g，定量的)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
步骤2：
向步骤1的产物(8.36g，19.8mmol)、(1R，2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙烷甲酰胺TsOH盐(9.64g，24mmol)和iPr2EtN(17.4mL，100mmol)在CH2Cl2(200mL)中的溶液中加入HATU(11.4g，31mmol)。使反应混合物搅拌16h，在真空下浓缩，再使残余物溶解于EtOAc(300mL)，依次用1N HCl(3x50mL)、水(2x30mL)和盐水(2x50mL)洗涤。有机用用MgSO4干燥，过滤，浓缩，再通过快速柱色谱法纯化(SiO2，洗脱使用25％丙酮/己烷)，得到11.5g的粗产物。将此化合物通过从MeOH(40mL)中结晶纯化，得到需要的产物(11g，88％产率)为结晶固体。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm1.03-1.31(m，8H)，1.43(s，9H)，1.88(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)，2.17-2.36(m，2H)，2.53(dd，J＝13.72，6.42Hz，1H)，2.90-3.03(m，1H)，3.72-3.93(m，2H)，4.40(dd，J＝9.69，6.92Hz，1H)，5.13(d，J＝10.32Hz，1H)，5.31(d，J＝17.12Hz，1H)，5.65-5.93(m，2H)，7.55(s，1H)，7.70(dd，J＝8.94，2.14Hz，1H)，8.06(d，J＝2.01Hz，1H)，8.09(d，J＝8.81Hz，1H)；13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δppm5.47，5.57，5.75，19.85，22.38，27.90，27.99，30.65，30.72，32.11，33.81，35.11，36.30，40.86，41.59，48.56，52.39，52.76，56.24，58.76，59.21，73.57，74.06，79.28，80.06，117.80，119.16，119.81，119.88，122.14，123.48，128.52，131.00，132.28，133.38，145.72，151.77，151.86，154.06，168.38，169.13，172.46，173.27；LC-MS，MSm/z635(M++H)。
步骤3：
将步骤2产物(6.34g，10mmol)在50mL的含有3mL浓HCl的MeOH中的浆液回流2h。使此溶液冷却至室温，再在真空中浓缩。将该固体残余物置于干燥的Et2O(50ml)中，再使该溶液在真空下浓缩。重此过程5次以确保完全除去水和溶解的HCl，得到二-HCl盐产物(6.07g，100％产率)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm0.96-1.21(m，3H)，1.22-1.30(m，1H)，1.38(dd，J＝9.57，5.54Hz，1H)，1.95(dd，J ＝8.06，5.79Hz，1H)，2.25-2.46(m，2H)，2.83-3.08(m，2H)，3.75-3.90(m，2H)，4.01(s，3H)，4.70(dd，J＝10.32，7.81Hz，1H)，5.10-5.20(m，1H)，5.33(d，J＝17.12Hz，1H)，5.58-5.76(m，1H)，5.88(s，1H)，7.57(s，1H)，7.74(dd，J＝8.81，2.01Hz，1H)，8.12(d，J＝9.06Hz，1H)，8.28(d，J＝2.01Hz，1H)；13C NMR(101MHz，CD3OD)δppm6.52，6.65，22.60，31.99，34.63，37.04，43.18，52.95，56.85，60.56，76.08，119.06，119.10，121.65，123.93，124.63，130.72，132.37，133.78，134.76，148.49，153.02，170.08，170.67；LC-MS，MSm/z535(M++H)。
步骤4：
向维持于0℃的步骤3产物(6.07g，10mmol)在100mL的CH2Cl2中的溶液中加入8.7mL的iPr2EtN(50mmol)，接着加入Boc-L-tert-亮氨酸(2.772g，12mmol)和HATU(5.7g，15mmol)。使反应混合物温热至室温，再搅拌16h，接着在真空下浓缩，将该残余物溶解于Et0Ac(300mL)。使该EtOAc溶液依次用1N HCl(3x50mL)、H2O(2x30mL)和盐水(2x50mL)洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤，再在真空中浓缩，通过快速柱色谱法纯化后获得粗产物(SiO2，洗脱使用33％丙酮in己烷)，得到白色固体产物(7g，94％产率)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm1.00-1.06(m，11H)，1.16(s，9H)，1.14-1.24(m，2H)，1.44(dd，J＝9.32，5.29Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.06，5.54Hz，1H)，2.17-2.39(m，2H)，2.59(dd，J＝13.85，6.80Hz，1H)，2.87-3.02(m，1H)，4.00(s，3H)，4.01-4.14(m，1H)，4.17-4.24(m，1H)，4.43(d，J＝12.09Hz，1H)，4.52-4.65(m，1H)，5.12(d，J＝10.07Hz，1H)，5.30(d，J＝16.87Hz，1H)，5.65-5.91(m，2H)，7.56(s，1H)，7.68(d，J＝9.06Hz，1H)，8.05(s，1H)，8.09(d，J＝9.06Hz，1H).LC-MS，MSm/z748(M++H)。C35H46ClN5O9S的分析计算值：C55.84，H6.32，N9.10，S.4.16.实测值：C56.02，H6.31，N9.04。
步骤5：
向(S)-1-((2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯，步骤4产物(5.08g， 6.79mmol)在DCM(20mL)和DCE(20.0mL)中的溶液中加入TFA(20mL260mmol)。使所得淡棕色反应混合物在25℃下搅拌。在室温下20min以后，使反应混合物浓缩至淡棕色粘稠油状物，使其溶解于DCE(30mL)中，重新浓缩成淡棕色固体。使该残余物溶解于DCM(10mL)，再加至剧烈搅拌的1N HCl在Et2O(100mL)中的溶液中，通过真空过滤获得所得灰白色沉淀物，用Et2O(50mL)洗涤，再在真空箱中干燥，得到(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-甲酰胺，2HCl(4.91g，6.81mmol，100％产率)为灰白色固体。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.0-1.1(m，3H)，1.2(s，9H)，1.2-1.3(m，3H)，1.4(dd，J＝9.5，5.2Hz，1H)，1.9(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，2.3(q，J＝8.9Hz，1H)，2.3-2.4(m，1H)，2.7(dd，J＝14.0，6.7Hz，1H)，2.9-3.0(m，1H)，3.3-3.3(m，1H)，3.5(q，J＝7.0Hz，1H)，4.0(s，3H)，4.1(s，1H)，4.1(dd，J＝12.4，3.5Hz，1H)，4.4(d，J＝12.2Hz，1H)，4.7(dd，J＝10.4，6.7Hz，1H)，5.1(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.3(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.7-5.7(m，1H)，5.9(s，1H)，7.5(s，1H)，7.8(dd，J＝8.9，1.8Hz，1H)，8.1(d，J＝8.9Hz，1H)，8.3(d，J＝2.1Hz，1H).13CNMR(MeOD)δppm5.8，5.8，14.5，22.4，25.9，31.3，34.6，34.9，35.2，41.8，54.9，56.3，59.5，60.6，65.9，77.8，114.7，117.8，121.0，123.7，123.9，130.4，133.0，133.1，134.7，147.8，152.8，168.1，169.4，173.4.LC-MS，MSm/z648(M++H)。
步骤6：
向步骤5，实施例6的产物(1.53g，2.12mmol)和N，N-二异丙基乙胺(1.11mL，6.37mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入Fmoc-异硫氰酸酯(0.895g，3.18mmol)。使所得棕色反应混合物在25℃下搅拌。53h小时后，将反应混合物用哌啶(2mL，20.20mmol)处理，并在25℃下搅拌另外6h。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，再用3x50mL0.1NHCl洗涤。有机层用MgSO4干燥，浓缩成棕色固体，使其通过快速柱色谱法纯化(SiO2，洗脱使用95：5DCM：MeOH)，得到(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-((S)-3，3-二甲基-2-硫脲基丁酰基)吡咯烷-2-甲 酰胺(1.38g，1.951mmol，92％产率)为淡棕色泡沫状固体产物；但是此物质仍然含有约33％的1-((9H-芴-9-基)甲基)哌啶副产物，其未经进一步纯化即用于下一步骤。少量的分析样品是通过反相HPLC获得的。LC-MS，MSm/z707(M++H)。
步骤7：
向步骤6产物(0.150g，0.212mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.111mL，0.636mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入2-溴-1-(3，4-二氟苯基)乙烷-1-酮(0.100g，0.424mmol)。使所得反应混合物在25℃下搅拌。17.5h后，使反应混合物滴加至剧烈搅拌的1.0N HCl溶液(5mL)中，使所得褐色沉淀物过滤，用H2O(3mL)洗涤。粗产物通过反相HPLC使用以下溶剂系统和条件纯化：溶剂A＝H2O，溶剂B＝MeOH，二者均含有0.1％TFA；40％B至100％B20min，维持100％B4min。浓缩合并的HPLC级分后，使所得残余物溶解于MeOH，再用1N HCl水溶液(2mL)处理，然后使其重新浓缩，再在真空箱中在50℃下干燥，得到(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-((S)-2-(4-(3，4-二氟苯基)噻唑-2-基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺，2HCl(76.9mg，0.084mmol，39.6％产率)，化合物6，为淡黄色固体。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.04-1.14(m，3H)，1.16(s，9H)，1.22(s，1H)，1.25(d，J＝4.9Hz，2H)，1.42(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.90(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.25(q，J＝8.9Hz，1H)，2.28-2.34(m，1H)，2.59(dd，J＝13.7，7.3Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.97(s，3H)，4.12(dd，J＝12.1，3.5Hz，1H)，4.50(d，J＝11.9Hz，1H)，4.64-4.69(m，2H)，5.13(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.68-5.77(m，1H)，5.96(s，1H)，7.18-7.25(m，1H)，7.29-7.34(m，1H)，7.43-7.48(m，1H)，7.52(s，1H)，7.62(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.84(d，J＝1.8Hz，1H)，8.02(d，J＝9.2Hz，1H)；LC-MS，MSm/z843(M++H)。
制备化合物7，实施例7：
化合物7是以57.5％产率制备的，其根据如制备化合物6所述相同操作法，不同的是将2-溴-4′-甲氧基苯乙酮用于替代步骤7中的2-溴-1-(3，4-二氟苯基)乙烷-1-酮。1H NMR(500MHz，MeOD)1.01-1.13(m，4H)，1.17(s，9H)，1.22-1.27(m，2H)，1.42(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.90(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.27(q，J＝8.9Hz，1H)，2.30-2.36(m，1H)，2.65(dd，J＝13.6，7.2Hz，1H)，2.92-3.00(m，1H)，3.82(s，3H)，3.97(s，3H)，4.10(dd，J＝11.9，2.7Hz，1H)，4.40(d，J＝12.5Hz，1H)，4.52(s，1H)，4.71(dd，J＝9.8，7.3Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.31(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.67-5.78(m，1H)，5.91(s，1H)，6.95(d，J＝8.5Hz，2H)，7.42(d，J＝8.5Hz，2H)，7.55(s，1H)，7.63(dd，J＝9.0，2.0Hz，1H)，7.94(d，J＝2.1Hz，1H)，8.05(d，J＝8.9Hz，1H)；LC-MS，MSm/z837(M++H)。
制备化合物8，实施例8：
化合物8是以28.4％产率制备的，其根据如制备化合物6所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙酮用于替代步骤7中的2-溴-1-(3，4-二氟苯基)乙烷-1-酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δ ppm1.05-1.14(m，3H)，1.17(s，9H)，1.21(s，1H)，1.23-1.26(m，2H)，1.42(dd，J＝9.6，5.3Hz，1H)，1.90(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.26(q，J＝8.9Hz，1H)，2.28-2.34(m，1H)，2.62(dd，J＝13.7，7.3Hz，1H)，2.93-2.99(m，1H)，3.97(s，3H)，4.11(dd，J＝11.9，3.4Hz，1H)，4.41(d，J＝12.2Hz，1H)，4.55(s，1H)，4.69(dd，J＝10.2，7.2Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.68-5.78(m，1H)，5.93(s，1H)，6.87(t，J＝73.4Hz，1H)，7.17(d，J＝8.9Hz，2H)，7.53(s，1H)，7.55(s，2H)，7.63(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.91(d，J＝2.1Hz，1H)，8.05(d，J＝8.9Hz，1H)；LC-MS，MSm/z873(M++H)。
制备化合物9，实施例9：
实施例9流程1
步骤1
向(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-((S)-3，3-二甲基-2-硫脲基丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺，实施例6步骤6流程2的产物(0.112g，0.158 mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.083mL，0.475mmol)在DMF(1mL)中的淡棕色混合物中加入2-溴苯丙酮(0.050mL，0.317mmol)。使所得反应混合物在25℃下搅拌。15hr后，使反应混合物用MeOH(2mL)稀释，再通过使用以下溶剂系统和条件反相HPLC纯化：溶剂A＝H2O，溶剂B＝MeOH，二者均含有0.1％TFA；20％B至100％B30min，维持100％B4min。浓缩合并的HPLC级分后，使各化合物重新溶解于MeOH中，再用1N HCl水溶液(2mL)处理。然后将样品浓缩，再在真空箱中在50℃下干燥，得到(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-((S)-3，3-二甲基-2-(5-甲基-4-苯基噻唑-2-基氨基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺，2HCl，化合物9(73.3mg，0.082mmol，51.8％产率)为白色二-HCl-盐固体。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.07-1.11(m，2H)，1.14(s，9H)，1.23-1.26(m，2H)，1.42(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.91(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.03(s，3H)，2.24-2.34(m，2H)，2.64(dd，J＝13.7，7.0Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.97(s，3H)，4.09(dd，J＝12.2，3.4Hz，1H)，4.28(d，J＝11.9Hz，1H)，4.43(s，1H)，4.71(dd，J＝10.1，7.0Hz，1H)，5.14(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.31(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.69-5.78(m，1H)，5.89(s，1H)，7.31-7.34(m，2H)，7.47-7.50(m，3H)，7.56(s，1H)，7.69(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.99(d，J＝2.1Hz，1H)，8.10(d，J＝8.9Hz，1H)，9.24(s，1H)；13C NMR(MeOD)δppm5.7，5.8，10.5，22.4，25.9，31.2，34.7，35.0，37.6，41.7，55.2，55.9，60.5，65.6，75.1，115.7，117.7，118.9，120.8，122.4，123.8，128.1，128.8，129.2，129.7，130.2，131.2，133.2，133.6，135.0，147.2，152.4，167.8，168.7，169.4，173.8；LC-MS，MSm/z821(M++H)。
制备化合物10，实施例10：
实施例10流程1
步骤1。
向(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-((S)-3，3-二甲基-2-硫脲基丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺，实施例6步骤6流程2的产物(0.150g，0.212mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.111mL，0.636mmol)在DMF(2mL)中的溶液混合物中加入2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙烷-1-酮(0.113g，0.424mmol)。使反应瓶在25℃搅拌过夜。18.0h以后，使反应混合物滴加至剧烈搅拌的1.0N HCl溶液(5mL)中，将所得褐色沉淀物过滤，用H2O(3mL)洗涤。将产物通过反相HPLC使用以下溶剂系统和条件纯化：溶剂A＝H2O，溶剂B＝MeOH，二者均含有0.1％TFA；用40％B至100％B20min，维持100％B4min。浓缩合并的HPLC级分后，使产物在50℃真空箱中干燥，得到(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-((S)-3，3-二甲基-2-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噻唑-2-基氨基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺，2TFA(97.3mg，0.088mmol，41.6％产率)为黄绿色固体。1H NMR(500MHz，MeOD)1.05-1.10(m，2H)，1.15(s，9H)， 1.23-1.29(m，2H)，1.38(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.85(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.15-2.21(m，1H)，2.21-2.27(m，1H)，2.40(dd，J＝13.7，6.7Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.88(s，3H)，4.16(dd，J＝11.6，3.7Hz，1H)，4.52(dd，J＝10.5，6.9Hz，1H)，4.83(s，1H)，4.92(d，J＝11.9Hz，1H)，5.09(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.26(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.66-5.76(m，1H)，6.07(s，1H)，6.84(s，1H)，7.10(d，J＝8.2Hz，2H)，7.37(s，1H)，7.42(d，J＝2.1Hz，1H)，7.47(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.66(d，J＝8.2Hz，2H)，7.86(d，J＝8.9Hz，1H)；13C NMR(MeOD)δppm5.6，5.8，22.5，26.3，31.3，34.9，35.4，35.5，41.7，55.2，55.6，60.1，63.2，74.2，104.3，117.6，118.2，120.7，122.6，123.1，124.7，124.7，125.9，129.4，130.7，133.1，133.3138.1，146.9，152.1，169.3，169.7，172.8，174.3；LC-MS，MSm/z875(M++H)。
制备化合物11，实施例11：
化合物11是以38.5％产率制备的，其根据如制备化合物10所述相同操作法，不同的是将2-溴-2′-萘乙酮用于替代2-溴-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙烷-1-酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.05-1.10(m，2H)，1.19(s，9H)，1.26(q，J＝4.7Hz，2H)，1.31(t，J＝7.3Hz，1H)，1.39(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.86(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，2.18(q，J＝8.9Hz，1H)，2.22-2.29(m，1H)，2.39(dd，J＝13.6，6.9Hz，1H)，2.85(s，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.72(s，3H)，4.22(dd，J＝11.6，3.7Hz，1H)，4.53(dd，J＝10.5，6.9Hz，1H)，5.01(d，J＝11.3Hz，1H)，5.09(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.26(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.66-5.77(m，1H)，6.12(s， 1H)，7.16(s，1H)，7.18(dd，J＝8.1，1.1Hz，1H)，7.21-7.26(m，1H)，7.32(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.36(d，J＝1.8Hz，1H)，7.39(d，J＝8.5Hz，1H)，7.45(d，J＝8.2Hz，1H)，7.49(d，J＝8.2Hz，1H)，7.56(dd，J＝8.5，1.8Hz，1H)，7.64(d，J＝8.9Hz，1H)，8.02(s，1H)；13C NMR(MeOD)δppm22.5，26.3，31.3，34.9，35.5，35.6，41.7，42.8，55.2，55.4，60.1，63.5，74.0，91.9，117.6，117.7，118.0，120.5，122.4，122.7，123.6，124.7，125.5，125.8，127.3，127.5，128.0，129.1，130.4，131.4，132.9，132.9，133.3，133.4，146.7，152.0，169.2，169.7，172.7，174.3；LC-MS，MSm/z857(M++H)。
制备化合物12，实施例12：
化合物12是以52％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(4-甲氧基-苯基)-butan-1-酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.0(t，J＝7.3Hz，3H)，1.0-1.1(m，2H)，1.1(s，9H)，1.2-1.3(m，2H)，1.9(dd，J＝8.1，5.3Hz，1H)，2.2-2.4(m，3H)，2.4-2.5(m，1H)，2.6(dd，J＝13.7，7.0Hz，1H)，2.9-3.0(m，1H)，3.8(s，3H)，4.0(s，3H)，4.1(dd，J＝11.9，3.4Hz，1H)，4.3(d，J＝12.2Hz，1H)，4.4(s，1H)，4.7(dd，J＝9.8，7.3Hz，1H)，5.1(d，J＝10.4Hz，1H)，5.3(d，J＝17.4Hz，1H)，5.7-5.8(m，1H)，5.9(s，1H)，7.0(d，J＝8.5Hz，2H)，7.2(d，J＝8.5Hz，2H)，7.6(s，1H)，7.7(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，8.0(d，J＝2.1Hz，1H)，8.1(d，J＝8.9Hz，1H)，9.2(s，1H).13C NMR(126MHz，MeOD)δppm5.7，5.8，14.5，19.5，22.4，25.9，31.2，34.7，35.0，37.6，41.7，55.0，55.3，55.9，60.6，65.7，75.1， 114.6，117.7，118.9，120.2，120.8，122.1，122.4，123.8，129.7，130.3，131.2，133.2，133.6，134.3，147.2，152.4，161.6，167.6，168.7，169.4，173.8.LC-MS，MS m/z865.3(M++H)。
制备化合物13，实施例13：
