JP6663018B2 - 糖尿病性網膜症の治療のための漢方薬組成物 - Google Patents

Description

本発明は漢方薬組成物に関し、具体的には、糖尿病性網膜症の治療のための漢方薬組成物に関し、漢方薬分野に属する。

糖尿病は人々の健康に深刻な脅威となる世界の最も主要な疾患の１つであり、罹患率は高くて１０％に達する。約５０〜６０％の糖尿病患者は糖尿病の大血管または細小血管合併症により死亡する。糖尿病性網膜症（ＤＲ）は糖尿病の細小血管合併症における最も重要な病変の１つであり、現在失明と視覚障害の原因の第１位となっている。どのようにＤＲの発症と進行を遅らせるかが、現在の医学分野において注目され、研究の焦点となっている。ＤＲの重要な発症機序の１つは微小循環障害である。糖尿病性網膜症の全方向の制御の視点から、薬物、レーザー、手術およびその他の包括的な手段がその治療の選択肢である。糖尿病性網膜症の初期段階では漢方薬の介入が肝心であり、特に合併した黄斑浮腫による視力低下は疾病自体よりも糖尿病患者に大きな苦しみを与える。漢方薬を合理的に利用することは、糖尿病性網膜症の症状進行を遅らせ、かつ初期の黄斑浮腫の発症を予防し、視力を維持するのに有利である。漢方薬が重要な役割を演じていることは明白であるが、糖尿病黄斑浮腫は常に眼科治療の難点である。本発明は、臨床観察と実験的研究を通じて、「変換プラットフォーム」を十分に活用し、漢方薬の作用機序を解明し、臨床治療薬の開発および普及に客観的な根拠を提供する。

糖尿病性網膜症の発症過程を総合的に見れば、漢方薬の専門家に認められている病因および発症機序が「本虚標実」である。「本虚」とは糖尿病患者の大半が初期陰虚燥熱、中期気陰両虚、晩期陰陽倶虚の段階を経たことを意味する。「標実」は「気滞血淤」が微小血管病変の持続として現れる。糖尿病性網膜症は罹患してから一般的に１０〜２０年で発症し、気陰両虚、気滞血淤がその主要な発症機序である。糖尿病性網膜症の発症機序に照らして、治療において、「標治」するために眼底微小血管腫、微小出血巣、硬性白斑、浮腫および他の兆候の解消することによる活血化淤に重点を置く。全身に気陰不足の兆候が認められる場合、益気養陰および活血化淤に重点を置くことで標本兼治が行われるべきである。この基本原則に基づいて、臨床上の異なる症候群の比較および異なる治療法の網膜微小血管障害に対する影響を調べる試験などを含む糖尿病性網膜症関連の研究が多く行われた。しかし、これらの研究は、十分に標準的または体系的ではないため、欠点がある。

本発明の目的は糖尿病性網膜症の治療のための漢方薬組成物を提供することである。

本発明のもう１つの目的は、当該漢方薬組成物の糖尿病性網膜症の治療のための医薬品の調製における使用を提供することである。

本発明のもう１つの目的は、当該漢方薬組成物の黄斑浮腫の治療のための医薬品の調製における使用を提供することである。

本発明の目的は、以下の技術的解決手段により達成される。

糖尿病性網膜症の治療のための漢方薬組成物であって、当該漢方薬組成物の原薬の組成はオウギ、タイシジン、ケイシ、トウキ、サンシチ、サンヤク、タンジン、ジリュウ、ジオウおよびビャクジュツを含む。

さらに、前記漢方薬組成物の原薬の組成は、オウギ１０〜８０重量部、タイシジン５〜３０重量部、ケイシ３〜２５重量部、トウキ８〜６０重量部、サンシチ２〜１５重量部、サンヤク１０〜８０重量部、タンジン１０〜８０重量部、ジリュウ２〜１５重量部、ジオウ８〜６０重量部、およびビャクジュツ８〜６０重量部である。

さらに、前記漢方薬組成物の原薬の組成は、オウギ１５〜６０重量部、タイシジン６〜２５重量部、ケイシ５〜２０重量部、トウキ１０〜５０重量部、サンシチ３〜１２重量部、サンヤク１５〜６０重量部、タンジン１５〜６０重量部、ジリュウ３〜１２重量部、ジオウ１０〜５０重量部、およびビャクジュツ１０〜５０重量部である。

さらに、前記漢方薬組成物の原薬の組成は、オウギ２０〜５０重量部、タイシジン８〜２０重量部、ケイシ８〜１８重量部、トウキ１２〜４０重量部、サンシチ４〜１０重量部、サンヤク２０〜５０重量部、タンジン２０〜５０重量部、ジリュウ４〜１０重量部、ジオウ１２〜４０重量部、およびビャクジュツ１２〜４０重量部である。

さらに、前記漢方薬組成物の原薬の組成は、オウギ２５〜４０重量部、タイシジン１０〜１８重量部、ケイシ９〜１５重量部、トウキ１５〜３０重量部、サンシチ５〜８重量部、サンヤク２５〜４０重量部、タンジン２５〜４０重量部、ジリュウ５〜８重量部、ジオウ１５〜３０重量部、およびビャクジュツ１５〜３０重量部である。

さらに、前記漢方薬組成物の原薬の組成は、オウギ３０重量部、タイシジン１２重量部、ケイシ１０重量部、トウキ２０重量部、サンシチ６重量部、サンヤク３０重量部、タンジン３０重量部、ジリュウ６重量部、ジオウ２０重量部、およびビャクジュツ２０重量部であるか、
または、オウギ２８重量部、タイシジン１６重量部、ケイシ９重量部、トウキ２８重量部、サンシチ５重量部、サンヤク３５重量部、タンジン２８重量部、ジリュウ７重量部、ジオウ１６重量部、およびビャクジュツ２８重量部であるか、
または、オウギ３８重量部、タイシジン１１重量部、ケイシ１４重量部、トウキ１６重量部、サンシチ７重量部、サンヤク２８重量部、タンジン３５重量部、ジリュウ５重量部、ジオウ２８重量部、およびビャクジュツ１６重量部である。

前記タイシジンはニンジンまたはセイヨウジンで代替されることができる。

前記ビャクジュツは炒めビャクジュツが好ましい。前記ジオウは生ジオウが好ましい。

本発明の前記漢方薬組成物は前記原薬を混合および粉砕して得た組成物であってもよいし、原薬を混合して従来の抽出方法により抽出される抽出物、または抽出物をさらに精製して得た薬用部位、またはさらに従来の製剤調製工程により調製された従来の経口剤形であってもよい。

そのうち、前記従来の抽出方法は浸漬抽出、煎出抽出、還流抽出、浸出抽出、超音波抽出などを含む。抽出用溶媒は水、２０〜９５％エタノール溶液を含む。前記精製工程はエタノール沈殿、抽出、シリカゲルカラムクロマトグラフィー分離、マクロポーラス樹脂カラム分離などを含む。前記従来の経口剤形は散剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、経口液剤、丸剤などを含む。

本発明の漢方薬組成物の調製方法では、割合で原薬をそれぞれ取り、水または有機溶媒で従来の抽出方法により抽出し、かつ従来の製剤製造工程により従来の経口剤形を調製する。

