CN103110617A - 一种双醋瑞因在制备治疗糖尿病肾病药物中的用途 - Google Patents

Abstract

双醋瑞因在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途。将所述的双醋瑞因作为药物有效成分的原料，与药学上接受的药用辅料组合，制成用于预防及治疗糖尿病肾病的药物组合物，该组合物含有治疗有效剂量的上述双醋瑞因和药学上可接受的载体。通过采用链脲佐菌素诱导实验性糖尿病大鼠模型探讨双醋瑞因对糖尿病大鼠肾脏保护作用研究中意外地发现，双醋瑞因降低糖尿病大鼠血中糖化血红蛋白水平和尿白蛋白排泄率，抑制肾皮质蛋白质非酶糖基化终末产物的形成，同时改善肾脏病理病变。

Description

一种双醋瑞因在制备治疗糖尿病肾病药物中的用途

技术领域

本发明涉及一种药用化合物，具体涉及一种4,5-双(乙酰氧)-9,10-二氢-9,10-二氧代-2-蒽甲酸（双醋瑞因）在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途。

背景技术

糖尿病发病率未来10年全球有增多趋势，其中威胁生命的糖尿病肾病是西方国家糖尿病死亡的主导原因，也正成为亚洲及发展中国家未来糖尿病死亡的主要原因。当前，降低糖尿病肾病危险性的措施主要是严格控制血糖、高血压和限制饮食中的蛋白摄取等，可降低20％由肾衰竭导致的死亡危险率。

糖尿病肾病表现为肾小球功能和结构改变，包括肾小球滤过性增高、肾小球基底膜增厚、细胞外基质扩充到肾小球系膜区域等。另外，肾小管病变在三分之一的II型糖尿病患者中也很突出。临床和动物实验均证明TGF-β与糖尿病肾病综合症的发展密切相关，临床发现糖尿病肾病患者肾小球和肾小管腔室中TGF-βmRNA及其蛋白水平均表达升高，链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠和小鼠肾脏中，也有TGF-βmRNA表达及其蛋白水平的升高，体外细胞培养中，高糖对来源于肾小球和肾小管腔室的多种细胞系也均有刺激TGF-β升高作用。另外，转导过表达TGF-β可使小鼠发生严重的肾损害，同时伴随肾纤维化；在肝脏转导过表达TGF-β1也使小鼠出现进展性肾损害，同时血液中存在较高浓度的激活TGF-β1。相反，用抗体或反义RNA措施阻止TGF-β可以改善小鼠的糖尿病器官损伤。

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病导致的肾脏损害，是糖尿病常见和严重的并发症之一，是糖尿病全身微血管病变的一部分。糖尿病肾病目前已成为慢性肾功能不全病因的最重要病因。在欧美国家糖尿病肾病是终末期肾衰竭的首位原因。据我国1999年的初步统计，糖尿病肾病在血液透析患者中为第二位，约占13.5％；在腹膜透析患者中为第三位，约占12.0％。

糖尿病具有两个类型即：胰岛素依赖型(I型糖尿病)和非胰岛素依赖型(II型糖尿病)。其中，I型糖尿病是指由于胰岛B细胞破坏导致胰岛素绝对缺乏所引起的糖尿病；II型糖尿病是指从胰岛素抵抗为主伴胰岛素相对不足到胰岛素分泌不足为主伴胰岛素抵抗所致的糖尿病。以上两种类型糖尿病均应除外一些已知因素所致的各种糖尿病。

不同类型糖尿病的病因和发病机制均不同，其确切机理至今尚未完全明了。目前认为：I型糖尿病是一种由淋巴细胞介导的、以免疫性胰岛炎和选择性胰岛B细胞操作为特征的自身免疫性疾病，特异性抗原-组织相容性抗原-T淋巴细胞受体三者构成三元复合体共同参与免疫反应、启动特异性识别、激活T淋巴细胞，再启动胰岛B细胞破坏；另外，与其发病有关的因素中还包括病毒感染、化学物质、饮食因素以及遗传等。II型糖尿病被认为是多个基因及环境因素共同参与并相互作用的多基因多环境因素复杂病，其中最主要的环境因素包括肥胖、高热量饮食、体力活动不足及增龄，而高血压、血脂紊乱、IGT或IFG者也能增加患病风险。而遗传因素在II糖尿病的病因中较I型糖尿病更为重要。不同类型的糖尿病其糖尿病肾病的发病率不同，约有15％-25％的I型糖尿病患者以及30％-40％的II型糖尿病患者最终会发展成为糖尿病肾病。

