CN102058888A

CN102058888A - 一种治疗能量代谢异常的药物组合物和其应用

Info

Publication number: CN102058888A
Application number: CN2009100274180A
Authority: CN
Inventors: 顾书华; 杜娟
Original assignee: CHANGZHOU HIGH-TECH INDUSTRIAL DEVELOPMENT ZONE SANWEI INDUSTRY TECHNOLOGY RESEARCH Co Ltd
Current assignee: CHANGZHOU HIGH-TECH INDUSTRIAL DEVELOPMENT ZONE SANWEI INDUSTRY TECHNOLOGY RESEARCH Co Ltd
Priority date: 2009-05-01
Filing date: 2009-05-01
Publication date: 2011-05-18
Anticipated expiration: 2029-05-01
Also published as: WO2010124520A1; CN102058888B

Abstract

本发明涉及一种治疗能量代谢异常的药物组合物，a)促进脂肪酸氧化的药物或其衍生物和b)促进葡萄糖氧化的药物或其可药用的盐的药物组合物，可以综合平衡脂肪酸和葡萄糖的代谢，优化脂肪酸和葡萄糖的产能，减少游离脂肪酸或乳酸等酸性代谢产物的异常积聚对机体的危害，治疗线粒体功能障碍，改善曲美他嗪等由于抑制脂肪酸氧化可能产生游离脂肪酸蓄积的缺陷，辅助治疗多种存在能量代谢失衡的疾病，如急慢性缺血、创伤、严重感染、糖尿病和肿瘤等。

Description

一种治疗能量代谢异常的药物组合物和其应用

技术领域

本发明涉及一种治疗能量代谢异常的药物组合物，用于调节葡萄糖和脂肪酸代谢的失衡和线粒体功能障碍。

技术背景

在动物的生命活动中，除了进行氧和二氧化碳的交换外，同时还需要葡萄糖、脂肪酸和蛋白质的分解与合成代谢，进行能量的储存和消耗的转换，以满足生命活动的需求。蛋白质是组成机体细胞的重要成分，通常并无多余储存，故一般情况下，需尽量节约蛋白质的消耗，供能以葡萄糖及脂肪酸的氧化为主。通常，糖氧化供能约占到人体全部供能的50-70％，脂肪是机体储能的主要方式，可达体重20％，有些器官，如心肌的能量供给60-80％来源于脂肪酸的有氧氧化(第二军医大学学报2001年22卷2期)。所以，葡萄糖和脂肪酸作为二大基础供能物质在正常的生理条件下，其转运、氧化和产能维持着体内能量代谢的平衡。

研究表明在许多疾病中，如急慢性缺血、创伤、严重感染、糖尿病和肿瘤等都存在着能量代谢失衡、产能不足、游离脂肪酸或乳酸等酸性代谢产物的异常积聚对机体产生危害、线粒体功能障碍等问题，能量代谢异常又是加重这些疾病的重要因素，目前能量代谢与疾病之间的关系已经越来越受到医学界的关注。(1.调节心肌能量代谢治疗缺血性心脏病研究进展，人民军医，2001年第44卷第01期39-40；2.能量代谢指标与肥胖评价方法关系分析(中国组织工程研究与临床康复第12卷第24期2008年06月10日出版4763-4766；3.运动与能量代谢异常的康复治疗进展，中国运动医学杂志2000年第19卷第4期417-419)；4.肿瘤病人静息能量代谢特点及意义，齐鲁医学杂志2008年12月第23卷第6期557-559)；5.肝硬化患者营养不良、能量代谢异常与营养支持，中国临床营养杂志第34卷第6期281-283；6.慢性重型病毒性肝炎的能量代谢及糖、蛋白质、脂肪氧化，中国临床营养杂志Vol.14 No.2April，2006 110-114；7.严重腹腔感染的肠瘘病人能量代谢的连续性变化规律，肠外与肠内营养，2006年1月第13卷第1期25-28)；8.Clin Chem.2008Jun；54(6)：945-55.Epub 2008 Apr 24，9)Genet Med.2008 Nov；10(11)：767-77等)。

生化学基础知识告诉我们，1分子葡萄糖产生36个ATP，而1分子脂肪酸(以16个碳为例)可产生129个ATP，但它们氧化代谢所需的条件有所不同，1分子葡萄糖完全氧化需消耗6个氧分子，而1分子脂肪酸完全氧化需消耗23个氧分子(生物化学，清华大学出版社，王希成编著；葡萄糖生物氧化过程中水分子数及其来源分析，中国医疗前沿2007年6月第2卷第12期，70页)。这种生化代谢特点在机体处于不同的病理状态下有着十分重要的意义，如器官缺血、创伤和严重感染时，细胞能量代谢由需氧丰富的脂肪酸代谢转化为需氧较少的糖代谢(包括糖酵解和糖异生)产能为主，这是机体的自主代偿性调节。但是，过多的糖酵解和糖异生的结果会导致游离脂肪酸和乳酸等酸性代谢产物在体内异常的堆积，糖和脂肪酸代谢产能的比例失衡，导致细胞内酸中毒，离子紊乱，线粒体肿胀和破裂，细胞自溶死亡，促使器官组织功能失代偿，导致线粒体功能障碍，进一步加重能量代谢的障碍，形成恶性循环。此外，一些主要依靠脂肪酸氧化供能的器官能量缺乏，也是片面促进葡萄糖氧化存在的问题。

目前在临床上缺少综合平衡脂肪酸和葡萄糖氧化产能、治疗能量代谢异常的药物，仅有一些单纯促进脂肪酸或葡萄糖氧化产能的药物，如：

1，促进葡萄糖氧化供能的药物如曲美他嗪、雷诺嗪等，其作用是以抑制脂肪酸代谢而直接和间接刺激葡萄糖代谢产能为主，由于它在促进葡萄糖氧化代谢过程中抑制了脂肪酸的氧化，易导致组织或血液中的游离脂肪酸在体内积聚，因此长期使用会导致心和肝等内脏器官的负担增加等副作用(M.F.McCarty Medical Hypotheses(2004)62，62 71)。

2，促进脂肪酸代谢的药物如左旋卡尼汀，它能促进游离脂肪酸进入线粒体内的转运及有氧氧化产能，降低乳酸等堆积，改善机体内环境紊乱。但是，脂肪酸的氧化消耗的氧比葡萄糖氧化要多，只有在氧供充分的情况下才能发挥作用，当在缺血缺氧情况下片面促进脂肪酸氧化是不合适的。

除了以上两类药物，目前临床没有发现更好的药物用于治疗能量代谢异常、脂肪酸和葡萄糖代谢失衡、线粒体功能障碍。并且上述药物在临床上都存在一定缺陷。

发明内容

本发明之一，是发明了一种治疗能量代谢异常的药物组合物，它由促进脂肪酸氧化的药物或其衍生物和促进葡萄糖氧化的药物或其可药用的盐的药物组成，用于治疗能量代谢异常疾病。它可以整体调节脂肪酸和葡萄糖的代谢，优化产能，减少脂肪酸或乳酸等酸性代谢产物的异常积聚，改善单一用药的副作用，治疗线粒体功能障碍，辅助促进存在能量代谢失衡疾病的治疗与康复。

本发明之二，是发明了本药物组合物中的左卡尼汀和曲美他嗪两种药物之间的最佳比例，可以发挥治疗能量代谢异常的最佳效果，能够综合平衡促进葡萄糖氧化代谢和脂肪酸的有氧氧化，优化产能，减少游离脂肪酸和乳酸等酸性代谢产物对组织器官的危害，治疗线粒体功能障碍，增加产能，促使机体在不同病理状态下合理地利用能量资源，从而治疗和预防存在能量代谢失衡的疾病。

本发明之三，是发明了用本药物组合物制备治疗许多存在能量代谢异常疾病的药物，如创伤、缺血及再灌注损伤导致的疾病，如各种急性化学物理因素所致的创伤、中毒、休克、高原病、放射病、尘肺、电击伤、晕动病、急慢性心功能不全，心律失常、心脏传导异常、人工心脏起搏、心血管介入疗法、瓣膜病、动脉粥样硬化、冠心病、(包括猝死)、先天性心脏病、高血压、感染性心内膜炎、肺源性心脏病、心包炎、心肌病、周围血管疾病(包括多发性大动脉炎、雷诺综合症、血栓闭塞性脉管炎、闭塞性动脉硬化等)、心脏移植手术、神经痛、神经炎、各种周围神经病、各种脊髓疾病、急性脑血管疾病(包括脑梗死、脑栓塞、脑出血、蛛网膜下腔出血等)、颅内肿瘤、中枢神经系统感染(包括病毒和细菌性脑炎、脑膜炎等)、运动障碍性疾病(帕金森病、舞蹈病、肝豆状核变性、肌张力障碍、抽搐与振颤)发作性疾病(包括癫痫、偏头痛、发作性睡病与猝倒症等)、脱髓鞘性疾病(包括多发性硬化症、视神经脊髓炎、脑白质营养不良)、骨骼肌肉病(包括肌营养不良症、强直性肌病、重症肌无力、炎症性肌病、代谢性肌病、周期性瘫痪)、自主神经疾病(包括雷诺病、红斑性肢痛、间脑综合症)、弥散性血管内凝血等；胰岛素抵抗及内分泌等因素引起的疾病，如肥胖症、各种原因所致低血糖、胰岛素抵抗综合症、代谢综合症、营养不良(营养不良性干瘦、恶性营养不良、继发性蛋白质能量营养不良)、肠内营养、肠外营养、水电解质代谢紊乱、酸碱平衡紊乱、糖尿病、糖尿病心血管疾病、糖尿病周围神经病变、糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病、糖尿病足、妊娠与糖尿病、糖尿病并发感染、糖尿病急性代谢并发症、乳酸性酸中毒、各型糖原累积病、血脂蛋白紊乱、高氨基酸尿症、黄瘤、粘多糖病、果糖不耐受症、半乳糖血症、其他嘌呤和嘧啶代谢疾病、营养与代谢障碍性皮肤病(维生素缺乏、肠病性肢端皮炎、原发性皮肤淀粉样变、皮肤卟啉病、黄瘤病)、糖尿病视网膜并发症、生长激素缺乏性侏儒症、成年人腺垂体功能减退症、肾上腺病、甲状腺病、甲状旁腺病、卵巢病、性早熟、胰岛内分泌肿瘤、多发性内分泌腺病等疾病；肿瘤等疾病，如各种肿瘤、癌症、肉瘤、血癌、急慢性白细胞及粒细胞性白血病、各种原因所致的贫血(包括骨髓性贫血、再生障碍性贫血、镰状红细胞性贫血)、淋巴组织细胞病、自身免疫性疾病、原发性和继发性免疫缺陷病、肺部肿瘤、肺肉瘤、消化性溃疡、食道癌、胃癌、胃肿瘤、大肠癌、肾脏肿瘤、口腔肿瘤、原发性和继发性肝癌、胆管肿瘤、艾滋病、各种皮肤癌、骨髓肿瘤等疾病；炎症、严重感染和免疫反应导致的疾病，如感染性休克、多脏器功能衰竭、高温、低温综合症、感染性疾病(呼吸道感染、哮喘、严重急性呼吸综合症、病毒性肝炎、流行性腮腺炎、流行性乙型脑炎、狂犬病、脊髓灰质炎、麻疹、风疹、天花、水痘、单纯疱疹、带状疱疹、流行性出血热、黄热病、肠道病毒所致的各系统感染、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、艾滋病、立克次体病、衣原体感染、支原体感染、细菌性疾病(包括结核性疾病厌氧菌感染、败血症、破伤风等)、真菌性疾病、螺旋体病、寄生虫病、各种原因引起的感染性腹泻、急性出血坏死性小肠炎、溃疡性结肠炎、肠梗阻、胃动力性和功能性疾病、急性腹膜炎、急性胰腺炎、各种原因引起肝硬化、脂肪肝、黄疸、腹泻、消化道出血、反流性食管炎、爆发性肝功能衰竭、肝性脑病、胆石病、胆囊炎、急慢性肾功能衰竭、血液净化疗法、急慢性呼吸功能不全、慢性阻塞性肺疾病、支气管哮喘、支气管扩张、各种原因引起的肺炎、肺脓肿、肺水肿、肺栓塞、肺静脉瘘、肺结核、先天性肺发育不全、阻塞性睡眠呼吸暂停综合症、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征、急慢性肾炎、肾病综合症、微小病变性肾病、膜性肾病、局灶性肾小球硬化症、系膜增殖性肾小球肾炎、系膜毛细血管增生性肾炎、继发性肾小球疾病、遗传性肾炎、泌尿道感染、间质性肾炎、肾小管疾病、肾石病、牙周脓肿、病毒性皮肤疾病、细菌性皮肤疾病、真菌性皮肤病、荨麻疹类皮肤病、失聪、美尼尔氏综合症、急慢性中耳炎、结膜病、角膜病、白内障、青光眼、葡萄膜病、视网膜病、视神经病、急慢性扁桃体炎、扁桃体脓肿、骨关节炎、代谢性骨病、骨质疏松症、痛风和高尿酸血症、结节病、淀粉样变性、大骨节病、色素性皮肤病(白癜风、黄褐斑、雀斑、黑变病、遗传性大疱性表皮松解症、鱼鳞病、毛周角化病、家族性良性天疱疮、日光性皮肤病、冻疮、放射性皮肤病、痤疮、脂溢性皮炎、斑秃、雄激素源性脱发、风湿热、系统性红斑囊疮、类风湿性关节炎、脊柱关节病、多发性肌炎和皮肌炎、硬皮病和系统性硬化症、过敏性疾病等；各种原因所致线粒体功能障碍导致的退行性病变以及神经精神性疾病，如衰老、阿尔兹海默病、各种原因导致的线粒体疾病，如亨廷顿氏疾病、帕金森病(PD)、肌萎缩性侧索硬化、线粒体脑肌病伴乳酸中毒及中风样发作综合征(MELAS)、肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维病(MERRF)、Leber遗传性视神经病(LHON)、线粒体心肌病、肌病、痴呆、突发的不能控制的肌肉收缩(肌阵挛性的癫痫)、精神疾病包括器质性精神障碍(痴呆综合症、谵妄综合症、遗忘综合症、艾滋病所致精神障碍)、精神活性物质所致精神障碍(酒精中毒和酒精依赖、药物依赖)、精神分裂症、情感障碍、神经症性障碍(恐怖症、焦虑症、强迫症、神经衰弱、癔症、疑病症)、进食障碍、睡眠障碍、广泛性发育障碍、精神发育迟滞、多动障碍、抽动障碍、男性性功能障碍等疾病。

本发明之四，是发明了用本药物组合物在制备治疗线粒体功能障碍的药物中的应用。

本发明药物与以往的一些能量代谢治疗药物相比优势明显，以往的一些能量代谢治疗药物只是单纯促进能量代谢过程中葡萄糖或脂肪酸中的代谢，一般情况下是一种药物只促进一种物质的代谢而不能够促进甚至是抑制了另一个物质的氧化代谢，使能量代谢过程中两种重要的代谢物质一一葡萄糖和脂肪酸之间发生了不平衡。因此，以往代谢治疗药物没有综合促进脂肪酸和葡萄糖代谢的平衡，没有有效解决能量代谢失衡的问题，没有整体解决能量代谢异常的问题，存在产能减少、以及代谢物质异常积聚导致对线粒体功能的障碍等问题，影响疾病的治疗和康复。因此，寻找有效治疗能量代谢异常的药物，综合平衡脂肪酸和葡萄糖的代谢，优化产能，有效治疗线粒体功能障碍，降低曲美他嗪的副反应，促进生理和病理的康复，具有十分重要的意义。

本发明中所指的能量代谢异常，是指各种疾病发生的脂肪酸和葡萄糖代谢指标的异常改变(1临床内科杂志，2004，21(8)：565；2河北医学，2004，10(5)：432-434)，脂肪酸和葡萄糖代谢失去平衡(1.卫生研究，2008，37(5)：560-565；2.基础医学与临床，2006，26(1)：27-34；3.创伤外科杂志，2002，4：59-61)、线粒体结构和功能发生障碍(心血管康复医学杂志，2008，17(1)：30-32)、组织器官的功能发生紊乱(中国麻醉与镇痛，2007，9(1)：75-77)等情况。

本发明的研究者使用本发明的药物组合物在多种存在能量代谢异常疾病的动物模型上进行试验，如心肌缺血再灌注损伤、代谢综合症、严重感染、多脏器功能衰竭、和肿瘤等，证明本发明的药物组合物能够整体调节脂肪酸和葡萄糖的代谢，优化产能，减少游离脂肪酸及乳酸等酸性代谢产物的异常积聚造成的危害，治疗线粒体功能障碍，增加产能，有效治疗多种疾病存在的能量代谢异常，改善治疗效果。

使用本发明的药物组合物在缺血再灌注损伤动物模型上进行了试验研究，超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等心肌缺血再灌注损伤指标好转，心肌乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CPK)改善的效果优于单一使用左卡尼汀和曲美他嗪，组成药物组合物的两种药物具有协同作用(P＜0.05)，说明本发明的药物组合物可以有效治疗心肌缺血再灌注损伤；合用时组织中能量代谢相关的指标，如丙酮酸脱氢酶(PDH)的活性比单用左卡尼汀升高，游离脂肪酸比单用曲美他嗪减少，组织ATP含量比单用曲美他嗪有显著上升，心肌组织糖原含量得到恢复，说明本发明的药物组合物可以治疗能量代谢异常，有效平衡脂肪酸和葡萄糖的氧化代谢；此外，通过对心肌线粒体的形态学观察发现，使用本发明的药物组合物后心肌细胞超微结构得到了改善，心肌线粒体的大小和形态都得到了改善，由于线粒体结构的完整性是线粒体发挥正常氧化功能的前提，所以本药物组合物对线粒体的功能障碍也有治疗作用。