前記従来の抽出方法は煎出抽出、還流抽出、浸漬抽出、超音波抽出もしくは浸出抽出などの従来の抽出方法の中のいずれか１つ、または複数の抽出方法の組み合わせを含む。前記有機溶媒は２０〜９５％エタノール溶液である。前記従来の経口剤形は顆粒剤、錠剤、散剤、カプセル剤、経口液剤、丸剤などを含む。

本発明の前記剤形を可能にするため、これらの剤形を調製する際、薬学的に許容される賦形剤、例えば、充填材、崩壊剤、潤滑剤、懸濁化剤、結合剤、甘味剤、矯味剤、防腐剤、基剤などを添加する必要がある。充填材はデンプン、アルファ化デンプン、乳糖、マンニトール、キチン、微結晶セルロース、スクロースなどを含む。崩壊剤はデンプン、アルファ化デンプン、微結晶セルロース、カルボキシメチルスターチナトリウム、ポリビニルポリピロリドン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウムなどを含む。潤滑剤はステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、シリカなどを含む。懸濁化剤はポリビニルピロリドン、微結晶セルロース、スクロース、寒天、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどを含む。結合剤はデンプンペースト、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどを含む。甘味剤はサッカリンナトリウム、アスパルテーム、スクロース、サイクラミン酸ナトリウム、グリシルレチン酸などを含む。矯味剤は甘味剤および様々な香料を含む。防腐剤はニパギン類、安息香酸、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびその塩、臭化ベンゾドデシニウム、酢酸クロルヘキシジン、ユーカリ油などを含む。基剤はＰＥＧ６０００、ＰＥＧ４０００、虫蝋などを含む。前記剤形で漢方薬薬剤学を実現させるため、これらの剤形を調製する際、薬学的に許容されるその他の賦形剤（範碧亭「漢方薬薬剤学」、上海科学出版社１９９７年１２月第１版に記載の賦形剤）を添加する必要がある。

本発明の漢方薬組成物はオウギ、タイシジン、ケイシ、トウキ、サンシチ、サンヤク、タンジン、ジリュウ、ジオウ、ビャクジュツの生薬での投入形態を採用するほか、上記生薬の抽出物（薬用部位）での投入形態を採用することができる。そのため、本発明はさらに糖尿病性網膜症の治療のための漢方薬組成物を開示する。

糖尿病性網膜症の治療のための漢方薬組成物の原薬の組成は、オウギ抽出物１０〜８０重量部、タイシジン抽出物５〜３０重量部、ケイシ抽出物３〜２５重量部、トウキ抽出物８〜６０重量部、サンシチ抽出物２〜１５重量部、サンヤク抽出物１０〜８０重量部、タンジン抽出物１０〜８０重量部、ジリュウ抽出物２〜１５重量部、ジオウ抽出物８〜６０重量部、およびビャクジュツ抽出物８〜６０重量部である。

さらに、前記漢方薬組成物の原薬の組成は、オウギ抽出物１５〜６０重量部、タイシジン抽出物６〜２５重量部、ケイシ抽出物５〜２０重量部、トウキ抽出物１０〜５０重量部、サンシチ抽出物３〜１２重量部、サンヤク抽出物１５〜６０重量部、タンジン抽出物１５〜６０重量部、ジリュウ抽出物３〜１２重量部、ジオウ抽出物１０〜５０重量部、およびビャクジュツ抽出物１０〜５０重量部である。

さらに、前記漢方薬組成物の原薬の組成は、オウギ抽出物２５〜４０重量部、タイシジン抽出物１０〜１８重量部、ケイシ抽出物９〜１５重量部、トウキ抽出物１５〜３０重量部、サンシチ抽出物５〜８重量部、サンヤク抽出物２５〜４０重量部、タンジン抽出物２５〜４０重量部、ジリュウ抽出物５〜８重量部、ジオウ抽出物１５〜３０重量部、およびビャクジュツ抽出物１５〜３０重量部である。

さらに、前記漢方薬組成物の原薬の組成は、オウギ抽出物３０重量部、タイシジン抽出物１２重量部、ケイシ抽出物１０重量部、トウキ抽出物２０重量部、サンシチ抽出物６重量部、サンヤク抽出物３０重量部、タンジン抽出物３０重量部、ジリュウ抽出物６重量部、ジオウ抽出物２０重量部、およびビャクジュツ抽出物２０重量部である。

前記原薬の抽出物は各原薬の水抽出物であってもよいし、有機溶媒抽出物、または水抽出物／有機溶媒抽出物をさらに精製して得た精製物であってもよい。

前記有機溶媒は２０〜９５％エタノール溶液である。

前記抽出物を調製するための抽出方法は煎出抽出、還流抽出、浸漬抽出、超音波抽出もしくは浸出抽出などの当該分野の従来の抽出方法の中のいずれか１つ、または複数の抽出方法の組み合わせを含む。前記精製工程はエタノール沈殿、抽出、シリカゲルカラムクロマトグラフィー分離、マクロポーラス樹脂カラム分離などを含む。

本発明の漢方薬組成物は、主にオウギ、ニンジン、ケイシ、サンシチ、タンジン、ジリュウなどの生薬から構成される。そのうち、オウギ、ニンジン、ケイシは温陽、健脾、益気、および昇陽の作用があり、血流を促し、血液供給を促進することができる。サンシチ、タンジン、ジリュウは止血、活血、通絡、および化淤の作用を有すると同時に、血小板凝集能を低下させ、血液の粘度を低下させ、フリーラジカルを除去し、虚血性損傷を軽減し、微小循環を改善し、低酸素症に対する体の抵抗力を強める作用があり、血管を拡張し、血流量を増加させ、虚血状態を改善し、血液凝固を阻害し、遊走能を促進し、血液のレオロジーを改善し、血液の粘度を低下させ、血小板凝集能を低下させ、血栓形成を抑制し、微小循環を改善し、障害を引き起こす可能性のある微小循環を促進し、血流を促す作用がある。全体として、漢方医学の益気、温陽、活血、および通絡の治療原則に合致する。臨床試験により、本発明の漢方薬組成物は黄斑浮腫を有する患者に対する治療効果が確実であり、その視力および視野を効果的に向上させることができ、眼底病変を緩和し、黄斑浮腫の軽減に対して有効な作用があり、その作用が複方血栓通カプセルより優れることが示唆された。

消化網膜伸展標本の顕微鏡観察の結果を示す図である。Ａは正常群、Ｂはモデル群、Ｃは実験群、Ｄは対照群である。 網膜パラフィン切片の光学顕微鏡観察の結果を示す図である。Ａは正常群、Ｂはモデル群、Ｃは実験群、Ｄは対照群である。 網膜パラフィン切片の免疫組織化学染色の結果を示す図である。Ａは正常群、Ｂはモデル群、Ｃは実験群、Ｄは対照群を示す図である。 網膜の電子顕微鏡観察の結果を示す図である。Ａは正常群、Ｂはモデル群、Ｃは実験群、Ｄは対照群を示す図である。

実験例１ 本発明の漢方薬組成物の糖尿病性網膜症の治療に関する臨床実験
１ 試料と方法
１．１ 一般情報。研究対象はいずれも２０１４年１月から２０１５年７月までに糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）と診断された患者８０例（１２８の目）である。そのうち、治療群は４９例（８０の目）、対照群は３１例（４８の目）である。治療群は男性１８例（２９の目）、女性３１例（５１の目）で平均年齢は５９．８０±１０．２１歳で、経過年数は７．４１±４．６２年である。対照群は男性１１例（１７の目）、女性２０例（３１の目）で、平均年齢は５７．６３±１２．１２歳で、経過年数は８．１７±５．３４年である。

