CN104807837A

CN104807837A - 虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法

Info

Publication number: CN104807837A
Application number: CN201510186016.0A
Authority: CN
Inventors: 杜震宇; 马倩倩; 张南南; 陈立侨
Original assignee: East China Normal University
Current assignee: East China Normal University
Priority date: 2015-04-17
Filing date: 2015-04-17
Publication date: 2015-07-29

Abstract

本发明提出了一种虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率的测定方法，其包括：配置第一反应体系、第二反应体系，向第一、第二反应体系中加入虾蟹匀浆液进行反应，反应终止后，取上清液，加入闪烁液，用入液闪仪测定其放射性强度，从而得到虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率。本发明间接反映虾蟹组织对脂肪酸的利用偏好，测定机体对脂肪酸进行β氧化的效率，作为衡量机体生存状态的直接敏感指标，还可以用于评定机体对脂肪酸利用效率，进而评定机体的代谢状况。

Description

虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法

技术领域

本发明涉及水产养殖与营养研究领域，具体涉及虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法。

背景技术

水产养殖虾蟹类饲料中添加用油大都富含多种脂肪酸，对于如何评判哪种脂肪酸更利于机体有效利用的研究，目前并无报道。在传统营养研究中，如果通过长期投喂某种脂肪酸的方式来评判机体对脂肪酸的利用效率，是不可行的，原因在于单一脂肪酸不利于机体生长、存活、繁殖，而且成本较高。如果通过长期饲喂富含某种脂肪酸的饲料，研究机体对脂肪酸的利用效率，由于营养的不均衡也是无法科学客观反应机体对脂肪酸的利用效率。因此，采用贝塔(以下用β描述)测定方法可以灵敏精确的测定机体对某种脂肪酸的利用效率。

饥饿状态下，机体主要由线粒体内的脂肪酸贝塔氧化为相应的组织器官提供能量。一般通过测定线粒体β氧化的标志酶β羟乙酰-CoA脱氢酶(HAD)的最大活性来衡量肌肉或肝脏组织中脂肪酸氧化的效率，但是在这个复杂的β氧化循环反应中，涉及很多种酶，如果测定单一酶在整个循环过程中的活性是不可能的。所以通过测定鲜活组织匀浆液的脂肪酸β氧化效率，可以精确反应相应组织脂肪酸氧化的效率。

在自然状态下，虾蟹类经常会受到饥饿、缺氧或药物的胁迫，必然影响机体的代谢能力，所以通过测定机体的脂肪酸β氧化效率，可以间接灵敏的评判机体的生存状态。

缺点：此方法的应用前景是非常广泛的。但是，此方法在实施过程中也有一些不足：比如，并没有对脂肪酸氧化过程中产生的¹⁴CO₂(据报道，¹⁴CO₂约占大鼠肌肉匀浆中，标记棕榈酸降解产物的1％-30％；大鼠肝脏匀浆中，¹⁴CO₂占标记棕榈酸降解产物的很少)进行测定。

现有的传统养殖技术无法灵敏准确测定某种脂肪酸对虾蟹类的利用效率，此方法通过¹⁴C标记脂肪酸在体外组织中的β氧化效率，可以精确灵敏反应组织对某种脂肪酸的利用效率，进而反应机体对脂肪酸的利用效率。推而广之，利用某一种脂肪酸(例如：棕榈酸)，通过体外测定其在组织中的β氧化效率，也可以作为评判机体代谢效率的，生存状态的一个灵敏指标。另外，体外测定组织对脂肪酸的β氧化效率，主要在人、小鼠、牛、羊、鱼类等脊椎动物中进行研究，在甲壳类中没有相关应用，没有对于此类相关实验材料、条件摸索的相关报道，此方法提供的流程对研究人员进行相关研究具有极高的参考价值。

