CN102203612A - 用于抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体、抗磷脂抗体测定试剂及抗磷脂抗体的测定方法 - Google Patents
用于抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体、抗磷脂抗体测定试剂及抗磷脂抗体的测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102203612A CN102203612A CN200980144306.1A CN200980144306A CN102203612A CN 102203612 A CN102203612 A CN 102203612A CN 200980144306 A CN200980144306 A CN 200980144306A CN 102203612 A CN102203612 A CN 102203612A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phospholipid antibody
- insoluble carrier
- reagent
- antibody
- mentioned
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明的目的在于提供用于反应性高的抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体。另外,本发明还可提供抗磷脂抗体测定试剂及抗磷脂抗体的测定方法。本发明为抗磷脂抗体测定试剂所使用的不溶性载体,按照在20mmol/L的磷酸钠水溶液(pH7.4)中固态成分浓度达到0.1%的方式进行混悬时的Z-电位小于-45mV。
Description
技术领域
本发明涉及反应性高的抗磷脂抗体测定试剂所使用的不溶性载体。另外,本发明还提供抗磷脂抗体测定试剂及抗磷脂抗体的测定方法。
背景技术
作为血液、尿等中所含微量物质的测定方法采用免疫学的测定方法。免疫学的测定方法基于抗原抗体反应的特异性的强大结合,即便从各种物质混存的试样中也可特异地、灵敏度良好地对目标物质进行测定。
但是,近年来对血液中的癌标记物、病毒等抗原,相对于细菌或病毒的抗体等极微量成分进行测定的需求有所提高,强烈需求免疫学测定方法的进一步的高灵敏度化。
作为实现免疫学测定方法的高灵敏度化的尝试,例如提出了在一定条件下对免疫学测定方法所使用的不溶性载体的Z-电位进行测定,选择处于-20mV以上且小于0mV的范围的载体,高效且大量地将抗原或抗体物理吸附的方法(专利文献1);使用将免疫学测定方法所用胶乳粒子表面的磺酸基量控制为0.005~0.7μmol/m2范围的载体的方法(专利文献2)等。
以往技术文献
【专利文献1】日本特开平7-270423号公报
【专利文献2】日本国际公开第03/005031号小册子
发明内容
发明预解决的技术问题
本发明的目的在于提供反应性高的抗磷脂抗体测定试剂所用的不溶性载体。另外,本发明的目的在于提供抗磷脂抗体测定试剂及抗磷脂抗体的测定方法。
用于解决技术问题的方法
本发明人等发现,与通常的使蛋白质构成的抗原或抗体吸附在不溶性载体上的情况不同,在使磷脂吸附在Z-电位为-20mV以上且小于0mV范围的不溶性载体的方法中,具有无法足够高灵敏度地测定抗磷脂抗体的问题。
本发明人等进行深入研究,结果发现在使亲水性部分少的磷脂吸附于不溶性载体时,与相同粒径、Z-电位不同的不溶性载体相比较时,使用了Z-电位低的不溶性载体的反应性更高,即可获得高灵敏度的抗磷脂抗体测定试剂,进而完成本发明。
具体地说,本发明为用于抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体,其在20mmol/L的磷酸钠水溶液(pH7.4)中按照固态成分浓度达到0.1%进行混悬时的Z-电位小于-45mV。
另外,本发明为使用上述不溶性载体的抗磷脂抗体测定试剂及使用上述不溶性载体的抗磷脂抗体的测定方法。
对于使用Z-电位低的不溶性载体而获得反应性高的抗磷脂抗体测定试剂的理由并不清楚。一般来说,Z-电位越接近0,则不溶性载体的排斥性越降低、变得越易凝集,因此可以说越是Z-电位接近0的不溶性载体,其反应性越高。但是,当电位完全消失、即达到0时,由于发生了自身凝集,因而需要一定程度的电位。另外,即便是被不溶性载体吸附的抗原(或抗体)与发生反应的抗体(或抗原)之间的距离过近,由于难以发生抗原抗体反应,因而认为保持一定程度的距离会引起稳定的反应。
使蛋白质来源的抗原或抗体吸附在不溶性载体上时,由于蛋白质中的亲水性氨基酸来源的电位会加于不溶性载体表面的电位,因此即便使用Z-电位接近0的不溶性载体,在吸附了蛋白质来源的抗原或抗体后,会存在一定程度的电位。但是,当使磷脂吸附于不溶性载体时,由于磷脂本身的亲水性部分很少,因而电位基本消失,使用Z-电位接近0的不溶性载体时,无法获得稳定的反应。另外,由于Z-电位的绝对值增大,因而所载持的磷脂分子的方向可能变为适于与抗磷脂抗体反应的方向。