１．２ 診断基準は、「ＤＭＥ国際臨床分類」、「米国ＤＲ初期治療研究グループＥＴＤＲＳ」、「漢方薬新薬臨床研究ガイドライン」、「糖尿病性網膜症の治療のための臨床研究ガイドライン」に基づいて制定された。

臨床診断：
（１）病歴：糖尿病性網膜症の病歴がある。
（２）症状：初期には目に軽度の視界ぼやけの自覚症状があり、長期経過の場合、程度の異なる視力低下があり、目の前を黒いものが飛び、または視野が歪み、ひいては失明する。
（３）徴候：糖尿病黄斑浮腫：「糖尿病黄斑浮腫の国際臨床分類基準」により、軽度、中度、重度と分類される。軽度ＤＭＥの場合は、後極部網膜にある程度の肥厚と硬性白斑とがあるが、肥厚および硬性白斑は黄斑部の中心から遠い。中度ＤＭＥの場合は、後極部網膜にある程度の肥厚および硬性白斑があり、肥厚および硬性白斑は黄斑部の中心に近いが中心部にはない。重度ＤＭＥの場合は、網膜の肥厚と硬性白斑が黄斑部の中心にある。
（４）蛍光眼底血管造影（ＦＦＡ）：「米国ＤＲ初期治療研究グループ基準ＥＴＤＲＳ」により、ＤＭＥは、局所性浮腫、びまん性浮腫および嚢胞性浮腫（びまん性浮腫として統計）に分類される。局所性浮腫の場合は、黄斑が局所的な浮腫を呈し、黄斑の毛細血管の拡張および微小動脈瘤からの蛍光漏出が認められる。びまん性浮腫の場合は、範囲は２ＰＤ以上で、かつ黄斑の無血管領域に侵入する。大量の毛細血管が漏出し、上部と下部血管弓に拡散し得る。嚢胞性浮腫の場合は、局所性浮腫が深刻になれば、毛細血管の漏出が上部と下部血管弓に拡散しないが、ＦＦＡ晩期フルオレセイン漏出はバックリングの周りに分布されて花弁状またはリング状の高輝度蛍光を呈する。

１．３ 選択基準
（１）蛍光眼底血管造影（ＦＦＡ）に基づき、１〜３型糖尿病性網膜症と黄斑浮腫とを同時に患う症例が選択された。
（２）西洋医学の黄斑浮腫診断基準に合致する者。
（３）年齢が１８〜７０歳の者。
（４）２週間以内にその他の臨床試験に参加しない者。
（５）２週間以内に本病気に関する治療薬を服用しない者。
（６）同意文書に署名する者。

１．４ 治療方法
治療群の患者は本発明の漢方薬組成物（実施例１の方法に従って調製）１回１００ｍｌを１日２回、３ヶ月連続服用した。
対照群の患者は複方血栓通カプセル１回３錠を１日３回服用する。複方血栓通カプセルは「中国薬典」（２０１５年版）に記載されており、その原料はサンシチ、オウギ、タンジン、ゲンジンであり、それは活血化淤および益気養陰の作用がある。視力低下または視覚異常、網膜出血が現れる血淤兼気陰両虚証の網膜静脈閉塞症の治療に用いられる。

１．５ 観察指標
（１）治療前後の最高矯正視力（国際標準視力表）
（２）ＯＣＴで測定された中心窩の厚さ（ＴＯＰＣＯＮ３ＤＯＣＴ−１０００）
（３）眼底カラー撮影でカウントされた微小血管腫の数（Ｔｏｐｃｏｎ ＴＲＣ−５０ＤＸ）
（４）蛍光眼底血管造影により測定された漏出面積（Ｔｏｐｃｏｎ Ｃｏｒｐ）
視力治療効果の評価基準は以下のとおりである。国際標準視力表を使用し、最高矯正視力は１週間以内に安定する。無光感知から光感知計まで２行あり、光感知、手動、指数、０．０２、０．０４、０．０６、０．０８、０．１の間隔はいずれも１行である。治療後視力向上が２行以上の場合は有効である。視力が１行向上または視力不変であるが、眼底の状態が改善した場合は安定である。視力が低下した場合は無効である。

１．６ 統計方法
ソフトウェアＳＰＳＳ１９．０を使用して統計処理を行い、治療前後の正規分布データに対してはサンプルペアｔ検定を使用し、非正規分布データに対してはノンパラメトリック検定を使用し、結果は平均値±標準偏差
で表し、Ｐ＜０．０５を統計的有意差とした。

２ 結果
２．１ 視力
治療前の患者の視力分布を表１に示す。１ヶ月間治療後の視力変化を表２に示す。群内の比較には、ｔ検定を用いた。治療前に比べて、治療群と対照群の視力はいずれも向上し、統計的有意差（Ｐ＜０．０５）が認められた。群間の比較には、χ^２検定を使用した。治療群は対照群に比べて、視力の変化に有意差（Ｐ＞０．０５）が認められなかった。３ヶ月間治療後の視力変化を表３に示した。群内の比較では、ｔ検定を用いた。治療前に比べて、治療群と対照群の視力はいずれも著しく向上し、統計的有意差（Ｐ＜０．０５）が認められた。群間の比較では、χ^２検定を使用した。２群間の視力変化に有意差が（Ｐ＞０．０５）認められなかった。以上より、治療群と対照群とはいずれもＤＭＥ患者の視力を向上させることができるが、両者が視力に対する改善の程度に有意差が認められないことが示唆された。

２．２ 中心窩の厚さ
すべての患者に関して治療前後にＯＣＴ検査で測定した中心窩の厚さの変化を表４に示す。ノンパラメトリック検定を使用した統計結果により、１ヶ月間治療後、治療群の中心窩の厚みの減少幅が対照群より大きく、統計的有意差（Ｐ＜０．０５）が認められた。３ヶ月間治療後、対照群に比べて、治療群の中心窩の厚みの減少がもっと顕著であり、統計的有意差（Ｐ＜０．０５）が認められた。以上より、治療群の黄斑浮腫の軽減は対照群より優れ、かつ治療効果が安定すると考えられた。

２．３ 微小血管腫の数
治療前後に眼底カラー撮影で微小血管腫の数をカウントし、具体的に表５に示した。ノンパラメトリック検定を使用したところ、１ヶ月間治療後、治療群の微小血管腫の数の変化は対照群に対して有意差が認められず（Ｐ＞０．０５）、３ヶ月間治療後、微小血管腫の数の減少傾向は治療群が対照群より有意に優れ、統計的有意差（Ｐ＜０．０５）が認められた。以上より、本発明の漢方薬組成物はレーザーを併用してＤＲを治療する場合、微小血管腫の変化は３ケ月後から優位性を発揮できることが示唆された。

２．４ 漏出面積
治療前後に蛍光眼底血管造影により漏出面積の変化を算出し、具体的に表６に示した。ノンパラメトリック検定を使用したところ、１ヶ月間治療後、治療群の漏出面積の縮小が対照群より有意に優れ、統計的有意差（Ｐ＜０．０５）が認められた。３ヶ月間治療後、両群を比較した結果では、治療群の漏出面積の縮小が顕著であり、統計的有意差（Ｐ＜０．０５）が認められた。以上より、治療群は漏出面積をより小さくすることができ、かつ治療効果が安定することが示唆された。

