CN102053153A - 斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒及其应用。本试剂盒包括斑点免疫金渗滤卡片，纳米胶体金或乳胶微球标记的检测探针，阴性和阳性标准品以及冲洗液，技术特征在于该斑点免疫金渗滤卡片为斑点免疫金定向渗滤卡片，其能够使待测样本和胶体金标探针依次沿着包被探针覆盖的区域渗滤。本发明制作简单，试剂消耗量少，检测范围广，可操作性好，与传统斑点免疫金渗滤法相比，显著提高了检测灵敏度。

Description

斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及一种斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，可用于科研、疾病诊断和食品安全领域。
背景技术
金标免疫检测技术是继同位素、荧光素和酶标记技术之后的一种新型免疫标记技术。该方法简便、快捷、不需要特殊设备，结果判定有极好的可视性。适用于‘床边’检测、疾病普查和流行病监测，以及海关、食品安全和养殖业等领域。
常用的金标免疫检测包括侧向免疫金层析法（Bilateral immune-chromatographic assay）和斑点金免疫渗滤法(Dot immune-gold filtration assay)。侧向免疫金层析法是受测样本和胶体金标记探针在一种微孔膜（例如：硝酸纤维素膜）上受虹吸作用做侧向运动，与预先包被在膜另一端的捕获探针相遇而聚集，呈现肉眼可见的红色线条。由于受测样本和标记探针是在混合状态下做同步运动，这种方法在检测抗体时会因为待测样本中的非特异性抗体存在而消耗标记探针，从而降低检测的灵敏度。在这种情况下通常使用双抗原夹心法取代间接抗体法。但双抗原夹心法要求包被抗原与标记抗原的抗原决定簇有尽可能大的差异而避免竞争性抑制，从而对试剂质量和成本提出更高的要求，成为该技术的主要缺陷。竞争法则以不显色为阳性结果，在很多情况下给结果判定带来不便。所以，目前该技术的临床应用受到局限。
斑点免疫金渗滤法是让待测样本垂直渗滤过微孔膜（例如：硝酸纤维素膜），被膜上包被的捕获探针捕获，再以同样方式让胶体金标探针渗滤过微孔膜，与被捕获的配体结合后聚集形成肉眼可见的红色斑点。这种方法的缺陷是大部分待测样本和标记探针从斑点以外的非相关区域流失，影响检测灵敏度，致使该技术尚未在临床检验中广泛使用。
发明内容
本发明的目的是提供一种高灵敏度和高准确度的斑点免疫金定向渗滤检测试剂盒，以克服现有技术的不足。
本发明的另一目的是提供斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒在科研、疾病诊断和食品安全领域中的应用。
本发明的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒包括斑点免疫金渗滤卡片，纳米胶体金或乳胶微球标记的检测探针，阴性和阳性标准品以及冲洗液，其工作原理是：在传统斑点免疫金渗滤法的基础上，在微孔膜与吸水膜之间设置一个渗滤限制装置，使待测样本和胶体金标探针依次沿着包被探针所覆盖的区域渗滤，避免试剂在其它非相关区域的流失，以提高检测灵敏度。
本发明实现过程如下：
一种斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，包括斑点免疫金渗滤卡片，纳米胶体金或乳胶微球标记的检测探针，阴性和阳性标准品以及冲洗液，其特征在于该斑点免疫金渗滤卡片为斑点免疫金定向渗滤卡片，其能够使待测样本和胶体金标探针依次沿着包被探针覆盖的区域渗滤。