使用本发明的药物组合物对不同的存在能量代谢异常的疾病进行治疗，如代谢综合症模型、严重感染、多脏器功能衰竭模型和肿瘤等疾病的动物模型上，通过测定脂肪酸和葡萄糖代谢相关的指标，如丙酮酸脱氢酶(PDH)、乳酸脱氢酶(LDH)和细胞色素氧化酶(CCO)的活性，以及游离脂肪酸、血糖、乳酸和ATP等浓度，发现本发明的药物组合物使上述各种不同类型存在能量代谢异常的疾病的能量代谢异常的指标得到改善，症状或疗效也得到改善，说明本发明的药物组合物可以用于治疗各种存在能量代谢异常的疾病。

通过实验发现，组成本发明的药物组合物的两种药物优选左卡尼汀与曲美他嗪，他们之间最佳的剂量配比是曲美他嗪3mg/kg与左卡尼汀600mg/kg，而且在达到同等效果的情况下，药物组合物中的曲美他嗪与左卡尼汀的剂量明显低于单用时的剂量，可以在达到同等治疗效果的情况下降低单方药物的用量，从而减少药物的副作用。该发明为包括人类在内的哺乳动物治疗各种疾病存在的能量代谢失衡或由于能量代谢失衡导致的各种疾病提供了一种安全、有效的药物组合物。

因此，基于上述的发现，本发明提供了一种用于治疗能量代谢异常的药物组合物，它包括：a)促进脂肪酸氧化的药物或其衍生物，b)促进葡萄糖氧化的药物或其可药用的盐；本药物组合物中左卡尼汀或其衍生物与曲美他嗪或其可药用的盐的含量为能有效治疗和预防存在能量代谢异常的疾病的含量。

在本发明中，左卡尼汀曲美他嗪药物组合物治疗能量代谢异常的疗效，可以用改善能量代谢异常的指标和/或存在能量代谢异常疾病的临床症状来表示，例如反映心肌缺血的指标如血LDH和CPK、反映心肌抗氧化应激功能性指标如心肌组织SOD和MDA、反映糖脂代谢的限速酶如组织PDH、组织LDH和CCO等酶的活性；和/或用血液和/或组织中游离脂肪酸、葡萄糖、ATP、糖原含量指标的改善来表示；和/或用组织细胞超微结构的形态学指标的改善来表示。有效是指以上述指标中至少有一个或一个以上的指标得到了显著改善，具有协同作用；或者比单方药物更多的指标得到了改善，具有单方药物所不具备的综合治疗效果。在有些实施方式中，改善上述指标的数值P＜0.05为具有显著差异，“有效治疗能量代谢异常”一词也可以理解为能有效改善上述一个或多个指标的数值约为或大于1％、约为或大于5％、约为或大于10％、约为或大于15％、约为或大于20％、约为或大于25％、约为或大于30、约为或大于35％、约为或大于40％、或约为或大于50％。

本发明的药物组合物中，左卡尼汀衍生物或其可药用的盐包括但不局限于：左卡尼汀、乙酰左卡尼汀、丙酰左卡尼汀和它们可药用的盐。优选左卡尼汀、乙酰左卡尼汀和它们可药用的盐。特别优选左卡尼汀。

在本发明的药物组合物中，曲美他嗪或其可药用的盐，包括但不局限于：曲美他嗪、曲美他嗪盐酸盐、特别优选曲美他嗪盐酸盐，与左卡尼汀或其衍生物以及可药用的盐组成本发明的药物组合物。

本发明所述的可药用的盐包括左卡尼汀或其衍生物和曲美他嗪与无机酸或有机酸形成的盐，例如与盐酸、溴氢酸、碘氢酸、硫酸、硝酸、磷酸、乙酸、马来酸、富马酸、构缘酸、柠檬酸、草酸、琥珀酸、酒石酸、苹果酸、扁桃酸、三氟乙酸、泛酸、甲磺酸和对甲苯磺酸形成的盐。

本发明的药物组合物的左卡尼汀或其衍生物和曲美他嗪或其可药用的盐有协同效果。因此，本发明的药物组合物的左卡尼汀或其衍生物和曲美他嗪或其可药用的盐之间的重量比是本药物组合物的重要技术特征之一。一般而言，在本发明的药物组合物中，左卡尼汀和曲美他嗪的重量比可以约为1∶0.000015至约为1∶4.3，优选为1∶0.0001-1∶0.1，更优选为1∶0.0001-1∶0.005。

本发明的另一方面，提供了一种药物制剂，包括曲美他嗪和其可药用的盐，特别优选曲美他嗪盐酸盐，其中的一种药物与左卡尼汀或其衍生物以及可药用的盐，可联合或与可药用载体、赋形剂或稀释剂混合，形成可药用的单独包装的药物制剂，依据药学规范单独给药的联合用药的方式，组成本发明的药物组合物；或混合组成本发明的药物组合物，可联合或与可药用载体、赋形剂或稀释剂混合，形成可药用的药物制剂，依据药学规范给药。

本发明的药物制剂，优选含有左卡尼汀或其衍生物和曲美他嗪或其可药用的盐作为活性成分和一种或多种可药用载体。其中左卡尼汀或其衍生物和曲美他嗪或其可药用的盐的重量比可以约为1∶0.000015至约为1∶4.3，优选为1∶0.0001-1∶0.1，更优选为1∶0.0001-1∶0.005。

在本发明药物制剂中，一个特别优选的实例是左卡尼汀与曲美他嗪或其可药用的盐组成的药物制剂。

药物组合物的给药形式包括：静脉、肌内、腹膜、皮下、口服、直肠栓剂插入法、阴道栓剂插入法、靶向给药、吸入式、灌胃式、鼻饲式、舌下给药、滴药法、微针式给药、连续给药系统和局部给药，局部给药方式如贴皮制剂、或植入式连续给药释放系统，其中贴皮制剂载体包括骨架材料如疏水的聚硅氧烷和亲水的聚乙烯醇等，控释膜材料如聚硅氧烷和乙烯-醋酸乙烯共聚物等，压敏胶如聚异丁烯、聚硅氧烷和聚丙烯酸酯，活性成分一般分散在压敏胶中；其中植入式连续给药释放系统所选用的高分子材料包括聚乳酸一乙醇酸共聚物、聚乙二醇聚乳酸共聚物、聚乳酸/聚己内酯、聚[碳酸(亚丁酯-co-ε-己内酯)酯]、聚丁内酯戊内酯、聚二氧环己酮(PDS)、聚-3-羟基丁酸酯(PHB)、聚左旋乳酸(PLLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚ε-己内酯(PCL)、聚己内酯/聚乙交酯丙交酯(PCL/PLGA)。

本发明的药物制剂可以呈适于口服使用的制剂，例如片剂、缓释片、锭剂、水溶液或油混悬液、颗粒剂、乳液、硬或软胶囊、或糖浆剂。

用于口服使用的本发明制剂可依据本领域用于制备口服药物组合物的任何已知方法制得，并且这样的组合物可包含一种或多种选自下列的物质：甜味剂、矫味剂、填充剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、着色剂和防腐剂，以提供药学美观和适口的制剂。具体包括淀粉、乳糖、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、羟丙甲纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅和聚山梨脂-80、十二烷基硫酸钠。

片剂含有活性组分以及与其混合的适于制备片剂的药学上可接受的赋形剂。这些赋形剂可以是：惰性稀释剂如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂例如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、玉米淀粉或藻酸；粘合剂例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯树胶；和润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。

片剂可以是未包衣的或者可通过本领域公知的技术将其包衣以掩蔽药物的令人不愉快的味道或者延迟其在胃肠道的崩解和吸收，以及由此在更长的时间内维持持续的作用。例如，可使用水溶性味道掩蔽材料例如羟丙基甲基纤维素或羟丙基纤维素或者时间延迟材料例如乙基纤维素、乙酸丁酸纤维素。

本发明的口服制剂还可以以硬明胶胶囊提供，其中活性组分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙和高岭土混合，或以软明胶胶囊提供，其中活性成分与水溶性载体例如聚乙二醇或油性介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。

本发明的水混悬液含有活性物质以及与其混合的适于制备水混悬液的赋形剂或分散剂。所述的赋形剂包括：混悬剂例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍树胶和阿拉伯树胶。所述的分散剂可以是天然磷脂例如卵磷脂、或烯化氧与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或烯化氧与长链脂族醇的缩合产物例如十七乙稀氧基鲸蜡醇，或者烯化氧与衍生自脂肪和己糖醇的偏酯的缩合产物，例如聚氧乙烷山梨糖醇单油酸酯。

本发明的注射剂是含有活性物质的无菌注射粉末，通过使用水或有机溶剂如酒精、甲醇、丙酮、氯仿等溶解结晶，通过常温干燥或冷冻干燥得到无菌注射的粉末或结晶。

本发明的注射剂是含有活性物质的无菌注射液，可使用水、或林格溶液、氯化钠溶液和/或葡萄糖溶液做载体，形成无菌注射溶液。

本发明的注射剂可通过局部快速浓注引入到患者血流中或者其他可以给药的部位，或者通过静脉滴注的形式引入到患者血流中。

本发明的再一方面是提供了一种治疗各种疾病导致的能量代谢失衡、糖脂代谢紊乱和/或能量代谢障碍、糖脂代谢紊乱导致的各种疾病的方法，该方法将曲美他嗪或其可药用的盐与左卡尼汀或其衍生物以及可药用的盐，通过先后或同时给予患有上述疾病的病人，或者将本发明的药物组合物或由其制备的药物制剂给予患有上述疾病的病人，用于改善上述疾病的状况，并可用于预防上述疾病的发生。本发明优选含有左卡尼汀或其衍生物和曲美他嗪或其可药用的盐作为活性成分和一种或多种可药用载体。其中左卡尼汀或其衍生物和曲美他嗪或其可药用的盐的重量比可以约为1∶0.000015至约为1∶4.3，例如约为1∶0.001-1∶0.1，约为1∶0.001-1∶0.01，约为1∶0.005-1∶0.01，或约为1∶0.005。

本发明的再一方面提供了组合物中两种活性成份药物的不同剂型的组合，可以把左卡尼汀一种或多种口服给药形式的制剂与曲美他嗪一种或多种口服给药形式组合，把左卡尼汀一种或多种口服给药形式的制剂与曲美他嗪一种或多种注射给药形式组合，把左卡尼汀一种或多种口服给药形式的制剂与曲美他嗪一种或多种局部给药形式组合，把左卡尼汀一种或多种注射给药形式的制剂与曲美他嗪一种或多种口服给药形式组合，把左卡尼汀一种或多种注射给药形式的制剂与曲美他嗪一种或多种注射给药形式组合，把左卡尼汀一种或多种注射给药形式的制剂与曲美他嗪一种或多种局部给药形式组合，把左卡尼汀一种或多种局部给药形式的制剂与曲美他嗪一种或多种口服给药形式组合，把左卡尼汀一种或多种注射给药形式的制剂与曲美他嗪一种或多种注射给药形式组合，把左卡尼汀一种或多种注射给药形式的制剂与曲美他嗪一种或多种局部给药形式组合，其中口服给药形式的制剂选自：普通片、缓释片、颗粒剂、硬或软胶囊、糖浆剂、溶液剂、乳剂；注射给药形式选自：无菌注射的水溶液、无菌注射的水包油微乳液、注射用无菌粉末；局部给药形式选自：贴剂、栓剂、霜剂、膏剂、凝胶剂、溶液或混悬液。以左卡尼汀口服形式、注射形式与盐酸曲美他嗪口服形式、注射形式的成人(例如体重60公斤成人)一天用药量为例(成人每Kg体重日用剂量约为大鼠每Kg体重日用剂量1/6，成人每Kg体重日用剂量约为小鼠每Kg体重日用剂量1/12，(药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算，中国临床药理学与治疗学，2004Sep；9(9)：1069-1072))为例，其中不同剂型组合的左卡尼汀和盐酸曲美他嗪的日用量可以按如下数据进行随机选择：

在本发明药物制剂中，一个特别优选的实例是左卡尼汀与曲美他嗪或其可药用的盐组成的药物制剂。成人给药的日剂量为：左卡尼汀或其衍生物为5-300mg/kg；曲美他嗪或其可药用的盐为0.005-1mg/kg。

本发明的再一方面是提供了一种治疗和预防各种疾病存在的能量代谢异常、糖脂代谢紊乱和/或各种因能量代谢失衡、糖脂代谢紊乱导致的疾病，如各种肿瘤、癌症、肉瘤、血癌、急慢性白细胞及粒细胞性白血病、各种原因所致的贫血(包括骨髓性贫血、再生障碍性贫血)、淋巴组织细胞病、出血性疾病(包括弥散性血管内凝血)、过敏性疾病、自身免疫性疾病、原发性和继发性免疫缺陷病、风湿热、系统性红斑囊疮、类风湿性关节炎、脊柱关节病、多发性肌炎和皮肌炎、硬皮病和系统性硬化症、骨关节炎、代谢性骨病、骨质疏松症、痛风和高尿酸血症、结节病、淀粉样变性、大骨节病、神经痛、神经炎、各种周围神经病、各种脊髓疾病、脑血管疾病(包括脑梗死、脑栓塞、脑出血、蛛网膜下腔出血等)、颅内肿瘤、中枢神经系统感染(包括病毒和细菌性脑炎、脑膜炎等)、运动障碍性疾病(帕金森病、舞蹈病、肝豆状核变性、肌张力障碍、抽搐与振颤)发作性疾病(包括癫痫、偏头痛、发作性睡病与猝倒症等)、脱髓鞘性疾病(包括多发性硬化症、视神经脊髓炎、脑白质营养不良)、骨骼肌肉病(包括肌营养不良症、强直性肌病、重症肌无力、炎症性肌病、代谢性肌病、周期性瘫痪)、自主神经疾病(包括雷诺病、红斑性肢痛、间脑综合症)、精神疾病包括器质性精神障碍(痴呆综合症、谵妄综合症、遗忘综合症、艾滋病所致精神障碍)、精神活性物质所致精神障碍(酒精中毒和酒精依赖、药物依赖)、精神分裂症、情感障碍、神经症性障碍(恐怖症、焦虑症、强迫症、神经衰弱、癔症、疑病症)、进食障碍、睡眠障碍、广泛性发育障碍、精神发育迟滞、多动障碍、抽动障碍；衰老、阿尔兹海默病、各种原因导致的线粒体疾病，如亨廷顿氏疾病、帕金森病(PD)、肌萎缩性侧索硬化、线粒体脑肌病伴乳酸中毒及中风样发作综合征(MELAS)、肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维病(MERRF)、Leber遗传性视神经病(LHON)、线粒体心肌病、肌病、痴呆、突发的不能控制的肌肉收缩(肌阵挛性的癫痫)、各种原因所致休克、多脏器功能衰竭、高温、低温综合症、感染性疾病(呼吸道感染、哮喘、严重急性呼吸综合症、病毒性肝炎、流行性腮腺炎、流行性乙型脑炎、狂犬病、脊髓灰质炎、麻疹、风疹、天花、水痘、单纯疱疹、带状疱疹、流行性出血热、黄热病、肠道病毒所致的各系统感染、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、艾滋病、立克次体病、衣原体感染、支原体感染、细菌性疾病(包括结核性疾病厌氧菌感染、败血症、破伤风等)、真菌性疾病、螺旋体病、寄生虫病、各种原因引起的感染性腹泻、各种急性化学物理因素所致的中毒、高原病、放射病、尘肺、电击伤、晕动病、营养不良(营养不良性干瘦、恶性营养不良、继发性蛋白质能量营养不良)、肥胖症、肠内营养、肠外营养、水电解质代谢紊乱、酸碱平衡紊乱、糖尿病、糖尿病心血管疾病、糖尿病周围神经病变、糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病、糖尿病足、妊娠与糖尿病、糖尿病与感染、糖尿病急性代谢并发症、乳酸性酸中毒、各种原因所致低血糖、胰岛素抵抗综合症、代谢综合症、各型糖原累积病、血脂蛋白紊乱、高氨基酸尿症、黄流、粘多糖病、果糖不耐受症、半乳糖血症、嘌呤和嘧啶代谢疾病、生长激素缺乏性侏儒症、成年人腺垂体功能减退症、肾上腺病、甲状腺病、甲状旁腺病、卵巢病、男性性功能障碍、性早熟、胰岛内分泌肿瘤、多发性内分泌腺病、急慢性心功能不全，心律失常、心脏传导异常、人工心脏起搏、心血管介入疗法、瓣膜病、动脉粥样硬化、冠心病、(包括猝死)、先天性心脏病、高血压、感染性心内膜炎、肺源性心脏病、心包炎、心肌病、心肌肥大、心肌扩张、周围血管疾病(包括多发性大动脉炎、雷诺综合症、血栓闭塞性脉管炎、闭塞性动脉硬化等)、心脏移植手术；急慢性呼吸功能不全、慢性阻塞性肺疾病、支气管哮喘、支气管扩张、各种原因引起的肺炎、肺脓肿、肺部肿瘤、肺肉瘤、肺水肿、肺栓塞、肺静脉瘘、肺结核、先天性肺发育不全、阻塞性睡眠呼吸暂停综合症、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征；黄疸、腹泻、消化道出血、食道癌、反流性食管炎、食管裂孔疝、消化性溃疡、胃癌、胃肿瘤、胃手术并发症、急性出血坏死性小肠炎、溃疡性结肠炎、大肠癌、肠道血管疾病、肠梗阻、胃动力性和功能性疾病、急性腹膜炎、急性胰腺炎、各种原因引起肝硬化、脂肪肝、原发性和继发性肝癌、爆发性肝功能衰竭、肝性脑病、胆石病、胆囊炎、胆管肿瘤；急慢性肾功能衰竭、血液净化疗法、急慢性肾炎、肾病综合症、微小病变性肾病、膜性肾病、局灶性肾小球硬化症、系膜增殖性肾小球肾炎、系膜毛细血管增生性肾炎、继发性肾小球疾病、遗传性肾炎、泌尿道感染、间质性肾炎、肾小管疾病、肾石病、肾脏肿瘤、失聪、美尼尔氏综合症、急慢性中耳炎、结膜病、角膜病、白内障、青光眼、葡萄膜病、视网膜病、视神经病、糖尿病视网膜并发症、急慢性扁桃体炎、扁桃体脓肿、口腔肿瘤、出血、窒息、牙周脓肿、病毒性皮肤疾病、细菌性皮肤疾病、真菌性皮肤病、荨麻疹类皮肤病、日光性皮肤病、冻疮、放射性皮肤病、痤疮、脂溢性皮炎、斑秃、雄激素源性脱发、营养与代谢障碍性皮肤病(维生素缺乏、肠病性肢端皮炎、原发性皮肤淀粉样变、皮肤卟啉病、黄瘤病)、色素性皮肤病(白癜风、黄褐斑、雀斑、黑变病、遗传性大疱性表皮松解症、鱼鳞病、毛周角化病、家族性良性天疱疮等等。优选含有左卡尼汀或其衍生物和曲美他嗪或其可药用的盐作为活性成分和一种或多种可药用载体。其中左卡尼汀或其衍生物和曲美他嗪或其可药用的盐的重量比可以约为1∶0.000016至约为1∶0.4，例如约为1∶0.001-1∶0.1，约为1∶0.001-1∶0.01，约为1∶0.005-1∶0.01，或约为1∶0.005。