３ 結論
本発明の漢方薬組成物は黄斑浮腫を有する患者に対する治療効果が確実であり、患者の視力および視野を向上させ、中心窩の厚さを薄くし、漏出面積を縮小させ、微小血管腫の数を減少させることができる。

実験例２ 本発明の漢方薬組成物の網膜血管病変の治療に関する実験研究（一）
１ 実験方法
１．１ モデリングとグループ分け：体重１４０〜１６０ｇのＶＡＦのＳＤ系の雄ラットを選んだ（維通利華実験動物技術社から購入、中日友好病院臨床医学研究所実験動物センターで飼育）。実験期間中、ラットに飼料と水を自由に摂取させた。標準ラット飼料は北京九江顆粒飼料工場から購入し、ケージとパディングは北京柯林実験動物サービスセンターから購入した。ラットを１週間予備飼育した後、体重１８０〜２００ｇのラットは全部で７０匹であり、正常群を除き、その他のモデリング前のラットを１２時間絶食させ、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を腹腔内投与した。ＳＴＺは投与直前に無菌の０．１ｍｍｏｌ／Ｌを使用し、ｐＨ４．４のクエン酸ナトリウム緩衝液で１％ＳＴＺ溶液に配合し、６５ｍｇ／Ｋｇを左下腹腔内投与した。正常対照群には同量の生理食塩水を投与した。７２時間後、尾静脈血を採取し、高速の血糖値測定器（Ｒｏｃｈｅ血糖測定器、楽康全血糖試験片）で血糖を測定した。非空腹時血糖が１６．７ｍｍｏｌ／Ｌ以上である場合、糖尿病ラットモデルとした。

モデリングした後、糖尿病ラットを無作為にモデル群１０匹、実験群１０匹（実施例１に従って調製される漢方薬組成物）、正常群１０匹に分けた。実験期間は３００日間とした。

１．２ 観察方法と指標：動物を致死させた後、ラットの眼球を４％パラホルムアルデヒド溶液で固定し、消化網膜伸展標本を作製し、ＰＡＳ−Ｈ染色を行った。血管内皮細胞（Ｅ）を観察し、周皮細胞（Ｐ）をカウントし、Ｅ／Ｐを算出した。パラフィン包埋により網膜切片を作成し、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）および最終糖化生成物（ＡＧＥｓ）の発現を観察した。新鮮な眼球溶解パルプについては、ＲＴ−ＰＣＲでＶＥＧＦｍＲＮＡ、ＰＥＤＦｍＲＮＡ，ＩＣＡＭ−１ｍＲＮＡおよびＲＡＧＥのｍＲＮＡレベルを測定した。イメージアナライザーで免疫組織化学的染色強度を測定し、定量分析を行った。ＳＰＳＳ １３．０統計解析ソフトウェアを使用してデータに対して統計処理を行った。

２ 実験結果
２．１ 消化網膜伸展標本の内皮細胞（Ｅ）、周皮細胞（Ｐ）の数およびＥ／Ｐの結果を表７に示す。

以上より、モデル群は正常群に比べ、内皮細胞の増殖が顕著であり、周皮細胞が有意に減少した（Ｐ＜０．０１）。他方では、実験群および正常群はモデル群に比べ、このような変化が有意に軽減し（Ｐ＜０．０１）、Ｅ／Ｐに有意差が認められた。被験物質は内皮細胞増殖を抑制し、周皮細胞の選択的な喪失を軽減させる作用があると考えられる。それにより糖尿病性網膜症の症状進行を遅らせることが示唆された。

２．２ 作用機序に関する研究
研究により、本発明の漢方薬組成物は糖尿病ラットの網膜におけるＡＧＥｓとＲＡＧＥ ｍＲＮＡの発現を低下させ、ＡＧＥｓの内皮細胞、周皮細胞および基底膜における沈着を軽減させ、内皮細胞に対する刺激を軽減し、それによりＶＥＧＦの産生を減少させ、さらに血管壁の機能障害の症状を軽減させた。網膜毛細血管のＩＣＡＭ−１と網膜のＩＣＡＭ−１ ｍＲＮＡの発現を低下させることにより、白血球と血管内皮細胞の接着を軽減させた。網膜および毛細血管のＶＥＧＦと網膜のＶＥＧＦ ｍＲＮＡの発現を低下させることにより、血管透過性を低下させ、ＩＣＡＭ−１の発現を低下させた。網膜のＰＥＤＦと網膜のＰＥＤＦ ｍＲＮＡの発現を向上させることができ、それによって新生血管の形成を阻害することが示唆された。

実験例３ 本発明の漢方薬組成物の糖尿病ラットの網膜血管病変の治療に関する実験研究（二）
１ 材料と方法
１．１ 実験動物とグループ分け
４８匹の体重（２２０±２０）ｇのＳＰＦの６週齢のＳＤ系の雄ラットを選んだ（華阜康バイオテクノロジー社から購入）。ラットを１週間予備飼育した後、無作為にモデル群３６匹および正常群１２匹に分けた。モデリング前にラットを１２時間絶食させ、１％ＳＴＺ溶液６０ｍｇ／ｋｇを単回腹腔内投与し、実験的糖尿病ラットモデルを誘導した。正常群のラットに同量の生理食塩水を投与した。７２時間後、血糖値をモニタリングし、尾静脈血を採取し、連続３日間の血糖値が１６．７ｍｍｏｌ／Ｌ以上の場合、モデリングに成功したものとした。さらにモデリングに成功したラットを無作為にモデル群１２匹、漢方薬組成物実験群１２匹（実験群という）、およびＤｏｂｅｓｔ（ドベシル酸カルシウム）対照群（対照群という）１２匹に分けた。実験群と対照群のラットに対してはモデリングから投与し始めた。実験群のラットへの投与量は１０ｍｌ／（ｋｇ・ｄ）とした。対照群のラットへの、２ｍｌの蒸留水で溶解したＤｏｂｅｓｔ（ドベシル酸カルシウム）粉末の投与量は２５０ｍｇ／（ｋｇ・ｄ）とした。正常群とモデル群のラットには、毎日蒸留水２ｍｌを胃内投与した。実験期間中、全てのラットに飼料と水を定時に与えた。毎月ラットの体重と血糖値の変化をモニタリングした。９ヶ月後に試料を採取した。

１．２ 消化網膜伸展標本の作製
各群から無作為に６匹のラットの一方の眼球を取って消化網膜伸展標本を作製した。作製方法は以下のとおりである。眼球を４％パラホルムアルデヒド溶液で４８時間固定してから、流水で５分間洗浄し、鋸歯状エッジリングで強膜を切り、前眼部を除去し、視神経乳頭を中心として後眼杯をミカンの房のように３つに切り、網膜を分離した。ＰＢＳ（０．０１ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ７．４）で１０分間洗浄した。３７℃下のインキュベーター内で３時間、３％トリプシンで消化した。蒸留水内で洗浄し、数回振盪すると、１層の透明な網膜血管網のみが残った。洗浄し、ガラススライド上に載せ、ＰＡＳ染色を行い、Ｏｌｙｍｐｕｓ光学顕微鏡で観察した。