以下详细地说明本发明。
本发明的用于抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体是在20mmol/L的磷酸钠水溶液(pH7.4)中按照固态成分浓度达到0.1%进行混悬时的Z-电位小于-45mV的不溶性载体。由于上述Z-电位小于-45mV,使用本发明的用于抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体而成的抗磷脂抗体测定试剂具有很高的反应性。上述Z-电位的下限并无特别限定,实质上-100mV左右为下限。上述Z-电位优选为-74mV以下。
本发明的用于抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体并无特别限定,例如可举出有机高分子粉末、微生物、血细胞、细胞膜片。其中,优选有机高分子粉末。
上述有机高分子粉末可举出天然高分子粉末、合成高分子粉末。
上述天然高分子粉末并无特别限定,例如可举出不溶性琼脂糖、纤维素、不溶性葡聚糖等。
上述合成高分子粉末并无特别限定,例如可举出聚苯乙烯、苯乙烯-磺酸(盐)共聚物、苯乙烯-(甲基)丙烯酸共聚物、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物、氯乙烯-(甲基)丙烯酸酯共聚物、乙酸乙烯酯-(甲基)丙烯酸酯共聚物等。
本发明的用于抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体可以是在表面导入有磺酸基或羧基等的不溶性载体。
其中,合成高分子微粒优选为均匀分散于水介质中的胶乳粒子。
上述胶乳粒子由具有苯基的聚合性单体和具有苯基及磺酸基的聚合性单体的共聚物构成。上述具有苯基的聚合性单体并无特别限定,例如可举出苯乙烯、二乙烯基苯、乙基苯乙烯、α-甲基苯乙烯、p-甲基苯乙烯、p-氯苯乙烯、氯甲基苯乙烯等。这些具有苯基的聚合性单体可单独使用,还可并用2种以上。其中优选苯乙烯。
上述具有苯基及磺酸基的聚合性单体只要是能够使聚合后的载体粒子表面含有磺酸基的单体则无特别限定,例如可举出苯乙烯磺酸盐、二乙烯基苯磺酸盐、乙基苯乙烯磺酸盐、α-甲基磺酸盐等。另外,此时的盐并无特别限定,例如可举出钠盐、钾盐、锂盐、铵盐等。这些具有苯基及磺酸基的聚合性单体可单独使用,还可并用2种以上。其中,优选苯乙烯磺酸盐、更优选苯乙烯磺酸钠。
上述胶乳粒子通过将上述具有苯基的聚合性单体与上述具有苯基及磺酸基的聚合性单体共聚而获得。
作为使上述具有苯基的聚合性单体与上述具有苯基及磺酸基的聚合性单体共聚的方法,可以使用以往公知的方法,例如在作为溶剂装有水的反应容器内添加上述具有苯基的聚合性单体、上述具有苯基和磺酸基的聚合性单体、聚合引发剂及根据需要的乳化剂,在氮气气氛中进行搅拌的方法等。
将上述具有苯基的聚合性单体与上述具有苯基和磺酸基的聚合性单体共聚时的聚合温度并无特别限定,优选的下限为50℃、优选的上限为100℃。上述聚合温度小于50℃时,聚合反应有时不会充分地进行。上述聚合温度超过100℃时,聚合速度变得过快,有时难以控制粒径。上述聚合温度的更优选的下限为60℃,更优选的上限为85℃。另外,聚合时间随聚合性单体的组成、浓度及聚合引发剂等的条件而不同,通常为5~50小时。
上述具有苯基和磺酸基的聚合性单体相对于上述具有苯基的聚合性单体的配合量有必要考虑通过共聚所获得的粒子表面的磺酸基量及粒径进行设定。并非使通常的蛋白质来源的抗原或抗体吸附在本发明的用于抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体上,而是使之吸附电荷少的磷脂。因而,当磺酸基量少时,则吸附了磷脂后的粒子之间的电荷排斥很弱、有发生自然凝集的危险,无法获得稳定的试剂。因而,优选胶乳粒子表面的磺酸基量为0.1μmol/m2以上。因此,上述具有苯基和磺酸基的聚合性单体相对于具有苯基的聚合性单体的配合量优选为0.02~0.2重量%,使得共聚后的粒子表面的磺酸基量达到0.1~0.7μmol/m2。
予以说明,上述胶乳粒子表面的磺酸基量可利用电导度滴定法(Journal of Colloid and Interface Sciences.49(3)425,1974)求得,通过将该值除以由所得粒径求得的粒子的总表面积,可求出每单位面积的磺酸基量。
上述聚合引发剂并无特别限定,例如可举出过硫酸盐类等。
上述过硫酸盐类并无特别限定,优选过硫酸钾、过硫酸钠、过硫酸铵等。
上述聚合引发剂的配合量并无特别限定,通常相对于聚合性单体量为0.01~1重量%的范围。
上述乳化剂通常优选不使用,其原因在于,当上述胶乳粒子中含有乳化剂时,则有阻碍测定精度等的问题,但当需要调整上述胶乳粒子表面的磺酸基量时,可根据需要进行使用。