发明内容

本发明提出了一种虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法，包括以下步骤：

①配置用于线粒体和过氧化物酶体反应的第一反应体系；配置用于抑制线粒体活性的第二反应体系；

②分别向所述第一反应体系、所述第二反应体系中加入虾蟹匀浆液，进行反应；

③分别向所述第一反应体系、所述第二反应体系中加入反应终止剂，过夜，抽滤并取抽滤的上清液，加入闪烁液；

④用入液闪仪测定其放射性强度，从而得到虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率。

其中，所述反应终止剂包括HCLO₄等。

本发明虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法中，所述第一反应体系包含线粒体和过氧化物酶体反应所需的生物能量、酶类、缓冲液和螯合剂。

所述第一反应体系包含：80～85mM KCl，15～18mM MgCl2，0.5～0.9mM EGTA，12～14mM4-羟乙基哌嗪乙磺酸，12～14mM DTT，3～6mM ATP，0.1～0.2mM NAD+，0.1～0.2mM CoA，0.4～0.6mM L-肉碱，0.4～0.6mM L-苹果酸，23～25μM细胞色素C，以及40～50nM被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。

优选地，所述第一反应体系包含：83.3mM KCl，16.7mM MgCl₂，0.7mM EGTA，13.3mMHepes(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)，13.3mM DTT，5mM ATP，0.2mM NAD+，0.2mM CoA，0.5mML-carnitine(肉碱)，0.5mM L-malate(苹果酸)，25μM cytochrome-c(细胞色素C)和50nM被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。

本发明虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法中，所述第二反应体系包含过氧化物酶体反应所需的生物能量、酶类、缓冲液、螯合剂和抑制剂。

所述第二反应体系包含：80～85mM KCl，15～18mM MgCl2，0.5～0.9mM EGTA，12～14mM4-羟乙基哌嗪乙磺酸，12～14mM DTT，3～6mM ATP，0.1～0.2mM NAD⁺，0.1～0.2mM CoA，2～3mM KCN，0.2～0.4mM鱼藤酮，以及40～50nM被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。

优选地，所述第二反应体系包含83.3mM KCl，16.7mM MgCl₂，0.7mM EGTA，13.3mMHepes(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)，13.3mM DTT，5mM ATP，0.2mM NAD⁺，0.2mM CoA，2.6mMKCN，0.38mM rotenone(鱼藤酮)，和50nM被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。

本发明虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法中，所述被¹⁴C标记的脂肪酸溶液包含被¹⁴C标记的脂肪酸与牛血清蛋白；预先将被¹⁴C标记的脂肪酸：牛血清蛋白(BSA)按1～1.5:0.5～1(摩尔比)单独配制成被¹⁴C标记的脂肪酸溶液，然后，再分别加入至第一或第二反应体系中。优选地，所述被¹⁴C标记的脂肪酸与牛血清蛋白的摩尔比为3:2。

本发明虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法中，所述被¹⁴C标记的脂肪酸包括但不限于被¹⁴C标记的棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、或花生四烯酸等之任意一种。在一具体实施例中，例如，所述被¹⁴C标记的脂肪酸为被¹⁴C标记的50nM棕榈酸、50nM油酸、50nM亚油酸、50nM亚麻酸或50nM花生四烯酸。

本发明虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法中，所述虾蟹匀浆液包括蟹或虾的肝胰腺或肌肉、以及蔗糖匀浆液；所述虾蟹匀浆液由蟹和/或虾的肝胰腺或肌肉以及蔗糖匀浆液混合冰浴制成。具体地，所述虾蟹匀浆液包括含有蟹的肝胰腺与蔗糖匀浆液、或含有蟹的肌肉与蔗糖匀浆液、或含有虾的肝胰腺与蔗糖匀浆液、或含有虾的肌肉与蔗糖匀浆液、等。

其中，蔗糖匀浆液是指用于虾蟹组织进行匀浆的PH＝7的缓冲液，其含有0.24～0.26M蔗糖溶液、8～10mM缓冲液和1～2mM螯合剂。其中，所述缓冲液包括Tris-cl溶液；所述螯合剂包括EGTA溶液。所述蔗糖溶液包含蔗糖和蒸馏水。

其中，蟹和/或虾的肝胰腺与蔗糖匀浆液的摩尔比为1～2：10～20。优选地，为1:10。

其中，蟹和/或虾的肌肉与蔗糖匀浆液的摩尔比为1～2：10～30。优选地，为1:20。

本发明虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法中，所述步骤②中，所述反应是在25℃～35℃水浴环境中分别在第一反应体系、第二反应体系中进行的。

