CN102099359A - 丙型肝炎病毒抑制剂 - Google Patents

Abstract

公开了通式(I)的丙型肝炎病毒抑制剂。还公开了包含所述化合物的组合物和使用所述化合物抑制HCV的方法。

Description

丙型肝炎病毒抑制剂

相关申请的交叉参考

本申请要求于2008年5月15日提交的第61/053,489系列号美国临时申请的优先权。

本申请公开一般涉及抗病毒化合物，更具体涉及抑制由丙型肝炎病毒(HCV)编码的NS3蛋白酶(本文中也称作“丝氨酸蛋白酶”)功能的化合物，包含这类化合物的组合物和抑制NS3蛋白酶功能的方法。

HCV是主要的人类病原体，其在世界范围内感染估计一亿七千万人-1型人免疫缺陷病毒感染人数的大致5倍。这些HCV感染个体中的相当一部分发展成严重的进行性肝病，包括肝硬化和肝细胞癌。

目前，最有效的HCV疗法采用α-干扰素和利巴韦林的组合，在40％患者中产生持久效力。最近的临床结果表明，作为单一疗法，聚乙二醇化的α-干扰素优于未改性的α-干扰素。但是，即使使用包括聚乙二醇化α-干扰素和利巴韦林的组合的实验治疗方案，相当一部分患者的病毒载量也没有持续降低。因此，开发用于治疗HCV感染的有效疗法是明显的长期需求。

HCV是正链RNA病毒。基于推导的氨基酸序列的比较和5’未翻译区中的广泛相似性，HCV已经被归为黄病毒科中的单独一类。黄病毒科的所有成员都包被着含有通过单一的未中断开放阅读框的翻译来编码所有已知病毒特异性蛋白质的正链RNA基因组的病毒颗粒。

在整个HCV基因组中，在核苷酸与编码的氨基酸序列内发现显著的多样性。已经表征了至少六种主要基因型，并且已经描述了多于50种亚型。HCV的主要基因型的全球分布不同，且HCV的基因多样性的临床重要性仍难以捉摸，尽管在基因型对发病机理和治疗的可能影响方面作出了许多研究。

单链HCV RNA基因组为大约9500个核苷酸长度并具有为大约3000个氨基酸的单个大聚合蛋白质编码的单一开放阅读框(ORF)。在感染的细胞中，这种聚合蛋白在多个位置被细胞和病毒蛋白酶分裂而产生结构性和非结构性(NS)蛋白。在HCV的情况下，通过两种病毒蛋白酶实现成熟的非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的生成。第一种被认为在NS2-NS3接点处分裂；第二种是包含在NS3的N-末端区域中的丝氨酸蛋白酶并介导NS3下游的所有后继分裂，既包括顺式(在NS3-NS4A分裂位点)也包括反式(对于其余NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位点而言)。NS4A蛋白看似发挥多重功能——充当NS3蛋白酶的辅因子，并可能有助于NS3和其它病毒复制酶组分的膜定位。NS3蛋白与NS4A的复合物形成看起来是加工事件所必须的，从而提高所有位点处的蛋白水解效率。该NS3蛋白也表现出核苷三磷酸酶和RNA解旋酶活性。NS5B是参与HCV复制的RNA依赖型RNA聚合酶。

本申请公开内容提供了能够抑制NS3蛋白酶，例如与NS4A蛋白酶联合的NS3蛋白酶的功能的肽类化合物。此外，本申请公开内容描述了对患者给予联合治疗，由此可以将有效抑制HCV NS3蛋白酶的本发明化合物与一种或两种具有抗HCV活性的另外化合物联合给药。

在第一个方面，本申请公开内容提供了式(I)化合物

或其药学上可接受的盐，其中

Q是C_3-9饱和的或不饱和的链，任选地含有一至三个独立地选自O、S(O)_m、和NR⁸的杂原子；其中m是0、1或2，并且R⁸选自氢、烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、氨基羰基、芳基磺酰基、环烷基、(环烷基)烷基、环烷基氧基、二烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基烷基、卤代烷基和杂环基羰基；

R¹选自烷基羰基、芳基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、杂环基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、和(NR^gR^h)羰基；其中所述芳基，所述芳基烷基、所述芳基烷基羰基和所述芳基羰基的芳基部分，所述杂环基，和所述杂环基烷基和所述杂环基烷基羰基的杂环基部分各自被一至六个R⁷基团任选取代；

R²选自烷基、芳基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、和-NR^aR^b，其中所述烷基、所述环烷基和所述(环烷基)烷基的环烷基部分被一个、两个或三个选自烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、环烯基、(环烷基)烷基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、和(NR^eR^f)羰基的取代基任选取代；

R³和R⁴独立地选自氢、烷氧基烷基、烷基、卤代烷氧基烷基、和卤代烷基；

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基；

R⁶选自苯基和五元或六元任选含有一个、两个、三个或四个选自氮、氧和硫的杂原子的部分或完全不饱和环；其中每个环被一个、两个、三个或四个独立选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基(alkylsulfanyl)、芳基、羧基、氰基、环烷基、环烷基氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、-NR^cR^d、(NR^eR^f)羰基、(NR^eR^f)磺酰基、和氧代的取代基任选取代；条件是当R⁶是六元的被取代环时，除氟以外的所有环上取代基必须在相对于该环与母体分子部分连接点的间位和/或对位；

每个R⁷独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、羧基、氰基、氰基烷基、环烷基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、杂环基、羟基、羟基烷基、硝基、-NR^cR^d、(NR^cR^d)烷基、(NR^cR^d)烷氧基、(NR^eR^f)羰基、和(NR^eR^f)磺酰基；或者

两个相邻的R⁷基团连同它们所连接碳原子一起形成四至七元部分或完全不饱和环，所述环任选地含有一个或两个独立地选自氮、氧、和硫的杂原子，其中所述环被一、二、或三个独立地选自烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、和卤代烷基的基团任选取代；

R^a和R^b独立地选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、和杂环基烷基；或者R^a和R^b连同它们所连接氮原子一起形成四至七元单环杂环；

R^c和R^d独立地选自氢、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基烷基、和卤代烷基；

R^e和R^f独立地选自氢、烷基、芳基、芳基烷基、和杂环基；其中所述芳基、所述芳基烷基的芳基部分、和杂环基被一个或两个独立地选自烷氧基、烷基、和卤素的取代基任选取代；和

R^g和R^h独立地选自氢、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、和杂环基；或者R^g和R^h连同它们所连接氮原子一起形成单环杂环，其中，所述单环杂环任选地稠合至苯环以形成双环体系；其中，所述单环杂环和双环体系被一个、两个或三个独立地选自烷氧基、烷基、卤素、卤代烷氧基、和卤代烷基的取代基任选取代。

在第一方面的第一种实施方式中，本申请公开内容提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中R²选自烷基和环烷基，其中，所述的环烷基被一个选自烯基、烷氧基、烷基、和卤素的取代基任选取代。

在第一方面的第二种实施方式中，本申请公开内容提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹选自杂环基和(NR^gR^h)羰基，其中所述杂环基被一至六个R⁷基团任选取代。在第三种实施方式中，R¹是杂环基。在第四种实施方式中，所述杂环基是被一个或两个R⁷基团任选取代的异喹啉基。

在第一方面的第五种实施方式中，本申请公开内容提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中R³和R⁴各自是氢并且Q是不含杂原子的C₆不饱和链。

在第一方面的第六种实施方式中，本申请公开内容提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中

Q是不含杂原子的C₆不饱和链；

R¹是杂环基，其中所述杂环基是被一个或两个R⁷基团任选取代的异喹啉基；

R²选自烷基和环烷基，其中，所述的环烷基被一个选自烯基、烷氧基、烷基、和卤素的取代基任选取代；

R³和R⁴各自是氢；并且

R⁶是含有一个氮原子的六元完全不饱和环，其中该环被一个、两个、三个或四个独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基、芳基、羧基、氰基、环烷基、环烷基氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、-NR^cR^d、(NR^eR^f)羰基、(NR^eR^f)磺酰基、和氧代的取代基任选取代；条件是除氟以外的所有环上取代基必须在相对于该环与母体分子部分连接点的间位和/或对位。

在第二方面中，本申请公开内容提供了一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。在第二方面的第一种实施方式中，所述组合物进一步包含至少一种具有抗HCV活性的另外的化合物。在第二方面的第二种实施方式中，另外的化合物中的至少一种是干扰素或利巴韦林。在第二方面的第三种实施方式中，所述干扰素选自干扰素α-2B、聚乙二醇化干扰素α、共有序列干扰素、干扰素α-2A、和类淋巴母细胞干扰素τ(lymphoblastiod interferon tau)。

在第二方面的第四种实施方式中，本申请公开内容提供了一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的载体、和至少一种具有抗HCV活性的另外的化合物；其中另外的化合物中的至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助性T细胞应答的发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、肌苷5’-单磷酸酯脱氢酶抑制剂、金刚烷胺、和金刚乙胺。

在第二方面的第五种实施方式中，本申请公开内容提供了一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的载体、和至少一种具有抗HCV活性的另外的化合物；其中另外的化合物中的至少一种有效抑制选自以下的靶标的功能，以用于HCV感染的治疗：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入(entry)、HCV组装、HCV放出(egress)、HCV NS5A蛋白、和IMPDH。

在第三方面，本申请公开内容提供了在患者中治疗HCV感染的方法，包括将治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐给予患者。在第三方面的第一种实施方式中，所述方法进一步包括将至少一种具有抗HCV活性的另外的化合物在式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后、或同时给药。在第三方面的第二种实施方式中，所述另外的化合物中的至少一种是干扰素或利巴韦林。在第三方面的第四种实施方式中，所述干扰素选自干扰素α-2B、聚乙二醇化干扰素α、共有序列干扰素、干扰素α-2A、和类淋巴母细胞干扰素τ。

在第三方面的第五种实施方式中，本申请公开内容提供了在患者中治疗HCV感染的方法，包括将治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种具有抗HCV活性的另外的化合物在式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予患者，其中所述另外的化合物中的至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助性T细胞应答的发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、肌苷5’-单磷酸酯脱氢酶抑制剂、金刚烷胺、和金刚乙胺。

在第三方面的第六种实施方式中，本申请公开内容提供了在患者中治疗HCV感染的方法，包括将治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种具有抗HCV活性的另外的化合物在式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予患者，其中另外的化合物中的至少一种有效抑制选自以下的靶标的功能，以用于HCV感染的治疗：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV放出、HCV NS5A蛋白、和IMPDH。

在第四方面，本申请公开内容提供了一种组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐，以及一种、两种、三种、四种或五种具有抗HCV活性的另外的化合物和药学上可接受的载体。在第四方面的第一种实施方式中，所述组合物包含三种或四种具有抗HCV活性的另外的化合物。在第四方面的第二种实施方式中，所述组合物包含一种或两种具有抗HCV活性的另外的化合物。

在第五方面，本申请公开内容提供了一种在患者中治疗HCV感染的方法，包括将治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种、两种、三种、四种或五种具有抗HCV活性的另外的化合物在式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予患者。在第一方面的第一种实施方式中所述方法包括给予三种或四种具有抗HCV活性的另外的化合物。在第一方面的第二种实施方式中所述方法包括给予一种或两种具有抗HCV活性的另外的化合物。

本发明公开内容的其他方面可包括本文公开的实施方式的适当组合。

还有的其它方面和实施方式可见于本文所提供的说明书。

本发明公开内容的说明书应当被解释为与化学成键的定律和原则相一致。在某些实例中，可能需要脱去氢原子以在任意的规定位置为取代基提供位置。

应当理解本发明公开所包括的化合物是作为药物使用时适当稳定的那些。

意图使分子中特定位置的任意取代基或变量的定义独立于它在那个分子中其它地方的定义。

本说明书中引用的所有专利、专利申请和参考文献以其全文结合至本文作为参考。在出现矛盾的情况下，本发明公开内容，包括定义将是优先的。

用于本说明书中时，以下术语具有下述含义：

本文中所使用的的单数形式“一(“a”、“an”)”、和“该(或其，the)”包括复数形式所指代的内容，除非上下文中清楚地指示了其他方式。

除非另有指示，本发明公开内容的所有芳基、环烷基和杂环基基团可以如它们各自定义中的每一个描述那样被取代。例如，芳基烷基基团的芳基部分可以如术语“芳基”的定义中所描述那样被取代。

