CN102058845B - 一种治疗黄斑变性的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种治疗黄斑变性的药物组合物，由黄芪、当归、茯苓、浙贝母等八味药组成；本发明药物组合物，加入常规辅料，按照常规工艺，可以制成药学上可接受的汤剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液体制剂、注射剂等各种剂型；本发明药物组合物可以提高和稳定AMD患者视力、促进出血吸收、减少黄斑区CNV荧光渗漏，标本辨治体现中医改善视觉功能的优势；本发明所采用的眼底血管荧光素造影检查、病理学检查和脉络膜血管铺片相结合能较好地对CNV进行评估；根据对用药干预后模型FFA、病理学和脉络膜血管铺片等形态学方法的观察，表明本发明药物组合物对激光诱导BN大鼠CNV有较好抑制作用，在抑制或稳定脉络膜新生血管膜生长方面也具有一定作用。

Description

一种治疗黄斑变性的药物组合物
技术领域
本发明涉及一种药物组合物，特别涉及一种治疗黄斑变性的药物组合物。
背景技术
年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，AMD)多发于55岁以上老年人。AMD是以黄斑区视网膜色素上皮(RPE)、Bruch′s膜、脉络膜毛细血管的变性疾病，AMD分为干性与湿性两种类型。尤其是湿性AMD显示于黄斑部视网膜下脉络膜新生血管(choroidalneovascularization，CNV)的形成，是本病致盲的根本原因。
AMD为眼科疑难病，其发病机制至今尚不清楚，目前的治疗方法均为探索性疗法。主要包括：光动力疗法、经瞳孔温热疗法、激光光凝、放射疗法、手术治疗、药物治疗、基因疗法、中医药治疗等。光动力学疗法是目前证实比较有效的治疗方法，但其疗效是以视力不继续降低为评价标准，且此疗法价格昂贵，且需重复治疗；激光疗法对黄斑中心凹下面的新生血管光凝，通常会导致中心视力的直接下降，并且激光光凝治疗新生血管的复发率亦高；西药药物疗法目前的焦点在抗新生血管内皮生长因子抑制剂的研发上，如Pegaptanib Sodiuml(哌加他尼钠)和贝伐单抗(Bevacizumab)等，但都尚处于临床试验阶段。
从上述可见，西医目前尚没有令人满意的治疗方法，而中医药在本病的探索性治疗过程中具有一定优势。本发明通过使用光学相干断层扫描技术(optical coherence tomography，OCT)、吲哚青绿血管造影(indocyanineangiography，ICGA)等先进仪器，证实本发明药物组合物对AMD有一定的临床疗效。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗黄斑变性的药物组合物，本发明的另一个目的在于提供其制备方法，本发明的目的还在于提供其在制备治疗湿性年龄相关性黄斑变性的药物中的应用。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
本发明药物组合物的原料药组成为：
Figure GDA0000081698240000021
本发明药物组合物的原料药组成为：
Figure GDA0000081698240000022
本发明药物组合物的原料药组成优选为：
Figure GDA0000081698240000023
本发明药物组合物的原料药组成优选为：
Figure GDA0000081698240000024
本发明药物组合物的原料药组成优选为：
Figure GDA0000081698240000025
取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成药学上可接受的汤剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液体制剂、注射剂等各种剂型，其中所述常规工艺可以是水提取，加水煎煮2-3次，加水量为常规用量，合并水提取液，乙醇浓缩干燥，按照常规工艺，制成各种剂型；也可以按其他常规方法提取、纯化，真空干燥，制成各种剂型。