所述步骤②中，虾或蟹的肝胰腺与蔗糖匀浆液的反应时间为30min～60min，优选地，持续反应60min。所述反应是指虾或蟹的肝胰腺加入蔗糖匀浆液中进行冰浴匀浆，制得虾或蟹的肝胰腺组织匀浆液，将此匀浆液迅速加入第一反应体系中进行反应30min～60min，优选反应60min，然后立刻向此反应液中加入终止液例如HCLO₄，终止反应。

所述步骤②中，虾或蟹的肌肉与蔗糖匀浆液的反应时间为30min～60min，优选地，反应持续30min。所述反应是指虾或蟹的肌肉加入蔗糖匀浆液中进行冰浴匀浆，制得虾或蟹的肌肉匀浆液，将此匀浆液迅速加入第二反应体系中进行反应30min～60min，优选反应30min，然后立刻向此反应液中加入终止液例如HCLO₄，终止反应。

本发明还提出了一种用于虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定的反应体系，即第一反应体系，其包括：80～85mM KCl，15～18mM MgCl2，0.5～0.9mM EGTA，12～14mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸，12～14mM DTT，3～6mM ATP，0.1～0.2mM NAD+，0.1～0.2mM CoA，0.4～0.6mML-肉碱，0.4～0.6mM L-苹果酸，23～25μM细胞色素C，以及40～50nM被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。其中，所述被¹⁴C标记的脂肪酸溶液包含被¹⁴C标记的脂肪酸与牛血清蛋白。其中，所述被¹⁴C标记的脂肪酸为被¹⁴C标记的棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸或花生四烯酸之任意一种。

优选地，所述反应体系包含83.3mM KCl，16.7mM MgCl₂，0.7mM EGTA，13.3mM Hepes(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)，13.3mM DTT，5mM ATP，0.2mM NAD+，0.2mM CoA，0.5mML-carnitine(肉碱)，0.5mM L-malate(苹果酸)，25μM cytochrome-c(细胞色素C)和50nM被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。

本发明还提出一种用于虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定的反应体系，即第二反应体系，其包含：80～85mM KCl，15～18mM MgCl2，0.5～0.9mM EGTA，12～14mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸，12～14mM DTT，3～6mM ATP，0.1～0.2mM NAD+，0.1～0.2mM CoA，2～3mM KCN，0.2～0.4mM鱼藤酮，以及40～50nM被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。其中，所述被¹⁴C标记的脂肪酸溶液包含被¹⁴C标记的脂肪酸与牛血清蛋白。其中，所述被¹⁴C标记的脂肪酸为被¹⁴C标记的棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸或花生四烯酸之任意一种。

优选地，所述反应体系包含83.3mM KCl，16.7mM MgCl₂，0.7mM EGTA，13.3mM Hepes(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)，13.3mM DTT，5mM ATP，0.2mM NAD+，0.2mM CoA，2.6mM KCN，0.38mM rotenone(鱼藤酮)和50nM被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。

本发明还提出了一种用于虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定的试剂盒。所述试剂盒包括前述第一反应体系，第二反应体系，虾蟹匀浆液，反应终止剂和闪烁液。所述试剂盒用于线粒体与过氧化物酶体贝塔氧化反应速率测定和过氧化物酶体贝塔氧化反应速率测定。

本发明提出的虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法，可以在体外精确灵敏的测定机体在一定温度下对脂肪酸的利用效率，通过¹⁴C标记的脂肪酸(例如棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸或花生四烯酸)，构建脂肪酸贝塔氧化反应体系，加入虾或蟹组织匀浆液在体外进行脂肪酸贝塔氧化测定，可以准确测定机体在体外的脂肪酸贝塔氧化速率，进而反应机体对脂肪酸的利用效率。本发明利用脂肪酸在体外被氧化分解的利用效率进行测定，间接反映虾蟹组织对脂肪酸的利用偏好，测定机体对脂肪酸进行β氧化的效率，作为衡量机体生存状态的直接敏感指标。利用本发明测定方法还可以评定机体对脂肪酸利用效率，进而评定机体的代谢状况。