所述的斑点免疫金定向渗滤卡片有以下两种实现方式，可以使待测样本和胶体金标探针依次沿着包被探针覆盖的区域渗滤。其中一种实现方式是在传统斑点免疫金渗滤法的基础上，在具有微孔和层析作用的微孔膜与吸水垫之间设置渗滤限制层，使待测样本和金标探针通过微孔膜时先向膜中央聚集，然后通过膜中央的探针包被区垂直渗滤至吸水垫，从而降低试剂在其它非相关区域里的流失，提高检测灵敏度。这种斑点免疫金定向渗滤卡片从上到下由表层、微孔膜、渗滤限制层和吸水垫4层组成，表层为非吸水材料，中央有一开孔；微孔膜为一种与蛋白分子有亲和力的微孔膜（孔径为0.2-5μm的硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜或PVDF膜），其上至少包被一种探针；渗滤限制层为非吸水材料（非吸水高分子薄膜、双面胶或防水涂料），中央有一开孔。
另一种实现方式是从上到下由表层、微孔膜和吸水垫3层组成，表层为非吸水材料，中央有一开孔；微孔膜为一种与蛋白分子有亲和力的微孔膜（孔径为0.2-5μm的硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜或PVDF膜），微孔膜上至少包被一种探针；吸水垫中央设置有凹槽，凹槽的中心设置有与包被探针形状大小相匹配的突起，探针包被区域与吸水垫突起部分紧密接触，微孔膜其余部分与吸水垫非接触，也就是微孔膜的其余部分与吸水垫相对应的凹槽悬空隔离。
使用微量点样或喷涂技术，将1-2μl捕获探针（1mg/ml）在微孔膜中央固定成直径为2～3mm的圆形斑点或2×10mm2的条形，常温或37℃吹风干燥，用1%牛血清白蛋白、小牛血清或脱脂牛奶浸泡微孔膜，以封闭膜上的空白结合点，常温或37℃吹风干燥。
所述的斑点免疫金定向渗滤卡片表层开孔为圆形或椭圆形，开孔直径8～12mm。
所述的斑点免疫金定向渗滤法卡片表层为PVC、PE、PP、PS、ABS塑料、或其它非吸水高分子材料。
所述的吸水垫为2-3mm厚的吸水纸板、吸水纤维板或吸水棉垫。
所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒还可以设置有与卡片表层开孔适配的漏斗状滤过膜，与卡片表层中央的微孔膜适配，并可自由拆卸。该滤过膜为孔径0.2-0.45微米滤纸制成，吸附有抗凝剂，可滤除样本中的有形成分。
所述的纳米胶体金或乳胶微球标记的检测探针是用10-40nm胶体金或乳胶微球连接的检测探针，包括抗原、半抗原、抗体、蛋白分子、多肽、核酸，这些标记探针在渗滤过程中与配体结合后聚集，呈现肉眼可见的颜色。
所述的冲洗液为磷酸缓冲液，Tris-缓冲液，或含有Tween 20的缓冲液。 
本发明斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒可用于科研、食品安全和疾病诊断，检测抗原、半抗原、抗体、蛋白分子、多肽、核酸；可检测食品中的药物残留和化学物质残留；可检测多种疾病标志物： 
感染性疾病包括：单纯泡疹病毒1/2、水痘病毒、EB病毒、巨细胞病毒、人类泡疹病毒-6/8；流感病毒A/B、付流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腺病毒、非典病毒、肝炎、脊髓灰质炎病毒、流行性乙脑病毒、出血热病毒、多价禽流感病毒、艾滋病毒1/2、狂犬病毒；脑膜炎球菌、布鲁氏菌、破伤风杆菌、梅毒、肺炎支原体、兔弓形体、百日咳杆菌、多价肺炎球菌、多价大肠杆菌、多价白喉杆菌、结核杆菌、伤寒杆菌、幽门螺旋体、血吸虫；