湿性年龄相关性黄斑变性眼底常表现为渗出、出血、水肿、色素改变和脉络膜新生血管(CNV)形成，中医多把这些眼底病理改变与“气虚”、“血瘀”及“痰淤”联系起来。本发明在中医辨证的基础上与辨病相结合，拟定益气养血助阳、凉血化瘀止血、化痰软坚三大法则，促进黄斑区渗出、水肿、出血的吸收，缩小CNV病灶，进而改善患者视力。
本发明药物组合物可以提高和稳定AMD患者视力、促进AMD患者出血吸收、减少AMD患者黄斑区CNV荧光渗漏，标本辨治体现中医改善视觉功能的优势；本发明应用氪激光诱导建立BN大鼠CNV模型，方法简单可行，经济实用，成模时间短，成模率高，可用于探讨CNV的发病机制及评估CNV治疗效果；另外，本发明所采用的眼底血管荧光素造影检查、病理学检查和脉络膜血管铺片相结合能较好地对CNV进行评估；根据对用药干预后模型FFA、病理学和脉络膜血管铺片等形态学方法的观察，表明本发明药物组合物对激光诱导BN大鼠CNV有较好的抑制作用，在抑制或稳定脉络膜新生血管膜生长方面也具有一定作用。
脉络膜新生血管膜(choroidal neovascularization，CNV)常发生于湿性年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，AMD)，中心性渗出性脉络膜视网膜病变(central exudative chorioretinitis，CEC)，病理性近视(pathologic myopia，PM)等眼底疾病。CNV通常位于黄斑中心凹下或中心凹旁，由于新生血管膜反复出血和渗出，最终形成疤痕，导致中心视力丧失。其中，黄斑变性是临床上最难治疗的一种类型。本发明人于2004年12月-2008年7月北京中日友好医院眼科门诊就诊的年龄相关性黄斑变性(AMD)，中心性渗出性脉络膜视网膜病变(CEC)或病理性近视所导致的脉络膜新生血管膜病变的病例进行临床实验摸索，采用黄芪20g 当归20g 三七6g 生蒲黄20g 陈皮15g 浙贝10g 郁金20g 枳壳10g 茯苓20g，每天1剂水煎200mL，早晚各1次口服，每次100mL，疗程3个月，该组合物虽然针对三种病例的整体有较高的有效率，但针对最难治疗的黄斑变性的效果并不明显。本发明新的组方，在针对黄斑变性的病例上显示出突出的临床效果。
说明书附图
图1：治疗前眼底黄斑区出血面积图
图2：治疗后眼底黄斑区出血面积图
图3：治疗前眼底血管荧光造影新生血管渗漏面积图
图4：治疗后眼底血管荧光造影新生血管渗漏面积图
图5：治疗前OCT检查图
图6：治疗后OCT检查图
图7：BN大鼠模型光凝前、光凝后彩照及造影的图像
A：光凝前、B：光凝后C：造影
图8：实验例2中FFA结果
A：正常组无荧光素渗漏
B：模型组光凝区可见大量的荧光素渗漏。
C：中药组光凝区可见有荧光素渗漏较轻。
D：对照组光凝区可见有荧光素渗漏较轻。
图9：实验例2中病理结果图
A：正常组视网膜及脉络膜B：模型组C：中药组D：对照组
图10：实验例2中电镜结果图
A：正常组B：模型组C：中药组D：对照组
图11：实验例2中脉络膜血管铺片结果图
A：正常组B：模型组C：中药组D：对照组
下述实验例和实施例进一步证明但不限于本发明。
实验例1：本发明药物组合物治疗湿性年龄相关性黄斑变性的临床疗效观察
1、对象与方法
1.1 临床资料
观察病例均来源于2008年7月-2010年1月北京中日友好医院眼科门诊就诊的渗出型AMD，眼底荧光造影下表现为典型脉络膜新生血管(choroidalneovascularization，CNV)的患者。中药组70例85只眼，男性37例(52.86％)，女性33例(47.14％)；患者年龄50-70岁，平均年龄58.21±7.21岁，病程0.5个月-40月，平均8.63±7.24月。男性13例，女性17例；年龄50～80岁，平均54.60±12.75岁；病程0.5个月-48月，平均7.93±6.84月。
1.2 诊疗标准
1.2.1 符合西医渗出性年龄相关性黄斑变性的诊断标准；经荧光素眼底血管造影(fundus fluorescein angiography，FFA)证实有典型性CNV的患者。
上述典型性渗出型年龄相关性黄斑变性诊断标准采用《中药新药临床研究指导原则.第三辑.北京：中华人民共和国卫生部，1997：205-207》的标准：①视力迅速下降；②黄斑部玻璃膜疣、色素脱失、出血、渗出、视网膜脱离或纤维机化膜；③黄斑区视网膜下新生血管，边界清楚的均匀强荧光区，早期其周边被弱荧光区包围，到中晚期，荧光持续渗漏，病变边界有所模糊。