在某些实例中，任何特定基团中的碳原子数表示在所列举的基团之前。例如，术语“C₆烷基”表示含有六个碳原子的烷基基团。如果存在这些名称，则它们取代此处包含的所有其它定义。

本文中所使用的的单数形式“一(“a”、“an”)”、和“该(或其，the)”包括复数形式所指代的内容，除非上下文中清楚地指示了其他方式。

本文中使用的术语“烯基”是指包含至少一个碳碳双键的二至六个碳原子的直链或支链基团。

本文中使用的术语“烷氧基”是指通过氧原子连接至母体分子部分的烷基基团。

本文中使用的术语“烷氧基烷基”是指被一个、两个或三个烷氧基基团取代的烷基。

本文中使用的术语“烷氧基羰基”是指通过羰基连接至母体分子部分的烷氧基基团。

本文中使用的术语“烷基”是指衍生自包含一至十个碳原子的直链或支链饱和烃的基团。

本文中使用的术语“烷基羰基”是指通过羰基连接至母体分子部分的烷基基团。

本文中使用的术语“烷基硫烷基”是指通过硫原子连接至母体分子部分的烷基基团。

本文中使用的术语“烷基磺酰基”是指通过磺酰基连接至母体分子部分的烷基基团。

本文中使用的术语“氨基羰基”是指通过羰基连接至母体分子部分的-NH₂基团。

本文中使用的术语“芳基”是指苯基；或双环稠环体系，其中所述环的一个或二者都是苯基。双环稠环体系由苯基稠合至四至六元芳香性或非芳香性碳环构成。本发明公开内容的芳基基团可以通过基团中任何可被取代的碳原子连接至母体分子部分。芳基基团的典型实例包括但不限于茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。本发明公开内容的芳基基团可以被一个、两个、三个、四个或五个取代基任选取代，所述取代基独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、羧基、环烷基、环烷基氧基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、硝基、-NR^cR^d、(NR^cR^d)羰基和氧代。

本文中使用的术语“芳基烷基”是指被一个、两个或三个芳基基团取代的烷基基团。

本文中使用的术语“芳基烷基羰基”是指通过羰基连接至母体分子部分的芳基烷基基团。

本文中使用的术语“芳基羰基”是指通过羰基连接至母体分子部分的芳基基团。

本文中使用的术语“芳基磺酰基”是指通过磺酰基连接至母体分子部分的芳基基团。

本文中使用的术语“羰基”是指-C(O)-。

本文中使用的术语“羧基”是指-CO₂H。

本文中使用的术语“氰基”是指-CN。

本文中使用的术语“氰基烷基”是指被一个、两个或三个氰基基团取代的烷基基团。

本文中使用的术语“环烯基”是指具有三至十四个碳原子和零个杂原子的非芳香性部分不饱和单环、双环或三环体系。环烯基基团的典型实例包括但不限于环己烯基、八氢萘烯基(octahydronaphthalenyl)和降冰片烯基。

本文中使用的术语“环烷基”是指具有三至十个碳原子和零个杂原子的饱和单环或双环烃环体系。环烷基基团的典型实例包括但不限于环丙基、环丁基和环戊基。

本文中使用的术语“(环烷基)烷基”是指被一个、两个或三个环烷基基团取代的烷基基团。

本文中使用的术语“环烷基氧基”是指通过氧原子连接至母体分子部分的环烷基基团。

本文中使用的术语“二烷基氨基羰基”是指通过羰基连接至母体分子部分的-NR’R”基团，其中R’和R”是相同或不同的烷基基团。

本文中使用的术语“二烷基氨基羰基烷基”是指被一个、两个或三个二烷基氨基羰基基团取代的烷基基团。

本文中使用的术语“卤代”和“卤素”是指F、Cl、Br和I。

本文中使用的术语“卤代烷氧基”是指通过氧原子连接至母体分子部分的卤代烷基。

本文中使用的术语“卤代烷氧基烷基”是指被一个、两个或三个卤代烷氧基基团取代的烷基基团。

本文中使用的术语“卤代烷基”是指被一个、两个、三个或四个卤素原子取代的烷基基团。

本文中使用的术语“杂环基”是指含有一个、两个或三个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的五元、六元或七元环。所述五元环具有零至二个双键且所述六元和七元环具有零至三个双键。术语“杂环基”还包括双环基团，其中的杂环稠合至四元至六元芳香性或非芳香性碳环或另一个单环杂环基团。本申请公开内容的杂环基基团可以通过基团中的碳原子或氮原子连接至母体分子部分。杂环基基团的实例包括但不限于：苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、噁唑基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、噻唑基、噻吩基和硫代吗啉基。本发明公开内容的杂环基基团可以被一个、两个、三个、四个或五个取代基任选取代，所述取代基独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、羧基、环烷基、环烷基氧基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、硝基、-NR^cR^d、(NR^cR^d)羰基和氧代。

本文中使用的术语“杂环基烷基”是指被一个、两个或三个杂环基基团取代的烷基基团。

本文中使用的术语“杂环基烷基羰基”是指通过羰基基团连接至母体分子部分的杂环基烷基基团。

本文中使用的术语“杂环基羰基”是指通过羰基基团连接至母体分子部分的杂环基基团。

本文中使用的术语“羟基”是指-OH。

本文中使用的术语“羟基烷基”是指被一个、两个或三个羟基基团取代的烷基基团。

本文中使用的术语“硝基”是指-NO₂。

本文中使用的术语“-NR^aR^b”是指R^a和R^b这两个基团通过氮原子连接至母体分子部分。R^a和R^b独立地选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、和杂环基烷基；或者R^a和R^b连同它们所连接的氮原子一起形成五元或六元单环杂环。

本文中使用的术语“-NR^cR^d”是指R^c和R^d这两个基团通过氮原子连接至母体分子部分。R^c和R^d独立地选自氢、烷氧基羰基、烷基和烷基羰基。

本文中使用的术语“(NR^cR^d)烷氧基”是指通过氧原子连接至母体分子部分的(NR^cR^d)烷基基团。

本文中使用的术语“(NR^cR^d)烷基”是指被一个、两个或三个-NR^cR^d基团取代的烷基基团。

本文中使用的术语“(NR^cR^d)羰基”是指通过羰基基团连接至母体分子部分的-NR^cR^d基团。

本文中使用的术语“-NR^eR^f”是指R^e和R^f这两个基团通过氮原子连接至母体分子部分。R^e和R^f独立地选自氢、烷基、芳基和芳基烷基。

本文中使用的术语“(NR^eR^f)羰基”是指通过羰基基团连接至母体分子部分的-NR^eR^f基团。

本文中使用的术语“(NR^eR^f)磺酰基”是指通过磺酰基基团连接至母体分子部分的-NR^eR^f基团。

本文中使用的术语“(NR^gR^h)羰基”是指通过羰基基团连接至母体分子部分的-NR^gR^h基团。

本文中使用的术语“-NR^gR^h”是指R^g和R^h这两个基团通过氮原子连接至母体分子部分。R^g和R^h独立地选自氢、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、和杂环基；或者R^g和R^h连同它们所连接氮原子一起形成单环杂环，其中，所述单环杂环任选地稠合至苯环以形成双环体系；其中，所述单环杂环和双环体系被一个、两个或三个独立地选自烷氧基、烷基、卤素、卤代烷氧基、和卤代烷基的取代基任选取代。

本文中使用的术语“氧代”是指＝O。

本文中使用的术语“磺酰基”是指-SO₂-。

本文所用术语“前药”是指在体内通过在血液中水解而迅速转化成母化合物的化合物。本申请公开内容的前药包括母分子上的羟基的酯，母分子上的羧基的酯，以及母分子上的胺的酰胺。

本申请公开内容的化合物可作为药学上可接受的盐存在。如本文所用的术语“药学上可接受的盐”，表示本申请公开内容的化合物的盐或两性离子的形式，其为可溶于水或油中的或者可分散于其中的，其在正确的医学判断的范畴内适用于与患者组织接触，而无过度毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，此与合理的利益/风险比相称，且对它们的预定用途有效。可在所述化合物的最终分离和纯化期间制备盐，或者通过使合适的碱性官能团与合适的酸反应来分离。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐(hemisulfate)、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲基苯磺酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。可用来形成药学上可接受的加成盐的酸的实例包括无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及有机酸例如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。

碱加成盐可在化合物的最终分离和纯化期间，通过使酸性基团与合适的碱例如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐或者与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺反应来制备。药学上可接受的盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁和铝，以及无毒性的季铵阳离子如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己基胺、普鲁卡因、二苄基胺、N，N-二苄基苯乙胺和N，N’-二苄基乙二胺。用于形成碱加成盐的其它代表性的有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。

本文所用术语“抗-HCV活性”是指化合物能有效治疗HCV病毒。

术语“本申请公开内容的化合物”以及等同的表示，意欲包括式(I)化合物，以及药学上可接受的对映体、非对映体及其盐。类似地，提及中间体时意欲包括它们的盐，只要在本文中这样的盐是允许的。

术语“患者”包括人和其它哺乳动物。

术语“药物组合物”是指包含本申请公开内容的化合物以及至少一种附加药物载体，即辅助剂、赋形剂或载体，例如稀释剂、防腐剂、填料、流动调节剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、矫味剂、增香剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂(取决于给药模式和剂型)的组合物。可以使用例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Company，Easton，PA(1999)中列出的成分。

术语“药学上可接受的”在本文中用于表示在合理医疗判断范围内适合与患者组织接触使用而没有过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症的与合理的风险/获益比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

如本文所用的术语“治疗有效量”，意指足以表现出患者益处的各活性成分的总量，如，减少病毒负荷。当单独给予应用于单个活性成分时，该术语意指单一的成分。当应用于联合给药时，该术语意指产生治疗效果的活性成分的合并量，而不管是否是依序或是同时的联合给予。

术语“治疗”是指：(i)预防可能容易患上疾病、障碍或病症但尚未被诊断为患病的患者体内出现该疾病、障碍或病症；(ii)抑制疾病、障碍或病症，即阻止其发展；和/或(iii)缓解疾病、障碍或病症，即引起疾病、障碍或病症消退。

当用于命名本申请公开内容的化合物时，本文所用的标号P1’、P1、P2、P2^*、P3和P4描绘了相对于天然肽分裂底物的结合点，蛋白酶抑制剂结合的氨基酸残基的相对位置。在天然底物中在P1和P1’之间发生分裂，其中非主要的位置是指从肽天然分裂位点的C-末端开始向N-末端延伸的氨基酸；而主要的位置源自分裂位点名称的N-末端并向C-末端延伸。例如，P1’是指远离分裂位点的C-末端的右手侧的第一位置(即N-末端第一位置)；而P1从C-末端分裂位点的左手侧开始计数，P2：从C-末端起第二位，等等(参见Berger A.& Schechter I.，Transactions of the Royal Society London series (1970)，B257，249-264)。

下图显示了本申请公开内容的化合物的亚位点(subsite)标号。

在本申请公开内容的化合物中存在不对称中心。例如，该化合物可以包括下式的P1环丙基单元

其中C₁和C₂各自代表环丙基环的1和2位处的不对称碳原子。

应该理解的是，本申请公开内容包括具有抑制HCV蛋白酶的能力的所有立体化学异构形式或其混合物。

本申请公开内容的某些化合物也可以以可分离的不同的稳定构象形式存在。由围绕不对称单键的限制旋转引起的扭转不对称性，例如由于位阻或环应变，可以实现不同构象异构体的分离。本申请公开内容包括这些化合物的各构象异构体及其混合物。