目前临床上根据糖尿病肾病的自然病程将其分为I-VI期。

糖尿病肾病I期，为肾小球高滤过期，主要表现为：肾小球肥厚增大、肾脏体积增大、肾血流量增加、肾小球高滤过。

糖尿病肾病II期，为无临床症状的肾脏损害期，大约出现在糖尿病2-5年后，主要表现为：肾小球毛细血管基底膜增厚，常有肾小球系膜区扩张；此期虽然有轻度肾脏病理改变，但无临床征象，肾脏以功能性改变为主，表现为肾小球滤过率的增加，肾血浆流量和滤过分数的增加。多数患者病变长期处于这一阶段，不发展到III期。

糖尿病肾病III期，也称为微量白蛋白尿期，以微量白蛋白尿的出现为标志，常出现在糖尿病10-15年后，可以出现高血压。此期的病理表现仍然是肾小球毛细血管基底膜增厚和肾小球系膜区扩张，但较II期为重。微量白蛋白尿是各种血管疾病包括心血管以及糖尿病肾病IV期的危险因素，多数患者在若干年后进展至大量白蛋白尿阶段。目前认为微量白蛋白尿的发生机制主要与内皮功能障碍、炎症以及胰岛素抵抗有关，而肾小球基底膜的改变仅对其有轻微的作用。由于肾小球滤过膜(基底膜与足细胞)正常的患者也能出现微量白蛋白尿，提示肾小球滤过膜结构与微量白蛋白尿之间无明显相关性。

糖尿病肾病IV期，为临床糖尿病肾病期，当微量白蛋白尿进展为大量蛋白尿时，即表示进入糖尿病肾病IV期。该期的主要表现为中、大量蛋白尿、高血压，此期的病理表现出现肾小球硬化。

糖尿病肾病V期，为肾功能不全期，表现为肾小球滤过率进行性下降，最终进入终末期肾衰，出现肾功能不全的表现。该期的病理表现为普遍的肾小球硬化。

糖尿病肾病肾组织病理上：早期(糖尿病肾病I期或糖尿病肾病II期或糖尿病肾病III期)改变主要为肾小球肥大，基底膜增厚，系膜基质增生，因此增加的细胞外基质主要为基底膜成分，如纤维连接蛋白(FN)、IV型胶原蛋白；晚期出现弥漫性肾小球硬化，间质纤维化，各类细胞外基质成分包括I型、IV型胶原蛋白、纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白都将显著增多。

糖尿病肾病的发病机制尚未完全阐明。目前认为，其机制主要与肾血流动力学异常、代谢紊乱、细胞因子作用、遗传因素等相关。其中，肾血流动力学异常在此起着关键作用，肾小球滤过率增高时跨壁毛细血管静水压增加，从而可促使上皮细胞产生基底膜增多，蛋白滤过也增多，并可沉积在系膜区和肾小球基底膜。沉积于系膜区的大分子物质又可刺激系膜细胞的增生，促使基质增加，形成恶性循环。而高血糖作为糖尿病肾病重要的代谢因素，可通过多元醇途径使细胞内山梨醇浓度升高，导致细胞功能障碍；还可使体内各种蛋白糖基化，导致糖基化终末产物的生成与蓄积，从而通过直接作用或蛋白激酶C等途径促使糖尿病肾病的发生发展。另外，各种细胞因子，如转化生长因子β(TGF-β)、结缔组织生长因子(CTGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、血小板源性生长因子(PDGF)等，均可促进细胞外基质的产生。其中，TGF-β是一个关键因子，它可以介导葡萄糖对系膜基质代谢的影响。而CTGF是目前公认的TGF-β下游因子，TGF-β的生物学作用部分是由CTGF介导的。高糖状态也可诱导CTGF的表达，提示CTGF在糖尿病肾病发生发展中可能起到的促进作用。此外，还有各种信号通路如Smads通路、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)通路等，均可参与各种靶基因的调控，促进糖尿病肾病的发生发展。其中，ERK1/2作为MAPK通路中的重要成员之一，可以使细胞外信号传至细胞内，影响细胞增殖和蛋白质的合成，在糖尿病肾病的发病机制中起重要的作用。氧化应激被认为是糖尿病肾病的主要致病因素，在正常情况下，肾脏的抗氧化系统和氧化能力之间保持着相对的动态平衡。在糖尿病早期患者体内，常伴有葡萄糖及糖化蛋白的自动氧化，使体内自由基产生明显增加，机体抗氧化能力降低，引起糖尿病早期肾损害。此外，遗传、高血脂等因素也对糖尿病肾病的发病起着非常重要的作用。

