CN102057030B - 包含家族44木葡聚糖酶变体的洗涤剂组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含亲本木葡聚糖酶变体的洗涤剂组合物。

Description

包含家族44木葡聚糖酶变体的洗涤剂组合物
发明领域
本发明涉及包含属于糖基水解酶家族44的木葡聚糖酶变体的洗涤剂组合物。
发明背景
木葡聚糖是植物初生(生长)细胞壁中的主要结构多糖。在结构上，木葡聚糖由纤维素样β-1，4-连接葡萄糖主链组成，它在很多情况下被不同的侧链取代。木葡聚糖据信在植物初生壁中通过交联纤维素微原纤维形成纤维素-木葡聚糖网状结构发挥作用。
木葡聚糖酶能够催化木葡聚糖增溶成木葡聚糖低聚糖。一些木葡聚糖酶仅表现出木葡聚糖酶活性，然而其他木葡聚糖酶表现出木葡聚糖酶和纤维素酶活性。可将木葡聚糖酶归类为EC3.2.1.4或EC.3.2.1.151。具有木葡聚糖酶活性的酶如Vincken等人(1997)CarbohydrateResearch298(4)：299-310中所述的酶，其中表征了三个不同的内葡聚糖酶EndoI、EndoV和EndoVI，它们来自绿色木霉(Trichodermaviride)(类似于里氏木霉，T.reesei)。EndoI、EndoV和EndoVI分别属于糖基水解酶家族5、7和12，参见Henrissat，B.等人(1991，1993)。WO94/14953公开了克隆自真菌棘孢曲霉(Aspergillusaculeatus)的家族12木葡聚糖酶(EGII)。WO99/02663公开了分别克隆自地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)和Bacillusagaradhaerens的家族12和家族5木葡聚糖酶。WO01/062903公开了家族44木葡聚糖酶。
具体地讲，WO99/02663和WO01/062903提出木葡聚糖酶可用于洗涤剂。
本发明的一个目的是提供包含属于家族44糖基水解酶的木葡聚糖酶变体的洗涤剂组合物，所述木葡聚糖酶变体与其亲本酶相比具有改善的性能。
发明概述
本发明涉及包含亲本木葡聚糖酶的分离变体的洗涤剂组合物，所述木葡聚糖酶变体在一个或多个(若干个)位点具有改变，所述位点选自由下列位点编号组成的组：68、123、156、118、200、129、137、193、92、83、149、34、340、332、9、76、331、310、324、498、395、366、1、374、7、140、8、14、21、211、37、45、13、78、87、436、101、104、111、306、117、119、414、139、268、142、159、164、102、168、176、180、482、183、202、206、217、4、222、19、224、228、232、2、240、244、5、247、249、328、252、259、406、267、269、275、179、166、278、281、288、298、301、18、302、165、80、303、316、169、322、120、146、342、348、147、353、380、468、382、383、38、384、389、391、10、392、396、177、397、399、409、237、413、253、415、418、40、443、445、148、449、225、450、454、3、455、456、299、461、470、204、476、488、347和507，这些位点对应于氨基酸序列SEQIDNO：3中的位点，并且其中所述的一个或多个改变是独立地进行的
i)在占据所述位点的氨基酸下游插入一个氨基酸，
ii)去除占据所述位点的氨基酸，或者
iii)用一个不同的氨基酸取代占据所述位点氨基酸；以及所述亲本木葡聚糖酶是家族44木葡聚糖酶；并且所述变体具有木葡聚糖酶活性。
发明详述
本发明涉及包含亲本家族44木葡聚糖酶变体的洗涤剂组合物，所述木葡聚糖酶变体具有一个改变，优选地是在一个或多个(若干个)位点上的取代形式和/或插入形式和/或去除形式，其中所述位点的编号对应于SEQIDNO：3的位点编号。本发明的变体具有木葡聚糖酶活性并且潜在地还具有水解纤维素活性。本发明的变体与亲本木葡聚糖酶相比具有改善的性能。在一个方面，所述变体在液体洗涤剂，尤其是液体衣物洗涤剂组合物中具有改善的稳定性。
定义
木葡聚糖酶活性：本文将术语“木葡聚糖酶活性”定义为催化木葡聚糖水解的酶。所述反应涉及木葡聚糖中的1，4-β-D-葡糖苷键的内部水解。就本发明目的而言，使用AZCL-木葡聚糖(来自Megazyme)作为反应底物来测定木葡聚糖酶活性。可通过若干方法进行测定，例如本专利申请实施例2所述的方法或者如WO01/62903所述的方法。一单位木葡聚糖酶活性(XyloU)的定义参照如WO01/62903，第60页，第3-17行所述的检测分析法。
纤维素酶活性：本文将术语“纤维素酶活性”定义为催化β-1，4-葡聚糖(纤维素)中的1，4-β-D-葡糖苷键水解的酶。就本发明目的而言，使用AZCL-HE-纤维素(来自Megazyme)作为反应底物来测定纤维素酶活性。
变体：本文将术语“变体”定义为具有木葡聚糖酶活性的多肽，所述多肽在一个或多个(若干个)特定位点上包含一个改变，例如取代、插入、和/或去除一个或多个(若干个)氨基酸残基，所述位点对应于SEQIDNO：3中的氨基酸位点。本发明的变体也可具有纤维素酶活性。改变了的多肽(变体)通过修改编码亲本酶的多核苷酸序列进行人工干预获得。亲本酶可由SEQIDNO：1、SEQIDNO：4或SEQIDNO：6或与这些序列中的其中一个具有至少75％的同一性的序列编码。变体多肽序列优选地是非天然存在的序列。
野生型酶：术语“野生型”木葡聚糖酶指由天然存在的微生物，例如天然存在的细菌、酵母、或丝状真菌表达的木葡聚糖酶。术语野生型可与术语“天然存在的”互换使用。
亲本酶：如本文所用，术语“亲本”木葡聚糖酶或“亲本的”木葡聚糖酶指对其进行修改例如一种或多种取代、插入、去除、和/或截短以制备本发明的酶变体的木葡聚糖酶。该术语也指与变体进行比较及比对的多肽。亲本可为天然存在的(野生型)多肽如SEQIDNO：2或SEQIDNO：3或SEQIDNO：5或SEQIDNO：7的酶。然而亲本多肽也可为天然存在的多肽的变体，所述天然存在多肽的氨基酸序列已经进行了修改或改变。亲本也可为等位变体，它是由占据相同染色体座位的基因的两个或更多个供选择的替代形式中的任何一个编码的多肽。
分离的变体或多肽：如本文所用，术语“分离的变体”或“分离的多肽”指分离自某种来源的变体或多肽，例如它从其中表达的宿主细胞或它通常存在于其中的酶络合物。优选地，所述多肽根据SDS-PAGE测定纯度为至少40％，更优选纯度为至少60％，甚至更优选纯度为至少80％，最优选地纯度为至少90％，甚至最优选纯度为至少95％。
基本上纯的变体或多肽：术语“基本上纯的变体”或“基本上纯的多肽”本文指一种多肽制品，所述多肽制品按重量计包含最多10％，优选最多8％，更优选最多6％，更优选最多5％，更优选最多4％，更优选最多3％，甚至更优选最多2％，最优选最多1％，甚至最优选最多0.5％的与其天然或重组结合的其他多肽材料。因此，基本上纯的变体或多肽的纯度按制品中存在的多肽材料总重量计优选为至少92％，优选至少94％，更优选至少95％，更优选至少96％，更优选至少96％，更优选至少97％，更优选至少98％，甚至更优选至少99％，最优选至少99.5％，甚至最优选100％。本发明的变体和多肽优选地为基本上纯的形式。这可通过例如熟知的重组方法或经典的纯化方法制备变体或多肽来完成。
成熟多肽：本文将术语“成熟多肽”定义为具有木葡聚糖酶活性的多肽，该多肽是其在翻译和任何翻译后修饰之后的最终形式，所述修饰例如是N-末端加工、C-末端截短、糖基化、磷酸化等。就如SEQIDNO：2所示的多肽而言，理论上成熟木葡聚糖酶序列可起始于SEQIDNO：2的位点28。成熟序列终止于SEQIDNO：2的位点551。理论上成熟的木葡聚糖酶序列如SEQIDNO：3所示。
成熟多肽编码序列：本文将术语“成熟多肽编码序列”定义为编码具有木葡聚糖酶活性的成熟多肽的核苷酸序列。在一个方面，成熟多肽编码序列为SEQIDNO：1的核苷酸82至1653。
同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性，这种相关性用参数“同一性”描述。
就本发明目的而言，两个氨基酸序列之间的同一性程度使用Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.48：443-453)如EMBOSS软件包在Needle程序中执行的(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件包(TheEuropeanMolecularBiologyOpenSoftwareSuite)，Rice等人，2000年，TrendsinGenetics16：276-277；http://emboss.org)算法进行测定，优选3.0.0或更新的版本。所用的任选参数是，10的空位罚分，0.5的空位延伸罚分，和EBLOSUM62(EMBOSS版的BLOSUM62)取代矩阵。使用标记为“最长同一性”的Needle输出(使用-nobrief选项获得)作为百分比同一性，并且如下计算：
(相同残基×100)/(序列长度-序列中的总空位数)。
就本发明目的而言，两个脱氧核糖核苷酸序列之间的同一性程度使用Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970，同上)如EMBOSS软件包在Needle程序中执行的(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件包(TheEuropeanMolecularBiologyOpenSoftwareSuite)，Rice等人，2000年，同上；http://emboss.org)算法进行测定，优选3.0.0或更新的版本。所用的任选参数是10的空位罚分，0.5的空位延伸罚分，和EDNAFULL(EMBOSS版的NCBINUC4.4)取代矩阵。使用标记为“最长同一性”的Needle输出(使用-nobrief选项获得)作为百分比同一性，并且如下计算：
(相同脱氧核糖核苷酸×100)/(序列长度-序列中的总空位数)。
功能片段：术语“多肽功能片段”用于描述来源于较长多肽的多肽，例如成熟多肽，并且该多肽已经被从N-末端区域或C-末端区域或上述两个区域截短以生成亲本多肽的片段。为了成为功能多肽，所述片段必须保留全长/成熟多肽至少20％，优选至少40％，更优选至少50％，更优选至少60％，更优选至少70％，更优选至少80％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，甚至最优选至少100％的木葡聚糖酶活性。
等位变体：术语“等位变体”本文指占据相同染色体座位的基因的任何两个或更多个供选择的替代形式。等位变体天然来源于突变，并且可导致种群内的多态性。基因突变可为沉默突变(不改变编码的多肽)或者可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位变体是由基因等位变体编码的多肽。
分离的多核苷酸：如本文所用，术语“分离的多核苷酸”指分离自某种来源的多核苷酸。在一个方面，分离的多核苷酸的纯度经琼脂糖电泳测定为至少40％，更优选至少60％，甚至更优选至少80％，最优选至少90％，甚至最优选至少95％。
基本上纯的多核苷酸：如本文所用，术语“基本上纯的多核苷酸”指不含其他外来的或不期望的核苷酸并且其形式适用于遗传工程的多肽制备体系的多核苷酸。因此基本上纯的多核苷酸按重量计包含最多10％，优选最多8％，更优选最多6％，更优选最多5％，更优选最多4％，更优选最多3％，甚至更优选最多2％，最优选最多1％，甚至最优选最多0.5％的与其天然或重组结合的其他多核苷酸材料。然而基本上纯的多核苷酸可包括天然存在的5’和3’非翻译区例如启动子和终止子。基本上纯的多核苷酸的纯度优选地为按重量计至少90％，优选至少92％，更优选至少94％，更优选至少95％，更优选至少96％，更优选至少97％，甚至更优选至少98％，最优选至少99％，甚至最优选至少99.5％。本发明的多核苷酸优选地为基本上纯的形式，即，多核苷酸制剂基本上不含与其天然或重组结合的其他多核苷酸材料。多核苷酸可为基因组、cDNA、RNA、半合成的、合成来源的、或它们的任何组合。
编码序列：当用于本文时，术语“编码序列”指多核苷酸，它直接确定其多肽产物的氨基酸序列。编码序列的边界一般由开放阅读框确定，它通常起始于ATG起始密码子或供选择的起始密码子如GTG和TTG并终止于终止密码子如TAA、TAG、和TGA。编码序列可为DNA、cDNA、合成的、或重组的多核苷酸。
可操作地连接：术语“可操作地连接”本文指一种构型，其中将对照序列相对于多核苷酸序列的编码序列置于合适的位点上使得所述对照序列引导多肽编码序列的表达。
宿主细胞：如本文所用，术语“宿主细胞”包括易于用包含本发明多核苷酸的核酸构建体或载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖亲本细胞的任何子代，它们由于在复制期间发生突变而不同于亲本细胞。
改善的化学稳定性：本文将术语“改善的化学稳定性”定义为在存在化学制品的情况下孵育一段时间后显示保留酶活性的变体酶，所述化学制品是天然存在的或合成的，它们减少亲本酶的酶活性。改善的化学稳定性也可使变体能够在存在此类化学品的情况下更好地催化反应。在本发明的一个特定方面，改善的化学稳定性是在洗涤剂、具体地讲在液体洗涤剂中的改善的化学稳定性。当把本发明的木葡聚糖酶变体混合到液体洗涤剂制剂中并随后在介于15和50℃之间的温度下存储时，改善的洗涤剂稳定性具体地讲是木葡聚糖酶活性的改善稳定性。
在本发明中液体洗涤剂用作液体衣物洗涤剂特别有效。
变体设计的规则
就本发明而言，将SEQIDNO：3中公开的木葡聚糖酶的氨基酸序列用于测定在另一种木葡聚糖酶中对应的氨基酸残基。将另一种木葡聚糖酶的氨基酸序列与SEQIDNO：3中公开的木葡聚糖酶的氨基酸序列进行比对，并且基于比对结果，可确定对应于SEQIDNO：3中公开的木葡聚糖酶氨基酸序列中的任何氨基酸残基的氨基酸位点编号。
可使用例如“ClustalW”进行多肽序列比对(Thompson，J.D.，Higgins，D.G.和Gibson，T.J.，1994，CLUSTALW：Improvingthesensitivityofprogressivemultiplesequencealignmentthroughsequenceweighting，positions-specificgappenaltiesandweightmatrixchoice，NucleicAcidsResearch22：4673-4680)。可使用多肽比对作为模板，用来自DNA序列的对应密码子取代氨基酸来进行DNA序列比对。
在对本发明的不同木葡聚糖酶变体的描述中，使用以下命名法以便于参考。在所有情况下，使用公认的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。
取代。就氨基酸取代而言，使用以下命名：初始氨基酸，/位点/取代氨基酸。因此将在位点226上用丙氨酸取代苏氨酸表示为“Thr226Ala”或“T226A”。用加号(“+”)分隔多个突变，例如“G205R+S411F”代表在位点205和411上分别用精氨酸(R)取代甘氨酸(G)以及用苯丙氨酸(F)取代丝氨酸(S)。其中初始氨基酸可被选自由下列组成的组的氨基酸取代：将它表示为“K129R，S，A，I，F，Q”，代表在位点129用选自由下列组成的组的氨基酸取代赖氨酸(K)：精氨酸(R)、丝氨酸(S)、丙氨酸(A)、异亮氨酸(I)、苯丙氨酸(F)和谷氨酰胺(Q)。作为另外一种选择，可将“K129R，S，A，I，F，Q”写成K129R或K129S、或K129A、或K129I或K129F或K129Q
去除。就氨基酸去除而言，使用以下命名：初始氨基酸/位点/星号(*)。因此将在位点195去除甘氨酸表示为“Gly195*”或“G195*”。用加号(“+”)分隔多个去除，例如“G195*+S411*”。
插入。就氨基酸插入而言，使用以下命名：星号(*)/位点/小写字母/插入的氨基酸，其中小写字母指示在位点编号下游增加的氨基酸。因此，在位点10下游插入谷氨酸(E)表示为“*10aE”。如果第二个氨基酸例如缬氨酸(V)将在谷氨酸(E)之后被插入位点10下游，将其表示为“*10aE+*10bV”。加到多肽的N-末端用0(零)表示。将谷氨酸(E)和缬氨酸(V)加到多肽的N-末端氨基酸用*0aE+*0bV表示。
亲本木葡聚糖酶
在本发明中，亲本木葡聚糖酶是(a)属于糖基水解酶家族44的木葡聚糖酶，也称为家族44木葡聚糖酶；或(b)选自由下列组成的组的多肽：SEQIDNO：3、SEQIDNO：5和SEQIDNO：7；或(c)包含具有与SEQIDNO：3的成熟多肽至少75％同一性的氨基酸序列的多肽；或(d)由在至少中严格条件下与以下序列杂交的多核苷酸编码的多肽：(i)SEQIDNO：1或SEQIDNO：4或SEQIDNO：6的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQIDNO：1或SEQIDNO：4或SEQIDNO：6的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；或(e)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸包含具有与SEQIDNO：1的成熟多肽编码序列至少70％的同一性的核苷酸序列。
在第一方面，亲本木葡聚糖酶包含氨基酸序列，所述氨基酸序列优选地具有与SEQIDNO：3的成熟多肽至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少95％，更优选至少96％，甚至更优选至少97％，最优选至少98％，或甚至最优选至少99％的同一性，其具有木葡聚糖酶活性(下文称为“同源多肽”)。在一个方面，同源多肽具有与SEQIDNO：3的成熟多肽有十个氨基酸，优选地九个，更优选地八个，更优选七个，更优选六个，更优选五个氨基酸，更优选四个氨基酸，甚至更优选三个氨基酸，最优选两个氨基酸，甚至最优选一个氨基酸不同的氨基酸序列。
基本上同源的亲本木葡聚糖酶可具有一个或多个(若干个)氨基酸改变如取代、去除和/或插入。这些改变优选地影响不大，即保守氨基酸取代和其他取代不显著地影响蛋白或多肽的三维折叠构型或活性；小的去除通常为一至约9个氨基酸，优选地一至约15个氨基酸并且最优选地一至约30个氨基酸；以及小的氨基或羧基末端延伸，例如氨基末端甲硫氨酸残基，小的连接肽为至多约五至十个残基，优选地10至15个残基并且最优选地20至25个残基，或者有利于纯化(亲和标记物)的小的延伸，例如聚组氨酸片段或蛋白质A(Nilsson等人，1985，EMBOJ.4：1075；Nilsson等人，1991，MethodsEnzymol.198：3。一般来讲也参见Ford等人，1991，ProteinExpressionandPurification2：95-107。
虽然上述改变优选地影响不大，但此类改变也可为实质性的例如融合至多300个氨基酸或更大的较大多肽作为氨基或羧基末端延伸。
保守取代的实例包括碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)、和小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸)。一般不改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且描述于例如Neurath和Hill，1979，TheProteins，AcademicPress，NewYork。最经常发生的改变为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、和Asp/Gly。
本发明的木葡聚糖酶多肽的必需氨基酸可根据本领域已知的方法进行鉴定，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells，Science244：1081-1085，1989)。在后一项技术中，将单个丙氨酸突变导入分子的每个残基，并测试所得突变分子的生物活性(即木葡聚糖酶活性)以鉴定对该分子活性至关重要的氨基酸残基。也参见Hilton等人，J.Biol.Chem.271：4699-4708，1996。酶的活性位点或其他生物学相互作用也能通过结构物理分析进行鉴定，这通过如核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记技术，连同推定接触位点氨基酸突变技术一起进行测定。参见例如deVos等人，Science255：306-312，1992；Smith等人，J.Mol.Biol.224：899-904，1992；Wlodaver等人，FEBSLett.309：59-64，1992。必需氨基酸的确定也能从分析与本发明多肽相关的多肽的同源性而推断出来。属于家族44糖基水解酶的酶晶体结构已经公布于Kitago等人，J.Biol.Chem.Vol.282：35703-35711，2007。基于这一结构，在计算机中生成亲本木葡聚糖酶(SEQIDNO：3)的三维结构是可能的。基于与公布结构的比较，已经确定SEQIDNO：3中的以下残基对酶功能至关重要：E187(催化-酸/碱)、E358(催化-亲核物质)、E56(羧酸根基团配位Ca2+)和D154(羧酸根基团配位Ca2+)。因此，这些位点应该优选不在亲本酶中突变。
亲本木葡聚糖酶优选包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或其等位变体；或其具有木葡聚糖酶活性的片段。在一个方面，亲本木葡聚糖酶包含SEQIDNO：2的氨基酸序列。在另一方面，亲本木葡聚糖酶包含SEQIDNO：2的成熟多肽。在另一方面，亲本木葡聚糖酶由SEQIDNO：3的氨基酸序列或其等位变体组成；或其具有木葡聚糖酶活性的片段。在另一方面，亲本木葡聚糖酶包含SEQIDNO：5的氨基酸序列或其等位变体；或其具有木葡聚糖酶活性的片段。在另一方面，亲本木葡聚糖酶包含SEQIDNO：7的氨基酸序列或其等位变体；或其具有木葡聚糖酶活性的片段。
SEQIDNO：3的成熟多肽的片段是从该氨基酸序列的氨基和/或羧基末端去除一个或多个(若干个)氨基酸并仍保留木葡聚糖酶活性的多肽。
在第二方面，亲本木葡聚糖酶由在非常低的严格条件下，优选低严格条件下，更优选中严格条件下，更优选地中-高严格条件下，甚至更优选高严格条件下，最优选非常高的严格条件下与以下序列杂交的多核苷酸编码：(i)SEQIDNO：1或SEQIDNO：4或SEQIDNO：6的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQIDNO：1或SEQIDNO：4或SEQIDNO：6的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)(i)或(ii)的亚序列，或(iv)(i)、(ii)、或(iii)的全长互补链(J.Sambrook，E.F.Fritsch，和T.Maniatis，1989，MolecularCloning，ALaboratoryManual，第2版，ColdSpringHarbor，NewYork)。所述亚序列可编码具有木葡聚糖酶活性的多肽片段。在一个方面，所述互补链是SEQIDNO：1或SEQIDNO：4或SEQIDNO：6的成熟多肽编码序列的全长互补链。
SEQIDNO：1或SEQIDNO：4或SEQIDNO：6的成熟多肽编码序列的亚序列或它们的同源物是其中已经从5’-和/或3’-末端去除一个或多个(若干个)核苷酸的核苷酸序列，其中由所述亚序列编码的多肽具有木葡聚糖酶活性。
亲本酶也可为具有木葡聚糖酶活性的多肽的等位变体。