在本发明药物制剂中，一个特别优选的实例是左卡尼汀与曲美他嗪或其可药用的盐组成的药物制剂。成人给药的日剂量为：左卡尼汀或其衍生物为5-600mg/kg；曲美他嗪或其可药用的盐为0.005-3mg/kg，儿童剂量根据体重依成人体重和剂量作相应降低。

在有些实施方式中，本发明可以排除以下内容：左卡尼汀单独以一次静脉注射2000mg方式单独给药和曲美他嗪以每次20mg、每日3次的单独给药方式联合治疗心肌梗死后泵衰竭，以上述给药方式左卡尼汀和盐酸曲美他嗪重量比为1∶0.01、1∶0.02或1∶0.03的组合。在有些实施例中本发明可以排除用于减少心肌梗死面积的应用。

本药物组合物的应用特别排除缩小心肌梗死面积、心肌缺血、心脏泵衰竭、心源性休克、慢性心肌梗死、心绞痛、急性冠状动脉综合症、急慢性心力衰竭、心肌缺血导致的心肌代谢异常。

具体实施方式

下面的实施例仅仅用于进一步解释本发明，而不是对本发明范围的限制。

具体实施方式

实施例1曲美他嗪和左卡尼汀药物组合物对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的疗效，对由于心肌缺血引起的能量代谢异常的疗效，对于综合平衡脂肪酸和葡萄糖代谢的作用，以及对于线粒体功能障碍的疗效。

心肌急性缺血及再灌注时，心肌能量的供应由于氧的不足，变脂肪酸有氧氧化供能转为糖酵解为主来提供能量，因此，酵解产生的大量乳酸，发生酸性产物堆积、过氧化程度加重，心肌超微结构受损等一系列病理改变。

为观察曲美他嗪、左卡尼汀以及不同配比对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤、能量代谢异常、线粒体功能障碍的防治作用，使用大鼠心肌急性缺血再灌注损伤模型并从以下三方面进行观察：1，心肌能量代谢指标的检测，包括心肌组织的ATP含量、糖原的含量、游离脂肪酸(FFA)的含量、丙酮酸脱氢酶(PDH)的活性检测；2，心功能的检测，包括乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CPK)；3，心肌抗氧化应激指标的测定；4，心肌细胞线粒体结构观察。

1.1实验方法：

1.1.1材料和分组：

曲美他嗪、左卡尼汀两种药物单用，每种药设四个剂量组，加溶剂对照共5组。分别为：

曲美他嗪(TMZ)组：溶剂对照组、曲美他嗪1、3、6、9mg/kg。

左卡尼汀(L-C)组：溶剂对照组、左卡尼汀100、300、600、900mg/kg给药组。

曲美他嗪+左卡尼汀(TMZ+L-C)复方药物组：参照以上曲美他嗪、左卡尼汀两个药物单用的剂量，分别去除两个组的最高剂量后，曲美他嗪+左卡尼汀复方药物的剂量(mg/kg)设置为3+100、3+300、3+600、1+300、6+300，加上溶剂对照共6组。

各组药物使用的溶剂为注射用水，先配制成不同的浓度的单药注射液，曲美他嗪1mg/ml，左卡尼汀200mg/ml，备用。

1.1.2缺血再灌注模型的制作：

给予SD大鼠按上述的分组剂量，先腹腔注射单次给药，给药容积为5ml/kg。行乙醚麻醉，按常规方法结扎大鼠冠状动脉，并留活线头，在心电图前边观察心电ST段抬高的情况，决定结扎的程度，确定心肌处于完全缺血的状态，保持结扎状态25分钟；再灌注-解开结扎线，保留动物1小时以上后，心尖取血，静置30分钟后，离心，取上清，保存于-20℃，待测。或根据各检测指标使用的试剂盒的要求需要取组织进行匀浆制备样本进行检测。

1.1.3心肌能量代谢指标的检测：

1.1.3.1ATP含量检测：

取心尖部约0.2g组织放入液氮冻存，后制备样本，采用ATP检测试剂盒(碧云天公司)测定组织的ATP含量：将ATP检测剂于冰水浴中溶解。取出液氮中的心肌标本，于冰上制备10％心肌匀浆。用虫荧光素酶法检测心肌匀浆中ATP的浓度。

1.1.3.2心肌组织糖原测定：

糖原标准品购白中国上海政翔化学试剂研究所。心肌糖原含量按Kemp等方法测定。实验大鼠心功能测定后取心尖部肌肉100mg左右，剪碎匀浆，离心(2000rpm，5mins)。在沉淀物中加入5ml去蛋白化溶液，沸水浴15min，冷却后离心(3000r，5mins)，取上清液1ml，加到3ml 3mol/L硫酸中振荡混匀.再沸水浴6.5min，冷却后在分光光度计520nm处比色测定。糖原单位为mg/g心肌。

1.1.3.3游离脂肪酸浓度(FFA)检测：

取心尖部组织约0.8g，用生理盐水冼净，以生理盐水制成10％匀浆制备样本，按游离脂肪酸(free fatty acid，FFA)测定试剂盒上的说明书操作测定FFA含量。

1.1.3.4丙酮酸脱氢酶(PDH)检测：

取心尖组织，依据Stephan方法提取线粒体(JBC，1991，266(31)：20998-21003.)。丙酮酸脱氢酶(PDH)依据Hinman等的方法(CML S，2004，(61)：220-229)，测定方法简述如下：适量线粒体加入测定液(NAD+2.5mmol/L，辅酶A0.1mmol/L，TPP0.2mmol/L，DTT0.3mmol/L，MgCl2 1mmol/L，BSA1mg/ml，0.05mol/L pH 7.8磷酸缓冲液，INT 0.6mmol/L，硫辛酰胺脱氢酶0.1mg/ml)，5mmol/L丙酮酸启动反应，500nm扫描5min。

1.1.4心功能检测：

乳酸脱氢酶、肌酸磷酸激酶测定：再灌注结束时立即从心尖取血2ml，室温静置后离心取血清，用COBAS-C111全自动生化分析仪测定CPK、LDH含量。

1.1.5抗氧化应激指标-MDA、SOD的测定

实验后迅速摘取心脏，将取下的左心室心肌组织块，用冰生理盐水漂洗，除去血液，用滤纸吸去多余水分，称重，按照1∶9(组织重量克数∶生理盐水体积毫升数)加入冰生理盐水，制成10％的心肌组织匀浆，做心肌匀浆测定丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。

1.1.6心肌细胞超微结构的电镜观察

心肌组织超微结构观察，分缺血再灌注模型组(M)、复方注射液小剂量(TMZ3+LC100)(LT-S)和大剂量(TMZ3+LC600)(LT-L)共三组。各组随机各取动物3只，再灌注240mins后，立即取缺血中心区心肌组织切成1mm大小，经磷酸盐缓冲溶液(PBS 0.1mol/L，pH 7.3)冲洗，4％戊二醛固定，1％锇酸固定2h，丙酮逐级脱水，Epon1812环氧树脂包埋，超薄切片，醋酸铀和枸椽酸铅双重染色，H-600透射电镜观察。

1.2结果

1.2.1心肌能量代谢、心功能以及抗氧化应激作用的结果

1)单用曲美他嗪对急性心肌缺血再灌注损伤模型的心肌能量代谢的影响，可见心肌细胞ATP含量上升；心肌糖原含量随剂量的增加逐渐下降；血游离脂肪酸浓度升高，丙酮酸脱氢酶活性升高，9mg/kg组PDH活性升高了33.1％；心功能指标也随剂量的增加而有所改善；血清SOD和MDA的浓度也随剂量的增加而改善。见表1-1。

2)单用左卡尼汀对急性心肌缺血再灌注损伤模型的心肌能量代谢的影响，可见心肌细胞ATP含量上升；心肌糖原含量上升；血游离脂肪酸浓度显著下降；丙酮酸脱氢酶活性呈下降趋势但无显著差异；心功能指标有改善；血清SOD浓度升高，MDA浓度升高。见表1-2。

3)不同配比的复方曲美他嗪左卡尼汀注射液对急性心肌缺血再灌注损伤模型的心肌能量代谢的影响，实验可见心肌细胞ATP含量显著上升，呈现剂量依赖，TMZ3+L-C600组上升了38.0％；心肌糖原含量随剂量的增加逐渐上升，以TMZ3+L-C600组最为显著；血游离脂肪酸浓度显著下降，TMZ3+L-C600组下降了36.3％；丙酮酸脱氢酶活性可见随剂量的增加而略有上升，TMZ3+L-C600组上升了31.2％；心功能指标也随剂量的增加而显著改善，以TMZ3+L-C600组最为显著；血清SOD浓度也随剂量的增加非常显著地升高，MDA浓度随剂量增加而升高，TMZ3+L-C600组呈现出较好的抗氧化应激活性。见表1-3。

1.2.2心肌超微结构的改变

通过实验，透射电镜显示复方曲美他嗪左旋卡尼汀注射液治疗后心肌组织的超微结构得以保留，线粒体结构完整；而对照组心肌的超微结构基本完全被破坏，线粒体的大小和形态异常。

1.3结果分析：

1.3.1合用曲美他嗪和左卡尼汀，与单用曲美他嗪、左卡尼汀和模型对照组相比，更好地改善了心功能，增加了心肌的抗氧化应激的能力，LDH显著降低，减轻了心肌缺血再灌注的损伤。效果不是简单的叠加，具有协同作用。

1.3.2合用曲美他嗪和左卡尼汀，与单用曲美他嗪相比，能量代谢的指标如心肌ATP、糖原的含量等指标得到显著改善，说明合用后产能增加。

1.3.3合用曲美他嗪和左卡尼汀，与单用曲美他嗪相比，合用后游离脂肪酸浓度下降，说明合用后促进了脂肪酸的氧化，减轻了FFA的堆积而导致的对线粒体结构的损伤，增加了产能；同时，合用后丙酮酸脱氢酶活性提高，降低了脂肪酸积聚导致的抑制葡萄糖氧化途径中起促进作用的丙酮酸脱氢酶活性的副作用，说明合用后也促进了葡萄糖的氧化。试验表明合用后同步调节了葡萄糖和脂肪酸的代谢，综合平衡了脂肪酸和葡萄糖代谢。

1.3.4合用曲美他嗪和左卡尼汀，与单用曲美他嗪相比，更好地保护了细胞线粒体结构，改善了线粒体功能的障碍。

1.3.5实验发现，当左卡尼汀：曲美他嗪的配比为200∶1时显示了心肌组织ATP含量达到最大程度升高，心功能得到了改善，心肌组织中FFA浓度的下降，提示心肌抑制得到解除，以上结果显示，当发生心肌缺血再灌注损伤、能量代谢异常时，需要综合平衡脂肪酸和葡萄糖代谢，才能使缺血再灌损伤心肌的能量供给得到优化、从而纠正能量代谢失衡、并促进心肌功能的恢复。

实验结果提示我们，本发明的可以治疗能量代谢异常、纠正能量代谢失衡、线粒体功能障碍的的药物组合物也可用于治疗其他各种同样存在能量代谢异常和线粒体功能障碍的疾病，如胰岛素抵抗性疾病、肿瘤以及严重感染造成的代谢紊乱等等。

实施例2左卡尼汀和曲美他嗪组合物治疗代谢综合症以及能量代谢异常的疗效

2.1造模方法：

动物：普通级雄性Wistar大鼠，体重200±20g；普通饲料喂养1周后，a)各模型组分别给予高糖高脂高盐饲料(基础饲料58％，化猪油8％，蔗糖22％，蛋黄10％，食盐2％)8周后检测造模指标。b)正常对照组：给予普通饲料(含0.5％盐)8周。所有动物均自由进食及饮水

2.2受试药物及分组

1)药物：左卡尼汀和盐酸曲美他嗪两种药物均由常州三维工业研究所提供。

溶剂：生理盐水。受试药物临用前用生理盐水配制成相应浓度等体积溶液。

2)剂量设置及实验分组

曲美他嗪和左卡尼汀根据临床人用剂量推算出大鼠等效剂量后，每个药设四个剂量组，加溶剂对照共5组，分别为：

曲美他嗪(TMZ)：溶剂对照组，TMZ 1、3、6、9mg/kg。

左卡尼汀(L-C)：溶剂对照组、L-C 100、300、600、900mg/kg。

TMZ+L-C剂量，根据曲美他嗪和左卡尼汀两个药的药效情况，去除两个组的最高剂量后，曲美他嗪和左卡尼汀剂量设置为：

曲美他嗪+左卡尼汀剂量(mg/kg)为：3+100、3+300、3+600、1+300、6+300，加上溶剂对照共6组。

3)给药途径及给药容积

灌胃给药，给药容积为1ml/100g。给药时间：2个月。

2.3检测指标：

1)糖耐量试验：所有动物禁食12小时，行眶后静脉丛取血1ml后灌胃20％葡萄糖1ml/kg，2小时候同样方法再次采血2ml，室温静置1小时以上，离心4000rpm，20min，取上清。使用罗氏COBAS-II全自动生化仪测定血糖值。

2)血浆游离脂肪酸浓度测定：实验结束后即刻抽取动脉血3ml，离心后取上清液按试剂盒说明书操作测定FFA。

3)肝组织丙酮酸脱氢酶(PDH)浓度测定：取肝组织，依据Stephan方法提取线粒体(JBC，1991,266(31)：20998-21003)。PDH测试方法同实施例1。

2.4实验结果

1)曲美他嗪单独使用：与溶剂对照组相比，各组间随着曲美他嗪剂量加大，血糖随之下降，组织FFA随着剂量的增加略有升高，PDH活性改善。见表2-4

表2-4单用曲美他嗪对MS模型大鼠血糖、FFA和PDH的影响

与溶剂对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

2)左卡尼汀单独使用：与溶剂对照组相比，各组间随着左卡尼汀剂量加大，血糖随剂量的增加有所下降，组织FFA显著下降。结果见表2-5。

表2-5左卡尼汀对MS大鼠的血糖、FFA和PDH活性的影响

与溶剂对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

3)曲美他嗪，左卡尼汀联合使用：曲美他嗪与左卡尼汀的不同配比实验结果显示，3mg/kg的TMZ与不同剂量的100，300，600mg/kg的L-C的组合，均明显地降低血糖，TMZ3mg/kg+L-C600mg/kg的组合效果尤为显著；游离脂肪酸显著下降，以TMZ3mg/kg+L-C600mg/kg最为显著，并且PDH的活性也显著改善。见表2-6。

表2-6复方左卡尼汀注射液对MS大鼠的血糖、FFA和PDH活性的影响

与溶剂对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

2.5实验结论

1)单用曲美他嗪虽然可使血糖显著下降，但不能显著降低游离脂肪酸浓度。

2)单用左卡尼汀可使血糖下降，组织游离脂肪酸下降；但对PDH的活性影响不明显；

3)合用曲美他嗪和左卡尼汀，克服了以上的缺点，尤其TMZ3mg/kg+L-C600mg/kg组使血糖下降显著，FFA显著下降，PDH的活性也显著改善。

4)当本药物组合物中曲美他嗪和左卡尼汀的比例为1∶200时，血糖下降最显著，ATP产生最多，综合治疗能量代谢异常的效果最好，提示曲美他嗪和左卡尼汀组合物治疗糖尿病患者能量代谢异常的最佳配比是1∶200。