自身免疫性疾病包括：双链DNA、组蛋白、心磷脂、核仁抗原、着丝粒抗原、髓过氧化酶、蛋白激酶3、核蛋白、‘史密斯’抗原、Jo-1 抗原、Scl-70 抗原、SS-A/B抗原、甲状腺球蛋白、线粒体抗原、心肌抗原、平滑肌抗原、肾小球基底膜抗原、胶原I-IV、髓磷脂基本蛋白、蛋白脂质蛋白、髓磷脂神经胶质细胞糖蛋白、以及类风湿因子和环瓜氨酸多肽；
肿瘤标志物包括：癌抗原27.29、癌胚抗原、癌抗原19.9、甲胎球蛋白、绒毛膜促性腺激、癌抗原125 、抗-癌抗原27.29、前列腺癌特异性抗原；
心脑血管疾病包括：肌红蛋白、肌钙蛋白I、超敏-C反应蛋白、磷酸肌酸激酶MB、新型脂肪酸结合蛋白；
家禽家畜疾病包括：鸡禽流感病毒、鸡新城疫病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒、猪口蹄疫、猪蓝耳病病毒、伪狂犬病毒、犬细小病毒；
寄生虫病包括：猪蛔虫病、旋毛虫病、姜片吸虫病、囊尾虫病、肉孢子虫病、弓形虫病、棘头虫病；猪肺线虫病、猪鞭虫病、猪类圆线虫病、猪结节虫病、猪肾虫病、猪胃虫圆线虫病、牛焦虫病、牛球虫病、牛住肉孢子虫病、牛弓形虫病、牛胎毛滴虫病、牛囊尾蚴病、牛棘球蚴病、牛肝片形吸虫病、牛血吸虫病、羊肝片吸虫病、羊血吸虫病、羊前后盘吸虫病、羊双腔吸虫病、羊脑多头蚴病、羊棘球蚴病、羊细颈囊尾蚴病、羊胃肠线虫病、羊肺线虫病、羊绦虫病、羊血孢子虫病、羊球虫病、羊泰勒虫病；
疫苗效价测定包括：牛痘疫苗、脊髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗、腺病毒疫苗、黄热病疫苗、风疹疫苗、腮腺炎疫苗、甲型肝炎疫苗、流感疫苗、水痘疫苗、轮状病毒疫苗、乙型脑炎疫苗、狂犬病疫苗、流行性出血热疫苗、卡介苗、伤寒疫苗、斑疹伤寒疫苗、霍乱疫苗、布氏菌疫苗、炭疽疫苗、痢疾疫苗、百日咳疫苗、鼠疫疫苗、肺炎链球菌疫苗、沙门Vi多糖疫苗、脑膜炎球菌A/C疫苗、痢疾疫苗、百日咳疫苗、鼠疫疫苗、肺炎链球菌疫苗、沙门Vi多糖疫苗、脑膜炎球菌A/C疫苗、流感嗜血杆菌疫苗、白喉疫苗，SARS疫苗。
发明的优点与积极效果：
（1）本发明所述的斑点免疫金定向渗滤技术与传统斑点免疫金渗滤法相比，显著提高了检测灵敏度。
（2）本发明与免疫金层析法相比，制作简单，试剂消耗量少，检测范围广，可操作性更好。
（3）本发明技术成本低，适合大规模推广。
附图说明
图1是本发明斑点免疫金定向渗滤卡片（4层）的结构示意图；
图2是本发明斑点免疫金定向渗滤卡片（4层）的渗滤方向示意图；
图3是本发明斑点免疫金定向渗滤卡片（3层）的结构示意图；
图4是本发明斑点免疫金定向渗滤卡片（3层）的渗滤方向示意图；
图5 是本发明斑点免疫金定向渗滤卡片检测的阳性结果示意图。
具体实施方式
如图1所示，本发明斑点免疫金定向渗滤卡片从上到下由①非吸水材料制成的表层、②包被有捕获探针的微孔膜、③非吸水材料制成的渗滤限制膜和④吸水垫4层组成，四层复合后成为本发明斑点免疫金定向渗滤卡片。