1.2.2 纳入标准
(1)符合上述疾病的西医诊断标准。(2)患者年龄在50-80岁，男女不限。(3)患者对研究人员的观察和疗效评价应有良好的依从性。(4)治疗前2-4周内未参加其他临床试验者。(5)治疗期间停用其他相关可能影响本实验结果的局部和全身用药。
1.2.3 排除标准
(1)年龄在45岁以下或者在70岁以上。(2)不符合上述西医诊断标准的病例。(3)隐匿性渗出型AMD或混合性渗出型AMD；合并青光眼、糖尿病视网膜病变、视网膜动、静脉阻塞、视神经萎缩等眼底疾病。(4)合并严重的心脑血管病、肝、肾和造血系统疾患。(5)精神病患者。(6)正在参加其他药物临床试验的患者；合并使用同类中药和其它治疗的患者；或受试者不愿参加临床试验者。
1.3 研究方法
1.3.1 治疗药物
对70例85只眼湿性AMD患者，给予按实施例1方法制备的本发明药物组合物汤剂治疗。每日一剂，早晚各服一次，每次100ml，疗程3个月。具体组方及制法为：黄芪20g、当归20g、茯苓20g、浙贝母10g、三七9g、大黄炭3g生蒲黄20g、郁金20g；取上述原料药，加水煎煮2次，加水量为常规用量，合并水提取液，制成汤剂一剂。
1.3.2 观察指标的测定及疗效判定标准
治疗前后均进行眼科检查：包括最佳矫正视力、眼压、直接检眼镜眼底检查、Amsler表、眼底彩色照相、眼底血管荧光素造影。
观察指标包括最佳矫正视力、Amsler表、眼底出血面积、眼底血管荧光造影新生血管渗漏面积、光学相干新断层扫描(optical coherence tomography，OCT)检查黄斑总容积。
最佳矫正视力检查：由两位医师使用国际标准视力表分别进行检测，两次结果在误差范围内平均，允许的误差范围是≤0.1。
Amsler表检查：在自然光线下，被检眼距Amsler表约30cru(先矫正近视力)，嘱其注视表格中央注视点，观察中央区有无黑影遮拦或发暗，方格是否规整，线条有无弯曲、中断、跳动，让患者用笔将病变范围画出。同样条件下治疗前后各检查1次。
眼底彩色照相及荧光血管造影：患者散瞳后，拍摄眼底彩色照片，然后肘静脉注射20％荧光素钠注射液3ml，拍摄FFA图象，共监测20分钟。眼底彩色照片及眼底血管荧光造影照片均输入ImageProPlus软件，用患者本人的视乳头面积(papillary diameter，PD)进行标准化，记录眼底出血面积(见附图1，附图2)、眼底血管荧光造影新生血管渗漏面积(见附图3，附图4)。
OCT检查：患者散瞳后行OCT检查：以黄斑中心凹为中心，做放射状6mm长的线性扫描，据具体情况对病变最明显的部位作详细的多方位线性扫描，治疗后取同方向线性扫描，测量黄斑总容积(见附图5，附图6)。
疗效评定标准参照文献《中药新药临床研究指导原则.第三辑.北京：中华人民共和国卫生部，1997：205-207.》、《张美霞，陆方，严密，等.光动力疗法治疗渗出型老年性黄斑变性四年临床观察总结.中华眼底病杂志，2004，20：275-279.》制定。
视力疗效评价标准：显效：最佳矫正视力提高4行或4行以上；有效：最佳矫正视力提高2行到3行；稳定：最佳矫正视力波动在1行内；无效：最佳矫正视力下降2行或大于2行。
Amsler表疗效标准：显效：Amsler表检查正常或异常格数减少10格以上；有效：Amsler表检查异常格数减少5格以上；稳定：Amsler表检查异常格数减少0-5格；无效：Amsler表检查异常格数增加。
眼底出血疗效评价标准：显效：眼底出血完全或吸收大于75％；有效：眼底出血吸收25％-75％；稳定：眼底出血吸收小于25％；无效：眼底出血增加。
CNV疗效评价标准：显效：FFA显示渗漏停止，表现为CNV无渗漏或仅表现为CNV组织着色，即CNV完全闭塞；有效：FFA显示渗漏减少，表现为CNV渗漏小于治疗前50％；稳定：FFA显示持续渗漏或渗漏增加，表现为CNV渗漏占治疗前范围50％-100％：无效：FFA显示持续渗漏或渗漏增加，表现为CNV渗漏超过治疗前范围。
1.4 统计学处理
采用SPSS13.0软件包进行统计学处理，正态分布计量资料以均数±标准差()表示，治疗前后比较采用t检验。