5)本实验结果提示，本药物组合物还可用在肥胖症、糖尿病及其并发症等其他糖脂代谢紊乱的疾病。

实施例3左卡尼汀和曲美他嗪组合物治疗肝癌能量代谢异常的疗效

3.1实验方法和剂量设置

BALB/c小鼠，雄性。体重20-22g。从每批36只小鼠中随机取15只作为健康组，其

余各组于右前肢下皮下注射HepA细胞悬液，每只0.2mL(5x10/ml)，制成肝癌实

体瘤模型。曲美他嗪和左卡尼汀根据临床人用剂量推算出小鼠等效剂量后，每个

药设2个剂量组，加溶剂组、对照组共4组。分别为：

曲美他嗪(TMZ)组：溶剂对照组、TMZ 48mg/kg给药组，腹腔注射。

左卡尼汀(L-C)组：溶剂对照组、L-C 340mg/kg给药组，灌胃。

曲美他嗪+左卡尼汀剂量(mg/kg)组：溶剂对照组、TMZ 48mg/kg给药组腹腔注射TMZ组为+L-C 340mg/kg给药组灌胃联合应用组。

给药时间，连续给药1个月。

将小鼠断颈处死，放血，取出肝脏或肿瘤组织，用标准方法分离线粒体。

3.2检测指标：

细胞色素氧化酶(CCO)活性测定：取肝癌细胞线粒体用二甲基对苯二胺比色法测定CCO活力。CCO的升高表示肿瘤细胞的呼吸链的氧化磷酸化增强。

乳酸脱氢酶(LDH)测定：取离心线粒体上清液用King氏法测定LDH活力。

肝细胞内游离脂肪酸的测定：取肝组织放入液氮冻存，后制备样本，3000rpm离心10min，取上清检测游离脂肪酸的含量，方法按试剂盒说明进行。

肝细胞ATP含量检测：参考实施例1，取肝组织放入液氮冻存，后制备样本，采用ATP检测剂(碧云天公司)测定组织的ATP含量：将ATP检测剂于冰水浴中溶解。取出液氮中的心肌标本，于冰上制备10％肝组织匀浆。用虫荧光素酶法检测肝组织匀浆中ATP的浓度。

3.3实验结果

1)曲美他嗪对小鼠肝癌模型的糖脂代谢指标的影响：

与溶剂对照组相比，曲美他嗪给药组随着各组间剂量加大，LDH和CCO活性随之下降；ATP含量随之升高。PDH活性随剂量增加而升高。结果见表3-7。

表3-7曲美他嗪注射液对小鼠肝癌模型的糖脂代谢指标的影响

vs正常组#P＜0.05，##P＜0.01

vs模型组*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

2)左卡尼汀对小鼠肝癌模型的糖脂代谢指标的影响：

与曲美他嗪单独使用一样，左卡尼汀单独使用后LDH、CCO活性下降、FFA含量下降明显；PDH活性变化不显著；ATP含量升高，，结果见表3-8。

表3-8左卡尼汀注射液对小鼠肝癌模型的糖脂代谢指标的影响

vs正常组#P＜0.05，##P＜0.01

vs模型组*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

3)曲美他嗪与左卡尼汀联合应用对小鼠肝癌模型的糖脂代谢指标的影响

曲美他嗪与左卡尼汀联合应用，实验结果显示，较好地降低了LDH和CCO活性以及FFA的含量，PDH的活性也升高，ATP含量增加。结果见表3-9。

表3-9复方左卡尼汀注射液对体外肝癌细胞模型的糖脂代谢指标的影响

vs正常组#P＜0.05，##P＜0.01

vs模型组*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

3.4实验结论

1)实验结果显示，曲美他嗪与左卡尼汀联合应用治疗肝癌小鼠，促进了糖代谢，抑制了糖酵解和异生；游离脂肪酸的浓度下降，促进了脂肪酸氧化，改善了细胞内环境。TMZ48mg/kg注射加L-C340mg/kg口服联合应用，可以综合平衡糖脂代谢，优化能量供应，促进细胞恢复正常功能，抑制肿瘤生长。

2)实验结果提示，本药物组合物还可用在其他各种癌症、白血病及艾滋病等疾病的治疗中。

实施例4左卡尼汀和曲美他嗪组合物对小肠缺血再灌注MODS能量代谢异常的治疗作用

4.1动物分组与药物剂量：

曲美他嗪和左卡尼汀根据临床人用剂量推算出大鼠等效剂量后，2个单药组、合用组、正常组、模型对照共5组。分别为：

曲美他嗪(TMZ)：溶剂对照组，TMZ 130mg/kg腹腔注射。

左卡尼汀(L-C)：溶剂对照组、L-C 5100mg/kg灌胃。

曲美他嗪+左卡尼汀剂量(mg/kg)为：TMZ 130mg/kg腹腔注射+L-C 5100mg/kg灌胃。

正常和模型对照组：灌胃给药10ml/kg蒸馏水。

4.2小肠缺血再灌注MODS动物模型的制作及标本采集

大鼠于模型制备前24h禁食不禁水，称重后给予腹腔注射10％水合氯醛(30mg/100g)麻醉后，实验台上仰卧固定，腹部脱毛后取腹部正中切口进腹，暴露肠系膜上动脉(superior mesenteric artery，SMA)，各组分别用无创夹夹闭其根部45minutes，松夹即为再灌注在进行SMA夹闭期间，间断地向腹腔内注射等渗盐水，总量约15～20ml/kg，以预防或减轻在松开动脉夹后出现的一过性低血容量反应。待肠系膜上动脉搏动恢复后记录再灌注时间。上述操作均在无菌条件下进行。

4.3检测能量代谢指标：

血糖测定：方法同实施例1

乳酸脱氢酶(LDH)活性测定方法同实施例1

丙酮酸脱氢酶(PDH)检测：方法同实施例1

组织游离脂肪酸浓度测定：方法同实施例1

肝组织ATP含量：方法同实施例1

4.4实验结果

1)单用曲美他嗪对MODS模型的能量代谢的治疗作用：LDH活性可见随剂量的增加而下降，PDH活性升高，肝脏组织ATP含量上升；血糖随剂量的增加逐渐下降，9mg/kg组下降了37％；组织游离脂肪酸浓度可见升高趋势，但无显著意义。见表4-10。

表4-10单用曲美他嗪对大鼠小肠缺血再灌注MODS动物模型的糖脂代谢指标的影响

vs正常组^#P＜0.05，^##P＜0.01

vs缺血组^*P＜0.05，^**P＜0.01

2)单用左卡尼汀对MODS的能量代谢异常的治疗作用：可见肝组织游离脂肪酸浓度下降，LDH活性随剂量的增加而略有下降，血糖含量随剂量的增加逐渐下降；PDH活性影响不显著；肝脏组织ATP含量上升。见表4-11。

表4-11单用左卡尼汀对大鼠小肠缺血再灌注MODS动物模型的糖脂代谢指标的影响

vs正常组#P＜0.05，##P＜0.01

vs缺血组*P＜0.05，**P＜0.01

3)左卡尼汀与曲美他嗪的联合应用对MODS能量代谢异常的治疗作用：血糖显著下降，LDH浓度显著下降，PDH浓度上升，组织FFA浓度下降，肝脏组织ATP含量显著上升。见表4-12。

表4-12药物组合对大鼠小肠缺血再灌注MODS动物模型的糖脂代谢指标的影响

vs正常组#P＜0.05，##P＜0.01

vs缺血组*P＜0.05，**P＜0.01

4.5实验结论

左卡尼汀与曲美他嗪联合应用治疗小肠缺血再灌注MODS后，与单用左卡尼汀和曲美他嗪相比，LDH活性下降，PDH活性上升，组织FFA浓度下降，血糖值下降，肝组织ATP增加，表明左卡尼汀与曲美他嗪联合应用后使糖脂代谢产生了新的平衡，优化了组织细胞能量的供给，纠正了细胞内代谢环境的紊乱，有利恢复细胞的功能。因此在MODS发生时，以平衡糖脂代谢为出发点来治疗，既克服了单用药的副作用，又为组织优化能量的供给，从细胞水平治疗MODS。

实验结果还提示，本药物组合物还可用于治疗其他急性创伤、休克、急慢性感染、肺部疾病，各种原因导致的急性组织器官功能障碍性疾病等类似小肠缺血再灌注MODS能量代谢失衡疾病。

实施例5左卡尼汀和曲美他嗪组合物对小鼠生精障碍的疗效

5.1分组及室验方法

5.1.1动物模型制备

普通级昆明种雄性小鼠，体重25±5g。除正常组外，每只小鼠予腹腔注射环磷酰胺(配制成0.1％注射液)75mg/kg/d)，连续5d。再喂养15d，造成生精障碍模型。

5.1.2动物分组

十天后，将造模小鼠随机分成5组，每组5只。曲美他嗪和左卡尼汀根据临床人用剂量推算出大鼠等效剂量后，2个单药组、合用组加溶剂、对照共5组。分别为：

克罗米芬组(CL)：按21.6mg/kg/天灌胃给予克罗米芬。

CL+曲美他嗪(TMZ)：克罗米芬21.6mg/kg/天灌胃，TMZ 132mg/kg灌胃。

CL+左卡尼汀(L-C)：克罗米芬21.6mg/kg/天灌胃，L-C 3400mg/kg灌胃。

CL+TMZ+LC：克罗米芬21.6mg/kg/天灌胃、TMZ 132mg/kg灌胃口服、L-C3400mg/kg灌胃口服。

正常组和模型对照组：按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水。连续治疗35天。

5.1.3指标测定

5.1.3.1睾丸、附睾湿重

最后一次给药24小时后，将小鼠脱臼处死，迅速摘取睾丸、附睾，称其湿重。

5.1.3.2精子数

将附睾置于盛有5ml生理盐水的平皿中，剪碎，37℃水浴20分钟，按红细胞计数法，测定每毫升精子数。

5.1.3.3精子活动率

滴1滴上述精子悬液于载玻片上，高倍镜记录精子活动率(100个精子中活动精子百分率)。

5.1.3.4精子细胞ATP含量

收集精液，检测方法参考实施例1。

5.2实验结果

5.2.1睾丸、附睾湿重

表5-13各给药组对睾丸及附睾重量的影响

^#P＜0.05，^##P＜0.01VS假手术组；^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001 VS模型对照组

由表5-13可知，用药组睾丸和附睾重量与模型组有显著差异。用药后睾丸、附睾重量明显提高。

5.2.2精子数及活动率

表5-14各给药组动物精子数及精子活动率及ATP含量的比较

^#P＜0.05，^##P＜0.01VS假手术组；^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001VS模型对照组

由表5-14结果显示，合用组药物对精子数量、活动率及精子细胞的ATP含量都有显著提高作用。

5.3结论

实验结果表明，给予生精障碍小鼠左卡尼汀和曲美他嗪组合物后，睾丸、附睾质量上升，由于睾丸是精子产生的地方，其质量上升间接反应了生精能力的提高；另外，实验还表明精子数量和活动率均明显上升，由于精子数量和活动率是衡量精液质量的重要指标，因此实验表明左卡尼汀+曲美他嗪药物组合物对男性不育症有辅助治疗效果。

实施例6.左卡尼汀和曲美他嗪组合物对脂肪肝的治疗作用

6.1实验方法

6.1.1动物分组

取健康wistar大鼠，雌雄各半，体重200±20g，随机分成5组，每组15只：

正常组和模型对照组：按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水。

曲美他嗪(TMZ)：45mg/kg/天灌胃。

左卡尼汀(L-C)：11.9g/kg/天灌胃。

TMZ+LC：TMZ 45mg/kg灌胃和L-C 11.9g/kg灌胃，连续给药1个月。

最后一次给药后禁食12小时，称重，以10％水合氯醛溶液腹腔麻醉，眼眶取血后处死，分离血清，迅速摘取肝脏。

6.1.2动物模型的制备

模型组大鼠每天10ml/kg脂肪乳灌胃。脂肪乳成分：每100ml含10g胆固醇、30g猪油、3g胆酸、10ml吐温-80、20ml丙二醇，蒸馏水加至100ml。连续8周。

6.1.3指标测定

6.1.3.1肝指数测定

用生理盐水将取出的肝脏冲洗干净，称重，以肝脏重量与体重之比作为肝指数。

6.1.3.2血脂血糖测定

按试剂盒操作步骤，在自动生化仪上测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FBS)。

6.1.3.3肝功能测定

按试剂盒操作步骤，在自动生化仪上测定谷丙转氨酶(ALT)活性

6.1.3.4能量代谢指标的测定，丙酮酸脱氢酶(PDH)、游离脂肪酸(FFA)浓度和肝细胞ATP含量测定，方法同实施例1。

6.2实验结果

6.2.1对大鼠脂肪肝肝指数的影响

表6-15各给药组动物的肝指数比较

由表6-15看出，模型组大鼠肝指数显著高于正常组大鼠，提示其出现肝肿大现象。用药组肝指数均显著下降，左卡尼汀+曲美他嗪组下降最显著，提示该药物组合物能有效缓解脂肪肝。

6.2.2对血脂血糖的影响

表6-16各给药组血脂改变情况

#P＜0.05，##P＜0.01VS假手术组；*P＜0.05，**P＜0.01VS模型对照组

由表6-16看出，TMZ和LC以及TMZ+LC组对血糖和TG均有显著下降作用。TMZ：LC＝3：450mg/kg的效果尤为显著。

6.2.3对肝功能及能量代谢指标的影响

结果显示，曲美他嗪和左卡尼汀的组合物更显著地改善肝功能，还表现在使改善了PDH的活性，降低了FFA的浓度，ATP含量的显著增加，见表6-17。

表6-17各给药组动物肝功能及能量代谢指标改变情况

#P＜0.05，##P＜0.01VS假手术组；*P＜0.05，**P＜0.01VS模型对照组

6.3结论

通过使用曲美他嗪和左卡尼汀药物组合物治疗脂肪肝，降低了血糖、血脂，改善了PDH活性、降低了FFA浓度，优化了ATP的生成，表明曲美他嗪和左卡尼汀药物组合物对脂肪肝糖脂代谢失衡具有治疗作用，可以有效治疗脂肪肝。实施例7.左卡尼汀和曲美他嗪药物组合物治疗高尿酸血症的疗效

7.1实验材料：

动物：雄性昆明种小鼠50只，体重28±2g

药品、试剂：氧嗪酸钾盐、别嘌呤醇、尿酸试剂盒

7.2实验方法：

取50只雄性昆明种小鼠，随机分为5组，每组8只。

正常组合和模型对照组：按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水。

曲美他嗪(TMZ)：90mg/kg/天腹腔注射。

左卡尼汀(L-C)：40g/kg/天灌胃。

TMZ+LC：TMZ 90mg/kg/天腹腔注射和L-C 40g/kg/天灌胃。

连续6天给药后，除空白组外，其他组分别腹腔注射氧嗪酸钾盐300mg/kg，2h后取血测尿酸和血清游离脂肪酸(FFA)和ATP含量(检测方法同实施例1)。

7.3实验结果

各组血清尿酸水平、FFA计、ATP值见表7-18：

表7-18各给药组血清尿酸、FFA计、ATP值的比较

#P＜0.05，##P＜0.01VS假手术组；*P＜0.05，**P＜0.01VS模型对照组

与模型组相比，曲美他嗪对血尿酸影响不大，左卡尼汀组对血尿酸具有显著下降作用，合用组更为显著(P＜0.001)；合用组较左卡组更显著地降低血清游离脂肪酸，合用组的血清ATP含量也显著升高。

7.4结论

左卡尼汀组可以显著降低血清尿酸，曲美他嗪+左卡尼汀组下降最明显，表明左卡尼汀曲美他嗪药物组合物有显著降尿酸作用，FFA的改善及ATP含量的升高的结果显示，该药物组合物可以治疗高尿酸血症，并可改善痛风患者糖脂代谢紊乱。。

实施例8左卡尼汀和曲美他嗪药物组合物对慢性肾衰的治疗作用

8.1试验方法

8.1.1动物模型

雄性SD大鼠，180-220g，0.5％腺嘌呤和4％酪蛋白混合饲料喂养2周。

8.1.2动物分组及药物剂量：动物随机分为6组，每组8只。

正常组和模型对照组：按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水。

开同组：1g/kg/天灌胃

开同+曲美他嗪(TMZ)：1g/kg/天+66mg/kg/天腹腔注射。

开同+左卡尼汀(L-C)：1g/kg/天+300mg/kg/天灌胃。

开同+TMZ+LC：1g/kg/天+66mg/kg/天腹腔注射+300mg/kg/天灌胃。

连续给药4周。

8.2指标检测

灌胃结束后，将大鼠放入代谢笼收集24h尿液，眶后静脉丛取血测肾功能。24小时尿总蛋白量(24hTP)及血清BUN、Scr的测定使用罗氏COBAS-II全自动生化检测仪。血清FFA和ATP含量的检测方法同实施例1。

8.3检测结果

结果显示(见表8-19)，与模型组比较，给药组TP、BUN水平下降，并且有统计学意义；Scr水平也有下降趋势，但无统计学意义；TMZ+LC组血清FFA显著下降，ATP含量显著改善。

表8-19各给药组对模型大鼠肾功能及血清FFA和ATP含量的影响

^*P＜0.05，^**P＜0.01VS模型组

8.4结论

本实验显示联合给药组24小时尿蛋白总量、BUN、Scr水平都比模型组低，提示联合给药组大鼠肾脏损害有所缓解；血FFA显著下降，ATP含量的改善提示左卡尼汀+曲美他嗪药物组合可以改善慢性肾衰造成的能量代谢紊乱，提示能辅助治疗慢性肾衰。

实施例9左卡尼汀和曲美他嗪药物组合物对慢性支气管炎的治疗作用

9.1实验方法

动物模型

昆明种健康雄性小白鼠，体质量(20±2)g。自制440mmx400mmx400mm的长方体带玻璃门烟熏箱，将小鼠分别装于铁丝网隔板层内，香烟点燃后，用大头针将其过滤嘴固定于箱底四角放置的四块海绵上，一次4支。烟熏箱顶部留置直径为3cm的圆孔，熏烟烟雾刺激，每次30min，前2周每天2次，后两周每天4次，共计4周。

动物分组和药物剂量

将模型小鼠随机分成5组，每组8只。

正常组和模型对照组：按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水。

曲美他嗪(TMZ)：0.3mg/kg/天灌胃。

左卡尼汀(L-C)：3g/kg/天腹腔注射。

TMZ+LC：0.3mg/kg/天灌胃，3g/kg/天腹腔注射。连续给药4周。

9.2检测方法

各组小鼠最后一次烟熏24小时后，摘眼球取血，以4000rpm/min于4℃冷冻离心10min后，提取血清。按试剂盒说明检测血清和组织的SOD、MDA；并测血清PDH和ATP含量。