化合物13是以17％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-2′，4′-二氟苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.0-1.1(m，3H)，1.2(s，9H)，1.2(s，1H)，1.2-1.3(m，2H)，1.4(dd，J＝9.5，5.2Hz，1H)，1.9(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.2(q，J＝8.8Hz，1H)，2.3-2.3(m，1H)，2.6(dd，J＝13.7，7.0Hz，1H)，2.9-3.0(m，1H)，4.0(s，3H)，4.1(dd，J＝11.9，3.4Hz，1H)，4.5(d，J＝11.9Hz，1H)，4.6-4.7(m，2H)，5.1(dd，J＝10.2，1.7Hz，1H)，5.3(dd，J＝17.1，1.5Hz，1H)，5.7-5.8(m，1H)，6.0(s，1H)，6.8-6.8(m，1H)，6.9-6.9(m，1H)，7.5(s，1H)，7.6(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.6-7.7(m，1H)，7.8(d，J＝2.1Hz，1H)，8.0(d，J＝9.2Hz，1H).13CNMR(MeOD)δppm5.6，5.8，22.5，26.1，31.2，34.8，35.1，36.7，41.7，55.2，55.8，60.3，64.8，74.7，104.3，104.5，111.7，111.8，111.9，117.7，118.1，118.5，120.8，122.5，123.5，129.6，130.8，131.0，133.2，133.5，147.1，152.3，159.4，169.2，169.5，170.4，174.0，186.3.LC-MS，MS m/z843.2(M++H)。
制备化合物14，实施例14：
化合物14是以87％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(2-吡啶基)-1-乙酮氢溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.1-1.1(m，2H)，1.1(s，9H)，1.2-1.3(m，2H)，1.4-1.4(m，1H)，1.9(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.2-2.3(m，2H)，2.4(dd，J＝13.6，6.9Hz，1H)，2.9-3.0(m，1H)，3.9(s，3H)，4.0(dd，J＝11.9，3.1Hz，1H)，4.6(dd，J＝10.5，7.2Hz，1H)，4.7(dd，J＝12.1，1.4Hz，1H)，4.9(s，1H)，5.1(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.3(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.7-5.8(m，1H)，6.1(t，J＝3.1Hz，1H)，7.4(s，1H)，7.5(d，J＝1.8Hz，1H)，7.5-7.5(m，1H)，7.6(dd，J＝9.2，2.1Hz，1H)，7.6(s，1H)，7.9(d，J＝8.9Hz，1H)，8.0(d，J＝8.2Hz，1H)，8.1-8.2(m，1H)，8.2(d，J＝5.2Hz，1H).LC-MS，MSm/z808.2(M++H)。
制备化合物15，实施例15：
化合物15是以24.4％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同 操作法，不同的是将3-(溴乙酰基)吡啶氢溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.1-1.1(m，3H)，1.2(s，9H)，1.2-1.3(m，2H)，1.4(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.9(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，2.2-2.3(m，2H)，2.4(dd，J＝13.6，6.6Hz，1H)，3.0(ddd，J＝12.8，8.1，4.7Hz，1H)，3.9(s，3H)，4.1(dd，J＝11.7，3.2Hz，1H)，4.5(dd，J＝10.7，7.0Hz，1H)，4.9(s，1H)，5.1(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.3(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.7(ddd，J＝17.2，10.3，8.9Hz，1H)，6.1(t，J＝2.9Hz，1H)，7.3(s，1H)，7.3(d，J＝2.1Hz，1H)，7.4(s，1H)，7.6(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.6(dd，J＝8.2，5.8Hz，1H)，7.9(d，J＝8.9Hz，1H)，8.2(d，J＝5.5Hz，1H)，8.7(d，J＝8.2Hz，1H)，8.9(s，1H).13C NMR(MeOD)δppm5.6，5.8，22.4，26.2，31.2，34.9，35.3，41.7，55.3，55.9，59.9，63.1，74.4，108.9，117.6，118.8，120.5，122.2，123.4，127.0，129.2，131.0，133.2，133.3，134.8，138.2，138.4，141.9，142.9，146.7，151.9，169.6，170.2，172.6，174.3.LC-MS，MSm/z808.2(M++H)。
制备化合物16，实施例16：
化合物16是以27.6％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(4-吡啶基)-1-乙酮氢溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.1-1.1(m，2H)，1.1(s，9H)，1.2-1.3(m，2H)，1.4(dd，J＝9.5，5.2Hz，1H)，1.9(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，2.2-2.3(m，2H)，2.4(dd，J＝13.6，6.9Hz，1H)，3.0(ddd，J＝12.7，8.1，4.9Hz，1H)，3.9(s，3H)，4.1-4.1(m，1H)，4.5(dd，J＝10.7，7.0Hz，1H)，4.9(s，1H)，5.1(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.3(d，J ＝17.1Hz，1H)，5.7-5.8(m，1H)，6.2(d，J＝3.1Hz，1H)，7.4(d，J＝2.1Hz，1H)，7.4(s，1H)，7.5(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.7(s，1H)，7.9(d，J＝8.9Hz，1H)，8.0(d，J＝7.0Hz，2H)，8.2(d，J＝6.7Hz，2H).13C NMR(MeOD)δppm5.6，5.8，22.5，26.2，31.2，34.9，35.3，35.3，41.7，55.4，55.9，60.0，63.0，74.3，115.9，117.6，117.8，118.8，120.6，122.4，123.3，129.2，131.0，133.2，133.4，140.7，144.9，146.7，150.3，152.0，169.6，169.9，172.5，174.3.LC-MS，MSm/z808.2(M++H).LC-MS，MSm/z806.2(M+-H)。
制备化合物17，实施例17：
化合物17是以82％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-[4-(三氟甲氧基)苯基]乙烷-1-酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)1.1-1.1(m，3H)，1.2(s，9H)，1.3(dd，J＝4.9，2.7Hz，2H)，1.3-1.3(m，1H)，1.4(dd，J＝9.3，5.3Hz，1H)，1.9(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.2-2.3(m，2H)，2.5(dd，J＝13.7，7.0Hz，1H)，2.9-3.0(m，1H)，3.9(s，3H)，4.1(dd，J＝12.1，3.5Hz，1H)，4.6(d，J＝12.2Hz，1H)，4.6-4.6(m，2H)，5.1(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.3(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.7-5.8(m，1H)，6.0(s，1H)，7.1(d，J＝8.2Hz，2H)，7.5(s，1H)，7.6-7.6(m，3H)，7.8(d，J＝1.8Hz，1H)，8.0(d，J＝8.9Hz，1H).LC-MS，MSm/z891.2(M++H)。
制备化合物18，实施例18：
实施例18流程1
步骤1：
向2-甲氧基联苯基-4-胺盐酸盐(1.0g，4.24mmol)和乙酸钠(0.348g，4.24mmol)在DCE(30mL)中的浆液混合物中加入3，3-二甲基-2-氧代丁酸(1.104g，8.49mmol)和氰基硼氢化钠(0.175g，2.79mmol)。使所得淡黄色反应混合物在25℃下搅拌过夜。LC-MS，MS m/z314.3(M++H)。
步骤1：
向(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)吡咯烷-2-甲酰胺，2HCl(155.0mg，0.255mmol)和DIEA(0.178mL，1.020mmol)在DCM(2mL)的溶液 混合物中加入2-(2-甲氧基联苯基-4-基氨基)-3，3-二甲基丁酸(80mg，0.255mmol)和HATU(126mg，0.331mmol)。使所得棕色反应混合物在25℃下搅拌。6hr以后，使反应浓缩，再通过反相HPLC用以下条件纯化：溶剂A＝H2O，溶剂B＝MeCN，二者均含有0.1％TFA；15％B至100％B20min，维持100％B4min。浓缩合并的HPLC级分，再在25℃真空箱中干燥，得到18A，(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-(2-(2-甲氧基联苯基-4-基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺，2TFA(104.4mg，0.095mmol，37.1％产率)，(异构体1，经HPLC)为淡黄色固体，和18B，(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-(2-(2-甲氧基联苯基-4-基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺，2TFA(75.8mg，0.067mmol，26.1％产率)，(异构体2，经HPLC)为淡黄绿色固体。
18A(异构体1，HPLC)：1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.04-1.11(m，2H)，1.14(s，9H)，1.23-1.28(m，2H)，1.43(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.1，5.6Hz，1H)，2.20-2.29(m，2H)，2.54(dd，J＝13.4，6.7Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.56(s，3H)，3.94(s，3H)，4.03(s，1H)，4.06(dd，J＝12.2，3.1Hz，1H)，4.40(d，J＝12.2Hz，1H)，4.58(dd，J＝10.5，6.9Hz，1H)，5.12(d，J＝10.4Hz，1H)，5.30(d，J＝17.1Hz，1H)，5.71(s，1H)，5.72-5.79(m，1H)，5.89(d，J＝7.9Hz，1H)，6.07(d，J＝8.2Hz，1H)，6.38(s，1H)，7.03(d，J＝7.3Hz，2H)，7.16(t，J＝7.0Hz，1H)，7.23(t，J＝7.5Hz，2H)，7.40(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.54(s，1H)，7.85(d，J＝1.8Hz，1H)，7.90(d，J＝8.9Hz，1H)，9.19(s，1H)；13CNMR(MeOD)δppm5.6，5.8，22.5，26.4，31.3，35.0，35.7，41.7，42.8，54.8，55.8，60.5，63.6，75.3，99.7，104.9，117.6，118.6，120.7，121.6，122.4，123.4)，125.7，127.5，129.2，129.5，130.6，130.7，131.1，133.3，133.5，138.9，147.1，148.3，152.6，157.6，169.7，173.3，174.5；LC-MS，MSm/z830.3(M++H)。
18B(异构体2，HPLC)：1H NMR(500MHz，MeOD)δppm0.98(s，9H)，1.01(s，1H)，1.01-1.05(m，1H)，1.20-1.26(m，2H)，1.35(dd，J＝9.6，5.3Hz，1H)，1.85(dd，J＝8.1，5.3Hz，1H)，2.22(q，J＝9.0Hz，1H)， 2.29-2.35(m，1H)，2.57(dd，J＝13.9，7.2Hz，1H)，2.79-2.86(m，1H)，3.74(s，3H)，3.99(s，3H)，4.05(dd，J＝11.9，3.4Hz，1H)，4.17(s，1H)，4.44(d，J＝11.9Hz，1H)，4.56(dd，J＝9.9，7.2Hz，1H)，5.11(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.74-5.81(m，1H)，5.82(s，1H)，6.40(d，J＝8.2Hz，1H)，6.46(s，1H)，7.03(d，J＝8.2Hz，1H)，7.16(t，J＝7.3Hz，1H)，7.27(t，J＝7.6Hz，2H)，7.38(d，J＝7.3Hz，2H)，7.57(s，1H)，7.68(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，8.01(d，J＝1.8Hz，1H)，8.09(d，J＝8.9Hz，1H)，9.35(s，1H)；13C NMR(MeOD)δppm5.4，5.8，23.6，26.1，31.2，34.4，34.5，36.5，41.5，54.1，55.1，55.8，60.2，62.4，75.2，98.8，117.5，117.8，118.8，120.7，120.8，122.5，123.6，125.7，127.7，129.2，129.6，131.0，131.1，133.3，133.5，139.5，147.1，149.2，152.5，157.8，169.8，173.8，174.8；LC-MS，MSm/z830.3(M++H)。
制备化合物19，实施例19：
化合物19是以59％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将p，α，α-三溴苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.1-1.1(m，4H)，1.2(s，9H)，1.2-1.3(m，3H)，1.4(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.9(dd，J＝8.1，5.3Hz，1H)，2.2-2.3(m，2H)，2.5(dd，J＝13.6，6.9Hz，1H)，2.9(none，1H)，2.9-3.0(m，1H)，4.0(s，3H)，4.0(d，J＝4.9Hz，1H)，4.1(dd，J＝11.7，3.5Hz，1H)，4.6(dd，J＝10.4，7.0Hz，1H)，5.1(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.3(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.7-5.8(m，1H)，6.0(s，1H)，7.2(d，J＝8.2Hz，2H)，7.4(d，J＝8.5Hz，2H)，7.4(s，1H)，7.5(dd，J＝9.2，2.1Hz， 1H)，7.6(d，J＝1.8Hz，1H)，8.0(d，J＝8.9Hz，1H)。
制备化合物20，实施例20：
化合物20是以51％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。 1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.1-1.1(m，2H)，1.2(s，9H)，1.2-1.2(m，1H)，1.2(d，J＝3.7Hz，2H)，1.4(dd，J＝9.3，5.3Hz，1H)，1.9(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，2.3-2.3(m，2H)，2.6(dd，J＝13.7，7.0Hz，1H)，3.0(dq，J＝8.4，4.1Hz，1H)，4.0(s，3H)，4.1(dd，J＝12.2，3.1Hz，1H)，4.4(d，J＝12.2Hz，1H)，4.5(s，1H)，4.7(dd，J＝10.1，7.3Hz，1H)，5.1(dd，J＝10.2，1.4Hz，1H)，5.3(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.7-5.8(m，1H)，5.9(s，1H)，7.4-7.5(m，3H)，7.5-7.5(m，2H)，7.6(s，1H)，7.6(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.9(d，J＝1.8Hz，1H)，8.1(d，J＝8.9Hz，1H).LC-MS，MSm/z807.2(M++H)。
制备化合物21，实施例21：
化合物21是以36％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-4′-氰基苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.1-1.1(m，2H)，1.2(s，9H)，1.2-1.3(m，2H)，1.4(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.9(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.2-2.3(m，2H)，2.5(dd，J＝13.6，6.9Hz，1H)，2.9-3.0(m，1H)，4.0(s，3H)，4.1(dd，J＝11.9，3.7Hz，1H)，4.6(dd，J＝10.5，6.9Hz，1H)，4.7(d，J＝11.6Hz，1H)，4.8(s，1H)，5.1(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.3(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.7(ddd，J＝17.1，10.4，8.9Hz，1H)，6.1(s，1H)，7.3(d，J＝7.3Hz，2H)，7.5(s，1H)，7.5-7.6(m，2H)，7.6(d，J＝8.5Hz，2H)，8.0(d，J＝9.2Hz，1H).LC-MS，MSm/z832.2(M++H)。
制备化合物22，实施例22：
化合物22是以69％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将3′，5′-二(三氟甲基)-2-溴苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.1-1.1(m，2H)，1.2(s，9H)，1.2-1.3(m，2H)，1.4(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.9(dd，J＝ 8.2，5.5Hz，1H)，2.2(q，J＝9.2Hz，1H)，2.2-2.3(m，1H)，2.5(dd，J＝14.0，7.0Hz，1H)，3.0(ddd，J＝12.8，8.1，4.7Hz，1H)，3.9(s，3H)，4.2(dd，J＝11.6，3.4Hz，1H)，4.4(dd，J＝10.7，6.7Hz，1H)，4.9(s，1H)，5.0(d，J＝11.0Hz，1H)，5.1(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.2(dd，J＝17.1，1.5Hz，1H)，5.7(ddd，J＝17.2，10.3，8.9Hz，1H)，6.0(t，J＝3.1Hz，1H)，7.2(s，1H)，7.3(d，J＝2.1Hz，1H)，7.3(s，1H)，7.4(s，1H)，7.5(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.9(d，J＝8.9Hz，1H)，8.2(s，2H).LC-MS，MSm/z943.0(M++H)。
制备化合物23，实施例23：
实施例23流程1
步骤1。
向(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-乙烯基环丙基)-1-((S)-3，3-二甲基-2-硫脲基丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(80mg，113umol)和N，N-二异丙基乙胺(43.9mg，339umol)在DMF(1.2mL)中的溶液中加入2-溴-4’-甲基苯乙酮 (226umol)。在室温下搅拌60hr后，使反应混合物通过反相HPLC纯化使用以下溶剂系统和条件纯化：溶剂A＝5：95MeCN：H2O，溶剂B＝95：5MeCN：H2O，二者均含有10mM NH4OAc；0％B至100％B8min，维持100％B1min。使合并的HPLC级分合并，浓缩，在真空下干燥，得到化合物23。LC-MS，MSm/z820.9(M++H)。
制备化合物24，实施例24：
化合物24是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将2-溴-4’-苯基苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。LC-MS，MSm/z882.9(M++H)。
制备化合物25，实施例25：
化合物25是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将3-(2-溴乙酰基)苯甲腈用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。LC-MS，MSm/z831.8(M++H)。
制备化合物26，实施例26：
化合物27是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将2-溴-1-吡嗪-2-基-乙酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.03-1.12(m，2H)，1.16(s，9H)，1.38(t，J＝7.03Hz，1H)，1.76(d，J＝6.44Hz，1H)，2.14-2.30(m，2H)，2.43(dd，J＝13.48，6.44Hz，1H)，2.96-3.05(m，1H)，3.96(s，3H)，4.22(dd，J＝11.42，3.81Hz，1H)，4.46(dd，J＝9.96，7.03Hz，1H)，4.76(d，J＝9.37Hz，1H)，4.83(d，J＝11.72Hz，1H)，5.12(d，J＝9.96Hz，1H)，5.24(d，J＝17.58Hz，1H)，6.03(br.s.，1H)，7.53(s，1H)，7.61(dd，J＝9.08，2.05Hz，1H)，7.95(dd，J＝14.94，9.08Hz，2H)，7.99(s，1H)，8.05(br.s.，1H)，8.27(s，2H)，8.87(br.s.，1H)，8.92(s，1H)，10.43(br.s.，1H).LC-MS，MS m/z808.9(M++H)。
制备化合物27，实施例27：
化合物27是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同 的是将4-氯-3-甲基苯甲酰氯用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。 1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm0.99-1.12(m，3H)，1.17(s，9H)，1.33-1.41(m，2H)，1.75(d，J＝5.27Hz，1H)，1.92(s，3H)，2.13-2.24(m，2H)，2.34(dd，J＝13.48，6.44Hz，1H)，2.96-3.05(m，1H)，3.99(s，3H)，4.21(dd，J＝11.13，3.52Hz，1H)，4.41(dd，J＝10.55，7.03Hz，1H)，4.70(d，J＝9.37Hz，1H)，4.94(d，J＝11.72Hz，1H)，5.11(d，J＝11.13Hz，1H)，5.24(d，J＝16.41Hz，1H)，5.66(t，J＝18.16Hz，1H)，6.10(br.s.，1H)，6.76(d，J＝8.79Hz，1H)，6.90(s，1H)，7.30(s，1H)，7.43(d，J＝7.03Hz，1H)，7.54-7.63(m，2H)，7.79(d，J＝9.37Hz，1H)，7.97(d，J＝8.79Hz，2H)，8.27(s，2H)，8.88(s，1H)，10.39(s，1H).LC-MS，MSm/z882.9(M++H)。
制备化合物28，实施例28：
化合物28是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将2-溴-2’，4’-二甲氧基苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.09(d，J＝3.52Hz，3H)，1.15(s，8H)，1.38(t，J＝4.69Hz，1H)，1.76(dd，J＝7.62，5.27Hz，1H)，2.21(ddd，J＝17.87，9.37，9.08Hz，2H)，2.34-2.42(m，1H)，2.61(t，J＝5.57Hz，1H)，2.98(dd，J＝8.50，3.81Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.98(s，3H)，4.02(d，J＝4.10Hz，1H)，4.21(dd，J＝11.72，4.10Hz，1H)，4.48(dd，J＝9.96，7.03Hz，1H)，4.62(d，J＝9.37Hz，1H)，4.75(d，J＝11.72Hz，1H)，5.12(d，J＝11.13Hz，1H)，5.25(d，J＝16.41Hz，1H)，5.62-5.72(m，1H)，5.95(d，J＝7.62Hz，1H)，6.04(br.s.，1H)， 6.27(s，1H)，6.80(s，1H)，7.52-7.58(m，2H)，7.67(d，J＝8.79Hz，1H)，7.86(d，J＝8.79Hz，1H)，7.99(s，2H)，8.27(s，2H)，8.92(s，1H)，10.44(s，1H).LC-MS，MSm/z866.9(M++H)。
制备化合物29，实施例29：
化合物29是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将3，4-二氯苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.04-1.12(m，3H)，1.17(s，9H)，1.33-1.45(m，2H)，1.75(dd，J＝7.62，5.27Hz，1H)，2.15-2.25(m，2H)，2.36(dd，J＝13.18，6.74Hz，1H)，2.98(dd，J＝8.50，3.81Hz，1H)，3.98(s，3H)，4.20(dd，J＝11.72，3.52Hz，1H)，4.42(dd，J＝10.55，6.44Hz，1H)，4.71(d，J＝9.37Hz，1H)，4.89(d，J＝11.13Hz，1H)，5.11(d，J＝11.13Hz，1H)，5.24(d，J＝16.99Hz，1H)，5.65(dd，J＝17.28，9.67Hz，1H)，6.10(br.s.，1H)，6.96(d，J＝8.20Hz，1H)，7.08(s，1H)，7.30(s，1H)，7.55(d，J＝1.76Hz，2H)，7.61(dd，J＝8.79，1.76Hz，1H)，7.82(s，1H)，7.89(d，J＝9.37Hz，1H)，7.96(d，J＝8.79Hz，1H)，7.99(s，1H)，8.27(s，2H)，8.87(s，1H)，10.40(s，1H).LC-MS，MSm/z876.8(M++H)。