水产养殖虾蟹类饲料中添加用油大都富含多种脂肪酸，在传统营养研究中，若想衡量某种脂肪酸对生物体内的利用效率，假如利用单一脂肪酸或富含单一脂肪酸的油类长期饲喂对生物体存活、生长、发育繁殖不利，因此其利用效率无法进行探究。而运用本发明虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法可以在体外测定单一脂肪酸贝塔氧化速率，进而评定机体对脂肪酸的利用效率，

本发明利用某一种特定脂肪酸(例如：棕榈酸、油酸、亚油酸等)在体外被氧化分解的利用效率进行测定，可以间接反映虾蟹组织对脂肪酸的利用偏好。饥饿状态下，机体主要由线粒体内的脂肪酸β‐氧化为相应的组织器官提供能量。而在绝大多数真核细胞内，线粒体和过氧化物酶体共同合作对脂肪酸进行β氧化。因此测定机体对脂肪酸进行β氧化的效率，可以作为衡量机体生存状态的直接敏感指标。饲喂某些药物来改变机体代谢状态后，亦可以用本发明提出的虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法来评定机体对脂肪酸利用效率，进而评定机体的代谢水平。

附图说明

图1为本发明实施例中35℃下中华绒螯蟹肝胰腺线粒体和过氧化物酶体β氧化速率。

图2为本发明实施例中25℃下中华绒螯蟹肝胰腺线粒体和过氧化物酶体β氧化速率。

图3为本发明实施例中35℃下中华绒螯蟹肌肉线粒体和过氧化物酶体β氧化速率。

图4为本发明实施例中25℃下中华绒螯蟹肌肉线粒体和过氧化物酶体β氧化速率。

图5为本发明实施例中35℃下日本沼虾肝胰腺线粒体和过氧化物酶体β氧化速率。

图6为本发明实施例中25℃下日本沼虾肝胰腺线粒体和过氧化物酶体β氧化速率。

图7为本发明实施例中35℃下日本沼虾肌肉线粒体和过氧化物酶体β氧化速率。

图8为本发明实施例中25℃下日本沼虾肌肉线粒体和过氧化物酶体β氧化速率。

具体实施方式

结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。

②分别向第一反应体系、第二反应体系中加入虾蟹匀浆液，进行反应；

③分别向第一反应体系、第二反应体系中加入终止剂HCLO₄，终止反应，过夜，抽滤并取抽滤的上清液，加入闪烁液；

④用入液闪仪测定其放射性强度。

实施例

(1)实施动物：

活力旺盛的20g左右中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)4只，活力旺盛的2.3g左右日本沼虾(Macrobrachium nipponense)15只。

(2)实施步骤：

①分别配置两种反应体系，第一反应体系是保证线粒体和过氧化物酶体都反应，第二反应体系抑制线粒体的活性。具体地，

第一反应体系含有83.3mM KCl，16.7mM MgCl₂，0.7mM EGTA，13.3mM Hepes(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)，13.3mM DTT，5mM ATP，0.2mM NAD⁺，0.2mM CoA，0.5mM L-carnitine(肉碱)，0.5mM L-malate(苹果酸)，25μM cytochrome-c(细胞色素C)，以及被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。

其中，被¹⁴C标记的脂肪酸溶液为：50nM ¹⁴C标记棕榈酸(palmitic acid简称PA)，50nM标记油酸(oleic acid简称OA)，50nM标记亚油酸(linoleic acid简称LA)，50nM标记亚麻酸(linolenic acid简称LNA)或50nM标记花生四烯酸(arachidonic acid简称ARA)。在第一反应体系中，这些脂肪酸只包含其中之一即可。

其中，被¹⁴C标记的脂肪酸溶液是预先按被¹⁴C标记的脂肪酸：牛血清蛋白(BSA)＝3:2(摩尔比)单独配制后，再加入至第一反应体系中。其中，所述脂肪酸包括但不限于棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸或花生四烯酸等之任意一种。