9.3实验结果

9.3.1表9-20的实验结果可见，TMZ和L-C均可不同程度地降低血清和肺组织中SOD的浓度，合用后效果尤为显著(P＜0.01)，二种药物具有协同作用。

表9-20各给药组对慢支小鼠血清及肺组织中SOD的影响

^*VS模型组^*＜0.05；^**＜0.01；##模型组VS正常组##p＜0.01，###p＜0.001

9.3.2表9-21的实验结果可见，TMZ可显著降低肺组织中的MDA含量，但无显著意义；复方左卡尼汀注射液可使慢支小鼠肺及血清中MDA有下降趋势，但无显著意义。

表9-21各给药组对慢支小鼠血清及肺组织中MDA的影响

^*VS模型组*^＜0.05；^**＜0.01；^##模型组VS正常组^##p＜0.01，^###p＜0.001

9.3.3表9-22的实验结果可见，药物组合可显著改善PDH活性，使肺组织ATP含量显著上升，从而改善慢性炎症造成的能量代谢紊乱

表9-22各给药组对慢支小鼠血清PDH及肺组织中ATP含量的影响

^*VS模型组^*＜0.05；^**＜0.01；^##模型组VS正常组^##p＜0.01，^###p＜0.001

9.4实验结论：

实验结果显示，左卡尼汀和曲美他嗪药物组合物治疗慢支模型小鼠，抗氧化应激指标SOD显著下降，但对MDA影响不大；可改善慢性炎症造成的PDH活性下降、以及肺组织ATP含量下降等能量代谢障碍，表明左卡尼汀和曲美他嗪药物组合物可以用于治疗慢支和其能量代谢障碍。

实施例10左卡尼汀和曲美他嗪药物组合物对老年痴呆(AD)的治疗作用

10.1实验方法

10.1.1动物模型

雄性wistar大鼠，体重400-500g，禁食8小时后，腹腔注射D-半乳糖48mg/kg，连续6周。

10.1.2分组

将模型大鼠随机分成4组，每组5只：

模型对照组：按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水；

阳性药对照组(盐酸多奈哌齐组)：按1.75mg/kg/天灌胃给予盐酸多奈哌齐；

曲美他嗪组：130mg/kg/天灌胃给予曲美他嗪；

左卡尼汀组：腹腔注射左卡尼汀的药物剂量为900mg/kg；

左卡尼汀+曲美他嗪组：130mg/kg/天灌胃给予曲美他嗪和900mg/kg/天腹腔注射左卡尼汀。

正常组大鼠按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水。连续给药6天。

10.2指标检测

给药7天后进行Morris水迷宫实验，水迷宫包括一个直径为120cm的盛有水的圆形水池，隐藏于水面下1.5cm(直径为10cm)平台，平台置于第三象限中央，并由图象自动采集系统进行自动跟踪分析并记录各种参数。水温控制在24℃，试验人员及周围环境保持恒定，照明四周对称，在水迷宫中加入奶粉使之混浊以掩盖水面下的平台。连续6天测定大鼠入水后的逃避潜伏期(到达平台的时间)，以潜伏期长短评价大鼠的学习能力。6天后撤掉平台，测定大鼠在平台区的逗留时间，以检测大鼠记忆能力。

实验结束处死动物取脑组织，常规方法制备脑组织匀浆，检测ATP含量，方法同实施例1。

10.3结果

10.3.1对逃避潜伏期的影响(表10-23)

模型组比其他组逃避潜伏期都长。第4天开始给药组潜伏期较模型组明显缩短(P＜0.05)，曲美他嗪+左卡尼汀组缩短时间最明显。

表10-23大鼠逃避潜伏期(S)

VS模型组*P＜0.05，**P＜0.01

10.3.2对平台逗留时间的影响(表10-24)

给药组在平台的逗留时间有降低趋势，但无统计学意义

表10-24大鼠平台区逗留时间(S)

VS模型组*P＜0.05，**P＜0.01

10.3.3脑组织ATP含量测定

实验表明药物组合物组可显著升高脑组织ATP含量。见表10-25。

表10-25各给药组对AD大鼠脑组织ATP含量的影响

10.4结论

老年痴呆(AD)模型大鼠逃避潜伏期主要考察学习能力，平台逗留时间主要考察记忆能力。本实验显示左卡尼汀和曲美他嗪药物组合物的给药组潜伏期时间较模型组缩短，表明大鼠认知能力改善，且脑组织ATP含量也显著上升，提示本药物组合可以辅助治疗老年痴呆。

实施例11复方左卡尼汀注射液对冰醋酸致胃溃疡模型大鼠的治疗

11.1实验方法

11.1.1动物模型

造模前24小时禁食不禁水，经腹腔注射10％水合氯醛麻醉大鼠，于剑突下腹中线剪2cm切口，将胃移出腹腔，在胃前壁窦体交接处靠胃窦侧浆膜面，用100％冰醋酸浸泡的直径5mm滤纸压贴1分钟，将胃放入腹腔，逐层缝合。

11.1.2动物分组及药物剂量

将模型大鼠随机分成5组，每组6只。

模型及正常对照组：按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水；

雷尼替丁组：6mg/kg灌胃

雷尼替丁+曲美他嗪组：6mg/kg灌胃+24mg/kg灌胃

雷尼替丁+左卡尼汀组：6mg/kg灌胃+30mg/kg腹腔注射

雷尼替丁+左卡尼汀+曲美他嗪组：6mg/kg灌胃+24mg/kg和30mg/kg腹腔注射

连续给1周。

11.2.指标测定

11.2.1胃液PH值

大鼠用10％水合氯醛麻醉，剑突下剪开腹腔，剥离胃，结扎幽门，于十二指肠和食管处剪断取胃，由贵门挤胃液于试纸上检测PH值

11.2.2胃溃疡指数

按(ulcer index，UI)判定：按Guth标准计算溃疡指数，处死动物，取出胃及十二指肠，沿大弯侧剪开后，展平，按溃疡或糜烂面积大小给予计分：斑点状糜烂为1，糜烂＜1mm为2，糜烂介于1～2mm之间为3，糜烂为2～4mm为4，糜烂＞4mm为5。

11.2.3胃组织FFA和ATP含量

取溃疡组织按常规方法制备组织匀浆，检测FFA和ATP方法同实施例1。

11.3.试验结果

11.3.1各给药组间胃液PH值及胃溃疡指数的变化见表11-26

表11-26各给药组间胃液PH值及胃溃疡指数的变化

VS模型组^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

11.3.2各给药组对溃疡组织FFA及ATP含量的影响，见表11-27

表11-27各给药组对溃疡组织FFA及ATP含量的影响

11.4讨论

实验显示，合用给药组大鼠胃液PH值增加显著，溃疡指数降低，FFA轻度下降，ATP含量有所改善，提示本药物组合能辅助治疗胃溃疡。

实施例12左卡尼汀和曲美他嗪药物组合物对宫内发育迟缓的治疗作用

12.1材料与方法

12.1.1动物分组及药物剂量：

四个月Wistar健康大鼠，体重180g～220g，雌性90只，雄性45只。将雌鼠、雄鼠分批按2∶1比例合笼过夜，次日清晨取雌鼠阴道分泌物镜检，查到精子者为妊娠零日。受孕雌鼠随机分为正常组、模型对照组、曲美他嗪组、左卡尼汀组、曲美他嗪+左卡尼汀组。

正常组合和模型对照组：按10mL/kg/天腹腔注射蒸馏水。

曲美他嗪(TMZ)：0.3mg/kg/天腹腔注射。

左卡尼汀(L-C)：1.8g/kg/天腹腔注射。

TMZ+LC：0.3mg/kg/天腹腔注射和1.8g/kg/天腹腔注射。连续给药4周。

12.1.2动物模型制作

除正常组外，其他各组孕鼠在半封闭的饲养箱中，每日烟熏一支，每次30min。吸烟1小时后腹腔注射白酒5ml/kg。烟酒干预从受孕第1天起持续至第20天。妊娠第十天起，曲美他嗪组、左卡尼汀组以及左卡尼汀+曲美他嗪组按以上剂量进行给药，正常组大鼠按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水直至第20天。

12.2指标检测

妊娠第21天，2％戊巴比妥钠麻醉下(2ml/kg)剖腹取胎。计录活胎数、死胎数，称量活胎体重。

能量代谢指标检测，测定血清FFA，活胚胎鼠肝组织PDH活性和ATP含量方法，参考实施例1。

12.3结果

与模型组相比，给药组死胎率下降，活胎体重增加。特别是曲美他嗪+左卡尼汀组死胎率明显下降，宫内迟缓发生率、或胎体重明显改善。见下表12-28。

表12-28各给药组对宫内发育迟缓胎鼠的影响情况比较

#P＜0.05，##P＜0.01VS正常组；*P＜0.05，**P＜0.01VS模型组与模型组比较，本药物组合能够显著地改善PDH活性及ATP含量，见表12-29

表12-29各给药组对活胚胎肝组织PDH活性及ATP含量的影响

12.3结论

实验结果表明，药物组合组较单方组更能减轻烟酒所致大鼠宫内发育迟缓，大鼠活胚胎肝组织PDH和ATP含量改善，提示左卡尼汀曲美他嗪药物组合物可以促进胎儿宫内生长发育。

实施例13左卡尼汀曲美他嗪药物组合物对II-型糖尿病的治疗作用。

13.1实验分组：随机分成5组，每组8只动物。

正常组和模型组：按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水；

左卡尼汀组：按5.1g/kg/天灌胃给予左卡尼汀；

曲美他嗪组：按0.13g/kg/天灌胃给予曲美他嗪；

左卡尼汀+曲美他嗪组：灌胃给予5.1g/kg/天左卡尼汀和0.13g/kg/天盐酸曲美他嗪。

13.2造模及给药：

将Wistar大鼠随机分组为：正常组、模型组、左卡尼汀组、曲美他嗪组、左卡尼汀+曲美他嗪组。

大鼠以高脂高糖饲料喂养4w，每周测1次空腹血糖。除对照组外，其余3组禁食不禁水24h，以25mg/kg的剂量一次性快速尾静脉注射链脲佐菌素，注射后禁食12h。3d后测定大鼠空腹血糖和尿糖，以血糖≥16.7mmol/L大鼠视为糖尿病模型鼠。

给药组按上述给药方法进行给药，1次/d，连续10周。给药期间，各组均不限制进食及饮水。

13.3指标测定：

实验结束后，禁食12h，用毛细血玻璃管刺内眦静脉窦采血4ml，4℃，3000rpm离心15min，吸取血清，低温冰箱保存，待测空腹血糖(FBG)、游离脂肪酸(FFA)浓度。

处死动物取肝脏组织，ATP含量的测定方法同实施例1。

13.4实验结果：

1)、单用左卡尼汀对2-型糖尿病模型的能量代谢紊乱的作用：可见血糖、FFA均下降，尤以FFA含量下降为明显，ATP含量显著上升。见表13-30。

2)、单用曲美他嗪可见血糖下降，FFA含量无显著性差异；ATP含量上升，。

3)、合用两药后可见血糖明显下降、FFA含量下降，ATP含量也上升。结果见如下表13-30：

表13-30各给药组对模型大鼠FBG、FFA及ATP含量的影响

vs正常组^#P＜0.05，^##P＜0.01；vs模型组*P＜0.05，**P＜0.01

13.5结论：

左卡尼汀组可以显著降低游离脂肪酸含量，升高ATP含量；曲美他嗪组血糖含量下降非常明显，而对游离脂肪酸无作用；两药合用后，血糖含量明显下降，效果优于左卡尼汀组和曲美他嗪组，游离脂肪酸含量也下降，ATP含量也显著升高；实验结果说明两药合用后可显著改善II-型糖尿病的血糖值，同步调节了糖脂代谢、优化了产能，对II-型糖尿病有一定的治疗作用。

实施例14左卡尼汀曲美他嗪药物组合物对肝损伤的治疗作用

14-1实验方法

取雄性SD大鼠，体重为200±20g。

14.1.1分组给药：

正常组和模型组：按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水；

曲美他嗪(TMZ)：0.045mg/kg/天灌胃给药；

左卡尼汀(L-C)：20g/kg/天灌胃给药；

TMZ+L-C药物组合物：0.045mg/kg/天TMZ+20g/kg/天L-C，均灌胃给药。连续给药4周。

末次给药3h后，除正常组外各组动物腹腔注射CCl₄(40mg/kg)。

14.1.2检测指标

腹腔注射CCl₄(40mg/kg)，24h后摘眼球取血，以4000rpm于4℃低温离心10min后，提取血清，按试剂盒说明检测血清中的AST、ALT和FFA含量；取肝组织匀浆，ATP含量检测方法同实施例1。

14.2实验结果

由表14-31的实验结果可见，TMZ和L-C均可不同程度地降低肝损伤模型大鼠血清的AST和ALT，但两药合用效果更为显著，具有协同作用。

表14-31各给药组大鼠血清AST、ALT活性比较

VS正常对照组，#P＜0.05，##P＜0.01；VS模型组，给药组

*P＜0.05，**P＜0.01

由表14-32的实验结果可见，TMZ对游离脂肪酸的降低无显著意义，L-C可明显降低血清的FFA含量和增加ATP含量，两药合用后ATP含量增加显著。

表14-32各给药组大鼠血清FFA及ATP含量比较

VS正常对照组，#P＜0.05，##P＜0.01；VS模型组，给

药组*P＜0.05，**P＜0.01

14.3结论：

TMZ和L-C均可不同程度地降低急性肝损伤大鼠血清的AST和ALT，但两药合用效果更为显著，具有协同作用。在糖脂代谢指标测定结果中可见左卡尼汀组可以显著降低游离脂肪酸含量，升高ATP含量；曲美他嗪组也可升高ATP含量，而对游离脂肪酸没有影响；两药合用后，游离脂肪酸含量显著下降，ATP含量也显著升高；实验结果说明两药合用后可显著降低急性肝损伤大鼠血清的AST和ALT，并调节糖脂代谢、优化产能，对肝损伤有一定的治疗作用。

实施例15左卡尼汀曲美他嗪药物组合对高脂血症大鼠的治疗作用

15.1实验方法

15.1.1动物模型

雄性wister大鼠，体重160±20g。除正常组给予正常饲料外，其余各组给予高脂饲料(基础料80％、猪油18％、胆固醇2％)，同时给药10周。

15.1.2实验分组和药物剂量

正常组和模型组：按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水；

左卡尼汀(L-C)：1.7g/kg/天灌胃；

曲美他嗪(TMZ)：0.066mg/kg/天腹腔注射；

TMZ+LC：0.066mg/kg/天TMZ腹腔注射+1.7g/kg/天LC灌胃。连续给药10周，给药期间，进食及饮水自由。

15.1.3检测方法

实验前禁食不禁水12h，后取血3ml，以4000rpm于4℃低温离心10min后，提取血清，按试剂盒说明检测血清中的TG和FFA含量。取肝组织匀浆，肝组织ATP含量检测方法同实施例1。

15.2结果

表15-33的实验结果可见，TMZ和L-C均可不同程度地降低模型大鼠血清的TG、FFA含量，同时升高ATP含量；但两药合用效果尤为显著。

表15-33左卡尼汀+曲美他嗪药物组合对大鼠高脂血症的治疗作用

*与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

15.3结论

TMZ和L-C均可不同程度地降低高血脂大鼠血清的TG含量，但两药合用效果更为显著。在糖脂代谢指标测定结果中可见左卡尼汀组可以显著降低游离脂肪酸含量，升高ATP含量；曲美他嗪组也可升高ATP含量，而对游离脂肪酸没有影响；两药合用后，游离脂肪酸含量显著下降，ATP含量也显著升高，具有协同作用；实验结果说明两药合用后可显著降低高血脂大鼠血清的TG含量，并调节糖脂代谢、优化产能，对高血脂有一定的治疗作用。

实施例16左卡尼汀曲美他嗪药物组合物对高血压的辅助治疗作用

16.1实验方法：

16.1.1材料和分组：

16.1.1.1动物

SD大鼠，体重(160±20)g，雌雄各半

16.1.1.2分组及药物剂量

将SD大鼠随机分成6组，每组8只。

假手术组对照组和模型组：按5mL/kg/天灌胃给予生理盐水。

卡托普利组：0.01g/kg/天灌胃。

卡托普利+左卡尼汀组：0.01g/kg/天+0.17g/kg/天灌胃。

卡托普利+曲美他嗪组：0.01g/kg/天+0.024g/kg/天灌胃。

卡托普利+左卡尼汀+曲美他嗪组：0.01g/kg/天+0.17g/kg/天+0.024g/kg/天灌胃。

连续给药8周。

16.1.1.3肾性高血压模型的制作及给药：

模型制作

以两肾一夹型法手术造模，空白组除外。各组术前禁食12h，不禁水，3％戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉后，将大鼠仰卧位固定。于腹正中纵行切口，依次暴露肾脏，在腹膜后近主动脉钝性分离左肾动脉，并用内径0.2mm银夹钳夹，右肾动脉不触及。逐层关腹，术后注射青霉素纳盐10万U/只，常规饲养。假手术组行手术而不上银夹，其余处理同造模组。待造模4周后，以尾动脉收缩压较术前升高22.6mmHg以上，超过135mmHg者为造模成功。

16.2指标测定：

16.2.1血压测定：

采用尾动脉波动法：在干燥、通风、安静的环境中将大鼠置25W灯下加温，预热10min使大鼠尾动脉充分扩张，待大鼠短暂躁动停止后，打开二道生理记录仪系统测血压。依照以下时点进行血压测定：造模后(于用药前)、用药后1周、用药后4周、用药后6周、用药后8周，每次于灌胃后1h开始测定，每个时点测3次取平均值。

16.2.2ATP含量检测：

取心尖部约0.2g组织放入液氮冻存，后制备样本，采用ATP检测剂(碧云天公司)测定组织的ATP含量：将ATP检测剂于冰水浴中溶解。取出液氮中的心肌标本，于冰上制备10％心肌匀浆。用虫荧光素酶法检测心肌匀浆中ATP的浓度。