本申请公开内容的某些化合物可以以两性离子形式存在，且本申请公开内容包括这些化合物的各两性离子形式及其混合物。

在用于疗法时，治疗有效量的式(I)化合物及其药学上可接受的盐有可能作为原料化学品给药，活性成分作为药物组合物出现也是可能的。因此，本申请公开内容还提供了药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。式(I)化合物及其药学上可接受的盐如上所述。载体、稀释剂或赋形剂在其与制剂的其它成分适配且对其接受者无害的意义上说，必须是可接受的。根据本申请公开内容的其它方面，也提供了制备药物制剂的方法，所述方法包括将式(I)化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。

药物制剂可以以单位剂型存在，其每单位剂量含有预定量的活性成分。在用于预防和治疗HCV介导的疾病的单一疗法中，约0.01-约250毫克每千克(“mg/kg”)体重每天，优选约0.05-约100mg/kg体重每天的本申请公开内容化合物的剂量水平是典型的。典型地，本申请公开内容的药物组合物将以每日约1-约5次给予，或者作为连续输注的方式给予。这样的给药可用作慢性或急性疗法。可以与载体材料组合以生产单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的疾病、病情的严重性、给药次数、给药途径、所用化合物的排泄速率、疗程以及患者的年龄、性别、体重和身体状况而变化。优选的单位剂量制剂为含有日剂量或如本文上述的亚剂量，或其合适的分剂量的活性成分。治疗可以以明显小于所述化合物的最适剂量的小剂量开始。此后，剂量按照小的增量增加，直至达到该情况下的最佳效果。一般来说，所述化合物的最理想的给予是在通常将提供抗病毒有效的结果，而不引起任何有害的或有毒的副作用的浓度水平。

当本申请公开内容的组合物包含本申请公开内容的化合物和一种或多种另外的治疗剂或预防剂的组合时，化合物和另外的治疗剂或预防剂两者通常以约10至150％之间的剂量水平存在，且通常更优选在单一疗法方案中以约10至80％之间的剂量给予。

可适于以任何适当的途径给予药物制剂，例如通过口服(包括颊或舌下含服)、直肠、经鼻、局部(包括颊、舌下或透皮)、阴道或胃肠外(包括皮下、皮内、肌内、关节内、滑膜腔内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或皮内注射或输注)途径。可通过制药领域已知的任何方法，例如通过将活性成分与载体或赋形剂混合来制备这样的制剂。

适用于口服给予的药物制剂可作为分离的单位存在，如胶囊或片剂；散剂或颗粒剂；在含水或非水液体中的溶液或混悬剂；可食用泡沫剂或甜食剂(whips)；或水包油液体乳剂或油包水乳剂。

例如，对于以片剂或胶囊形式的口服给药，活性药物成分可与口服的、非毒性的药学上可接受的惰性载体如乙醇、甘油、水等混合。散剂通过将化合物粉碎成合适的细粉大小并与类似地粉碎的药用载体(如食用碳水化合物，例如，淀粉或甘露醇)混合来制备。矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂也可存在。

通过如上描述制备粉剂混合物并将其填充至成形的明胶壳囊中，制备胶囊剂。也可在填充操作前，将助流剂和润滑剂诸如胶体二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇加至粉末混合物中。也可加入崩解剂或增溶剂诸如琼脂-琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善胶囊剂摄入后的药物利用度。

而且，当想要或需要时，也可将适宜的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。适宜的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖诸如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶诸如阿拉伯树胶、黄蓍胶或藻酸钠、羧基甲基纤维素、聚乙二醇等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括，但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。例如，通过制备粉末混合物，造粒或造小块(slugging)，添加润滑剂和崩解剂并且压制成片剂，配制片剂。通过将适当粉碎的化合物与稀释剂或如上描述的基质混合，并且任选与粘合剂诸如羧基甲基纤维素、藻酸盐、胶凝剂或聚乙烯吡咯烷酮，溶液阻滞剂(retardant)诸如石蜡、再吸收加速剂诸如季铵盐和/或吸收剂诸如膨润土、高岭土或磷酸二钙混合，制备粉末混合物。可通过用粘合剂诸如糖浆、淀粉糊、阿卡迪亚粘液(acadia mucilage)或纤维素或聚合物原料的溶液湿润粉末混合物，并且挤压通过筛网造粒。作为造粒的另一种选择，可将粉末混合物通过压片机，并将不完整形成的块破碎成粒。可采用添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或植物油的方法使颗粒润滑以防片剂粘附在片剂成形冲模上。然后将润滑的混合物压制成片剂。也可将本申请公开内容化合物与自由流动的惰性载体混合直接压制成片剂，而无需进行造粒或造小块的步骤。可提供由虫胶的密封层组成的透明或不透明的保护层、糖或聚合原料的包衣和蜡抛光包衣。可将染料加至这些包衣中以区别不同的单位剂量。

可制备为剂量单位形式的口服液体剂诸如溶液剂、糖浆剂和酏剂，这样，所给的量含预定量的化合物。通过将化合物溶解于适宜的经过矫味处理的水溶液中，可制备糖浆剂，而通过使用无毒性的溶媒，可制备酏剂。也可加入增溶剂和乳化剂诸如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚，防腐剂、矫味添加剂诸如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它的人造甜味剂等。

合适时，口服给予的剂量单位制剂可以被微囊化。制剂也可通过例如用聚合物、蜡等中的特殊原料包衣或包埋于其中而制备成长效制剂或缓释制剂。

式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可以以脂质体传递系统的形式给予，如小单层囊(vesicles)、大单层囊和多层囊。从多种磷脂诸如胆固醇、十八烷基胺或磷脂酰胆碱可形成脂质体。

式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可通过使用单克隆抗体作为与该化合物分子偶联的单个的载体传递。化合物也可与作为可靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。这样的聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺苯酚或被棕榈酰(palitoyl)残基取代的聚环氧乙烷聚赖氨酸。此外，化合物可偶联至一类生物可降解的聚合物，用于实现药物的控制释放，例如，聚乳酸、聚ε-己内酯(polepsilon caprolactone)、聚羟基丁(butyric)酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联的或两亲的嵌段共聚物。

适于透皮给药的药用制剂可呈现为分散的贴片剂，其意欲以延长的时间保持与接受者的表皮的密切接触。例如，可将活性成分从贴片通过在Pharmaceutical Research 1986，3(6)，318中通常描述的离子电渗疗法传递。

可将适于局部给药的药用制剂配制成软膏、乳膏、悬浮剂、洗剂、粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。

对于治疗眼睛或其它外部组织例如口和皮肤来说，制剂优选以局部软膏或乳剂的形式施加。当配制成软膏时，活性成分可以与石蜡族软膏基质或者水可混溶的软膏基质一起使用。或者，活性成分可以与水包油乳剂基质或者油包水基质一起配制在乳剂中。

适于眼部局部给药的药物制剂包括滴眼剂，其中活性成分溶解或者悬浮在合适的载体，特别是水性溶剂中。

适于在口腔中局部给药的药物制剂包括锭剂、软锭剂和含漱剂。

适于直肠给药的药物制剂可以以栓剂或者灌肠剂的形式呈现。

适于经鼻给药的药物制剂，其中载体是固体，包括粒径例如为20-500微米的粗粉末，其以其中采取鼻吸的方式进行给药，即通过从靠近鼻子的粉末容器中快速通过鼻部通道吸入。用于以鼻喷雾剂或滴鼻剂的形式给药的其中载体是液体的合适的制剂包括活性成分的水溶液或者油溶液。

适于通过吸入给药的药物制剂包括细颗粒粉尘或烟雾，其可以借助于各种型式的计量的、剂量增压的气溶胶、喷雾器或吹入器形成。

适于阴道给药的药物制剂可以以阴道环、棉球、乳剂、凝胶剂、糊剂、泡沫或喷雾剂制剂的形式呈现。

适于肠胃外给药的药物制剂包括含水和无水的无菌的注射液，其可以包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和soutes(其可以使制剂与所意图的受体的血液等渗压)；和含水和无水的无菌的悬浮液，其可以包括悬浮剂和增稠剂。所述制剂可以存在于单位计量或多计量容器中，例如密封的安瓿或小瓶中，并且可以存储在冷冻干燥(冻干)条件下，仅仅需要添加无菌的液体载体，例如注射用水，然后再即刻使用。即刻注射溶液和悬浮液可以由无菌粉末、颗粒和片剂制备。

应当理解的是，除了上述特别提及的成分之外，所述制剂还可以包括与所讨论的制剂类型相关的领域常规的其它物质，例如适于口服的那些可以包括矫味剂。

下表1列出可以与本申请公开内容的化合物一起施用的化合物的一些示例性实例。本申请公开内容的化合物可以与其它抗-HCV活性化合物在联合疗法中共同或单独施用，或通过将这些化合物组合成组合物来施用。

表1

本申请公开内容化合物也可用作实验室试剂。化合物可为提供研究设计病毒复制分析、验证动物检验系统和结构生物学研究的工具，以进一步加深了解HCV疾病的机制。再有，本申请公开内容化合物用于例如，通过竞争性抑制确立或测定其它的抗病毒化合物的结合位点。

本申请公开内容化合物也可用于治疗或预防材料的病毒污染，并且因此降低实验室或与这些材料接触的医务人员或患者的病毒感染的风险，所述材料有例如血液、组织、手术器械和外表面、实验室器械和外表面以及血液收集或输血仪器和材料。

本申请公开内容意欲包括通过合成方法制备或通过包括那些发生在人或动物体(体内)或在体外加工的代谢方法制备的具有式(I)的化合物。

在本申请中所用的缩写，特别包括在以下的说明性反应方案和实施例中的缩写，为本领域技术人员众所周知。使用的一些缩写如下：EtOAc表示乙酸乙酯；t-Bu表示叔丁基；DMSO表示二甲基亚砜；HATU表示O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲

磷酸盐；DIEA或DIPEA表示二异丙基乙胺；DCM表示二氯甲烷；CDI表示1，1’羰基二咪唑；DBU表示1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯；h表示小时；min表示分钟；MeOH表示甲醇；NBS表示N-溴代琥珀酰亚胺；n-Bu-Li表示正丁基锂；i-Pr表示异丙基；TMS表示三甲基甲硅烷基；THF表示四氢呋喃；MeCN表示乙腈；rt表示室温或保留时间(上下文将规定)。

可用于合成本申请公开内容的化合物的原料是本领域技术人员已知的并且可以容易地制造或可购得。

以举例说明为目的提供下述方法，它们不是要限制权利要求的范围。要认识到，可能需要制备其中使用常规保护基保护官能团的化合物，然后除去保护基以提供本申请公开内容的化合物。关于根据本申请公开内容的保护基的应用的细节是本领域技术人员已知的。

实施例1：化合物1的制备

方案1

步骤1：

在0℃向3-甲氧基肉桂酸(11.0g，62mmol)和三乙胺(12.5g，124mmol)的丙酮(80mL)溶液中滴加氯甲酸乙酯(大约1.5当量)。在该温度下搅拌1小时后，滴加NaN₃水溶液(6.40g，100mmol的35mL H₂O)，并将反应混合物在环境温度搅拌16小时。向混合物中加入水(100mL)并在真空下除去挥发物。用甲苯(3x50mL)萃取所得浆液，合并有机层，用MgSO₄干燥并过滤。在190℃将滤液滴加至加热的二苯甲烷(50mL)和三丁胺(30mL)溶液中。在添加过程中通过蒸馏除去甲苯。完全添加后，将反应温度升至210℃保持2小时。冷却后，通过过滤收集沉淀产物，用己烷(2x50mL)洗涤，干燥，得到白色固体状目标产物(5.53g，51％)(Nicolas Briet等人，Tetrahedron，2002，5761-5766)。LC-MS，MS m/z 176(M⁺+H)。