上述乳化剂的配合量并无特别限定,考虑到利用聚合后的后处理工序进行除去,相对于具有苯基的聚合性单体优选的上限为1重量%、更优选的上限为0.5重量%、进一步优选的上限为0.02重量%。上述乳化剂的配合量的优选下限为0.01重量%。
另外,在使上述具有苯基的聚合性单体与上述具有苯基和磺酸基的聚合性单体共聚时,还可添加聚合性不饱和单体。上述聚合性不饱和单体只要是在通常的自由基聚合中能够使用则无特别限定,例如可举出(甲基)丙烯酸、(甲基)丙烯酸酯、苯乙烯衍生物、(甲基)丙烯腈、(甲基)丙烯酰胺、卤乙烯、乙烯基酯、(甲基)丙烯醛、马来酸衍生物、富马酸衍生物等。
予以说明,本说明书中(甲基)丙烯酸是指丙烯酸或甲基丙烯酸。
进而,在使上述具有苯基的聚合性单体与上述具有苯基和磺酸基的聚合性单体共聚时,为了提高聚合稳定性,还可根据需要添加各种盐类。上述盐类只要在通常的自由基聚合中使用,则无特别限定,例如可举出硫酸镁、硫酸钙、硫酸二钠、硫酸二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化钠、氯化钾等。
测定所使用的胶乳粒子的平均粒径可通过测定方法或所用的测定机器适当选择,一般来说优选的下限为0.01μm、优选的上限为1.5μm。上述胶乳粒子的平均粒径小于0.01μm时,则凝集所导致的光学变化量过小,无法获得测定所必须的灵敏度,而试剂调制时的离心分离时需要很多时间,试剂成本有时会提高。上述胶乳粒子的平均粒径超过1.5μm时,当被测定物质为高浓度时,胶乳粒子的凝集所导致的光学变化量会超过可测定的区域,无法获得对应于被测定物质的量的光学变化量。考虑到使用了常用的自动分析装置时的抗磷脂抗体测定的灵敏度时,本发明所用胶乳粒子的平均粒径的优选的下限为0.2μm、优选的上限为0.5μm、更优选的下限为0.3μm、更优选的上限为0.4μm。予以说明,该平均粒径可以通过使用了透射型电子显微镜装置的图像解析求得。
上述胶乳粒子的粒径的变异系数(以下也称作CV值(%))并无特别限定,优选的上限为10%。上述胶乳粒子的粒径的CV值(%)超过10%时,试剂调制时的批次再现性差、测定试剂的再现性会降低。上述胶乳粒子的粒径的CV值(%)的更优选上限为5%、进一步优选的上限为3%。
予以说明,上述粒径的CV值(%)可通过下式计算。
粒径的CV值(%)=粒径的标准偏差/平均粒径×100
上述胶乳粒子不仅为1种粒子,只要是在20mmol/L的磷酸钠水溶液(pH7.4)中按照固态成分浓度达到0.1%进行悬浊时的Z-电位小于-45mV,则可使用Z-电位不同的2种以上的胶乳粒子。通过使用2种以上的胶乳粒子,可以在从低浓度到高浓度的宽浓度范围内,以高灵敏度且高精度测定抗原抗体反应,特别是作为分光光度计、浊度计、光散射测定装置等光学测定装置用可获得优选的测定试剂。
本发明之一为用于抗磷脂抗体测定的抗磷脂抗体测定试剂,其含有载持有磷脂抗原的不溶性载体和缓冲液,载持上述磷脂抗原之前的不溶性载体在20mmol/L的磷酸钠水溶液(pH7.4)中按照固态成分浓度达到0.1%的方式进行混悬时的Z-电位小于-45mV。
本发明的抗磷脂抗体测定试剂含有载持有磷脂抗原的不溶性载体。
上述磷脂抗原并无特别限定,例如优选包含心磷脂、卵磷脂及胆固醇的磷脂抗原。
上述心磷脂优选使用由牛心精制的物质,还可以经化学合成。
上述卵磷脂优选使用由鸡蛋黄精制的物质,也可用卵磷脂的含有量为60~80%的卵磷脂。另外,还可以是由牛心或大豆等中提取的物质或者经化学合成的物质。
上述胆固醇可以是动物来源的,还可经化学合成。
上述心磷脂、卵磷脂及胆固醇的混合比并无特别限定,相对于心磷脂1mg,卵磷脂优选为8~12mg、胆固醇优选为1~5mg。
作为将上述磷脂抗原载持于上述不溶性载体的方法并无特别限定,可举出利用以往公知的方法通过物理及/或化学键合将其载持的方法等。
本发明的抗磷脂抗体测定试剂含有缓冲液。
上述缓冲液具有使载持有上述磷脂抗原的胶乳粒子分散或悬浮的作用。
上述缓冲液并无特别限定,例如可举出磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris盐缓冲液、Good’s缓冲液等。
上述缓冲液的pH并无特别限定,优选的下限为5.5、优选的上限为8.5、更优选的下限为6.5。
本发明的抗磷脂抗体测定试剂以提高测定灵敏度及促进抗原抗体反应为目的,还可含有水溶性高分子。
上述水溶性高分子并无特别限定,例如可举出普鲁兰多糖(pullulan)、聚乙烯吡咯烷酮等。
本发明之一为提供一种抗磷脂抗体的测定方法,其为具有以下工序的使用抗磷脂抗体测定试剂的抗磷脂抗体的测定方法:将含有载持了磷脂抗原的不溶性载体和缓冲液的抗磷脂抗体测定试剂与检体混合,通过抗原抗体反应产生凝集的工序;通过光学测定或目视观察上述凝集程度,从而测定检体中的脂质抗体的工序,载持上述磷脂抗原之前的不溶性载体在20mmol/L的磷酸钠水溶液(pH7.4)中按照固态成分浓度达到0.1%的方式进行混悬时的Z-电位小于-45mV。