如图2所示，将斑点免疫金定向渗滤卡在室温下水平放置，将受测血清或血浆做适当稀释（1:（5-10）），用微量移液器将50-100μl该稀释样本滴注到卡片中央的微孔膜上，待其渗滤完后滴注50-100μl PBS冲洗液；待其渗滤完后滴注50-100μl金标检测探针；待其渗滤完后滴注50-100μl PBS冲洗液；用同样方法对阳性和阴性标准品检测，作为检测过程的质量控制。肉眼观察捕获探针区域的显色反应：红色斑点为阳性，不显色为阴性。结果判定：若阳性对照和受测样本均为阳性，则判定受测样本为阳性；若阳性对照为阳性，受测样本为阴性，则判定受测样本为阴性；若阳性对照为阴性，说明试验过程有误，应重复。整个过程大约需要3-5分钟。预先对受测样本做梯度稀释，可对被检品滴度作定量分析。
如图3、4所示，本发明斑点免疫金定向渗滤卡片从上到下由非吸水材料制成的表层①、包被有捕获探针的微孔膜②和吸水垫④3层组成，三层复合后成为本发明斑点免疫金定向渗滤卡片。吸水垫④中央设置有凹槽，凹槽的中心设置有与包被探针形状大小相匹配的突起，探针包被区域与吸水垫突起部分紧密接触，微孔膜的其余部分与吸水垫相对应的凹槽悬空隔离，非接触，以保证溶液按照箭头所指方向定向渗滤，富集样品，提高检测灵敏度。
本发明还可以在斑点免疫金定向渗滤卡中央的微孔膜上加置一个过滤膜，用微量移液器将5-10μl血清、血浆或全血样本滴注到过滤膜上，随即滴注50-100μl PBS冲洗液，待其渗滤完后滴注50-100μl 金标检测探针，以下步骤同上。 
图5 是本发明斑点免疫金定向渗滤卡片检测的阳性结果示意图，根据捕获探针的包被区域形状显示为①圆斑状或②条状。
实施例1 斑点免疫金定向渗滤试剂盒的制备
斑点免疫金定向渗滤卡片的表层为白色5×4×0.5cm3的PVC卡片，中央有一直径为0.8cm的圆孔；渗滤卡片的微孔膜为直径为1.2cm的NC膜（微孔为0.45）。使用微量点样或喷涂技术将1-2μl捕获探针（1mg/ml）固定于微孔膜中央, 呈直径为2mm的圆型斑点（或条状），室温或吹风干燥后，浸入1%牛血清1分钟，室温或吹风干燥后室温或吹风干燥20分钟；渗滤卡片的渗滤限制层为5×4×0.5cm3的双面胶薄膜，中央开有一直径为2mm的圆孔（或条状），与微孔膜中央的包被探针区相对应；渗滤卡片的吸水垫为5×4×0.3cm3 的吸水纸板。以上四层经不干胶依次紧密粘合，制成的卡片用铝箔袋密封保存。
阳性和阴性对照品分别为经标准品校对过的阳性和阴性样品。金标捕获探针为直径为20nM标记的检测探针，冲洗液为0.1M的PBS缓冲液。
或者，上述的渗滤限制层的双面胶薄膜被省略，在渗滤卡片的吸水垫中央冲压一直径为10mm、深为1.5mm的圆形凹陷，凹陷中央保留一直径为2mm的圆柱状突起。将该吸水垫与上述的微孔膜和PVC卡片依次由下而上紧密粘合，制成的卡片用铝箔袋密封保存。
实施例2 双斑点免疫金定向渗滤卡片的制作
双斑点免疫金定向渗滤卡片是在同一检测孔中同时显示阳性对照和检测斑点。 斑点免疫金定向渗滤卡片的表层为白色5×4×0.5cm3的PVC卡片，中央有一直径为1cm的圆型或椭圆形开孔；渗滤卡片的微孔膜为直径为1.5cm的NC膜（微孔为0.45）。使用微量点样或喷涂技术将1-2μl抗金标探针抗体（1mg/ml）和捕获探针（1mg/ml）分别固定于微孔膜中央, 二者相距4mm, 呈直径为2mm的圆型斑点（或条状），室温或吹风干燥后，浸入1%牛血清1分钟，室温或吹风干燥后室温或吹风干燥20分钟；渗滤卡片的渗滤限制层为5×4×0.5cm3的双面胶薄膜，中央开有两个直径为2mm的圆孔（或条状），与微孔膜中央的2个包被探针区相对应；渗滤卡片的吸水垫为5×4×0.3cm3 的吸水纸。以上四层经不干胶依次紧密粘合，完成卡片的制作。制成的卡片用铝箔袋密封保存待用。
实施例3 检测抗原的斑点免疫金定向渗滤卡片（双抗体法）的制作