步骤2：

将6-甲氧基-2H-异喹啉-1-酮(5.0g，28.4mmol)的POCl₃(10mL)溶液加热温和回流3小时，然后在真空下浓缩混合物(Nicolas Briet等人，Tetrahedron，2002，761-5766)。将残余物倒至冰水(20mL)中，通过添加10.0M NaOH调至pH＝10。所得混合物用CHCl₃萃取。有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤浓缩。通过快速柱层析(1∶1 己烷-乙酸乙酯)纯化残余物，得到4.41g(80％)白色固体状目标产物。¹H NMR(CD₃OD)δppm 3.98(s，3H)，7.34-7.38(m，2H)，7.69(d，J＝5.5Hz，1H)，8.10(d，J＝6.0Hz，1H)，8.23(d，J＝9.5Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 194(M⁺+H)。

方案2

步骤3：

将6-甲氧基吡啶-3-胺(0.372g，3mmol)、2-氧代壬-8-烯酸(0.511g，3.00mmol)和NaHB(OAc)₃(1.907g，9.00mmol)在CH₂ClCH₂Cl(10ml)中的混合物搅拌24h。将反应用饱和NH₄Cl(20mL)淬灭，用EtOAc(50mL)稀释，用盐水(20ml)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，浓缩。浓缩得到800mg粗的目标产物，该产物在下一步骤无需纯化直接使用。

步骤4：

在环境温度向N-Boc-4-(R)-羟基-L-脯氨酸(0.892g，3.89mmol)的DMSO(40mL)溶液中一次性添加固体叔丁醇钾(1.34g，12.0mmol)。在室温下搅拌悬浮液30分钟，然后冷却至10℃。一次性加入固体1-氯-6-甲氧基-异喹啉(实施例1步骤2的产物)(785mg，4.05mmol)，在环境温度下搅拌所得混合物12小时。用冰冷的5％柠檬酸水溶液淬灭混合物，然后用乙酸乙酯(100mL)萃取。水相再用乙酸乙酯萃取。合并的有机层分别用5％柠檬酸水溶液和盐水洗涤，用MgSO₄干燥并过滤。在真空下将滤液浓缩至干，得到灰白色泡沫状目标产物(1.49g，产率99％)。该粗物质无需纯化在下一步骤中直接使用。¹H NMR(CD₃OD)δ1.42，1.44(旋光异构体，9H)，2.38-2.43(m，1H)，2.66-2.72(m，1H)，3.80-3.87(m，2H)，3.92(s，3H)，4.44-4.52(m，1H)，5.73(bs，1H)，7.16-7.18(m，2H)，7.24-7.25(m，1H)，7.87-7.88(m，1H)，8.07(d，J＝8.5Hz，1H)；LC-MS，MS m/z 389(M⁺+H)。

步骤5：

在室温下4小时内向实施例1步骤4的产物(7.7g，20mmol)、DIPEA(12.92g，100mmol)和(1R，2S)-1-氨基-N-(环丙基磺酰基)-2-乙烯基环丙酰胺盐酸盐(4.6g，24mmol)在CH₂Cl₂(100mL)中的混合物中添加HATU(11.41g，30mmol)。浓缩后，将残余物通过Biotage(40+S Si柱)用33％丙酮的己烷溶液洗脱纯化，得到9.5g(90％)油状目标产物。LC-MS，MS m/z 526(M⁺+H)。

步骤6：

e向实施例步骤5的产物(5.26g，10mmol)中添加4M HCl(25.00mL，100mmol)的1，4-二噁烷的溶液。将形成的溶液在25℃搅拌3h。在真空中浓缩后，向残余物中添加乙醚(20mL)，然后再次浓缩，重复该过程3次。置于真空干燥，得到4.98g(100％)固体状粗产物，该产物无需纯化在下一步骤中直接使用。LC-MS，MS m/z 426(M⁺+H)。

步骤7：

向实施例1步骤6的产物(150mg，0.3mmol)、实施例1步骤3的产物(84mg，0.300mmol)和Hunig′s碱(0.524ml，3.00mmol)的CH₂Cl₂(5ml)溶液中添加HATU(171mg，0.450mmol)。搅拌16h后浓缩，残余物通过Biotage用33％丙酮的己烷溶液洗脱纯化，得到170mg固体的非对映异构体的目标化合物。LC-MS，MS m/z 686(M⁺+H)。

步骤8：

加入实施例1，步骤7的产物(160mg，0.233mmol)和GrubbsII(30mg，0.035mmol)在CH₂Cl₂(5ml)中的溶液并回流16h。浓缩后，残余物通过Biotage用25％丙酮的己烷溶液洗脱纯化，得到52mg单一的非对映异构体(它的结构如在方案或(R)-异构体中之一所标记)。LC-MS，MS m/z 658(M⁺+H)。

步骤9：

将实施例1步骤8的产物(50mg，0.076mmol)和氢氧化钠(30.4mg，0.760mmol)在MeOH(5ml)和水(2.00ml)的溶液回流2h。浓缩后，将残余物用1N HCl(1mL)中和EtOAc萃取，MgSO₄干燥。浓缩得到36mg目标产物，其无需进一步纯化用于下个步骤。LC-MS，MS m/z 630(M⁺+H)。

步骤10：

实施例1步骤9的产物(35mg，0.056mmol)和CDI(12.62mg，0.078mmol)在THF(1ml)中的溶液回流1h。冷却至室温后，向该溶液中添加环丙烷磺酰胺(10.77mg，0.089mmol)接着添加DBU(0.017ml，0.111mmol)，然后将所得溶液搅拌过夜。浓缩后，将残余物通过制备性HPLC纯化得25mg(61％)白色固体状目标化合物。LC-MS，MS m/z 733(M⁺+H)。

实施例2：化合物2的制备

方案1

步骤1：

将3-氯-6-甲基苯甲酸(17.0g，0.10mol)在亚硫酰氯(23.5ml，0.30mol)中的浆液缓慢加热至温和回流并在这个温度保持2h。然后将反应混合物冷却至室温并在真空下除去过量的亚硫酰氯。将残余物提取到DCM(50ml)中，并随后在真空中除去溶剂(应当注意，多次重复该过程以保证除去残余的亚硫酰氯和HCl)。然后将得到的产品溶于THF(80ml)，将其直接用于下文所述的下一反应。

步骤2：

向冰盐浴(-10℃)冷却的30％氨(58ml)在水(240ml)中的溶液中滴加实施例2步骤1产物的THF溶液。添加完成后，将得到的反应混合物(浆液)在-10℃搅拌1hr。然后将反应混合物升温至室温并倾析。然后用水(50ml)粉碎反应容器中剩余的固体。然后重复这种粉碎和倾析的过程。然后过滤剩余的固体并用水洗涤滤饼。然后将固体在真空中过夜干燥生成13.8g(82％)白色晶体状目标产物。¹H NMR(DMSO-d₆)δppm 2.33(s，3H)，7.24-7.27(m，1H)，7.35-7.38(m，2H)，7.44(b，1H)，7.80(b，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 18.87，126.64，128.86，129.81，132.31，134.19，138.65，169.41；LC-MS，MS m/z 170。

步骤3：

将实施例2步骤2的产物(11.5g，68mmol)、DMF-乙缩醛(10.9ml，82mmol)和THF(150ml)的混合物加热至回流并在该温度保持2hr。然后将反应混合物冷却至室温并在真空中除去挥发物。得到的残余物从己烷(150ml)中重结晶得到14.7g(96％)白色针状目标产物。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ2.49-2.51(m，3H)，3.09(s，3H)，3.20(s，3H)，7.24，7.27(d，J＝13.5Hz，1H)，7.37-7.41(dd，J1＝14Hz，J2＝4.5Hz，1H)，7.91，7.92(d，J＝4.0Hz，1H)，8.55(s，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 20.69，35.09，40.91，129.50，129.72，132.98，136.86，138.87，160.60，177.04；LC-MS，MS m/z 225。

步骤4：

将实施例2步骤3的产物和KOtBu(14.7g，131mmol)在THF(300ml)中的混合物加热至回流并在该温度保持2hr(反应混合物加热时变成深色溶液)。然后通过蒸出大约100mL溶剂来减少反应混合物的体积。然后小心地将得到的溶液倒入水(1L)中并用1M HCl将得到的混合物酸化至pH为4。然后过滤混合物，用水彻底洗涤收集到的固体，然后在真空中干燥过夜得到7.0g(60％)灰白色粉末状目标产物。

¹H NMR(400Hz，CD₃OD)δppm 6.66(d，J＝7.05Hz，1H)，7.18(d，J＝7.05Hz，1H)，7.66(s，1H)7.67(d，J＝2.01Hz，1H)，8.24(d，J＝2.27Hz，1H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 104.05，125.62，127.21，128.54，129.52，130.77，132.43，136.55，160.72；LC-MS，MS m/z 180。

步骤5：

将实施例2步骤4的产物和NBS(39.747g，223.3mmol)在MeCN(500mL，无水)中的浆液在大约2h的时间内缓慢加热至温和回流并在温和回流下保持1.5h(该反应可以用LC/MS监测)。然后将反应混合物在大约3h的时间内缓慢地冷却至室温并通过简单过滤移除可见固体。用MeCN(100mLx3)洗涤收集的固体得到47g目标产物。该物质无需进一步纯化即用于下一步。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 7.46(s，1H)，7.81(dd，J＝8.40，2.00Hz，1H)，7.88(d，J＝8.8Hz，1H)，8.27(d，J＝2.00Hz，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 96.68，126.34，127.58，127.71，130.73，132.20，133.47，134.46，159.88；LC-MS，MS m/z 258。

步骤6：

将实施例2步骤5的产物(47g，182mmol)在POCl₃(200mL，2.15mol)中的不均匀溶液在1h的时间内缓慢加热至回流。将反应混合物在回流下保持4h。然后将反应混合物冷却至室温并在真空中浓缩以除去过量的POCl₃。然后将得到的残余物提取到600mL CH₂Cl₂中，冷却至-35℃，然后小心地用1N NaOH(400mL)中和至混合物显弱碱性(pH＝8)。分离得到的有机层，用水洗涤，经MgSO₄干燥并在真空中浓缩。得到的残余物从EtOAc(大约50mL)中重结晶得到32g目标产物。用10％EtOAc/己烷(3x50ml)洗涤收集到的固体。浓缩母液并通过Biotage纯化(用16％EtOAc的己烷溶液洗脱)得到4g固体状目标产物。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 7.80(dd，J＝8.81，2.01Hz，1H)，8.14(d，J＝9.06Hz，1H)，8.34(d，J＝1.76Hz，1H)，8.48(s，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 118.39，125.06，127.59，128.71，133.89，134.14，134.93，143.18，148.98；LC-MS，MS m/z 275。

步骤7：

于-78℃向实施例2步骤6的产物(22.16g，80mmol)在THF(500ml)中的浆液中通过套管在15min内滴加100ml的1.6M n-BuLi(己烷中，160mmol)(保持内部温度＜-65℃)。将得到的溶液搅拌0.5h，这之后在10min内通过注射器滴加(i-PrO)₃B(37ml，160mmol)(保持内部温度＜-65℃)。将得到的反应混合物搅拌0.5h。通过LC/MS检查反应完成之后，在10min内通过加料漏斗滴加80ml的30％H₂O₂(776mmol)(添加期间内部温度升至-60℃)，随后添加80ml的1N NaOH(80mmol)。移除冷却浴，将反应混合物升温至室温并在室温搅拌额外的1h。经LC/MS确认(conforming)反应完成后，将反应混合物冷却至-40℃，在30min内通过加料漏斗滴加100gNa₂SO₃(0.793摩尔)在400ml水中的溶液作为淬灭过量H₂O₂的手段(保持内部温度在5-10℃)。在0℃用6N HCl(大约50ml)中和得到的浆液直至pH～6，然后用500ml EtOAc稀释并倾析至2L的分液漏斗。向反应容器中残留的固体添加500mL水和300ml EtOAc，然后用6N HCl(大约20ml)中和。合并的有机层用食盐水(300mlx3)，然后用水(200mlx3)洗涤，经MgSO₄干燥并浓缩以得到粗产物(用50ml EtOAc磨碎)。通过过滤收集固体，用EtOAc(3x25ml)冲洗并干燥得目标产物(2遍：12.0g，70％和13.8g，81％)。合并滤出液，浓缩并通过Biotage纯化，用35％EtOAc的己烷溶液洗脱得到2.1g产物。总体上，44.4g溴化物得到27.9g(81％)4-OH产物。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 4.05(s，3H)，7.4(s，1H)，7.76(dd，J＝8.8，2，Hz，1H)，8.16(d，J＝2Hz，1H)，8.23(d，J＝8.8Hz，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 123.78，124.66，125.62，127.03，127.71，130.72，133.80，137.63；148.88；LC-MS，MS m/z 213。