制备化合物30，实施例30：
化合物30是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将2-溴-1-(2，5-二甲氧基苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.09(dd，J＝6.15，2.64Hz，3H)，1.16(s，9H)，1.35-1.41(m，1H)，1.75(dd，J＝7.91，5.57Hz，1H)，2.15-2.26(m，2H)，2.42(dd，J＝13.77，6.74Hz，1H)，2.61(t，J＝5.57Hz，1H)，2.98(dd，J＝8.20，3.52Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.95(s，3H)，4.20(dd，J＝11.42，3.81Hz，1H)，4.45(dd，J＝9.96，7.03Hz，1H)，4.66(d，J＝8.79Hz，1H)，4.79(d，J＝11.13Hz，1H)，5.12(d，J＝11.72Hz，1H)，5.25(d，J＝17.58Hz，1H)，5.62-5.71(m，1H)，5.99(br.s.，1H)，6.37(dd，J＝8.50，2.64Hz，1H)，6.68(d，J＝8.79Hz，1H)，7.02(s，0H)，7.44-7.52(m，2H)，8.27(s，2H)，8.90(s，1H)，10.41(s，1H).LC-MS，MSm/z866.8(M++H)。
制备化合物31，实施例31：
化合物31是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同 的是将4-溴-苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.03-1.12(m，2H)，1.15(s，9H)，1.38(dd，J＝9.08，4.98Hz，1H)，1.75(br.s.，1H)，2.11-2.29(m，1H)，2.33-2.42(m，1H)，2.92-3.02(m，1H)，3.99(s，3H)，4.06(q，J＝5.27Hz，2H)，4.22(dd，J＝10.55，2.93Hz，1H)，4.47(d，J＝16.41Hz，1H)，4.69(d，J＝9.37Hz，1H)，4.78(d，J＝11.13Hz，1H)，5.04-5.16(m，1H)，5.24(d，J＝16.40Hz，1H)，5.67(dd，J＝19.63，9.08Hz，1H)，6.05(br.s.，1H)，6.89(s，1H)，6.96(d，J＝8.20Hz，1H)，7.46(br.s.，1H)，7.53(d，J＝8.79Hz，2H)，7.58(s，1H)，7.65(dd，J＝9.08，2.05Hz，1H)，7.80(d，J＝9.37Hz，1H)，8.00(d，J＝9.37Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.89(br.s.，1H)，10.44(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z884.8(M++H)。
制备化合物32，实施例32：
化合物32是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将2-氯-4’-氟苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1HNMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.04-1.12(m，2H)，1.15(s，9H)，1.38(dd，J＝8.79，5.27Hz，1H)，1.72-1.79(m，1H)，2.14-2.31(m，2H)，2.40(dd，J＝13.48，6.44Hz，1H)，3.97(s，3H)，4.06(q，J＝5.27Hz，1H)，4.22(dd，J＝11.13，2.93Hz，1H)，4.47(d，J＝4.46Hz，1H)，4.70(d，J＝9.37Hz，1H)，4.73-4.80(m，1H)，5.12(d，J＝8.79Hz，1H)，5.25(d，J＝15.82Hz，1H)，5.62-5.74(m，1H)，6.02(br.s.，1H)，6.65(t，J＝8.50Hz，1H)，7.57(s，1H)，7.63(dd，J＝8.50，5.57Hz，2H)， 7.75(d，J＝9.37Hz，1H)，7.99(d，J＝9.37Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.89(br.s.，1H)，10.44(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z824.9(M++H)。
制备化合物33，实施例33：
化合物33是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将2-溴-2’-甲氧基苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.06-1.13(m，3H)，1.15(s，9H)，1.39(dd，J＝8.50，4.98Hz，1H)，1.76(d，J＝1.76Hz，1H)，2.24(d，J＝15.82Hz，1H)，2.41(dd，J＝13.48，7.03Hz，1H)，3.24(d，J＝4.69Hz，2H)，3.84(s，3H)，3.96(s，3H)，4.06(q，J＝5.27Hz，1H)，4.23(d，J＝7.62Hz，1H)，4.48(d，J＝16.41Hz，01H)，4.64(d，J＝9.37Hz，1H)，4.71(d，J＝6.44Hz，1H)，5.12(d，J＝9.96Hz，1H)，5.25(d，J＝17.58Hz，1H)，5.67(t，J＝14.35Hz，1H)，5.97(br.s.，1H)，6.47(t，J＝7.32Hz，1H)，6.79(d，J＝7.62Hz，1H)，6.86(br.s.，1H)，6.95(s，1H)，7.56(d，J＝9.37Hz，1H)，7.68(d，J＝9.37Hz，1H)，7.99(t，J＝8.79Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.90(br.s.，1H)，10.44(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z836.9(M++H)。
制备化合物34，实施例34：
化合物34是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将2-溴-1-(2，4-二甲基苯基)乙烷-1-酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。LC-MS，MSm/z834.9(M++H)。
制备化合物35，实施例35：
化合物35是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将2-溴-3’-甲氧基苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.06-1.13(m，2H)，1.15(s，9H)，1.39(dd，J＝8.50，4.98Hz，1H)，1.76(d，J＝1.76Hz，1H)，2.24(d，J＝15.82Hz，1H)，2.41(dd，J＝13.48，7.03Hz，1H)，3.24(d，J＝4.69Hz，3H)，3.84(s，3H)，3.96(s，3H)，4.06(q，J＝5.27Hz，1H)，4.23(d，J＝7.62Hz，1H)，4.48(d，J＝16.41Hz，1H)，4.64(d，J＝9.37Hz，1H)，4.71(d，J＝6.44Hz，1H)，5.12(d，J＝9.96Hz，1H)，5.25(d，J＝17.58Hz，1H)，5.67(t，J＝14.35Hz，1H)，5.97(br.s.，1H)，6.47(t，J＝7.32Hz，1H)，6.79(d，J＝7.62Hz，1H)，6.86(br.s.，1H)，6.95(s，1 H)，7.56(d，J＝9.37Hz，1H)，7.68(d，J＝9.37Hz，1H)，7.99(t，J＝8.79Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.90(br.s.，1H)，10.44(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z837.4(M++H)。
制备化合物36，实施例36：
化合物36是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将2-溴-1-(2，3-二氢-1，4-苯并二氧杂环己烯-6-基)乙烷-1-酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.03-1.12(m，3H)，1.16(s，9H)，1.38(dd，J＝8.79，5.27Hz，1H)，1.74(br.s.，1H)，2.14-2.27(m，2H)，2.38(dd，J＝12.89，6.44Hz，1H)，3.24(d，J＝5.27Hz，3H)，3.72(br.s.，1H)，3.86(d，J＝6.44Hz，1H)，3.98(s，3H)，4.06(q，J＝5.08Hz，2H)，4.22(dd，J＝11.43，3.81Hz，1H)，4.42(t，J＝8.20Hz，1H)，4.66(d，J＝8.79Hz，1H)，4.86(d，J＝9.96Hz，1H)，5.11(d，J＝10.55Hz，1H)，5.24(d，J＝17.58Hz，1H)，6.03(br.s.，1H)，6.34(d，J＝8.20Hz，1H)，6.67(s，1H)，7.12(d，J＝8.20Hz，1H)，7.20(s，1H)，7.48(br.s.，1H)，7.59(s，1H)，7.62-7.70(m，2H)，8.00(d，J＝8.79Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.88(br.s.，1H)，10.42(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z864.9(M++H)。
制备化合物37，实施例37：
化合物37是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将2，2’，4’-三氯苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。 1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.02-1.12(m，3H)，1.15(s，9H)，1.39(dd，J＝9.37，5.27Hz，1H)，1.65-1.81(m，1H)，2.22(t，J＝16.11Hz，2H)，2.36(dd，J＝13.77，6.74Hz，1H)，2.92-3.02(m，1H)，3.99(s，3H)，4.06(q，J＝5.27Hz，2H)，4.19(d，J＝8.20Hz，1H)，4.50(t，J＝7.91Hz，1H)，4.61(d，J＝9.37Hz，2H)，5.12(d，J＝9.37Hz，1H)，5.26(d，J＝16.40Hz，1H)，5.60-5.72(m，1H)，6.03(br.s.，1H)，6.78(d，J＝8.20Hz，1H)，7.04(s，1H)，7.13(br.s.，1H)，7.53(br.s.，1H)，7.57(s，1H)，7.71(d，J＝2.34Hz，1H)，7.82(t，J＝8.50Hz，2H)，8.03(d，J＝8.79Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.93(br.s.，1H)，10.45(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z874.8(M++H)。
制备化合物38，实施例38：
化合物38是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同 的是将2-溴-4’-氯苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1HNMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.04-1.12(m，3H)，1.15(s，9H)，1.38(dd，J＝9.08，4.98Hz，1H)，1.75(br.s.，1H)，2.13-2.29(m，2H)，2.38(dd，J＝12.89，6.44Hz，2H)，3.98(s，3H)，4.07(q，J＝5.27Hz，2H)，4.22(d，J＝8.79Hz，1H)，4.48(d，J＝5.86Hz，1H)，4.69(d，J＝8.79Hz，1H)，4.73-4.81(m，1H)，5.12(br.s.，1H)，5.24(d，J＝16.99Hz，1H)，5.68(br.s.，1H)，6.05(br.s.，1H)，6.84(d，J＝8.20Hz，1H)，6.87(br.s.，1H)，7.54-7.60(m，3H)，7.65(d，J＝8.79Hz，l H)，7.79(d，J＝9.37Hz，1H)，7.99(d，J＝8.79Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.89(br.s.，1H)，10.44(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z840.9(M++H)。
制备化合物39，实施例39：
化合物39是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将2-氟苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.08(d，J＝7.03Hz，3H)，1.15(s，9H)，1.38(dd，J＝8.79，4.69Hz，1H)，1.75(br.s.，1H)，2.18-2.29(m，1H)，2.38-2.44(m，1H)，2.98(br.s.，1H)，3.96(s，3H)，4.07(q，J＝4.88Hz，2H)，4.22(dd，J＝11.43，3.22Hz，1H)，4.47(t，J＝8.50Hz，1H)，4.70(d，J＝9.37Hz，1H)，4.74(d，J＝9.96Hz，1H)，5.12(d，J＝9.96Hz，1H)，5.25(d，J＝17.58Hz，1H)，6.00(br.s.，1H)，6.65(t，J＝7.03Hz，1H)，6.80(s，1H)，6.84-6.94(m，2H)，7.51(br.s.，1H)，7.54(s，1H)，7.65(dd，J＝8.79，1.76Hz，1H)，7.79(d，J＝9.37Hz，1H)，7.92(t，J＝7.91Hz，1H)，7.97(d，J＝8.79Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.89 (br.s.，1H)，10.44(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z824.9(M++H)。
制备化合物40，实施例40：
化合物40是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将1-(1，3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-溴乙烷-1-酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.06(t，3H)，1.15(s，9H)，1.38(dd，J＝9.08，4.98Hz，1H)，1.75(br.s.，1H)，2.22(d，J＝15.23Hz，2H)，2.32-2.41(m，1H)，2.98(br.s.，1H)，3.98(s，3H)，4.06(q，J＝5.27Hz，2H)，4.22(d，J＝7.62Hz，1H)，4.45(d，J＝16.99Hz，1H)，4.67(d，J＝8.79Hz，1H)，4.79(d，J＝11.13Hz，1H)，5.11(d，J＝9.37Hz，1H)，5.24(d，J＝14.65Hz，1H)，5.56(br.s.，1H)，5.74(s，1H)，6.06(br.s.，1H)，6.33(d，J＝7.62Hz，1H)，6.68(s，1H)，7.09-7.21(m，1H)，7.50(br.s.，1H)，7.58(s，1H)，7.64-7.71(m，2H)，8.00(d，J＝8.79Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.89(br.s.，1H)，10.43(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z850.9(M++H)。
制备化合物41，实施例41：
化合物41是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将2-溴-1-(4-吗啉代苯基)-1-乙酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.04-1.11(m，4H)，1.16(s，9H)，1.38(dd，J＝9.37，5.27Hz，1H)，1.74(br.s.，1H)，2.15-2.29(m，2H)，2.35(d，J＝6.44Hz，2H)，2.65-2.70(m，2H)，2.71-2.78(m，2H)，2.98(br.s.，2H)，3.60-3.69(m，4H)，3.79(br.s.，H)，3.99(s，3H)，4.02(d，J＝5.86Hz，1H)，4.07(d，J＝4.69Hz，4H)，4.27(dd，J＝11.13，4.10Hz，1H)，4.45(d，J＝8.79Hz，1H)，4.65(d，J＝8.79Hz，1H)，4.87(d，J＝11.72Hz，1H)，5.11(d，J＝11.13Hz，1H)，5.24(d，J＝16.99Hz，1H)，5.68(qt，1H)，6.03(br.s.，1H)，6.34(d，J＝8.20Hz，2H)，6.62(s，1H)，7.53(d，J＝8.20Hz，2H)，7.59-7.68(m，2H)，8.00(d，J＝8.79Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.90(br.s.，1H)，10.45(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z891.9(M++H)。
制备化合物42，实施例42：
化合物42是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同 的是将2-溴-1-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1-乙酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.09(br.s.，2H)，1.13(s，9H)，1.16-1.21(m，2H)，1.42(dd，J＝8.79，5.27Hz，1H)，1.79(d，J＝1.17Hz，1H)，2.18-2.33(m，2H)，2.50(dd，J＝13.48，7.03Hz，1H)，3.00(br.s.，1H)，3.72(s，3H)，3.96(s，3H)，4.06(q，J＝4.88Hz，2H)，4.20(dd，J＝11.13，2.93Hz，1H)，4.43(d，J＝11.13Hz，1H)，4.59(t，J＝8.50Hz，1H)，4.74(d，J＝9.37Hz，1H)，5.15(d，J＝9.96Hz，1H)，5.29(d，J＝16.99Hz，1H)，5.70(br.s.，1H)，5.86(br.s.，1H)，7.08(s，1H)，7.14-7.21(m，2H)，7.25(d，J＝6.44Hz，1H)，7.33(s，1H)，7.51(d，J＝6.44Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.79，2.34Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.89(d，J＝8.79Hz，1H)，8.00(d，J＝9.37Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.97(br.s.，1H)，10.46(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z860.9(M++H)。
制备化合物43，实施例43：
化合物43是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将3-氟苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm0.99-1.13(m，2H)，1.16(s，9H)，1.38(dd，J＝9.37，5.27Hz，1H)，1.75(br.s.，1H)，2.09-2.28(m，1H)，2.35-2.47(m，1H)，3.96(s，3H)，4.06(d，J＝5.27Hz，2H)，4.23(dd，J＝11.13，3.52Hz，1H)，4.44(t，J＝7.91Hz，1H)，4.71(d，J＝9.37Hz，1H)，4.80(d，J＝12.30Hz，1H)，5.12(d，J＝9.37Hz，1H)，5.24(d，J＝16.40Hz，1H)，6.02(br.s.，1H)，6.93(d，J＝7.03Hz，2H)， 7.43(d，J＝10.55Hz，1H)，7.48(d，J＝7.03Hz，1H)，7.55(s，1H)，7.64(d，J＝8.79Hz，1H)，7.81(d，J＝9.37Hz，1H)，7.97(d，J＝9.37Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.88(br.s.，1H)，10.42(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z824.9(M++H)。
制备化合物44，实施例44：
化合物44是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将α-溴-4-(二乙基氨基)苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm0.86(t，J＝6.74Hz，6H)，1.05-1.11(m，4H)，1.16(s，9H)，1.37(dd，J＝9.08，4.98Hz，1H)，1.74(d，J＝6.44Hz，1H)，2.21(dd，J＝17.58，9.37Hz，2H)，2.35(dd，J＝13.18，6.74Hz，1H)，2.93-3.10(m，6H)，3.96(s，3H)，4.07(d，J＝5.27Hz，3H)，4.24(d，J＝11.72Hz，1H)，4.42(dd，J＝9.37，7.03Hz，1H)，4.64(d，J＝9.37Hz，1H)，4.92(d，J＝11.13Hz，1H)，5.11(d，J＝10.55Hz，1H)，5.24(d，J＝17.58Hz，1H)，5.63-5.72(m，1H)，6.02(br.s.，1H)，6.14(d，J＝8.79Hz，2H)，6.47(s，1H)，7.50(d，J＝8.20Hz，2H)，7.57(d，J＝9.37Hz，2H)，7.59(s，1H)，7.64(dd，J＝9.08，2.05Hz，1H)，7.97(d，J＝8.79Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.88(br.s.，1H)，10.43(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z877.9(M++H)。
制备化合物45，实施例45：
化合物45是根据如制备化合物23所述相同操作法制备的，不同的是将2-溴-2-苯基苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴-4’-甲基苯乙酮。 1H NMR(600MHz，DMSO_CDCl3)δppm1.04-1.13(m，3H)，1.16(s，9H)，1.18(br.s.，2H)，1.39(dd，J＝9.08，4.98Hz，1H)，1.76(t，J＝5.86Hz，1H)，2.24(dd，J＝16.40，9.37Hz，2H)，2.40(dd，J＝12.60，7.32Hz，1H)，2.99(br.s.，1H)，3.98(s，3H)，4.06(q，J＝4.88Hz，2H)，4.24(dd，J＝11.13，4.10Hz，1H)，4.50(d，J＝15.82Hz，1H)，4.70(d，J＝9.37Hz，2H)，5.13(d，J＝10.55Hz，1H)，5.26(d，J＝16.99Hz，1H)，5.62-5.72(m，1H)，5.95(br.s.，1H)，6.71-6.86(m，3H)，7.15(d，J＝7.03Hz，1H)，7.27(d，J＝7.03Hz，5H)，7.62(s，1H)，7.69(d，J＝8.79Hz，1H)，7.72(s，1H)，7.87(d，J＝9.37Hz，1H)，8.03(d，J＝8.79Hz，1H)，8.28(s，2H)，8.90(br.s.，1H)，10.45(br.s.，1H).LC-MS，MSm/z882.9(M++H)。
制备化合物46，实施例46：
化合物46是根据如制备化合物9所述相同操作法制备的，不同的是将4-(2-溴乙酰基)苯甲酸用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1HNMR(500MHz，MeOD)δppm1.06-1.11(m，2H)，1.12-1.19(m，9H)，1.22-1.29(m，3H)，1.41(dd，J＝9.3，5.3Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.19-2.28(m，2H)，2.39-2.46(m，1H)，2.83-2.87(m，1H)，2.95(tt，J＝8.7，4.5Hz，1H)，3.90(s，3H)，4.15(dd，J＝11.4，3.5Hz，1H)，4.57(dd，J＝10.5，6.9Hz，1H)，5.11(dd，J＝10.5，1.4Hz，1H)，5.28(d，J＝17.4Hz，1H)，5.68-5.77(m，1H)，6.06-6.11(m，1H)，7.38(s，1H)，7.51(ddd，J＝8.5，5.8，2.4Hz，4H)，7.55-7.61(m，2H)，7.89(d，J＝8.9Hz，1H).LC-MS，MSm/z851.2(M++H)。
制备化合物47，实施例47：
化合物47是以41％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2，3，4，5，6-五氟苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.04-1.10(m，2H)，1.15(s，9H)，1.21-1.28(m，2H)，1.40(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.87(dd， J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.17-2.26(m，2H)，2.35-2.43(m，1H)，2.95(td，J＝8.4，4.0Hz，1H)，3.98(s，3H)，4.10(dd，J＝11.4，3.8Hz，1H)，4.56(dd，J＝10.4，6.7Hz，1H)，4.64(s，1H)，4.72(d，J＝11.6Hz，1H)，5.11(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.27(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.72(ddd，J＝17.1，10.2，9.0Hz，1H)，6.04(s，1H)，6.85(s，1H)，7.49(s，1H)，7.59-7.65(m，2H)，8.00(d，J＝8.9Hz，1H).13C NMR(126MHz，MeOD.)δppm5.6，5.8，22.5，26.2，31.2，34.9，35.5，35.7，41.7，42.8，54.9，55.8，60.2，63.7，74.4，117.6，118.5，120.6，122.3，123.3，129.3，130.9，133.3，133.5，146.9，152.2，168.7，169.6，172.3，174.2.LC-MS，MSm/z897.2(M++H)。
制备化合物48，实施例48：