斑点免疫金定向渗滤卡片的表层为白色5×4×0.5cm3的PVC卡片，中央有一直径为0.8cm的圆孔；渗滤卡片的微孔膜为直径为1.2cm的NC膜（微孔为0.45）。使用微量点样或喷涂技术将1-2μl捕获抗体（1mg/ml）固定于微孔膜中央, 呈直径为2mm的圆型斑点（或线状和环状），室温或吹风干燥后，浸入1%牛血清1分钟，室温或吹风干燥后室温或吹风干燥20分钟；其余操作同实施例1。
实施例4 检测抗体的斑点免疫金定向渗滤卡片（间接抗体法）的制作
斑点免疫金定向渗滤卡片的表层为白色5×4×0.5cm3的PVC卡片，中央有一直径为0.8cm的圆孔；渗滤卡片的微孔膜为直径为1.2cm的NC膜（微孔为0.45）。使用微量点样或喷涂技术将1-2μl抗原（捕获探针）（1mg/ml）固定于微孔膜中央, 呈直径为2mm的圆型斑点（或线状和环状），室温或吹风干燥后，浸入1%牛血清1分钟，室温或吹风干燥后室温或吹风干燥20分钟；其余操作同实施例1。
实施例5 检测乙肝病毒抗原（双抗体法）
试剂盒内容包括：乙肝病毒表面抗原(HbsAg)、核心抗原(HbcAg)和e抗原(HbeAg)特异性抗体分别包被的斑点免疫金定向渗滤卡片，乙肝病毒阳性和阴性对照血清，20nm胶体金标记的抗乙肝病毒表面抗原、核心抗原和e抗原特异性抗体，以及PBS冲洗液。操作过程如下：将受测血清或血浆用PBS做1：10稀释，用移液器将100μl 该稀释样本滴注在卡片中央的微孔膜上，待渗滤后滴注100μl PBS缓冲液冲洗；待渗滤后滴注50μl金标探针；待渗滤后滴注100μl PBS缓冲液冲洗；观测斑点显色。阳性和阴性对照血清并行检测作为质量控制，同时与传统斑点免疫金渗滤卡片做比较。 对20例乙肝阳血清和20例正常对照检测结果显示：本发明所述的斑点免疫金定向渗滤法和传统斑点免疫金渗滤法的灵敏度分别为95%和40%；特异性均为100%。
实施例6 检测丙肝病毒抗体（间接抗体法）
试剂盒内容包括：重组丙肝病毒非结构抗原（HCVns）和核心抗原(HCVc)包被的斑点免疫金定向渗滤卡片，丙肝病毒阳性和阴性对照血清，20nm胶体金标记的羊抗人IgG抗体，以及PBS冲洗液。操作过程同实施例5.对20例丙肝血清和20例正常对照检测结果显示：本发明所述的斑点免疫金定向渗滤法和传统斑点免疫金渗滤法的灵敏度分别为85%和45%；特异性均为100%。
实施例7 检测艾滋病毒（HIV）抗体（间接抗体法）
试剂盒内容包括：重组HIV1+2抗原包被的斑点免疫金定向渗滤卡片，HIV阳性和阴性对照血清，20nm胶体金标记的羊抗人IgG抗体，以及PBS冲洗液。操作过程同实施例5。对20例HIV血清和20例正常对照检测结果显示：本发明所述的斑点免疫金定向渗滤法和传统斑点免疫金渗滤法的灵敏度分别为95%和40%；特异性均为100%。
实施例8 检测梅毒螺旋体抗体（间接抗体法）
试剂盒内容包括：重组梅毒螺旋体抗原包被的斑点免疫金定向渗滤卡片，梅毒阳性和阴性对照血清，20nm胶体金标记的羊抗人IgG抗体，以及PBS冲洗液。操作过程同实施例5。对20例梅毒血清和20例正常对照检测结果显示：本发明所述的斑点免疫金定向渗滤法和传统斑点免疫金渗滤法的灵敏度分别为95%和20%；特异性均为100%。
实施例9 检测流行性出血热病毒（Hantan virus）抗体
试剂盒内容包括：重组流行性出血热病毒包被的斑点免疫金定向渗滤卡片，流行性出血热病毒阳性和阴性对照血清，20nm胶体金标记的羊抗人IgG+IgM抗体，以及PBS冲洗液。操作过程同实施例5。对20例流行性出血热病毒血清和20例正常对照检测结果显示：本发明所述的斑点免疫金定向渗滤法和传统斑点免疫金渗滤的灵敏度分别为90%和15%；特异性均为100%。