SEQIDNO：1或SEQIDNO：4或SEQIDNO：6的多核苷酸；或它们的亚序列；以及SEQIDNO：3或SEQIDNO：5或SEQIDNO：7的氨基酸序列；或它们的片段；可用于设计核酸探针以根据本领域熟知的方法鉴定并克隆编码亲本木葡聚糖酶的DNA，所述亲本木葡聚糖酶来自不同属或菌种的菌株。具体地讲，此类探针可用于按照标准的Southern印迹法与受关注的属或菌种的基因组或cDNA杂交以鉴定并分离其中对应的基因。此类探针可显著地比完整序列更短，但是长度应为至少14个，优选至少25个，更优选至少35个，最优选至少70个核苷酸。然而优选地是核酸探针长度为至少100个核苷酸。例如核酸探针长度可为至少200个核苷酸，优选至少300个核苷酸，更优选至少400个核苷酸，或最优选至少500个核苷酸。甚至可使用更长的探针，例如核酸探针长度为优选至少600个核苷酸，更优选至少700个核苷酸，甚至更优选至少800个核苷酸，优选至少900个核苷酸，优选至少1000个核苷酸，优选至少1100个核苷酸，优选至少1200个核苷酸，优选至少1300个核苷酸，优选至少1400个核苷酸，优选至少1500个核苷酸或最优选至少1600个核苷酸。能够使用DNA和RNA探针。探针通常进行标记以检测对应的基因(例如用32P、3H、35S、生物素、或亲和素标记)。本发明涵盖此类探针。
可筛选从其他生物中制备的基因组DNA文库以获取与上述探针杂交并编码亲本木葡聚糖酶的DNA。可通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他分离技术分离来自其他生物的基因组或其他DNA。可将来自文库的DNA或分离的DNA转移到硝化纤维或其他合适载体材料上并固定在其上。为了鉴定与SEQIDNO：1或其亚序列同源的克隆或DNA，将载体材料用于Southern印迹法。就本发明目的而言，杂交指所述多核苷酸在低至非常高的严格条件下杂交到对应于如SEQIDNO：1所示的多核苷酸、它的互补链、或其亚序列的标记核苷酸探针上。与所述探针杂交的分子能够使用例如X射线胶片或本领域已知的任何其他检测手段进行检测。
在一个方面，核酸探针是SEQIDNO：1的成熟多肽编码序列。在另一方面，核酸探针是SEQIDNO：1的核苷酸82至1653。在另一方面，核酸探针是编码SEQIDNO：2的多肽的多核苷酸序列或其亚序列。在另一方面，核酸探针是SEQIDNO：1。
就长度为至少100个核苷酸的长探针而言，将非常低至非常高的严格条件定义为在42℃，在5XSSPE，0.3％SDS，200微克/mL剪切变性鲑精DNA，以及25％甲酰胺(非常低和低严格条件)或35％甲酰胺(中和中-高严格条件)或50％甲酰胺(高和非常高严格条件)中预杂交和杂交，随后进行标准Southern印迹程序12至24小时(最适)。
就长度为至少100个核苷酸的长探针而言，最后用2XSSC，0.2％SDS优选地在45℃(非常低的严格条件)，更优选地在50℃(低严格条件)，更优选地在55℃(中严格条件)，更优选地在60℃(中-高严格条件)，甚至更优选地在65℃(高严格条件)，最优选在70℃(非常高的严格条件)洗涤载体材料三次，每次15分钟。
就长度为约15个核苷酸至约70个核苷酸的短探针而言，将严格条件定义为在约5℃至约10℃(低于计算出的Tm，所用的计算根据Bolton和McCarthy(1962，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA48：1390))，在0.9MNaCl，0.09MTris-HClpH7.6，6mMEDTA，0.5％NP-40，1XDenhardt溶液，1mM焦磷酸钠，1mM磷酸二氢钠，0.1mMATP，以及0.2mg酵母RNA每毫升中预杂交、杂交、以及杂交后洗涤，随后进行标准Southern印迹程序12-24小时(最合适)。
就长度为约15个核苷酸至约70个核苷酸的短探针而言，将载体材料在6XSCC加0.1％SDS中洗涤一次，时间15分钟，并且用6XSSC洗涤两次，每次15分钟，洗涤温度为5℃至10℃，低于计算出的Tm。
在第三方面，亲本木葡聚糖酶由包含以下核苷酸序列或由以下核苷酸序列组成的多核苷酸编码：所述核苷酸序列具有与SEQIDNO：1的成熟多肽编码序列优选至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，甚至最优选地96％，97％，98％，或99％的同一性，所述成熟多肽编码序列编码活性多肽。在一个方面，成熟多肽编码序列为SEQIDNO：1的核苷酸82至1653。
亲本木葡聚糖酶可获取自任何属的微生物。在一个方面，将亲本木葡聚糖酶分泌到细胞外。
在另一方面亲本木葡聚糖酶可为细菌木葡聚糖酶。例如木葡聚糖酶可为革兰氏阳性菌多肽例如芽孢杆菌属，优选来自芽孢杆菌属/乳酸杆菌亚群，优选来自属类芽胞杆菌属菌种，尤其是多粘类芽孢杆菌，例如多粘类芽胞杆菌ATCC832，优选地所述木葡聚糖酶是家族44木葡聚糖酶，例如如WO01/62903所述的木葡聚糖酶，更优选SEQIDNO：5的木葡聚糖酶，更优选来自SEQIDNO：7木葡聚糖酶，最优选SEQIDNO：2的木葡聚糖酶或它们的成熟多肽。
变体的制备
亲本木葡聚糖酶的变体能够根据本领域已知的任何诱变程序制备，例如随机和/或定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等。
合成基因构建需要体外合成设计的多核苷酸分子以编码受关注的多肽分子。基因合成能够利用许多技术进行，例如基于多元芯片的技术，该技术在Tian等人(Tian，等人，Nature432：1050-1054)中进行了描述，以及类似的技术，其中合成寡核苷酸并将其装配到光可编程的微流体芯片上。
半合成基因构建通过组合使用合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组来完成。半合成构建的典型是通过利用合成多核苷酸片段的过程与PCR技术组合使用。因此，可从头合成限定的基因区域，然而其他区域可使用位点特异性诱变引物进行扩增，而其他区域可经过易错PCR或非易错PCR进行扩增。然后多核苷酸片段可进行改组。
定点诱变是其中在编码亲本木葡聚糖酶的多核苷酸中的一个限定位点上制造一个或若干个突变的技术。该技术能在体外或体内进行。
定点诱变能在体外通过PCR完成，所述PCR涉及包含期望诱变的寡核苷酸引物的使用。定点诱变也能在体外通过盒诱变进行，所述盒诱变涉及限制性酶在包含编码亲本木葡聚糖酶的多核苷酸中的一个位点上裂解以及随后连接在多核苷酸中包含突变的寡核苷酸。通常消化质粒和寡核苷酸的限制性酶是相同的，使得质粒的粘性末端和插入序列彼此连接。为了进一步描述适用的技术，参考Sambrook等人(1989)，Molecularcloning：Alaboratorymanual，ColdSpringHarborlab.，ColdSpringHarbor，NY；Ausubel，F.M.等人(eds.)“CurrentprotocolsinMolecularBiology”.JohnWiley和Sons，1995；Harwood，C.R.和Cutting，S.M.(eds.)“MolecularBiologicalMethodsforBacillus”.JohnWiley和Sons，1990)，以及WO96/34946；Scherer和Davis，1979，Proc.Natl.Acad.Sci.USA76：4949-4955；以及Barton等人，1990，NucleicAcidsResearch18：7349-4966。
在连接反应后，连接混合物可用于转化宿主细胞以用于克隆目的。常使用大肠杆菌细胞，如Ausubel，F.M.等人所述。转化的大肠杆菌细胞能在液体培养基中或固体琼脂板上繁殖，能从转化细胞中拯救质粒并用于转化枯草芽孢杆菌细胞。适用的感受态芽孢杆菌属细胞如MB1510，168-衍生物(例如以登录号1A1168trpC2得自BGSC的产品)可如WO03/095658所述进行转化。用于文库构建的大肠杆菌质粒携带的整合盒可用于芽孢杆菌属转化。该方法详述于WO03/095658。作为另外一种选择，可使用体外扩增的PCR-SOE-产物(Melnikov和Youngman，NucleicAcidResearch27，1056)。
定点诱变可通过本领域已知的方法在体内完成。参见例如美国专利公开申请公布2004/0171154；Storici等人，2001，NatureBiotechnology19：773-776；Kren等人，1998，Nat.Med.4：285-290；以及Calissano和Macino，1996，FungalGenet.Newslett.43：15-16。
本发明能够使用任何定点诱变程序。有许多可利用的商业试剂盒可用于制备亲本木葡聚糖酶变体。
能使用已知的诱变、重组、和/或改组方法制造并测试单个或多个氨基酸取代、去除、和/或插入，随后进行有关的筛选程序，例如那些由以下文献公开的程序：Reidhaar-Olson和Sauer，1988，Science241：53-57；Bowie和Sauer，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86：2152-2156；WO95/17413；或WO95/22625。可用的其他方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人，1991，Biochem.30：10832-10837；美国专利公开5,223,409；WO92/06204)和定位诱变(Derbyshire等人，1986，Gene46：145；Ner等人，1988，DNA7：127)。
上述的诱变/改组方法能与高通量自动筛选方法组合使用以检测由克隆的诱变多肽的活性，所述多肽由宿主细胞表达，例如上述的芽孢杆菌属。编码具有木葡聚糖酶活性的多肽的诱变DNA分子可从宿主细胞中回收并使用本领域的标准方法快速测序。
变体
在本发明中，亲本木葡聚糖酶的分离变体包含在一个或多个(若干个)位点上的改变，所述位点选自由下列位点编号组成的组：68、123、156、118、200、129、137、193、92、83、149、34、340、332、9、76、331、310、324、498、395、366、1、374、7、140、8、14、21、211、37、45、13、78、87、436、101、104、111、306、117、119、414、139、268、142、159、164、102、168、176、180、482、183、202、206、217、4、222、19、224、228、232、2、240、244、5、247、249、328、252、259、406、267、269、275、179、166、278、281、288、298、301、18、302、165、80、303、316、169、322、120、146、342、348、147、353、380、468、382、383、38、384、389、391、10、392、396、177、397、399、409、237、413、253、415、418、40、443、445、148、449、225、450、454、3、455、456、299、461、470、204、476、488、347和507，其中具有木葡聚糖酶活性的变体包含氨基酸序列，所述氨基酸序列具有与亲本木葡聚糖酶的氨基酸序列至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，更优选至少95％，更优选至少约97％，最优选至少98％，以及甚至更优选99％的同一性。位点编号为相对于SEQIDNO：3的氨基酸序列。与亲本木葡聚糖酶相比，在一个或多个上文确定的位点包含改变的变体优选地具有在洗涤剂、优选地在液体洗涤剂中提高的稳定性。
在一个优选的实施方案中变体包含一个或多个(若干个)以下改变的组合：
V1*+V2*+H3*；
V1Q+*1aE+*1bV；
H3A；
H3A+H436A；
K8A，Q，S；
T9D；
T9D+L34F+A83E+Q149E+H193T+S332P+R340T；
I10V+D33E+M40L+A41T+Q67M+Y73F+S76D+G78A+Q82K+T92A+
L102Q+Q137E+I222V+V228I+D249N+S269N+V272A+E333A+I337L
+M356L+T374A+S416A+D444Y+A469E+K470T+I473G+T517A+S52
2*；
I10V+F17S+D33E+M40L+A41T+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+Q137E+V219A+D24
9N+V272A+I337L+M356L+V397A+S416A+T421I+S424N+N441D+D444Y+V450I+K470
T+I473S+V477I；
I10V+F17S+D33E+M40L+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+H16
4N+N168K+T172A+V219A+I222V+V228I+D249N+S269N+V272A+E333A+I337L+M356
L+N415S+T421I+S424H+N441D+D444Y+S522P+P523V+V524E；
I10V+F17S+D33E+M40L+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+I222
V+V228I+D249N+V272A+I337L+M356L+T374A+V397A+S416A+T421I+S424N+N441D
+D444Y+V450I+A469E+K470T+I473G+T517A+S522P+P523V+V524E；
I10V+F17S+D33E+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+N168K+T1
72A+I222V+V228I+D249N+V272A+E333A+I337L+M356L+V397A+S416A+T421I+S424
H+N441D+D444Y+A469E+K470T+I473S+V477I+E489A+A490V+T517A+S522*；
I10V+F17S+M40L+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+I222V+V22
8I+D249N+S269N+V272A+T320A+I337L+M356L+T374A+V397A+N415S+T421I+S424H
+N441D+D444Y+A469E+K470T
+I473S+V477I+T517A+S522P+P523V+V524E；
I10V+F17S+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T104A+Q137E+N153K+R156Q+V219A+I
222V+V228I+D249N+S269N+V272A+E333A+I337L+M356L+V397A+N415S+D420G+T4
21I+S424H+N441D+D444Y+V450I+A469E+K470T+I473G+T517A+S522*；
I10V+F17S+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+T104A+Q137E+R156Q+V159A+H
164N+N168K+T172A+I222V+V228I+D249N+V272A；
I10V+F17S+Y53H+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+T172V+A1
77T+I222V+V228I+D249N+S269N+I337L+M356L+V397A+S416A+T421I+S424H+N441
D+D444Y+A469E+K470T+I473G+T517A+S522*；
K13A+K129A；
K13A+Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P；
K13A，R；
K18R；
R20A；
K21Q+K129A；
K21Q，R，T；
Q32H+M40L+R49G+D65E+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+T104A+Q1
37E+H164N+K202E+I222V+V228I+D249N+M356L+T374A；
D33V+Q68H+N168H+V450I；
L34F，I，M，V；
L34I+K129A；
D37G，N+K129A+R156Y；
E38I，V；
M40L+A41T+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+Q137E+N153K+H164N+D249N+V272A
+I337L+M356L+V397A+N415S+T421I+S424N+N441D+V450I+E489A+A490V+T517A+S
522*；
M40V；
L45I；
Q68H，M，N；
Q68H+G200P+N331F；
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+K118A+R156V+G200P+N331F；
Q68H+K118A+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+K118R+R156F，Y；
Q68H+K118R+R156Y+G200P；
Q68H+K118S+R156F+G200P+G274D+N331F；
Q68H+K129A，T+R156K+G200P+N331F；
Q68H+R156F，V，Y+G200P+N331F；
Q68H+R156Y；
Q68H+R156Y+H193T；
Q68H+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+R156Y+H193T+G200P+M310V；
Q68H+S76W+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92A，D，I，S，V，Y+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92N+D97N+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92S+K118A+K129A+R156Y+G200P+G274D+N331F；
Q68H+T92V+G200P+M310V；
Q68H+T92V+G200P+M310V+N331F；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+A224P+N331F；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+G200P+M310V+E446K；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+N331H，K，Q；
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T；
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+G200P+M310V；
Q68H+T92V+K118A+Q137E+N140F+R156Y+G200P+K470T；
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+D324N；
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+K470T；
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+M310L；
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92V+K118A，R+R156Y，F；
Q68H+T92V+K118A+S123P，T+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92V+K118R+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V+S484C；
Q68H+T92V+R156F，V，Y+G200P+M310V；
Q68H+T92V+R156F，V，Y+G200P+M310V+N331F；
Q68H+T92V+R156F，Y+H193T；
Q68H+T92V+R156F，Y+H193T+D366H；
Q68H+T92V+R156F，Y+H193T+G200P+M310V；
Q68H+T92V+R156Y；
S76E，I，K，M，R，T，V，W；
S76W+G200P；
S76W+G200P+A224P；
G78A+K118A++K129A+R156Y；
G78A+K118A+K129A+R156Y；
G78A+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
G78A+K118A+K129A+R156Y+K169A；
G78A，N，S；
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y；
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+K169A；
L80V；
A83D，E，H，I，L，N，R，S，T，Y；
K87Q；
K87V+K129A+K169A；
T92I，V；
T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
T92V+K118A+K129A+R156Y；
T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
T92V+K118A+K129A+R156Y+H164N+G200P+N331F；
T92V+K129A+R156Y；
K101A+K129A；
K101R；
K101R+L102I；
T104A+P111Q+A117S+K129A+R156Y；
P111Q；
K118A+K129A；
K118A+K129A+F146L+R156Y+G200P+N331F；
K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
K118A+K129A+R156Y；
K118A+K129A+R156Y+A224P；
K118A+K129A+R156Y+G200P；
K118A+K129A+R156Y+G200P+M310V+N331F；
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F+N399I；
K118A+K129A+R156Y+K169A+G200P+N331F；
K118A+K129A+R156Y+K470T；
K118A，R；
K118A+R156Y；
K118A+R156Y+G200P；
D119L；
G120A；
S123P，T；
S123T+K129A+R156Y；
K129A，F，I，K，R，S，T；
K129A+K169A；
K129A+K176P；
K129A+K275Q；
K129A+K445S；
K129A+K470T；
K129A+Q137E+R156Y；
K129A+Q137E+R156Y+G200P；
K129A+Q137E+R156Y+K470T；
K129A+Q137E+V139K+N140F+Q147S+R156Y；
K129A+R156Y；
K129A+R156Y+A177T+V179I+A183S；
K129A+R156Y+A328G；
K129A+R156Y+D247G；
K129A+R156Y+D249G，N，S；
K129A+R156Y+D303I，K，S，V；
K129A+R156Y+D324N；
K129A+R156Y+D366H+T374A；
K129A+R156Y+D461N，Q，T；
