CN102070690A - 一种同时制备腺苷、虫草素、n6-(2-羟乙基)腺苷化学对照品的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种同时制备腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基)腺苷三个化学对照品的制备新工艺。蛹虫草提取物，经树脂柱分离及制备高效液相色谱两步高效纯化，即可获得纯度大于98％的腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基)腺苷三种化学对照品。本发明工艺步骤简单、纯度高，易于放大规模生产。

Description

一种同时制备腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基)腺苷化学对照品的方法
技术领域本发明涉及一种同时制备腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基)腺苷化学对照品的制备新方法。主要包括柱分离浓缩富集以及快速的高效液相制备方法精制。三种对照品的结构式如下：
Figure BSA00000367114700011
背景技术
蛹虫草是名贵中药冬虫夏草的替代品，二者具有相似的成分及功效，均具有补肾益肺、止血化痰等功效。所含的核苷类成分为其主要活性成分及质控指标成分，因此，制备高纯度核苷类化合物对于更深入研究其药理药效及相关虫草药材的质量控制具有重要意义。
目前，单一虫草素对照品的制备方法报道较多，主要有等电点沉淀法、离子交换树脂层析、硅胶正相色谱等，步骤较多；有少量反相高效制备的文献(上海农业学报，2007，23(1)：59-61；中国发明专利CN01124109.8)，但一般为分析规模及半制备规模，制备通量很小。
N6-(2-羟乙基)腺苷对照品的制备方法报道较少，柴一秋等采用萃取、大孔树脂层析、Art.
Figure BSA00000367114700012
柱、Sephadex LH-20柱制备该化合物(中国发明专利CN2004100094511.0)；吕子明等采用硅藻土层析、树脂层析、硅胶柱层析、重结晶等步骤纯化该化合物。二者工艺均较为繁琐(中国中药杂志，2008，33(24)：2914-2917)。
同时制备腺苷和虫草素的文献也较少，董培智等采用酸碱处理、反复萃取及硅胶柱层析成功制备了腺苷和虫草素(山西医药杂志，2007，36(10)：949-950)。而同时获取腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基)腺苷三个对照品的制备工艺未见报道。
发明内容
本发明旨在提供一种同时获取腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基)腺苷三个对照品的高效制备工艺，其制备规模达到10克级。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种同时制备腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基)腺苷化学对照品的方法，蛹虫草提取物，经树脂柱分离及制备高效液相色谱两步高效纯化，同时获得纯度大于98％的腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基)腺苷三种化学对照品，其具体步骤如下：
1)树脂柱分离除杂：
蛹虫草菌丝体，乙醇溶液提取，提取液进行树脂柱分离，先以水、10％乙醇溶液洗脱除去杂质，然后以体积分数在15％-25％之间的任一乙醇溶液洗脱，收集相应乙醇洗脱物，浓缩干燥得红色浸膏；
2)制备高效液相色谱精制：
红色浸膏用低浓度甲醇溶液溶解，微孔滤膜过滤，反相高效液相制备色谱分离，以甲醇-水溶液为洗脱体系，紫外检测器260nm监测，分别收集制备图谱中三个主要的色谱峰，相应流份干燥即可得到纯度大于98％的三个对照品，其外观为白色粉末。
所述步骤1)的具体过程为：蛹虫草菌丝体用体积分数为0％-40％的乙醇溶液提取，采用HPD-100、Diaion或D101树脂分离；
所述步骤2)的具体过程为：红色浸膏用体积分数为10％-20％的甲醇溶液溶解，配置样品浓度为50～150mg/ml；制备色谱柱的填充填料为C18，制备柱长10-30cm、直径2-10cm；采用的流动相为体积分数为10％-20％的甲醇水溶液；进样体积为1-40ml，流速控制在140-180ml/min；收集保留时间分别为8.2-8.7min(腺苷)、10.3-10.9min(虫草素)和14.8-15.2min(N6-(2-羟乙基)腺苷)的流份，干燥获取三种对照品。