步骤8：

于0℃向实施例2步骤7的产物在MeOH-MeCN(30mL/300mL)中的浆液中滴加60ml TMSCHN₂在己烷中的2M溶液(120mmol)。将反应混合物升温至室温，然后搅拌14h。然后浓缩溶液并将得到的固体从EtOAc(大约50mL)重结晶得到8.1g目标产物(用25％EtOAc的己烷溶液洗涤，20x3次)。浓缩母液并通过Biotage纯化(用16％EtOAc的己烷溶液洗脱)得到3.2g固体状目标产物。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 4.05(s，3H)，7.67(dd，J＝9.06，2.01Hz，1H)，7.80(s，1H)，8.16(d，J＝8.81Hz，1H)，8.23(d，J＝2.01Hz，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 56.68，122.70，123.99，124.14，126.67，127.83，131.43，134.10，139.75，149.94；LC-MS，MS m/z 229。

方案2

步骤9：

在搅拌下于10℃向1，7-二氯-4-甲氧基异喹啉(4.52g，20mmol)、Boc-L-Hyp-OH(5.08g，22mmol)和t-BuOK(6.72g，60mmol)的混合物中添加DMSO(200mL)，然后将得到的浆液经超声波处理30min以在室温下快速获得均一的溶液。将得到的溶液搅拌3h。然后将反应混合物冷却至0℃并用50ml水淬灭。通过加入1N HCl将得到的混合物中和/酸化至最终pH为5。用EtOAc(400mL)萃取得到的混合物，然后用食盐水(200mL)、水(200mLx2)洗涤有机层，经MgSO₄干燥，过滤，然后在真空中浓缩得到粗固体(8.36g)。该物质无需进一步纯化用于下一步骤。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm2.34-2.47(m，1H)，2.62-2.77(m，1H)，3.70-3.92(m，2H)，4.42-4.59(m，1H)，5.65(brs，1H)，7.54(s，1H)，7.68(dd，J＝8.81，2.01Hz，1H)，8.02-8.13(m，2H)；¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)(由于Boc的旋转异构体，观察到的峰多于碳原子数)δppm 13.90，14.04，20.71，22.02，27.84，27.98，30.91，35.00，35.87，51.84，52.08，56.21，57.49，57.80，59.70，73.32，73.87，79.14，79.19，119.11，119.77，122.38，123.35，128.50，130.95，132.25，145.70，151.94，153.25，153.71，173.51，173.98；LC-MS，MS m/z 423。

步骤10：

将实施例2步骤9的产物(4.23g，10mmol)、环丙烷磺酰胺(2.300g，12.00mmol)、Hunig碱(6.46g，50.0mmol)和HATU(5.70g，15.00mmol)在CH₂Cl₂(20mL)中的混合物搅拌4h。浓缩后，残余物通过Biotage(40+S Si柱)纯化，用33％丙酮在己烷中的溶液洗脱得到4.7g(84％)固体状目标产物。LC-MS，MS m/z 560。

步骤11：

向实施例2步骤10的产物(5.60g，10mmol)中添加1，4-二噁烷中的4MHCl(25.00mL，100mmol)。将形成的溶液在25℃搅拌3h。真空下浓缩后，向残余物中添加乙醚(20mL)，然后再次浓缩，将该过程重复3次。置于(House)真空中干燥得到5.33g(100％)固体状粗产物，其无需进一步纯化用于下一步骤。

步骤12：

向实施例2步骤11的产物(5.60g，10mmol)中添加1，4-二噁烷中的4M HCl(25.00mL，100mmol)。将形成的溶液在25℃搅拌3h。真空下浓缩后，向残余物中添加乙醚(20mL)，然后再次浓缩，将该过程重复3次。置于真空中干燥得到5.33g(100％)固体状粗产物，其无需进一步纯化用于下一步骤。LC-MS，MS m/z 720。

步骤13：

添加实施例2步骤12的产物(160mg，0.222mmol)和GrubbsII(30mg，0.035mmol)在CH₂Cl₂(5ml)中的溶液回流16h。浓缩后，残余物通过Biotage纯化，用25％丙酮在己烷中的溶液洗脱得到54mg单一的非对映异构体(它的结构如在方案或(R)-异构体中之一所标记)。LC-MS，MS m/z 692。

步骤14：

将实施例2步骤13的产物(50mg，0.072mmol)和氢氧化钠(28.9mg，0.722mmol)在MeOH(5ml)和水(2.00ml)中的溶液回流2h。浓缩后，用1N HCl(1mL)中和残余物，用EtOAc萃取，经MgSO₄干燥。过滤并浓缩得到46mg目标产物，其无需进一步纯化用于下一步骤。

步骤15：

将实施例2步骤14的产物(45mg，0.068mmol)和CDI(15.38mg，0.095mmol)在THF(1ml)中的溶液回流1h。冷却至室温后，向该溶液中添加环丙烷磺酰胺(13.13mg，0.108mmol)，随后添加DBU(0.020ml，0.136mmol)，然后将得到的溶液搅拌过夜。浓缩后，经制备性HPLC纯化残余物得到15mg(30％)白色固体状目标产物。LC-MS，MS m/z 767。

实施例3：化合物3的制备

步骤1：1-(2(S)-叔丁氧基羰基氨基-壬-8-烯酰基)-4(R)-羟基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲酯的制备

将2(S)-叔丁氧基羰基氨基-8-壬烯酸(购自RSP氨基酸)(3.5g，12.9mmoL)在200mLDCM中的溶液按顺序用4(R)-羟基吡咯烷-2(S)-羧酸甲酯氢氯化物(2.15g，11.8mmoL)、N-甲基吗啉(4.25mL，38.6mmoL)和HATU(5.37g，14.1mmoL)处理。在室温下N₂中搅拌反应混合物3天，然后在真空下浓缩。将残余物在乙酸乙酯和pH 4缓冲液(苯二甲酸氢盐)中分化。有机相用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)，并在真空下浓缩，得到粗产物。快速柱层析(50％乙酸乙酯/己烷至100％乙酸乙酯)，得到4.7g(～100％)无色油状1-(2(S)-叔丁氧基羰基氨基-壬-8-烯酰基)-4(R)-羟基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲酯：¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ1.33-1.50(m，8H)，1.46(s，9H)，1.57(m，1H)，1.72(m，1H)2.08(m，2H)，2.28(m，1H)，3.72(s，3H，)3.75-3.87(m，2H)，4.36(m，1H)，4.51(bs，1H)，4.57(t，J＝8.2Hz，1H)，4.95(d，J＝10.4Hz，1H)，5.01(m，1H)，5.83(m，1H)。MS m/z 399(M⁺+1)。

步骤2：1-{[1-(2(S)-叔丁氧基羰基氨基-壬-8-烯酰基)-4(R)-羟基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯的制备

将1-(2(S)-叔丁氧基羰基氨基-壬-8-烯酰基)-4(R)-羟基-吡咯烷-2(S)-羧酸甲酯(4.7g，11.8mmoL)溶于THF(80mL)、甲醇(20mL)和水(40mL)中。加入粉状的氢氧化锂(5.6g，233mmoL)。在室温下N₂中搅拌浅黄色浆液16h，然后在真空下浓缩。残余物在乙醚和水中分化。丢弃乙醚相，并用1N HCl处理水相直到pH为4。酸性溶液用EtOAc(3x)萃取。将合并的EtOAc萃取物干燥(MgSO₄)，过滤，并在真空下浓缩，得到4.36g(96％)白色固体状的1-(2(S)-叔丁氧基羰基氨基-8-壬烯酰基)-4(R)-羟基-吡咯烷-2(S)-羧酸。然后将该酸溶于150mLDMF中，并加入(1R，2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯盐酸盐(2.61g，13.6mmoL)、N-甲基吗啉(2.5mL，22.6mmoL)和HATU(5.2g，13.7mmoL)。在室温下N₂中搅拌反应混合物16h，然后在真空中浓缩。残余物在乙酸乙酯和pH 4的缓冲液(苯二甲酸氢盐)中分化。有机相用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并在真空中浓缩，得到粗产物。快速柱层析(60％-80％乙酸乙酯/己烷)得到6.0g(98％)白色固体状1-{[1-(2(S)-叔丁氧基羰基氨基-壬-8-烯酰基)-4(R)-羟基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯。¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ1.25(t，J＝7.2Hz，3H)，1.33-1.80(m，10H)，1.46(s，9H)，2.09(m，3H)，2.25(m，2H)，3.76(m，2H)，4.14(m，2H)，4.27(dd，J＝8.5，5.2Hz，1H)，4.50(m，2H)，4.94(d，J＝10.1Hz，1H)，5.01(dd，J＝17.1，1.8Hz，1H)，5.11(dd，J＝10.4，1.8Hz，1H)，5.30(d，J＝15.6Hz，1H)，5.80(m，2H)，8.57(s，1H)。MS m/z 522(M⁺+1)。

步骤3：1-{[1-(2-叔丁氧基羰基氨基-壬-8-烯酰基)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯的制备

向1-{[1-(2(S)-叔丁氧基羰基氨基-壬-8-烯酰基)-4(R)-羟基-吡咯烷-2(S)羰基]-(1R)-氨基}-2(S)-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯(1.5g，2.87mmoL)在10mL DMF中的混合物中添加咪唑(0.25g，3.67mmoL)和叔丁基-二甲基氯硅烷(516mg，3.44mmoL)。在室温下搅拌混合物2天。然后在真空下浓缩并将残余物溶于乙酸乙酯。然后用水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，在真空下干燥，得到固体，然后该固体通过快速柱层析(用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，分离得白色固体(1.43g，78％)。¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δ0.10(s，6H)，0.89(s，9H)，1.22(m，3H)，1.31-1.48(m，16H)，1.50-1.75(m，3H)，2.06(m，3H)，2.11-2.33(m，2H)，3.70(m，2H)，4.03-4.19(m，2H)，4.21(m，1H)，4.45(t，J＝7.87Hz，1H)，4.59(m，1H)，4.91(d，J＝9.15Hz，1H)，4.98(d，J＝17.20Hz，1H)，5.08(dd，J＝10.25，1.83Hz，1H)，5.27(dd，J＝17.38，1.65Hz，1H)，5.65-5.87(m，2H)。MS m/z 636(M⁺+1)。

步骤4：14-叔丁氧基羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮杂-三环[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯的制备

向1-{[1-(2-叔丁氧基羰基氨基-壬-8-烯酰基)-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-2-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯(1.63g，2.56mmoL)的640mL二氯甲烷溶液中添加215mg(0.26mmoL)三环己基膦[1，3-双(2，4，6-三[苯亚甲基]二氯化钌(IV)。将混合物加热回流15min。残余物在真空下浓缩，然后通过快速柱层析使用30％乙酸乙酯/己烷洗脱纯化。为了进一步将样品脱色，将粗产物使用50％乙醚的己烷溶液洗脱再次柱层析，得到1.5g(96％)白色固体状产物。¹H NMR(500MHz，CD₃Cl)δ0.06(s，3H)，0.07(s，3H)，0.86(s，9H)，1.18-1.24(m，6H)，1.34-1.64(m，14H)，1.86-1.96(m，3H)，2.02-2.09(m，1H)，2.11-2.17(m，1H)，2.19-2.28(m，1H)，2.57-2.63(m，1H)，3.50-3.54(m，1H)，3.71(dd，J＝10.22，6.26Hz，1H)，4.06-4.17(m，2H)，4.52-4.58(m，2H)，4.75(d，J＝8.55Hz，1H)，5.21(t，J＝9.92Hz，1H)，5.35(d，J＝7.63Hz，1H)，5.45-5.50(m，1H)，6.94(s，1H)。MS m/z 608(M⁺+1)。