化合物48是以31.5％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将3-氯苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.06-1.11(m，2H)，1.16(s，9H)，1.24-1.27(m，2H)，1.41(dd，J＝9.5，5.2Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.20-2.30(m，2H)，2.51(dd，J＝13.7，6.7Hz，1H)，2.96(ddd，J＝12.7，8.0，4.9Hz，1H)，3.93(s，3H)，4.15(dd，J＝11.6，3.7Hz，1H)，4.56(dd，J＝10.4，7.0Hz，1H)，4.68-4.72(m，2H)，5.11(dd，J＝10.2，1.7Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.2，10.2，9.2Hz，1H)，6.00(t，J＝3.2Hz，1H)，7.01-7.04(m，1H)，7.08(t，J＝7.8Hz，1H)，7.43(d，J＝7.9Hz，2H)，7.53-7.57(m，2H)，7.62(d，J＝1.8Hz，1H)，7.96(d，J＝8.9Hz，1H).13C NMR(126MHz，MeOD)δppm5.6，5.8，22.5，26.1，31.2，34.9，35.3，3δ.1，41.7，55.1，55.7，δ0.2， δ4.1，74.5，117.6，118.4，120.8，122.6，123.3，124.1，125.9，127.8，129.5，129.8，130.9，133.2，134.4，147.0，148.8，152.2，163.2，169.6，169.7，171.6，174.1，178.4.LC-MS，MS m/z841.2(M++H)。
制备化合物49，实施例49：
化合物49是以28.9％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-氯苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δ.ppm1.06-1.12(m，3H)，1.14(s，9H)，1.25(dd，J＝4.9，2.7Hz，2H)，1.42(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.22-2.32(m，2H)，2.56(dd，J＝13.6，7.2Hz，1H)，2.96(ddd，J＝12.8，8.1，4.7Hz，1H)，3.95(s，3H)，4.13(dd，J＝11.7，3.8Hz，1H)，4.38(d，J＝11.9Hz，1H)，4.58(s，1H)，4.63(dd，J＝10.1，7.3Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.2，10.3，8.9Hz，1H)，5.90(s，1H)，6.77(s，1H)，7.21(t，J＝7.5Hz，1H)，7.26-7.31(m，1H)，7.36(d，J＝7.3Hz，1H)，7.48(s，1H)，7.50(dd，J＝7.6，1.5Hz，1H)，7.66(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.89(d，J＝2.1Hz，1H)，8.06(d，J＝8.9Hz，1H).13C NMR(126MHz，MeOD)δppm5.6，5.8，22.5，26.1，31.2，34.8，35.1，37.0，41.7，55.1，55.8，60.4，64.6，74.7，117.6，118.7，120.8，122.6，123.6，127.2，129.6，130.0，130.3，130.6，131.1，131.5，132.7，133.2，133.5，147.1，152.4，168.8，169.5，170.1，174.0，181.3.LC-MS，MSm/z841.2(M++H)。
制备化合物50，实施例50：
化合物50是以41.6％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-2′-羟基苯乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD).1.06-1.11(m，2H)，1.15(s，9H)，1.24(dd，J＝4.9，2.7Hz，2H)，1.42(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.90(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.22-2.28(m，1H)，2.28-2.33(m，1H)，2.63(dd，J＝13.7，7.3Hz，1H)，2.92-2.98(m，J＝8.2，8.2，4.9，4.7Hz，1H)，3.98(s，3H)，4.07(dd，J＝12.2，3.1Hz，1H)，4.24(s，1H)，4.35(d，J＝11.9Hz，1H)，4.69(dd，J＝10.1，7.3Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.1，10.4，8.9Hz，1H)，5.90(s，1H)，6.90(t，J＝7.8Hz，2H)，7.23-7.27(m，1H)，7.43(d，J＝7.9Hz，1H)，7.56(s，1H)，7.59(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.91(d，J＝2.1Hz，1H)，8.04(d，J＝8.9Hz，1H).13C NMR(126MHz，MeOD)δppm5.6，5.8，22.4，25.9，31.2，34.8，34.9，36.8，41.7，55.2，55.9，60.4，66.2，74.9，116.7，117.7，118.9，120.4，120.8，122.3，123.8，127.6，129.6，131.0，131.4，133.2，133.6，147.2，152.2，154.6，159.0，169.4，169.5，169.7，172.4，173.9.LC-MS，MSm/z823.2(M++H)。
制备化合物51，实施例51：
化合物51是以36.2％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-氟-4-甲氧基苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.04-1.11(m，3H)，1.15(s，9H)，1.21-1.26(m，2H)，1.41(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.1，5.6Hz，1H)，2.21-2.30(m，2H)，2.54(dd，J＝13.7，6.7Hz，1H)，2.96(ddd，J＝12.7，8.1，4.9Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.96(s，3H)，4.12(dd，J＝11.7，3.5Hz，1H)，4.52(d，J＝11.6Hz，1H)，4.56(s，1H)，4.62(dd，J＝10.4，7.0Hz，1H)，5.12(d，J＝10.4Hz，1H)，5.29(d，J＝17.4Hz，1H)，5.73(dt，J＝17.2，9.6Hz，1H)，5.98(s，1H)，6.53-6.63(m，2H)，7.46-7.52(m，2H)，7.60(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.76(s，1H)，8.01(d，J＝8.9Hz，1H).13C N MR(126MHz，MeOD)δppm5.6，5.8，22.5，26.0，31.2，34.8，35.2，36.6，41.7，42.8，55.2，55.3，55.8，60.4，64.8，74.6，101.8，102.0，110.5，117.6，118.6，120.8，122.5，123.5，129.5，129.9，129.9，131.0，133.2，133.4，147.1，152.3，161.8，169.2，169.5，170.5，174.0LC-MS，MSm/z855.2(M++H)。
制备化合物52，实施例52：
化合物52是以21.2％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(3-氯-4-氟苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.04-1.11(m，3H)，1.15(s，9H)，1.22-1.29(m，2H)，1.41(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.18-2.26(m，2H)，2.42-2.50(m，1H)，2.91-2.98(m，1H)，3.94(s，3H)，4.14(dd，J＝11.7，3.5Hz，1H)，4.55(dd，J＝10.7，7.0Hz，1H)，4.70-4.76(m，2H)，5.11(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.27(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.1，10.4，8.9Hz，1H)，6.06(d，J＝2.7Hz，1H)，6.86(t，J＝8.9Hz，1H)，7.38-7.45(m，2H)，7.51-7.57(m，2H)，7.60(dd，J＝7.2，2.3Hz，1H)，7.95(d，J＝9.5Hz，1H).13C NMR(126MHz，MeOD)δppm5.6，5.8，22.5，26.2，31.2，34.9，35.4，35.8，41.7，55.2，55.7，60.2，63.8，74.3，116.2，116.4，117.6，118.3，120.5，120.6，120.7，122.5，123.3，123.6，125.9，125.9，128.0，128.5，129.4，130.8，133.2，133.2，147.0，152.1，169.6，169.6，172.0，174.2.LC-MS，MSm/z859.2(M++H)。
制备化合物53，实施例53：
化合物53是以15.3％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(3，5-二氯-2-氟苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.07-1.11(m，2H)，1.14(s，9H)，1.23-1.27(m，2H)，1.42(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.23-2.33(m，2H)，2.57(dd，J＝13.7，7.3Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.98(s，4H)，4.16(dd，J＝11.7，4.1Hz，1H)，4.27(d，J＝11.9Hz，1H)，4.56(s，1H)，4.63(dd，J＝9.9，7.2Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.1，1.5Hz，1H)，5.27-5.34(m，1H)，5.74(ddd，J＝17.1，10.4，8.9Hz，1H)，5.83(s，1H)，6.67(s，1H)，7.27-7.35(m，2H)，7.50(s，1H)，7.70(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.98(d，J＝2.1Hz，1H)，8.11(d，J＝8.9Hz，1H).13C NMR(126MHz，MeOD)δppm5.6，5.8，15.1，22.5，26.1，31.2，34.8，35.1，37.1，41.7，55.0，55.8，60.4，64.3，74.8，105.9，108.7，117.6，117.8，118.7，120.8，122.6，123.7，129.1，129.2，131.1，133.2，133.5，147.2，148.1，148.4，148.4，152.5，165.7，169.5，170.2，173.9，178.4.LC-MS，MSm/z895.1(M++H)。
制备化合物54，实施例54：
化合物54是以40.2％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(2-甲氧基-5-甲基-苯基)-乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD).δppm1.06-1.11(m，2H)，1.16(s，9H)，1.24(dd，J＝4.6，2.4Hz，2H)，1.42(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.90(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，2.24(s，3H)，2.30(ddd，J＝13.9，10.1，4.1Hz，2H)，2.61(dd，J＝13.7，7.3Hz，1H)，2.96(ddd，J＝12.7，8.0，4.9Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.99(s，3H)，4.09(dd，J＝12.1，3.2Hz，1H)，4.35(s，1H)，4.44(d，J＝12.2Hz，1H)，4.66(dd，J＝10.2，7.2Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.2，1.7Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.2，10.3，8.9Hz，1H)，5.92(s，1H)，6.96(d，J＝8.5Hz，1H)，7.16(d，J＝7.9Hz，1H)，7.36(d，J＝0.9Hz，1H)，7.56(s，1H)，7.58(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.85(d，J＝1.5Hz，1H)，8.03(d，J＝8.9Hz，1H).13CNMR(126MHz，MeOD)δppm5.6，5.8，19.4，22.5，25.9，31.1，34.8，35.0，36.9，41.6，55.1，55.3，55.8，60.3，65.7，74.8，111.8，117.7，118.7，120.7，122.4，123.7，129.2，129.5，130.7，131.0，133.2，133.4，147.1，150.7，152.2，154.6，160.2，169.5，173.9，176.8，179.5，185.7，191.1.LC-MS，MSm/z851.2(M++H)。
制备化合物55，实施例55：
化合物55是以37.9％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(3，5-二氯-2-甲氧基苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.06-1.11(m，2H)，1.16(s，9H)，1.23-1.27(m，2H)，1.42(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.89(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，2.20-2.26(m，1H)，2.26-2.32(m，1H)，2.55(dd，J＝13.6，6.9Hz，1H)，2.96(ddd，J＝12.8，8.1，4.7Hz，1H)，3.61(s，3H)，3.96(s，3H)，4.17(dd，J＝11.9，3.7Hz，1H)，4.55(d，J＝11.6Hz，1H)，4.60(dd，J＝10.4，7.0Hz，1H)，4.68(s，1H)，5.12(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.1，1.2Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.2，10.2，9.2Hz，1H)，5.97(s，1H)，7.24(d，J＝2.4Hz，1H)，7.48(s，1H)，7.58(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.62(d，J＝2.4Hz，1H)，7.72(d，J＝2.1Hz，1H)，7.99(d，J＝9.2Hz，1H).13C NMR(126MHz，MeOD)δppm5.6，5.8，22.6，26.1，31.2，34.9，35.2，36.5，41.6，55.1，55.7，59.9，60.3，64.1，74.6，117.6，118.5，120.7，122.5，123.4，128.3，129.4，129.5，129.7，130.9，133.2，147.0，152.1，152.3，152.5，168.6，169.6，171.0，174.0，175.5，181.0.LC-MS，MSm/z07.1(M++H).LC-MS，MSm/z905.2(M+-H)。
制备化合物56，实施例56：
化合物56是以40.9％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(5-氟-2-甲氧基苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.06-1.11(m，2H)，1.16(s，9H)，1.22-1.26(m，2H)，1.42(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.90(dd，J＝8.1，5.3Hz，1H)，2.23-2.31(m，2H)，2.59(dd，J＝13.9，6.9Hz，1H)，2.95(td，J＝8.3，4.1Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.97(s，3H)，4.10(dd，J＝11.9，3.4Hz，1H)，4.40-4.48(m，2H)，4.65(dd，J＝10.1，7.3Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.29(d，J＝17.1Hz，1H)，5.68-5.77(m，1H)，5.94(s，1H)，7.03(d，J＝4.6Hz，2H)，7.35(dd，J＝9.5，2.1Hz，1H)，7.52(s，1H)，7.58(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.81(s，1H)，8.01(d，J＝8.9Hz，1H).13C NMR(126MHz，MPOD)δppm5.6，5.8，22.5，25.9，31.2，34.8，35.0，36.8，41.6，55.1，55.7，60.3，65.4，74.7，113.0，113.1，115.2，115.4，116.9，117.7，118.6，120.7，122.4，123.6，129.5，130.9，133.2，133.4，147.1，148.6，152.2，153.1，154.6，156.2，158.1，168.9，169.5，169.9，172.8，173.9.LC-MS，MSm/z855.1(M++H).LC-MS，MSm/z853.2(M+-H)。
制备化合物57，实施例57：
化合物57是以8.9％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(2，6-二氯苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.06-1.11(m，3H)，1.12-1.16(m，9H)，1.25(dd，J＝4.6，2.7Hz，2H)，1.42(dd，J＝9.6，5.3Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.25-2.33(m，2H)，2.56(dd，J＝13.6，7.2Hz，1H)，2.96(ddd，J＝12.8，8.1，4.7Hz，1H)，3.98(s，3H)，4.15(dd，J＝11.7，4.1Hz，1H)，4.23-4.29(m，1H)，4.57(s，1H)，4.62(dd，J＝9.8，7.0Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.74(ddd，J＝17.1，10.2，9.0Hz，1H)，5.83(s，1H)，6.59(s，1H)，7.28(dd，J＝15.6，8.5Hz，1H)，7.33(s，3H)，7.49(s，1H)，7.70(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.99(d，J＝1.8Hz，1H)，8.11(d，J＝9.2Hz，1H).LC-MS，MSm/z877.2(M++H).LC-MS，MSm/z875.1(M+-H)。
制备化合物58，实施例58：
化合物58是以50.5％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同 操作法，不同的是将2-溴-1-(2，6-二甲氧基苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)1.06-1.13(m，3H)，1.16(s，9H)，1.23(d，J＝4.6Hz，2H)，1.43(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.91(dd，J＝8.2，5.5Hz，1H)，2.25-2.34(m，2H)，2.65(dd，J＝13.6，7.2Hz，1H)，2.95(tt，J＝8.1，4.7Hz，1H)，3.85(s，6H)，4.00(s，3H)，4.08(dd，J＝12.2，3.4Hz，1H)，4.27-4.35(m，2H)，4.70(dd，J＝10.2，7.2Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.4，1.5Hz，1H)，5.31(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.2，10.2，9.2Hz，1H)，5.87(s，1H)，6.65(s，1H)，6.79(d，J＝8.5Hz，2H)，7.42(t，J＝8.4Hz，1H)，7.58(s，1H)，7.64(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.99(d，J＝1.8Hz，1H)，8.07(d，J＝8.9Hz，1H).13C NMR(126MHz，MeOD)δppm5.6，5.8，22.5，25.9，31.2，34.8，34.9，37.3，41.7，55.0，55.7，55.8，60.5，65.9，75.0，104.6，105.7，117.7，118.9，120.8，122.4，123.8，129.6，131.1，132.3，133.2，133.5，147.2，152.3，158.6，168.3，168.8，169.4，173.9，182.6.LC-MS，MSm/z867.2(M++H)..LC-MS，MSm/z865.2(M+-H)。
制备化合物59，实施例59：
化合物59是以45.8％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.06-1.11(m，2H)，1.16(s，9H)，1.24(dd，J＝4.0，3.1Hz，2H)，1.41(dd，J＝9.5，5.5Hz，1H)，1.89(dd，J＝7.9，5.5Hz，1H)，2.21(none，1H)，2.25(s，3H)，2.27-2.32(m，1H)，2.56(dd，J＝13.4，7.0Hz，1H)，2.96(tt，J＝8.0， 4.8Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.98(s，3H)，4.11(dd，J＝12.1，3.2Hz，1H)，4.46(s，1H)，4.53(d，J＝11.9Hz，1H)，4.62(dd，J＝10.2，7.2Hz，1H)，5.12(d，J＝10.4Hz，1H)，5.29(d，J＝16.8Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.2，10.3，8.9Hz，1H)，5.97(s，1H)，6.90(s，1H)，7.52(s，1H)，7.55-7.59(m，2H)，7.74(s，1H)，8.00(d，J＝8.9Hz，1H).13C NMR(126MHz，MeOD)δppm5.6，5.8，19.2，22.5，26.0，31.2，34.8，35.1，36.7，41.6，55.1，55.5，55.8，60.3，74.6，114.1，117.6，118.6，120.7，122.4，123.4，125.9，128.8，129.5，130.9，133.2，133.3，145.7，147.0，152.2，155.3，161.9，169.5，170.2，173.9.LC-MS，MSm/z885.2(M++H)。
制备化合物60，实施例60：
化合物60是以44.3％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(4-羟基苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.04-1.11(m，3H)，1.15(s，9H)，1.21-1.26(m，2H)，1.42(dd，J＝9.3，5.5Hz，1H)，1.90(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.21-2.33(m，2H)，2.62(dd，J＝13.7，7.2Hz，1H)，2.95(ddd，J＝12.8，8.1，4.8Hz，1H)，3.96(s，3H)，4.09(dd，J＝12.0，3.4Hz，1H)，4.34(d，J＝11.8Hz，1H)，4.43(s，1H)，4.67(dd，J＝10.3，7.3Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.1，1.5Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.2，10.3，8.8Hz，1H)，5.91(s，1H)，6.80(d，J＝8.8Hz，2H)，7.31(d，J＝8.6Hz，2H)，7.55(s，1H)，7.62(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.91(d，J＝2.0Hz，1H)，8.06(d，J＝8.8Hz，1H.LC-MS，MSm/z 823.2(M++H)。
制备化合物61，实施例61：
化合物61是以50.0％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2，5-二氟苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.05-1.11(m，2H)，1.15(s，9H)，1.22-1.27(m，2H)，1.41(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.19-2.31(m，2H)，2.52(dd，J＝13.7，6.9Hz，1H)，2.91-2.99(m，1H)，3.93(s，3H)，4.14(dd，J＝11.8，3.5Hz，1H)，4.55-4.62(m，2H)，4.68(s，1H)，5.11(dd，J＝10.4，1.6Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.1，1.3Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.1，10.3，8.8Hz，1H)，6.00(s，1H)，6.82-6.88(m，1H)，6.98(ddd，J＝10.6，9.1，4.4Hz，1H)，7.40(ddd，J＝9.3，5.9，3.1Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.56(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.68(d，J＝2.0Hz，1H)，7.95(d，J＝9.1Hz，1H).13C NMR(101MHz，MeOD)δppm5.6，5.8，22.6，26.1，31.2，34.9，35.2，36.3，41.6，55.1，55.7，60.2，64.1，74.6，108.1，109.6，115.3，117.6，118.2，120.7，122.5，123.4，130.9，133.2，133.3，133.4，144.1，152.2，159.4，160.4，165.8，169.6，174.1，176.1，179.3，183.4，186.0.LC-MS，MSm/z843.2(M++H)。