2、结果
2.1 眼科检查指标
2.1.1 视力 中药治疗前后相比具有统计学差异(p＜0.05)，治疗后视力提高。
表1 中药治疗前后视力比较
Figure GDA0000081698240000072
注：中药治疗前后视力差值比较，P＜0.05。
表2 中药治疗视力疗效
Figure GDA0000081698240000073
2.1.2 Amsler表 中药治疗前后相比具有统计学差异(p＜0.05)，治疗后视物变形及中心暗点好转。
表3 中药治疗前后视物变形及中心暗点比较
Figure GDA0000081698240000074
Figure GDA0000081698240000081
注：中药治疗前后视物变形及中心暗点数差值比较，P＜0.05。
表4 中药治疗Amsler表疗效
Figure GDA0000081698240000082
2.1.3 眼底出血 彩色眼底照相显示治疗前后相比具有统计学差异(p＜0.05)，治疗后眼底出血面积减少。
表5 中药治疗前后眼底出血面积(PD)比较
Figure GDA0000081698240000083
注：治疗前后眼底出血面积差值比较，P＜0.05。
表6 中药治疗眼底出血面积疗效
Figure GDA0000081698240000084
2.1.4 CNV渗漏
2.1.4.1 眼底荧光血管造影(FFA)：
表7 中药治疗前后黄斑区荧光渗漏面积疗效
2.1.4.2 光学相干断层扫描(OCT)：治疗前后黄斑总容积相比有统计学意义(p＜0.05)，治疗后黄斑总容积较治疗前减小。
表8 中药治疗前后黄斑总容积比较
注：治疗前后比较，治疗后黄斑总容积较治疗前明显减少，P＜0.05。
4 结论
实验结果显示，本发明药物组合物可以提高和稳定AMD患者视力、促进AMD患者出血吸收、减少AMD患者黄斑区CNV荧光渗漏、在抑制或稳定脉络膜新生血管膜生长方面具有明显的作用。
实验例2：本发明药物组合物干预脉络膜新生血管形成的实验研究
1 实验材料
1.1 实验动物
SPF级8周龄雄性BN大鼠48只(体重200g±10g)，购自维通利华实验动物研究所(许可证编号：SCXK京2007-0001)。实验前双眼前节和眼底检查均正常。自由饮食，在光/暗周期12h/12h(光照时间6:00-18:00)，背景噪音(40±10)db，温度(20±3)℃条件下饲养。
1.2 药品及试剂
1.2.1 实验用药
中药组：本发明药物组合物(由实施例1方法制备)。
对照组：Avastin(Roche罗氏)。
1.2.2 表9主要试剂
Figure GDA0000081698240000092
1.3 表10仪器及设备
Figure GDA0000081698240000093
Figure GDA0000081698240000101
2、模型建立和分组
2.1 模型建立
麻醉BN大鼠(10％水合氯醛溶液腹腔注射，3.5ml/kg)，复方托品卡胺充分散瞳表麻后，置于氪激光器前，将三面镜放在散瞳眼上，通过裂隙灯显微镜将瞄准光斑聚焦于视网膜上，避开大血管，用氪激光(功率360mW，直径50μm，光凝时间0.05秒)，距视盘外2-3PD做环形光凝，光凝10-12点，以击破Bruch膜为度。见附图7。
2.2 分组及用药
造模大鼠随机分为3组：中药组、对照组、模型组
中药组：本发明药物组合物自激光光凝前1周起灌胃(2ml·0.2g/0.2kg·d)，给药4周。
对照组：Avastin(Roche罗氏)。激光光凝后1周玻璃体腔注射给药1微升(25μg/1μl)，给药1次。
大鼠麻醉状态下，试验眼散瞳，生理盐水冲洗结膜囊，手术显微镜下，30G针头从颜侧角膜缘后0.5mm做一穿刺口，微量注射器从穿刺口进针，针尖朝向眼球中心，从瞳孔看见针尖后，缓缓注入Avastin1微升(25μg/1μl)，轻轻拔出针后，棉签轻压穿刺口片刻，避免药物外流。注射造成玻璃体出血和晶体损伤眼被排除试验。
正常组及模型组各12只，均以生理盐水灌胃3周(2ml/0.2kg)，2次/每日。
3、实验方法
3.1 FFA