目前认为I型糖尿病和II型糖尿病引起肾脏损害的机理不同。I型糖尿病患者在发病的前10年血糖水平较II型高(16.3vs 11.4mmol/l)，而血压水平低于II型糖尿病(148vs157mmHg)，发展为终末期肾衰的时间明显长于II型糖尿病(22vs 17years)。另外，II型糖尿病中常见的高脂血症和肥胖在糖尿病肾病中起重要作用，而在I型糖尿病中血糖的控制水平对糖尿病肾病的发展更为重要。动物实验和临床研究表明，高胆固醇血症可以诱发或加重肾小球硬化和小管间质损伤。高胆固醇血症可以诱导单核细胞趋化因子MCP-1的表达，促进肾脏炎性细胞的浸润。高胆固醇血症也引起大血管内皮损伤和动脉粥样硬化。实验证明与高血糖相比，高脂血症更能促进糖尿病肾病的发展。胰岛素抵抗在II型糖尿病肾病的发生发展中发挥一定作用，胰岛素抵抗发生后，己糖胺通路活化，后者可引起TGF-B产生增加，从而参与细胞外基质的积聚，改善胰岛素抵抗可减轻肾损伤。

由I型糖尿病和II型糖尿病导致的糖尿病肾病的机理不同，I型糖尿病和II型糖尿病引起的糖尿病肾病的病理改变和后果也不尽相同。II型糖尿病肾病和I型糖尿病肾病的主要组织学改变基本相似，但II型糖尿病肾病的形态学改变表现更为多样性，而非特异性的血管损伤和间质损伤更为常见。

糖尿病患者一旦发现肾脏损害，出现持续性蛋白尿则病情不可逆转，目前临床上尚无有效的方法能够防止其发生和恶化。糖尿病肾病的药物治疗目前主张多途径综合治疗，包括限制蛋白摄入，控制血糖、血压、血脂等促进肾功能恶化的危险因素。近期动物研究显示，糖基化终末产物抑制剂如氨基胍对糖尿病肾病有一定疗效，但是尚未进入临床使用。而目前广泛应用的ACEI及ARB类药物如卡托普利、依那普利及络沙坦等有一定作用，但其疗效有限。因此，目前尚无有效治疗糖尿病肾病的药物。

4,5-双(乙酰氧)-9,10-二氢-9,10-二氧代-2-蒽甲酸，又名双醋瑞因，结构式如下：

传统上，双醋瑞因是一种新的白介素(IL-1)抑制剂。其作用机制(1)抑制IL-1的活性；(2)抑制滑膜组织中IL-1合成；(3)抑制软骨细胞中IL-1受体的表达；(4)阻遏胶原酶及基质溶解素等金属蛋白酶和过氧化物的生成；(5)促进胶原及氨基多糖的合成；(6)抑制白细胞的趋化作用及稳定溶酶体。

CN101537002A公开了双醋瑞因可显著缓解症状和有效修正结构，属于改变骨关节炎症状和病情的慢作用药物。所有相关试验均显示，双醋瑞因可显著改善骨关节炎患者的关节功能，延缓病程，减轻疼痛，提高患者的生活质量，具有较NSAIDs更强的后续效应和更好的安全性，是一种有效的治疗骨关节炎的药物。同时又是一种治疗肾炎、肾小球肾炎、牛皮癣的药物。

CN1395484A公开了双醋瑞因或其可药用衍生物用于制备治疗牛皮癣及其相关疾病，例如牛皮癣关节炎的药物中的用途。

CN1810759A公开了二乙酰大黄酸作为骨关节炎IL-1抑制剂，可诱导软骨生成，具有止痛、抗炎及退热作用。临床上用于治疗退行性关节炎及相关疾病引起的疼痛和关节功能障碍等症状。

CN102526013A公开了一种药物组合物和含其的药物制剂及用途。该药物组合物含有双醋瑞因，显示了优异的预防和治疗各种原因导致的粘膜损伤，或由这种损伤导致或表征的疾病的效果。