光学测定上述凝集程度的方法并无特别限定,使用以往公知的方法,例如可举出通过所用不溶性载体的粒子的大小、浓度的选择、反应时间的设定,测定散射光强度、吸光度、透射光强度的增减的方法。另外,还可将这些方法并用。
予以说明,进行上述测定时的光的波长优选为300~900nm。
使用对上述吸光度的增减进行测定的方法时,为了进行正确的测定,需要作为标准血清中的最高浓度的8.0R.U.(梅毒阳性抗体价的单位、1.0R.U.以上时诊断为梅毒阳性)的吸光度变化量至少达到250mAbs的反应性。8.0R.U.的吸光度变化量为250mAbs时,成为判断抗磷脂抗体测定试剂的阴性或阳性的界限的1.0R.U.的吸光度变化量约为30mAbs。1.0R.U.的吸光度变化量为30mAbs以下时,数据的再现性显著降低,无法正确地进行是阴性还是阳性的判定。
光学测定上述凝集程度的方法所使用的装置并无特别限定,可举出能检测散射光强度、透射光强度、吸光度等的光学机器,只要是一般使用的生化学自动分析机,则可以使用任何一种。
目视观察上述凝集程度的方法通常可使用在判定板上混合检体和本发明的抗磷脂抗体测定试剂,振摇混合液后,判断有无凝集的方法等。
予以说明,凝集程度的观察中,除了利用目视的方法之外,还可使用利用数码相机等拍摄凝集状态、实施图像处理的方法。
发明效果
本发明可以提供用于反应性高的抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体。另外,本发明还可提供抗磷脂抗体测定试剂及抗磷脂抗体的测定方法。
附图说明
【图1】表示使用实施例1、实施例4及比较例1的RPR标准血清8.0R.U.时的吸光度变化量变化的曲线。
具体实施方式
以下举出实施例,更加详细地说明本发明,但本发明并非仅限定于这些实施例。
(1)胶乳LotA
(胶乳粒子的制作)
在具备搅拌机、回流用冷却器、温度检测器、氮气导入管及套管的玻璃制反应容器(容量2L)中装入蒸馏水1100g、苯乙烯180g、苯乙烯磺酸钠0.04g及在蒸馏水26g中溶解有过硫酸钾0.8g的水溶液,利用氮气将容器内置换后,一边在70℃下搅拌一边聚合48小时。
聚合结束后,使用滤纸对上述溶液进行过滤处理,将胶乳粒子取出。利用下述方法测定所得胶乳粒子的粒径、表面的磺酸基量及Z-电位。
(胶乳粒子的平均粒径)
使用透过型电子显微镜装置(日本电子社制、“JEM-1010型”)以10000倍的倍率拍摄胶乳粒子,对最低100个以上的粒子进行图像解析,从而测定粒径。所得的平均粒径为0.4μm。
(胶乳粒子表面的磺酸基量)
使用赛璐玢管透析膜用精制水对胶乳粒子透析48小时,将残存单体除去。按照干燥重量达到10g,将该粒子放入4口玻璃容器后,利用蒸馏水进行稀释,直至达到150mL,使用搅拌器进行搅拌。将其作为溶液A。
接着,在电位差电导度滴定处理装置(京都电子工业社制、“AT-310”)的附带装置ATB-310电动滴管中放置0.01N氢氧化钠(和光纯药工业社制),进而将导电率电极浸渍在溶液A中,设定氮气导入管、脱气管及pH电极。然后,滴加0.01N氢氧化钠(由在150秒~500秒的范围内测定0.05mL的磺酸基量进行调整),由使用了电位差电导度滴定处理装置(京都电子工业社制、“AT-310”)的传导度变化量测定当量点,计算目标的磺酸基量。所得的磺酸基量为0.28μmol/m2。
(胶乳粒子的Z-电位)
按照在20mmol/L的磷酸钠水溶液(pH7.4)中固态成分浓度达到0.1%,调整胶乳粒子,将其作为Z-电位测定用样品。
接着,使用Z-电位测定装置(Malvem Instruments Ltd.社制、“Zetasizer Nano ZEN3600”)向Z-电位测定用毛细管内注入测定样品750μL,在测定温度37℃下测定Z-电位。所得Z-电位为-74mV。
(2)胶乳LotB
除了使苯乙烯磺酸钠的配合量为0.08g之外,与LotA同样地制作胶乳粒子。利用与LotA相同的方法进行评价,所得胶乳粒子的平均粒径为0.3μm、磺酸基量为0.23μmol/m2、Z-电位为-77mV。
(3)胶乳LotC
除了使蒸馏水的配合量为1020g、苯乙烯磺酸钠的配合量为0.25g、代替在蒸馏水26g中溶解有过硫酸钾0.8g的水溶液使用在蒸馏水13g中溶解有过硫酸钾0.4g的水溶液、进而添加0.1mol/L磷酸氢二钾80g之外,与LotA同样地制作胶乳粒子。利用与LotA相同的方法进行评价,所得胶乳粒子的平均粒径为0.3μm、磺酸基量为0.16μmol/m2、Z-电位为-88mV。
(4)胶乳Lot D
除了使蒸馏水的配合量为1020g、苯乙烯磺酸钠的配合量为0.20g、代替在蒸馏水26g中溶解有过硫酸钾0.8g的水溶液使用在蒸馏水16g中溶解有过硫酸钾0.6g的水溶液、进而添加0.1mol/L磷酸氢二钾80g之外,与LotA同样地制作胶乳粒子。利用与LotA相同的方法进行评价,所得胶乳粒子的平均粒径为0.4μm、磺酸基量为0.18μmol/m2、Z-电位为-86mV。
(5)胶乳Lot E