实施例10 检测自身免疫性抗体
试剂盒内容包括：双链DNA、组蛋白、心磷脂、核仁抗原、着丝粒抗原、髓过氧化酶、蛋白激酶3、核蛋白、‘史密斯’抗原、Jo-1 抗原、Scl-70 抗原、SS-A/B抗原、甲状腺球蛋白、线粒体抗原、心肌抗原、平滑肌抗原、肾小球基底膜抗原、胶原I-IV、髓磷脂基本蛋白、蛋白脂质蛋白、髓磷脂鞘神经胶质细胞糖蛋白、以及类风湿因子和环瓜氨酸多肽（CCP）分别包被的斑点免疫金定向渗滤卡片，相关自身免疫性疾病对照血清和正常对照血清，20nm胶体金标记的羊抗人IgG抗体，以及PBS冲洗液。操作过程同实施例5。其中，对20例类风湿性关节炎血清和20例正常对照的抗CCP抗体检测结果显示：本发明所述的斑点免疫金定向渗滤法和传统斑点免疫金渗滤法的灵敏度分别为95%和30%；特异性均为100%。
实施例11 使用斑点免疫金定向渗滤卡片检测肿瘤标志物
试剂盒内容包括：癌抗原27.29（CA27.29）、癌胚抗原(CEA)、癌抗原19.9(CA19.9)、甲胎球蛋白(AFP)、绒毛膜促性腺激(b-hCG)、癌抗原125(CA125)、前列腺癌特异性抗原(PSA)特异性抗体分别包被的斑点免疫金定向渗滤卡片，相关肿瘤阳性和阴性对照血清，20nm胶体金标记的相关肿瘤标志物抗体，以及PBS冲洗液。操作过程同实施例5。其中，对20例PSA血清和20例正常对照检测结果显示：本发明所述的斑点免疫金定向渗滤法和传统斑点免疫金渗滤法的灵敏度分别为65%和10%；特异性均为100%。
实施例12 使用斑点免疫金定向渗滤卡片检测心脑血管疾病生物标志物
试剂盒内容包括：肌红蛋白、肌钙蛋白I、超敏-C反应蛋白、磷酸肌酸激酶MB和新型脂肪酸结合蛋白特异性抗体分别包被的斑点免疫金定向渗滤卡片，阳性和阴性对照血清，20nm胶体金标记的相关心脑血管疾病生物标志物抗体，以及PBS冲洗液。操作过程同实施例5。其中，对20例患者血清和20例正常对照的超敏-C反应蛋白检测结果显示：本发明所述的斑点免疫金定向渗滤法和传统斑点免疫金渗滤法的灵敏度分别为70%和15%；特异性均为100%。 
实施例13 检测食品中残留化学物质-三聚氰胺
试剂盒内容包括：兔抗三聚氰胺抗体包被的斑点免疫金定向渗滤卡片，阳性和阴性对照品，20nm胶体金标记的羊抗三聚氰胺抗体，以及PBS冲洗液。操作过程同实施例5。其中，对20阳性样品和20例正常样品的检测结果显示：本发明所述的斑点免疫金定向渗滤法和传统斑点免疫金渗滤法的灵敏度分别为100%和35%；特异性均为100%。
实施例14 检测家禽感染性疾病
试剂盒内容包括：灭活鸡禽流感病毒和鸡新城疫病毒抗原包被的斑点免疫金定向渗滤卡片，鸡禽流感血清、鸡新城疫血清和正常鸡血清对照品，20nm胶体金标记的羊抗鸡IgM和IgG抗体，以及PBS冲洗液。操作过程同实施例5。其中，对20鸡禽流感血清和20例正常血清样品的检测结果显示：本发明所述的斑点免疫金定向渗滤法和传统斑点免疫金渗滤法的灵敏度分别为90%和25%；特异性均为100%。
实施例15 检测家畜感染性疾病
试剂盒内容包括：灭活猪细小病毒、猪圆环病毒、猪口蹄疫、猪蓝耳病病毒抗原包被的斑点免疫金定向渗滤卡片，感染血清和正常血清对照品，20nm胶体金标记的羊抗猪IgM和IgG抗体，以及PBS冲洗液。操作过程同实施例5。其中，对20猪细小病毒感染血清和20例正常血清样品的检测结果显示：本发明所述的斑点免疫金定向渗滤法和传统斑点免疫金渗滤法的灵敏度分别为90%和20%；特异性均为100%。