16.2.3游离脂肪酸浓度(FFA)检测：

16.3结果

1)对血压的影响

与模型组比较，卡托普利+左卡尼汀+曲美他嗪组血压有下降更明显趋势，但与卡托普利组比较并无显著意义。见表16-34。

表16-34各给药组对动物血压的影响结果(mHg)

vs假手术组：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

vs模型组：#＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001

vs卡托普利组：▲＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001

2)对FFA及心组织ATP含量的影响

托普利+左卡尼汀+曲美他嗪组的FFA显著低于卡托普利组，心肌组织ATP含量显著高于卡托普利组和模型对照组，表明应用左卡尼汀曲美他嗪药物组合物，可以改善能量代谢紊乱，保护心脏等重要器官。结果见表16-35。

表16-35对血FFA及心组织ATP含量的影响

16.4结论

卡托普利+左卡尼汀曲美他嗪药物组合物的血压比单用卡托普利组的降压效果相比虽不明显，但本药物组合物+卡托普利组的血清FFA，以及心肌组织ATP含量显著上升，说明本药物组合在改善能量代谢方面具有显著作用，可用于纠正高血压代谢紊乱并保护重要器官，预防高血压并发症的发生，辅助治疗高血压。

实施例17左卡尼汀曲美他嗪药物组合物的抗衰老作用

17.1实验方法

取ICR小鼠30只清雌雄各半，随机取6只作为健康组，其余各组每只小鼠每天皮下注射射D2L半乳糖(1000mg/kg)，连续10d，制成衰老小鼠模型，曲美他嗪和左卡尼汀根据临床人用剂量推算出小鼠等效剂量后，把衰老小鼠模型分成左卡尼汀组、曲美他嗪组、左卡尼汀+曲美他嗪复方组、正常对照组和模型对照组共5组。分别为：

正常和模型对照组：按5ml/kg腹腔注射生理盐水。

左卡尼汀(L-C)：0.06g/kg/d腹腔注射。

曲美他嗪(TMZ)：0.132g/kg/d腹腔注射。

左卡尼汀+曲美他嗪(L-C+TMZ)：L-C 0.06g/kg/d腹腔注射+TMZ0.132g/kg/d腹腔注射，联合给药。连续给药连续24天。

17.2检测指标：

17.2.1过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)衰老指标测定

小鼠摘眼球取血，48h内测定血清中过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)含量，方法参照试剂盒说明书进行。过氧化氢酶(CAT)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒(南京建成生物科技公司)。

17.2.2心肌线粒体ATP含量测定方法同实施例1。

17.3实验结果

LC和TMZ组以及LC+TMZ药物组合都可不同程度地降低过氧化氢酶(CAT)的活性，以药物组合最为显著(P＜0.01)，并有协同作用，在对心肌线粒体ATP含量的影响上，LC和药物组合均可显著使心肌线粒体ATP含量显著上升，药物组合更显著(P＜0.01)。见表17-36如下

表17-36各给药组对CAT、MDA及心肌线粒体ATP含量的影响

vs假手术组：#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001

vs模型组：^＊0.05，^＊＊P＜0.01，^＊＊＊P＜0.001

17.4结论

生物体内的抗氧化酶如CAT和MDA的活性是随着年龄的增长而下降的，，这些酶活性的降低导致防御过氧化损伤的能力下降，并加速衰老进程。本试验中药物组合物显著地改善了CAT活性并具有协同作用，也改善了MDA的活性，并且显著改善了心肌线粒体ATP的含量，提示我们左卡尼汀曲美他嗪药物组合物可以延缓衰老的进程，对延长重要器官的寿命具有重要意义。

实施例18左卡尼汀和曲美他嗪药物组合物对获得性免疫力低下的治疗作用

18.1实验方法

取ICR小鼠30只清雌雄各半，随机取6只作为健康组，其余各组每只小鼠腹腔注射环磷酰胺(40mg/Kg，每周2次，共1周)诱导免疫力低下，制成免疫力低下模型。

左卡尼汀和曲美他嗪根据临床人用剂量推算出小鼠等效剂量后，把获得性免疫力低下模型小鼠分成左卡尼汀组、曲美他嗪组、左卡尼汀+曲美他嗪复方组、模型及正常对照共5组。分别为：

左卡尼汀(L-C)：10.2g/kg/d灌胃。

曲美他嗪(TMZ)：0.132g/kg/d腹腔注射。

LC+TMZ：10.2g/kg/d+0.132g/kg/d灌胃+注射联合给药。

正常及模型组：每日给与灌胃10ml/kg蒸馏水。

连续给药连续24天。

18.2检测指标：

18.2.1小鼠免疫器官重量的测定

称小鼠体重，颈椎脱臼处死小鼠，取胸腺、脾脏称其湿重，计算胸腺指数和脾指数。

18.2.2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率的测定

在饲养的第20天无菌注射3％淀粉溶液1ml于小白鼠腹腔内。4d后注射1％鸡红细胞悬液1ml于小白鼠腹腔内，轻揉腹部，使鸡红细胞悬液分散，20～30min后，将小鼠拉颈椎处死，用解剖剪剪开腹腔，用尖吸管吸适量生理盐水(或Hanks液)冲洗腹腔并吸出腹腔液置清洁小试管内，用生理盐水(或Hanks液)调节腹腔内细胞浓度，于载玻片上制成推片，自然干燥。加甲醇固定10min，以Giemsa染液染色10min，用蒸馏水轻轻冲洗吹干，最后镜检。计100个腹腔巨噬细胞中吞有鸡红细胞的吞噬细胞数，计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分率。

18.2.3胸腺组织ATP活性测定，方法同实施例1

18.3实验结果，见表18-37

表18-37各给药组对胸腺和脾指数、吞噬百分率及胸腺组织ATP含量的影响

Vs正常组#P＜0.05，##P＜0.01，vs模型组^＊0.05，^＊＊P＜0.01，^＊＊＊P＜0.001

18.4实验结论

对免疫力低下小鼠使用左卡尼汀和曲美他嗪药物组合物，与单用左卡尼汀或曲美他嗪相比，吞噬百分率显著改善，并有协同作用，对胸腺指数、脾指数、也有改善作用；另外药物组合还显著地提高了胸腺组织的ATP含量，提示本药物组合物对免疫力低下疾病有促进免疫器官功能恢复的作用。

实施例19曲美他嗪左卡尼汀药物组合物对流感的辅助治疗作用

19.1实验方法

19.1.1细胞与病毒：流感病毒鼠肺适应株(FM1)购自卫生部药品生物制品检定所；

19.1.2动物BALB/C小鼠：12～15g幼龄鼠，由中科院实验动物中心提供，II级合格动物，

19.1.3造模方法：实验小鼠经鼻腔感染FM1后，第2天开始按以下分组及剂量进行给药，连续注射药物6d，共观察2周。

19.1.4动物分组及药物剂量：随机分为6组，每组8只动物

病毒唑组：腹腔注射1g/kg/日

病毒唑+左卡尼汀：腹腔注射1g/kg+腹腔注射3.6g/kg

病毒唑+曲美他嗪：腹腔注射1g/kg+灌胃给药曲美他嗪0.6mg/kg

病毒唑+左卡尼汀+曲美他嗪：腹腔注射1g/kg+腹腔注射3.6g/kg+灌胃0.6mg/kg；1次/日

19.1.5观察指标：记录小鼠的生存天数及测定肺指数；肺组织PDH活性及FFA浓度，常规方法取得肺组织匀浆，检测方法见实施例1。

19.2实验结果

19.2.1与病毒唑组比较，药物组合物组动物的死亡率及平均生存时间都较显著改善。见表19-38

表19-38各给药组死亡率及存活时间比较

vs正常组：#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001

vs模型组：*＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

vs病毒唑组：^▲＜0.05，^▲▲P＜0.01，^▲▲▲P＜0.001

19.2.2肺组织PDH活性及FFA浓度

与病毒唑组比较，药物组合物组动物的肺组织PDH活性显著提高，FFA浓度显著下降。见表19-39

表19-39各给药组肺组织PDH活性及FFA浓度的比较

vs正常组：#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001

vs模型组：*＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

vs病毒唑组：^▲＜0.05，^▲▲P＜0.01，^▲▲▲P＜0.001

19.3实验结论

模型组动物的PDH活性下降及FFA浓度的升高提示病毒感染宿主时，病毒的复制会导致宿主细胞的代谢紊乱。本药物组合物，在和抗病毒药物联合应用时，可以显著降低模型动物的死亡率，可以延长存活时间并有协同作用；并且能够显著提高肺组织PDH活性和降低FFA浓度的结果，提示在病毒感染时纠正能量代谢紊乱，将能显著提高抗病毒药物的疗效。

实施例20左卡尼汀和曲美他嗪药物组合物对甲状腺功能亢进治疗的作用

20.1实验方法

30只Wistar大鼠雌雄各半，90～100日龄，体重190～210g，随机取6只作为健康组，其余各组每只大鼠服甲状腺片8mg/d，腹腔注射生理盐水0.5ml/d，连续30d，大鼠出现甲亢体征，制成甲状腺功能亢进模型。

左卡尼汀和曲美他嗪是根据临床人用剂量推算出小鼠等效剂量后，把甲状腺功能亢进模型大鼠随机分成左卡尼汀组、曲美他嗪组、左卡尼汀+曲美他嗪复方组、正常对照组及模型对照组共5组，分别为：

甲硫米唑：6mg/kg灌胃。

甲硫米唑+左卡尼汀(L-C)：6mg/kg灌胃+0.3g/kg/d腹腔注射，1次/日。

甲硫米唑+曲美他嗪(TMZ)：6mg/kg灌胃+0.066g/kg/d灌胃口服，1次/日。

甲硫米唑+曲美他嗪+左卡尼汀：6mg/kg灌胃+0.3g/kg/d腹腔注射+0.066g/kg/d灌胃，联合给药，1次/日。

正常对照及模型对照组：给10ml/kg蒸馏水灌胃，1次/日。

连续给药4周。

20.2检测指标：

20.2.1三碘甲腺原氨酸(T₃)和甲状腺素(T₄)测定

实验结束，行眶后静脉丛采血，采用放射免疫法，；严格按T3、T4放免试剂盒，天津德普生物技术和医学产品有限公司产品说明操作。

20.2.2肝组织糖原及ATP含量测定

取各组动物肝脏，按常规方法取得匀浆，测定糖原及ATP含量，检测方法同实施例1。

20.2.3血浆游离脂肪酸浓度测定(同实施例1)

实验结束后即刻抽取动脉血3ml，离心后取上清液按试剂盒说明书操作测定FFA。

20.3实验结果

实验结果显示，和甲硫米唑组比较，本药物组合物+甲硫米唑可显著降低血T3和T4的含量；肝糖原回升，ATP含量也显著改善。见表20-40如下

表20-40各给药组队模型大鼠T3、T4及肝组织糖原及ATP含量的影响

vs正常组：#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001

vs模型组：*＜0.05，^＊＊P＜0.01，^＊＊＊P＜0.001

vs甲硫米唑组：^▲＜0.05，^▲▲P＜0.01，^▲▲▲P＜0.001

20.4实验结论

与甲硫米唑合用时本药物组合虽然对T3、T4分泌的影响不显著，但可以显著提高肝糖原的含量并有协同作用，也可使提高肝组织ATP含量，改善机体细胞的内环境，表明左卡尼汀和曲美他嗪药物组合物对甲状腺功能亢进的治疗具有促进作用。

实施例21左卡尼汀曲美他嗪药物组合物对创伤模型伤口愈合的作用

21.1试验方法：

21.1.1动物模型

健康SD大鼠，体重(200±20)g，雌雄不限。乙醚麻醉后，背部去毛，面积为2cm×2cm，消毒后切割1个1cm×1cm正方形创面，形成创伤动物模型。

21.1.2动物分组

实验大鼠随机分为5组，每组动物8只。

正常对照组和模型对照组：按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水；

曲美他嗪组：按0.3mg/kg/天腹腔注射；

左卡尼汀组：按3.0g/kg/天腹腔注射；

左卡尼汀+曲美他嗪组组：按0.3mg/kg/天腹腔注射曲美他嗪和3.0g/kg/天腹腔注射左卡尼汀，

以上各组连续给药4周。

21.2检测指标

21.2.1伤口愈合时间，在给药后观察伤口是否愈合。

21.2.2血清FFA浓度：连续给药2周后，大鼠眶后静脉丛取血，离心后取上清液，按FFA试剂盒说明书检测血清FFA含量。

21.3实验结果

21.3.1对伤口愈合时间的影响见表21-41

与模型组比较，各用药组愈合时间均下降，曲美他嗪+左卡尼汀组下降最多。

表21-41各给药组对伤口愈合时间的影响

vs假手术组：#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001

vs模型组：^＊0.05，^＊＊P＜0.01，^＊＊＊P＜0.001

21.3.2对血清FFA含量的影响(表21-42)

与模型组比较，左卡尼汀组、曲美他嗪+左卡尼汀组血清FFA浓度显著下降。

表21-42各给药组对血清F F A浓度的影响

vs假手术组：#P＜0.05，###＜0.01，###P＜0.001

vs模型组：^＊0.05，^＊＊P＜0.01，^＊＊＊P＜0.001

21.4结论

曲美他嗪左卡尼汀药物组合组的创面愈合时间较模型组和单用组相比显著减少，并有协同作用，也可以减少血清游离脂肪酸的浓度、改善细胞内环境，提示曲美他嗪左卡尼汀药物组合组对创口的愈合有促进作用。

实施例22左卡尼汀曲美他嗪组合物对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)小鼠的辅助治疗作用

22.1实验方法

22.1.1动物分组

C57BL/6J雄性小鼠，10周龄，体重20±2g。随机分成6组：正常组、EAMG模型组、EAMG+左卡尼汀组、EAMG+曲美他嗪组、EAMG+左卡尼汀组+曲美他嗪组。

22.1.2动物模型制备

预先将完全弗氏佐剂(CFA)与磷酸盐缓冲液(PBS)或电鳗乙酰胆碱受体(TAChR)以1∶1体积比充分混匀，对照组皮下注射PBS/CFA混合物，0.3ml/只，实验组皮下注射TAChR/CFA混合物，0.3ml(含0.16mg TAChR)/只，注射部位均为背部4个点，尾根部1个点，第30、50天时加强免疫，第70天时作模型评价。

佐剂对照组皮下注射PBS+CFA混合物，200μl/只，EAMG模型对照组皮下注射TAChR+CFA混合物，200μl(含20μg TAChR)/只，注射部位均为背部4个点，尾根部1个点。连续注射70天。

22.1.3各组给药

前三组每日0.9％氯化钠溶液0.2ml/只灌胃，后三组分别灌胃给予40g/kg/天左卡尼汀、腹腔注射曲美他嗪0.048g/kg/天、灌胃给予40g/kg/天左卡尼汀、腹腔注射曲美他嗪0.048g/kg/天，均给药4周。

22.1.4检测指标

22.1.4.1行为学评分

按Lennon等的分级法将肌无力症状严重程度分为4级：0，没有肯定的无力表现。1+，撕咬无力，四肢力量较差，在光滑地面上前肢打滑，活动减少且易疲劳；2+，明显无力，休息时身体呈隆起姿势，头尾下垂，大腿外展，前肢趾弯曲，动作笨拙，行走不稳；3+，严重无力表现，无撕咬动作，肌肉震颤，呼吸困难，濒死或死亡。

22.1.4.2游离脂肪酸

实验结束时，眼眶取血，离心、分离取上清，检测血清FFA，方法参见上述实施例。

22.2结果

22.2.1各组小鼠临床评分见表22-43

表22-43各组小鼠临床评分

*P＜0.05，**P＜0.01VS EAMG模型组；#P＜0.05，##P＜0.01VS正常组

由表22-43可知，正常组、佐剂对照组小鼠肌肉基本没有出现无力症状；与正常组比，除佐剂组外，其他各组均有明显的肌无力症状；与EAMG模型组相比，各给药组评分均下降，EAMG+左卡尼汀组+曲美他嗪组下降最显著(P＜0.01)。

22.2.2血清FFA浓度见表22-44

表22-44血清FFA浓度

组别	血清FFA浓度(c/μmol/L)
		正常组	200.32±19.58
佐剂对照组	206.96±15.26^**
		EAMG模型组	310.26±20.16##
EAMG+左卡尼汀组	276.35±19.64^*##
		EAMG+曲美他嗪组	388.10±26.31^*##
EAMG+左卡尼汀组+曲美他嗪组	292.62±23.56^**##

*P＜0.05，**P＜0.01VS EAMG模型组；#P＜0.05，##P＜0.01VS正常组

由上表可知，与正常组相比，除佐剂组外，其他各组血清FFA浓度均显著下降；与EAMG模型组相比，各给药组FFA浓度均下降，EAMG+左卡尼汀组+曲美他嗪组下降最显著(P＜0.01)。

实施例23左卡尼汀曲美他嗪组合物对脑梗塞模型大鼠的治疗作用

23.1试验方法

23.1.1动物模型的制备

动物模型制备参照Nagasaway与Zea Longa等线栓法阻断大脑中动脉模型(MCAO)：大鼠水合氯醛麻醉后仰卧位固定于手术操作台上，颈正中切口，钝性分离左侧颈总动脉及其分支颈外动脉，动脉夹夹闭左颈总动脉远心段，再结扎颈外动脉主干一段，然后在颈总动脉近心段上剪一小口，插入尼龙线(直径0.25mm)，松开动脉夹，尼龙线经过颈总动脉分叉处进入颈内动脉，入脑中动脉处，插入的深度为19.5±0.5mm；而假手术组仅插入9±0.2mm。

23.1.2动物分组

取健康SD大鼠，雄性，体重250±20g，随机分成5组，每组8只；假手术组和模型对照组：按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水；曲美他嗪组：0.045g/kg/天灌胃给予曲美他嗪；左卡尼汀组：1.8g/kg/天腹腔注射左卡尼汀；左卡尼汀+曲美他嗪组：0.045g/kg/天灌胃给予曲美他嗪和1.8g/kg/天腹腔注射左卡尼汀。连续给药4周。

23.2指标测定

23.2.1脑梗死区质量百分比

将各只大鼠中部脑片迅速置于10g/L红四氮唑中，避光，37℃温孵30min，其间每隔10mi n摇动一次，染色后以40g/L多聚甲醛固定。染色结果：正常组织呈红色，梗塞组织呈白色。将全脑片称重后，剪下白色梗死区，称质量，计算脑梗死区质量百分比。

23.2.2脑组织FFA测定

取脑组织约2g，用生理盐水冼净，以生理盐水制成10％匀浆制备样本，测定方法同实施例1.