制备化合物62，实施例62：
化合物62是以46.9％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(5-氯-1-苯并呋喃-2-基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.05-1.11(m，2H)，1.17(s，9H)，1.22-1.28(m，2H)，1.39(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.86(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.18-2.28(m，2H)，2.36-2.43(m，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.85(s，3H)，4.15(dd，J＝11.6，3.5Hz，1H)，4.54(dd，J＝10.6，6.8Hz，1H)，4.80(s，1H)，4.98(d，J＝11.3Hz，1H)，5.09(dd，J＝10.3，1.8Hz，1H)，5.26(dd，J＝17.1，1.5Hz，1H)，5.71(ddd，J＝17.1，10.3，8.8Hz，1H)，6.19(t，J＝3.0Hz，1H)，6.60(s，1H)，6.89(d，J＝2.3Hz，1H)，7.03-7.07(m，1H)，7.09-7.13(m，1H)，7.35(s，1H)，7.37(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.46(d，J＝2.0Hz，1H)，7.70(d，J＝8.8Hz，1H).LC-MS，MSm/z881.1(M++H)。
制备化合物63，实施例63：
化合物63是以42.7％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(3，4-二甲基-苯基)-乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.05-1.12(m，2H)，1.16(s，9H)，1.22-1.25(m，2H)，1.41(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.22(s，6H)，2.24-2.33(m，2H)，2.59(dd，J＝13.8，7.3Hz，1H)，2.95(ddd，J＝12.8，8.1，4.8Hz，1H)，3.96(s，3H)，4.11(dd，J＝12.1，3.5Hz，1H)，4.41(d，J＝12.1Hz，1H)，4.49(s，1H)，4.66(dd，J＝10.2，7.2Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.1，1.3Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.2，10.3，9.1Hz，1H)，5.93(s，1H)，7.08-7.13(m，1H)，7.19(dd，J＝7.8，1.8Hz，1H)，7.26(s，1H)，7.54(s，1H)，7.60(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.85(d，J＝2.0Hz，1H)，8.04(d，J＝9.1Hz，1H).13C NMR(101MHz，MeOD)δppm2.1，5.6，5.8，18.6，18.8，22.5，25.9，31.2，34.8，35.0，37.2，41.6，55.1，55.8，60.4，62.7，65.6，74.5，74.8，117.7，118.7，120.8，122.4，123.6，127.2，129.6，130.2，131.0，132.3，133.2，133.4，137.7，147.1，152.3，173.8.LC-MS，MSm/z835.2(M++H)。
制备化合物64，实施例64：
化合物64是以34.1％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将3-氟-4-甲氧基苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.06-1.11(m，2H)，1.16(s，9H)，1.24(ddd，J＝7.5，5.0，4.8Hz，2H)，1.41(dd，J＝9.6，5.5Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.2，5.4Hz，1H)，2.21-2.32(m，2H)，2.57(dd， J＝13.8，7.1Hz，1H)，2.91-2.99(m，J＝8.6，4.2，4.0，4.0Hz，1H)，3.83(s，3H)，3.95(s，3H)，4.11(dd，J＝12.0，3.4Hz，1H)，4.46(d，J＝12.1Hz，1H)，4.57(s，1H)，4.65(dd，J＝10.3，7.1Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.1，1.3Hz，1H)，5.67-5.78(m，1H)，5.96(s，1H)，6.98(t，J＝8.8Hz，1H)，7.20-7.27(m，2H)，7.51(s，1H)，7.60(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.81(d，J＝2.0Hz，1H)，8.01(d，J＝9.1Hz，1H). 13C NMR(101MHz，MeOD)δppm5.6，5.8，22.5，23.7，26.0，31.2，34.8，35.1，37.0，41.6，55.2，55.8，60.4，64.5，65.2，67.7，74.8，78.5，113.7，114.0，117.7，118.5，120.8，122.4，122.6，123.6，129.5，131.0，133.2，147.1，152.2，158.7，169.5，169.9，173.9，175.3，180.3LC-MS，MS m/z855.2(M++H)。
制备化合物65，实施例65：
化合物65是以49.0％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(4-乙氧基苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.06-1.11(m，2H)，1.15(s，9H)，1.22-1.26(m，2H)，1.37(t，J＝6.9Hz，3H)，1.41(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.90(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.21-2.33(m，2H)，2.59(dd，J＝13.7，7.2Hz，1H)，2.95(ddd，J＝12.7，8.1，4.9Hz，1H)，3.96(s，3H)，3.97-4.04(m，2H)，4.10(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，4.40(d，J＝11.8Hz，1H)，4.48(s，1H)，4.66(dd，J＝10.1，7.3Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.4，1.6Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.1，1.3Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.2，10.3，8.8Hz，1H)，5.93(s，1H)，6.87(d，J＝8.8Hz，2H)，7.37-7.41(m， 2H)，7.54(s，1H)，7.61(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.87(d，J＝2.0Hz，1H)，8.05(d，J＝8.8Hz，1H).13C NMR(101MHz，MeOD)δppm4.7，5.6，5.8，14.0，22.6，25.9，31.2，34.8，35.0，37.2，41.6，55.1，55.8，60.4，63.8，65.5，74.8，89.5，96.8，115.0，117.7，118.7，120.4，120.8，121.6，122.4，123.7，124.8，127.7，129.6，131.1，133.2，133.5，160.7，172.9，173.9，190.8.LC-MS，MS m/z851.2(M++H)。
制备化合物66，实施例66：
化合物66是以34.6％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将3，5-二氟苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.05-1.11(m，2H)，1.15(s，9H)，1.22-1.27(m，2H)，1.40(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.18-2.30(m，2H)，2.50(dd，J＝13.7，6.9Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.93(s，3H)，4.14(dd，J＝11.8，3.5Hz，1H)，4.57(dd，J＝10.6，7.1Hz，1H)，4.66(d，J＝11.6Hz，1H)，4.73(s，1H)，5.11(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.72(ddd，J＝17.2，10.3，8.9Hz，1H)，6.02(t，J＝3.0Hz，1H)，6.57-6.63(m，1H)，7.09(dd，J＝8.7，2.1Hz，2H)，7.43(s，1H)，7.56(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.62(d，J＝2.0Hz，1H)，7.95(d，J＝9.1Hz，1H).LC-MS，MSm/z843.2(M++H)。
制备化合物67，实施例67：
化合物67是以42.7％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-(三氟甲氧基)苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.06-1.11(m，2H)，1.15(s，9H)，1.22-1.27(m，2H)，1.41(dd，J＝9.6，5.5Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.2，5.4Hz，1H)，2.22-2.33(m，2H)，2.57(dd，J＝13.7，7.2Hz，1H)，2.96(ddd，J＝12.7，8.1，4.7Hz，1H)，3.94(s，3H)，4.13(dd，J＝11.8，3.8Hz，1H)，4.36(d，J＝11.8Hz，1H)，4.61(s，1H)，4.64(dd，J＝10.1，7.1Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.3，1.8Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.1，1.5Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.2，10.3，8.8Hz，1H)，5.90(s，1H)，7.28-7.37(m，2H)，7.43-7.47(m，1H)，7.48(s，1H)，7.60(dd，J＝7.8，1.5Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.90(d，J＝2.0Hz，1H)，8.04(d，.J＝8.8Hz，1H).LC-MS，MSm/z891.2(M++H)。
制备化合物68，实施例68：
化合物68是以34.2％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将3-(三氟甲氧基)苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.06-1.11(m，2H)，1.16(s，9H)，1.22-1.27(m，2H)，1.41(dd，J＝9.6，5.5Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.19-2.31(m，2H)，2.55(dd，J＝13.6，7.1Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.93(s，3H)，4.13(dd，J＝11.8，3.5Hz，1H)，4.55-4.62(m，2H)，4.64(s，1H)，5.11(dd，J＝10.4，1.6Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.1，1.3Hz，1H)，5.72(ddd，J＝17.1，10.3，8.8Hz，1H)，5.95(s，1H)，7.10(d，J＝8.1Hz，1H)，7.31(t，J＝8.1Hz，1H)，7.47(s，2H)，7.51(dd，JJ＝7.8，1.0Hz，1H)，7.56(dd，J＝8.8，2.0Hz，1H)，7.72(d，J＝2.0Hz，1H)，7.99(d，J＝8.8Hz，1H).LC-MS，MSm/z891.2(M++H)。
制备化合物69，实施例69：
化合物69是以54.5％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2’-氯-5’-(三氟甲基)苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.08(ddd，J＝7.7，3.4，3.2Hz，2H)，1.15(s，9H)，1.22-1.27(m，2H)，1.40(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.20-2.31(m，2H)，2.55(dd，J＝13.6，7.1Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.93(s，3H)，4.13(dd，J＝11.6，3.8Hz，1H)，4.48(d，J＝11.8Hz，1H)，4.59(dd，J＝10.3，7.1Hz，1H)，4.64(s，1H)，5.11(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.1，1.3Hz，1H)，5.67-5.77(m，1H)，5.89(s，1H)，7.03(s，1H)，7.45(s，1H)，7.53(s，2H)，7.63(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.78(d，J＝2.0Hz，1H)，7.97(s， 1H)，8.03(d，J＝8.8Hz，1H).LC-MS，MSm/z909.0(M++H)。
制备化合物70，实施例70：
化合物70是以53.2％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2，4-二(三氟甲基)苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.06-1.11(m，2H)，1.13(s，9H)，1.21(s，1H)，1.24(dd，J＝4.7，2.6Hz，2H)，1.41(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.2，5.4Hz，1H)，2.21-2.32(m，2H)，2.55(dd，J＝13.7，7.2Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.95(s，3H)，4.12(dd，J＝11.8，4.0Hz，1H)，4.34(d，J＝11.8Hz，1H)，4.61(s，1H)，4.63(dd，J＝10.1，7.1Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.2，10.3，8.8Hz，1H)，5.88(s，1H)，6.72(s，1H)，7.49(s，1H)，7.65(d，J＝8.1Hz，1H)，7.68(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.82(d，J＝7.8Hz，1H)，7.93(d，J＝1.8Hz，1H)，7.97(s，1H)，8.07(d，J＝9.1Hz，1H).LC-MS，MSm/z943.0(M++H)。
制备化合物71，实施例71：
化合物71是以34.0％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-氟-6-(三氟甲基)苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.08(ddd，J＝8.3，6.3，3.8Hz，3H)，1.13(s，9H)，1.22-1.27(m，2H)，1.41(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.22-2.33(m，2H)，2.60(dd，J＝13.8，7.1Hz，1H)，2.95(ddd，J＝12.7，8.1，4.7Hz，1H)，3.97(s，3H)，4.11-4.22(m，2H)，4.55(s，1H)，4.64(dd，J＝9.8，7.3Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.1，1.3Hz，1H)，5.72(ddd，J＝17.2，10.3，8.8Hz，1H)，5.84(s，1H)，6.80(s，1H)，7.47(t，J＝8.8Hz，1H)，7.50(s，1H)，7.63(d，J＝7.8Hz，1H)，7.68-7.73(m，2H)，8.01(d，J＝2.0Hz，1H)，8.10(d，J＝9.1Hz，1H).LC-MS，MSm/z893.2(M++H)。
制备化合物72，实施例72：
化合物72是以57.3％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰甲基溴化物用于替代步 骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.08(ddd，J＝10.1，5.1，2.9Hz，2H)，1.15(s，9H)，1.22-1.27(m，2H)，1.40(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.3，5.5Hz，1H)，2.18-2.30(m，2H)，2.49(dd，J＝13.6，7.1Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.91(s，3H)，4.13(dd，J＝11.8，3.5Hz，1H)，4.58(dd，J＝10.3，7.1Hz，1H)，4.64(d，J＝11.8Hz，1H)，4.74(s，1H)，5.11(dd，J＝10.4，1.6Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.1，1.3Hz，1H)，5.72(ddd，J＝17.2，10.3，8.8Hz，1H)，6.01(t，J＝3.0Hz，1H)，6.99(t，J＝7.9Hz，1H)，7.35(t，J＝6.9Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.54(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)，7.60(d，J＝1.8Hz，1H)，7.92(d，J＝9.1Hz，1H)，7.94-7.98(m，1H).LC-MS，MSm/z893.2(M++H)。
制备化合物73，实施例73：
化合物73是以55.6％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)d ppm1.05-1.11(m，2H)，1.16(s，9H)，1.22-1.27(m，2H)，1.40(dd，J＝9.6，5.3Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.2，5.4Hz，1H)，2.17-2.29(m，2H)，2.47(dd，J＝13.7，6.9Hz，1H)，2.96(ddd，J＝12.8，8.1，4.8Hz，1H)，3.92(s，3H)，4.14(dd，J＝11.8，3.5Hz，1H)，4.56(dd，J＝10.6，7.1Hz，1H)，4.69-4.76(m，2H)，5.10(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.27(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.72(ddd，J＝17.2，10.3，8.9Hz，1H)，6.04(s，1H)，7.09(d，J＝8.1Hz，1H)，7.19(d，J＝11.3Hz，1H)，7.42(s，1H)，7.53-7.58(m，2H)，7.88-7.96(m，2H).LC-MS，MSm/z893.2(M++H)。
制备化合物74，实施例74：
化合物74是以38.5％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将4-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.05-1.11(m，2H)，1.16(s，9H)，1.22-1.27(m，2H)，1.39(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.17-2.29(m，2H)，2.49(dd，J＝13.6，7.1Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.93(s，3H)，4.14(dd，J＝11.6，3.5Hz，1H)，4.53(dd，J＝10.6，7.1Hz，1H)，4.72-4.78(m，2H)，5.10(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.27(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.72(ddd，J＝17.2，10.3，9.1Hz，1H)，5.99(t，J＝2.9Hz，1H)，7.01(t，J＝9.6Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.51-7.56(m，2H)，7.77-7.82(m，1H)，7.87(dd，J＝6.8，2.0Hz，1H)，7.95(d，J＝9.6Hz，1H).LC-MS，MSm/z893.2(M++H)。
制备化合物75，实施例75：
化合物75是以53.4％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同 操作法，不同的是将3-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.05-1.11(m，2H)，1.16(s，9H)，1.25(td，J＝4.9，2.5Hz，2H)，1.39(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.86(dd，J＝8.2，5.4Hz，1H)，2.16-2.28(m，2H)，2.43(dd，J＝13.7，6.9Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.91(s，3H)，4.15(dd，J＝11.7，3.4Hz，1H)，4.53(dd，J＝10.6，7.1Hz，1H)，4.79-4.83(m，2H)，5.10(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.26(dd，J＝17.1，1.3Hz，1H)，5.71(ddd，J＝17.2，10.3，8.8Hz，1H)，6.08(s，1H)，7.19(t，J＝7.9Hz，1H)，7.41-7.48(m，4H)，7.52(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.91(d，J＝8.8Hz，1H).LC-MS，MSm/z893.2(M++H)。
制备化合物76，实施例76：
化合物76是以49.3％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(2，5-二氯苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.06-1.11(m，2H)，1.15(s，9H)，1.25(ddd，J＝7.5，5.0，4.8Hz，2H)，1.41(dd，J＝9.6，5.3Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.21-2.32(m，2H)，2.57(dd，J＝13.6，7.1Hz，1H)，2.95(ddd，J＝12.8，8.0，4.7Hz，1H)，3.96(s，3H)，4.14(dd，J＝11.8，3.8Hz，1H)，4.41(d，J＝11.8Hz，1H)，4.58-4.65(m，2H)，5.12(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.1，1.3Hz，1H)，5.67-5.77(m，1H)，5.92(s，1H)，6.94(s，1H)，7.25-7.30(m，1H)，7.31-7.36(m，1H)，7.49(s，1H)，7.60(d，J＝2.5Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.84(d，J＝2.0Hz，1H)，8.04(d，J＝9.1Hz，1H).LC-MS，MSm/z 877.1(M++H)。
制备化合物77，实施例77：
化合物77是以49.2％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(3，4-二甲氧基苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.04-1.11(m，3H)，1.16(s，9H)，1.21-1.26(m，2H)，1.41(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.21-2.33(m，2H)，2.59(dd，J＝13.6，7.1Hz，1H)，2.95(ddd，J＝12.7，8.1，4.7Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.82(s，3H)，3.96(s，3H)，4.10(dd，J＝12.0，3.1Hz，1H)，4.45(d，J＝12.1Hz，1H)，4.50(s，1H)，4.66(dd，J＝10.2，7.2Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.25-5.34(m，1H)，5.67-5.78(m，1H)，5.94(s，1H)，6.87(d，J＝8.3Hz，1H)，7.02-7.08(m，2H)，7.53(s，1H)，7.60(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)，7.84(d，J＝2.0Hz，1H)，8.03(d，J＝8.8Hz，1H).LC-MS，MSm/z867.2(M++H)。
制备化合物78，实施例78：
化合物78是以54.2％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-[2-(二氟甲氧基)-5-甲基苯基]乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.06-1.11(m，2H)，1.16(s，9H)，1.22-1.27(m，2H)，1.41(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.2，5.4Hz，1H)，2.20-2.25(m，1H)，2.26(s，3H)，2.28-2.33(m，1H)，2.59(dd，J＝13.7，7.2Hz，1H)，2.92-2.99(m，J＝8.6，4.2，4.0，4.0Hz，1H)，3.95(s，3H)，4.12(dd，J＝12.0，3.7Hz，1H)，4.40(d，J＝12.1Hz，1H)，4.54(s，1H)，4.64(dd，J＝10.1，7.1Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.72(ddd，J＝17.2，10.3，9.1Hz，1H)，5.91(s，1H)，6.75(t，J＝73.4Hz，1H)，7.09(d，J＝8.3Hz，1H)，7.22(dd，J＝8.4，1.6Hz，1H)，7.37(d，J＝1.5Hz，1H)，7.51(s，1H)，7.63(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.89(d，J＝2.0Hz，1H)，8.05(d，J＝8.8Hz，1H).LC-MS，MSm/z887.2(M++H)。