然而，现有技术并未报道双醋瑞因在治疗糖尿病肾病的药物中的用途。并且，Felisaz N等人(Osteoarthritis Cartilage.1999May;7(3):255-64.,Stimulatingeffect of diacerein on TGF-beta1 and beta2 expression in articular chondrocytescultured with and without interleukin-1.)发现在促进软骨中的合成代谢反应过程中，双醋瑞因通过刺激生长转化因子TGF-β的产生，从而促进软骨细胞增殖和胶原蛋白II、蛋白多糖以及透明质酸的合成。

发明内容

本发明目的是提出一种药用化合物的应用，具体涉及一种4,5-双(乙酰氧)-9,10-二氢-9,10-二氧代-2-蒽甲酸在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途。

具体而言，本发明的目的在于提供一种双醋瑞因的用途：抑制体内转化生长因子-β1水平升高预防或治疗糖尿病肾病的用途。

本发明的另一个目的在于提供一种双醋瑞因在降低糖尿病引起的体内TGF-β1水平升高中的用途，及在预防和治疗糖尿病肾病的用途。

本发明的另一个目的在于提供一种双醋瑞因药用组合物，其包含双醋瑞因及其药物上可接受的载体。所述药物上可接受的载体可以是药学上可接受的药用辅料组合。本发明的另一个目的在于提供双醋瑞因在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途。

本发明的药用组合物的剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使双醋瑞因为活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。

本发明所述的4,5-双(乙酰氧)-9,10-二氢-9,10-二氧代-2-蒽甲酸，又名双醋瑞因，CAS号：13739-02-1，英文名称：Diacerein，结构式如下所示：

4,5-双(乙酰氧)-9,10-二氢-9,10-二氧代-2-蒽甲酸在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途；进一步的，将所述的双醋瑞因作为药物有效成分的原料，然后与药学上可接受的药用辅料组合，制成用于预防及治疗糖尿病肾病的药物组合物，该组合物含有治疗有效剂量的上述双醋瑞因和药学上可接受的载体。

上述双醋瑞因加入药用辅料，制备成药物制剂。在制备治疗糖尿病肾病的药物用途。所述的药物组合物是药剂学上所说的任何一种剂型，包括片剂、胶囊剂、软胶囊、凝胶剂、口服剂、混悬剂、冲剂、贴剂、软膏、丸剂、散剂、注射剂、输液剂、冻干注射剂、静脉乳剂、脂质体注射剂、栓剂、缓释制剂或控释制剂。

本发明的药用组合物优选双醋瑞因含量为1wt％～95wt％。

本发明的药用组合物优选双醋瑞因含量为1.5wt％～90wt％。

本发明的药用组合物更优选双醋瑞因含量为2.5wt％～80wt％。

本发明的药用组合物除含有治疗有效量的上述双醋瑞因为活性成分，还应含有一种或多种药学上可接受的载体。

上文所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂和水等，填充剂如淀粉、蔗糖，乳糖、微晶纤维素等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如羧甲基淀粉钠，羟丙纤维素，交联羧甲基纤维素，琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇，十二烷基硫酸钠；吸附载体如高龄土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。

本发明的药用组合物可通过口服、直肠或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆、口服液、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、粉针、水或油性悬浮剂等。优选的形式是片剂、包衣片剂、胶囊、颗粒剂、口服液和注射剂。

本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。以上所述的药物组合物制剂，其特点是，其剂型是药剂学上所说的任何一种剂型，包括片剂、胶囊剂、软胶囊、喷雾剂、凝胶剂、凝胶吸入机、口服剂、混悬剂、冲剂、贴剂、软膏、丸剂、散剂、注射剂、输液剂、冻干注射剂、静脉乳剂、脂质体注射剂、靶向给药注射剂、栓剂、缓释制剂或控释制剂。

本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。以上所述的药物组合物制剂，其特点是，它是双醋瑞因与不同碱基或离子形成的药用复合物与填充剂、崩解剂组配的片剂或胶囊剂；或者是双醋瑞因与不同碱基或离子形成的药用复合物与填充剂、羟丙甲纤维素K4M组配的缓释片剂或胶囊剂；或者是双醋瑞因分散于油相中得到双醋瑞因软胶囊。