K129A+R156Y+E288Q；
K129A+R156Y+G200P；
K129A+R156Y+G200P+G204T+R211K；
K129A+R156Y+H164N；
K129A+R156Y+H436Y；
K129A+R156Y+I10V+V14I+D19E；
K129A+R156Y+I222V+A224P+V228I+V232A；
K129A+R156Y+K176P，S；
K129A+R156Y+K275T；
K129A+R156Y+K322I+K454Q；
K129A+R156Y+K406N+N415G；
K129A+R156Y+K454Q；
K129A+R156Y+L380F+N383Y+D384G+N389T；
K129A+R156Y+N298F+E299N+G301T；
K129A+R156Y+N302K+D303L，S；
K129A+R156Y+N331F；
K129A+R156Y+P507A；
K129A+R156Y+R267H；
K129A+R156Y+R409L，T；
K129A+R156Y+S443D+K445S+L449I+V450I+S455N+M456Y；
K129A+R156Y+T244D；
K129A+R156Y+V159M+H164N+F165Y；
K129A+R156Y+V259I+R267K+L268K+S269A；
Q137D，E；
N140F；
K142A，Q，R；
F146C+H164C；
F146K，L；
F146L+K322I；
L148K+N168D；
Q149E；
R156A，D，E，F，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，Y；
R156Y+N331F；
V159M；
H164A，N；
L166I；
N168D；
K169A，Q，R；
K176P；
A177E，T；
K180R；
H193A，D，S，T；
R197A，L；
H199A；
G200A，C，D，E，F，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，Y；
G200P+A224P；
K202N，Q，R；
S214E；
K217A；
A221K；
G225S；
V232A；
G237A，S，V；
K240A，Q，R；
K252A，Q，R；
G253A；
R267A；
L268I；
K275A，Q，R；
L278I；
F281L；
M290R；
R295A；
K306A，R；
K307Q；
M310I，L，V；
M310V+N399I；
R314A；
G316I；
K322A，R；
D324N；
N331A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，P，Q，R，S，T，V，W，Y；
S332M，P；
S332P+V397I；
R340A，N，T；
K342A；
V345I；
K347A，Q，R；
D348G；
K353Q，R；
D366H；
M373Q；
T374A；
L380F；
K382A；
N383Y；
N389A，F，N，V；
W391V；
K392G，Q；
D395G；
G396P；
V397S；
N399I；
K406N；
G413A，S；
K414A；
N415S；
T417K；
F418I；
V431E；
H436A；
N441G+A442E+S443D；
S443E，K，Q；
K445A，R，S；
K445C+K470C；
H448A；
K454R；
S467R+G468S+A469T；
G468S，Y；
K470P，R，T；
I473T；
K476Q；
K482A，Q，R；
K488A，Q，R，T；
A490R；
G498A，D，S；
R500A，T，V；
H512A；
T517A+G518D；或
G518D；
在一个方面，在本发明变体中的氨基酸改变的数目包括优选地总数55个，优选52个，更优选50个，更优选40个，更优选30个，更优选20个，更优选15个，更优选十个，更优选九个，更优选八个，甚至更优选七个，甚至更优选六个，甚至更优选五个，甚至更优选四个，甚至更优选三个，最优选两个改变，以及最优选一个改变。在另一方面改变的总数为一个，优选两个，更优选三个，甚至更优选四个，甚至更优选五个，甚至更优选六个，甚至更优选七个，甚至更优选八个，甚至更优选九个，最优选十个。改变可为以下形式：i)在占据所述位点的氨基酸下游插入一个氨基酸；ii)去除占据所述位点的氨基酸，或iii)用一个不同的氨基酸取代占据所述位点的氨基酸。可进行彼此独立的改变，例如与亲本木葡聚糖酶相比，在一个位点可以有一个插入，而在第二个位点有一个取代并在第三个位点有一个删除。在一个优选的实施方案中所述变体仅包含取代。
在本发明的一个方面基于共有序列分析鉴定将发生突变的位点。所述分析通过将SEQIDNO：3与SEQIDNO：5和SEQIDNO：7以及来自uniprot数据库的其他序列比对来完成，来自uniprot数据库的其他序列与SEQIDNO：3的家族44糖基水解酶区域具有30％的同一性。所得共有序列如图1所示。共有序列1是在给定位点包含比对中出现频率最高的氨基酸的序列，共有序列2是在给定位点具有出现频率第2高的氨基酸的序列等等。在本发明的一个方面，SEQIDNO：3的一个或多个(若干个)残基被来自共有序列1或共有序列2或共有序列3或共有序列4的对应残基取代。在本发明的一个方面变体在一个或多个(若干个)位点包含改变，所述位点选自由通过共有序列分析鉴定的52个位点组成的组：位点编号10、19、68、80、89、104、111、117、123、129、137、139、140、147、156、159、164、165、177、179、183、200、204、211、222、224、225、228、232、259、267、268、269、281、328、345、366、374、380、383、384、406、415、436、443、445、449、450、455、456、488和507。在一个优选的实施方案中所述改变为取代或若干个取代，选自由下列组成的组：I10V、D19E、Q68H、L80V、G89A、T104A、P111Q、A117S、S123P、K129T、Q137E、V139K、N140F、Q147S、R156Y、V159M、H164N、F165Y、A177T、V179I、A183S、G200P、G204T、R211K、I222V、A224P、G225S、V228I、V232A、V259I、R267K、L268K、S269A、F281L、A328G、V345I、D366H、T374A、L380F、N383Y、D384G、K406N、N415G、H436Y、S443D、K445S、L449I、V450I、S455N、M456Y、K488T和P507A。
在本发明的另一方面，变体通过将在亲本肽中的那些带正电荷并位于钙离子内的氨基酸变成中性或带负电的氨基酸来产生。本发明的优选变体包括其中在距钙离子内的总电荷已经为负的变体。在专利申请条件下，在此类变体中带正电的氨基酸可已经用中性或带负电的氨基酸取代。因此在“化学稳定”或专利申请条件下，优选的变体可具有部分或全部带正电的氨基酸残基，即用带负电的或中性氨基酸取代Lys、Arg或His。优选的取代氨基酸可为带负电的氨基酸如Asp和Glu或中性氨基酸如Ala、Asn、Gln、Tyr、Trp和Phe。本发明的优选变体在一个或多个位点包含改变，所述位点选自由下列位点编号组成的组：49、87、118、129、134、142、156、169和197。在一个优选的实施方案中所述改变为在一个或多个位点上的取代，所述取代选自由下列位点编号组成的组：87、118、129、134、142、156、和169。在一个优选的实施方案中所述取代选自由下列组成的组：K87A；K129A，S，F，I；K118A；K142A，Q、R156Y，F，V，I，K，W，L，M和K169Q，A。
在一个方面，亲本木葡聚糖酶的变体在一个或多个包含(若干个)位点上包含改变，所述位点对应于位点68或123或156或118或200或129或137或193或92或76或331。所述变体优选地在位点68上包含取代，并且在一个或多个另外的位点上包含一个或多个取代，所述另外的位点选自由下列位点编号组成的组：123、156、118、200、129、137、193、92、83、149、34、340、332、9、76、331、310、324、498、395和366。
在另一方面，变体在位点156上包含一个取代，并且在一个或多个另外的位点上包含一个或多个取代，所述另外的位点选自由下列位点编号组成的组：10、13、14、19、37、68、78、92、118、123、129、137、139、140、147、159、164、165、169、176、177、179、183、200、204、211、222、224、244、247、249、259、267、268、269、275、288、299、301、302、303、310、324、328、331、366、380、383、384、389、406、409、415、436、443、445、449、450、454、455、456、461、470和507。
在另一方面，亲本木葡聚糖酶的变体在两个或更多个(若干个)位点上包含改变，所述位点对应于位点68或123或156或118或200或129或137或193或92或76或331。所述变体优选在位点68或123或156或118或200或129上包含取代。所述变体甚至更优选在位点129和位点156上包含取代。
在另一方面，亲本木葡聚糖酶的变体在三个或更多个(若干个)位点上包含改变，所述位点对应于位点68或123或156或118或200或129或137或193或92或76或331。
在另一方面，亲本木葡聚糖酶的变体在四个或更多个(若干个)位点上包含改变，所述位点对应于位点68或123或156或118或200或129或137或193或92或76或331。
在另一方面，亲本木葡聚糖酶的变体在五个或更多个(若干个)位点上包含改变，所述位点对应于位点68或123或156或118或200或129或137或193或92或76或331。
在另一方面，亲本木葡聚糖酶的变体在六个或更多个(若干个)位点上包含改变，所述位点对应于位点68或123或156或118或200或129或137或193或92或76或331。
在另一方面，亲本木葡聚糖酶的变体在七个或更多个(若干个)位点上包含改变，所述位点对应于位点68或123或156或118或200或129或137或193或92或76或331。
在另一方面，亲本木葡聚糖酶的变体在对应于位点129和156和331和200和118的位点上包含改变。
在另一方面，亲本木葡聚糖酶的变体在对应于位点68和129和156和331和200和118的位点上包含改变。
在另一方面，亲本木葡聚糖酶的变体在对应于位点68和92和129和156和331和200和118的位点上包含改变。
在另一方面所述变体包含一个或多个(若干个)取代，所述取代选自由下列组成的组：Q68H，N，L；S123P，T；R156Y，F，V，I，K，W，L，M；K118A，R；G200P，E，S，D；K129T，A，S；Q137E；H193T，S，D；T92V，I，A，S；A83E；Q149E；L34F，I，V；R340T，N；S332P；T9D；S76W，V，I，K，R，T；N331F，C；M310I，V，L；D324N；G498A，D；D395G和D366H。所述取代优选地选自由下列组成的组：Q68H；S123P；R156Y，F；K118A；G200P，E；K129T，A；Q137E；H193T；T92V和N331F。所述取代更优选地选自由下列组成的组：Q68H；S123P；R156Y，F；K118A；G200P，E；K129T，A；Q137E；T92V和N331F。更优选地，所述变体在九个或八个，七个或六个或五个或四个或三个或两个或一个位点上包含一个取代，其中所述取代选自由下列组成的组：Q68H；S123P；R156Y，F；K118A；G200P，E；K129T，A；Q137E；T92V和N331F。
在另一方面，所述变体包含一个或多个(若干个)以下取代组合：
Q68H
S123P
R156Y
Q68H+R156Y
K129A+R156Y
S123T+K129A+R156Y
K129A+R156Y+G200P
Q68H+K118R+R156F
Q68H+R156Y+H193T
Q68H+R156F+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+R156Y
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y
Q68H+K129T+R156K+G200P+N331F
K118A+K129A+R156Y+K169A+G200P+N331F
T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F
G78A+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+K169A
Q68H+T92V+Q137E+R156Y+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+N331F
Q68H+T92V+R156Y+G200P+M310V+N331F
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366H
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366H
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+S123P，T+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+A224P+N331F
在一个优选的实施方案中上述所有变体为亲本木葡聚糖酶的变体，所述亲本木葡聚糖酶属于糖基水解酶家族44，更优选所述亲本木葡聚糖酶选自与SEQIDNO：3氨基酸序列具有至少75％的同一性的木葡聚糖酶，更优选所述亲本木葡聚糖酶选自由下列组成的组：SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、SEQIDNO：5和SEQIDNO：7，并且最优选所述亲本木葡聚糖酶由SEQIDNO：3组成。
组合物
本发明也涉及包含变体木葡聚糖酶或具有本发明木葡聚糖酶活性的多肽的组合物。所述组合物优选地富集此类变体或多肽。术语“富集的”指示所述组合物的木葡聚糖酶活性已经被提高了，例如浓缩因子为1.1或更高。优选地，配制所述组合物以提供所期望的特性例如浅色、低气味和可接受的贮存稳定性。
所述组合物可包含本发明的变体或多肽作为主要酶组分，例如单组分组合物。作为另外一种选择，所述组合物可包含多种酶活性，例如氨基肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、壳多糖酶、角质酶、环糊精葡萄糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、酯酶、α-半乳醣苷酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、卤素过氧化物酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、氧化酶、果胶酶、肽谷氨酰胺酶、过氧化物酶、肌醇六磷酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、或木聚糖酶。
所述多肽组合物可根据本领域已知的方法制备，并且可为液体或干燥制剂形式。例如多肽可制成为粒状或微粒状形式。所述组合物中将包括的变体或多肽可根据本领域已知的方法稳定。在一个优选的实施方案中将变体木葡聚糖酶配制成液体组合物。
使用
本发明也涉及使用木葡聚糖酶变体的方法。
将变体木葡聚糖酶优选地掺入洗涤剂组合物和/或与其一起使用，例如衣物洗涤剂组合物如家用衣物洗涤剂组合物尤其是液体衣物洗涤剂组合物。洗涤剂组合物通常包含常规洗涤剂成分例如表面活性剂(阴离子的、阳离子的、非离子的、两性离子的、两性的表面活性剂)、助洗剂、漂白剂、聚合物、其他酶和其他成分，例如在WO2007/130562和WO2007/149806中所述的成分，上述文献据此全文以引用方式并入本文。
洗涤剂组合物可为任何形式，例如固体、液体、凝胶或它们的任何组合，所述组合物优选地为液体形式，优选地为液体衣物洗涤剂组合物。
本发明的一个方面是将本发明的木葡聚糖酶变体或木葡聚糖酶变体组合物与洗涤剂组合物一起使用以赋予织物或衣服抗起球和/或织物柔软性和/或颜色清晰和/或污垢移除和/或抗污垢再沉淀和/或抑制染料转移的有益效果。
此外本发明涉及洗涤织物的方法，所述方法包括用包含洗涤剂组合物和本发明的木葡聚糖酶变体或木葡聚糖酶变体组合物的洗涤溶液处理织物。洗涤处理能够在例如机洗过程或手洗过程中进行。洗涤溶液可为例如包含洗涤剂组合物并具有介于3和12之间的pH的洗涤水溶液。
在洗涤和使用期间，织物或衣服表面将通常被破碎的或脱落的纤维片段弄脏，纤维片段能使织物的外观褪色并磨损。从织物上移除这些表面纤维将部分恢复织物的初始颜色和外观，导致颜色清晰和外观改善。本发明的木葡聚糖酶变体或木葡聚糖酶变体组合物可通过用于单个或多个(重复)洗涤循环来提供颜色清晰和/或外观改善的有益效果。
此外纺织物表面的微纤维突出能够聚集成小球，即，粘到织物表面并破坏其外观的所谓的小球或绒毛。本发明的木葡聚糖酶变体或木葡聚糖酶变体组合物可用于移除此类小球，称为抗起球效应。
可通过目测，使用测试组样板评估颜色清晰度和抗起球。该效应也可通过光反射测量或通过光学测量测定棉制品绒毛。这些方法一般来讲是本领域已知的，并且简述于EnzymesinDetergency，1997，由MarcelDekker公布，第139至140页。
尤其是随着洗涤循环数的增加，在纺织物纤维表面上积累了堆积物，所述堆积物可包括粒状污垢、可溶解污垢、染料和颜料、以及不溶解盐。这可导致洗涤处理感觉到的清洁性能发生可见的劣化，例如导致织物的外观浅灰色或微黄色。这可通过在洗涤循环中使用本发明的木葡聚糖酶变体或木葡聚糖酶变体组合物来预防。将该效应称为抗再沉淀或染料转移抑制或污垢移除效应，并且该效应可通过光学测量进行评估。
织物表面上和纤维间留存的污垢或不溶解的盐微粒能够导致织物硬化。通过将本发明的木葡聚糖酶变体或木葡聚糖酶变体组合物加入洗涤循环可软化织物。
用本发明的方法处理的织物可为常规的可洗衣物，例如家居衣物。衣物的主要部分优选地是衣服和织物，包括针织品、织造品、牛仔布、纱线、和毛巾，它们由棉布、棉混纺织物或天然的或人造的纤维(例如来源于木浆)或它们的混纺织物制成。混纺织物的实例为棉混纺物或人造丝/粘胶连同一种或多种伴侣材料如羊毛、合成纤维(例如，聚酰胺纤维、丙烯腈系纤维、聚酯纤维、聚乙烯醇纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳族聚酰胺纤维)、和含有纤维素的纤维(例如，人造丝/粘胶、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、乙酸纤维素纤维、lyocell纤维)。
人们认识到用包含本发明木葡聚糖酶变体或木葡聚糖酶变体组合物的洗涤剂溶液处理织物和/或衣服可尤其与例如新纤维和/或织物和/或衣服的生产有关，也尤其与使用的织物和/或衣服的洗涤过程有关，例如家庭洗衣过程或洗衣店洗衣过程。
本发明的木葡聚糖酶变体或木葡聚糖酶变体组合物的剂量和使用组合物的其他条件(包括洗涤剂溶液的组成和浓度)可基于本领域已知的方法测定。
木葡聚糖酶可用于本发明的组合物以影响包含纤维素或半纤维素衍生物的污垢的移除、促进抗再沉淀并改善去垢性。木葡聚糖酶也能用于本发明的组合物以在随后的洗衣过程中赋予棉制品去垢有益效果。在棉制织物和含显著量棉的所有类型织物诸如棉混纺(例如聚酯、聚酰胺如NylonTM、和弹力棉)织物上观察到去垢有益效果。
衣物洗涤剂组合物
本发明的衣物洗涤剂组合物包含亲本木葡聚糖酶的分离变体。亲本木葡聚糖酶的分离变体在上文中详述。所述组合物优选包含特异性的两亲烷氧基化油脂清洁聚合物。所述组合物优选包含去污表面活性剂，优选低含量的去污表面活性剂。特定的两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物更详细地描述于下文。去污表面活性剂更详细地描述于下文。所述组合物优选包含无规接枝共聚物。下文中详述了适用的无规接枝共聚物。
优选地，所述组合物包含具有下列一般结构的化合物：二((C2H5O)(C2H4O)n)(CH3)-N+-CxH2x-N+-(CH3)-二((C2H5O)(C2H4O)n)，其中n＝20至30，并且x＝3至8，或其硫酸化或磺化的变体。
所述组合物优选包含香料微胶囊，所述香料优选被包封在三聚氰胺甲醛薄膜中。
洗涤剂组合物优选包含约0.00003重量％至约0.2重量％，约0.00008重量％至约0.05重量％，或者甚至约0.0001重量％至约0.04重量％的织物调色剂。所述组合物可包含0.0001-0.2重量％的织物调色剂，当所述组合物是单位剂量小袋形式时，这可为尤其优选的。
所述衣物洗涤剂组合物可为任何形式，如固体、液体、凝胶或它们的任何组合。所述组合物可为片剂或小袋的形式，包括多隔室小袋。所述组合物可为自由流动的粉末形式，如附聚物、喷雾干燥粉末、胶囊包封物、挤出物、针状物、条状物、薄片、或它们的任何组合。然而，所述组合物优选为液体形式。此外，所述组合物为各向同性或各向异性形式。所述组合物或至少其部分优选为层状相。
所述组合物优选包含少量的水，如0.01-10重量％，优选至5重量％，优选至4重量％，或至3重量％，或至2重量％，或甚至至1重量％。如果所述组合物为通常至少部分、优选完全被水溶性薄膜包封的小袋形式时，这是尤其优选的。所述水溶性薄膜优选包含聚乙烯醇。
所述组合物可包含结构剂、诸如氢化蓖麻油。尤其可用于本发明的组合物中的结构化试剂的一种适宜的类型包括非聚合的(除了常规的烷氧基化作用)晶体羟基功能性材料。这些结构剂材料通常形成遍布液体基质的附连的分子间螺纹样网络，通常在基质内就地结晶。优选的结构剂为晶体、含羟基脂肪酸、脂肪族酯或脂肪族蜡。适宜的结构剂通常选自具有下列化学式的那些：
其中：
(x+a)介于11和17之间；
(y+b)介于11和17之间；并且
(z+c)介于11和17之间。
优选地，在该式中，x＝y＝z＝10和/或a＝b＝c＝5。
优选的结晶含羟基结构化剂的具体实施例包括蓖麻油及其衍生物。尤其优选的是氢化蓖麻油衍生物，例如氢化蓖麻油和氢化蓖麻蜡。可商购获得的基于蓖麻油的结晶含羟基结构剂包括得自Rheox，Inc.(现为Elementis)的THIXCIN。
所述组合物还优选包含链烷醇胺以中和酸性组分。适宜的链烷醇胺的实例为三乙醇胺和单乙醇胺。当所述组合物包含蛋白酶稳定剂，如硼酸或其衍生物，如硼酸时，这是尤其优选的。适宜的硼酸衍生物的实例为下列化学式的苯基硼酸衍生物：
其中R选自由下列组成的组：氢、羟基、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烯基和取代的C1-C6烯基。
高度优选的蛋白酶稳定剂为4-甲酰基-苯基硼酸。适用作蛋白酶稳定剂更多适宜的硼酸衍生物描述于US4,963,655、US5,159,060、WO95/12655、WO95/29223、WO92/19707、WO94/04653、WO94/04654、US5,442,100、US5,488,157和US5,472,628。
所述组合物可包含可逆肽蛋白酶抑制剂。优选地，所述可逆肽蛋白酶抑制剂为三肽酶抑制剂。适宜的三肽酶抑制剂例证性的非限制性实例包括：
以及它们的混合物。
所述可逆肽蛋白酶抑制剂可用任何适宜的方式制备。用于制造所述可逆肽蛋白酶抑制剂适宜的方法的例证性的非限制性实例存在于美国专利公开6,165,966中。
在一个实施方案中，所述组合物包含按所述组合物的重量计约0.00001％至约5％，具体地讲约0.00001％至约3％，更具体地讲约0.00001％至约1％的可逆肽蛋白酶抑制剂。