为确证本发明所制备的对照品的结构，腺苷和虫草素分别和法定对照品比较了保留时间、UV、MS、MS/MS等；N6-(2-羟乙基)腺苷测试了UV、MS、MS/MS、HR-MS、1H NMR、13C NMR等。
以本发明从蛹虫草提取物中分离腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基)腺苷化学对照品具有如下优点和进步：
1.本发明工艺简单，蛹虫草提取物通过树脂分离和制备型高效液相制备两步高效纯化，即可同时获取高纯度的三种对照品。有利于资源利用最大化。
2.本发明工艺非常适宜规模化工艺生产。发展的高效液相制备方法为快速制备方法，一次进样分离时间在16分钟，适合大批量化学对照品的制备；高效制备之前有预处理步骤，避免了批量制备中制备柱柱效下降过快的缺点；所用流动相不含有添加剂，可方便实现制备溶剂的回收利用，降低批量制备的成本。
附图说明
图1为制备高效液相的制备色谱图(260nm)；
图2为腺苷的HPLC分析图谱(260nm)；
图3为虫草素的HPLC分析图谱(260nm)；
图4为N6-(2-羟乙基)腺苷的HPLC分析图谱(260nm)；
图5为N6-(2-羟乙基)腺苷的1H NMR图谱；
图6为N6-(2-羟乙基)腺苷的13C NMR图谱。
具体实施方式
现结合实施例和附图对本发明做进一步详细说明，实施例仅限于说明本发明，而非对本发明的限定。
实施例1
1)树脂柱分离除杂
蛹虫草菌丝体10g，用100ml水提取三次，三次的提取时间分别为1.5小时、1小时、0.5小时，合并三次提取液，减压回收至约150ml，四层纱布过滤，清液上HPD100树脂柱分离，其中药材∶树脂为1∶10(g/ml)，分别以3倍柱体积的水、10％、15％的乙醇溶液洗脱，收集15％乙醇洗脱物，浓缩干燥得红色浸膏。
2)制备高效液相色谱精制
红色浸膏用体积分数为15％甲醇水溶液溶解，配置成150mg/ml的供试品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤；制备型高效液相柱填料品牌为Chromatorex C18键合相填料；粒径为10μm，柱长20cm、直径7.5cm；进样体积为10ml，以体积浓度15％甲醇-水溶液为洗脱体系，流速控制在160ml/min，紫外检测器260nm检测，分别收集保留时间分别为8.2-8.7min(腺苷)、10.3-10.9min(虫草素)和14.8-15.2min(N6-(2-羟乙基)腺苷)的流份，以上三种高纯流份干燥即可得到纯度大于98％的相应对照品，其外观为白色粉末。制备色谱图见图1；各对照品纯度分析图谱见图2-图4。N6-(2-羟乙基)腺苷的1H NMR见图5，13C NMR见图6。
实施例2
1)树脂柱分离除杂
蛹虫草菌丝体50g，用500ml 20％乙醇溶液提取三次，三次的提取时间分别为1.5小时、1小时、0.5小时，合并三次提取液，减压回收至约300ml，四层纱布过滤，清液上Diaion树脂柱分离，其中药材∶树脂为1∶6(g/ml)，分别以3倍柱体积的水、10％、20％的乙醇溶液洗脱，收集20％乙醇洗脱物，浓缩干燥得红色浸膏。
2)制备高效液相色谱精制
红色浸膏用体积分数为10％甲醇水溶液溶解，配置成100mg/ml的供试品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤；制备型高效液相柱填料品牌为McirosorbC18键合相填料，粒径为5μm；柱长17cm、直径5cm；进样体积为20ml，以体积浓度10％甲醇-水溶液为洗脱体系，流速控制在180ml/min，260nm检测，分别收集保留时间分别为8.3-8.7min(腺苷)、10.5-10.9min(虫草素)和15.0-15.2min(N6-(2-羟乙基)腺苷)的流份，以上三种高纯流份干燥即可得到纯度大于98％的相应对照品，其外观为白色粉末。
实施例3
1)树脂柱分离除杂
蛹虫草菌丝体500g，用5000ml 40％乙醇溶液提取三次，三次的提取时间分别为1.5小时、1小时、0.5小时，合并三次提取液，减压回收至约3000ml，四层纱布过滤，清液上D101树脂柱分离，其中药材∶树脂为1∶6(g/ml)，分别以3倍柱体积的水、10％、25％的乙醇溶液洗脱，收集25％乙醇洗脱物，浓缩干燥得红色浸膏。
2)制备高效液相色谱精制
红色浸膏用体积分数为20％甲醇水溶液溶解，配置成50mg/ml的供试品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤；制备型高效液相柱填料品牌为ChromatorexC18键合相填料；粒径为10μm，柱长20cm、直径7.5cm；进样体积为40ml，以体积浓度20％甲醇-水溶液为洗脱体系，流速控制在140ml/min，260nm检测，分别收集保留时间分别为8.2-8.5min(腺苷)、10.3-10.7min(虫草素)和14.8-15.0min(N6-(2-羟乙基)腺苷)的流份，以上三种高纯流份干燥即可得到纯度大于98％的相应对照品，其外观为白色粉末。