本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。以上所述的药物组合物制剂，其特点是，其特征在于，所述的填充剂是蔗糖，乳糖、微晶纤维素、糊精、淀粉或磷酸钙；所述的崩解剂是羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮或交联羧甲基纤维素钠；病患双醋瑞因日用剂量为100-1000mg/日；尤其是300-1000mg/日。

本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。以上所述的药物组合物制剂，其特点是，所述制剂中还含有粘合剂、润湿剂或润滑剂。

本发明有益效果是：通过采用链脲佐菌素诱导实验性糖尿病大鼠模型探讨双醋瑞因对糖尿病大鼠肾脏保护作用研究中意外地发现，双醋瑞因降低糖尿病大鼠血中糖化血红蛋白水平和尿白蛋白排泄率，抑制肾皮质蛋白质非酶糖基化终末产物的形成，同时改善肾脏病理病变。进一步采用活性指标指导下的导向分离方法研究双醋瑞因预防和/或治疗糖尿病肾病作用物质基础，首次发现了双醋瑞因对蛋白质非酶糖基化终末产物的形成具有明显地抑制作用，因而完成了本发明。双醋瑞因胰岛炎有疗效、改善胰岛素抵抗可减轻肾损伤、治疗非特异性的血管损伤和间质损伤；符合糖尿病肾病的药物治疗目前主张的多途径综合治疗方案。

附图说明

图1：双醋瑞因对糖尿病小鼠血清TGF-β1的影响

图2：双醋瑞因对糖尿病小鼠肾脏TGF-β1的影响

图3：双醋瑞因对四氧嘧啶型I糖尿病小鼠血糖的影响

图4：双醋瑞因对链脲佐菌素II型糖尿病小鼠血糖的影响

图5：双醋瑞因对四氧嘧啶I型糖尿病小鼠饮水量的影响

图6：双醋瑞因对链脲佐菌素II型糖尿病小鼠饮食量的影响

图7：双醋瑞因对I型糖尿病小鼠肌酐清除率的影响

图8：双醋瑞因对I型糖尿病小鼠尿白蛋白的影响

图9：双醋瑞因对I型及II型糖尿病的预防作用

图10：双醋瑞因对正常小鼠糖耐受量的影响

图11：双醋瑞因对db/db糖尿病小鼠血清TGF-β1的影响.

具体实施方式

下面的动物实验研究进一步说明了本发明中双醋瑞因抑制TGF-β1用于预防和治疗糖尿病肾病的有效作用：

实验例1、双醋瑞因对四氧嘧啶诱导的小鼠I型糖尿病的治疗作用。

实验方法：将四氧嘧啶80mg/kg尾静脉注射于体重20±1g的昆明小鼠，每周1次，共注射2次。末次注射后1周，尾端采血测定空腹血糖，以空腹血糖大于13mmol/L的小鼠为I型糖尿病小鼠。

将入选小鼠按血糖高低随机分组：模型对照组：静脉注射或灌胃给予等容量溶剂；治疗组：灌胃给药，双醋瑞因100mg/kg，每组10只小鼠，雌雄各半，每日给药1次，每日测量小鼠的进食量及饮水量，绘出小鼠的每周饮食量、饮水量的变化曲线，连续10周。第6周、第10周治疗结束时各测1次空腹血糖(禁食12h以上)，治疗结束时检测肾肌酐清除率和尿白蛋白含量以评价肾脏损害，之后眼眶静脉采血分离血清，随后将小鼠处死，切除肾脏，用PBS匀浆后离心取上清用于测组织TGF-β1。血清及组织TGF-β1用ELISA试剂盒检测，尿白蛋白含量用免疫散射速率比浊法试剂盒测定，血肌酐量用碱性苦味酸法试剂盒测定。

结果：双醋瑞因可以降低四氧嘧啶诱导的I型糖尿病小鼠小鼠血清及肾脏TGF-β1(见图1和图2)。双醋瑞因也降低四氧嘧啶诱导的I型糖尿病小鼠血糖(见图3)、改善I型糖尿病小鼠多饮多食症状(见图5和图6)，并改善I型糖尿病小鼠肌酐清除率和降低尿白蛋白含量，从而减轻糖尿病小鼠肾脏损害(见图7和图8)。