Claims (14)

1.一种斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，包括斑点免疫金渗滤卡片，纳米胶体金或乳胶微球标记的检测探针，阴性和阳性标准品以及冲洗液，其特征在于该斑点免疫金渗滤卡片为斑点免疫金定向渗滤卡片，其能够使待测样本和胶体金标探针依次沿着包被探针覆盖的区域渗滤。
2.根据权利要求1所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，其特征在于：所述的斑点免疫金定向渗滤卡片从上到下由表层、微孔膜、渗滤限制层和吸水垫4层组成，表层为非吸水材料，中央有一开孔；微孔膜为一种与蛋白分子有亲和力的微孔膜，其上至少包被一种探针；渗滤限制层为非吸水材料，中央有一开孔，开孔与包被的探针相对应，形状匹配。
3.根据权利要求2所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，其特征在于：所述的斑点免疫金定向渗滤卡片渗滤限制层为PVC、PE、PP、PS、ABS塑料、双面胶或防水涂料制成。
4.根据权利要求1所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，其特征在于：所述的斑点免疫金定向渗滤卡片从上到下由表层、微孔膜和吸水垫3层组成，表层为非吸水材料，中央有一开孔；微孔膜为一种与蛋白分子有亲和力的微孔膜，微孔膜上至少包被一种探针；吸水垫中央设置有凹槽，凹槽的中心设置有与包被探针形状大小相匹配的突起，探针包被区域与吸水垫突起部分紧密接触，微孔膜其余部分与吸水垫非接触。
5.根据权利要求2或4所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，其特征在于：使用微量喷涂技术，将捕获探针固定在微孔膜中央成直径为2～3mm的圆斑或2×10mm2的条形。
6.根据权利要求2或4所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，其特征在于：所述的斑点免疫金定向渗滤卡片表层开孔为圆形或椭圆形，开孔直径8～12mm。
7.根据权利要求6所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，其特征在于：所述的斑点免疫金定向渗滤法卡片表层为PVC、PE、PP、PS、ABS塑料材料。
8.根据权利要求2或4所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，其特征在于：所述的斑点免疫金定向渗滤卡片的微孔膜为硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜或PVDF膜，孔径为0.2-5微米。
9.根据权利要求2或4所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，其特征在于：所述的吸水垫为2-3mm厚的吸水纸板、吸水纤维板、吸水棉垫、吸水性树脂或复合吸水材料。
10.根据权利要求1、2或4所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，其特征在于所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒还包括有与卡片表层开孔适配的漏斗状过滤膜，该过滤膜为孔径为0.2-0.45微米滤纸制成，吸附有抗凝剂，滤除样本中的有形成分。