除了使苯乙烯磺酸钠的配合量为0.01g、代替在蒸馏水26g中溶解有过硫酸钾0.8g的水溶液使用在蒸馏水4g中溶解有过硫酸钾0.1g的水溶液之外,与LotA同样地制作胶乳粒子。利用与LotA相同的方法进行评价,所得胶乳粒子的平均粒径为0.4μm、磺酸基量为0.06μmol/m2、Z-电位为-29mV。
(实施例1)
(1)缓冲液(第1试剂)的调制
在含有1.2(W/V)%的普鲁兰多糖(林原社制)、1.0(W/V)%的牛血清白蛋白(BSA)的25mmol/L的磷酸缓冲液(pH6.5)100mL中添加氯化钠0.9g和叠氮化钠0.1g,制成缓冲液(第1试剂)。
(2)磷脂抗原致敏胶乳试剂(第2试剂)的调制
混合心磷脂的乙醇溶液(5mg/mL、シグマ社制)2mL、精制卵磷脂(ナカライテスク社制)的乙醇溶液(10mg/mL)10mL及胆固醇(ナカライテスク社制)的乙醇溶液(10mg/mL)3mL,获得磷脂抗原液。
在胶乳粒子(LotA)100μL中添加所得磷脂抗原液250μL,直接在37℃下缓慢搅拌2小时。接着,添加以5(W/V)%浓度含有BSA的100mmol/L的磷酸缓冲液(pH6.5)3mL,进一步在37℃下搅拌1小时。在15000rpm、4℃下离心分离30分钟,除去上清液,将沉淀的胶乳粒子再次混悬于以1(W/V)%浓度含有BSA的100mmol/L的磷酸缓冲液(pH6.5)2mL中。重复该操作2次,对胶乳粒子进行洗涤,最后混悬在含有10mmol/L的EDTA·4Na及500mmol/L的氯化胆碱的100mmol/L的磷酸缓冲液(pH6.5)10mL中,制成磷脂抗原致敏胶乳试剂(第2试剂)。
(实施例2)
除了将胶乳粒子改变为LotB之外,与实施例1同样地调制缓冲液(第1试剂)、磷脂抗原致敏胶乳试剂(第2试剂)。
(实施例3)
除了将胶乳粒子改变为LotC之外,与实施例1同样地调制缓冲液(第1试剂)、磷脂抗原致敏胶乳试剂(第2试剂)。
(实施例4)
除了将胶乳粒子改变为LotD之外,与实施例1同样地调制缓冲液(第1试剂)、磷脂抗原致敏胶乳试剂(第2试剂)。
(比较例1)
除了将胶乳粒子改变为LotE之外,与实施例1同样地调制缓冲液(第1试剂)、磷脂抗原致敏胶乳试剂(第2试剂)。
<评价>
对于实施例及比较例中获得的缓冲液(第1试剂)、磷脂抗原致敏胶乳试剂(第2试剂)利用以下方法进行评价。
在市售的RPR标准血清8.0R.U.(积水メデイカル社制)20μL中混合缓冲液(第1试剂)180μL,在37℃保持5分钟后,添加磷脂抗原致敏胶乳试剂(第2试剂)60μL进行搅拌,在测定波长700nm下,使用日立7170形生化学自动分析机测定添加后1分钟及5分钟的吸光度变化。将结果示于表1及图1。
由图1可知,在-45mV以上的Z-电位下,无法满足必要的吸光度变化量,另外,Z-电位越降低,则吸光度变化量越大。
【表1】
平均粒径(μm) | Z-电位(mV) | 吸光度变化量(mAbs) | |
实施例1 | 0.4 | -74 | 323 |
实施例2 | 0.3 | -77 | 427 |
实施例3 | 0.3 | -88 | 496 |
实施例4 | 0.4 | -86 | 509 |
比较例1 | 0.4 | -29 | 214 |
产业上利用的可能性
本发明可以提供用于反应性高的抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体。另外,本发明还可提供抗磷脂抗体测定试剂及抗磷脂抗体的测定方法。
权利要求书(按照条约第19条的修改)
1.一种不溶性载体,其为用于抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体,其特征在于,按照在pH7.4、20mmol/L的磷酸钠水溶液中固态成分浓度为0.1%的方式进行混悬时的Z-电位不到-45mV。
2.根据权利要求1所述的不溶性载体,其特征在于,平均粒径为0.2μm~0.5μm。
3.一种抗磷脂抗体测定试剂,其为用于抗磷脂抗体测定的抗磷脂抗体测定试剂,其特征在于,
其含有载持了磷脂抗原的不溶性载体和缓冲液,
载持所述磷脂抗原之前的不溶性载体按照在pH7.4、20mmol/L的磷酸钠水溶液中固态成分浓度为0.1%的方式进行混悬时的Z-电位不到-45mV。
4.根据权利要求3所述的抗磷脂抗体测定试剂,其特征在于,不溶性载体的平均粒径为0.2μm~0.5μm。
5.一种抗磷脂抗体的测定方法,其为具有以下工序的抗磷脂抗体的测定方法:将含有载持了磷脂抗原的不溶性载体和缓冲液的抗磷脂抗体测定试剂与检体混合,通过抗原抗体反应产生凝集的工序;以及通过光学测定或目视观察所述凝集的程度,从而测定检体中的脂质抗体的工序,其中,
载持所述磷脂抗原之前的不溶性载体按照在pH7.4、20mmol/L的磷酸钠水溶液中固态成分浓度为0.1%的方式进行混悬时的Z-电位不到-45mV。
6.根据权利要求5所述的抗磷脂抗体的测定方法,其特征在于,不溶性载体的平均粒径为0.2μm~0.5μm。
7.(追加)根据权利要求1所述的不溶性载体,其特征在于,不含乳化剂。