以上结果表明，双醋瑞因化合物对四氧嘧啶诱导的小鼠I型糖尿病及并发症有治疗作用。

实验例2、双醋瑞因对链脲佐菌素诱导的II型糖尿病的治疗作用

实验方法：将链脲佐菌素100mg/kg尾静脉注射于体重20±1g的C57BL/6小鼠，同时腹腔注射烟酰胺100mg/kg，每周1次，共注射3次。末次注射后1周，尾端采血测定空腹血糖，以空腹血糖在9-12mmol/L的小鼠为II型糖尿病小鼠。

将入选小鼠按血糖高低随机分组：模型对照组：静脉注射或灌胃给予等容量溶剂；治疗组：灌胃给药，双醋瑞因100mg/kg，每组10只小鼠，雌雄各半，每日给药1次，连续8周。第5周、第8周治疗结束时各测1次空腹血糖(禁食12h以上)，治疗结束时眼眶静脉采血分离血清，随后将小鼠处死，切除肾脏，用PBS匀浆后离心取上清用于测组织TGF-β1。血清及组织TGF-β1用ELISA试剂盒检测。

结果：双醋瑞因可以降低链脲佐菌素诱导的II型糖尿病小鼠血清及肾脏TGF-β1(见图1和图2)，也可以降低链脲佐菌素诱导的II型糖尿病小鼠血糖(见图4)。

以上结果表明，双醋瑞因对链脲佐菌素诱导的II型糖尿病有治疗作用。

实验例3、双醋瑞因四氧嘧啶诱导的小鼠I型糖尿病的预防作用

糖尿病模型建立同实验1，从模型建立前7天开始给与药物，剂量同实验1，每天给药1次，连续给药到最后1次给予四氧嘧啶后2周，检测空腹血糖。

结果：双醋瑞因可以阻止四氧嘧啶诱导的小鼠I型糖尿病血糖升高(见图9)。

以上结果表明，双醋瑞因对四氧嘧啶诱导的小鼠I型糖尿病有预防作用。

实验例4、双醋瑞因对链脲佐菌素诱导的II型糖尿病的预防作用

糖尿病模型建立同实验2，从模型建立前7天开始给与药物，剂量同实验2，每天给药1次，连续给药到最后1次给四氧嘧啶后2周，检测空腹血糖。

结果：双醋瑞因可以阻止链脲佐菌素诱导的II型糖尿病血糖升高(见图9)。

以上结果表明，双醋瑞因对链脲佐菌素诱导的II型糖尿病有预防作用。

实验例5、双醋瑞因对正常小鼠糖耐受量的影响

使用正常小鼠，剂量同实验2，每天给药1次，连续给药10天。最后1次给药前禁食12h以上，给药前测量血糖1次计为0h血糖，给药后立即灌胃葡萄糖5g/kg，测量给药后1h及2h时的血糖，以1h与2h之间的血糖差为糖耐受量。

结果：双醋瑞因均可以不同程度的提高正常小鼠的糖耐受量(见图10)。

以上结果表明，双醋瑞因对正常小鼠糖耐受量有提高作用。

本发明所述双醋瑞因可以降低四氧嘧啶诱导的I型糖尿病小鼠和链脲佐菌素诱导的II型糖尿病小鼠血清及肾脏中TGF-β1水平，还可以降低四氧嘧啶诱导的I型糖尿病小鼠和链脲佐菌素诱导的II型糖尿病小鼠血糖、改善I型糖尿病小鼠多饮多食症状，并减轻I型糖尿病小鼠肾脏损害。另外，发明所述双醋瑞因可以阻止四氧嘧啶诱导的I型糖尿病小鼠和链脲佐菌素诱导的II型糖尿病小鼠血糖升高，提高正常小鼠的糖耐受量。以上结果表明本发明所述双醋瑞因具有预防及治疗糖尿病肾病的作用。

实验例6、双醋瑞因对db/db小鼠糖尿病的治疗作用

使用9周龄的db/db及db/m小鼠进行试验，雌雄各半,随机分成三组，每组10只：A组，db/m对照组；B组，db/db对照组；D组,db/db双醋瑞因治疗组。治疗组每日早间固定时间以双醋瑞因80mg/kg灌胃一次，对照组给以相同剂量的生理盐水，共给药12周。实验结束时宰杀小鼠,迅速剥离双侧肾脏，称重，固定，行病理检查。实验期间，小鼠在层流柜中饲养，所有器具及食物均消毒，无菌操作。小鼠自由进食、进水,保持垫料干燥，12h交替照明。治疗结束时眼眶静脉采血分离血清，随后将小鼠处死，切除肾脏，用PBS匀浆后离心取上清用于测组织TGF-β1。