23.3实验结果

23.3.1梗死面积

表23-45各给药组脑组织梗死面积比较

组别	梗死面积(％)
		假手术组	0
模型组	23.5±3.4##
		左卡尼汀组	19.4±3.9^*
曲美他嗪组	17.0±4.5^**
		左卡尼汀组+曲美他嗪组	15.4±3.7^***

#P＜0.05，##P＜0.01VS假手术组；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001VS模型对照组

由表23-45可知，与模型组相比，各组梗死面积均显著下降，左卡尼汀+曲美他嗪组下降最显著，P＜0.01。

23.3.2脑组织FFA的改变情况

表23-46各给药组脑组织的FFA含量变化比较

组别	血清FFA浓度(μmol/L)
		假手术组	236.03±16.89
模型组	359.73±26.13##
		左卡尼汀组	298.57±17.23^*
曲美他嗪组	350.18±29.03
		左卡尼汀组+曲美他嗪组	260.36±23.28^***

由表23-46可见，各给药组脑组织游离脂肪酸均可见有显著下降，尤其以复方组为显著，提示复方左卡尼汀+盐酸曲美他嗪药物组合可以降低脑梗塞组织FFA浓度。

23.4结论：

本实验结果提示我们，复方左卡尼汀+盐酸曲美他嗪可以显著缩小脑梗死面积，并减轻缺氧造成的FFA升高对脑组织的损伤。

实施例24左卡尼汀曲美他嗪组合物对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的治疗作用

24.1实验方法

24.1.1分组及给药

健康雄性Wistar大鼠，240-270g，随机分为5组：假手术组、模型组、左卡尼汀组、曲美他嗪组、左卡尼汀+曲美他嗪组。前2组按10mL/kg/天灌胃给予蒸馏水；后3组分别灌胃给予0.17g/kg/天左卡尼汀、灌胃给予0.066g/kg/天曲美他嗪、灌胃给予0.17g/kg/天左卡尼汀和灌胃给予0.066g/kg/天曲美他嗪，均预防给药4周。

24.1.2动物分组及模型制备

各组动物麻醉后开腹，假手术组分离左、右肾动脉但不夹闭，45min后缝合切口，1小时后；模型组和各给药组分离左、右肾动脉并夹闭，45min后松开动脉夹行再灌注并缝合切口，再灌注1小时，断头处死，取器官。

24.2检测指标

24.2.1肾功能

再灌注结束后，眼眶取血，离心，分离上清，按“大鼠肾衰模型”测定血清尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)

24.2.2游离脂肪酸

检测血清FFA，方法参见上述实施例1。

24.2.3肾脏ATP

处死大鼠后，取适量肾脏组织并用生理盐水制成10％肾脏匀浆，测ATP含量。方法参见实施例1。

24.3结果

24.3.1各组小鼠肾功能指标

表24-47各组小鼠肾功能指标

*P＜0.05，**P＜0.01VS模型组；#P＜0.05，##P＜0.01VS假手术组

由表24-47可知，与模型组相比，各组肾功能均有所改善，其中左卡尼汀+曲美他嗪组肾功能改善最显著。

24.3.2血清FFA浓度

表24-48血清FFA浓度

*P＜0.05，**P＜0.01VS模型组；#P＜0.05，##P＜0.01VS假手术组

由表24-48可知，与假手术组相比，各组血清FFA浓度均显著下降；与模型组相比，各给药组FFA浓度均下降，左卡尼汀+曲美他嗪组下降最显著(P＜0.01)；肾组织ATP含量单药组与复方组均有显著改善，以复方组最为显著(P＜0.01)。

24.4结论

本实验结果提示我们，在肾缺血时及时进行改善能量代谢药物干预对改善肾功能具有重要意义。

实施例25左卡尼汀曲美他嗪组合物对大鼠胃缺血再灌注损伤的防治作用

25.1实验方法

25.1.1分组及给药

健康雄性SD大鼠，250±20g，雌雄各半，随机分为5组，每组10只。分为：假手术组、缺血一再灌注组、左卡尼汀组、曲美他嗪组、左卡尼汀+曲美他嗪组。假手术组、缺血一再灌注组按10mL/kg/d静脉注射生理盐水；灌胃左卡尼汀组：灌胃给予5.1g/kg/d左卡尼汀；曲美他嗪组：腹腔注射0.0003g/kg/d曲美他嗪；左卡尼汀+曲美他嗪组：分别灌胃给予5.1g/kg/d左卡尼汀和腹腔注射0.0003g/kg/d曲美他嗪。

25.1.2动物分组及模型制备

所有动物实验前禁食24h、自由饮水，腹腔注射3％戊巴比妥钠40mg/kg麻醉。仰卧固定于操作台上，暴露右侧颈内静脉，行颈内静脉穿刺置管用于输液。动物开腹，分离并夹闭腹腔动脉30min，去除动脉夹恢复血流。于再灌注后的1h处死动物，快速取胃。假手术(S组)仅分离腹腔动脉，不进行夹闭。各给药组于术前一周开始按上述方法给药，缺血一再灌注组、假手术组给与等量生理盐水。

25.2检测指标

25.2.1胃粘膜损伤指数

按Guth标准计算溃疡指数。处死动物，取出胃及十二指肠，沿大弯侧剪开后展平。以腺胃区局限于胃上皮的点状糜烂、溃疡、出血灶的长度累积计分：按溃疡或糜烂面积大小给予计分：正常为0分，斑点状糜烂为1，糜烂＜1mm为2，糜烂介于1～2mm之间为3，糜烂为2～4mm为4，糜烂＞4mm为5。

25.2.2血清游离脂肪酸浓度

实验结束后眼眶取血，检测血清FFA，方法参见上述实施例1。

25.2.3胃组织ATP含量

处死大鼠后，取适量胃组织，用生理盐水制成匀浆，测ATP含量。方法参见实施例1。

25.3结果

25.3.1各组大鼠胃黏膜损伤指数

表25-49各组大鼠胃黏膜损伤指数

组别	胃粘膜损伤指数
		假手术组	0.21±0.02
模型组	4.45±0.8##
		左卡尼汀组	3.71±0.31^*
曲美他嗪组	4.05±0.61
		左卡尼汀组+曲美他嗪组	3.21±0.23^**

#P＜0.05，##P＜0.01VS假手术组；*P＜0.05，**P＜0.01VS模型组

由表25-49可知，与模型组相比，各给药组胃黏膜损伤指数均下降，其中左卡尼汀+曲美他嗪组改善最显著(P＜0.01)。

25.3.2各组血清FFA浓度与胃组织ATP含量比较

表25-50各组血清FFA浓度与胃组织ATP含量比较

#P＜0.05，##P＜0.01VS假手术组；*P＜0.05，**P＜0.01VS模型组；

由表25-50可知，与模型组相比，各给药组FFA浓度均下降，左卡尼汀+曲美他嗪组下降最显著(P＜0.01)；各给药组ATP浓度均有所升高，左卡尼汀+曲美他嗪组上升最显著(P＜0.01)。

25.4结论

左卡尼汀+曲美他嗪组在大鼠胃缺血再灌注损伤的防治作用中，可显著降低胃黏膜损伤P＜0.01)，显著降低血清FFA浓度(P＜0.01)，显著升高胃组织ATP含量(P＜0.01)。

实施例26左卡尼汀曲美他嗪组合物对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的防治作用

26.1实验方法

26.1.1分组及给药

健康雄性SD大鼠，250±20g，雌雄各半。随机分为5组，每组24只。分别为：假手术组、缺血再灌注组、左卡尼汀组、曲美他嗪组、左卡尼汀+曲美他嗪组。假手术组、模型组按10mL/kg尾静脉给予生理盐水；左卡尼汀组：腹腔注射0.3g/kg/天左卡尼汀；曲美他嗪组：灌胃给予0.13g/kg/天曲美他嗪；左卡尼汀+曲美他嗪组：腹腔注射0.3g/kg/天左卡尼汀+灌胃给予0.13g/kg/天曲美他嗪。

26.1.2动物分组及模型制备

各给药组按上述方式进行给药一周后造模，术前实验动物禁食12h，自由进水，术前进行最后一次给药。用氯胺酮(50mg/kg)腹腔注射进行麻醉，腹正中切口，分离胃脾韧带，结扎脾门血管，夹持脾脏，将胃翻向大鼠右侧，暴露膈肌与左肾动脉之间的腹主动脉，游离腹主动脉及脾动脉，用无创动脉夹夹闭脾动脉，造成胰腺体尾缺血模型，30min后松开动脉夹进行再灌注。假手术组以相同的手术方法切开暴露腹主动脉及脾动脉.但不夹闭血管。

26.2检测指标

26.2.1血清游离脂肪酸

实验结束后眼眶取血，检测血清FFA，方法参见上述实施例1。

26.2.2血清TNF-α

用TNF-α免疫试剂盒测定血清TNF-α含量。

26.2.3胰腺组织ATP含量

处死大鼠后，取适量胰腺组织，用生理盐水制成匀浆，测ATP含量。方法参见实施例1。

26.3结果

26.3.1血清TNF-α浓度

表26-51血清TNF-α浓度

组别	TNF-α浓度(pg/ml)
		假手术组	10.19±1.22
模型组	27.21±2.21##
		左卡尼汀组	23.38±1.32^*
曲美他嗪组	24.66±1.21^*
		左卡尼汀组+曲美他嗪组	18.99±1.28^**

#P＜0.05，##P＜0.01VS假手术组；*P＜0.05，**P＜0.01VS模型组

由表26-51可知，与模型组相比，各给药组TNF-α浓度均有所下降，左卡尼汀+曲美他嗪组下降最明显(P＜0.01)。

26.3.2血清FFA浓度及胰腺组织ATP含量

表26-52血清FFA浓度及胰腺组织ATP含量

*P＜0.05，**P＜0.01VS假手术组；#P＜0.05，##P＜0.01VS模型组

由表26-52可知，与模型组相比，各给药组FFA浓度均下降，左卡尼汀+曲美他嗪组下降最显著(P＜0.01)；与模型组相比，各给药组ATP浓度均有所升高，左卡尼汀+曲美他嗪组上升最显著(P＜0.01)。

26.4结论

左卡尼汀+曲美他嗪组在大鼠胰腺缺血再灌注损伤的防治作用中，显著降低血清TNF-α浓度；可显著降低血清FFA浓度(P＜0.01)，(P＜0.01)，显著升高胰腺组织ATP含量(P＜0.01)。

实施例27左卡尼汀：盐酸曲美他嗪不同剂量配比的组合药物制剂。

本发明的含左卡尼汀和盐酸曲美他嗪的组合药物可以按如下数据配制各种含不同左卡尼汀和盐酸曲美他嗪剂量配比的组合药物制剂：

左卡尼汀10mg-600mg/kg/日；盐酸曲美他嗪0.01mg-3mg/kg/日

确定比例范围为30g∶1mg至0.5g∶200mg

实施例27.1：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)口服溶液

处方：左卡尼汀 1000g

盐酸曲美他嗪 0.016g

蒸馏水加至10000ml

工艺：取左卡尼汀、盐酸曲美他嗪，加蒸馏水3000ml溶解后，加蒸馏水至10000ml即得。

1∶0.00004 1000g∶40mg

实施例27.2：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)口服溶液

处方：左卡尼汀 1000g

盐酸曲美他嗪 0.04g

蒸馏水加至10000ml

工艺：取左卡尼汀、盐酸曲美他嗪，加蒸馏水3000ml溶解后，加蒸馏水至10000ml 即得。

1∶0.00005 1000g∶50mg

实施例27.3：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)口服溶液

处方：左卡尼汀 1000g

盐酸曲美他嗪 0.05g

蒸馏水加至10000ml

1∶0.0001 1000g∶100mg

实施例27.4：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)糖浆

处方：

工艺：取左卡尼汀和盐酸曲美他嗪溶于蒸馏水中，加单糖浆至全量，即得。

1∶0.0005 1000g∶500mg

实施例27.5：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)乳剂

处方：

工艺：将阿拉伯胶与左卡尼汀、盐酸曲美他嗪研匀，一次加入250ml蒸馏水，用力沿一个方向研磨成初乳，加糖精钠水溶液，挥发杏仁油，尼泊金乙酯醇液，再缓缓加入西黄耆胶胶浆，加蒸馏水至全量，搅匀，即得。

1∶0.002 1000g∶2g

实施例27.6：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)注射液

处方：

工艺：在制备容器中，加处方量80％的注射用水，加左卡尼汀、盐酸曲美他嗪溶解后，分次缓缓加入碳酸氢钠，搅拌至完全溶解，加入预备配置好的依地酸二钠和盐酸溶液，搅拌均匀，调节药液PH6.0～6.2，注射用水至全量，再加入0.1％活性炭脱色，用垂熔玻璃虑器与膜滤器过滤，并在氮气气流下灌封，最后于100℃流通蒸汽15min灭菌。

1∶0.005 1000g∶5g

实施例27.7：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)注射液

处方：

工艺：在制备容器中，加处方量80％的注射用水，加左卡尼汀、盐酸曲美他嗪溶解后，分次缓缓加入碳酸氢钠，搅拌至完全溶解，加入预备配置好的依地酸二钠和盐酸溶液，搅拌均匀，调节药液PH6.0～6.2，注射用水至全量，再加入活性炭脱色，过滤、灌封、灭菌，而得。

1∶0.005 1000g∶5g

实施例27.8：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)注射液

处方：

1∶0.005 1000g∶5g

实施例27.9：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)注射液

处方：

1∶0.005 1000g∶5g

实施例27.10：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)输液

处方：

工艺：取约8000ml热注射用水，按处方量投入左卡尼汀、盐酸曲美他嗪，搅拌使全溶，加抗氧剂，并用10％盐酸调PH至6.0左右，加注射用水适量，再加入0.15％活性炭脱色，过滤至澄明，灌封于100ml输液瓶内，充氮气，加塞，轧盖，于100℃灭菌30min即可。

1∶0.001 1000g∶1g

实施例27.11：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)输液

处方：

1∶0.002 1000g∶2g

实施例27.12：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)输液

处方：

1∶0.003 1000g∶3g

实施例27.13：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)输液

处方：

1∶0.004 1000g∶4g

实施例27.14：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)输液

处方：

1∶0.01 1000g∶10g

实施例27.15：注射用复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)无菌冻干制剂

处方：

工艺：将上述各成分用适量注射水溶解后，无菌过滤，安装于安瓿中，冷冻干燥后封口，漏气检查即得。

1∶0.005 1000g∶5g

实施例27.16：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)颗粒剂

处方：

工艺：将左卡尼汀、盐酸曲美他嗪过80目筛，与乳糖、蔗糖混匀，加含柠檬黄的PVP K 30浆制成软材，用14目筛制粒后，置70℃～80℃干燥后于12目筛整粒，加入交联PVP和硬脂酸混匀后，装1000袋即可。

1∶0.006 1000g∶6g

实施例27.17：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)颗粒剂

处方：

工艺：将左卡尼汀、盐酸曲美他嗪过80目筛，与乳糖、蔗糖混匀，加含柠檬黄的PVP K30浆制成软材，用14目筛制粒后，置70℃～80℃干燥后于12目筛整粒，加入交联PVP和硬脂酸混匀后，装1000袋即可。

1∶0.007 1000g∶7g

实施例27.18：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)颗粒剂

处方：

工艺：将左卡尼汀、盐酸曲美他嗪过80筛，与乳糖、蔗糖混匀，加含柠檬黄的PVP K 30浆制成软材，用14筛制粒后，置70℃～80℃干燥后于12目筛整粒，加入交联PVP和硬脂酸混匀后，装1000袋即可。

1∶0.007 1000g∶7g

1∶0.008 1000g∶8g

实施例27.19：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)颗粒剂

处方：

1∶0.009 1000g∶9g

实施例27.20：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)颗粒剂

处方：

1∶0.001 1000g∶1g

实施例27.21：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)片

处方：

工艺：将左卡尼汀、盐酸曲美他嗪过80目筛，与淀粉乳糖混匀，加淀粉浆制成软材，用14目筛制粒后，置70℃～80℃干燥后于12目筛整粒，加入干淀粉及硬脂酸镁混匀后，压片，即得。