制备化合物79，实施例79：
化合物79是以48.6％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将3，4，5-三氟苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.05-1.11(m，2H)，1.14(s，9H)，1.25(td，J＝4.8，2.4Hz，2H)，1.40(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.3，5.5Hz，1H)，2.18-2.29(m，2H)，2.46(dd，J＝13.7，6.9Hz，1H)，2.95(ddd，J＝12.7，8.1，4.7Hz，1H)，3.94(s，3H)，4.13(dd，J＝11.8，3.5Hz，1H)，4.57(dd，J＝10.6，6.8Hz，1H)，4.69(d，J＝11.8Hz，1H)，4.78(s，1H)，5.10(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.27(dd，J＝17.1，1.5Hz，1H)，5.72(ddd，J＝17.1，10.3，8.8Hz，1H)，6.07-6.11(m，1H)，7.19(dd，J＝9.2，6.7Hz，2H)，7.44(s，1H)，7.54-7.58(m，2H)，7.94(d，J＝9.6Hz，1H).LC-MS，MSm/z861.2(M++H)。
制备化合物80，实施例80：
化合物80是以51.4％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2，3-二氟苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.08(ddd，J＝7.8，4.8，2.5H7，2H)，1.15(s，9H)，1.25(dt，J＝6.5，4.2Hz，2H)，1.41(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.20-2.31(m，2H)，2.53(dd，J＝13.7，6.9Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.94(s，3H)，4.12(dd，J＝11.8，3.5Hz，1H)，4.54(d，J＝11.8Hz，1H)，4.60(dd，J＝10.3，7.1Hz，1H)，4.65(s，1H)，5.11(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.1，1.3Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.2，10.3，9.1Hz，1H)，5.97(s，1H)，6.90-6.96(m，1H)，7.03-7.10(m，1H)，7.39-7.43(m，1H)，7.44(s，1H)，7.59(dd，J＝ 8.8，2.3Hz，1H)，7.72(d，J＝2.0Hz，1H)，7.99(d，J＝9.1Hz，1H).LC-MS，MSm/z843.2(M++H)。
制备化合物81，实施例81：
化合物81是以42.0％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2，4，5-三氟苯甲酰甲基溴化物用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.05-1.11(m，2H)，1.14(s，9H)，1.25(dt，J＝7.3，2.1Hz，2H)，1.41(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.1，5.5Hz，1H)，2.19-2.30(m，2H)，2.49(dd，J＝13.7，6.9Hz，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.94(s，3H)，4.13(dd，J＝11.6，3.5Hz，1H)，4.56-4.63(m，2H)，4.72(s，1H)，5.11(dd，J＝10.3，1.8Hz，1H)，5.28(dd，J＝17.1，1.3Hz，1H)，5.72(ddd，J＝17.2，10.3，9.1Hz，1H)，6.06(t，J＝3.0Hz，1H)，6.97(td，J＝10.6，6.5Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.51-7.59(m，2H)，7.61(d，J＝2.0Hz，1H)，7.94(d，J＝9.1Hz，1H).LC-MS，MSm/z861.2(M++H)。
制备化合物82，实施例82：
化合物82是以64.4％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(2，4-二氟苯基)丙烷-1-酮bromide用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.05-1.10(m，2H)，1.13(s，9H)，1.21-1.26(m，2H)，1.42(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.90(dd，J＝8.2，5.4Hz，1H)，1.98(s，3H)，2.22-2.33(m，2H)，2.61(dd，J＝13.6，7.1Hz，1H)，2.95(ddd，J＝12.7，8.0，4.8Hz，1H)，3.97(s，3H)，4.10(dd，J＝12.0，3.7Hz，1H)，4.27(d，J＝12.1Hz，1H)，4.47(s，1H)，4.67(dd，J＝10.1，7.1Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.2，1.4Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.2，10.3，8.8Hz，1H)，5.86(s，1H)，7.02-7.11(m，2H)，7.34-7.40(m，1H)，7.53(s，1H)，7.69(dd，J＝8.8，2.0Hz，1H)，7.99(d，J＝2.0Hz，1H)，8.09(d，J＝8.8Hz，1H).LC-MS，MSm/z857.2(M++H)。
制备化合物83，实施例83：
化合物83是以62.9％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-2’，6’-二氟乙酰苯用于替代步骤1中的 2-溴苯丙酮。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm1.05-1.11(m，2H)，1.15(s，9H)，1.21-1.26(m，2H)，1.41(dd，J＝9.4，5.4Hz，1H)，1.89(dd，J＝8.2，5.4Hz，1H)，2.22-2.33(m，2H)，2.59(dd，J＝13.7，7.2Hz，1H)，2.95(ddd，J＝12.7，8.1，4.7Hz，1H)，3.97(s，3H)，4.12(dd，J＝12.0，3.9Hz，1H)，4.35(d，J＝11.8Hz，1H)，4.52(s，1H)，4.64(dd，J＝10.1，7.1Hz，1H)，5.12(dd，J＝10.3，1.5Hz，1H)，5.30(dd，J＝17.1，1.5Hz，1H)，5.73(ddd，J＝17.1，10.3，8.8Hz，1H)，5.88(s，1H)，6.84(s，1H)，7.01(t，J＝8.6Hz，2H)，7.43(ddd，J＝14.8，8.4，6.3Hz，1H)，7.52(s，1H)，7.65(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)，7.94(d，J＝2.0Hz，1H)，8.06(d，J＝8.8Hz，1H).LC-MS，MSm/z843.2(M++H)。
制备化合物84，实施例84：
化合物84是以34.1％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)乙烷-1-酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.09-1.15(m，3H)，1.18(s，9H)，1.25-1.33(m，3H)，1.46(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.92(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)，2.22-2.30(m，2H)，2.31(s，3H)，2.46(dd，J＝13.43，7.02Hz，1H)，2.95-3.04(m，1H)，3.70(s，3H)，4.19(dd，J＝11.60，3.66Hz，1H)，4.64(dd，J＝10.38，7.02Hz，1H)，4.82(br.s.，1H)，5.15(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)，5.32(dd，J＝17.09，1.22Hz，1H)，5.78(ddd，J＝17.09，10.22，9.00Hz，1H)，7.16-7.23(m，2H)，7.28(t，J＝7.63Hz，1H)，7.43-7.49(m，1H)，7.49-7.54(m，2H)，7.64(d，J＝2.14Hz，1H)，7.79(d，J＝8.85Hz，1H).LC-MS，MSm/z 878(M+H)+。
制备化合物85，实施例85：
化合物85是以43.1％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(3-苯基异唑-5-基)乙烷-1-酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.08-1.14(m，2H)，1.21(s，9H)，1.26-1.32(m，2H)，1.42(dd，J＝9.31，5.34Hz，1H)，1.88(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)，2.21(q，J＝8.85Hz，1H)，2.24-2.31(m，1H)，2.43(dd，J＝13.43，6.41Hz，1H)，2.96-3.03(m，1H)，3.74(s，3H)，4.20(dd，J＝11.60，3.36Hz，1H)，4.53(dd，J＝10.68，6.41Hz，1H)，4.86(s，1H)，5.09-5.15(m，2H)，5.28(dd，J＝17.24，1.07Hz，1H)，5.74(ddd，J＝17.17，10.15，9.00Hz，1H)，6，21(br.s.，1H)，6.68(s，1H)，7.22-7.39(m，5H)，7.46-7.53(m，2H)，7.78(d，J＝9.77Hz，1H).LC-MS，MSm/z875(M+H)+。
制备化合物86，实施例86：
化合物86是以61.2％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(3-(2，4-二氯苯基)异唑-5-基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.06-1.14(m，2H)，1.22(s，9H)，1.25-1.32(m，2H)，1.39(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.86(dd，J＝8.09，5.34Hz，1H)，2.18(q，J＝8.85Hz，1H)，2.21-2.29(m，1H)，2.40(dd，J＝13.28，6.56Hz，1H)，2.93-3.02(m，1H)，3.93(s，3H)，4.24(dd，J＝11.29，3.66Hz，1H)，4.46(dd，J＝10.68，6.71Hz，1H)，4.79(s，1H)，5.11(d，J＝10.68Hz，2H)，5.26(d，J＝17.09Hz，1H)，5.73(dt，J＝17.17，9.58Hz，1H)，6.11(br.s.，1H)，6.93(s，1H)，7.03(d，J＝8.55Hz，1H)，7.14-7.22(m，1H)，7.31(d，J＝1.83Hz，1H)，7.38(s，1H)，7.47-7.54(m，2H)，7.85(d，J＝9.46Hz，1H).LC-MS，MSm/z944(M+H)+。
制备化合物87，实施例87：
化合物87是以40.4％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相 同操作法，不同的是将1-(苯并呋喃-2-基)-2-溴乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.06-1.15(m，2H)，1.20(s，9H)，1.26-1.33(m，2H)，1.44(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.90(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.19-2.34(m，2H)，2.46(dd，J＝13.58，6.87Hz，1H)，2.95-3.03(m，1H)，3.79(s，3H)，4.02(dt，J＝6.49，3.32Hz，1H)，4.20(dd，J＝11.75，3.51Hz，1H)，4.58(dd，J＝10.68，6.71Hz，1H)，4.83(s，1H)，4.99(d，J＝11.60Hz，1H)，5.14(dd，J＝10.38，1.53Hz，1H)，5.30(d，J＝17.09Hz，1H)，5.70-5.83(m，2H)，6.16(br.s.，1H)，6.68(s，1H)，6.97-7.06(m，2H)，7.14(td，J＝7.63，1.22Hz，1H)，7.23(d，J＝7.93Hz，1H)，7.34(s，1H)，7.40(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)，7.57(d，J＝1.83Hz，1H)，7.74(d，J＝8.85Hz，1H).LC-MS，MSm/z848(M+H)+。
制备化合物88，实施例88：
化合物88是以59.9％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(3-(4-氯苯基)异唑-5-基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.08-1.13(m，2H)，1.22(s，9H)，1.26-1.32(m，2H)，1.41(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.87(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)，2.16-2.30(m，2H)，2.35-2.41(m，1H)，2.95-3.03(m，1H)，3.81(s，3H)，4.21(dd，J＝11.60，3.66Hz，1H)，4.50(dd，J＝10.83，6.56Hz，1H)，4.84(s，1H)，5.09-5.18(m，2H)，5.27(dd，J＝17.24，1.07Hz，1H)，5.74(ddd，J＝17.09，10.07，9.16Hz，1H)，6.25(br.s.，1H)，6.70(s，1H)，7.20-7.29(m，5H)，7.43(d，J ＝1.83Hz，1H)，7.47(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)，7.75(d，J＝8.85Hz，1H)，LC-MS，MSm/z909(M+H)+。
制备化合物89，实施例89：
化合物89是以14.2％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，Me0D)δppm1.09-1.15(m，2H)，1.20(s，9H)，1.25-1.33(m，2H)，1.43(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.90(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.18-2.30(m，2H)，2.44(dd，J＝13.73，6.41Hz，1H)，2.81(s，3H)，2.96-3.03(m，1H)，3.93(s，3H)，4.19(dd，J＝11.60，3.36Hz，1H)，4.53(dd，J＝10.68，7.02Hz，1H)，4.92(s，1H)，5.02(d，J＝10.99Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.53，1.37Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.24，1.07Hz，1H)，5.75(ddd，J＝17.09，10.22，9.00Hz，1H)，6.12(t，J＝3.05Hz，1H)，7.39-7.47(m，4H)，7.52(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)，7.81(d，J＝8.55Hz，2H)，7.91(d，J＝8.85Hz，1H).LC-MS，MSm/z886(M+H)+。
制备化合物90，实施例90：
化合物90是以47.3％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(3-氯噻吩-2-基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.09-1.14(m，2H)，1.16(s，9H)，1.26-1.33(m，2H)，1.45(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.91(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.22-2.36(m，2H)，2.52(dd，J＝13.58，6.87Hz，1H)，2.96-3.03(m，1H)，3.98(s，3H)，4.19(dd，J＝11.60，3.97Hz，1H)，4.60(dd，J＝10.07，7.02Hz，1H)，4.76(s，1H)，4.80(d，J＝11.60Hz，1H)，5.15(dd，J＝10.22，1.37Hz，1H)，5.32(dd，J＝17.09，1.22Hz，1H)，5.77(ddd，J＝17.09，10.22，9.00Hz，1H)，6.05(br.s.，1H)，6.64(d，J＝5.49Hz，1H)，6.83(d，J＝5.49Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.61(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)，7.68(d，J＝1.83Hz，1H)，8.00(d，J＝8.85Hz，1H).LC-MS，MSm/z848(M+H)+。
制备化合物91，实施例91：
化合物91是以31.8％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相 同操作法，不同的是将2-溴-1-(4-苯氧基苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.08-1.15(m，2H)，1.20(s，9H)，1.26-1.31(m，2H)，1.44(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.92(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)，2.21-2.35(m，2H)，2.57(dd，J＝13.43，7.02Hz，1H)，2.95-3.03(m，1H)，3.99(s，3H)，4.17(dd，J＝11.90，3.66Hz，1H)，4.61(dd，J＝10.22，7.17Hz，1H)，4.65-4.71(m，2H)，5.15(dd，J＝10.38，1.22Hz，1H)，5.32(dd，J＝17.09，1.22Hz，1H)，5.76(ddd，J＝17.17，10.15，9.00Hz，1H)，5.99(br.s.，1H)，6.78(d，J＝8.55Hz，2H)，6.86(d，J＝7.63Hz，2H)，7.15(t，J＝7.32Hz，1H)，7.35(t，J＝8.09Hz，2H)，7.52-7.57(m，3H)，7.62(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)，7.75(d，J＝1.83Hz，1H)，8.06(d，J＝8.85Hz，1H).LC-MS，MSm/z900(M+H)+。
制备化合物92，实施例92：
化合物92是以21.9％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(4-氯-2-氟-5-甲基苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.09-1.14(m，2H)，1.21(s，9H)，1.27-1.32(m，2H)，1.43(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.87-1.93(m，4H)，2.19-2.31(m，2H)，2.40-2.47(m，1H)，2.94-3.03(m，1H)，3.99(s，3H)，4.20(dd，J＝11.60，3.36Hz，1H)，4.54(dd，J＝10.68，6.71Hz，1H)，4.85(s，1H)，4.98(d，J＝11.29Hz，1H)，5.13(dd，J＝10.38，1.22Hz，1H)，5.29(dd，J＝17.09，1.22Hz，1H)，5.75(ddd，J＝17.09，10.22，9.00Hz，1H)，6.18(t，J＝2.75Hz，1H)，6.76(d， J＝11.29Hz，1H)，7.40(d，J＝2.14Hz，1H)，7.45(s，1H)，7.54(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)，7.76(d，J＝8.55Hz，1H)，7.96(d，J＝8.85Hz，1H).LC-MS，MSm/z874(M+H)+。
制备化合物93，实施例93：
化合物93是以41.7％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(噻吩-3-基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.09-1.15(m，2H)，1.19(s，9H)，1.25-1.31(m，2H)，1.45(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.93(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.23-2.37(m，2H)，2.61(dd，J＝13.73，7.02Hz，1H)，2.95-3.03(m，1H)，4.00(s，3H)，4.17(dd，J＝11.90，3.36Hz，1H)，4.54-4.62(m，2H)，4.67(dd，J＝10.22，7.17Hz，1H)，5.16(dd，J＝10.53，1.37Hz，1H)，5.33(dd，J＝17.09，1.22Hz，1H)，5.77(ddd，J＝17.17，10.15，9.00Hz，1H)，5.96(br.s.，1H)，7.26(dd，J＝5.04，1.07Hz，1H)，7.38(dd，J＝4.73，2.90Hz，1H)，7.54-7.59(m，2H)，7.62(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)，7.85(d，J＝2.14Hz，1H)，8.06(d，J＝8.85Hz，1H).LC-MS，MSm/z814(M+H)+。
制备化合物94，实施例94：
化合物94是以37.8％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.09-1.15(m，2H)，1.20(s，9H)，1.26-1.32(m，2H)，1.43(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.91(dd，J＝8.24，5.49Hz，1H)，2.17-2.33(m，2H)，2.53(dd，J＝13.43，7.02Hz，1H)，2.95-3.03(m，1H)，3.94(s，3H)，4.19(dd，J＝11.60，3.36Hz，1H)，4.55(dd，J＝10.53，6.87Hz，1H)，4.80(s，1H)，4.84(br.s.，1H)，5.14(dd，J＝10.38，1.22Hz，1H)，5.30(dd，.J＝16.94，1.07Hz，1H)，5.70-5.81(m，1H)，6.01(br.s.，1H)，7.21-7.31(m，2H)，7.44(s，1H)，7.52-7.56(m，2H)，7.82(d，J＝7.32Hz，1H)，7.92(s，1H)，7.95(d，J＝9.77Hz，1H).LC-MS，MSm/z876(M+H)+。
制备化合物95，实施例95：
化合物95是以67.9％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(2-(三氟甲基)苯基)乙酮用于替代步骤1 中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.09-1.14(m，2H)，1.16(s，9H)，1.27-1.31(m，2H)，1.45(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.92(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.24-2.36(m，2H)，2.56(dd，J＝13.43，7.02Hz，1H)，2.95-3.03(m，1H)，4.00(s，3H)，4.16(dd，J＝11.90，3.97Hz，1H)，4.42(d，J＝11.60Hz，1H)，4.60-4.66(m，2H)，5.16(dd，J＝10.38，1.22Hz，1H)，5.33(dd，J＝17.24，1.07Hz，1H)，5.77(ddd，J＝17.17，9.99，9.16Hz，1H)，5.88(br.s.，1H)，7.37-7.47(m，3H)，7.50(s，1H)，7.61(d，J＝7.32Hz，1H)，7.71(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)，7.93(d，J＝1.83Hz，1H)，8.11(d，J＝8.85Hz，1H).LC-MS，MSm/z876(M+H)+。
制备化合物96，实施例96：
化合物96是以71.1％产率制备的，其根据如制备化合物9所述相同操作法，不同的是将1-(苯并[d]噻唑-2-基)-2-溴乙酮用于替代步骤1中的2-溴苯丙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.08-1.15(m，2H)，1.19(s，9H)，1.26-1.33(m，2H)，1.45(dd，J＝9.46，5.49Hz，1H)，1.91(dd，J＝7.93，5.49Hz，1H)，2.21-2.35(m，2H)，2.46(dd，J＝13.43，7.02Hz，1H)，2.95-3.04(m，1H)，3.67(s，3H)，4.20(dd，J＝11.44，2.90Hz，1H)，4.63(dd，J＝10.07，7.02Hz，1H)，4.90(s，1H)，5.15(d，J＝10.38Hz，1H)，5.31(d，J＝17.09Hz，1H)，5.76(dt，J＝17.09，9.46Hz，1H)，6.23(br.s.，1H)，7.23(s，1H)，7.31-7.40(m，1H)，7.43(dd，J＝8.85，1.83Hz，1H)，7.46-7.52(m，2H)，7.60(d，J＝7.93Hz，1H)，7.67(d，J＝8.85Hz，1H)，7.73(d，J＝8.24Hz，1H).LC-MS， MS m/z865(M+H)+。
制备化合物97，实施例97。
流程1.