表1.双醋瑞因对db/db小鼠体重、血糖、白蛋白排泄和肾功能的影响

*P＜0.01 vs db/m正常小鼠组;#P＜0.01 vs db/db糖尿病小鼠组

上述试验数据表明双醋瑞因对db/db小鼠具有良好的治疗效果，并能显著地改善db/db小鼠糖尿病肾病的相关表征。

实验例7、体外D-葡萄糖-牛血清白蛋白蛋白质非酶糖基化反应体系测定双醋瑞因、大黄酸和氨基胍的抑制作用

体外糖基化反应系统葡萄糖终浓度200mmol/L，牛血清白蛋白终浓度10mg/ml，叠氮钠0.2mg/ml，PBS缓冲液0.2mol/L，pH为7.4。反应体积为葡萄糖1ml，牛血清白蛋白1ml，PBS 0.85ml，受试药物0.15ml，终体积3ml。配制化合物和氨基胍终浓度分别为1mM，0.5mM，0.25mM，0.125mM，0.0625mM，0.03125mM，0.015625mM，分别加入糖基化系统中。另设对照：①不加药物的完整糖基化系统；②加药物不含葡萄糖的糖基化系统；③不加药物不含葡萄糖的糖基化系统，反应体系需无菌操作，糖基化和各对照体系均在37℃恒温、密封条件下反应。1周后，测定各管的荧光值(F)。

AGEs测定采用960MC型荧光分光光度计，激发波长370nm，发射波长440nm，灵敏度2，增益2。

计算各种药物对糖基化反应的抑制作用，以抑制率(IR)表示。计算公式：IR＝1-[药物管(F)-对照管(2)(F)/[对照管(1)(F)对照管(3)(F)]×100％。

根据抑制率和药物浓度按Logit法计算IC₅₀。

双醋瑞因和大黄酸半数抑制浓度IC₅₀值分别为39.08μM和87.54μM，低于阳性对照氨基胍半数抑制浓度IC₅₀值123.48μM。

所述数据表明，双醋瑞因可用于制备治疗糖尿病肾病产品，且显著优于大黄酸。

虽然作用机制比较复杂，但从上述数据能够推测得到双醋瑞因可以抑制蛋白质非酶糖基化终末产物的形成，并具有治疗糖尿病肾病的良好前景。

下面的实施例用于进一步说明双醋瑞因剂型但不限于本发明。

实施例1：双醋瑞因片剂

取双醋瑞因20g，加入常规辅料，按照常规工艺制成片剂，用于预防及治疗糖尿病肾病，日服用剂量为300-1000mg/日。

双醋瑞因、微晶纤维素、乳糖、羧甲基淀粉钠分别过100目筛混合均匀，以含吐温80的HPMC溶液为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，湿颗粒于50-60℃烘箱鼓风干燥；干颗粒过20目筛整粒，与硬脂酸镁混匀，压片。

实施例2：双醋瑞因胶囊剂

取双醋瑞因20g，加入常规辅料，按照常规工艺制成胶囊剂，用于预防及治疗糖尿病肾病，日服用剂量为300-1000mg/日。

双醋瑞因、微晶纤维素、乳糖、羧甲基淀粉钠分别过100目筛混合均匀，以含吐温80的HPMG溶液为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，湿颗粒于50-60℃烘箱鼓风干燥；干颗粒过20目筛整粒，与硬脂酸镁混匀，灌装于胶囊中。

实施例3：双醋瑞因注射用乳剂

取双醋瑞因20g，加入常规辅料，按照常规工艺制成注射用乳剂，用于预防及治疗糖尿病肾病，日给药剂量为300-1000mg/日。

在氮气流下，将豆磷脂加入大豆油搅拌使其溶解，加入甘油和双醋瑞因搅拌溶解，搅拌条件下慢慢加入注射用水，经二步高压乳匀机乳化；仍在氮气流下，用4号垂熔玻璃漏斗减压过滤，并在氮气流下装瓶轧盖，先经预热再于121℃灭菌15分钟，灭菌完毕后，冲热水逐渐冷却即得。