所述组合物优选包含溶剂。所述溶剂通常为水或有机溶剂或它们的混合物。优选地，所述溶剂为水和有机溶剂的混合物。如果所述组合物为单位剂量小袋的形式，那么优选所述组合物包含有机溶剂和小于10重量％或5重量％、或4重量％或3重量％的游离水，并且可以甚至为无水的，通常不包含有意添加的游离水。通常使用KarlFischer滴定法测量游离水。在室温下将2g衣物洗涤剂组合物在50mL干燥甲醇中萃取20分钟并通过KarlFischer滴定法分析1mL甲醇。
所述组合物可包含0重量％以上至25重量％，或0重量％以上至20重量％，或0重量％以上至15重量％，或0重量％以上至10重量％，或0重量％以上至8重量％，优选地0重量％以上至5重量％，最优选地0重量％以上至3重量％的有机溶剂。适宜的溶剂包括C4-C14醚和二醚、乙二醇类、烷氧基化的乙二醇类、C6-C16乙二醇醚、烷氧基化的芳族醇、芳族醇、脂族支链的醇、烷氧基化的脂族支链的醇、烷氧基化的直链的C1-C5醇、直链的C1-C5醇、胺、C8-C14烷基和环烷基烃和卤代烃、以及它们的混合物。
优选的溶剂选自甲氧基十八醇、2-(2-乙氧基乙氧基)乙醇、苄醇、2-乙基丁醇和/或2-甲基丁醇、1-甲基丙氧基乙醇和/或2-甲基丁氧基乙醇、直链的C1-C5醇，如甲醇、乙醇、丙醇、丁基二乙二醇醚(BDGE)、丁三甘醇醚、叔戊基醇、甘油、异丙醇、以及它们的混合物。能够用于本文尤其优选的溶剂为丁氧基丙氧基丙醇、丁基二乙二醇醚、苄醇、丁氧基丙醇、丙二醇、甘油、乙醇、甲醇、异丙醇、以及它们的混合物。其它适宜的溶剂包括丙二醇和二甘醇、以及它们的混合物。
所述组合物优选地包含按所述组合物的重量计约0.1％至约5％的钙多价螯合剂，所述螯合剂在pH8下具有大于约4的条件稳定常数。在一个实施方案中，优选地为液体形式的所述组合物可包含在pH8下具有大于约4的条件稳定常数的钙多价螯合剂。在pH8下具有大于约4的条件稳定常数的钙多价螯合剂能够与钙离子形成可溶解的复合物。在一个实施方案中，钙多价螯合剂选自1-羟基亚乙基1，1二磷酸(HEDP)、二乙三胺五乙酸(DTPA)、氨三乙酸(NTA)以及它们的组合。钙多价螯合剂和它们的稳定常数的附加信息可见于“KeystoChelationwithVerseneChelatingAgents”，公布于DowCompany，参见表4.4、4.5、4.6、4.7.″，以及MonsantoTechnicalBulletin53-39(E)ME-2。
固体衣物洗涤剂组合物
在本发明的一个实施方案中，所述组合物为固体衣物洗涤剂组合物，优选固体衣物洗涤粉末洗涤剂组合物。
所述组合物优选包含0-10重量％，甚至至5重量％的沸石助洗剂。所述组合物还优选包含0-10重量％，甚至5重量％的磷酸盐助洗剂。
所述组合物通常包含优选与辅助表面活性剂组合的阴离子去污表面活性剂，优选直链烷基苯磺酸盐。优选的辅助表面活性剂为平均乙氧基化度为1-10，优选1-3的烷基乙氧基化硫酸盐，和/或平均乙氧基化度为1-10，优选3-7的乙氧基化醇。
所述组合物优选包含螯合剂，所述组合物优选包含0.3-2.0重量％的螯合剂。适宜的螯合剂是乙二胺-N，N’-二琥珀酸(EDDS)。
所述组合物可包含纤维素聚合物，如以下物质的钠盐或钾盐：羧甲基纤维素、羧乙基纤维素、磺乙基纤维素、磺基丙基纤维素、纤维素硫酸盐、磷酸化纤维素、羧甲基羟乙基纤维素、羧甲基羟丙基纤维素、磺乙基羟乙基纤维素、磺乙基羟丙基纤维素、羧甲基甲基羟乙基纤维素、羧甲基甲基纤维素、磺乙基甲基羟乙基纤维素、磺乙基甲基纤维素、羧甲基乙基羟乙基纤维素、羧甲基乙基纤维素、磺乙基乙基羟乙基纤维素、磺乙基乙基纤维素、羧甲基甲基羟丙基纤维素、磺乙基甲基羟丙基纤维素、羧甲基十二烷基纤维素、羧甲基十二烷酰基纤维素、羧甲基氰乙基纤维素、和磺乙基氰乙基纤维素。所述纤维素可以是被两个或更多个不同取代基取代的纤维素，如甲基和羟乙基纤维素。
所述组合物可包含去垢聚合物，如Repel-o-TexTM。其它适宜的去垢聚合物是阴离子去垢聚合物。适宜的去垢聚合物更详细地描述于WO05123835A1、WO07079850A1和WO08110318A2中。
所述组合物可包含喷雾干燥粉末。所述喷雾干燥粉末可包括硅酸盐，如硅酸钠。
两亲烷氧基化油脂清洁聚合物
本发明的两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物是指任何具有平衡的亲水性和疏水性的烷氧基化的聚合物，这使得它们从织物和表面移除油脂颗粒。本发明两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物具体的实施方案包括核结构和多个连接到那个核结构的烷氧基化物基团。
所述核结构可包括聚亚烷基亚胺结构，其以密集的形式包含化学式(I)、(II)、(III)和(IV)的重复单元：
其中：在各种情况下，#表示介于式(I)、(II)、(III)或(IV)的两个邻近重复单元的氮原子和基团A1的自由结合位置之间的半个键；*在各种情况下表示其中一个烷氧基化物基团的半个键；并且A1独立地选自直链或支链的C2-C6-亚烷基；其中聚亚烷基亚胺结构由1个式(I)的重复单元、x个式(II)的重复单元、y个式(III)的重复单元和y+1个式(IV)的重复单元组成，其中在各种情况下x和y具有在0至约150范围内的值；其中所述聚亚烷基亚胺核心结构的重均分子量Mw具有在约60至约10,000g/mol范围内的值。
作为另一种选择，所述核结构可包含至少一种选自化学式(I.a)和/或(I.b)N-(羟烷基)胺的缩合产物的化合物的聚链烷醇胺结构，
其中A独立地选自C1-C6-亚烷基；R1、R1*、R2、R2*、R3、R3*、R4、R4*、R5和R5*独立地选自氢、烷基、环烷基或芳基，其中最后三个提到的基团可被任选地取代；并且R6选自氢、烷基、环烷基或芳基，其中最后三个提到的基团可被任选地取代。
连接到所述核结构多个烯氧基基团独立地选自化学式(V)的烯氧基单元
其中*在各种情况下，表示键合到式(I)、(II)或(IV)的重复单元的氮原子上的半个键；在各种情况下，A2独立地选自1，2-亚丙基、1，2-亚丁基和1，2-亚异丁基；A3为1，2-亚丙基；在各种情况下，R独立地选自氢和C1-C4-烷基；m具有在0至约2范围内的平均值；n具有在约20至约50范围内的平均值；并且p具有在约10至约50范围内的平均值。
两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物具体的实施方案可选自具有内聚环氧乙烷嵌段和外聚丙烯氧基嵌段烷氧基化的聚亚烷基亚胺，乙氧基化度和丙氧基化度不会超过或低于具体的限定值。根据本发明的烷氧基化聚亚烷基亚胺的具体实施方案具有约0.6的最小聚乙烯嵌段对聚丙烯嵌段的比率(n/p)和约1.5(x+2y+1)1/2的最大比率。已发现，具有约0.8至约1.2(x+2y+1)1/2的n/p比率的烷氧基化聚亚烷基亚胺具有特别有益的特性。
根据本发明的烷氧基化聚亚烷基亚胺具有一条主链，所述主链由伯胺、仲胺和叔胺氮原子组成，其通过亚烷基A互相连接并且是无规排列的。伯氨基部分，其是聚亚烷基亚胺主链的主要链和侧链的起始点或终结点并且其剩余的氢原子随后被亚烷氧基单元取代，分别被称为式(I)或(IV)的重复单元。仲氨基部分，其剩余的氢原子随后被亚烷氧基单元取代，被称为式(II)的重复单元。叔氨基部分，其使主要链和侧链分叉，被称为式(III)的重复单元。
由于在聚亚烷基亚胺主链的形成中会发生环化，在主链中还可能存在少量的环状氨基部分。当然，包含环状氨基部分的此类聚亚烷基亚胺以与由非环状伯氨基和仲氨基部分组成的那些相同的方式烷氧基化。
由氮原子和基团A1组成的聚亚烷基亚胺主链具有约60至约10,000g/mol，优选约100至约8,000g/mol，并且更优选约500至约6,000g/mol的平均分子量Mw。
(x+2y+1)的和对应于存在于一条单独的聚亚烷基亚胺主链中的亚烷基亚胺单元的总数，并因此直接与所述聚亚烷基亚胺主链的分子量相关。然而，在本说明书中给出的值涉及所述混合物中存在的所有聚亚烷基亚胺的平均数。(x+2y+2)的和对应于存在于一条单独的聚亚烷基亚胺主链中的氨基的总数。
连接氨基氮原子的基团A1可以是相同或不同的、直链或支链的C2-C6-亚烷基，如1，2-亚乙基、1，2-亚丙基、1，2-亚丁基、1，2-亚异丁烯、1，2-亚戊基、1，2-亚己基或六亚甲基。优选的支链亚烷基是1，2-亚丙基。优选的直链亚烷基是亚乙基和六亚甲基。更优选的亚烷基是1，2-亚乙基。
聚亚烷基亚胺主链中伯胺基和仲胺基的氢原子可被式(V)的亚烷氧基单元取代。
在该式中，所述变量优选具有以下所给出的一种含义：
在各种情况下，A2选自1，2-亚丙基、1，2-亚丁基和1，2-亚异丁基；优选地A2是1，2-亚丙基。A3为1，2-亚丙基；在各种情况下R选自氢和C1-C4烷基，如甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基、和叔-丁基；R优选地是氢。在各种情况下指数m的值为0至约2；优选地m为0或大约1；更优选地m为0。指数n的平均值在约20至约50的范围内，优选地在约22至约40的范围内，更优选地在约24至约30的范围内。指数p的平均值在约10至约50的范围内，优选地在约11至约40的范围内，更优选地在约12至约30的范围内。
式(V)的亚烷氧基单元优选是非随机序列的烷氧基化物嵌段。通过非随机序列是指首先添加[-A2-O-]m(即最接近式(I)、(II)或(III)的重复单元的氮原子的键)，其次添加[-CH2-CH2-O-]n，而第三个添加[-A3-O-]p。该目标提供具有内层聚环氧乙烷嵌段和外层聚环氧丙烷嵌段的烷氧基化聚亚烷基亚胺。
这些式(V)的亚烷氧基单元的基本部分由亚乙氧基单元-[CH2-CH2-O)]n-和亚丙氧基单元-[CH2-CH2(CH3)-O]p-形成。所述亚烷氧基单元还可具有小部分的亚丙氧基或亚丁氧基单元-[A2-O]m-，即用氢原子饱和的聚亚烷基亚胺主链，可最初使每摩尔存在的NH-部分与少量的至多约2mol，尤其是约0.5至约1.5mol，特别是约0.8至约1.2mol的环氧丙烷或环氧丁烷反应，即，初期烷氧基化。
如果需要的话，所述聚亚烷基亚胺主链的这种初始改性可使烷氧基化过程中反应混合物的粘度降低。然而，所述改性通常不会影响烷氧基化聚亚烷基亚胺的性能特性，因此不构成优选的标准。
所述两亲烷氧基化的油脂清洁聚合物按所述组合物的重量计以约0.05％至10％范围内的含量存在于本发明的去污和清洁组合物中。所述组合物的实施方案按重量计可包含约0.1％至约5％。更具体地讲，所述实施方案可包含约0.25至约2.5％的油脂清洁聚合物。
去污表面活性剂
所述组合物包含去污表面活性剂。所述去污表面活性剂可以是阴离子、非离子、阳离子和/或两性离子的。所述去污表面活性剂优选是阴离子的。所述组合物优选包含2-50％的表面活性剂，更优选包含5-30％，最优选7-20％的去污表面活性剂。所述组合物可包含2-6％的去污表面活性剂。所述组合物优选包含一定量的去污表面活性剂，以在洗涤过程期间，在洗涤液体中提供100-5,000ppm的去污表面活性剂。当在洗涤过程期间，将10-125g液体衣物洗涤剂组合物加入到洗涤液体中时，这是尤其优选的。所述组合物在与水接触时通常形成洗涤液体，所述洗涤液体包含0.5-10g/L的洗涤剂组合物。
无规接枝共聚物
无规接枝共聚物包含：(i)亲水性主链，所述主链包含的单体选自由下列组成的组：不饱和的C1-C6羧酸、醚、醇、醛、酮、酯、糖单元、烷氧基单元、马来酸酐、诸如甘油的饱和的多元醇、以及它们的混合物；和(ii)选自由下列组成的组的疏水性侧链：C4-C25烷基、聚丙烯、聚丁烯、饱和的C1-C6一元羧酸的乙烯基酯、丙烯酸或甲基丙烯酸的C1-C6烷基酯、以及它们的混合物；
所述聚合物优选具有通式：
其中X、Y和Z是封端单元，独立地选自H或C1-6烷基；每个R1独立地选自甲基和乙基；每个R2独立地选自H和甲基；每个R3独立地为C1-4烷基；并且每个R4独立地选自吡咯烷酮和苯基基团。所述聚环氧乙烷主链的重均分子量通常为约1,000g/mol至约18,000g/mol，或约3,000g/mol至约13,500g/mol，或约4,000g/mol至约9,000g/mol。选择m、n、o、p和q的值，以使得侧基的含量按所述聚合物的重量计为至少50％，或约50％至约98％，或约55％至约95％，或约60％至约90％。可用于本文的聚合物通常具有约1,000至约100,000g/mol，或优选约2,500g/mol至约45,000g/mol，或约7,500g/mol至约33,800g/mol，或约10,000g/mol至约22,500g/mol的重均分子量。
适宜的接枝共聚物更详细地描述于WO07/138054、WO06/108856和WO06/113314中。
适用的织物调色剂
荧光增白剂发出至少一些可见的光。与之相反，织物调色剂能改变表面颜色是因为它们吸收至少一部分可见光谱。适用的织物调色剂包括染料、染料-粘土共轭物、和颜料，它们能满足本说明书测试方法部分的测试方法1的需求。适用的染料包括小分子染料和聚合物染料。适用的小分子染料选自由下列组成的组：染料属于颜色索引(ColourIndex，C.I.)分类的直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或它们的混合物，例如：
(1)下式的三偶氮直接蓝染料
其中A、B和C萘基环中的至少两个被磺酸根基团取代，C环可在位点5上被NH2或NHPh基团取代，X是由最多2个磺酸根基团取代的苄基或萘基环，可在位点2上被OH基团取代，也可被NH2或NHPh基团取代。
(2)下式的双-偶氮直接紫染料：
其中Z是H或苯基，A环优选地被甲基和甲氧基基团在箭头所示位点取代，A环也可以是萘基环，Y基团是苯基或萘基环，它被硫酸根基团取代，也可被甲基基团一取代或二取代。
(3)下式的蓝色或红色酸性染料
其中X和Y中的至少一个必须是芳族基团。在一个方面，两个芳族基团都可以是取代的苄基或萘基，它可以被非水增溶的基团取代，例如烷基或烷氧基或芳氧基，X和Y不能被水增溶的基团取代，例如磺酸盐或羧酸盐。在另一方面，X是硝基取代的苄基基团，Y是苄基基团
(4)以下结构的红色酸性染料
其中B是萘基或苄基基团，它可以被非水增溶的基团取代，例如烷基或烷氧基或芳氧基，B不能被水增溶的基团取代，例如磺酸盐或羧酸盐。
(5)以下结构的重氮基染料
其中X和Y彼此独立地为氢，C1-C4烷基或C1-C4-烷氧基，Rα是氢或芳基，Z是C1-C4烷基；C1-C4-烷氧基；卤素；羟基或羧基，n是1或2，m是0、1或2，以及它们相应的盐和混合物
(6)下列结构的三苯甲烷染料
以及它们的混合物。在另一方面，合适的小分子染料选自由下列组成的组：颜色索引(SocietyofDyersandColourists，Bradford，UK)号直接紫9、直接紫35、直接紫48、直接紫51、直接紫66、直接蓝1、直接蓝71、直接蓝80、直接蓝279、酸性红17、酸性红73、酸性红88、酸性红150、酸性紫15、酸性紫17、酸性紫24、酸性紫43、酸性红52、酸性紫49、酸性蓝15、酸性蓝17、酸性蓝25、酸性蓝29、酸性蓝40、酸性蓝45、酸性蓝75、酸性蓝80、酸性蓝83、酸性蓝90和酸性蓝113、酸性黑1、碱性紫1、碱性紫3、碱性紫4、碱性紫10、碱性紫35、碱性蓝3、碱性蓝16、碱性蓝22、碱性蓝47、碱性蓝66、碱性蓝75、碱性蓝159以及它们的混合物。在另一方面，合适的小分子染料选自由下列组成的组：颜色索引(SocietyofDyersandColourists，Bradford，UK)号酸性紫17、酸性紫43、酸性红52、酸性红73、酸性红88、酸性红150、酸性蓝25、酸性蓝29、酸性蓝45、酸性蓝113、酸性黑1、直接蓝1、直接蓝71、直接紫51以及它们的混合物。在另一方面，合适的小分子染料包括选自由下列组成的组的小分子染料：颜色索引(SocietyofDyersandColourists，Bradford，UK)号酸性紫17、直接蓝71、直接紫51、直接蓝1、酸性红88、酸性红150、酸性蓝29、酸性蓝113或它们的混合物。
合适的聚合物染料选自由下列组成的组：包含共轭色原体(染料-聚合物共轭物)的聚合物、色原体共聚合进入聚合物主链的聚合物、以及它们的混合物。
在另一方面，合适的聚合物染料选自由下列组成的组：以商品名Liquitint(Milliken，Spartanburg，SouthCarolina，USA)销售的织物-实体着色剂、由至少一种活性染料形成的染料-聚合物共轭物、以及选自由包含以下部分的聚合物形成的组的聚合物：羟基部分、伯胺部分、仲胺部分、硫醇部分、以及它们的混合物。在另一方面，合适的聚合物染料选自由下列组成的组：Liquitint(Milliken，Spartanburg，SouthCarolina，USA)VioletCT、与活性蓝共轭的羟甲基纤维素(CMC)、活性紫或活性红染料如与C.I.活性蓝19共轭的CMC，由Megazyme，Wicklow，Ireland以产品名AZO-CM-CELLULOSE，产品代码S-ACMC销售、烷氧基化的三苯基-甲烷聚合着色剂、烷氧基化的噻吩聚合着色剂、以及它们的混合物。
合适的染料粘土共轭物选自由下列组成的组：包含至少一种阳离子/碱性染料和绿土粘土、以及它们的混合物。在另一方面，合适的染料粘土共轭物选自由下列组成的组：一种阳离子/碱性染料，它选自由下列组成的组：C.I.碱性黄1至108、C.I.碱性橙1至69、C.I.碱性红1至118、C.I.碱性紫1至51、C.I.碱性蓝1至164、C.I.碱性绿1至14、C.I.碱性棕1至23、CI碱性黑1至11、以及粘土，所述粘土选自由下列组成的组：蒙脱石粘土、锂蒙脱石粘土、皂石粘土、以及它们的混合物。在另一方面，合适的染料粘土共轭物选自由下列组成的组：蒙脱石碱性蓝B7C.I.42595共轭物、蒙脱石碱性蓝B9C.I.52015共轭物、蒙脱石碱性紫V3C.I.42555共轭物、蒙脱石碱性绿G1C.I.42040共轭物、蒙脱石碱性红R1C.I.45160共轭物、蒙脱石C.I.碱性黑2共轭物、锂蒙脱石碱性蓝B7C.I.42595共轭物、锂蒙脱石碱性蓝B9C.I.52015共轭物、锂蒙脱石碱性紫V3C.I.42555共轭物、锂蒙脱石碱性绿G1C.I.42040共轭物、锂蒙脱石碱性红R1C.I.45160共轭物、锂蒙脱石C.I.碱性黑2共轭物、皂碱性蓝B7C.I.42595共轭物、皂碱性蓝B9C.I.52015共轭物、皂碱性紫V3C.I.42555共轭物、皂碱性绿G1C.I.42040共轭物、皂碱性红R1C.I.45160共轭物、皂石C.I.碱性黑2共轭物、以及它们的混合物。
合适的颜料选自由下列组成的组：黄烷士酮、靛蒽醌、包含1至4个氯原子的氯化靛蒽醌、皮蒽酮、二氯皮蒽酮、单溴二氯皮蒽酮、二溴二氯皮蒽酮、四溴皮蒽酮、二萘嵌苯-3，4，9，10-四羧酸二酰亚胺酯，其中所述酰亚胺基团可被也可不被C1至C3的-烷基或苯基或杂环基取代，并且其中苯基和杂环基可另外带有不提供水中溶解度的取代基、蒽嘧啶羧酸酰胺、蒽酮紫、异蒽酮紫、二嗪颜料、每个分子可包含最多2个氯原子的铜酞菁、多氯铜酞菁或每个分子包含最多14个溴原子的多溴铜酞菁、以及它们的混合物。
在另一方面，合适的颜料选自由下列组成的组：群青蓝(C.I.颜料蓝29)、群青紫(C.I.颜料紫15)、以及它们的混合物。
可以组合使用上述织物调色剂(可使用织物调色剂的任何混合物)。合适的织物调色剂可购自Aldrich，Milwaukee，Wisconsin，USA；CibaSpecialtyChemicals，Basel，Switzerland；BASF(Ludwigshafen，Germany)；DaygloColorCorporation，Mumbai，India；OrganicDyestuffsCorp.，EastProvidence，RhodeIsland，USA；Dystar，Frankfurt，Germany；Lanxess，Leverkusen，Germany；Megazyme，Wicklow，Ireland；Clariant(Muttenz，Switzerland)；Avecia，Manchester，UK和/或根据本文包含的实例制备。
适宜的调色剂更详细地描述于US7,208,459B2中。
辅助成分
适宜的助剂材料包括但不限于表面活性剂、助洗剂、螯合剂、染料转移抑制剂、分散剂、另外的酶和酶稳定剂、催化物质、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预成形的过酸、聚合物分散剂、粘土污垢去除/抗再沉淀剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹性化剂、织物软化剂、载体、水溶助长剂、加工助剂、溶剂和/或颜料。除了上述公开内容外，其它此类助剂和用量的适宜实例还可见于美国专利公开5,576,282、6,306,812和6,326,348中。
以下实施例进一步描述了本发明，所述实施例不应理解为限制本发明的范围。
实施例
实施例1：木葡聚糖酶变体的生产和纯化
本发明的木葡聚糖酶变体通过标准方法制备，简述如下：将随机和/或定点突变导入基因，用该突变基因转化枯草芽孢杆菌宿主细胞，发酵该转化的宿主细胞，并且从发酵液中获取木葡聚糖酶变体。以相似方式在枯草芽孢杆菌中重组制备基准木葡聚糖酶(SEQIDNO：3)。
发酵在37℃，在摇瓶培养物中振荡4天，使用包含CaCO3片剂(0,5g)的100mLPS-1培养基在带挡板的500mL锥形瓶中进行。PS-1培养基组合物包含100g/L蔗糖，40g/L豆粉，10g/LNa2HPO4*12H2O，0.1mL/LDowfax63N10和6μg/mL氯霉素形式的抗生素。
在发酵之后，离心(26000×g，20分钟)收获培养液。将小体积的上清液无菌滤过0.45μm的过滤器并冻存。在开始下述的稳定性测试前允许即时融化样本。
在一些情况下，在将酶样本用于稳定性测试前纯化它们。
为了纯化酶，将上清液滤过NALGENE0.2μm过滤单位(cat.no.569-0020)以移除剩余的宿主细胞。用20％CH3COOH将0.2μm滤液的pH调节至5.0并将滤液施加到XpressLineProA柱(UpFrontchromatographyA/S)上，所述柱用pH5.0的50mM琥珀酸/NaOH，1mMCaCl2平衡。在用平衡缓冲彻底液洗涤XpressLineProA柱后，用pH9.0的50mMTris/HCl逐步洗脱木葡聚糖酶。在洗脱期间收集洗脱组分。分析从柱中洗脱的组分的木葡聚糖酶活性(实施例2)并收集具有活性的组分。用3MTris碱将收集组分的pH调节至pH9.0并用脱盐水将收集组分洗脱至与pH9.0的50mMTris/HCl相同(或更低)的电导率。将调节溶液施加到SOURCEQ柱(GEHealthcare)上，该柱用pH9.0的50mMTris/HCl平衡。在用平衡缓冲液彻底洗涤SOURCEQ柱后，用线性NaCl梯度(0→0.5M)在相同缓冲液中以五倍柱体积洗脱所述酶。再次分析从柱中洗脱的组分的木葡聚糖酶活性并通过SDS-PAGE进一步分析活性组分。其中在考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE凝胶上仅可见一个条带的组分作为纯化制备物被收集。
实施例2：木葡聚糖酶测定
在AZCL-木葡聚糖测定中测量酶样本的木葡聚糖酶活性，例如纯化得到的样本。
用木葡聚糖酶孵育AZCL-木葡聚糖(Megazyme)并且在650nm测量释放的蓝色。在减去适当的空白值后，以孵育期间增加的蓝色来计算木葡聚糖酶活性。
AZCL-木葡聚糖底物：通过搅拌使4mg/mLAZCL-木葡聚糖(Megazyme)均匀悬浮在0.01％TritonX-100中。
测定温度：37℃。
测定缓冲液：50mM琥珀酸/NaOH，0.01％TritonX-100，pH5.0。
将500μLAZCL-木葡聚糖底物悬浮液置于Eppendorf管中并置于冰上。加入500μL测定缓冲液并冰浴混合物。加入20μL酶样本(稀释于0.01％TritonX-100)。将Eppendorf管转移到Eppendorf恒温混匀器上开始测定，将恒温混匀器设置成测定温度。在Eppendorf恒温混匀器上以其最高转速(1400rpm)孵育15分钟。将所述管转移到冰浴上以终止孵育。当所述管变得冰冷时，在冷冻离心机中短时间地离心所述管以沉淀未反应的底物。将200μL上清液转移到微滴定板上并读取A650数值。测定包括缓冲液空白(20μL0.01％TritonX-100代替酶)，并且酶样本和缓冲液空白之间的A650差值是木葡聚糖酶活性的一个量度。