1∶0.009 1000g∶9g

实施例27.22：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)片

处方：

1∶0.007 1000g∶7g

实施例27.23：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)片

处方：

1∶0.005 1000g∶5g

实施例27.24：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)片

处方：

1∶0.1 1000g∶100g

实施例27.25：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)缓释片

处方：

工艺：将左卡尼汀、盐酸曲美他嗪与HPMC乳糖混匀，枸橼酸溶于乙醇中作润湿剂制成软材，制粒，干燥，整粒，加硬脂酸镁混匀，压片即得。

1∶0.05 1000g∶50g

实施例27.26：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)胶丸

处方：

工艺：取左卡尼汀和盐酸曲美他嗪，加鱼肝油或精炼食用植物油(在0℃左右脱去固体脂肪)，溶解，并调整浓度至每丸含维生素左卡尼汀应为标示量的90％～120％，含维生素D应为标示量的85％以上，作为药液待用；另取甘油与水加热至70℃～80℃，加入明胶，搅拌溶化，保温1～2小时，除去上浮的泡沫，过滤，加入滴丸机滴制，以液体石蜡为冷却液，收集冷凝的胶丸，用纱布拭去黏附的冷却液，在室温下吹冷风4小时，放于25～35℃下烘4小时，再经石油醚洗涤两次(每次3～5min)，除去胶丸外层液体石蜡，再用95％乙醇洗涤一次，最后在30～35℃烘干约2小时，筛选，质检，包装，即得。

1∶0.02 1000g∶20g

实施例27.27：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)栓

处方：

工艺：取左卡尼汀、盐酸曲美他嗪加乙醇煮沸溶解，加入羟苯乙酯搅拌溶解，再加适量甘油搅匀，缓缓加入明胶甘油基质中，保温待用。加入聚山梨酯，搅拌均匀后，缓缓搅拌下加至上述保温基质中，充分搅拌，保温55℃，灌模冷却即得。

1∶0.1 1000g∶100g

实施例27.28：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)栓

处方：

1∶0.2 1000g∶200g

实施例27.29：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)栓

处方：

1∶0.4 1000g∶400g

实施例27.30：复方(左卡尼汀+盐酸曲美他嗪)栓

处方：

实施例28：左卡尼汀制剂与盐酸曲美他嗪制剂的组合包装

分别制备或者购买左卡尼汀制剂和盐酸曲美他嗪制剂，如表28-53所示

表28-53不同规格的左卡尼汀制剂和盐酸曲美他嗪制剂

左卡尼汀制剂	盐酸曲美他嗪制剂
		注射液0.5g/2.0ml	盐酸曲美他嗪片2mg/片
注射液1g/5ml	盐酸曲美他嗪片3mg/片
		注射液2g/5ml	盐酸曲美他嗪包衣片20mg/片
口服片0.25g/片	盐酸曲美他嗪缓释片35mg/片

口服片0.333g/片	盐酸曲美他嗪注射液2ml∶4mg
		口服片0.5g/片
口服片1g/片
		口服液2.5ml∶0.25g
口服液5ml∶0.5g
		口服液10ml∶1g
口服液50ml∶5g
		口服液100ml∶10g
口服液500ml∶50g。

将左卡尼汀制剂中的任一种制剂如注射液0.5g与盐酸曲美他嗪的5种制剂中的任一种制剂分别进行组合包装，共计可以获得65类包装组合。本次实验仅按照1∶1的数量进行组合。事实上，每种组合中两种制剂的数量可以按照临床需要进行确定。

Claims

1.含有a)促进脂肪酸氧化的药物和b)促进葡萄糖氧化的药物的药物组合物在制备用于预防或治疗由能量代谢异常引起的疾病的药物中的用途。

2.含有a)促进脂肪酸氧化的药物和b)促进葡萄糖氧化的药物的药物组合物在制备用于预防或治疗由脂肪酸和葡萄糖代谢失衡引起的疾病的药物中的用途。

3.含有a)促进脂肪酸氧化的药物和b)促进葡萄糖氧化的药物的药物组合物在制备用于预防或治疗由于线粒体功能障碍引起的疾病的药物中的用途。

4.含有a)促进脂肪酸氧化的药物和b)促进葡萄糖氧化的药物的药物组合物在制备防治存在能量代谢异常疾病的药物中的用途，其特征是用于改善单纯促进葡萄糖代谢而抑制脂肪酸氧化药物的缺陷的应用，用于改善其供能不足、游离脂肪酸和/或酸性代谢产物积聚对细胞线粒体功能损害等副作用。

5.权利要求1-4任一项的用途，其中a)促进脂肪酸氧化的药物选自左卡尼汀或其衍生物、PPAR-a激动剂、脂联素、双胍类降糖药、噻唑烷二酮类、AMPK激动剂或其盐，b)促进葡萄糖氧化的药物选自曲美他嗪、雷诺嗪、葡萄糖氧化限速酶的激动剂或其盐。

6.权利要求5中左卡尼汀或其衍生物选自左卡尼汀、乙酰左卡尼汀、丙酰左卡尼汀和它们可药用的盐。

7.权利要求5的用途，其中PPAR-a激动剂包含苯氧酸类降脂药如氯贝丁酯、非贝特诺、环丙贝特、苯扎贝特或其盐。

8.权利要求5的用途，其中双胍类降糖药包含二甲双胍、苯乙双胍或其盐，噻唑烷二酮类包含罗格列酮或其盐，AMPK激动剂包含5-氨基-4-咪唑甲酰胺核苷酸(AICAR)或其盐。

9.权利要求5的用途，其中葡萄糖氧化限速酶的激动剂包含1，6二磷酸果糖、二氯乙酸二异丙胺、AMP、ADP、镁离子、钙离子、Actovegin或其盐。

10.权利要求1-4任一项的用途，其中所述药物组合物含有：a)左卡尼汀或其衍生物，和b)曲美他嗪或其可药用盐。

11.权利要求10中a)左卡尼汀或其衍生物和b)曲美他嗪的可药用的盐包括它们与盐酸、溴氢酸、碘氢酸、硫酸、硝酸、磷酸、乙酸、马来酸、富马酸、枸缘酸、柠檬酸、草酸、琥珀酸、酒石酸、苹果酸、扁桃酸、三氟乙酸、泛酸、甲磺酸和对甲苯磺酸形成的盐。

12.权利要求1-4任一项的用途，其特征在于其中所述的药物组合物中，a)左卡尼汀或其衍生物和b)曲美他嗪或其可药用的盐的重量比为1∶0.000015-1∶4.3。

13.权利要求1-4任一项的用途，其特征在于其中所述药物组合物包含a)左卡尼汀和b)曲美他嗪盐酸盐，左卡尼汀和曲美他嗪盐酸盐的重量比为1∶0.000015-1∶0.005。

14.权利要求1-4任一项的用途，其特征在于其中所述的药物组合物成分a)和b)一起或者分别与一种或多种可药用载体混合，制备成药物制剂，该制剂为口服给药制剂、注射给药制剂或局部给药制剂，其中：

(1)口服给药制剂包括普通片、缓释片、颗粒剂、硬或软胶囊、糖浆剂、溶液剂、乳剂；口服给药制剂的载体包括填充剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、着色剂、矫味剂或者其他常规添加剂，具体包括淀粉、乳糖、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙甲纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅和聚山梨脂-80、十二烷基硫酸钠；

(2)注射给药制剂包括无菌注射的水溶液、无菌注射的水包油微乳液、注射用无菌粉末；注射给药制剂的载体包括注射用溶剂、注射用附加剂，具体注射溶剂包括注射用水、注射用油如大豆油，注射用增溶剂如乙醇、丙二醇、聚乙二醇、甘油，等渗物质如氯化钠、葡萄糖；

(3)局部给药制剂是贴剂、栓剂、霜剂、膏剂、凝胶剂、溶液、靶向制剂或混悬液，其中靶向制剂包括脂质体、微球剂、毫微粒、包含物、单克隆抗体耦联物；局部给药制剂的载体包括药学上用于局部给药的常规载体。

15.权利要求1-4的用途，其特征在于其中所述的药物组合物中成分a)和b)分别与一种或多种可药用载体混合制备成药物制剂，该制剂为口服给药制剂、注射给药制剂或局部给药制剂，其中：

(3)局部给药制剂是贴剂、栓剂、霜剂、膏剂、凝胶剂、溶液、靶向制剂或混悬液，其中靶向制剂包括脂质体、微球剂、毫微粒、包含物、单克隆抗体耦联物；局部给药制剂的载体包括药学上用于局部给药的常规载体；

在上述的制剂形式中，成分a)与b)的制剂是独立包装或联合包装形式。

16.权利要求1-4的用途，其特征在于其中所述的药物组合物的给药形式包括：静脉、肌内、腹膜、皮下、口服、直肠栓剂插入法、阴道栓剂插入法、靶向给药、吸入式、灌胃式、鼻饲式、舌下给药、滴药法、微针式给药、连续给药系统和局部给药，局部给药方式如贴皮制剂、或植入式连续给药释放系统，其中贴皮制剂载体包括骨架材料如疏水的聚硅氧烷和亲水的聚乙烯醇等，控释膜材料如聚硅氧烷和乙烯-醋酸乙烯共聚物等，压敏胶如聚异丁烯、聚硅氧烷和聚丙烯酸酯，活性成分一般分散在压敏胶中；其中植入式连续给药释放系统所选用的高分子材料包括聚乳酸一乙醇酸共聚物、聚乙二醇聚乳酸共聚物、聚乳酸/聚己内酯、聚[碳酸(亚丁酯-co-ε-己内酯)酯]、聚丁内酯戊内酯、聚二氧环己酮(PDS)、聚-3-羟基丁酸酯(PHB)、聚左旋乳酸(PLLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚ε-己内酯(PCL)、聚己内酯/聚乙交酯丙交酯(PCL/PLGA)。

17.权利要求1-4任一项的用途，其特征在于其中所述的的疾病包括：创伤、缺血及再灌注损伤导致的疾病，如各种急性化学物理因素所致的创伤、中毒、休克、高原病、放射病、尘肺、电击伤、晕动病、急慢性心功能不全，心律失常、心脏传导异常、人工心脏起搏、心血管介入疗法、瓣膜病、动脉粥样硬化、冠心病、(包括猝死)、先天性心脏病、高血压、感染性心内膜炎、肺源性心脏病、心包炎、心肌病、周围血管疾病(包括多发性大动脉炎、雷诺综合症、血栓闭塞性脉管炎、闭塞性动脉硬化等)、心脏移植手术、神经痛、神经炎、各种周围神经病、各种脊髓疾病、急性脑血管疾病(包括脑梗死、脑栓塞、脑出血、蛛网膜下腔出血等)、颅内肿瘤、中枢神经系统感染(包括病毒和细菌性脑炎、脑膜炎等)、运动障碍性疾病(帕金森病、舞蹈病、肝豆状核变性、肌张力障碍、抽搐与振颤)发作性疾病(包括癫痫、偏头痛、发作性睡病与猝倒症等)、脱髓鞘性疾病(包括多发性硬化症、视神经脊髓炎、脑白质营养不良)、骨骼肌肉病(包括肌营养不良症、强直性肌病、重症肌无力、炎症性肌病、代谢性肌病、周期性瘫痪)、自主神经疾病(包括雷诺病、红斑性肢痛、间脑综合症)、弥散性血管内凝血等；胰岛素抵抗及内分泌等因素引起的疾病，如肥胖症、各种原因所致低血糖、胰岛素抵抗综合症、代谢综合症、营养不良(营养不良性干瘦、恶性营养不良、继发性蛋白质能量营养不良)、肠内营养、肠外营养、水电解质代谢紊乱、酸碱平衡紊乱、糖尿病、糖尿病心血管疾病、糖尿病周围神经病变、糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病、糖尿病足、妊娠与糖尿病、糖尿病并发感染、糖尿病急性代谢并发症、乳酸性酸中毒、各型糖原累积病、血脂蛋白紊乱、高氨基酸尿症、黄瘤、粘多糖病、果糖不耐受症、半乳糖血症、其他嘌呤和嘧啶代谢疾病、营养与代谢障碍性皮肤病(维生素缺乏、肠病性肢端皮炎、原发性皮肤淀粉样变、皮肤卟啉病、黄瘤病)、糖尿病视网膜并发症、生长激素缺乏性侏儒症、成年人腺垂体功能减退症、肾上腺病、甲状腺病、甲状旁腺病、卵巢病、性早熟、胰岛内分泌肿瘤、多发性内分泌腺病等疾病；肿瘤等疾病，如各种肿瘤、癌症、肉瘤、血癌、急慢性白细胞及粒细胞性白血病、各种原因所致的贫血(包括骨髓性贫血、再生障碍性贫血、镰状红细胞性贫血)、淋巴组织细胞病、自身免疫性疾病、原发性和继发性免疫缺陷病、肺部肿瘤、肺肉瘤、消化性溃疡、食道癌、胃癌、胃肿瘤、大肠癌、肾脏肿瘤、口腔肿瘤、原发性和继发性肝癌、胆管肿瘤、艾滋病、各种皮肤癌、骨髓肿瘤等疾病；炎症、严重感染和免疫反应导致的疾病，如感染性休克、多脏器功能衰竭、高温、低温综合症、感染性疾病(呼吸道感染、哮喘、严重急性呼吸综合症、病毒性肝炎、流行性腮腺炎、流行性乙型脑炎、狂犬病、脊髓灰质炎、麻疹、风疹、天花、水痘、单纯疱疹、带状疱疹、流行性出血热、黄热病、肠道病毒所致的各系统感染、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、艾滋病、立克次体病、衣原体感染、支原体感染、细菌性疾病(包括结核性疾病厌氧菌感染、败血症、破伤风等)、真菌性疾病、螺旋体病、寄生虫病、各种原因引起的感染性腹泻、急性出血坏死性小肠炎、溃疡性结肠炎、肠梗阻、胃动力性和功能性疾病、急性腹膜炎、急性胰腺炎、各种原因引起肝硬化、脂肪肝、黄疸、腹泻、消化道出血、反流性食管炎、爆发性肝功能衰竭、肝性脑病、胆石病、胆囊炎、急慢性肾功能衰竭、血液净化疗法、急慢性呼吸功能不全、慢性阻塞性肺疾病、支气管哮喘、支气管扩张、各种原因引起的肺炎、肺脓肿、肺水肿、肺栓塞、肺静脉瘘、肺结核、先天性肺发育不全、阻塞性睡眠呼吸暂停综合症、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征、急慢性肾炎、肾病综合症、微小病变性肾病、膜性肾病、局灶性肾小球硬化症、系膜增殖性肾小球肾炎、系膜毛细血管增生性肾炎、继发性肾小球疾病、遗传性肾炎、泌尿道感染、间质性肾炎、肾小管疾病、肾石病、牙周脓肿、病毒性皮肤疾病、细菌性皮肤疾病、真菌性皮肤病、荨麻疹类皮肤病、失聪、美尼尔氏综合症、急慢性中耳炎、结膜病、角膜病、白内障、青光眼、葡萄膜病、视网膜病、视神经病、急慢性扁桃体炎、扁桃体脓肿、骨关节炎、代谢性骨病、骨质疏松症、痛风和高尿酸血症、结节病、淀粉样变性、大骨节病、色素性皮肤病(白癜风、黄褐斑、雀斑、黑变病、遗传性大疱性表皮松解症、鱼鳞病、毛周角化病、家族性良性天疱疮、日光性皮肤病、冻疮、放射性皮肤病、痤疮、脂溢性皮炎、斑秃、雄激素源性脱发、风湿热、系统性红斑囊疮、类风湿性关节炎、脊柱关节病、多发性肌炎和皮肌炎、硬皮病和系统性硬化症、过敏性疾病等；各种原因所致线粒体功能障碍导致的退行性病变以及神经精神性疾病，如衰老、阿尔兹海默病、各种原因导致的线粒体疾病，如亨廷顿氏疾病、帕金森病(PD)、肌萎缩性侧索硬化、线粒体脑肌病伴乳酸中毒及中风样发作综合征(MELAS)、肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维病(MERRF)、Leber遗传性视神经病(LHON)、线粒体心肌病、肌病、痴呆、突发的不能控制的肌肉收缩(肌阵挛性的癫痫)、精神疾病包括器质性精神障碍(痴呆综合症、谵妄综合症、遗忘综合症、艾滋病所致精神障碍)、精神活性物质所致精神障碍(酒精中毒和酒精依赖、药物依赖)、精神分裂症、情感障碍、神经症性障碍(恐怖症、焦虑症、强迫症、神经衰弱、癔症、疑病症)、进食障碍、睡眠障碍、广泛性发育障碍、精神发育迟滞、多动障碍、抽动障碍、男性性功能障碍等疾病。

18.权利要求17的用途，其中所述疾病优选：急性心肌缺血再灌注损伤、代谢综合症、肝癌、多脏器功能衰竭、生精障碍、脂肪肝、高尿酸血症、慢性肾衰、慢性支气管炎、老年痴呆、胃溃疡、宫内发育迟缓、II-型糖尿病、肝损伤、高脂血症、高血压、衰老、获得性免疫力低下、流感、甲状腺功能亢进、组织损伤、胰腺缺血再灌注损伤、胃缺血再灌注损伤、肾脏缺血再灌注损伤、自身免疫性重症肌无力、脑梗塞。

19.权利要求1-4任一项所述的用途，其特征在于其中所述药物组合物人类给药的日剂量为：左卡尼汀或其衍生物5-3300mg/kg，曲美他嗪或其可药用的盐0.05-22mg/kg，左卡尼汀或其衍生物与曲美他嗪或其可药用的盐的重量比为1∶0.000015-1∶4.3。

20.权利要求19所述的用途，其特征在于左卡尼汀或其衍生物与曲美他嗪或其可药用的盐的重量比为1∶0.0001-1∶0.1。

21.权利要求20所述的用途，其特征在于左卡尼汀或其衍生物与曲美他嗪或其可药用的盐的重量比为1∶0.0001-1∶0.005。

22.权利要求21所述的用途，其特征在于成人给药的日剂量为：左卡尼汀或其衍生物2500-30000mg，曲美他嗪或其可药用的盐1-100mg，儿童根据体重相应降低用量。

23.一种预防或治疗人类能量代谢异常，同步改善葡萄糖和脂肪酸代谢失衡的方法，该方法包括：给需要的人体先后或同时联合施用含有曲美他嗪或其可药用的盐的药物和含有左卡尼汀或其衍生物的药物；或者

给需要的人体施用权利要求1-15任一项的药物组合物或其制剂。