本例中还可选用以下辅料：注射用油如；油酸乙酯、聚乙二醇400、棉籽油、花生油、麻油、玉米油，橄榄油、肉豆蔻酸异丙酯等；抗氧剂如：没食子酸丙酯、特丁基苯酚(BHT)、维生素E等；表面活性剂如：吐温类、聚氧乙烯蓖麻油、磷脂类、普流罗尼等。

实施例4：双醋瑞因注射剂

取双醋瑞因10g，加入常规辅料，按照常规工艺制成注射剂，用于预防及治疗糖尿病肾病，日给药剂量为300-1000mg/日。

双醋瑞因                        10g

注射用水加至                        5L

取双醋瑞因10g，加入注射用水中，充分溶解，加入0.1％活性炭，加热煮沸15分钟，过滤除炭，调pH值至5.0～7.0，测中间体含量、pH值，合格后，灌封于玻璃安剖中，100℃，30分钟流通蒸气灭菌，得双醋瑞因注射剂。

实施例5：注射用双醋瑞因复合物粉针剂的制备

双醋瑞因复合物            15.0g

甘露醇                    16.0g

注射用水至                10000ml

取双醋瑞因复合物(可以是双醋瑞因的精氨酸、赖氨酸、氨基葡萄糖、葡甲胺等复合物)置适宜容器中，加注射用水9000ml，搅拌均匀，超声至溶解，加入甘露醇搅拌使溶解；按0.1％加入针用活性炭，搅拌30分钟，经钛砂芯脱碳抽滤到洁净的容器中，补加注射用水至10000ml，将溶液搅拌5分钟使均匀，再经0.22μm微孔滤膜过滤，滤液灌装在西林瓶中，然后部分地塞上丁基橡胶赛，送至冻干箱内的板层上，插入温度探头，关闭箱门。按冻干曲线冷冻干燥，最后干燥温度为35℃以上并保持2小时。密塞，放气，出箱，轧盖。

Claims (10)

1.双醋瑞因在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途。 

2.根据权利要求1所述的双醋瑞因在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途，其特征是将所述的双醋瑞因作为药物有效成分的原料，与药学上接受的药用辅料组合，制成用于预防及治疗糖尿病肾病的药物组合物，该组合物含有治疗有效剂量的上述双醋瑞因和药学上可接受的载体。 

3.根据权利要求2所述的双醋瑞因在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途，其特征是制备成药物制剂：片剂、胶囊剂、软胶囊、凝胶剂、口服剂、混悬剂、冲剂、贴剂、软膏、丸剂、散剂、注射剂、输液剂、冻干注射剂、静脉乳剂、脂质体注射剂、栓剂、缓释制剂或控释制剂。 

4.根据权利要求2所述的双醋瑞因在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途，其特征是药用组合物优选双醋瑞因含量为1wt％～95wt％。 

5.根据权利要求2所述的双醋瑞因在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途，其特征是药用组合物优选双醋瑞因含量为2.5wt％～80wt％。 

6.根据权利要求3所述的双醋瑞因在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途，其特征是药用组合物除含有治疗有效量的上述双醋瑞因为活性成分，还应含有一种或多种药学上可接受的载体、粘合剂、润湿剂、崩解剂，药物载体：稀释剂、赋形剂和水等，填充剂如淀粉、蔗糖，乳糖、微晶纤维素；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂：甘油；崩解剂：羧甲基淀粉钠，羟丙纤维素，交联羧甲基纤维素，琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇，十二烷基硫酸钠；吸附载体如高龄土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶和聚乙二醇。 

7.根据权利要求3所述的双醋瑞因在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途，其特征是双醋瑞因与不同碱基或离子形成的药用复合物与填充剂、崩解剂组配的片剂或胶囊剂；或者是双醋瑞因与不同碱基或离子形成的药用复合物与填充剂、羟丙甲纤维素K4M组配的缓释片剂或胶囊剂；或者是双醋瑞因分散于油相中得到双醋瑞因软胶囊。 

8.根据权利要求3所述的双醋瑞因在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途，其特征是所述的填充剂是蔗糖，乳糖、微晶纤维素、糊精、淀粉或磷酸钙；所述的崩解剂是羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮或交联羧甲基纤维素钠。 

9.根据权利要求3所述的双醋瑞因在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途，其特征是双醋瑞因日用剂量为100-1000mg/日。 

10.根据权利要求9所述的双醋瑞因在制备预防及治疗糖尿病肾病的药物中的用途，其特征是双醋瑞因日用剂量是300-1000mg/日。 

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