第二反应体系含有83.3mM KCl，16.7mM MgCl₂，0.7mM EGTA，13.3mM Hepes，13.3mMDTT，5mM ATP，0.2mM NAD⁺，0.2mM CoA，2.6mM KCN和0.38mM rotenone、和被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。

其中，被¹⁴C标记的脂肪酸溶液的配制方法同上，预先按脂肪酸：牛血清蛋白(BSA)＝3:2(摩尔比)单独配制后，再加入至第二反应体系中。其中，所述脂肪酸包括但不限于棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸等之任意一种。其中，被¹⁴C标记的脂肪酸溶液包括：50nM ¹⁴C标记棕榈酸(palmitic acid简称PA)，50nM标记油酸(oleic acid简称OA)，50nM标记亚油酸(linoleic acid简称LA)，50nM标记亚麻酸(linolenic acid简称LNA)，50nM标记花生四烯酸(arachidonic acid简称ARA)。在第二反应体系中仅包含前述脂肪酸的其中之一即可。

具体地，将预先配制好的第一反应体系、第二反应体系，分别加入多个塑料试管中，在一定的反应时间内可以同时进行测定，以评定组织偏好利用哪一种脂肪酸。本发明测定方法实施的多个不同实验条件，见以下表1。

②取适量新鲜蟹、虾的肝胰腺(hepatopancreas)与肌肉(muscle)，用冰浴蔗糖匀浆液清洗3次，滤纸吸干多余水分。以如下比例(W:V单位：g/ml)冰浴机械匀浆：肝胰腺：蔗糖匀浆液＝1:10；肌肉：蔗糖匀浆液＝1:20。制成的虾蟹匀浆液分别为含有蟹的肝胰腺与蔗糖匀浆液的虾蟹匀浆液；含有虾的肝胰腺与蔗糖匀浆液的虾蟹匀浆液；含有蟹的肌肉与蔗糖匀浆液的虾蟹匀浆液；含有虾的肌肉与蔗糖匀浆液的虾蟹匀浆液。

分别向第一反应体系、第二反应体系中加入100μl虾蟹匀浆液，在两种反应体系中，均在25℃和35℃水浴环境中分别进行反应，持续反应，反应时间分别为肝胰腺组织60min，肌肉组织30min。

表1

③然后，向各个反应体系中加入1.5ml 10％HClO₄，过夜，抽滤，取抽滤的上清液300μl加入800μl闪烁液。所述闪烁液为用于液体闪烁计数测量的闪烁剂混合液，是市售普通产品。

④入液闪仪测定其放射性强度。

(3)实验结果：

①如图1、2所示，中华绒螯蟹肝胰腺线粒体在温度为35℃、25℃条件下，对亚麻酸β氧化能力都是最高的；对油酸和亚油酸β氧化能力次之；对棕榈酸和花生四烯酸的β氧化能力都是最低的。中华绒螯蟹肝胰腺过氧化物酶体在温度为35℃、25℃条件下，对亚油酸和亚麻酸β氧化能力相近，并且都显著高于棕榈酸、油酸和花生四烯酸。

②如图3、4所示，中华绒螯蟹肌肉线粒体在温度为35℃、25℃条件下，对亚油酸β氧化能力都是最高的，对亚麻酸、花生四烯酸和油酸的β氧化能力依次降低；对棕榈酸的β氧化能力最低。中华绒螯蟹肌肉过氧化物酶体在温度为35℃、25℃条件下，对脂肪酸的β氧化能力均较低，对亚麻酸的β氧化能力相对高于其他四种脂肪酸。

③如图5、6所示，在35℃条件下，日本沼虾肝胰腺线粒体对亚麻酸的β氧化能力最强，油酸、亚油酸次之；而在过氧化物酶体中，亚油酸和亚麻酸的β氧化能力最强，25℃条件下是相同的趋势。

④如图7、8所示，日本沼虾肌肉线粒体在35℃条件下，对亚油酸的β氧化能力最强，过氧化物酶体中则对花生四烯酸的β氧化能力最强，亚麻酸和亚油酸次之；25℃时日本沼虾肌肉线粒体对花生四烯酸、亚麻酸的利用率最高。