步骤1。
在0℃下向(1R，2S)-乙基1-(叔丁氧基羰基氨基)-2-乙烯基环丙烷甲酸酯(15.3g，59.9mmol)在THF(100ml)中的溶液中滴加9-BBN(180ml，90mmol)。使所形成的溶液在室温下搅拌2hr。使最终溶液冷却回到0℃，同时加入3M乙酸钠水溶液(180ml，540mmol)。向此充分搅拌的混合物中滴加过氧化氢(89ml，30％，869mmol)(应当注意该添加是放热的)。使所形成的温热的两层混合物搅拌过夜。将上层有机层分离，水层用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，蒸发。使残余物通过硅胶柱纯化，洗脱使用4：1、3：1、 2：1、然后3：2的己烷-EtOAc，得到需要的产物(1R，2S)-乙基1-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2-羟基乙基)环丙烷甲酸酯(11.50g，42.1mmol，70.2％产率)为粘稠油状物，其在工作台上放置时固化。1H NMR(CDCl3)δ1.18-1.21(m，1H)，1.25(t，J＝7Hz，3H)，1.35-1.40(m，1H)，1.44(s，9H)，1.61-1.65(m，1H)，1.70-1.75(m1H)，1.91-1.98(m，1H)，3.61-3.65(m，1H)，3.71-3.75(m，1H)，4.10-4.21(m，2H)，5.17(b，1H)。
步骤2。
在0℃下向(1R，2S)-乙基1-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2-羟基乙基)环丙烷甲酸酯(9.70g，35.5mmol)在DCM(300ml)中的溶液中加入Dess-Martin periodinane(18.06g，42.6mmol)。使所形成的浆状物在室温下搅拌过夜。通过硅藻土过滤反应混合物。使所得过滤物浓缩，此过程重复一次以上。残余物通过硅胶柱纯化，洗脱使用8：1、4：1、3：1、然后2：1的己烷-EtOAc，得到(1R，2S)-乙基1-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2-氧代乙基)环丙烷甲酸酯(6.15g，22.67mmol，63.9％产率)为无色油。1H NMR(CDCl3)δ1.24(t，J＝7Hz，3H)，1.40-1.45(m，11H)，1.65-1.69(m，1H)，2.75-2.80(m，2H)，4.09-4.19(m，2H)，5.17(b，1H)，9.76(s，1H)。
步骤3。
在0℃下向(1R，2S)-乙基1-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2-氧代乙基)环丙烷甲酸酯(4.10g，15.11mmol)在DCM(50ml)中的溶液中加入(二乙基氨基)SULFUR TRIFLUORIDE(7.99ml，60.4mmol)。使形成的淡黄色溶液在室温下搅拌过夜。将最终溶液用DCM稀释，冷却，小心用浓氯化铵猝灭。将分离的有机层分别用5％枸橼酸洗涤2次，用0.5M NaOH洗涤3次，再用盐水洗涤，用MgSO4干燥，在真空中蒸发。使残余物通过Biotage柱纯化，洗脱使用的梯度为5％至40％EtOAc-己烷，得到(1R，2S)-乙基1-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙烷甲酸酯(1.65g，5.63mmol，37.2％产率)为淡黄色油状物。还回收发500mg的起始物质(12％)。1H NMR(CDCl3)δ1.26(t，J＝7Hz，3H)，1.35-1.39(m，1H)，1.44(s，9H)，1.46-1.50(m，1H)，1.55-1.60(m，1H)，2.18-2.24(m，2H)，4.15-4.21(m，2H)，5.17(b，1H)，5.73，5.85， 5.99(b，1H)。
步骤4。
向(1R，2S)-乙基1-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙烷甲酸酯(1.14g，3.89mmol)在THF(10mL)和MeOH(10.00mL)中的溶液中加入预选制备的一水合氢氧化锂(0.489g，11.66mmol)在水(10.00mL)中的溶液。使所形成的混浊溶液在室温下搅拌过夜。在真空下除去挥发性物质，将残余物置于水中，用5％枸橼酸酸化，用EtOAc萃取。使分离的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，在真空中蒸发。将暗色残余物用己烷研磨，得到665mg的淡黄色固体。将过滤物浓缩成暗色残余物(300mg)，使其通过Biotage柱纯化，洗脱使用的梯度为5％至10％DCM-MeOH，得到另外的250mg的需要的产物为淡黄色固体。总计：(1R，2S)-1-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙烷甲酸(915mg，3.45mmol，89％产率)。1H NMR(CD3OD)δ1.25-1.28(m，1H)，1.42-1.43(m，10H)，1.46-1.53(m，1H)，2.12-2.14(m，2H)，5.73，5.85，6.00(b，1H)。
步骤5。
向(1R，2S)-1-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙烷甲酸(665mg，2.507mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入CDI(528mg，3.26mmol)，再将形成的溶液在室温下搅拌3h。加入环丙烷磺酰胺(395mg，3.26mmol)和DBU(0.756mL，5.01mmol)，再使该混合物在室温下搅拌过夜。使反应用EtOAc稀释，再用1.0M HCl溶液洗涤。水层用EtOAc萃取，将合并的有机物用5％枸橼酸、盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，蒸发，得到粗物质。使粗产物在Biotage上纯化(丙酮/己烷5-30％)，得到纯产物(1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙基氨基甲酸叔丁酯(783mg，1.913mmol，76％产率)为白色固体。1H NMR(500MHz，MeOD)δ1.01-1.15(m，2H)，1.16-1.35(m，2H)，1.49(s，10H)，1.58-1.77(m，2H，)，1.92-2.19(m，2H)，2.90-2.99(m，1H)，5.80-6.10(m，1H)。
步骤6。
将4.0M HCl在二氧杂环己烷中的溶液(10.5ml，42.0mm0l)加至(1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙基氨基甲酸叔丁酯(770mg，2.090mmol)中，再使所得混合物在室温下搅拌过夜。使反应浓缩，再在真空下干燥，得到需要的产物(1R，2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙烷甲酰胺，HCl，0.6二氧杂环己烷(746mg，1.877mmol，90％产率)为淡黄色泡沫状物。1HNMR光谱显示其含有作为溶剂合物的0.6mol当量的1，4-二氧杂环己烷。1HNMR(500MHz，MeOD)δ1.07-1.20(m，2H)，1.21-1.39(m，2H)，1.61(dd，J＝10.22，7.48Hz，1H)，1.78-1.88(m，1H)，1.94(t，J＝7.78Hz，1H)，2.07-2.30(m，2H)，3.00-3.13(m，1H)，5.89-6.24(m，1H)。
流程2.
步骤1：
向(2S，4R)-1-((S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-2-甲酸(500mg，0.933mmol)、(1R，2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙烷甲酰胺，HCl， 0.6二氧杂环己烷(334mg，0.933mmol)和HATU(426mg，1.119mmol)在CH2Cl2(10ml)中的浆液中在0℃下加入N，N-二异丙基乙胺(0.487ml，2.80mmol)。使形成的淡黄色溶液在0℃至室温下搅拌过夜。使反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，用5％枸橼酸、盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。粗产物溶解于少量的DCM中，再装入Biotage硅胶柱中，使其用5-40％梯度的己烷-丙酮洗脱，得到(S)-1-((2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯(655mg，0.816mmol，88％产率)为白色泡沫状物。1H NMR(500MHz，MeOD)δ0.98-1.23(m，21H)，1.23-1.44(m，3H)，1.70(d，J＝3.36Hz，2H)，2.12-2.39(m，3H)，2.61(dd，J＝13.73，6.71Hz，1H)，2.90-2.99(m，1H)，4.03(s，3H)，4.05-4.13(m，1H)，4.22(d，J＝9.46Hz，1H)，4.46(d，J＝11.29Hz，1H)，4.61(dd，J＝10.38，7.02Hz，1H)，5.77-6.13(m，2H)，6.60(br.s.，1H)，7.60(s，1H)，7.71(d，J＝8.85Hz，1H)，7.99-8.19(m，2H).LC-MS(保留时间：3.25min，方法A)，MS m/z786.2(M++H)。
方法A的LC/MS条件。
开始％B＝0
最终％B＝100
梯度时间＝3min
结束时间＝4min
流速＝4ml/min
波长＝220
溶剂A＝90％水-10％甲醇-0.1％TFA
溶剂B＝10％水-90％甲醇-0.1％丁FA
柱子3＝(3)PHENOMENEX-LUNA4.6x50mm S10
步骤2：
使4.0M HCl在二氧杂环己烷中的溶液(3.665mL，14.66mmol)加至(S)-1-((2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-2-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙基氨基甲酰基)吡咯烷-1- 基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯(592mg，0.753mmol)中并在室温下搅拌过夜。使反应浓缩，再在真空下干燥，得到需要的产物(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙基)吡咯烷-2-甲酰胺，2HCl，0.13二氧杂环己烷(593mg，0.693mmol，92％产率)为淡黄色粉末。1HNMR光谱显示其含有作为溶剂合物的0.13mol当量的1，4-二氧杂环己烷。1H NMR(500MHz，MeOD)δ1.05-1.23(m，10H)，1.23-1.41(m，3H)，1.60-1.84(m，2H)，2.10-2.27(m，2H)，2.28-2.42(m，1H)，2.66(dd，J＝13.73，6.71Hz，1H)，2.93-3.06(m，1H)，4.03(s，3H)，4.09(s，1H)，4.15(dd，J＝12.05，3.81Hz，1H)，4.28(d，J＝11.90Hz，1H)，4.65-4.79(m，1H)，5.77-6.14(m，2H)，7.61(s，1H)，7.76(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)，8.09-8.22(m，2H)，9.30(s，1H).LC-MS(保留时间：2.47min，方法A)，MS m/z686.1(M++H)。
步骤3：
向(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙基)吡咯烷-2-甲酰胺，2HCl(207mg，0.273mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.142mL，0.8l8mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入Fmoc-异硫氰酸酯(97mg，0.327mmol)。使所得棕色反应混合物在25℃下搅拌2h。将反应混合物用0.1M HCl洗涤。有机层有盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩成棕色泡沫状物(11.6g)。使此产物通过快速柱色谱法纯化(SiO2，洗脱使用的梯度为5％～50％丙酮-己烷)，得到(2S，4R)-1-((S)-2-(3-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)硫脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙基)吡咯烷-2-甲酰胺(190mg，0.177mmol，64.8％产率)为白色固体。1H NMR(500MHz，MeOD)δ1.01(m.，2H)，1.10-1.18(s，9H)，1.18-1.29(m，2H)，1.28-1.42(m，1H)，1.58-1.76(m，2H)，2.13-2.26(m，2H)，2.26-2.41(m，1H)，2.65(m，1H)，2.96(m，1H)，3.95-4.10(m，4H)，4.29(t，J＝6.87Hz，1H)，4.39-4.46(m，1H)，4.46-4.55(m，1H)，4.66(dd，J＝10.68，6.71Hz，1 H)，4.79(s，1H)，5.80(m，1H)，5.82-6.10(m，1H)，7.33(t，J＝7.63Hz，2H)，7.42(t，J＝7.48Hz，2H)，7.57(s，1H)，7.68(d，J＝8.55Hz，2H)，7.82(d，J＝7.32Hz，2H)，8.03-8.18(m，2H).LC(保留时间：3.44min，方法A)。
步骤4：
向(2S，4R)-1-((S)-2-(3-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)硫脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙基)吡咯烷-2-甲酰胺(184mg，0.190mmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入哌啶(0.2mL，2.020mmol)。使所形成的淡黄色溶液在25℃下搅拌。2h以后，使用旋转蒸发器在减压下除去溶剂和过量的哌啶。使所得黄色固体置于DCM中，再用0.1N HCl洗涤。有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩成淡黄色固体。通过Biotage柱纯化，洗脱使用的梯度为0-5％MeOH-DCM，不能使需要的产物与副产物分离，因此在此步骤中使所形成的产物使所形成的产物以粗物质用于未来的反应。LC-MS(保留时间：2.89min，方法A)，MS m/z745.2(M++H)。
步骤5：
向(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙基)-1-((S)-3，3-二甲基-2-硫脲基丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(30mg，0.040mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.014mL，0.081mmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入2-溴-1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙酮(22.95mg，0.081mmol)。使所形成的淡黄色溶液在25℃下搅拌。3h后，将反应混合物用MeOH(1mL)稀释，再通过反相HPLC使用以下溶剂系统和条件纯化：溶剂A＝H2O、溶剂B＝MeOH，二者均含有0.1％TFA；15％B至100％B15min，维持100％B5min。将合并的HPLC级分浓缩成几乎干燥，过滤，用水洗涤滤饼。使收集的饼状物在真空中干燥过夜，得到需要的产物(2S，4R)-4-(7-氯-4-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((1R，2S)-1-(环丙基磺酰基氨基甲酰基)-2-(2，2-二氟乙基)环丙基)-1-((S)-2-(4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)噻唑-2-基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(26mg， 0.027mmol，65.9％产率)为灰白色固体。1H NMR(500MHz，MeOD)δ1.10-1.15(m，2H)，1.18(s，9H)，1.24-1.42(m，3H)，1.61-1.75(m，2H)，2.09-2.32(m，3H)，2.45(dd，J＝13.73，6.71Hz，1H)，2.92-3.10(m，1H)，3.95(s，3H)，4.18(dd，J＝11.44，3.51Hz，1H)，4.51(dd，J＝10.83，6.87Hz，1H)，4.87-4.93(m，1H)，4.99(d，J＝10.99Hz，1H)，5.74-6.05(m，1H)，6.08(br.s.，1H)，6.75-6.91(m，2H)，7.37(d，J＝1.83Hz，1H)，7.42(s，1H)，7.52(dd，J＝8.85，2.14Hz，1H)，7.82(ddd，J＝8.39，2.44，2.29Hz，1H)，7.86-8.00(m，2H).LC(保留时间：3.34min，方法A)。
制备化合物98，实施例98
化合物98是以41.5％产率制备的，其根据如制备化合物97所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(3-(4-氯苯基)异唑-5-基)乙酮用于替代步骤5中的-溴-1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δ1.06-1.17(m，2H)，1.19-1.26(m，9H)，1.25-1.40(m，3H)，1.56-1.75(m，2H)，2.11-2.29(m，3H)，2.36(dd，J＝13.58，6.26Hz，1H)，2.96-3.07(m，1H)，3.81(s，3H)，4.21(dd，J＝11.60，3.66Hz，1H)，4.52(dd，J＝10.99，6.71Hz，1H)，4.77-4.86(m，1H)，5.14(d，J＝11.29Hz，1H)，5.75-6.10(m，1H)，6.19-6.32(m，1H)，6.70(s，1H)，7.14(s，1H)，，7.19-7.33(m，5H)，7.40-7.51(m，2H)，7.75(d，J＝8.85Hz，1H).LC(保留时间：3.35min，方法A)。
制备化合物99，实施例99。
化合物99是以41.6％产率制备的，其根据如制备化合物97所述相同操作法，不同的是将2-溴-1-(4-苯氧基苯基)乙酮用于替代步骤5中的-溴-1-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙酮。1H NMR(500MHz，MeOD)δppm1.13(dd，J＝8.09，2.59Hz，2H)，1.15-1.24(m，9H)，1.24-1.41(m，3H)，1.57-1.76(m，2H)，2.07-2.33(m，3H)，2.45(dd，J＝13.73，6.71Hz，1H)，2.94-3.07(m，1H)，3.97(s，3H)，4.19(dd，J＝11.44，3.51Hz，1H)，4.52(dd，J＝10.53，6.87Hz，1H)，4.77-4.86(m，1H)，4.97(t，J＝11.60Hz，1H)，5.72-6.10(m，2H)，6.53(d，J＝8.85Hz，2H)，6.60-6.74(m，3H)，7.02-7.13(m，1H)，7.27(t，J＝7.63Hz，2H)，7.46(s，1H)，7.53-7.67(m，4H)，8.01(d，J＝8.85Hz，1H).LC(保留时间：3.46min，方法A)。
制备化合物100，实施例100：
实施例100流程1
步骤1：
向L-丙氨酸甲酯盐酸盐(0.96g，6.9mmol)和5-氯-1-苯基-1H-四唑(1.26g，7.0mmol)中厚壁反应容器中的混合物中加入铜粉(100mg)和氯化钯(20mg)，以及在干燥的二氧杂环己烷(30mL)中的无水碳酸钾(1.0gm)。使该混悬液温热至120℃形成绿色混合物。此绿色未长时间保持(在120℃下低于20分钟)，然后溶液相回变成非常淡的黄色。连续加热过夜。根据TLC(20％乙酸乙酯v/v的己烷溶液，洗脱2次)，反应中形成了一对非常相似的产物。LCMS显示一对相同分子量的勉强分离峰。使反应混合物用1N HCl洗涤，使有机残余物萃取到乙酸乙酯(2X25mL)中。经正相硅胶柱分离粗产物，得到198mg(12％)的除了未反应的起始物质以外的两种成分的混合物。LCMS[Phenomenex-Luna4.6X50mm S10，在4分钟中0％B至70％B，流速4mL/分钟]Rt＝2.79和2.96分钟，二者均具有相同的[M+H]+＝248.18。部分NMR化学位移记录如下：1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm1.53(d，J＝7.05Hz，3H，对于MeCH)，3.74(s，3H，对于MeO)，对于主要异构体(53％)；1.83(d，J＝7.05Hz，3H，MeCH)，3.77(s，3H，MeO)，对于次要异构体(47％)。此混合物用于下一步骤而未进一步纯化。
步骤2：
在室温下使步骤1的混合的四唑衍生物(198mg，0.8mmol)混悬 在甲醇(2mL)中。加入氢氧化钠溶液(1.0N，0.4mL)，使混合物搅拌一小时以形成澄清溶液。将其用醚(2X5mL)萃取，水相用1N HCl中和。将游离酸萃取到醚中，在高真空下浓缩，得到92.3mg(49.5％)的需要的羧酸。