实施例3：木葡聚糖酶变体的稳定性
本发明的木葡聚糖酶变体的洗涤剂稳定性通过测量在液体洗涤剂中孵育后的变体活性来评估。
稳定性测试通过将酶样本加入液体洗涤剂中并贮藏在高温(例如35℃或40℃)下来进行。在规定的贮藏时间后，测定酶活性并与在大约-18℃下贮藏相同时间的相同样本活性进行比较。稳定性测试的结果是将贮藏在高温下的样本活性表示为％冷藏样本活性。
将在相同条件下测试的木葡聚糖酶变体的结果与亲本木葡聚糖酶(SEQIDNO：3)的结果进行比较。这两个稳定性结果之间的比率为稳定性改善系数(SIF)。
具有SIF＞1的变体在所述测试条件下比亲本木葡聚糖酶更稳定。优选的变体是那些在该测试中具有高SIF的变体。
洗涤剂
用于稳定性测试的液体洗涤剂具有以下组合物
贮藏测试
允许如实施例1所述制备的酶样本在开始贮藏稳定性测试之前即时融化。
将酶样本稀释成大约0.25mg酶蛋白每mL的浓度。
将液体洗涤剂分配到玻璃瓶中，体积为大约12mL，每个玻璃瓶提供1.0±0.05克的洗涤剂。
每个酶样本准备两个相同的瓶。将50μL稀释酶和小磁力搅拌子加入到瓶中并紧闭(以防止贮藏期间蒸发)。借助磁力搅拌子混合内容物约5分钟。将两瓶中的一个置于大约-18℃的冷冻机中。将另一个瓶置于规定高温(例如35℃或40℃)下的合适培养箱中进行测试。在规定的贮藏时间后将培养箱中的瓶子转移到冷冻机中。
活性测定
使用以下方法测量在洗涤剂中贮藏后的酶样本活性。
材料和试剂：
1M磷酸盐缓冲液，pH7：
将138克NaH2PO4·H2O溶解在约750mL水中。加入4NNaOH至pH7.0。然后使得终体积为1000mL。
测定缓冲液(50mM磷酸盐，pH7)：
将950mL水，pH7的50mL1M磷酸盐缓冲液和5mLBerol537(非离子表面活性剂，购自AkzoNobel)混合。将最终pH调节到7.00±0.02。
底物：
CellazymeC片剂，购自MegazymeInternationalIrelandLtd，目录编号T-CCZ。片剂包含交染HE纤维素。
步骤
在开始测定前约30分钟将瓶子从冷冻机中转移到大约4℃的冷藏机中。在开始测定前即时将瓶子取出冷藏机并置于实验室工作台顶部，将其打开。
将10mL测定缓冲液(室温)加到每个打开的瓶中。然后将瓶子转移到30℃水浴中，水浴装置配备有浸没的多点磁力搅拌器。轻柔搅动内容物约5分钟。
将一个CellazymeC片剂加入每个瓶中。用搅拌器持续搅拌，搅拌速度恰恰足以保持基底颗粒运动状态并避免沉淀。在加入片剂后30分钟从水浴中移除瓶子，然后室温下静置15分钟。
用移液管从每个瓶的顶部吸移大约1mL近于澄清的上清液并转入半微量分光光度计比色杯。然后使用合适的分光光度计测量590nm的吸光度。在15分钟内完成所有测量。
测定包括空白样本，即不含加入的木葡聚糖酶的相同洗涤剂样本。
计算
每个酶样本有两个Abs590测量：
·A590f，它是贮藏在-18℃的样本的Abs590值
·A590w，它是贮藏在高温的样本的Abs590值。
从A590f(A590f-A590b)和A590w(A590w-A590b)中减去空白值(A590b)。
稳定性计算如下：
％稳定性＝((A590w-A590b)/(A590f-A590b))×100％。
每个酶的(A590f-A590b)结果必须在0.1-1.2的范围内。如果所述值在这一范围之外，必须将该酶的结果认为是不可靠的，并且应该以酶样本的不同稀释液重复测试。
最终每个酶变体的稳定性改善系数(SIF)计算如下：
SIF＝％酶样本稳定性/％亲本酶稳定性(SEQIDNO：3)
结果
以下是在不同条件下测试的木葡聚糖酶变体的稳定性结果。
表1：在40℃下贮藏18小时的无菌过滤酶样本。
突变 SIF
K8Q 1，1
K8A 1，2
K13A 1，1
K18R 1，1
K87Q 1，1
K129A 1，7
K169Q 1，3
K169R 1，4
K169A 1，3
N140F 1，2
G316I 1，1
F418I 1，1
突变 SIF
L34I 1，1
L166I 1，1
L268I 1，1
L278I 1，3
V1*+V2*+H3* 1，2
*0aE+*0bV 1，3
F146L 1，2
Q137E 1，6
R156Y 2，2
R156Q 1，5
K8S 1，2
K21T 1，4
K176P 1，1
K445S 1，4
K470T 1，2
表2：在40℃下贮藏18小时的纯化酶样本。
表3：在40℃下贮藏24小时的无菌过滤酶样本。
突变 SIF
K101R+L102I 1，1
K217A 1，1
L380F 1，1
N383Y 1，2
G78A 1，2
M310V 1，2
N399I 1，1
G498S 1，1
F146L 1，1
Q137E 1，4
R156Y 2，0
突变 SIF
V1*+V2*+H3*+G4*+Q5* 1，1
N331F 1，2
K8S 1，1
T92V 1，3
K176P 1，2
G253A 1，1
K445S 1，3
K470T 1，2
表4：在40℃下贮藏24小时的纯化酶样本。
突变 SIF
T92V 1，2
Q137E 1，5
R156Y 1，7
R156Q 1，2
表5：在40℃下贮藏30小时的无菌过滤酶样本。
突变 SIF
K118R 1，1
K118A 1，7
K129A+K169A 1，6
G200P 1，5
K129A+R156Y 2，0
K129A+Q137E+R156Y 2，2
K129A+R156Y+H164N 2，1
表6：在40℃下贮藏30小时的纯化酶样本。
突变 SIF
T92V 1，3
R156Y 1，9
K129A+R156Y 2，1
表7：在40℃下贮藏48小时的无菌过滤酶样本。
突变 SIF
K118A 3，0
K252Q 1，1
K252R 1，2
K252A 1，1
K275Q 1，1
K275R 1，2
K275A 1，1
K306R 1，1
K306A 1，1
K347Q 1，1
K347R 1，1
K347A 1，1
K382A 1，1
K414A 1，2
K445R 1，3
K454R 1，1
K476Q 1，1
K482Q 1，1
K482A 1，1
K488Q 1，1
K488R 1，1
K488A 1，1
M40V 1，4
R156Y 2，9
G200P 1，8
K129A+R156Y 3，5
K129A+Q137E+R156Y+K470T 3，7
K406N 1，1
K445S 1，2
K488T 1，2
T92V+K129A+R156Y 3，7
K118A+K129A+R156Y 3，8
T92V+K118A+K129A+R156Y 3，9
K129A+R156Y+P507A 3，2
K129A+R156Y+S443D+K445S+L449I+V450I+S455N+M456Y 3，8
K129A+R156Y+H436Y 3，9
K129A+R156Y+K406N+N415G 3，5
K129A+R156Y+L380F+N383Y+D384G+N389T 3，5
K129A+R156Y+D366H+T374A 3，4
K129A+R156Y+A328G 3，5
K129A+R156Y+V259I+R267K+L268K+S269A 3，5
K129A+R156Y+T244D 3，4
K129A+R156Y+I222V+A224P+V228I+V232A 2，0
突变 SIF
K129A+R156Y+G200P+G204T+R211K 3，6
K129A+R156Y+A177T+V179I+A183S 2，9
K129A+R156Y+V159M+H164N+F165Y 2，8
K129A+R156Y+I10V+V14I+D19E 4，0
T104A+P111Q+A117S+K129A+R156Y 2，1
S123T+K129A+R156Y 3，8
K129A+Q137E+V139K+N140F+Q147S+R156Y 2，9
K129A+R156Y+D324N 3，4
K129A+R156Y+K176P 3，2
K129A+R156Y+D249N 3，2
K129A+R156Y+D249G 3，3
K129A+R156Y+D249S 3，1
K129A+R156Y+D461N 3，6
K129A+R156Y+D461T 3，9
K129A+R156Y+D461Q 4，0
K129A+R156Y+R409T 3，8
K129A+R156Y+R409L 3，6
K129A+R156Y+D247G 1，4
K129A+R156Y+E288Q 2，7
D37G+K129A+R156Y 3，9
D37N+K129A+R156Y 3，6
K129A+R156Y+R267H 3，8
K129A+R156Y+D303I 4，1
K129A+R156Y+D303K 3，7
K129A+R156Y+K275T 3，5
K129A+R156Y+G200P 3，9
K129A+R156Y+N331F 3，8
R156Y+N331F 3，2
K118A+K129A+R156Y+K470T 4，4
K470R 1，1
K470P 1，2
G413A 1，1
K118A+K129A+R156Y+A224P 3，9
D119L 1，3
K87V+K129A+K169A 1，9
K129A+K445S 1，8
K118A+K129A+R156Y+G200P 3，8
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 4，2
G78A+K118A+K129A+R156Y 3，8
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y 3，8
T92V+K118A+K129A+R156Y 3，7
M310V+N399I 1，7
L34I+K129A 1，9
K101A+K129A 1，8
K13A+K129A 2，0
突变 SIF
K129A+K470T 1，8
K129A+K176P 1，9
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+K169A 4，8
K118A+K129A+R156Y+K169A+G200P+N331F 4，7
K118A+K129A+R156Y+G200P+M310V+N331F 4，7
K129A+R156Y+K454Q 3，8
G78A+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 4，2
T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 4，3
K129A+R156Y+N302K+D303S 2，9
K129A+R156Y+N302K+D303L 2，7
S332P+V397I 1，1
K129A+R156Y+K322I+K454Q 2，3
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 4，1
Q68H+T92S+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 5，2
Q68H+T92A+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 4，7
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 5，0
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 5，7
Q68H+T92D+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 3，3
Q68H+T92I+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 4，4
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 4，4
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 4，2
K129S 1，1
K129A 1，5
R156M 1，3
R156F 2，3
R156W 1，6
R156L 1，4
R156V 2，2
G396P 1，3
G413S 1，1
A177T 1，1
E38I 1，1
E38V 1，2
G36V+D37A+E38*+N39* 1，2
T104A 1，2
L102A+T104V+*104P 1，3
Q68L 1，3
Q68H 3，6
N389A 1，1
G468Y 1，1
G237V 1，1
表8：在40℃下贮藏48小时的纯化酶样本。
突变 SIF
K118A 2，3
R156Y 2，5
K129A+K169A 1，7
G200P 1，5
K129A+R156Y 1，7
K129A+Q137E+R156Y 3，7
K129A+R156Y+H164N 3，5
K129A+Q137E+R156Y+K470T 4，2
T92V+K129A+R156Y 4，5
K118A+K129A+R156Y 3，8
K129A+R156Y+G200P 4，8
K129A+R156Y+N331F 4，1
R156Y+N331F 3，5
K118A+K129A+R156Y+G200P， 4，2
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 4，5
G78A+K118A，+K129A+R156Y 4，0
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y 4，3
Q68H 3，7
表9：在40℃下贮藏72小时的无菌过滤酶样本。
突变 SIF
K13R 1，3
K206Q 1，1
K129A+R156Y 5，1
K129A+Q137E+R156Y+K470T 6，4
T92V+K129A+R156Y 6，6
K118A+K129A+R156Y 7，2
K129A+R156Y+G200P 7，7
K129A+R156Y+N331F 5，9
R156Y+N331F 5，3
表10：在35℃下贮藏一周的无菌过滤酶样本。
突变 SIF
K8Q 1，4
K8A 1，1
K13Q 1，1
突变 SIF
K18Q 1，1
K18A 1，4
K21Q 1，4
K21R 1，4
K21A 1，4
K87Q 1，3
K101R 1，3
K101A 1，6
K118R 1，4
K118A 2，3
K101R+L102I 1，1
K129A 2，1
K169Q 1，4
K169R 1，5
K169A 1，5
K220Q 1，3
K220A 1，2
K252Q 1，1
K252R 1，1
K275Q 1，1
K275R 1，1
K275A 1，1
K306R 1，1
K306A 1，1
K307Q 1，2
K307R 1，1
K454Q 1，6
K454R 1，2
K476Q 1，3
K476R 1，3
K476A 1，2
K482Q 1，2
K482A 1，2
K488Q 1，2
K488R 1，2
K488A 1，1
N140F 1，7
G78A 1，2
M310V 1，3
G316I 1，1
W391V 1，1
N399I 1，4
L34I 1，3
L268I 1，1
L278I 1，2
突变 SIF
G498S 1，2
*0aE+*0bV 1，4
F146L 2，3
Q137E 2，0
R156Y 3，2
R156Q 1，7
N331F 1，5
K8S 1，3
K21T 1，5
K176P 1，2
G253A 1，1
K445S 1，5
K470T 1，6
F146C 1，3
K129A+K169A 1，8
G200P 1，7
A224P 1，1
K129A+R156Y 2，6
K129A+Q137E+R156Y 2，6
K129A+R156Y+H164N 2，6
K406N 1，3
K445S 1，2
K488T 1，2
K129R 1，1
R156F 2，0
表11：在35℃下贮藏一周的纯化酶样本。
突变 SIF
K101R 1，1
K101A 1，1
K118A 2，3
K129A 1，8
K169R 1，2
K169A 1，1
T92V 2，0
F418I 1，1
del(V1-Q5) 1，2
Q137E 1，6
R156Y 2，5
R156Q 1，2
K21T 1，1
G200P 1，7
K129A+R156Y 2，7
K129A+Q137E+R156Y 3，0
K129A+R156Y+H164N 3，1
A7T+G200P+A224P+G225K+R267K+L268K+S269A 1，3
H164N+V179I+G200A+R267K 1，3
H164N+V179I+G200A+R211K+G225D+F281L 1，8
H164N+G200A+G225N+R267K 1，6
表12：在44℃下贮藏16小时的纯化酶样本。
突变 SIF
Q68H 5，8
S123P 4，4
R156Y 4，0
K118A 2，9
G200P 2，6
K129A 2，4
Q137E 2，4
H193T 2，1
T92V 2，0
S76W 1，7
实施例4：木葡聚糖酶变体的稳定性
本实施例的木葡聚糖酶变体的洗涤剂稳定性通过测量在液体洗涤剂中孵育后的变体活性来评估。
稳定性测试通过将酶样本加入液体洗涤剂中并贮藏在高温(例如35℃或46℃)下来进行。在规定的贮藏时间后，测定酶活性并与已经在大约+5℃冷藏相同时间的相同样本活性进行比较。稳定性测试的结果是将贮藏在高温下的样本(胁迫样本)活性表示为％冷藏的相同样本活性(非胁迫样本)。
将在相同条件下测试的木葡聚糖酶变体的结果与亲本木葡聚糖酶(SEQIDNO：3)的结果进行比较。
洗涤剂
用于稳定性测试的液体洗涤剂具有以下组合物
贮藏测试
允许如实施例1所述制备的酶样本在开始贮藏稳定性测试之前即时融化。
使用不进一步稀释的酶样本。
将液体洗涤剂分配到圆底聚苯乙烯96-孔微滴定板(板1)中，每孔提供190μL的洗涤剂。
将十μL酶样本和小磁力搅拌子加到每个孔中，并且用粘性铝箔封盖(BeckmanCoulter)密封所述板(以防止蒸发)。用磁力搅拌子混合内容物约30分钟。
然后将来自板1每个孔的20μL洗涤剂-酶混合物转移到新的相同空板(板2)中。然后密封两块板。
将初始板(板1)置于规定高温(例如35℃或46℃)下的培养箱中进行测试。将另一块板(板2)置于大约5℃的冷藏机中。
在孵育规定时间后，从冷藏机和培养箱中移出所述板。将板置于实验室工作台上至少半小时以使所有孔达到室温。
然后将来自板1每个孔的20μL孵育液转移到新的空圆底96孔板(板1a)中。
板1a目前包含20μl胁迫样本，板2包含20μl非胁迫样本。
活性测定
使用以下方法在室温下测量在洗涤剂中贮藏后的酶样本活性。
测定原则：
对硝基苯酚-β-D-纤维四糖苷(pNP-β-D-纤维四糖苷)是一种合成底物，它被某种木葡聚糖酶的催化作用水解。
该底物本身是无色的；然而在水解末端还原末端糖苷键时释放对硝基苯酚，由于对硝基苯酚在405nm的强吸光度，它在pH8的缓冲液中是黄色的。
pNP-β-D-纤维四糖苷本身在给定的测定条件下是非常稳定的。因此在405nm的吸光度提高是酶活性的一个属性。
我们发现亲本木葡聚糖酶(SEQIDNO：3)接受pNP-β-D-纤维四糖苷作为底物，这一点通过在405nm的强吸光度增加得到证明。
材料和试剂：
测定缓冲液：100mMEPPS；0.01％Tween20；pH8.0。
pNP-β-D-纤维四糖苷(CAS-#：129411-62-7；TorontoResearchChemicals；Canada)
底物溶液：在测定缓冲液中的1mMpNP-β-D-纤维四糖苷。
步骤：
板1a包含20μl胁迫样本，板2包含20μl非胁迫样本。
加入50μL测定缓冲液到板1a和板2的所有孔中以稀释样本，使用微量滴定板振荡器混合一小时。然后将另外的50μL测定缓冲液加到所有孔中并继续振荡10分钟。
将20μL系数为6的稀释样本转移到透明的384孔聚苯乙烯微滴定板中，并且将20μL底物溶液加到所有孔中。通过简短地振荡微滴定板混合样本。使用384-孔分光光度曲线阅读器观察405nm的吸光度提高速率立即开始酶活性的动力学测量。
测定反应的初始速度(Abs/分钟)。反应的初始速度是样本中的酶活性量度，这一点被相关酶浓度的线性标准曲线证实。
计算：
如下计算％残余活性：胁迫样本的酶活性除以相同的非胁迫样本酶活性。
％残余活性＝“Abs/分钟(胁迫样本)”/“Abs/分钟(非胁迫样本)”*100％。
结果
以下是在不同条件下测试的木葡聚糖酶变体的稳定性结果。
表13：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 7
K118A 24
R156Y 36
K129A+K169A 19
G200P 26
K129A+R156Y 51
K129A+Q137E+R156Y 72
K129A+R156Y+H164N 63
表14：在+47℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
K118A+K129A+R156Y 52
T92V+K118A+K129A+R156Y 88
K129A+R156Y+G200P+G204T+R211K 68
S123T+K129A+R156Y 65
K129A+R156Y+G200P 73
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 90
G78A+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 98
T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 95
表15：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 22
R156Y 59
K13R 34
K307Q 31
K414A 34
G253A 33
G498S 31
M310V 38
N399I 30
V1*+V2*+H3*+G4*+Q5* 31
F146L 34
K445S 30
K470T 30
表16：在+45℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 6
R156Y 34
K129A+R156Y 55
K101R+L102I 12
K118A+K129A+R156Y 72
K129A+R156Y+P507A 57
K129A+R156Y+D366H+T374A 44
K129A+R156Y+V259I+R267K+L268K+S269A 40
K129A+R156Y+G200P+G204T+R211K 49
K129A+R156Y+V159M+H164N+F165Y 30
T104A+P111Q+A117S+K129A+R156Y 39
S123T+K129A+R156Y 70
突变 ％残余活性
K129A+R156Y+D324N 60
K129A+R156Y+D461N 59
K129A+R156Y+D461T 61
K129A+R156Y+D461Q 59
D37G+K129A+R156Y 60
D37N+K129A+R156Y 64
K129A+R156Y+R267H 64
K129A+R156Y+D303I 62
K129A+R156Y+D303K 65
K129A+R156Y+K275T 68
K129A+R156Y+G200P 92
K118A+K129A+R156Y+K470T 80
H164N ＜5
K129A+R156Y+N302K+D303S 66
K129A+R156Y+N302K+D303L 64
表17：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 26
R156Y 58
K118A+R156Y+G200P 84