麻醉大鼠并散瞳，彩色和无赤光眼底照相后，腹腔注射10％荧光素钠(1.0mL/kg)，同一曝光度分别拍摄1、2、3、5、10分钟照片各1张。以动脉期即开始显影，迅速扩大成强荧光斑，直至造影晚期仍持续不退，且与视网膜血管无关为荧光素渗漏判断标准。计算其荧光素渗漏率(荧光素渗漏率＝荧光渗漏点数/所观察的激光斑点数×100％)。
3.2 HE染色光镜观察
激光光凝3周后，每组选取6只大鼠。
3.2.1 取材
实验大鼠腹腔注射3％的戊巴比妥溶液深度麻醉后，腹主动脉放血处死，立即完整摘取眼球，平衡盐溶液冲洗后置于10％的甲醛溶液中固定待用；
3.2.2 固定、脱水、透明、浸蜡、包埋
脱水包埋将眼球从10％的甲醛固定液中取出，修剪多余组织后放入包埋筐内，自来水冲洗去除甲醛后，用吸水纸吸除水分，将包埋筐放入脱水机内脱水，具体步骤为：
①梯度酒精：50％、60％、75％、80％、95％I、95％II、100％I、100％II各60min；
②二甲苯I、II各45min；
③石蜡I、II、III各30min；
④脱水完毕后用溶好的石蜡包埋。
3.2.3 切片
切片将包埋好的蜡块进行切片，切片厚度4微米，将组织片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后，附于载玻片上，平放在展片器上，裱好的切片60℃恒温箱过夜，取出备用。
3.2.4 HE染色光学片制备
 ①石蜡切片脱蜡，二甲苯I、II脱蜡各15min；
②梯度酒精即出即入(浓度分别为100％I、100％II、95％I、95％II、90％、80％、70％、60％、50％)；
③流水冲洗5min；
④切片入Harris苏木素15min；
⑤流水冲洗5min；
⑥0.5％盐酸酒精分化30sec；
⑦流水冲洗10min；
⑧伊红染色10min，换两遍自来水；
⑨梯度酒精脱水(浓度分别为50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％I、II)
⑩二甲苯I、II透明各15min，滴DPX，盖玻片封片。
计算机采集数字图像。
3.3 电镜观察
激光光凝3周后，处死大鼠，迅速取出眼球，每只大鼠在光斑部位取材，将取出组织迅速固定于2.5％的戊二醛内，放4℃冰箱保存。
电镜标本的制备：
①固定一周后，0.1％二钾胂酸钠缓冲液漂洗4h以上，4℃，换5次漂洗液；
②1％饿酸-0.1mol/1二钾胂酸钠缓冲液固定2h，用双蒸水漂洗5min；
③逐级脱水：50％、70％、80％、90％乙醇各10min，换90％丙酮10min，纯丙酮(用干燥剂处理过)3次，每次10min；
④浸透和包埋：临时配制环氧树脂包埋剂，按下列浓度浸透，丙酮∶包埋剂＝1∶1，浸1h，丙酮∶包埋剂＝1∶3，浸3h，纯包埋剂浸1h，用环氧树脂包埋标本，加上编号标签，置烤箱内聚合，35℃12h，60℃24-58h；
⑤切片及染色：先切厚1um半薄切片，HE染色，做定位观察，定位后做厚50nm超薄切片，醋酸铀饱和水溶液染后再用柠檬酸铅染色，各30分钟；
⑥透射电镜观察。
3.4 脉络膜血管铺片
用高分子量异硫氰酸荧光素葡聚糖(fluoresceinisothiocyanate-dextran，FITC-D)，对脉络膜血管进行灌注。
灌注方法：麻醉大鼠后，将大鼠胸腔剪开，把23G头皮针刺入左心室，缓慢持续经心脏注入0.1MPBS(pH7.4)。当多数血液已流出、流出液不见血色后，改成用FITC-D乳酸盐林格氏液20mL(内含FITC-D100mg，明胶2g)缓慢灌流固定大鼠。灌注固定后，冰块冷冻眼球10min，立即摘除眼球、固定、取材，获得RPE-脉络膜-巩膜复合体标本。利用激光共聚焦显微镜对其观察和测量。以488mn激光激发样品，收集530nm荧光信号，计算机采集数字图像。
3.5 图像处理
图像均输入Image-proplus6.0专业图像处理软件进行分析。
3.6 结果处理
所有各组测量结果用SPSS16.0软件做统计分析比较，用单因素方差分析法进行总体样本均数的比较，组间比较用q检验，P＜0.05为有统计学意义。
4 结果
4.1 一般情况
36只BN大鼠(72只眼)行激光光凝。模型组共光凝244点，其中234点光凝时激光斑中可见气泡形成，占95.90％；光凝斑部位的视网膜呈白色，其中4点有视网膜下出血，无玻璃体出血。中药组共光凝244点，其中235点光凝时激光斑中可见气泡形成，占96.31％；光凝斑部位的视网膜呈白色，其中3点有视网膜下出血，无玻璃体出血。对照组共光凝248点，其中237点光凝时激光斑中可见气泡形成，占95.56％。光凝斑部位的视网膜呈白色，其中4点有视网膜下出血，无玻璃体出血。