１．３ 網膜パラフィン切片の光学顕微鏡観察用標本の作製
その他の６匹のラットの両側眼球を摘出してパラフィン切片を作製した。眼球と視神経とを４％パラホルムアルデヒド（４℃、４８時間）で固定し、角膜輪部に沿って眼球の壁を切り、角膜、水晶体および硝子体を除去し、勾配アルコールで脱水し、キシレンで透明化し、パラフィンで包埋した。切片の厚さを１０μｍとして連続切片を行い、ＨＥ染色および免疫組織化学染色を行った。Ｏｌｙｍｐｕｓ光学顕微鏡で観察した。

１．４ 網膜の電子顕微鏡的観察
６匹のラットの他方の眼球を摘出し、２．５％グルタルアルデヒド（４℃）で７２時間固定してから、２ｍｍ×２ｍｍの網膜中心組織を切り、１％オスミック酸で固定し、アセトンで段階的に脱水し、Ｅｐｏｎ８１２エポキシ樹脂で包埋した。１μｍの半薄切片を作製し、光学顕微鏡で観察し、さらに超薄切片を作製し、酢酸ウラニルとクエン酸鉛で二重染色を行い、日立Ｈ−６００透過型電子顕微鏡で観察した。

１．５ 統計解析
実験で収集したすべてのデータを、いずれもＳＰＳＳ１９．０統計解析ソフトウェアで統計処理し、ｔ検定、分散分析またはノンパラメトリック検定を使用し、統計の結果はいずれも平均値±標準偏差で表した。α＝０．０５を検定基準値とし、即ちＰ≦０．０５を統計的有意差とした。

２ 結果
２．１ 体重と血糖
結果を表８に示す。実験期間中に以下のような症状が観察された。正常群のラットに比べ、モデル群のラットの体重増加の速度が遅く、毛並みが悪く、痩せ、尿の量が増え、水様便であった。モデリング前の各群のラットの血糖値に有意差（Ｐ＞０．０５）が認められなかった。正常群に比べ、モデリング後のラットの各時間帯における血糖値がいずれも有意に向上し、有意差（Ｐ＜０．０１）が認められた。

２．２ 消化網膜伸展標本
顕微鏡で消化網膜伸展標本を観察した。正常群のラットの網膜の毛細血管は規則的に分布しており、真っ直ぐに走行し、その太さが均一であった。内皮細胞は一般的に毛細血管の中心部に位置し、核が比較的大きく、染色が比較的浅く、楕円形または不規則な形状を呈し、その長軸は毛細血管と平行であった。周皮細胞は毛細血管内腔の外側に位置し、核が比較的小さく、染色が濃く、ほとんど球形または三角形を呈した（図１Ａ）。モデル群のラットの網膜の毛細血管網の分布は無秩序であり、走行が極めて不規則であり、血管の太さが均一ではなかった。数本の毛細血管が歪んでループを形成し、分節内に拡大し、周皮細胞の核が凝縮し、内皮細胞と細胞外基質の増殖が顕著であり、無細胞毛細血管、陰影周皮細胞および内皮細胞アポトーシスなどの糖尿病性網膜症の特徴的な変化が認められた（図１Ｂ）。実験群（図１Ｃ）と対照群（図１Ｄ）では介入後、網膜の微小血管病変が維持され、あるいはその進行が遅れた。無細胞毛細血管および陰影周皮細胞などの初期ＤＲの典型的な病変は認められず、毛細血管が比較的規則に分布され、太さが比較的均一であり、著しい歪み拡張が認められなかった。

２．３ 網膜パラフィン切片のＨＥ染色
光学顕微鏡でＨＥ染色した網膜パラフィン切片を観察した。正常群のラットの網膜の各層の組織では、境界が明瞭であり、規則的に分布していた（図２Ａ）。モデル群のラットの網膜の各層の組織の分布は、極めて不規則であり、毛細血管の拡張が顕著であり、神経繊維層の浮腫が肥厚になり、網膜神経節細胞の数が減少し、空胞変性が認められた。さらに、細胞核が凝縮し、クロマチンエッジが凝集し、一部の網膜神経節細胞が壊死し、核が溶解し、内網状層の浮腫、内核層の空胞変性が認められた（図２Ｂ）。実験群のラットの網膜間質に軽度の浮腫が認められ、細胞の分布が基本的に規則的であった（図２Ｃ）。対照群のラットの網膜の網状構造は粗く、内外顆粒層の分布が不規則であり、毛細血管が拡張し、間質に浮腫が認められた（図２Ｄ）。

２．４ 網膜パラフィン切片の免疫組織化学染色
免疫組織化学法で染色された血管内皮増殖因子（ＶＥＦＧ）はラットの網膜内において広く発現され、陽性発現部位は黄褐色または褐色を呈した。ＶＥＧＦの各群の網膜での発現のグレー値の比較は以下のとおりである。モデル群（図３Ａ）は正常群（図３Ｂ）より有意に高く（Ｐ＜０．０１）、実験群（図３Ｃ）と対照群（図３Ｄ）のＶＥＧＦの発現がモデル群より有意に低く（Ｐ＜０．０１）、統計学有意差が認められた。しかし、実験群と対照群の群間に有意差が認められなかった（表９）。

２．５ 網膜の電子顕微鏡的観察
網膜の超微細構造の観察結果は以下のとおりである。正常群のラットの網膜の内皮細胞の形態は正常であり、紡錘形を呈し、細胞間が完全に接合され、基底膜が連続的であり、厚くなかった。神経線維層の微小管とミトコンドリアが明瞭であり、神経節細胞の胞体は楕円形を呈し、核が大きくて明らかであり、細胞質内に比較的多い粗面小胞体、ポリリボソーム、ミトコンドリアが認められ、細胞の表面に比較的多い突起があった（図４Ａ）。モデル群のラットの網膜の毛細血管の内皮細胞は明らかに膨化し、胞体が丸くなり、内腔に突出し、ミトコンドリアが膨化し、空胞化し、基底膜が厚くなり、神経節細胞の胞体が変形し、細胞核が明らかに凝縮し、核膜が消失し、細胞質内に多くの大きさが異なる空胞が認められた。さらに、ミトコンドリアが膨化し、細胞表面の突起が顕著に減少し、ポリリボソームと粗面小胞体が顕著に減少した（図４Ｂ）。実験群のラットの網膜の毛細血管の内腔壁は滑らかであり、基底膜の厚さが少々厚くなり、少数の周皮細胞に浮腫が認められ、一部の内皮細胞に軽度過形成が認められ、神経節細胞の胞体が変形し、ミトコンドリアが膨化し、構造があまり明瞭でなかった（図４Ｃ）。対照群のラットの網膜の毛細血管の内腔壁は滑らかであり、基底膜の厚さが厚くなり、少数の周皮細胞に浮腫が認められ、一部の内皮細胞が膨化し、一部のミトコンドリアが空胞化し、神経節細胞の胞体が変形し、ミトコンドリアに膨化が軽度に認められ、クロマチンが溶解し、クリステクリアランスがさらに拡張または消失した（図４Ｄ）。

３ 結論
実験的糖尿病ラットの網膜血管に著しい病理学的障害が生じた。本発明の漢方薬組成物は糖尿病ラットの網膜血管に対して一定の保護作用があり、糖尿病ラットの網膜のＶＥＧＦ発現を抑制し、網膜血管障害を軽減させることができる。

実験例４ 本発明の漢方薬組成物の糖尿病ラットの視神経伝導障害の治療に関する実験研究
１実験方法
１．１ モデリングとグループ分け
モデリング方法は実験例２と同じである。
モデリングに成功した糖尿病ラットを無作為にモデル群５匹、実験群５匹（実施例１に従って調製された漢方物組成物）、および正常群５匹に分けた。実験期間は３００日とした。