实施例100流程2
步骤1：
在氮气下使实施例100步骤2流程1的产物(46mg，0.2mmol，异构体的混合物)与实施例6步骤3流程2的产物(105mg，0.2mmol，连同HATU(225mg，0.59mmol)在无水THF(4mL)中混合。在室温下向此混合物中加入Hünig’s碱(50μL，0.3mmol)，连续搅拌过夜。将此粘稠混悬液用0.5N HCl稀释，有机残余物萃取到乙酸乙酯(3X5mL)中。粗产物在制备型HPLC上纯化[YMC combiprep ODS30X50mmS5，在12分钟中30％B至100％B，流速40mL/分钟]，得到两个主要级分，RT为9.6和10.1分钟。较快的级分(35mg)是在反应条件下起始物质环化所得的副产物(实施例6步骤3流程2的产物)。较慢的级分是需要的产物(58mg，39％，100A和100B的混合物)。LCMS[Phenomenex-Luna4.6X50mm S10，洗脱使用在4分钟中40％B至100％B，流速4mL/分钟]Rt＝3.313，[M+H]+＝750.33。部分NMR化学位移记录如下：1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-D)δppm1.45 (d，J＝6.80Hz，3H，对于MeCH)，3.976(s，3H，对于MeO)，对于主要异构体(～2/3)；1.33(d，J＝6.80Hz3H，MeCH)，3.984(s，3H，MeO)，对于次要异构体(～1/3)。
生物学研究
在本发明公开中使用HCV NS3/4A蛋白酶复合酶检定并基于细胞的HCV复制子检定，其制备、执行和验证如下：
产生重组性HCVNS3/4A蛋自酶复合物
如下所述，产生自BMS菌株、H77菌株或J4L6S菌株衍生的HCV NS3蛋白酶复合物。产生此类经纯化的重组蛋白以用于均相检定(参见下文)，从而提供本发明公开化合物如何有效抑制HCV NS3蛋白水解活性的指示。
来自HCV感染患者的血清得自旧金山医院Dr.T.Wright。HCV基因组(BMS菌株)的工程化全长cDNA(互补脱氧核糖核酸)模板是通过血清RNA(核糖核酸)的逆转录-PCR(RT-PCR)获得的DNA片段，并使用基于其他基因型1a菌株之间的同源性所选择的引物而建构。根据整个基因组序列的测定，根据Simmonds等人的分类(参见P Simmonds，KA Rose，S Graham，SW Chan，F Mcomish，BC Dow，EAFollett，PL Yap and H Marsden，J.Clin.Microbiol.，31(6)，1493-1503(1993))将基因型1a归类为HCV分离株。非结构区域NS2-5B的氨基酸序列显示与HCV基因型1a(H77)的一致性＞97％，并且与基因型1b(J4L6S)87％一致。感染性克隆H77(1a基因型)和J4L6S(1b基因型)由R.Purcell(NIH)获得并且序列公开于Genbank中(AAB67036，参见Yanagi，M.，Purcell，R.H.，Emerson，S.U.and Bukh，J.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94(16)，8738-8743(1997)；AF054247，参见Yanagi，M.，St Claire，M.，Shapiro，M.，Emerson，S.U.，Purcell，R.H.and Bukh，J，Virology244(1)，161-172.(1998))。
使用H77和J4L6S菌株来制造重组性NS3/4A蛋白酶复合物。如P.Gallinari等人(参见Gallinari P，Paolini C，Brennan D，Nardi C，Steinkuhler C，De Francesco R.Biochemistry.38(17)：5620-32，(1999))所描述，操纵编码此类菌株的重组性HCV NS3/4A蛋白酶复合 物(氨基酸1027至1711)的DNA。简言之，将三个赖氨酸的溶解尾部添加于NS4A编码区域之3’-末端处。将NS4A-NS4B裂解位点的P1位置(氨基酸1711)中的半胱氨酸改变为甘氨酸，以避免赖氨酸标签的蛋白水解分解。此外，通过氨基酸位置1454处的PCR引入半胱氨酸成为丝氨酸的突变以预防NS3解螺旋酶域中的自溶分解。遵循并修改P.Gallinari等人所描述的方案(参见Gallinari P，Brennan D，Nardi C，Brunetti M，Tomei L，Steinkuhler C，De Francesco R.，J Virol.72(8)：6758-69(1998))，将变异DNA片段克隆于pET21b细菌表达载体(Novagen)中并将NS3/4A复合物表达于大肠杆菌菌株BL21(DE3)(Invitrogen)中。简言之，在20℃下以0.5毫摩尔(mM)异丙基β-D-1-硫代哌喃半乳糖苷(IPTG)诱导NS3/4A蛋白酶复合物表达历时22小时(h)。典型发酵作用(1升(L))产生约10克(g)的湿细胞浆状物。将细胞再悬浮于溶胞缓冲剂(10mL/g)中，使其均化且在4℃下培育20分钟(min)，该溶胞缓冲剂包括25mMN-(2-羟基乙基)哌嗪-N′-(2-乙烷磺酸)(HEPES)，pH7.5、20％甘油、500mM氯化钠(NaCl)、0.5％TritonX-100、1微克/毫升(″μg/m L″)溶菌酶、5mM氯化镁(MgCl2)、1μg/mlDnaseI、5mMβ-巯基乙醇(βME)、无乙二胺四乙酸(EDTA)的蛋白酶抑制剂(Roche)。对匀浆进行超音波处理并通过在4℃下在235000g下超速离心1小时(h)而使其澄清。将咪唑添加至上清液中直至15mM的最终浓度并将pH值调节至8.0。将粗蛋白质萃取物装载至以缓冲剂B(25mM HEPES，pH8.0、20％甘油、500mM NaCl、0.5％Triton X-100、15mM咪唑、5mMβME)达到预平衡的镍-氮基三乙酸(Ni-NTA)柱上。以1mL/min的流速装载样品。以15柱体积的缓冲剂C(除具有0.2％Triton X-100之外，与缓冲剂B相同)洗涤柱子。以5柱体积的缓冲剂D(除具有200mM咪唑之外，与缓冲剂C相同)洗脱蛋白质。
汇集合有NS3/4A蛋白酶复合物的级份，将其装载至以缓冲剂D(25mM HEPES，pH7.5、20％甘油、300mM NaCl、0.2％Triton X-100、10mMβME)达到预平衡的脱盐柱Superdex-S200上。以1mL/min流动速率装载样品。汇集含有NS3/4A蛋白酶复合物的级份，将其浓缩至约0.5mg/ml。通过SDS-PAGE和质谱分析判定自BMS、H77和J4L6S菌株衍生的NS3/4A蛋白酶复合物的纯度大于90％。将酶储存于-80℃，在冰上解冻，并在用于检定缓冲剂中之前加以稀释。
监测HCVNS3/4A蛋白水解活性的FRET肽检定
此体外检定的目的是测量本发明公开化合物对如上所述自BMS菌株、H77菌株或J4L6S菌株衍生的HCV NS3蛋白酶复合物的抑制作用。此检定提供本发明公开化合物如何有效抑制HCV NS3蛋白水解活性的指示。
为了监控HCV NS3/4A蛋白酶活性，使用NS3/4A肽底物。该底物为Taliani等人在Anal.Biochem.240(2)：60-67(1996)中所述的RET S1(共振能量传递缩肽底物；AnaSpec，Inc.cat#22991)(FRET肽)。除在分解位点处存在酯键连接而非酰胺键之外，此肽的序列大概基于HCV NS3蛋白酶的NS4A/NS4B天然分解位点。该肽还含有接近肽的一个末端的荧光供体EDANS以及接近另一末端的受体DABCYL。肽的荧光通过供体与受体之间的分子间共振能量传递(RET)而猝灭，但当NS3蛋白酶分解该肽时，从RET猝灭释放产物并且供体的荧光变得明显。
在不存在或存在本发明公开的化合物的情况下，将肽底物与三种重组性NS3/4A蛋白酶复合物中的一种一起培育。通过使用Cytofluor Series4000实时监控荧光反应产物的形成来测定化合物的抑制效应。
试剂如下：HEPES和甘油(Ultrapure)得自GIBCO-BRL。二甲亚砜(DMSO)获自Sigma。β-巯基乙醇获自Bio Rad。
检定缓冲剂：50mM HEPES，pH7.5；0.15M NaCl；0.1％Triton；15％甘油；10mMβME。底物：2μM最终浓度(来自储存于-20℃下的DMSO中的2mM储备溶液)。HCV NS3/4A蛋白酶1a型(1b)，2-3nM最终浓度(来自25mM HEPES，pH7.5、20％甘油、300mM NaCl、0.2％Triton-X100、10mMβME中的5μM储备溶液)。对于效能接近检定限度的化合物，通过将50μg/ml牛血清白蛋白(Sigma)添加至检定缓冲剂中及减少终点蛋白酶浓度至300pM而使检定更加敏感。
在来自Falcon的96孔聚苯乙烯黑板中进行检定。每一孔含有检定缓冲剂中的25μl NS3/4A蛋白酶复合物、10％DMSO/检定缓冲剂中的50μl本发明公开的化合物及检定缓冲剂中的25μl底物。还在同一检定板上制备对照(无化合物)。将酶复合物与化合物或对照溶液混合1min，接着通过添加底物而开始酶促反应。立即使用Cytofluor Series4000(Perspective Biosystems)读取检定板。将仪器设定为在25℃ 下读取340nm的发射和490nm的激发。通常追踪反应约约15min。
以以下方程计算抑制百分比：
100-[(δFinh/δFcon)x100]
其中δF为曲线的线性范围内的荧光变化。将非线性曲线拟合应用于抑制浓度数据，并使用方程式y＝A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))通过使用Excel XLfit软件来计算50％有效浓度(IC50)。
虽然本发明公开的化合物始终证实与1a菌株相比对于1b菌株的效能更大，但针对一种以上类型的NS3/4A复合物所测试，发现本发明公开的化合物具有相似抑制性质。
特异性检定
进行特异性检定以证实如与其他丝氨酸或半胱氨酸蛋白酶相比，本发明公开的化合物在体外选择性抑制HCV NS3/4A蛋白酶复合物。
针对多种丝氨酸蛋白酶来测定本发明公开的化合物的特异性：人嗜中性细胞弹性蛋白酶(HNE)、猪胰弹性蛋白酶(PPE)及人类胰凝乳蛋白酶以及一种半胱氨酸蛋白酶：人类肝脏组织蛋白酶B。在所有情况下，如先前所描述(PCT专利申请No.WO00/09543)，并伴以丝氨酸蛋白酶检定的一些修改，使用利用每一种酶的特异性荧光氨基-甲基-香豆紊(AMC)底物的96孔板格式方案。所有酶均购自Sigma，EMDbiosciences，而底物来自Bachem、Sigma和EMDbiosciences。
视效能而定，化合物浓度自100至0.4μM变化。该酶检定各自是通过将底物添加至室温下预培育10min的酶-抑制剂中且如cytofluor上所测量水解直至15％转化率而开始的。
每一检定的最终条件如下：
50mM Tris(羟基甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)pH8、0.5M硫酸钠(Na28O4)、50mM NaCl、0.1mM EDTA、3％DMSO、0.01％Tween-20和5μM LLVY-AMC以及1nM胰凝乳蛋白酶。
50mM Tris-HCl，pH8.0，50mM NaCl，0.1mM EDTA，3％DMSO，0.02％Tween-20，5μM succ-AAPV-AMC和20nM HNE或8nM PPE；
100mM NaOAC(乙酸钠)pH5.5，3％DMSO，1mM TCEP(Tris(2-羧基乙基)膦盐酸盐)，5nM组织蛋白酶B(使用之前在含有20mM TCEP的缓冲剂中活化的酶原料)以及在H2O中稀释的2μMZ-FR-AMC。
使用下式来计算抑制百分比：
[1-((UVinh-UV空白)/(UVctl-UV空白))]x100
将非线性曲线拟合应用于抑制-浓度数据，并通过使用Excel XLfit软件来计算50％有效浓度(IC50)。
HCV复制子的产生
如Lohmann V，Korner F，Koch J，Herian U，Theilmann L，Bartenschlager R.，Science285(5424)：110-3(1999)所描述，建立HCV复制子全细胞系统。此系统使得我们能够评估HCV蛋白酶化合物对于HCV RNA复制的效应。简言之，使用Lohmann论文(保藏号：AJ238799)中所述的HCV菌株1b序列，通过Operon Technologies，Inc.(Alameda，CA)合成HCV cDNA，并且随后使用标准分子生物学技术在质粒pGem9zf(+)(Promega，Madison，WI)中组装全长复制子。该复制子是由(i)与衣壳蛋白质的前12个氨基酸融合的HCV5’UTR、(ii)新霉素磷酸转移酶基因(neo)、(iii)来自脑心肌炎病毒(EMCV)的IRES以及(iv)HCV NS3至NS5B基因和HCV3’UTR组成。以ScaI使质体DNA线性化并使用T7MegaScript转录试剂盒(Ambion，Austin，TX)，根据制造商说明书在活体外合成RNA转录物。将cDNA的体外转录物转染到人类肝癌细胞株HUH-7中。在可选标记物新霉素(G418)存在下达到结构性表达HCV复制子的细胞的选择。表征所得细胞株随时间的正链及负链RNA产生及蛋白质产生。
HCV复制子FRET检定
开发HCV复制子FRET检定以监控本发明公开中所述化合物对于HCV病毒复制的抑制效应。使结构性表达HCV复制子的HUH-7细胞生长于含有10％胎牛血清(FCS)(Sigma)及1mg/ml G418(Gibco-BRL)的Dulbecco氏改良Eagle培养基(DMEM)(Gibco-BRL)中。在前一晚，已将细胞(1.5x104细胞/孔)接种于96孔组织培养无菌板中。在稀释板中的含有4％FCS、1：100青霉素/链霉素(Gibco-BRL)、 1：100L-谷氨酰胺和5％DMSO的DMEM中(检定中，DMSO最终浓度为0.5％)制备化合物和无化合物对照物。将化合物/DMSO混合物添加至细胞中并在37℃下培育4天。4天之后，首先使用阿尔玛蓝(alamar Blue)(Trek Diagnotstic Systems)来评定细胞的细胞毒性以获得CC50读数。通过将1/10体积的阿尔玛蓝添加至培育细胞的培养基中来测定化合物的毒性(CC50)。4h之后，使用Cytofluor Series4000(Perspective Biosystems)，以530nm下的激发波长和580nm的发射波长读取来自每一孔的荧光信号。随后，以磷酸盐缓冲生理食盐水(PB S)充分冲洗各板150μl，3次)。以含有HCV蛋白酶底物(以蒸馏水稀释至1X的5X细胞荧光素酶细胞培养溶胞试剂(Promega#E153A)、添加至最终150mM的NaCl、来自100％DMSO中的2mM原料稀释至最终10μM的FRET肽底物(如以上对于酶检定所描述))的25μl溶胞检定试剂溶解细胞。随后，将板置于已设定至340nm激发/490nm发射(自动模式)的Cytofluor4000仪器中历时21个循环并且以动态模式读取该板。如关于IC50测定所描述，进行EC50测定。
HCV复制子荧光素酶报导子检定
作为第二检定，在复制子荧光素酶报导子检定中确认来自复制子FRET检定的EC50测定。首先，由Krieger等人(Krieger N，Lohmann V，and Bartenschlager R，J.Virol.75(10)：4614-4624(2001))描述利用复制子荧光素酶报导子检定。通过插入编码海肾(Renilla)荧光素酶基因的人类化形式的cDNA以及直接与该荧光素酶基因的3’-末端融合的连接子序列来修饰关于FRET检定所描述的复制子构建体。使用正好在新霉素标记基因上游、位于核心中的Asc l限制位点将此插人物引入复制子构筑体中。还引入位置1179处的适应性突变(丝氨酸至异亮氨酸)(Blight KJ，Kolykhalov，AA，Rice，CM，Science290(5498)：1972-1974)。如上所述，产生结构性表达此HCV复制子构建体的稳定细胞株。如关于HCV复制子FRET检定所描述并伴以以下修改来建立荧光素酶报导子检定。在37℃/5％CO2恒温箱中4天之后，使用Promega Dual-Glo荧光素酶检定系统来分析细胞的海肾荧光素酶活性。从含有细胞的每一孔中移除培养基(100μl)。向剩余50μl培养基中添加50μl的Dual-Glo荧光素酶试剂，并在室温下将板摇动10min 至2h。随后，将Dual-Glo Stop&Glo试剂(50μl)添加至每一孔中，并在室温下再次将板摇动另外10min至2h。使用发光程序，在Packard TopCount NXT上读取各板。
使用下式来计算抑制百分比：
将数据绘图，再使用XLfit分析以获得EC50数据。
在HCV酶检定、HCV复制子细胞检定和/或若干概述的特异性检定中评定本发明公开的代表性化合物。例如，发现化合物68在酶检定中相对于NS3/4A BMS菌株具有4纳摩尔(nM)的IC50。以公开的H77(1.9nM的IC50)和J4L6S(0.9nM的IC50)菌株获得相似效能值。复制子FRET检定中的EC50值在复制子荧光素酶检定中为5.7nMt和2nM。在特异性检定中，发现相同化合物具有以下活性：HLE＞50μM；PPE＞50μM；胰凝乳蛋白酶＝3μM；组织蛋白酶B15μM。这些结果表明此家族的化合物对于NS3蛋白酶具有高度特异性并且它们中的许多抑制HCV复制子复制。
测试本发明公开的化合物并且发现其具有如下范围的活性：
IC50活性范围(对于所测试的化合物)：A＞200nM；B为20-200nM；C为1-20nM。
EC50活性范围(NS3/4A BMS菌株)：A＞200nM；B为50-200nM；C为1-50nM。
表2
| 试验号 | IC50范围 | EC50范围 |
| 1 | C | C |
| 2 | C | C |
| 3 | C | C |
| 4 | C | C |
| 5 | C | C |
[0855]
| 6 | C | C |
| 7 | C | C |
| 8 | C | C |
| 9 | C | C |
| 10 | C | C |
| 11 | C | C |
| 12 | C | C |
| 13 | C | C |
| 14 | C | C |
| 15 | C | C |
| 16 | 1.00nM | 6.57nM |
| 17 | 11.00nM | 8.95nM |
| 18A | 54.00nM | 78.11nM |
| 18B | 2500.00nM | --- |
| 19 | C | C |
| 20 | 3.00nM | 3.91nM |
| 21 | C | C |
| 22 | C | C |
| 23 | B | C |
| 24 | B | C |
| 25 | C | C |
| 26 | C | C |
| 27 | 2.00nM | 5.26nM |
| 28 | C | C |
| 29 | C | C |
| 30 | C | C |
| 31 | C | C |
| 32 | C | C |
| 33 | 9.00nM | 6.84nM |
| 34 | C | C |
| 35 | C | C |
[0856]
| 36 | C | C |
| 37 | B | C |
| 38 | C | C |
| 39 | C | C |
| 40 | C | C |
| 41 | C | C |
| 42 | C | C |
| 43 | C | C |
| 44 | C | C |
| 45 | C | C |
| 46 | C | C |
| 47 | C | C |
| 48 | C | C |
| 49 | C | C |
| 50 | 39.00nM | 18.93nM |
| 51 | C | C |
| 52 | C | C |
| 53 | 17.00nM | 20.30nM |
| 54 | C | C |
| 55 | C | C |
| 56 | C | C |
| 57 | C | C |
| 58 | C | C |
| 59 | C | C |
| 60 | C | --- |
| 61 | C | --- |
| 62 | C | |
| 63 | C | |
| 64 | C | |
| 65 | C | |
| 66 | C |
[0857]
| 67 | B | |
| 68 | C | |
| 69 | C | |
| 70 | 89.00nM | --- |
| 71 | B | --- |
| 72 | C | --- |
| 73 | C | --- |
| 74 | 2.00nM | --- |
| 75 | C | --- |
| 76 | C | --- |
| 77 | C | --- |
| 78 | C | --- |
| 79 | C | --- |
| 80 | C | --- |
| 81 | C | --- |
| 82 | C | --- |
| 83 | C | --- |
| 84 | C | |
| 85 | C | C |
| 86 | 2.00nM | |
| 87 | C | |
| 88 | C | |
| 89 | C | |
| 90 | C | |
| 91 | C | |
| 92 | C | C |
| 93 | C | C |
| 94 | C | |
| 95 | 17.00nM | |
| 96 | C | |
| 97 | C | C |
[0858]
| 98 | C | C |
| 99 | B | B |
| 1OO | 795.0nM | 334.4nM |
对于本领域技术人员显而易见的是，本发明公开不限于前述说明性实施例，并且其可以以其它具体形式来体现而不会脱离其基本特征。因此期望，所述实施例在所有方面被认为是作为说明性的而非限制性的，可以参考所附权利要求书，而不是前面的实施例，并且符合权利要求等同物的含义和范围内的所有改变均涵盖在其中。
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1.下式化合物
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Granted publication date: 20161116 Termination date: 20190409 |
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