步骤5：14-叔丁氧基羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮杂-三环[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸的制备

向14-叔丁氧基羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮杂-三环[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸乙酯(1.5g，2.47mmoL)的THF(4mL)、甲醇(1mL)和水(2mL)溶液中加入粉状氢氧化锂(1.0g，50mmoL)，并在室温下N₂中搅拌浅黄色浆液4h。然后在真空下浓缩混合物，并将残余物在乙醚和水中分化。丢弃乙醚相，并用1N HCl处理水相直到pH 4。用EtOAc萃取酸性溶液3次。将合并的EtOAc萃取物干燥(MgSO₄)并在真空下浓缩，得到1.2g(84％)灰白色固体。¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δppm 0.12(s，6H)，0.89(s，9H)，1.23-1.64(m，17H)，1.70-1.87(m，1H)，1.90-2.49(m，6H)，3.70-3.80(m，1H)，3.83-3.90(m，1H)，4.28-4.36(m，1H)，4.47-4.55(m，1H)，4.65(s，1H)，5.30-5.39(m，1H)，5.53-5.62(m，1H)。MS m/z 580(M⁺+1)。

步骤6：[18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-4-环丙烷磺酰氨基羰基-2，15-二氧代-3，16-二氮杂-三环[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁酯的制备

将14-叔丁氧基羰基氨基-18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮杂-三环[14.3.0.04，6]十九-7-烯-4-羧酸(500mg，0.86mmoL)溶于25mL THF中，并用CDI(180mg，1.12mmoL)处理。(通过使用充分干燥的玻璃器具并保持N2气氛小心避免湿气)。将反应混合物回流2小时后，冷却至室温，并按顺序用环丙基磺酰胺(135mg，1.12mmoL)和DBU(170mg，1.12mmoL)处理。在室温下搅拌4h，通过旋转蒸发除去THF。将残余物在乙酸乙酯和pH 4的缓冲液中分化。将有机相干燥(MgSO₄)、过滤、并在真空下浓缩，得到粗产物。然后通过快速柱层析使用33％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱纯化，分离白色固体(300mg，51％)。¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δppm ¹H 0.07(s，3H)，0.08(s，3H)，0.85(s，9H)，0.87-1.49(m，21H)，1.73-1.95(m，3H)，2.08-2.16(m，1H)，2.25-2.36(m，2H)，2.42-2.56(m，1H)，2.85-2.93(m，1H)，3.65-3.74(dd，J＝10.61，3.66Hz，1H)，3.89(d，J＝10.25Hz，1H)，4.34(m，J＝9.70，9.70Hz，1H)，4.43(t，J＝7.87Hz，1H)，4.57(s，1H)，4.94-5.01(m，1H)，5.10(d，J＝8.78Hz，1H)，5.66-5.75(m，1H)，6.55(s，1H)，10.13(s，1H)。MS m/z 683(M⁺+1)。

步骤7：(4-环丙烷磺酰氨基羰基-18-羟基-2，15-二氧代-3，16-二氮杂-三环[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基)-氨基甲酸叔丁酯的制备

向[18-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-4-环丙烷磺酰氨基羰基-2，15-二氧代-3，16-二氮杂-三环[14.3.0.04，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁酯(330mg，0.48mmoL)的25mLTHF混合物中添加四丁基氟化铵(150mg，0.54mmoL)，并将混合物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发除去THF。残余物在乙酸乙酯和水之间分化。将有机相干燥(MgSO₄)并在真空下浓缩，得到粗产物。然后通过用己烷粉碎纯化，得到白色固体(200mg，73％)。¹H NMR(500MHz，CD₃Cl)δppm 1.87-1.64(m，21H)，1.70-1.98(m，3H)，2.15-2.56(m，5H)，2.85-2.94(m，1H)，3.71(d，J＝13.91Hz，1H)，4.10-4.26(m，2H)，4.51(t，J＝7.87Hz，1H)，4.62(s，1H)，4.98(m，1H)，5.06(d，J＝8.78Hz，1H)，5.64-5.71(m，1H)，6.72(s，1H)，10.24(s，1H)。MS m/z 569(M⁺+1)。

步骤8，[4-环丙烷磺酰氨基羰基-18-(6-甲氧基-异喹啉-1-基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮杂-三环[14.3.0.0^4，6]十九-7-烯-14-基]-氨基甲酸叔丁酯的制备

向4-叔丁氧基羰基氨基-18-羟基-2，15-二氧代-3，16-二氮杂-三环[14.3.0.0^4，6]十九-7-烯-4-羧酸(215mg，0.46mmol)的DMSO(5mL)混合物中添加t-BuOK(125mg，1.11mmol)和1-氯-6-甲氧基-异喹啉(110mg，0.56mmol，得自方案1实施例1)。在室温下搅拌反应5h。然后用乙醚(10mL)和水(10mL)分化反应混合物。水相用1N HCl酸化至pH 4。所得溶液用EtOAc(3x20mL)萃取。将合并的EtOAc提取物干燥(MgSO₄)、过滤并在真空下浓缩，得到白色固体。快速柱层析(2％MeOH/CH₂Cl₂)，得到140mg(49％)的白色固体状羧酸衍生物。LC-MS(方法B，保留时间：1.80min)，MS m/z 543(M⁺+1)。如上文一般程序所述将上述固体(140mg，0.22mmol)用环丙基磺酰胺(35mg，0.28mmol)处理得到粗产物。快速柱层析(2％MeOH/DCM)得到90mg目标产物。通过制备性HPLC(YMC Xterra，S5，30x50mm，50％至100％B，梯度9min，保持1min，流速40mL/min)进一步纯化，得到30mg(19％)白色粉末状产物。MS m/z 726(M⁺+1)。

步骤9：环丙烷磺酸[(Z)-(1S，4R，14S，18R)-14-氨基-18-(6-甲氧基-异喹啉-1-基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮杂-三环[14.3.0.0^4，6]十九-7-烯-4-羰基]-酰胺的制备

将实施例2(0.944g，3.03mmol)的产物溶于4M HCl的二噁烷(15mL)溶液中。在室温下搅拌混合物4小时，然后在真空下浓缩。然后将残余物溶于二氯甲烷(20mL)中并再次在真空中浓缩。白色固体无需纯化用于随后的步骤中。MS m/z 626(M⁺+1)。

步骤10：中间体1的制备

在室温下N₂中将溶于5mL的DCM的环丙烷磺酸[(Z)-(1S，4R，14S，18R)-14-氨基-18-(6-甲氧基-异喹啉-1-基氧基)-2，15-二氧代-3，16-二氮杂-三环[14.3.0.0^4，6]十九-7-烯-4-羰基]-酰胺(100mg，0.16mmol)，按顺序用Fmoc-异硫氰酸(49.5mg，0.176mmol，1.1当量)和DIPEA(0.084mL，0.479mmol，3当量)处理。在室温下搅拌混合物1h。将所得溶液直接用于下一步骤。

步骤11：环丙烷磺酸[(Z)-(1S，4R，6S，14S，18R)-18-(6-甲氧基-异喹啉-1-基氧基)-2，15-二氧代-14-硫脲基-3，16-二氮杂-三环[14.3.0.0^4，6]十九-7-烯-4-羰基]-酰胺的制备

向中间体1(145mg，0.16mmol)在5mL DCM中的反应溶液中添加哌啶(0.5mL)。在室温下搅拌反应混合物2hs。浓缩溶剂。残余物溶于EtOAc并用HCl 1N和盐水溶液洗涤。干燥有机层并浓缩。快速柱层析(2％MeOH/DCM)，得到57mg(0.083mmol，52％)的白色固体状目标产物。MS m/z 685.4(M⁺+1)。

步骤12：化合物3的制备

在室温下N₂中向环丙烷磺酸[(Z)-(1S，4R，6S，14S，18R)-18-(6-甲氧基-异喹啉-1-基氧基)-2，15-二氧代-14-硫脲基-3，16-二氮杂-三环[14.3.0.0^4，6]十九-7-烯-4-羰基]-酰胺(20mg，0.029mmol)和DIPEA(0.015mL，0.088mmol，3当量)在DMF(1ml)中的混合物中添加2-溴-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙酮(16.53mg，0.058mmol，2当量)。将混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物通过制备性HPLC纯化，得到10.9mg(0.012mmol，43％)的白色粉末状产物。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 0.97-1.02(m，2H)1.04-1.11(m，4H)1.25-1.37(m，2H)1.40(m，2H)1.57(m，2H)1.71(dd，J＝8.06，5.54Hz，2H)1.92-2.03(m，2H)2.40(d，J＝9.06Hz，1H)2.52-2.64(m，2H)2.83-2.93(m，2H)3.11(dt，J＝3.21，1.54Hz，2H)3.89(s，3H)4.21(dd，J＝11.71，3.90Hz，1H)4.63(t，J＝8.06Hz，1H)4.75-4.81(m，2H)5.08(d，J＝9.57Hz，1H)5.70(d，J＝10.07Hz，1H)6.02(s，1H)6.73(s，1H，NH)6.83-6.89(m，3H)7.12(d，J＝2.27Hz，1H)7.21(d，J＝6.04Hz，1H)7.60-7.67(m，2H)7.79(d，J＝6.04Hz，1H)9.00(s，1H，NH).MS m/z 869.3(M⁺+1)。

实施例4：化合物4的制备

除了用2-溴-1-(2，4-二氟苯基)乙酮在步骤12中代替2-溴-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙酮之外，通过实施例3的制备中所述的相同过程制备实施例4。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 0.96-1.02(m，1H)1.04-1.11(m，2H)1.25-1.31(m，1H)1.36(m，1H)1.58(dd，J＝9.44，5.41Hz，4H)1.71(dd，J＝8.06，5.54Hz，2H)1.91-2.03(m，2H)2.38-2.47(m，1H)2.50-2.61(m，1H)2.64(m，1H)2.85-2.95(m，1H)3.64(s，2H)3.90(s，3H)4.17(dd，J＝11.33，3.78Hz，1H)4.63(t，J＝8.18Hz，1H)4.74(dd，J＝10.58，3.27Hz，1H)4.88-4.96(m，2H)5.04-5.10(m，1H)5.66-5.73(m，1H)6.05(s，1H)6.45(td，J＝8.31，2.27Hz，1H)6.63(s，1H，NH)6.65-6.69(m，1H)6.89(dd，J＝9.06，2.52Hz，1H)7.12(d，J＝2.52Hz，1H)7.19(d，J＝5.79Hz，1H)7.58(d，J＝9.06Hz，1H)7.74-7.81(m，2H)8.98(s，1H，NH)MS m/z 821.6(M⁺+H)。

实施例5：化合物5的制备

除了用2-溴-1-苯乙酮在步骤12中代替2-溴-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙酮之外，通过实施例3的制备中所述的相同过程制备实施例5。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δppm 0.98-1.03(m，1H)1.05-1.12(m，2H)1.26-1.38(m，4H)1.47-1.59(m，2H)1.72(dd，J＝8.18，5.67Hz，1H)1.81(s，1H)2.02(s，2H)2.36(t，J＝8.94Hz，1H)2.55(ddd，J＝13.85，8.69，4.66Hz，2H)2.63-2.71(m，1H)2.91(tt，J＝7.93，4.91Hz，1H)3.64(s，3H)3.89(s，3H)4.18(dd，J＝11.58，3.78Hz，1H)4.57(s，1H)4.69-4.76(m，2H)5.01-5.11(m，2H)5.66-5.74(m，1H)5.98(s，1H)6.63(s，1H，NH)7.01(dd，J＝9.19，2.39Hz，1H)7.16(d，J＝2.52Hz，1H)7.19-7.26(m，4H)7.53(dd，J＝7.93，1.64Hz，2H)7.84(d，J＝6.04Hz，2H)9.09(s，1H，NH)MS m/z 785.6(M⁺+H)。