１．２ 観察方法と指標は以下のとおりである。動物を致死させてから網膜組織切片を作製して形態学的検査を行った。電子顕微鏡で網膜神経細胞の超微細構造を観察した。ＲＴ−ＰＣＲ法で網膜グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）のｍＲＮＡの発現レベルを測定した。ＴＵＮＥＬ法により網膜神経節細胞（ＲＧＣｓ）および内核層細胞のアポトーシスを検出し、かつアポトーシス細胞の数をカウントした。免疫組織化学技術ＬＳＡＢ法によりＧＦＡＰ、グルタミン酸トランスポーター（ＧＬＡＳＴ）、グルタミン合成酵素（ＧＳ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）の網膜における発現を測定し、ＲＧＣｓおよび内核層細胞機能の変化を観察した。データの解析方法は実験例２と同じである。

２ 実験結果
２．１ ＲＧＣｓアポトーシスに関する研究
陽性アポトーシスＲＧＣｓ細胞の判定は以下のとおりである。細胞核が黄褐色（褐色）を呈する細胞を陽性細胞とした。陽性アポトーシスＲＧＣｓ細胞数のカウント方法は以下のとおりである。高倍率（１０×４０倍）双眼顕微鏡を使用し、ディスクの片側から鋸歯状のエッジへ、５つの連続視野の平均を取ってアポトーシスＲＧＣｓ細胞／高倍率視野とした。連続した３つの切片を読み取り、そのＲＧＣｓ細胞数の平均を当該サンプルのＲＧＣｓ細胞のアポトーシスの数とした。本実験結果により、ＴＵＮＥＬ法で検出された、ラットの網膜のアポトーシスの陽性細胞はＲＧＣｓ層と内核層のみに存在することが示唆された。各群のＲＧＣｓアポトーシスに対する影響を表１０に示す。

以上より、正常群のラットに比べ、モデル群のラットのＲＧＣｓアポトーシスの数は有意に増加した（Ｐ＜０．０１）。モデル群に比べ、実験群のＲＧＣｓアポトーシスの数は有意に減少し（Ｐ＜０．０５）、本発明の組成物はモデルラットのＲＧＣｓアポトーシスを抑制することができ、それに対して神経保護作用を有することが示唆された。

２．２ 作用機序に関する研究
研究により、本発明の漢方薬組成物はＭｕｌｌｅｒ細胞におけるＧＦＡＰの過剰発現を抑制し、グリア細胞の反応性過形成を抑制し、ＤＭのＭｕｌｌｅｒ細胞の機能に対する影響を軽減させ、網膜ニューロンの損傷を修復し、Ｍｕｌｌｅｒ細胞におけるＧＬＡＳＴとＧＳの発現を促した。本発明の漢方薬組成物は、細胞外の過剰なグルタミン酸をタイムリーかつ効果的に除去し、高濃度のグルタミン酸の興奮毒性を軽減させ、ニューロトロフィンＮＴ−３の発現を促し、神経細胞のアポトーシスを減少させることが示唆された。

実験例５ 本発明の漢方薬組成物の糖尿病ラットの虹彩微小循環病変の治療に関する実験研究
１ 実験方法
１．１ モデリングとグループ分け
モデリングは実験例２と同じである。
モデリングに成功した糖尿病ラットを無作為にモデル群２０匹、実験群３０匹（実施例１に従って調製された漢方物組成物）、対照群２０匹（Ｄｏｂｅｓｔ群）、および正常群１２匹に分けた。実験期間は３００日とした。

１．２ 観察方法と指標：虹彩血管灌流スキャンと虹彩蛍光血管造影を使用して虹彩の血流速度、虹彩の血管径、虹彩の微小血管密度、虹彩の微小血管内皮構造、虹彩の微小血管透過性、および虹彩の単位面積当たりの血液灌流量を観察した。

２ 実験結果
２．１ 虹彩の血流速度を表１１に示す。結果により、正常群の虹彩の血流速度が安定し、モデル群の虹彩の血流速度が有意に低下し、実験群はモデル群に比べ有意に向上し（Ｐ＜０．０１）、Ｄｏｂｅｓｔ群はモデル群に比べ統計学的有意差が認められないことが示唆された。

２．２ 虹彩の血管径を表１２に示す。結果により、正常群の虹彩の血管径が均一であり、モデル群は正常群に比べ血管径が有意に拡張し、実験群はモデル群に比べ有意に低下し（Ｐ＜０．０１）、Ｄｏｂｅｓｔ群はモデル群に比べ統計学的有意差が認められないことが示唆された。

２．３ 虹彩の血液灌流量を表１３に示す。結果により、レーザードップラー画像において、正常群の虹彩の単位面積当たりの血液灌流量が十分であり、スキャン画像が均一であり、モデル群の虹彩の血液灌流量が正常群に比べ有意に低下し（Ｐ＜０．０１）、治療群の血液灌流量がモデル群に比べ向上し（Ｐ＜０．０５）、対照群はモデル群に比べ統計学的有意差が認めないことが示唆された。

以上より、本発明の実験組成物は虹彩の血流を促進し、血管の異常拡張を抑制し、虹彩の微小血管の透過性の異常向上を改善し、かつ単位面積当たりの血液灌流量を増加させ、虚血状態を緩和させることが示唆された。

（発明の実施の形態）
（実施例１）
原薬の組成は、オウギ３０ｇ、タイシジン１２ｇ、ケイシ１０ｇ、トウキ２０ｇ、サンシチ６ｇ、サンヤク３０ｇ、タンジン３０ｇ、ジリュウ６ｇ、ジオウ２０ｇ、および炒めビャクジュツ２０ｇである。

調製方法：割合で原薬を取り、水を加えて１回１．５時間で２回煎じ、煎じ液を合わせてろ過し、２００ｍｌになるまで濃縮させる。

用法用量：毎日朝夜２回、毎回１００ｍｌ。

（実施例２）
原薬の組成はオウギ２８ｇ、タイシジン１６ｇ、ケイシ９ｇ、トウキ２８ｇ、サンシチ５ｇ、サンヤク３５ｇ、タンジン２８ｇ、ジリュウ７ｇ、ジオウ１６ｇ、および炒めビャクジュツ２８ｇである。

調製方法：割合で原薬を取り、７０％エタノールで、１回目は１時間、２回目は０．５時間の２回、超音波抽出し、抽出液を合わせてろ過し、減圧下で濃縮し、抽出物に対して、デキストリンを賦形剤とする。薬剤賦形剤比３：１で混合し、均一に混合させ、顆粒に調製し、乾燥させ、顆粒剤にする。

（実施例３）
原薬の組成はオウギ３８ｇ、タイシジン１１ｇ、ケイシ１４ｇ、トウキ１６ｇ、サンシチ７ｇ、サンヤク２８ｇ、タンジン３５ｇ、ジリュウ５ｇ、ジオウ２８ｇ、および炒めビャクジュツ１６ｇである。

調製方法：割合で原薬を取り、水を加えて１回１．５時間で２回煎じ、煎じ液を合わせてろ過し、従来の方法に従って経口液剤を調製する。

（実施例４）
原薬の組成はオウギ２２ｇ、ニンジン１８ｇ、ケイシ９ｇ、トウキ３５ｇ、サンシチ５ｇ、サンヤク４５ｇ、タンジン２２ｇ、ジリュウ８ｇ、ジオウ１５ｇ、およびビャクジュツ３５ｇである。