8.(追加)根据权利要求1所述的不溶性载体,其特征在于,按照在pH7.4、20mmol/L的磷酸钠水溶液中固态成分浓度为0.1%的方式进行混悬时的Z-电位为-74mV以下。
Claims (6)
1.一种不溶性载体,其为用于抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体,其特征在于,按照在pH7.4、20mmol/L的磷酸钠水溶液中固态成分浓度为0.1%的方式进行混悬时的Z-电位不到-45mV。
2.根据权利要求1所述的不溶性载体,其特征在于,平均粒径为0.2μm~0.5μm。
3.一种抗磷脂抗体测定试剂,其为用于抗磷脂抗体测定的抗磷脂抗体测定试剂,其特征在于,
其含有载持了磷脂抗原的不溶性载体和缓冲液,
载持所述磷脂抗原之前的不溶性载体按照在pH7.4、20mmol/L的磷酸钠水溶液中固态成分浓度为0.1%的方式进行混悬时的Z-电位不到-45mV。
4.根据权利要求3所述的抗磷脂抗体测定试剂,其特征在于,不溶性载体的平均粒径为0.2μm~0.5μm。
5.一种抗磷脂抗体的测定方法,其为具有以下工序的抗磷脂抗体的测定方法:将含有载持了磷脂抗原的不溶性载体和缓冲液的抗磷脂抗体测定试剂与检体混合,通过抗原抗体反应产生凝集的工序;以及通过光学测定或目视观察所述凝集的程度,从而测定检体中的脂质抗体的工序,其中,
载持所述磷脂抗原之前的不溶性载体按照在pH7.4、20mmol/L的磷酸钠水溶液中固态成分浓度为0.1%的方式进行混悬时的Z-电位不到-45mV。
6.根据权利要求5所述的抗磷脂抗体的测定方法,其特征在于,不溶性载体的平均粒径为0.2μm~0.5μm。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008289581 | 2008-11-12 | ||
JP2008-289581 | 2008-11-12 | ||
PCT/JP2009/069273 WO2010055883A1 (ja) | 2008-11-12 | 2009-11-12 | 抗リン脂質抗体測定試薬に用いる不溶性担体、抗リン脂質抗体測定試薬、及び、抗リン脂質抗体の測定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102203612A true CN102203612A (zh) | 2011-09-28 |
CN102203612B CN102203612B (zh) | 2016-04-06 |
Family
ID=42170014
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN200980144306.1A Active CN102203612B (zh) | 2008-11-12 | 2009-11-12 | 用于抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体、抗磷脂抗体测定试剂及抗磷脂抗体的测定方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20110263048A1 (zh) |
EP (1) | EP2352029A4 (zh) |
JP (2) | JP4646270B2 (zh) |
KR (1) | KR101690803B1 (zh) |
CN (1) | CN102203612B (zh) |
CA (1) | CA2741801C (zh) |
HK (1) | HK1160680A1 (zh) |
WO (1) | WO2010055883A1 (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106053851A (zh) * | 2016-08-08 | 2016-10-26 | 上海睿康生物科技有限公司 | 稳定性高的前白蛋白检测试剂盒 |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2634583A1 (de) * | 2012-02-28 | 2013-09-04 | Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH | Screening-Methode zum Auffinden von Proben mit Antiphospholipid-Antikörpern |
KR102574040B1 (ko) * | 2015-06-30 | 2023-09-04 | 에센티움 메터리얼스, 엘엘씨 | 셀룰로오스 나노물질을 갖는 합성 개질된 열가소성 고분자 복합체 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63281054A (ja) * | 1987-05-13 | 1988-11-17 | Japan Synthetic Rubber Co Ltd | 診断薬用担体粒子 |