实施例6：化合物6的制备

除了用1，7-二氯-4-甲氧基-异喹啉(得自方案1实施例2)在步骤8中代替氯代异喹啉之外，通过实施例3的制备中所述的相同过程制备实施例6。¹H NMR(400MHz，MCD₃OD)δppm 0.99(ddd，J＝11.90，8.25，3.27Hz，1H)1.03-1.13(m，2H)1.24-1.36(m，2H)1.58(dd，J＝9.44，5.16Hz，4H)1.70(dd，J＝8.18，5.41Hz，2H)1.89-1.98(m，1H)2.02(s，1H)2.41-2.52(m，3H)2.64(s，1H)2.84-2.92(m，1H)3.31-3.34(m，2H)3.64(s，1H)3.92(s，3H)4.15(dd，J＝11.33，3.78Hz，1H)4.58(t，J＝8.31Hz，1H)4.78(dd，J＝10.95，3.15Hz，2H)5.03-5.13(m，2H)5.68(m，1H)6.08(s，1H)6.68(m，2H)6.75(s，1H)7.40(s，1H，NH)7.46(s，1H)7.52(dd，J＝8.81，2.27Hz，1H)7.56-7.62(m，2H)7.93(d，J＝8.81Hz，1H)8.93(s，1H，NH).MS m/z 903.3(M⁺+H)。

生物学研究

在本申请公开内容中采用HCV NS3/4A蛋白酶复合酶检验法和细胞基HCV复制检验法，并如下制备、进行和验证：

重组HCV NS3/4A蛋白酶复合物的生成

如下所述产生衍生自BMS株、H77株或J4L6S株的HCV NS3蛋白酶复合物。产生这些提纯的重组蛋白以用在均相检验法(见下文)中以指示本申请公开内容的化合物如何有效地抑制HCV NS3蛋白质分解活性。

来自HCV感染患者的血清获自Dr.T.Wright，San Francisco Hospital。由通过血清RNA(核糖核酸)的反转录-PCR(RT-PCR)获得的DNA片段和使用基于其它基因型1a株之间的同源性选择的引物，构造HCV基因组的工程全长cDNA(互补(compliment)脱氧核糖核酸)模板。通过测定整个基因组序列，根据Simmonds等人的分类法，将基因型1a归因于HCV分离物(参见P Simmonds，KA Rose，S Graham，SW Chan，F McOmish，BC Dow，EA Follett，PL Yap和H Marsden，J.Clin.Microbiol.，31(6)，1493-1503(1993))。非结构区域NS2-5B的氨基酸序列据显示＞97％等于HCV基因型1a(H77)和87％等于基因型1b(J4L6S)。感染克隆系H77(1a基因型)和J4L6S(1b基因型)获自R.Purcell(NIH)且序列公开在Genbank中(AAB67036，参见Yanagi，M.，Purcell，R.H.，Emerson，S.U.和Bukh，J.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94(16)，8738-8743(1997)；AF054247，参见Yanagi，M.，St Claire，M.，Shapiro，M.，Emerson，S.U.，Purcell，R.H.和Bukh，J，Virology 244(1)，161-172.(1998))。

H77和J4L6S株用于制造重组NS3/4A蛋白酶复合物。如P.Gallinari等人(参见Gallinari P，Paolini C，Brennan D，Nardi C，Steinkuhler C，De Francesco R.Biochemistry.38(17)：5620-32，(1999))所述使用为这些株的重组HCV NS3/4A蛋白酶复合物(氨基酸1027至1711)编码的DNA。简言之，在NS4A编码区的3’-端加入三个赖氨酸增溶尾(solubilizing tail)。将NS4A-NS4B分裂位点(氨基酸1711)的P1位置中的半胱氨酸换成甘氨酸以避免酪氨酸标签的蛋白水解。此外，在氨基酸位置1454处通过PCR引入半胱氨酸向丝氨酸突变以防止NS3解旋酶域中的自溶分裂。在pET21b细菌表达载体(Novagen)中克隆变异DNA片段，并根据修改的P.Gallinari等人描述的规程(参见Gallinari P，Brennan D，Nardi C，Brunetti M，Tomei L，Steinkuhler C，De Francesco R.，J Virol.72(8)：6758-69(1998))在大肠杆菌株BL21(DE3)(Invitrogen)中表达NS3/4A复合物。简言之，在20℃下用0.5毫摩尔(mM)异丙基β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)引发NS3/4A蛋白酶复合物表达22小时(h)。典型的发酵(1升(L))产生大约10克(g)湿细胞糊。将所述细胞重悬浮在由25mM N-(2-羟乙基)哌嗪-N′-(2-乙磺酸)(HEPES)，pH 7.5，20％甘油、500mM氯化钠(NaCl)、0.5％Triton X-100、1微克/毫升(″μg/m L″)溶菌酶、5mM氯化镁(MgCl2)、1μg/ml DnaseI、5mM β-巯基乙醇(βME)、蛋白酶抑制剂-乙二胺四乙酸(EDTA)free(Roche)构成的溶胞缓冲液(10毫升/克)中，匀浆并在4℃下培养20分钟(min)。将该匀浆声处理并通过在235000g下在4℃下超离心1小时来澄清化。向上清液中加入咪唑至15mM的最终浓度并将pH值调节至8.0。将该粗制蛋白质提取物加载在用缓冲液B(25mM HEPES，pH 8.0，20％甘油，500mM NaCl，0.5％Triton X-100，15mM咪唑，5mM βME)预平衡的镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)柱上。以1毫升/分钟的流速加载样品。该柱用15倍柱体积的缓冲液C(与缓冲液B相同，但含0.2％Triton X-100)洗涤。用5倍柱体积的缓冲液D(与缓冲液C相同，但含200mM咪唑)洗脱该蛋白质。

汇集含NS3/4A蛋白酶复合物的级分并加载在用缓冲液D(25mM HEPES，pH 7.5，20％甘油，300mM NaCl，0.2％Triton X-100，10mM βME)预平衡的脱盐柱Superdex-S200上。以1毫升/分钟的流速加载样品。汇集含NS3/4A蛋白酶复合物的级分并浓缩成大约0.5毫克/毫升。通过SDS-PAGE和质谱分析判断衍生自BMS、H77和J4L6S柱的NS3/4A蛋白酶复合物的纯度大于90％。将该酶储存在-80℃下，在冰上解冻并在使用之前在检验用缓冲液中稀释。

FRET肽检验法以监测HCV NS3/4A蛋白水解活性

这种体外检验法的目的是测量本申请公开内容的化合物对如上所述衍生自BMS株、H77株或J4L6S株的HCV NS3蛋白酶复合物的抑制。该检验法指示本申请公开内容的化合物如何有效地抑制HCV NS3蛋白质分解活性。

为了监测HCV NS3/4A蛋白酶活性，使用NS3/4A肽底物。该底物是Taliani等人在Anal.Biochem.240(2)：60-67(1996)中描述的RET S1(共振能传递缩酚肽底物(Resonance Energy Transfer Depsipeptide Substrate)；AnaSpec，Inc.cat # 22991)(FRET肽)。该肽的序列大致基于HCV NS3蛋白酶的NS4A/NS4B自然分裂位点，只是在该分裂位点处存在酯键而非酰胺键。该肽也在肽的一个末端附近含有荧光给体EDANS和在另一末端附近含有受体DABCYL。通过给体与受体之间的分子间共振能量转移(RET)猝灭肽的荧光，但随着NS3蛋白酶使该肽分裂，从RET猝灭中释放出产物且给体的荧光变明显。

用三种重组NS3/4A蛋白酶复合物之一在存在或不存在本申请公开内容的化合物的情况下培养肽底物。通过使用Cytofluor Series 4000实时监测荧光反应产物的形成，测定化合物的抑制效果。

试剂如下：HEPES和Glycerol(Ultrapure)获自GIBCO-BRL。二甲亚砜(DMSO)获自Sigma。β-巯基乙醇获自Bio Rad。

检验用缓冲液：50mM HEPES，pH 7.5；0.15M NaCl；0.1％Triton；15％甘油；10mM βME。底物：2μM最终浓度(来自储存在-20℃下的在DMSO中的2mM储液)。HCV NS3/4A蛋白酶1a型(1b)，2-3nM最终浓度(来自在25mM HEPES中的5μM储液，pH7.5，20％甘油，300mM NaCl，0.2％Triton-X100，10mM βME)。对于效力接近检验限的化合物，通过向检验用缓冲液中添加50微克/毫升胎牛血清白蛋白(Sigma)并将最终蛋白酶浓度降至300pM来使该检验更敏感。

在来自Falcon的96孔聚苯乙烯黑板中进行检验。各孔含有在检验用缓冲液中的25μl NS3/4A蛋白酶复合物、50微升在10％DMSO/检验用缓冲液中的本申请公开内容的化合物和25微升在检验用缓冲液中的底物。也在相同检验板上制备对照物(无化合物)。将该酶复合物与化合物或对照溶液混合1分钟，然后通过添加底物来引发酶促反应。立即使用Cytofluor Series 4000(Perspective Biosystems)读取检验板。将该仪器设定为在25℃下读取340纳米发射和490纳米激发。反应通常进行大约15分钟。

用下列公式计算抑制百分比：

            100-[(δF_inh/δF_con)x100]

其中δF是该曲线的线性范围内的荧光变化。对抑制-浓度数据应用非线性曲线拟合，并使用公式y＝A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))用Excel XLfit软件计算50％有效浓度(IC₅₀)。

发现所有受试化合物都以7nM或更低的IC50’s抑制NS3/4A蛋白酶复合物的活性。此外，针对多于一种的NS3/4A复合物测试的本申请公开内容化合物据发现具有类似抑制性质，尽管该化合物一律表现出比对1a株高的对1b株的效力。

特异性检验

进行特异性检验以证明与其它丝氨酸或半胱氨酸蛋白酶相比，本申请公开内容的化合物在抑制HCV NS3/4A蛋白酶复合物方面的体外选择性。

对照各种丝氨酸蛋白酶测定本申请公开内容的化合物的特异性：人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)、猪胰弹性蛋白酶(PPE)和人胰凝乳蛋白酶和一种半胱氨酸蛋白酶：人肝组织蛋白酶B。在所有情况下，如上所述使用经过一些修改的96孔板格式规程(其使用对各酶特异性的比色对硝基苯胺(pNA)底物或荧光氨基-甲基-香豆素(AMC)底物)(PCT专利申请No.WO 00/09543)。所有酶均购自Sigma、EMDbiosciences，而底物来自Bachem、Sigma和EMDbiosciences。

化合物浓度随其效力从100到0.4μM不等。通过将底物添加到在室温下预培养10分钟的酶-抑制剂中来引发酶检验，并且水解至在cytofluor上测定的15％转化率。

各检验的最终条件如下：

50mM三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)pH 8，0.5M硫酸钠(Na₂SO₄)，50mM NaCl，0.1mM EDTA，3％DMSO，0.01％Tween-20，含：5μM LLVY-AMC和1nM胰凝乳蛋白酶。

50mM Tris-HCl，pH 8.0，50mM NaCl，0.1mM EDTA，3％DMSO，0.02％Tween-20，5μM succ-AAPV-AMC和20nM HNE或8nM PPE；

100mM NaOAC(乙酸钠)pH 5.5，3％DMSO，1mM TCEP(三(2-羧基乙基)膦盐酸盐)，5nM组织蛋白酶B(在使用之前在含20mM TCEP的缓冲液中激活的酶储液)和在H₂O中稀释的2μM Z-FR-AMC。