調製方法：割合で原薬を取り、水を加えて１回１．５時間で還流して２回抽出する。煎じ液を合わせてろ過し、６０％エタノール溶液を加えてエタノール沈殿し、静置し、ろ過し、濃縮させ、減圧下で乾燥させ、デキストリンを賦形剤とする。薬剤賦形剤比３：１で混合し、均一に混合させ、顆粒に調製し、乾燥させ、顆粒剤にする。

（実施例５）
原薬の組成はオウギ４５ｇ、ニンジン１０ｇ、ケイシ１５ｇ、トウキ１３ｇ、サンシチ８ｇ、サンヤク２２ｇ、タンジン４８ｇ、ジリュウ５ｇ、ジオウ３８ｇ、およびビャクジュツ１５ｇである。

調製方法：割合で原薬を取り、混合し、粉砕して６０〜８０目のふるいに掛け、散剤を調製する。

（実施例６）
原薬の組成はオウギ１６ｇ、セイヨウジン２４ｇ、ケイシ６ｇ、トウキ４５ｇ、サンシチ４ｇ、サンヤク５５ｇ、タンジン１６ｇ、ジリュウ１０ｇ、ジオウ１２ｇ、およびビャクジュツ４５ｇである。

調製方法：割合で原薬を取り、水を加えて毎回１．５時間で２回煎じ、煎じ液を合わせてろ過し、従来の方法に従って経口液剤を調製する。

（実施例７）
原薬の組成はオウギ５５ｇ、タイシジン７ｇ、ケイシ１８ｇ、トウキ１２ｇ、サンシチ１１ｇ、サンヤク１８ｇ、タンジン５５ｇ、ジリュウ４ｇ、ジオウ４５ｇ、および炒めビャクジュツ１２ｇである。

調製方法：割合で原薬を取り、７０％エタノールで、１回目は１時間、２回目は０．５時間の２回、超音波抽出し、抽出液を合わせてろ過し、減圧下で濃縮し、濃縮液をＤ１０１マクロポーラス型樹脂から抽出した。先ず２ＢＶ水を使用して溶出し、次いで５ＢＶ ５０％エタノール溶液を使用して溶出し、５０％エタノール溶出液を集め、エタノールを回収し、抽出物に対しては従来の方法に従って、従来の賦形剤を加え、錠剤を調製する。

（実施例８）
原薬の組成はオウギ１２ｇ、タイシジン２８ｇ、ケイシ４ｇ、トウキ５５ｇ、サンシチ３ｇ、サンヤク７５ｇ、タンジン１２ｇ、ジリュウ１４ｇ、ジオウ９ｇ、および炒めビャクジュツ５５ｇである。

調製方法：割合で原薬を取り、水を加えて毎回１．５時間で２回煎じ、煎じ液を合わせてろ過し、濃縮させ、減圧下で乾燥させ、デキストリンを賦形剤とする。薬剤賦形剤比３：１で混合し、均一に混合させ、顆粒に調製し、乾燥させ、顆粒剤にする。

（実施例９）
原薬の組成はオウギ７５ｇ、タイシジン６ｇ、ケイシ２４ｇ、トウキ８ｇ、サンシチ１４ｇ、サンヤク１２ｇ、タンジン７５ｇ、ジリュウ３ｇ、ジオウ５５ｇ、および炒めビャクジュツ１０ｇである。

調製方法：割合で原薬を取り、６倍量の７５％エタノールを加えて毎回１．５時間で２回還流抽出し、抽出液を合わせてろ過し、従来の賦形剤を加え経口液剤を調製する。

（実施例１０）
原薬の組成はオウギ抽出物３０ｇ、タイシジン抽出物１２ｇ、ケイシ抽出物１０ｇ、トウキ抽出物２０ｇ、サンシチ抽出物６ｇ、サンヤク抽出物３０ｇ、タンジン抽出物３０ｇ、ジリュウ抽出物６ｇ、ジオウ抽出物２０ｇ、およびビャクジュツ抽出物２０ｇである。

当該原薬抽出物を原薬として水を加えて煎じて水抽出物を得て、各原薬の水抽出物を合わせてろ過し、従来の方法に従って経口液剤を調製する。

（実施例１１）
原薬の組成はオウギ抽出物２８ｇ、ニンジン抽出物１６ｇ、ケイシ抽出物９ｇ、トウキ抽出物２８ｇ、サンシチ抽出物５ｇ、サンヤク抽出物３５ｇ、タンジン抽出物２８ｇ、ジリュウ抽出物７ｇ、ジオウ抽出物１６ｇ、および炒めビャクジュツ抽出物２８ｇである。

当該原薬抽出物を原薬として７０％エタノール溶液加えて還流抽出してエタノール抽出物を得て、各原薬のエタノール抽出物を濃縮させ、減圧下で乾燥させてから均一に混合し、デキストリンを賦形剤とする。薬剤賦形剤比３：１で混合し、均一に混合させ、顆粒に調製し、乾燥させ、顆粒剤にする。

（実施例１２）
原薬の組成はオウギ抽出物３８ｇ、セイヨウジン抽出物１１ｇ、ケイシ抽出物１４ｇ、トウキ抽出物１６ｇ、サンシチ抽出物７ｇ、サンヤク抽出物２８ｇ、タンジン抽出物３５ｇ、ジリュウ抽出物５ｇ、ジオウ抽出物２８ｇ、および炒めビャクジュツ抽出物１６ｇである。

当該各原薬の抽出物を原薬として水を加えて煎じて水抽出物を得て、各原薬の水抽出物を濃縮させ、減圧下で乾燥させてから均一に混合し、デキストリンを賦形剤とする。薬剤賦形剤比３：１で混合し、均一に混合させ、顆粒に調製し、乾燥させ、顆粒剤にする。

（付記）
（付記１）
オウギ、タイシジン、ケイシ、トウキ、サンシチ、サンヤク、タンジン、ジリュウ、ジオウ、およびビャクジュツを含む、糖尿病性網膜症の治療のための漢方薬組成物。

（付記２）
前記オウギ１０〜８０重量部、前記タイシジン５〜３０重量部、前記ケイシ３〜２５重量部、前記トウキ８〜６０重量部、前記サンシチ２〜１５重量部、前記サンヤク１０〜８０重量部、前記タンジン１０〜８０重量部、前記ジリュウ２〜１５重量部、前記ジオウ８〜６０重量部、および前記ビャクジュツ８〜６０重量部を含む、付記１に記載の漢方薬組成物。

（付記３）
前記オウギ１５〜６０重量部、前記タイシジン６〜２５重量部、前記ケイシ５〜２０重量部、前記トウキ１０〜５０重量部、前記サンシチ３〜１２重量部、前記サンヤク１５〜６０重量部、前記タンジン１５〜６０重量部、前記ジリュウ３〜１２重量部、前記ジオウ１０〜５０重量部、および前記ビャクジュツ１０〜５０重量部を含む、
または、前記オウギ２０〜５０重量部、前記タイシジン８〜２０重量部、前記ケイシ８〜１８重量部、前記トウキ１２〜４０重量部、前記サンシチ４〜１０重量部、前記サンヤク２０〜５０重量部、前記タンジン２０〜５０重量部、前記ジリュウ４〜１０重量部、前記ジオウ１２〜４０重量部、および前記ビャクジュツ１２〜４０重量部を含む、
または、前記オウギ２５〜４０重量部、前記タイシジン１０〜１８重量部、前記ケイシ９〜１５重量部、前記トウキ１５〜３０重量部、前記サンシチ５〜８重量部、前記サンヤク２５〜４０重量部、前記タンジン２５〜４０重量部、前記ジリュウ５〜８重量部、前記ジオウ１５〜３０重量部、および前記ビャクジュツ１５〜３０重量部を含む、付記２に記載の漢方薬組成物。