4.2 FFA结果(见表11、12，附图8)
正常BN大鼠视网膜血管放射状走行，FFA检查视网膜血管管径均匀、管壁完整、管腔内荧光素充盈，脉络膜血管充盈并融合成弥漫的背景荧光，无荧光素渗漏。
光凝后7天，三组视网膜光凝区均出现圆盘状荧光素渗漏。模型组与对照组相比没有显著差异(P＞0.05)。中药组荧光渗漏范围明显小于模型组及对照组(P＜0.05)。
光凝后14天，三组视网膜光凝区均可见荧光素渗漏增加，呈早期强荧光后期荧光斑扩散且不消褪。模型组与对照组相比没有显著差异(P＞0.05)。中药组荧光渗漏范围明显小于模型组(P＜0.05)，与对照组相比无统计学差异(P＞0.05)。
光凝后21天，模型光凝区可见更多的荧光素渗漏，荧光强度也进一步加强达高峰。三组视网膜光凝区均可见有荧光素渗漏。模型组与对照组相比没有显著差异(P＞0.05)。中药组荧光渗漏范围明显小于模型组(P＜0.05)，与对照组相比无统计学差异(P＞0.05)。
表11 激光光凝后不同时间不同级别荧光渗漏光斑数及百分比
注：与对照组比较*P＜0.05；与模型组比较ΔP＜0.05，#P＜0.05
表12 荧光素渗漏积分光密度
Figure GDA0000081698240000142
注：同一时间与对照组比较*P＜0.05；与模型组比较ΔP＜0.05，#P＜0.05
4.3 病理结果(见表13、附图9)
正常视网膜及脉络膜组织：视网膜内界膜、神经纤维层、神经节细胞层、内丛状层、内核层、外从状层、外核层、外界膜、光感受器细胞层、RPE层、Bruch膜及脉络膜结构完整、层次清晰。
模型组：光凝区视网膜和脉络膜浅层毛细血管层损伤、结构紊乱。视网膜可见色素性巨噬细胞，纤维细胞增多，RPE细胞增殖，大量CNV形成，CNV中央厚度为63.59±4.08μm。
中药组：光凝区内视网膜和脉络膜浅层毛细血管层损伤、结构紊乱较轻。光凝区内可见新生血管较少，分层增殖迁移的RPE细胞、成纤维细胞和胶原纤维。CNV中央厚度为39.65±4.24μm，较模型组明显缩小(P＜0.05)。
对照组：光凝区视网膜色素上皮细胞层和Bruch膜断裂，脉络膜浅层毛细血管层损伤、结构紊乱，纤维细胞及胶原纤维增多，其间可见增殖的RPE细胞、成纤维细胞和少量的新生血管。CNV中央厚度为40.36±3.55μm，较模型组明显缩小(P＜0.05)。中药组与对照组相比没有显著性差异(P＞0.05)。
表13 各组CNV中央厚度
Figure GDA0000081698240000151
注：与对照组比较*P＜0.05；与模型组比较ΔP＜0.05，#P＜0.05
4.4 电镜结果(见附图10)
正常组BN大鼠脉络膜及各层超微结构完整，视细胞外节结构清晰，排列整齐，色素上皮细胞在近基部，胞核呈卵圆形，胞质中有较多的圆形或长橄榄形的色素颗粒。模型组脉络膜近视网膜处见有新生毛细血管管腔内附着内皮细胞胞突，红细胞游离于管腔中，形似腊肠，血管内容物较多，色素上皮细胞胞质内的细胞器结构不清，色素颗粒减少，基部的绒毛呈溶解性改变，细胞间出现空泡变，绒毛委缩。基膜和血管壁之间的结构不清，见有大量胶原纤维和弹力纤维。
4.5 脉络膜血管铺片结果(见表14、附图11)
光凝后视乳头周围的CNV与周围的脉络膜比较呈网状高荧光斑。21天后，中药组CNV面积较模型组明显缩小(P＜0.05)；对照组CNV面积较模型组明显缩小(P＜0.05)，中药组与对照组相比没有明显差异(P＞0.05)。
表14 各组CNV面积
注：与对照组比较*P＜0.05；与模型组比较ΔP＜0.05，#P＜0.05
5、结论
本发明应用氪激光诱导建立BN大鼠CNV模型，方法简单可行，经济实用，成模时间短，成模率高，可用于探讨CNV的发病机制及评估CNV治疗效果。同时，眼底血管荧光素造影检查、病理学检查和脉络膜血管铺片相结合能较好地对CNV进行评估。根据对用药干预后模型FFA、病理学和脉络膜血管铺片等形态学方法的观察，说明本发明药物组合物对激光诱导BN大鼠CNV有较好的抑制作用。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