使用下式计算抑制百分比：

        [1-((UV_inh-UV_空白)/(UV_ctl-UV_空白))]×100

对抑制浓度数据应用非线性曲线拟合，并使用Excel XLfit软件计算50％有效浓度(IC₅₀)。

HCV复制子的生成

如Lohmann V，Korner F，Koch J，Herian U，Theilmann L，Bartenschlager R.，Science 285(5424)：110-3(1999)所述建立HCV复制子全细胞系统。该系统使我们能够评测我们的HCV蛋白酶化合物对HCV RNA复制的影响。简言之，使用Lohmann论文中所述的HCV株1b序列(登录号：AJ238799)，Operon Technologies，Inc.(Alameda，CA)合成了HCV cDNA，然后在质粒pGem9zf(+)(Promega，Madison，WI)中使用标准分子生物技术组装全长复制子。该复制子由下列成分构成：(i)稠合到壳体蛋白的前12个氨基酸上的HCV 5’UTR，(ii)新霉素磷酸转移酶基因(neo)，(iii)来自脑心肌炎病毒(EMCV)的IRES，和(iv)HCV NS3至NS5B基因和HCV 3’UTR。质粒DNA用ScaI线性化并在体外使用T7MegaScript转录试剂盒(Ambion，Austin，TX)根据制造商的指示合成RNA转录产物。将cDNA的体外转录产物转染到人肝细胞瘤细胞系HUH-7中。在可选择的标记物新霉素(G418)的存在下实现在构成上表达HCV复制子的细胞的选择。随时间针对正链和负链RNA产生和蛋白质产生表征所得细胞系。

HCV复制子FRET检验法

开发HCV复制子FRET检验法以监测本申请公开内容中所述的化合物对HCV病毒复制的抑制效果。在含有10％胎牛血清(FCS)(Sigma)和1mg/ml G418(Gibco-BRL)的Dulbecco′s Modified Eagle培养基(DMEM)(Gibco-BRL)中使在构成上表达HCV复制子的HUH-7细胞生长。在前夜将细胞接种(1.5×10⁴个细胞/孔)在96孔组织培养无菌板中。在稀释板中在含4％FCS、1∶100青霉素/链霉素(Streptomysin)(Gibco-BRL)、1∶100 L-谷氨酰胺和5％DMSO的DMEM中制备化合物和无化合物的对照物(在该检验中0.5％DMSO最终浓度)。向细胞中加入化合物/DMSO混合物并在37℃下培养4天。4天后，首先针对CC50读数使用alamar Blue(Trek Diagnotstic Systems)评估细胞的细胞毒性。通过将1/10体积的alamar Blue添加到培养细胞的培养基中，测定化合物的毒性(CC₅₀)。4小时后，在530纳米激发波长和580纳米发射波长下使用Cytofluor Series 4000(Perspective Biosystems)读取来自各孔的荧光信号。然后用磷酸盐缓冲盐水(PBS)(150微升3次)充分漂洗各板。用25微升含HCV蛋白酶底物的溶胞检验试剂(5×细胞荧光素酶细胞培养溶胞试剂(Promega #E153A)，用蒸馏水稀释至1×，添加NaCl至150mM最终浓度，FRET肽底物(如上文对酶检验法所述)由在100％DMSO中的2mM储液稀释至10μM最终浓度)溶解细胞。HCV蛋白酶底物。然后将该板放入已设定至340纳米激发/490纳米发射的Cytofluor 4000仪器中，自动模式运行21周期，并以动态模式读取该板。如对IC₅₀测定所述进行EC₅₀测定。

HCV复制子荧光素酶报告基因检验法

作为二次检验法，在复制子荧光素酶报告基因检验法中验证来自复制子FRET检验法的IC50测定结果。Krieger等人(Krieger N，Lohmann V，和Bartenschlager R，J.Virol.75(10)：4614-4624(2001))最先描述了复制子荧光素酶报告基因检验法的应用。通过插入编码Renilla荧光素酶基因的人化形式的cDNA和直接稠合到荧光素酶基因的3’-端上的连接子序列，修改对我们的FRET检验法所述的复制子构造。使用位于刚好在新霉素标记基因上游的核中的Asc1限制位点将这种插入物引入复制子构造中。也介绍了位置1179(丝氨酸至异亮氨酸)处的适应性突变(Blight KJ，Kolykhalov，AA，Rice，CM，Science 290(5498)：1972-1974)。如上所述产生在构造上表达这种HCV复制子构造的稳定细胞系。如对HCV复制子FRET检验法所述，以下列修改设置荧光素酶报告基因检验法。在37℃/5％CO₂培养器中4天后，使用Promega Dual-Glo荧光素酶检验系统分析细胞的Renilla荧光素酶活性。从含细胞的各孔中取出培养基(100μl)。向其余50微升培养基中，加入50μlDual-Glo荧光素酶试剂，并将板在室温下摇动10分钟至2小时。然后向各孔中加入Dual-Glo Stop & Glo Reagent(50微升)，并将板在室温下再摇动10分钟至2小时。在Packard TopCount NXT上使用荧光程序读取板。

使用下式计算抑制百分比：

使用XLfit绘制和分析数值以获得EC₅₀值。

在HCV酶检测法、HCV复制子细胞检测法和/或在若干概述的特异性检验法中评估代表性的本申请公开内容化合物。例如，发现化合物1在酶检验法中具有对NS3/4A BMS株的8.7纳摩尔(nM)的IC₅₀。用公开的H77(1.9nM的IC₅₀)和J4L6S(1.2nM的IC₅₀)株获得类似的效力值。复制子FRET检验法中的EC₅₀值为21nM。

在特异性检验法中，发现同一化合物具有下列活性：HLE＝1.5μM；PPE＞25μM；胰凝乳蛋白酶＝25μM；组织蛋白酶B＞25μM。这些结果表明，这类化合物对NS3蛋白酶高度特异性且许多这些成员抑制HCV复制子复制。

测试本申请公开内容的化合物并发现具有下述活性：

表2

化合物号

IC50

EC50

1	7	20.5
			2	6	9.1
3	5	6.2
			4	11	13.8
5	3	8.1
			6	2	8.7

对于本领域技术人员显而易见的是，本公开内容不局限于上述示意性实施例，在不背离其本质性质的情况下，它可以以其它特定的形式表现。因此期望的是全面地考虑各个实施例，如对所附权利要求而非上述实施例进行说明性的而非限制性的参考，并且落入权利要求等价物的涵义和范围内的全部变化因此旨在包含于其中。

Claims (20)

1.式(I)化合物或其药学上可接受的盐

其中

Q是C_3-9饱和的或不饱和的链，任选地含有一至三个独立地选自O、S(O)_m、和NR⁸的杂原子；其中m是0、1或2，并且R⁸选自氢、烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、氨基羰基、芳基磺酰基、环烷基、(环烷基)烷基、环烷基氧基、二烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基烷基、卤代烷基和杂环基羰基；

R¹选自烷基羰基、芳基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、杂环基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、和(NR^gR^h)羰基；其中所述芳基，所述芳基烷基、所述芳基烷基羰基和所述芳基羰基的芳基部分，所述杂环基，和所述杂环基烷基和所述杂环基烷基羰基的杂环基部分各自被一至六个R⁷基团任选取代；

R²选自烷基、芳基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、和-NR^aR^b，其中所述烷基、所述环烷基和所述(环烷基)烷基的环烷基部分被一个、两个或三个选自烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、环烯基、(环烷基)烷基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、和(NR^eR^f)羰基的取代基任选取代；

R³和R⁴独立地选自氢、烷氧基烷基、烷基、卤代烷氧基烷基、和卤代烷基；

R⁵选自氢、烷基和卤代烷基；

R⁶选自苯基和五元或六元任选含有一个、两个、三个或四个选自氮、氧和硫的杂原子的部分或完全不饱和环；其中每个环被一个、两个、三个或四个独立选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基、芳基、羧基、氰基、环烷基、环烷基氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、-NR^cR^d、(NR^eR^f)羰基、(NR^eR^f)磺酰基、和氧代的取代基任选取代；条件是当R⁶是六元的被取代环时，除氟以外的所有环上取代基必须在相对于该环与母体分子部分连接点的间位和/或对位；

每个R⁷独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、羧基、氰基、氰基烷基、环烷基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、杂环基、羟基、羟基烷基、硝基、-NR^cR^d、(NR^cR^d)烷基、(NR^cR^d)烷氧基、(NR^eR^f)羰基、和(NR^eR^f)磺酰基；或者

两个相邻的R⁷基团连同它们所连接的碳原子一起形成四至七元部分或完全不饱和环，所述环任选地含有一个或两个独立地选自氮、氧、和硫的杂原子，其中所述环被一、二、或三个独立地选自烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、和卤代烷基的基团任选取代；

R^a和R^b独立地选自氢、烷氧基、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、和杂环基烷基；或者R^a和R^b连同它们所连接的氮原子一起形成四至七元单环杂环；

R^c和R^d独立地选自氢、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基烷基、和卤代烷基；

R^e和R^f独立地选自氢、烷基、芳基、芳基烷基、和杂环基；其中所述芳基、所述芳基烷基的芳基部分、和杂环基被一个或两个独立地选自烷氧基、烷基、和卤素的取代基任选取代；和

R^g和R^h独立地选自氢、烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环基、和杂环基；或者R^g和R^h连同它们所连接的氮原子一起形成单环杂环，其中，所述单环杂环任选地稠合至苯环以形成双环体系；其中，所述单环杂环和双环体系被一个、两个或三个独立地选自烷氧基、烷基、卤素、卤代烷氧基、和卤代烷基的取代基任选取代。

2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R²选自烷基和环烷基，其中所述环烷基被一个选自烯基、烷氧基、烷基、和卤素的取代基任选取代。

3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹选自杂环基和(NR^gR^h)羰基，其中所述杂环基被一至六个R⁷基团任选取代。

4.权利要求3的化合物，其中R¹是杂环基。

5.权利要求4的化合物，其中所述杂环基是被一个或两个R⁷基团任选取代的异喹啉基。

6.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R³和R⁴各自是氢并且Q是不含杂原子的C₆不饱和链。

7.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，

其中

Q是不含杂原子的C₆不饱和链；

R¹是杂环基，其中所述杂环基是被一个或两个R⁷基团任选取代的异喹啉基；

R²选自烷基和环烷基，其中，所述的环烷基被一个选自烯基、烷氧基、烷基、和卤素的取代基任选取代；

R³和R⁴各自是氢；并且

R⁶是含有一个氮原子的六元完全不饱和环，其中该环被一个、两个、三个或四个独立地选自烷氧基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基硫烷基、芳基、羧基、氰基、环烷基、环烷基氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、-NR^cR^d、(NR^eR^f)羰基、(NR^eR^f)磺酰基、和氧代的取代基任选取代；条件是除氟以外的所有环上取代基必须在相对于该环与母体分子部分连接点的间位和/或对位。

8.选自以下的化合物或其药学上可接受的盐

9.一种组合物，其包含权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体。

10.权利要求9的组合物，其进一步包含至少一种具有抗HCV活性的另外的化合物。

11.权利要求10的组合物，其中至少一种另外的化合物是干扰素或利巴韦林。

12.权利要求11的组合物，其中所述的干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、共有序列干扰素、干扰素α2A、和类淋巴母细胞干扰素τ。

13.权利要求10的组合物，其中至少一种另外的化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助性T细胞应答的发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、肌苷5’-单磷酸酯脱氢酶抑制剂、金刚烷胺、和金刚乙胺。

14.权利要求10的组合物，其中，至少一种另外的化合物有效抑制选自以下的靶标的功能，以用于HCV感染的治疗：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV放出、HCV NS5A蛋白、和IMPDH。

15.一种在患者中治疗HCV感染的方法，包括将治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐给予患者。

16.权利要求15的方法，进一步包括将至少一种具有抗HCV活性的另外的化合物在权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐之前、之后、或同时给药。

17.权利要求16的方法，其中至少一种另外的化合物是干扰素或利巴韦林。

18.权利要求17的方法，其中，所述的干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、共有序列干扰素、干扰素α2A、和类淋巴母细胞干扰素τ。

19.权利要求16的方法，其中至少一种另外的化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助性T细胞应答的发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、肌苷5’-单磷酸酯脱氢酶抑制剂、金刚烷胺、和金刚乙胺。

20.权利要求16的方法，其中至少一种另外的化合物有效抑制选自以下的靶标的功能，以用于HCV感染的治疗：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV放出、HCV NS5A蛋白、和IMPDH。