JPH08105890A (ja) * | 1994-10-05 | 1996-04-23 | Sekisui Chem Co Ltd | 抗りん脂質抗体測定用試薬の製造方法 |
CN1522370A (zh) * | 2001-07-02 | 2004-08-18 | ��Ԩ��ѧ��ҵ��ʽ���� | 用于分析试剂的载体颗粒胶乳和分析试剂 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3182819B2 (ja) * | 1991-11-14 | 2001-07-03 | ジェイエスアール株式会社 | イムノクロマトグラフ法 |
JP3328058B2 (ja) | 1994-03-30 | 2002-09-24 | 積水化学工業株式会社 | 免疫診断薬の製造方法 |
JP4213543B2 (ja) * | 2003-09-01 | 2009-01-21 | 株式会社三菱化学ヤトロン | カルジオリピン感作ラテックス試薬及びその製造方法 |
JP2006145256A (ja) * | 2004-11-16 | 2006-06-08 | Sekisui Chem Co Ltd | 磁性体内包粒子、免疫測定用粒子及びイムノクロマトグラフィ法 |
JP2006153590A (ja) * | 2004-11-26 | 2006-06-15 | Sysmex Corp | 免疫学的測定方法及び試薬キット |
JP2006329959A (ja) * | 2005-05-30 | 2006-12-07 | Sekisui Chem Co Ltd | 測定試薬用担体粒子及び測定試薬 |
EP1934609A4 (en) * | 2005-09-08 | 2009-06-24 | Biterials Co Ltd | MAGNETIC NANOPARTICLE WITH FLUORESCENCE AND MANUFACTURING METHOD AND USE THEREOF |
JP5183905B2 (ja) * | 2006-11-01 | 2013-04-17 | バンドー化学株式会社 | 担体、担体の製造方法、およびその利用 |
JP5202857B2 (ja) * | 2007-03-13 | 2013-06-05 | 古河電気工業株式会社 | 分散性が高く、非特異的吸着を防止した複合粒子、複合粒子コロイド、それを用いた分析試薬、及び複合粒子の製造方法 |
-
2009
- 2009-11-12 EP EP20090826130 patent/EP2352029A4/en not_active Withdrawn
- 2009-11-12 US US13/128,718 patent/US20110263048A1/en not_active Abandoned
- 2009-11-12 JP JP2010506751A patent/JP4646270B2/ja active Active
- 2009-11-12 WO PCT/JP2009/069273 patent/WO2010055883A1/ja active Application Filing
- 2009-11-12 KR KR1020117008604A patent/KR101690803B1/ko active IP Right Grant
- 2009-11-12 CA CA2741801A patent/CA2741801C/en active Active
- 2009-11-12 CN CN200980144306.1A patent/CN102203612B/zh active Active
-
2010
- 2010-08-09 JP JP2010178919A patent/JP5348724B2/ja active Active
-
2012
- 2012-02-03 HK HK12101022.6A patent/HK1160680A1/zh unknown
-
2014
- 2014-06-17 US US14/306,556 patent/US20140295576A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63281054A (ja) * | 1987-05-13 | 1988-11-17 | Japan Synthetic Rubber Co Ltd | 診断薬用担体粒子 |
JPH08105890A (ja) * | 1994-10-05 | 1996-04-23 | Sekisui Chem Co Ltd | 抗りん脂質抗体測定用試薬の製造方法 |