具体实施方式
实施例1：汤剂
Figure GDA0000081698240000162
取上述原料药，加水煎煮2次，加水量为常规用量，合并水提取液，制成汤剂。
实施例2：片剂
Figure GDA0000081698240000163
Figure GDA0000081698240000171
取上述原料药，加入乙醇常温下浸渍24小时，合并提取液回收乙醇，浓缩干燥，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂。
实施例3：胶囊剂
Figure GDA0000081698240000172
取上述原料药，加入乙醇至药材量的10倍进行渗漉，回收乙醇，浓缩干燥，加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊剂。
实施例4：丸剂
Figure GDA0000081698240000173
取上述原料药，加入水提取3次，每次1个小时，合并滤液，浓缩干燥，加入常规辅料，按照常规工艺，制成丸剂。
实施例5：口服液体制剂
取上述原料药，按照常规工艺，制成口服液体制剂。

Claims (9)

1.一种治疗黄斑变性的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：
黄芪10-40重量份        当归10-40重量份
茯苓10-40重量份        浙贝母5-20重量份
三七3-18重量份         大黄炭1-10重量份
生蒲黄10-40重量份      郁金10-40重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：
黄芪10-30重量份        当归10-30重量份
茯苓12-30重量份        浙贝母6-15重量份
三七4-14重量份         大黄炭2-4重量份
生蒲黄10-30重量份      郁金10-30重量份。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：
黄芪20重量份           当归20重量份
茯苓20重量份           浙贝母10重量份
三七9重量份            大黄炭3重量份
生蒲黄20重量份         郁金20重量份；
或黄芪15重量份         当归25重量份
茯苓28重量份           浙贝母8重量份
三七6重量份            大黄炭4重量份
生蒲黄24重量份         郁金15重量份；
或黄芪26重量份         当归16重量份
茯苓18重量份           浙贝母12重量份
三七12重量份           大黄炭2重量份
生蒲黄15重量份        郁金25重量份。
4.如权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成药学上可接受的汤剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液体制剂、注射剂各种剂型。
5.如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成药学上可接受的汤剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液体制剂、注射剂各种剂型。
6.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备治疗湿性年龄相关性黄斑变性的药物中的应用。
7.如权利要求3所述的药物组合物在制备治疗湿性年龄相关性黄斑变性的药物中的应用。
8.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备治疗脉络膜新生血管膜病变的药物中的应用。
9.如权利要求3所述的药物组合物在制备治疗脉络膜新生血管膜病变的药物中的应用。
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