K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 92
K445C+K470C 32
F281L 32
D366H 35
K392G 26
D395G 35
S76W 47
G498D 32
G498A 36
D324N 39
S123T 36
Q68Y 6
Q68C 13
K129A+R156Y 89
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 100
表18：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 34
R156Y 66
R156M 39
R156F 63
R156W 44
R156L 34
R156P ＜5
R156V 50
R156T 35
R156S 27
R156A 36
R156D 34
R156K 52
R156N 29
R156I 50
T92I 39
R156Q 34
表19：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 25
R156Y 70
R156E 66
R156F 65
T92V 43
R156P ＜5
R156V 53
R156K 38
R156I 31
表20：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 31
R156Y 65
N415S 34
S443E 33
S443K 32
突变 ％残余活性
S443Q 35
K129T 46
K129A 50
G468Y 32
G237A 34
G237S 34
G237V 25
G468S 32
表21：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 21
R156Y 45
S332P 41
K129A+R156Y+K176S 73
K129A+R156Y+D303V 77
K129A+R156Y+D303S 81
R197L 20
R340N 41
R340T 43
H193S 51
H193D 49
H193T 66
L34F 43
Q137D 24
Q149E 48
T9D 40
A83E 49
S214E 25
K129A+R156Y 98
T92V 49
T92I 36
表22：在+47℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 ＜5
R156Y 29
Q68H+R156V+G200P+N331F 93
Q68H+R156F+G200P+N331F 大约100
表23：在+46℃下贮藏64小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 ＜5
R156Y ＜5
Q68H+R156V+G200P+N331F 80
Q68H+R156F+G200P+N331F 84
Q68H+G200P+N331F 63
Q68H+T92V+R156V+G200P+M310V 52
Q68H+T92V+R156Y+G200P+M310V 67
Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V 63
Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V+S484C 68
Q68H+T92V+G200P+M310V 48
Q68H+T92V+R156V+G200P+M310V+N331F 93
突变 ％残余活性
Q68H+T92V+R156Y+G200P+M310V+N331F 100
Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V+N331F 91
Q68H+T92V+G200P+M310V+N331F 80
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 56
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 86
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 88
表24：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 16
R156Y 52
T374A 27
F146L+K322I 24
K129A+Q137E+R156Y+G200P 87
Q68S 14
Q68T ＜5
K129A+R156Y 71
F146L 26
K129A+R156Y+G200P 82
Q68H 77
表25：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 19
R156Y 53
K101A+K129A 47
K129A+K470T 46
S332P 29
G413A 30
K118A+K129A+R156Y+A224P 81
K129A+K176P 50
K118A+K129A+R156Y+K169A+G200P+N331F 89
K118A+K129A+R156Y+G200P+M310V+N331F 86
K129A+R156Y+K454Q 86
K13A+K129A 49
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+K169A 93
K129A+R156Y+K322I+K454Q 76
K129A 47
K129A+R156Y 74
K118A+K129A+R156Y 77
突变 ％残余活性
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 大约100
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y 93
表26：在+46℃下贮藏6天的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 ＜5
R156Y ＜5
Q68H+R156V+G200P+N331F 50
Q68H+R156Y+G200P+N331F 60
Q68H+R156F+G200P+N331F 64
Q68H+G200P+N331F 40
Q68H+T92V+R156V+G200P+M310V 32
Q68H+T92V+R156Y+G200P+M310V 42
Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V 43
Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V+S484C 34
Q68H+T92V+G200P+M310V 27
Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V+N331F 93
Q68H+T92V+G200P+M310V+N331F 58
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 27
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 75
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 70
表27：在+44℃下贮藏64小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 ＜5
R156Y 9
K101A+K129A 6
K129A+K470T 4
S332P ＜5
G413A ＜5
K118A+K129A+R156Y+A224P 51
K129A+K176P 6
K118A+K129A+R156Y+K169A+G200P+N331F 67
K118A+K129A+R156Y+G200P+M310V+N331F 63
K129A+R156Y+K454Q 52
K13A+K129A 5
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+K169A 72
K129A 5
K129A+R156Y 32
突变 ％残余活性
K118A+K129A+R156Y 30
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 63
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y 72
表28：在+46℃下贮藏64小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 ＜5
R156Y 4
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 71
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F+N399I 59
K118A+K129A+F146L+R156Y+G200P+N331F 62
T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 74
T92V+K118A+K129A+R156Y+H164N+G200P+N331F 70
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 87
Q68H+T92V+K118A+S123T+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 90
T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 66
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 68
Q68H T92V K118A K129A R156Y G200P N331F 83
表29：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 19
R156Y 51
S123P 69
V159M 21
V345I 34
G225S 30
V232A ＜10
表30：在+46℃下贮藏10天的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 ＜5
R156Y ＜5
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 32
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F+N399I 16
K118A+K129A+F146L+R156Y+G200P+N331F 23
T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 34
突变 ％残余活性
T92V+K118A+K129A+R156Y+H164N+G200P+N331F 31
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 67
Q68H+T92V+K118A+S123T+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 81
T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 23
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 25
Q68H T92V K118A K129A R156Y G200P N331F 61
表31：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 15
R156Y 51
Q68F ＜5
Q68N 69
Q68Y ＜5
Q68D ＜10
Q68C ＜10
Q68G ＜10
Q68S ＜10
Q68E ＜5
Q68A ＜5
Q68M 27
Q68W ＜10
Q68H 82
表32：在+46℃下贮藏7天的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 ＜5
R156Y ＜5
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+A224P+N331F 81
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 74
Q68H+T92V+Q137E+R156Y+G200P+N331F 80
Q68H+T92V+K118A+Q137E+G200P+N331F 65
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+N331F 80
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P 67
G78A+K118A+K129A+R156Y+K169A 14
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 73
K129A+R156Y ＜5
G78A+K118A+K129A+R156Y 7
表33：在+46℃下贮藏48小时的无菌过滤酶样本。
表34：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 22
R156Y 61
S123T+K129A+R156Y 83
H193T 44
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y 91
S123T 55
S123P 73
V232A ＜10
K129A+R156Y 64
K118A+K129A+R156Y 68
表35：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 17
R156Y 60
N140F 25
H164A 7
H193A 23
R500T 30
R500A 33
R500V 29
H199A ＜10
H3A 26
H436A 26
H448A ＜10
H512A 25
H96A 14
H3A+H436A 27
表36：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 27
R156Y 66
N399I 33
L34F 35
Q149E 35
S332P 36
K129A 50
K21Q+K129A 54
K129A+K275Q 56
Q68F 6
T9D+L34F+A83E+Q149E+H193T+S332P+R340T 53
表37：在+37℃下贮藏12天的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 ＜5
R156Y 8
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 52
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 47
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 67
表38：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 19
R156Y 49
G200S 28
G200D 25
G200Y 12
G200L ＜5
G200P 37
G200W ＜5
G200I ＜5
G200N 9
G200F ＜5
G200V 9
G200H 12
G200Q 19
G200C 17
G200A 24
G200M 6
G200K 11
G200E 48
G200R ＜5
突变 ％残余活性
G200T 5
表39：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 13
R156Y 45
K21Q+K129A 34
K129A+K275Q 39
T9D+L34F+A83E+Q149E+H193T+S332P+R340T 43
N399I 24
L34F 22
Q149E 23
S332P 24
K129A 58
G518D 19
K118A+K129A 73
K118A 48
K129A+K169A 40
表40：在46℃下贮藏5天的纯化酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 ＜5
R156Y ＜5
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366H 73
Q68H+R156Y+H193T 63
Q68H 13
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+N331F 70
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y 44
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 46
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 83
Q68H+K129T+R156K+G200P+N331F 77
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366H 85
表41：在+46℃下贮藏5天的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 ＜5
R156Y ＜5
突变 ％残余活性
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+N331K 70
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+N331H 42
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+N331Q 24
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T 33
Q68H+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 74
Q68H+S76W+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 87
K13A+Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P 54
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+D324N 53
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+K470T 69
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 75
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P 52
表42：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 13
R156Y 43
S76M 21
S76I 36
S76E 19
S76R 26
S76K 27
S76V 39
S76R 24
表43：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 20
R156Y 51
K118A+R156Y 62
R197A ＜5
R20A 26
R267A 26
R295A 23
R314A ＜10
R340A 23
A221K 25
M290R 23
M373Q 25
V397S 25
T417K 27
突变 ％残余活性
N441G+A442E+S443D 30
S467R+G468S+A469T 29
I473T 24
A490R 32
T517A+G518D 31
V431E 29
S76W+G200P+A224P 58
S76W+G200P 59
G200P+A224P 56
S76T 42
M310V 31
G200P 47
G200E 59
M310V+N399I ＜10
Q68W ＜5
表44：在+46℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
表45：在+46℃下贮藏9天的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 ＜5
R156Y ＜5
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+N331K 46
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+N331H 19
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+N331Q 9
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T 17
突变 ％残余活性
Q68H+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 48
Q68H+S76W+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 65
K13A+Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P 31
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+D324N 30
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+K470T 41
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F 50
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P 30
表46：在46℃下贮藏9天的纯化酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 ＜5
R156Y ＜5
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366H 52
Q68H+R156Y+H193T 34
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+N331F 45
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y 14
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 18
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 56
Q68H+K129T+R156K+G200P+N331F 47
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366H 52
Q68H+R156Y+H193T 31
表47：在+37℃下贮藏30天的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 ＜5
R156Y ＜5
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 33