CN1522370A (zh) * | 2001-07-02 | 2004-08-18 | ��Ԩ��ѧ��ҵ��ʽ���� | 用于分析试剂的载体颗粒胶乳和分析试剂 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106053851A (zh) * | 2016-08-08 | 2016-10-26 | 上海睿康生物科技有限公司 | 稳定性高的前白蛋白检测试剂盒 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2741801C (en) | 2018-01-02 |
CA2741801A1 (en) | 2010-05-20 |
JP5348724B2 (ja) | 2013-11-20 |
US20110263048A1 (en) | 2011-10-27 |
CN102203612B (zh) | 2016-04-06 |
WO2010055883A1 (ja) | 2010-05-20 |
HK1160680A1 (zh) | 2012-08-10 |
EP2352029A1 (en) | 2011-08-03 |
JP2010249846A (ja) | 2010-11-04 |
KR101690803B1 (ko) | 2016-12-28 |
JPWO2010055883A1 (ja) | 2012-04-12 |
KR20110093763A (ko) | 2011-08-18 |
JP4646270B2 (ja) | 2011-03-09 |
EP2352029A4 (en) | 2012-05-16 |
US20140295576A1 (en) | 2014-10-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102414554A (zh) | 采用液晶的分析物检测 | |
CN103460046B (zh) | 测定试剂用胶乳粒子、致敏胶乳粒子及免疫比浊法用测定试剂 | |
KR100894947B1 (ko) | 측정 시약용 담체 입자 라텍스 및 측정 시약 | |
CN104335048B (zh) | 凝集测定用胶乳粒子 | |
JP6320711B2 (ja) | 油溶性色素含有診断薬用着色ラテックス粒子 | |
JP4853666B2 (ja) | 標的物質の検出方法、混合粒子、および標的物質の検出試薬 | |
CN102203612B (zh) | 用于抗磷脂抗体测定试剂的不溶性载体、抗磷脂抗体测定试剂及抗磷脂抗体的测定方法 | |
JP4629564B2 (ja) | 抗トレポネーマ・パリダム抗体測定試薬 | |
US20220227984A1 (en) | Particle and method for producing particle | |
DK1956373T3 (en) | PROCEDURE FOR ANALYTICAL ANTI-TREPONEMA PALLIDUM ANTIBODY ANALYSIS | |
JPH0795065B2 (ja) | 水不溶性試薬、それを含む要素及びその使用方法 | |
US20210080455A1 (en) | Organic Colored Microparticles, Diagnostic Reagent Kit, and In Vitro Diagnosis Method | |
JP2002510397A (ja) | 標的およびインディケーターイオノフォアをその中に分布させて有する粒子からなるイオンディテクター | |
CN104662426B (zh) | 粒子凝集测定用胶乳粒子 | |
JP7486978B2 (ja) | 検査薬、検査キットおよび検査方法 | |
JP2023168250A (ja) | 偏光異方に基づく測定による解析方法及び解析装置 | |
JPS6366464A (ja) | 診断試薬用担体ラテツクス | |
JP2006329958A (ja) | 測定試薬用担体粒子及び測定試薬 | |
JP2005241363A (ja) | 測定試薬用担体粒子及び測定試薬 | |
KR20130012124A (ko) | 글리세로 인지질의 안정화 방법 및 그것을 이용한 시약 | |
Stanishevskiy et al. | Technology for test-systems for diagnosis of modified proteins (proteopathy) underlying social diseases (Report 1) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1160680 Country of ref document: HK |
|
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: GR Ref document number: 1160680 Country of ref document: HK |