基于以上实施例，本发明提出的虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法可以在体外精确灵敏的测定机体在一定温度下对脂肪酸的利用效率，通过¹⁴C标记的脂肪酸(包括棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸)，构建脂肪酸贝塔氧化反应体系，加入虾蟹组织匀浆液在体外进行脂肪酸贝塔氧化测定，可以准确测定机体在体外的脂肪酸贝塔氧化速率，进而反应机体对脂肪酸的利用效率。

Claims

1.一种虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

①配置用于线粒体和过氧化物酶体反应的第一反应体系；配制用于抑制线粒体活性的第二反应体系；

③分别向所述第一反应体系、所述第二反应体系中加入反应终止剂，过夜，抽滤后取上清液，加入闪烁液；

2.如权利要求1所述的虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法，其特征在于，所述第一反应体系包含80～85mM KCl，15～18mM MgCl₂，0.5～0.9mM EGTA，12～14mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸，12～14mM DTT，3～6mM ATP，0.1～0.2mM NAD⁺，0.1～0.2mM CoA，0.4～0.6M L-肉碱，0.4～0.6mM L-苹果酸，23～25μM细胞色素C，以及40～50nM被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。

3.如权利要求1所述的虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法，其特征在于，所述第二反应体系包含80～85mM KCl，15～18mM MgCl2，0.5～0.9mM EGTA，12～14mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸，12～14mM DTT，3～6mM ATP，0.1～0.2mM NAD+，0.1～0.2mM CoA，2～3mM KCN，0.2～0.4mM鱼藤酮，以及40～50nM被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。

4.如权利要求2或3所述的虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法，其特征在于，所述被¹⁴C标记的脂肪酸溶液包含被¹⁴C标记的脂肪酸与牛血清蛋白；其中，被¹⁴C标记的脂肪酸为被¹⁴C标记的棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸或花生四烯酸之任意一种。

5.如权利要求4所述的虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法，其特征在于，所述被¹⁴C标记的脂肪酸与所述牛血清蛋白的摩尔比为1～1.5:0.5～1。

6.如权利要求1所述的虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法，其特征在于，所述虾蟹匀浆液包括蟹或虾的肝胰腺或肌肉、以及蔗糖匀浆液；其中，所述蟹或虾的肝胰腺与所述蔗糖匀浆液的摩尔比为1～2:10～30；所述蟹或虾的肌肉与蔗糖匀浆液的摩尔比为1～2:10～20。

7.如权利要求6所述的虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法，其特征在于，所述步骤②中，反应在25℃～35℃下进行。

8.一种应用于如权利要求1所述的虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法中的反应体系，其特征在于，所述反应体系含有：80～85mM KCl，15～18mM MgCl2，0.5～0.9mM EGTA，12～14mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸，12～14mM DTT，3～6mM ATP，0.1～0.2mM NAD+，0.1～0.2mM CoA，0.4～0.6M L-肉碱，0.4～0.6mM L-苹果酸，23～25μM细胞色素C，以及40～50nM被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。其中，所述被¹⁴C标记的脂肪酸溶液包含被¹⁴C标记的脂肪酸与牛血清蛋白；其中，所述被¹⁴C标记的脂肪酸为被¹⁴C标记的棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸或花生四烯酸之任意一种。

9.一种应用于如权利要求1所述的虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法中的反应体系，其特征在于，所述反应体系含有：80～85mM KCl，15～18mM MgCl2，0.5～0.9mM EGTA，12～14mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸，12～14mM DTT，3～6mM ATP，0.1～0.2mM NAD+，0.1～0.2mM CoA，2～3mM KCN，0.2～0.4mM鱼藤酮，以及40～50nM被¹⁴C标记的脂肪酸溶液。其中，所述被¹⁴C标记的脂肪酸溶液包含被¹⁴C标记的脂肪酸与牛血清蛋白；其中，所述被¹⁴C标记的脂肪酸为被¹⁴C标记的棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸或花生四烯酸之任意一种。

10.一种应用于如权利要求1所述虾蟹类脂肪酸贝塔氧化速率测定方法中的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一反应体系、第二反应体系、虾蟹匀浆液、反应终止剂和闪烁液。