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 42
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F 52
Q68H+R156Y+G200P+N331F 41
Q68H+R156F+G200P+N331F 58
Q68H+T92V+R156Y+G200P+M310V 41
Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V 42
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366H 50
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366H 32
Q68H+T92V+R156Y+H193T+D366H 33
Q68H+T92V+R156F+H193T+D366H 28
Q68H+R156Y+H193T+D366H 25
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T 41
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T 43
表48：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 15
R156Y 49
A83S 15
A83N 9
A83Y 10
A83H 14
A83I 8
A83L 10
A83R 16
A83D 17
A83T 12
A83E 31
L34V 22
L34M 19
L34I 24
M310I 21
M310V 20
M310L 18
表49：在+35℃下贮藏3天的无菌过滤酶样本。
突变 ％残余活性
SEQ ID NO：3 61
R156Y 89
N331K 57
N331R 54
N331L 39
N331H 62
N331G 59
突变 ％残余活性
N331M 70
N331W 55
N331S 58
N331V 57
N331T 46
N331Y 55
N331I 47
N331A 87
N331Q 82
N331C 70
N331E 58
N331D 63
N331P 26
N331F 51
表50：在+44℃下贮藏16小时的无菌过滤酶样本。
表51：在+44℃下贮藏2天的无菌过滤酶样本。
液体衣物洗涤剂组合物
组合物1-8：适用于前加载式自动洗衣机的液体衣物洗涤剂组合物。
组合物9-16：适用于顶加载式自动洗衣机的液体衣物洗涤剂组合物。
组合物17：小袋形式的液体衣物洗涤剂组合物，其由聚乙烯醇薄膜包封。
实施例18-29
下列是根据本发明制得的适用于洗涤织物的颗粒状洗涤剂组合物。
1无规接枝共聚物为聚乙酸乙烯酯接枝的环氧乙烷共聚物，其具有聚环氧乙烷主链和多个聚乙酸乙烯酯侧链。所述聚环氧乙烷主链的分子量为约6000，并且聚环氧乙烷与聚乙酸乙烯酯的重量比率为约40至60，并且每50个环氧乙烷单元具有不超过1个接枝点。
2聚氮丙啶(MW＝600)，每个-NH具有20个乙氧基化基团。
3两亲烷氧基化油脂清洁聚合物为聚氮丙啶(MW＝600)，每个-NH具有24个乙氧基化基团，并且每个-NH具有16个丙氧基化基团
4具有下列结构的可逆蛋白酶抑制剂：
*标注：所有酶含量表示为％酶原料，除了木葡聚糖酶，其中所述含量以活性酶蛋白质mg/100g洗涤剂为单位给出。
本文所公开的量纲和值不旨在被理解为严格地限于所述的精确值。相反，除非另外指明，每个这样的量纲旨在表示与所引用的数值和围绕该数值的功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。

Claims (12)

1.一种包含亲本木葡聚糖酶的分离的变体的洗涤剂组合物，所述变体包含在三个或更多个选自由下列位点编号组成的组的位点上的所述亲本木葡聚糖酶的改变：68、92、118、129、156、200和331，所述位点对应于氨基酸序列SEQIDNO：3中的位点，其中所述变体包含与所述SEQIDNO：3的亲本木葡聚糖酶的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，并且其中
a)所述一个或多个改变是
i)在占据所述位点的氨基酸下游插入一个氨基酸，和/或
ii)去除占据所述位点的氨基酸，和/或
iii)用不同的氨基酸取代占据所述位点的氨基酸，其中所述取代选自由以下组成的组：Q68H，N，L；R156Y，F，V，I，K，W，L，M；K118A，R；G200P，E，S，D；K129T，A，S；T92V，I，A，S；和N331F，C；
b)所述亲本木葡聚糖酶是家族44木葡聚糖酶；以及
c)所述变体具有木葡聚糖酶活性。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述取代选自由以下组成的组：Q68H；R156Y，F；K118A；G200P，E；K129T，A；T92V；和N331F。
3.如权利要求1所述的组合物，其中所述变体包含一个或多个以下改变的组合：
K13A+Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P；
Q68H+G200P+N331F；
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+K118A+R156V+G200P+N331F；
Q68H+K118A+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+K118R+R156F，Y；
Q68H+K118R+R156Y+G200P；
Q68H+K118S+R156F+G200P+G274D+N331F；
Q68H+K129A，T+R156K+G200P+N331F；
Q68H+R156F，V，Y+G200P+N331F；
Q68H+R156Y+H193T+G200P+M310V；
Q68H+S76W+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92A，D，I，S，V，Y+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92N+D97N+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92S+K118A+K129A+R156Y+G200P+G274D+N331F；
Q68H+T92V+G200P+M310V；
Q68H+T92V+G200P+M310V+N331F；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+A224P+N331F；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+G200P+M310V+E446K；
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+N331H，K，Q；
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T；
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+G200P+M310V；
Q68H+T92V+K118A+Q137E+N140F+R156Y+G200P+K470T；
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+D324N；
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+K470T；
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+M310L；
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92V+K118A，R+R156Y，F；
Q68H+T92V+K118A+S123P，T+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
Q68H+T92V+K118R+R156Y+H193T+D366H；
Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V+S484C；
Q68H+T92V+R156F，V，Y+G200P+M310V；
Q68H+T92V+R156F，V，Y+G200P+M310V+N331F；
Q68H+T92V+R156F，Y+H193T；
Q68H+T92V+R156F，Y+H193T+D366H；
Q68H+T92V+R156F，Y+H193T+G200P+M310V；
Q68H+T92V+R156Y；
G78A+K118A++K129A+R156Y；
G78A+K118A+K129A+R156Y；
G78A+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
G78A+K118A+K129A+R156Y+K169A；
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y；
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+K169A；
T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
T92V+K118A+K129A+R156Y；
T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
T92V+K118A+K129A+R156Y+H164N+G200P+N331F；
T92V+K129A+R156Y；
K118A+K129A+F146L+R156Y+G200P+N331F；
K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F；
K118A+K129A+R156Y；
K118A+K129A+R156Y+A224P；
K118A+K129A+R156Y+G200P；
K118A+K129A+R156Y+G200P+M310V+N331F；
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F；
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F+N399I；
K118A+K129A+R156Y+K169A+G200P+N331F；
K118A+K129A+R156Y+K470T；
K118A+R156Y+G200P。
4.如权利要求1所述的组合物，其中所述变体在位点129和位点156上包含取代。
5.如权利要求1所述的组合物，其中所述变体包含一个或多个以下取代的组合：
K129A+R156Y+G200P
Q68H+K118R+R156F
Q68H+R156F+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+R156Y
K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y
Q68H+K129T+R156K+G200P+N331F
K118A+K129A+R156Y+K169A+G200P+N331F
T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F
G78A+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F
G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+K169A
Q68H+T92V+Q137E+R156Y+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+N331F
Q68H+T92V+R156Y+G200P+M310V+N331F
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366H
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366H
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+S123P，T+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+A224P+N331F。
6.如权利要求1所述的组合物，其中所述变体与亲本木葡聚糖酶相比具有改善的化学稳定性，所述改善的化学稳定性导致改善的洗涤剂稳定性。
7.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物是液体衣物洗涤剂组合物。
8.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含一种或多种成分，所述成分选自：
(a)两亲烷氧基化油脂清洁聚合物；
(b)无规接枝共聚物，其中所述无规接枝共聚物包含：
(i)包含选自由下列组成的组的单体的亲水性主链：不饱和的C1-C6羧酸、醚、醇、醛、酮、酯、糖单元、烷氧基单元、马来酸酐、诸如甘油的饱和的多元醇、以及它们的混合物；以及
(ii)一个或多个选自由下列组成的组的疏水性侧链：C4-C25烷基、聚丙烯、聚丁烯、饱和的C1-C6一元羧酸的乙烯基酯、丙烯酸或甲基丙烯酸的C1-C6烷基酯、以及它们的混合物；
(c)具有以下通式结构的化合物：二((C2H5O)(C2H4O)n)(CH3)-N+-CxH2x-N+-(CH3)-二((C2H5O)(C2H4O)n)，其中n＝20至30，并且x＝3至8，或其硫酸化或磺化的变体。
9.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含香料微胶囊。
10.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含织物调色剂。
11.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含按所述组合物重量计0.1％至5％的钙多价螯合剂，所述钙多价螯合剂在pH8下具有大于4的条件稳定常数。
12.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物为固体形式。
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ZA (1) ZA201008419B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104017789A (zh) * 2008-06-06 2014-09-03 诺维信公司 家族44木葡聚糖酶变体

Families Citing this family (110)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104673532A (zh) 2008-01-04 2015-06-03 宝洁公司 包含糖基水解酶的衣物洗涤剂组合物
EP2208776A1 (en) * 2009-01-16 2010-07-21 The Procter and Gamble Company Bleaching compositions containing perfume microcapsules
EP2213716A1 (en) * 2009-01-16 2010-08-04 The Procter & Gamble Company Bleaching compositions containing perfume microcapsules
EP2336285B1 (en) * 2009-12-18 2013-09-04 The Procter & Gamble Company Composition comprising microcapsules
BR112012020078B1 (pt) 2010-02-12 2020-11-03 Unilever N.V composição de tratamento de roupa método de tratamento de um produto têxtil de roupa
BR112012027594A2 (pt) 2010-04-29 2016-08-09 Unilever Nv composição de tratamento de roupa e método de tratamento de um têxtil para roupa
CA2813794C (en) 2010-10-14 2018-08-28 Unilever Plc Laundry detergent particles
CN103282477B (zh) 2010-10-14 2015-04-01 荷兰联合利华有限公司 顶部装载洗衣容器的方法
EP2441825A1 (en) 2010-10-14 2012-04-18 Unilever Plc, A Company Registered In England And Wales under company no. 41424 of Unilever House Process for preparing laundry detergent particles
IN2013MN00619A (zh) 2010-10-14 2015-06-12 Unilever Plc
WO2012049053A1 (en) 2010-10-14 2012-04-19 Unilever Plc Package comprising a laundry composition, dispenser for said package and method for washing using said dispenser and said package
BR112013009132B1 (pt) 2010-10-14 2021-12-14 Unilever Ip Holdings B.V. Partícula de detergente revestida e pluralidade de partículas de detergente revestidas
EP2441822A1 (en) 2010-10-14 2012-04-18 Unilever Plc, A Company Registered In England And Wales under company no. 41424 of Unilever House Laundry detergent particles
WO2012049032A1 (en) 2010-10-14 2012-04-19 Unilever Plc Refill and refillable packages of concentrated particulate detergent compositions
MY162985A (en) 2010-10-14 2017-07-31 Unilever Plc Particulate detergent compositions comprising fluorescer
PT2627755E (pt) 2010-10-14 2016-01-14 Unilever Nv Composição de detergente particulada empacotada
EP2441820A1 (en) 2010-10-14 2012-04-18 Unilever Plc, A Company Registered In England And Wales under company no. 41424 of Unilever House Laundry detergent particles
BR112013009129B1 (pt) 2010-10-14 2020-10-13 Unilever N.V. partícula de detergente revestida
WO2012049034A1 (en) 2010-10-14 2012-04-19 Unilever Plc Packaging and dispensing of detergent compositions
CA2813830A1 (en) 2010-10-14 2012-04-19 Uniliver Plc Packaged particulate detergent composition
WO2012049055A1 (en) 2010-10-14 2012-04-19 Unilever Plc Transparent packaging of detergent compositions
WO2012048950A1 (en) 2010-10-14 2012-04-19 Unilever Plc Laundry detergent particles
CN103180222B (zh) 2010-10-14 2016-01-20 荷兰联合利华有限公司 包装的浓缩颗粒洗涤剂组合物
AU2011315790B2 (en) 2010-10-14 2014-03-06 Unilever Plc Laundry detergent particles
ES2644555T3 (es) 2010-10-14 2017-11-29 Unilever N.V. Embalaje y distribución de composiciones detergentes
WO2012098046A1 (en) 2011-01-17 2012-07-26 Unilever Plc Dye polymer for laundry treatment
US8828920B2 (en) 2011-06-23 2014-09-09 The Procter & Gamble Company Product for pre-treatment and laundering of stained fabric
EP2540824A1 (en) 2011-06-30 2013-01-02 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions comprising amylase variants reference to a sequence listing
EP2639291A1 (en) 2012-03-13 2013-09-18 Unilever PLC Packaged particulate detergent composition
WO2013139702A1 (en) 2012-03-21 2013-09-26 Unilever Plc Laundry detergent particles
US20130255097A1 (en) * 2012-03-27 2013-10-03 Bsh Bosch Und Siemens Hausgerate Gmbh Clothes treatment appliance with condenser and cleaning device
US20130255095A1 (en) * 2012-03-27 2013-10-03 Bsh Bosch Und Siemens Hausgerate Gmbh Clothes treatment appliance with condenser and cleaning device
MX340639B (es) 2012-04-03 2016-07-19 Unilever Nv Particulas de detergente para lavado de ropa.