Claims (7)

1.同时制备腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基)腺苷化学对照品的方法，其特征在于：蛹虫草提取物，经树脂柱分离及制备高效液相色谱两步高效纯化，同时获得纯度大于98％的腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基)腺苷三种化学对照品；具体为，
1)树脂柱分离除杂：
蛹虫草菌丝体，乙醇溶液提取，提取液进行树脂柱分离，先以水、10％乙醇溶液洗脱除去杂质，然后以体积分数在15％-25％之间的任一乙醇溶液洗脱，收集相应乙醇洗脱物，浓缩干燥得红色浸膏；
2)制备高效液相色谱精制：
红色浸膏用低浓度甲醇溶液溶解，微孔滤膜过滤，反相高效液相制备色谱分离，以甲醇-水溶液为洗脱体系，紫外检测器260nm监测，分别收集制备图谱中三个主要的色谱峰，相应流份干燥即可得到纯度大于98％的三个对照品，其外观为白色粉末。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中提取时乙醇溶液的体积浓度为0％-40％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中粗分离采用的树脂为HPD-100、Diaion或D101。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中供试品溶液配置中，甲醇的体积分数为10％-20％，配置样品浓度为50～150mg/ml。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中反相高效液相制备色谱采用的流动相中，甲醇的体积分数为10％-20％。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：2)步骤反相高效液相制备中进样体积为1-40ml，流速控制在140-180ml/min。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：2)步骤反相高效液相制备中收集保留时间分别为8.2-8.7min(腺苷)、10.3-10.9min(虫草素)和14.8-15.2min(N6-(2-羟乙基)腺苷)的流份，干燥获取三种对照品。
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Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103141490A (zh) * 2013-03-06 2013-06-12 浙江省亚热带作物研究所 N6-(2-羟乙基)腺苷在制备农作物杀虫试剂中的应用
CN103141489A (zh) * 2013-03-06 2013-06-12 浙江省亚热带作物研究所 含有n6-(2-羟乙基)腺苷的杀虫试剂
CN103214535A (zh) * 2012-01-20 2013-07-24 珠海市先康生物科技有限公司 蛹虫草(粤96-18)菌种的子实体中新的化合物发现和应用
CN103242402A (zh) * 2013-04-26 2013-08-14 浙江省亚热带作物研究所 一种快速制备高纯度的n6-（2-羟乙基）腺苷的方法
CN103848878A (zh) * 2014-01-27 2014-06-11 正源堂（天津）生物科技有限公司 从蛹虫草中提取n6-(2-羟乙基)腺苷的方法及其应用
CN106995477A (zh) * 2017-05-07 2017-08-01 沂水铭睿生物科技有限公司 一种模拟移动床技术制备分离虫草素的方法
CN107556358A (zh) * 2017-09-27 2018-01-09 黄河科技学院 促凝血蛹虫草有效成分及其提取分离方法和应用
CN109463729A (zh) * 2018-12-26 2019-03-15 中国科学院西北高原生物研究所 蛹虫草提取物的制备方法、功能性食品
CN109553647A (zh) * 2018-12-26 2019-04-02 中国科学院西北高原生物研究所 代谢产物的提取方法、添加剂
CN109939121A (zh) * 2019-04-12 2019-06-28 浙江省亚热带作物研究所 N6-(2-羟乙基)腺苷在治疗高血压药物中的应用
CN113480587A (zh) * 2021-05-20 2021-10-08 徐州工程学院 一种高效提取蝉花虫草子实体中n6-(2-羟乙基)腺苷的方法