（付記４）
前記オウギ３０重量部、前記タイシジン１２重量部、前記ケイシ１０重量部、前記トウキ２０重量部、前記サンシチ６重量部、前記サンヤク３０重量部、前記タンジン３０重量部、前記ジリュウ６重量部、前記ジオウ２０重量部、および前記ビャクジュツ２０重量部を含む、
または、前記オウギ２８重量部、前記タイシジン１６重量部、前記ケイシ９重量部、前記トウキ２８重量部、前記サンシチ５重量部、前記サンヤク３５重量部、前記タンジン２８重量部、前記ジリュウ７重量部、前記ジオウ１６重量部、および前記ビャクジュツ２８重量部を含む、
または、前記オウギ３８重量部、前記タイシジン１１重量部、前記ケイシ１４重量部、前記トウキ１６重量部、前記サンシチ７重量部、前記サンヤク２８重量部、前記タンジン３５重量部、前記ジリュウ５重量部、前記ジオウ２８重量部、および前記ビャクジュツ１６重量部を含む、付記３に記載の漢方薬組成物。

（付記５）
前記タイシジンはニンジンまたはセイヨウジンで代替され、前記ビャクジュツは炒めビャクジュツであって、前記ジオウは生ジオウである、付記２から４のいずれか一つに記載の漢方薬組成物。

（付記６）
一定の割合で原薬をそれぞれ取り、水または有機溶媒で従来の抽出方法により抽出し、かつ従来の製剤調製方法で従来の経口剤形を調製する、付記１から５のいずれか一つに記載の漢方薬組成物の調製方法。

（付記７）
前記従来の経口剤形は顆粒剤、錠剤、散剤、カプセル剤、経口液剤または丸剤である、付記６に記載の調製方法。

（付記８）
オウギ抽出物１５〜６０重量部、タイシジン抽出物６〜２５重量部、ケイシ抽出物５〜２０重量部、トウキ抽出物１０〜５０重量部、サンシチ抽出物３〜１２重量部、サンヤク抽出物１５〜６０重量部、タンジン抽出物１５〜６０重量部、ジリュウ抽出物３〜１２重量部、ジオウ抽出物１０〜５０重量部、およびビャクジュツ抽出物１０〜５０重量部を含む、糖尿病性網膜症の治療のための漢方薬組成物。

（付記９）
糖尿病性網膜症の治療のための医薬品の調製における、付記１〜５、８のいずれか一つに記載の漢方薬組成物の使用。

（付記１０）
黄斑浮腫の治療のための医薬品の調製における、付記１〜５、８のいずれか一つに記載の漢方薬組成物の使用。

Claims (9)

1. オウギ１０〜８０重量部、タイシジン５〜３０重量部、ケイシ３〜２５重量部、トウキ８〜６０重量部、サンシチ２〜１５重量部、サンヤク１０〜８０重量部、タンジン１０〜８０重量部、ジリュウ２〜１５重量部、ジオウ８〜６０重量部、およびビャクジュツ８〜６０重量部を含む、糖尿病性網膜症の治療のための漢方薬組成物。
2. 前記オウギ１５〜６０重量部、前記タイシジン６〜２５重量部、前記ケイシ５〜２０重量部、前記トウキ１０〜５０重量部、前記サンシチ３〜１２重量部、前記サンヤク１５〜６０重量部、前記タンジン１５〜６０重量部、前記ジリュウ３〜１２重量部、前記ジオウ１０〜５０重量部、および前記ビャクジュツ１０〜５０重量部を含む、
   または、前記オウギ２０〜５０重量部、前記タイシジン８〜２０重量部、前記ケイシ８〜１８重量部、前記トウキ１２〜４０重量部、前記サンシチ４〜１０重量部、前記サンヤク２０〜５０重量部、前記タンジン２０〜５０重量部、前記ジリュウ４〜１０重量部、前記ジオウ１２〜４０重量部、および前記ビャクジュツ１２〜４０重量部を含む、
   または、前記オウギ２５〜４０重量部、前記タイシジン１０〜１８重量部、前記ケイシ９〜１５重量部、前記トウキ１５〜３０重量部、前記サンシチ５〜８重量部、前記サンヤク２５〜４０重量部、前記タンジン２５〜４０重量部、前記ジリュウ５〜８重量部、前記ジオウ１５〜３０重量部、および前記ビャクジュツ１５〜３０重量部を含む、請求項１に記載の漢方薬組成物。
3. 前記オウギ３０重量部、前記タイシジン１２重量部、前記ケイシ１０重量部、前記トウキ２０重量部、前記サンシチ６重量部、前記サンヤク３０重量部、前記タンジン３０重量部、前記ジリュウ６重量部、前記ジオウ２０重量部、および前記ビャクジュツ２０重量部を含む、
   または、前記オウギ２８重量部、前記タイシジン１６重量部、前記ケイシ９重量部、前記トウキ２８重量部、前記サンシチ５重量部、前記サンヤク３５重量部、前記タンジン２８重量部、前記ジリュウ７重量部、前記ジオウ１６重量部、および前記ビャクジュツ２８重量部を含む、
   または、前記オウギ３８重量部、前記タイシジン１１重量部、前記ケイシ１４重量部、前記トウキ１６重量部、前記サンシチ７重量部、前記サンヤク２８重量部、前記タンジン３５重量部、前記ジリュウ５重量部、前記ジオウ２８重量部、および前記ビャクジュツ１６重量部を含む、請求項２に記載の漢方薬組成物。
4. 前記タイシジンはニンジンまたはセイヨウジンで代替され、前記ビャクジュツは炒めビャクジュツであって、前記ジオウは生ジオウである、請求項１から３のいずれか一項に記載の漢方薬組成物。
5. 一定の割合で原薬をそれぞれ取り、水または有機溶媒で従来の抽出方法により抽出し、かつ従来の製剤調製方法で従来の経口剤形を調製する、請求項１から４のいずれか一項に記載の漢方薬組成物の調製方法。
6. 前記従来の経口剤形は顆粒剤、錠剤、散剤、カプセル剤、経口液剤または丸剤である、請求項５に記載の調製方法。
7. オウギ抽出物１５〜６０重量部、タイシジン抽出物６〜２５重量部、ケイシ抽出物５〜２０重量部、トウキ抽出物１０〜５０重量部、サンシチ抽出物３〜１２重量部、サンヤク抽出物１５〜６０重量部、タンジン抽出物１５〜６０重量部、ジリュウ抽出物３〜１２重量部、ジオウ抽出物１０〜５０重量部、およびビャクジュツ抽出物１０〜５０重量部を含む、糖尿病性網膜症の治療のための漢方薬組成物。
8. 糖尿病性網膜症の治療のための医薬品の調製における、請求項１〜４、７のいずれか一項に記載の漢方薬組成物の使用。
9. 黄斑浮腫の治療のための医薬品の調製における、請求項１〜４、７のいずれか一項に記載の漢方薬組成物の使用。