BR112014021493B1 (pt) 2012-04-03 2021-05-11 Unilever Ip Holdings B.V partícula detergente revestida e formulação detergente embalada
MX2014011547A (es) 2012-04-03 2014-11-14 Unilever Nv Particulas de detergente para lavado de ropa.
MX2014011527A (es) 2012-04-03 2015-01-16 Unilever Nv Particulas de detergente para lavado de ropa.
MX346181B (es) 2012-09-25 2017-03-10 Unilever Nv Particulas detergentes para lavado de ropa.
KR20150123847A (ko) * 2013-02-28 2015-11-04 바스프 에스이 세탁물 케어를 위한 알콕실화된 폴리프로필렌이민의 용도 및 그의 조성물
US9850512B2 (en) 2013-03-15 2017-12-26 The Research Foundation For The State University Of New York Hydrolysis of cellulosic fines in primary clarified sludge of paper mills and the addition of a surfactant to increase the yield
JP2017503061A (ja) 2013-11-11 2017-01-26 エコラボ ユーエスエー インコーポレイティド 多目的酵素洗剤及び使用溶液を安定化する方法
US9951363B2 (en) 2014-03-14 2018-04-24 The Research Foundation for the State University of New York College of Environmental Science and Forestry Enzymatic hydrolysis of old corrugated cardboard (OCC) fines from recycled linerboard mill waste rejects
CN107207999B (zh) 2014-09-18 2019-09-27 荷兰联合利华有限公司 增白组合物
TR201819563T4 (tr) 2015-01-09 2019-01-21 Unilever Nv Bir boya içeren çamaşır arıtma bileşimi.
WO2016128466A1 (en) 2015-02-13 2016-08-18 Unilever Plc Laundry liquid composition
US20180171269A1 (en) * 2015-09-01 2018-06-21 Novozymes A/S Laundry method
TR201808208T4 (tr) 2016-01-07 2018-07-23 Unilever Nv Acı parçacık.
BR112018014327A2 (pt) 2016-01-15 2018-12-11 Unilever Nv composição de tratamento para lavagem e método doméstico de tratamento de um tecido
EP3417039B1 (en) 2016-02-17 2019-07-10 Unilever PLC Whitening composition
BR112018016674B1 (pt) 2016-02-17 2022-06-07 Unilever Ip Holdings B.V. Composição de detergente para lavagem de roupas e método doméstico de tratamento de um tecido
CN108884415A (zh) 2016-03-21 2018-11-23 荷兰联合利华有限公司 洗衣洗涤剂组合物
CN108779416B (zh) 2016-04-08 2021-01-05 荷兰联合利华有限公司 洗衣洗涤剂组合物
US10457900B2 (en) * 2016-05-20 2019-10-29 The Proctor & Gamble Company Detergent composition comprising an alkyl ether sulfate-rich surfactant system and coated encapsulates
US10494592B2 (en) * 2016-05-20 2019-12-03 The Procter & Gamble Company Detergent composition comprising anionic/nonionic/cationic surfactant system and encapsulates
BR112019007851B1 (pt) 2016-10-18 2022-10-18 Unilever Ip Holdings B.V. Composição detergente para lavagem de roupas e método doméstico de tratamento de um tecido
CN110023469A (zh) 2016-12-15 2019-07-16 荷兰联合利华有限公司 洗衣洗涤剂组合物
DK3357994T3 (da) 2017-02-01 2023-11-20 Procter & Gamble Rengørinssammensætninger indeholdende amylasevarianter
WO2018234056A1 (en) 2017-06-20 2018-12-27 Unilever N.V. PARTICULATE DETERGENT COMPOSITION COMPRISING A FRAGRANCE
WO2018234003A1 (en) 2017-06-21 2018-12-27 Unilever Plc PACKAGING AND DISTRIBUTION OF DETERGENT COMPOSITIONS
CN110869480B (zh) 2017-07-07 2021-08-13 联合利华知识产权控股有限公司 增白组合物
EP3649221B8 (en) 2017-07-07 2024-05-29 Unilever IP Holdings B.V. Laundry cleaning composition
EP3717616B1 (en) 2017-11-30 2021-10-13 Unilever IP Holdings B.V. Detergent composition comprising protease
CN112119144A (zh) 2018-05-17 2020-12-22 荷兰联合利华有限公司 包含鼠李糖脂和烷基醚羧酸盐表面活性剂的清洁组合物
WO2019219531A1 (en) 2018-05-17 2019-11-21 Unilever Plc Cleaning composition
CN112513236A (zh) 2018-07-17 2021-03-16 联合利华知识产权控股有限公司 鼠李糖脂在表面活性剂体系中的用途
CN112543801A (zh) 2018-07-27 2021-03-23 荷兰联合利华有限公司 洗衣洗涤剂
BR112021004507A2 (pt) 2018-09-17 2021-06-08 Unilever Ip Holdings B.V. composição detergente, método de tratamento de um substrato com uma composição detergente e uso de uma enzima lipase bacteriana
BR112021009807A2 (pt) 2018-11-20 2021-08-17 Unilever Ip Holdings B.V. composição detergente, método de tratamento de um substrato de tecido e uso de uma enzima isomerase
WO2020104158A1 (en) 2018-11-20 2020-05-28 Unilever Plc Detergent composition
EP3884026B1 (en) 2018-11-20 2024-06-26 Unilever Global Ip Limited Detergent composition
CN113166689A (zh) 2018-11-20 2021-07-23 联合利华知识产权控股有限公司 洗涤剂组合物
WO2020104157A1 (en) 2018-11-20 2020-05-28 Unilever Plc Detergent composition
WO2020151992A1 (en) 2019-01-22 2020-07-30 Unilever N.V. Laundry detergent
US20220098525A1 (en) 2019-01-22 2022-03-31 Conopco, Inc., D/B/A Unilever Laundry detergent
CA3127171A1 (en) 2019-03-14 2020-09-17 The Procter & Gamble Company Method for treating cotton
CA3127169A1 (en) 2019-03-14 2020-09-17 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions comprising enzymes
CA3127167A1 (en) 2019-03-14 2020-09-17 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions comprising enzymes
EP3969556A1 (en) 2019-05-16 2022-03-23 Unilever Global Ip Limited Laundry composition
MX2021015382A (es) 2019-06-24 2022-01-24 Procter & Gamble Composiciones de limpieza que comprenden variantes de amilasa.
BR112021022423A2 (pt) 2019-06-28 2022-01-04 Unilever Ip Holdings B V Composição detergente e método doméstico de tratamento de tecidos
US20220372408A1 (en) 2019-06-28 2022-11-24 Conopco, Inc., D/B/A Unilever Detergent composition
EP3990599B1 (en) 2019-06-28 2023-01-18 Unilever Global Ip Limited Detergent composition
WO2020260006A1 (en) 2019-06-28 2020-12-30 Unilever Plc Detergent compositions
US20220364022A1 (en) 2019-06-28 2022-11-17 Conopco, Inc., D/B/A Unilever Detergent composition
EP3990603B1 (en) 2019-06-28 2022-12-07 Unilever Global Ip Limited Detergent composition
AR119874A1 (es) 2019-09-02 2022-01-19 Unilever Nv Composición detergente con un derivado de éster de ácido cítrico de un monoglicérido
BR112022004470A2 (pt) 2019-09-19 2022-05-31 Unilever Ip Holdings B V Composição detergente e método para lavagem não oxidativa de manchas de tecido
AR120142A1 (es) 2019-10-07 2022-02-02 Unilever Nv Composición detergente
US11427794B2 (en) * 2019-12-19 2022-08-30 Henkel Ag & Co. Kgaa Low density unit dose detergents based on butyl cellosolve with encapsulated fragrance
EP4162018B1 (en) 2020-06-08 2024-01-31 Unilever IP Holdings B.V. Method of improving protease activity
WO2022043321A2 (en) * 2020-08-25 2022-03-03 Novozymes A/S Variants of a family 44 xyloglucanase
WO2022043042A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Unilever Ip Holdings B.V. Detergent composition
EP4204396B1 (en) 2020-08-28 2024-05-29 Unilever IP Holdings B.V. Surfactant and detergent composition
EP4204530B1 (en) 2020-08-28 2024-07-17 Unilever IP Holdings B.V. Detergent composition
BR112023002979A2 (pt) 2020-08-28 2023-04-04 Unilever Ip Holdings B V Composição detergente e método de tratamento de um artigo têxtil
BR112023001773A2 (pt) 2020-08-28 2023-03-28 Unilever Ip Holdings B V Composição detergente e método
JP2023547600A (ja) 2020-10-29 2023-11-13 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー アルギン酸リアーゼ酵素を含有する洗浄組成物
CN116529351A (zh) 2020-12-07 2023-08-01 联合利华知识产权控股有限公司 洗涤剂组合物
EP4256020A1 (en) 2020-12-07 2023-10-11 Unilever IP Holdings B.V. Detergent compositions
WO2022128781A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 Unilever Ip Holdings B.V. Cleaning composition
CN116583583A (zh) 2020-12-17 2023-08-11 联合利华知识产权控股有限公司 用途和清洁组合物
CA3201033A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Basf Se Amphiphilic alkoxylated polyamines and their uses
JP2023548846A (ja) 2021-03-15 2023-11-21 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー ポリペプチドバリアントを含有する洗浄組成物
MX2023012548A (es) 2021-05-05 2023-11-03 Procter & Gamble Metodos para elaborar composiciones de limpieza y detectar suciedades.
EP4108767A1 (en) 2021-06-22 2022-12-28 The Procter & Gamble Company Cleaning or treatment compositions containing nuclease enzymes
CN117957300A (zh) 2021-09-20 2024-04-30 联合利华知识产权控股有限公司 洗涤剂组合物
EP4416255A1 (en) 2021-10-14 2024-08-21 The Procter & Gamble Company A fabric and home care product comprising cationic soil release polymer and lipase enzyme
WO2023165507A1 (en) * 2022-03-02 2023-09-07 Novozymes A/S Use of xyloglucanase for improvement of sustainability of detergents
EP4273210A1 (en) 2022-05-04 2023-11-08 The Procter & Gamble Company Detergent compositions containing enzymes
EP4273209A1 (en) 2022-05-04 2023-11-08 The Procter & Gamble Company Machine-cleaning compositions containing enzymes
US20240263162A1 (en) 2023-02-01 2024-08-08 The Procter & Gamble Company Detergent compositions containing enzymes

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1261400A (zh) * 1997-05-05 2000-07-26 普罗格特-甘布尔公司 含有木葡聚糖酶的洗衣和清洗组合物
CN1369007A (zh) * 1999-08-13 2002-09-11 诺沃奇梅兹有限公司 来自畸枝霉属的碱性木葡聚糖酶

Family Cites Families (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5159060A (en) 1988-05-27 1992-10-27 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cytotoxic boronic acid peptide analogs
US4963655A (en) 1988-05-27 1990-10-16 Mayo Foundation For Medical Education And Research Boron analogs of amino acid/peptide protease inhibitors
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
DK16490D0 (da) * 1990-01-19 1990-01-19 Novo Nordisk As Enzym
US6893845B1 (en) 1990-09-28 2005-05-17 Applied Molecular Evolution, Inc. Surface expression libraries of heteromeric receptors
IL99552A0 (en) 1990-09-28 1992-08-18 Ixsys Inc Compositions containing procaryotic cells,a kit for the preparation of vectors useful for the coexpression of two or more dna sequences and methods for the use thereof
HUT65823A (en) 1991-04-30 1994-07-28 Procter & Gamble Liquid detergents with an aryl boronic acid and process for using thereof
US5442100A (en) 1992-08-14 1995-08-15 The Procter & Gamble Company β-aminoalkyl and β-N-peptidylaminoalkyl boronic acids
US5354491A (en) 1992-08-14 1994-10-11 The Procter & Gamble Company Liquid detergent compositions containing protease and certain β-aminoalkylboronic acids and esters
EP0583536B1 (en) 1992-08-14 1997-03-05 The Procter & Gamble Company Liquid detergents containing an alpha-amino boronic acid
WO1994014953A1 (en) 1992-12-23 1994-07-07 Novo Nordisk A/S An enzyme with endoglucanase activity
US5431842A (en) 1993-11-05 1995-07-11 The Procter & Gamble Company Liquid detergents with ortho-substituted phenylboronic acids for inhibition of proteolytic enzyme
DE4343591A1 (de) 1993-12-21 1995-06-22 Evotec Biosystems Gmbh Verfahren zum evolutiven Design und Synthese funktionaler Polymere auf der Basis von Formenelementen und Formencodes
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
US5834415A (en) 1994-04-26 1998-11-10 Novo Nordisk A/S Naphthalene boronic acids
DE69637907D1 (de) 1995-05-05 2009-06-04 Novozymes As Protease-varianten und verbindungen
US6682924B1 (en) 1995-05-05 2004-01-27 Novozymes A/S Protease variants and compositions
US5576282A (en) 1995-09-11 1996-11-19 The Procter & Gamble Company Color-safe bleach boosters, compositions and laundry methods employing same
MA24137A1 (fr) 1996-04-16 1997-12-31 Procter & Gamble Fabrication d'agents de surface ramifies .
US6165966A (en) 1996-09-24 2000-12-26 The Procter & Gamble Company Liquid detergents containing proteolytic enzyme and protease inhibitors
JP4489190B2 (ja) 1997-03-07 2010-06-23 ザ、プロクター、エンド、ギャンブル、カンパニー 金属ブリーチ触媒およびブリーチアクチベーターおよび／または有機過カルボン酸を含有したブリーチ組成物
BR9810548A (pt) 1997-07-07 2000-08-15 Novo Nordisk As Preparação de enzima, xiloglucanase, molécula isolada de polinucleotìdeo, vetor de expressão, célula cultivada, polipeptìdeo isolado, processos para produzir um polipeptìdeo tendo atividade de xiloglucanase e para tratamento de tecidos em máquina, enzima isolada tendo atividade de xiloglucanase, composição detergente, e, uso da preparação de enzima ou da enzima
US6268197B1 (en) 1997-07-07 2001-07-31 Novozymes A/S Xyloglucan-specific alkaline xyloglucanase from bacillus
US6815192B2 (en) * 2000-02-24 2004-11-09 Novozymes A/S Family 44 xyloglucanases
EP1259594B1 (en) 2000-02-24 2009-02-18 Novozymes A/S Family 44 xyloglucanases
RU2291901C2 (ru) * 2000-09-21 2007-01-20 Басф Акциенгезелльшафт Полипептид и композиция, обладающие активностью ксиланазы, применение полипептида, полинуклеотид, кодирующий полипептид, вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид, способ получения полинуклеотида, способ обработки растительного или ксилансодержащего материала
EP1260578A1 (en) * 2001-05-22 2002-11-27 The Procter & Gamble Company Pouched compositions
EP1421187B1 (en) 2001-07-27 2007-10-10 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Systems for in vivo site-directed mutagenesis using oligonucleotides
WO2003095658A1 (en) 2002-05-07 2003-11-20 Novozymes A/S Homologous recombination into bacterium for the generation of polynucleotide libraries
DE102004029310A1 (de) 2004-06-17 2005-12-29 Clariant Gmbh Hochkonzentrierte, wässrige Formulierungen von Oligo-und Polyestern
US7208459B2 (en) 2004-06-29 2007-04-24 The Procter & Gamble Company Laundry detergent compositions with efficient hueing dye
JP5080446B2 (ja) 2005-04-15 2012-11-21 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 内側ポリエチレンオキシドブロック及び外側ポリプロピレンオキシドブロックを有する両親媒性の水溶性アルコキシル化ポリアルキレンイミン
MX292760B (es) 2005-04-15 2011-11-28 Procter & Gamble Composiciones detergentes liquidas para lavanderia con polimeros de polietilenimina modificada y enzima lipasa.
DE102005061058A1 (de) 2005-12-21 2007-07-05 Clariant Produkte (Deutschland) Gmbh Anionische Soil Release Polymere
US20080015135A1 (en) 2006-05-05 2008-01-17 De Buzzaccarini Francesco Compact fluid laundry detergent composition
EP2024479B2 (en) 2006-05-31 2015-02-25 The Procter & Gamble Company Cleaning compositions with amphiphilic graft polymers based on polyalkylene oxides and vinyl esters
MX2008016448A (es) 2006-06-19 2009-01-22 Procter & Gamble Composiciones detergentes liquidas con polimeros a base de acido poliacrilico y polidispesidad baja.
DE102007013217A1 (de) 2007-03-15 2008-09-18 Clariant International Ltd. Anionische Soil Release Polymere
CN104673532A (zh) 2008-01-04 2015-06-03 宝洁公司 包含糖基水解酶的衣物洗涤剂组合物
RU2470070C2 (ru) 2008-01-04 2012-12-20 Дзе Проктер Энд Гэмбл Компани Композиции, содержащие фермент и подкрашивающий агент для тканей
PL2242829T3 (pl) 2008-01-04 2013-08-30 Procter & Gamble Kompozycja detergentu piorącego zawierająca hydrolazę glikozylową oraz korzystny składnik zawierający cząstkę przenoszącą
ATE556131T1 (de) 2008-01-04 2012-05-15 Procter & Gamble Verwendung einer cellulase für schmutzabweisende wirkung bei baumwolle während eines nachfolgenden waschvorgangs

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1261400A (zh) * 1997-05-05 2000-07-26 普罗格特-甘布尔公司 含有木葡聚糖酶的洗衣和清洗组合物
CN1369007A (zh) * 1999-08-13 2002-09-11 诺沃奇梅兹有限公司 来自畸枝霉属的碱性木葡聚糖酶

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104017789A (zh) * 2008-06-06 2014-09-03 诺维信公司 家族44木葡聚糖酶变体
CN104017789B (zh) * 2008-06-06 2017-11-03 诺维信公司 家族44木葡聚糖酶变体

Also Published As

Publication number Publication date
US8202831B2 (en) 2012-06-19
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MX2010013276A (es) 2010-12-21
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RU2010148557A (ru) 2012-07-27
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ES2720369T3 (es) 2019-07-19
JP2011524438A (ja) 2011-09-01
MY159940A (en) 2017-02-15
CN102057030A (zh) 2011-05-11

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