CN114163485A (zh) * 2021-11-11 2022-03-11 浏阳朗林生物科技有限公司 一种蛹虫草提取物的制备方法及应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101157712A (zh) * 2007-11-16 2008-04-09 上海市农业科学院 一种虫草素的分离纯化方法
CN101508715A (zh) * 2009-04-01 2009-08-19 江苏省农业科学院 一种蛹虫草中虫草素提取纯化方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101157712A (zh) * 2007-11-16 2008-04-09 上海市农业科学院 一种虫草素的分离纯化方法
CN101508715A (zh) * 2009-04-01 2009-08-19 江苏省农业科学院 一种蛹虫草中虫草素提取纯化方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《安徽农业科学》 20081231 马健生 等 蛹虫草中虫草素的提取与纯化工艺研究进展 第1929-1931页 1-7 第36卷, 第5期 *
《重庆中草药研究》 20060630 李刚 等 蛹虫草中虫草素分离纯化工艺研究进展 第51-54、29页 1-7 , 第1期 *

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103214535A (zh) * 2012-01-20 2013-07-24 珠海市先康生物科技有限公司 蛹虫草(粤96-18)菌种的子实体中新的化合物发现和应用
CN103141490A (zh) * 2013-03-06 2013-06-12 浙江省亚热带作物研究所 N6-(2-羟乙基)腺苷在制备农作物杀虫试剂中的应用
CN103141489A (zh) * 2013-03-06 2013-06-12 浙江省亚热带作物研究所 含有n6-(2-羟乙基)腺苷的杀虫试剂
CN103141490B (zh) * 2013-03-06 2015-09-16 浙江省亚热带作物研究所 N6-(2-羟乙基)腺苷在制备农作物杀虫试剂中的应用
CN103242402A (zh) * 2013-04-26 2013-08-14 浙江省亚热带作物研究所 一种快速制备高纯度的n6-（2-羟乙基）腺苷的方法
CN103242402B (zh) * 2013-04-26 2015-08-12 浙江省亚热带作物研究所 一种快速制备高纯度的n6-(2-羟乙基)腺苷的方法
CN103848878A (zh) * 2014-01-27 2014-06-11 正源堂（天津）生物科技有限公司 从蛹虫草中提取n6-(2-羟乙基)腺苷的方法及其应用
CN103848878B (zh) * 2014-01-27 2015-12-30 图克（天津）医药科技有限公司 从蛹虫草中提取n6-(2-羟乙基)腺苷的方法及其应用
CN106995477A (zh) * 2017-05-07 2017-08-01 沂水铭睿生物科技有限公司 一种模拟移动床技术制备分离虫草素的方法
CN106995477B (zh) * 2017-05-07 2020-05-15 沂水铭睿生物科技有限公司 一种模拟移动床技术制备分离虫草素的方法
CN107556358A (zh) * 2017-09-27 2018-01-09 黄河科技学院 促凝血蛹虫草有效成分及其提取分离方法和应用
CN109463729A (zh) * 2018-12-26 2019-03-15 中国科学院西北高原生物研究所 蛹虫草提取物的制备方法、功能性食品
CN109553647A (zh) * 2018-12-26 2019-04-02 中国科学院西北高原生物研究所 代谢产物的提取方法、添加剂
CN109939121A (zh) * 2019-04-12 2019-06-28 浙江省亚热带作物研究所 N6-(2-羟乙基)腺苷在治疗高血压药物中的应用
CN113480587A (zh) * 2021-05-20 2021-10-08 徐州工程学院 一种高效提取蝉花虫草子实体中n6-(2-羟乙基)腺苷的方法
CN113480587B (zh) * 2021-05-20 2024-05-03 湖南合健生物科技有限公司 一种高效提取蝉花虫草子实体中n6-(2-羟乙基)腺苷的方法
CN114163485A (zh) * 2021-11-11 2022-03-11 浏阳朗林生物科技有限公司 一种蛹虫草提取物的制备方法及应用
CN114163485B (zh) * 2021-11-11 2023-10-13 湖南朗林生物资源股份有限公司 一种蛹虫草提取物的制备方法及应用

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