11.根据权利要求1、2或4所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，其特征在于：所述的纳米胶体金或乳胶微球标记的检测探针是用10-40nm胶体金或乳胶微球连接的检测探针，探针包括抗原、半抗原、抗体、蛋白分子、多肽、核酸，这些标记探针在渗滤过程中与配体结合后聚集，呈现肉眼可见的颜色。
12.根据权利要求1、2或4所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒，其特征在于：所述的冲洗液为磷酸缓冲液，Tris-缓冲液，或含有Tween 20的缓冲液。
13.权利要求1、2或4所述的斑点免疫金定向渗滤检测法试剂盒在科研、食品安全和疾病诊断中的应用。
14.根据权利要求13所述用途，其特征在于：可检测抗原、半抗原、抗体、蛋白分子、多肽、核酸；可检测食品中的药物残留和化学物质残留；可检测多种疾病标志物：
感染性疾病包括：单纯泡疹病毒1/2、水痘病毒、EB病毒、巨细胞病毒、人类泡疹病毒-6/8；流感病毒A/B、付流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腺病毒、非典病毒、肝炎、脊髓灰质炎病毒、流行性乙脑病毒、出血热病毒、多价禽流感病毒、艾滋病毒1/2、狂犬病毒；脑膜炎球菌、布鲁氏菌、破伤风杆菌、梅毒、肺炎支原体、兔弓形体、百日咳杆菌、多价肺炎球菌、多价大肠杆菌、多价白喉杆菌、结核杆菌、伤寒杆菌、幽门螺旋体、血吸虫；
自身免疫性疾病包括：双链DNA、组蛋白、心磷脂、核仁抗原、着丝粒抗原、髓过氧化酶、蛋白激酶3、核蛋白、‘史密斯’抗原、Jo-1 抗原、Scl-70 抗原、SS-A/B抗原、甲状腺球蛋白、线粒体抗原、心肌抗原、平滑肌抗原、肾小球基底膜抗原、胶原I-IV、髓磷脂基本蛋白、蛋白脂质蛋白、髓磷脂神经胶质细胞糖蛋白、以及类风湿因子和环瓜氨酸多肽；
肿瘤标志物包括：癌抗原27.29、癌胚抗原、癌抗原19.9、甲胎球蛋白、绒毛膜促性腺激、癌抗原125 、抗-癌抗原27.29、前列腺癌特异性抗原；
心脑血管疾病包括：肌红蛋白、肌钙蛋白I、超敏-C反应蛋白、磷酸肌酸激酶MB、新型脂肪酸结合蛋白；
家禽家畜疾病包括：鸡禽流感病毒、鸡新城疫病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒、猪口蹄疫、猪蓝耳病病毒、伪狂犬病毒、犬细小病毒；
寄生虫病包括：猪蛔虫病、旋毛虫病、姜片吸虫病、囊尾虫病、肉孢子虫病、弓形虫病、棘头虫病；猪肺线虫病、猪鞭虫病、猪类圆线虫病、猪结节虫病、猪肾虫病、猪胃虫圆线虫病、牛焦虫病、牛球虫病、牛住肉孢子虫病、牛弓形虫病、牛胎毛滴虫病、牛囊尾蚴病、牛棘球蚴病、牛肝片形吸虫病、牛血吸虫病、羊肝片吸虫病、羊血吸虫病、羊前后盘吸虫病、羊双腔吸虫病、羊脑多头蚴病、羊棘球蚴病、羊细颈囊尾蚴病、羊胃肠线虫病、羊肺线虫病、羊绦虫病、羊血孢子虫病、羊球虫病、羊泰勒虫病；
疫苗效价测定包括：牛痘疫苗、脊髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗、腺病毒疫苗、黄热病疫苗、风疹疫苗、腮腺炎疫苗、甲型肝炎疫苗、流感疫苗、水痘疫苗、轮状病毒疫苗、乙型脑炎疫苗、狂犬病疫苗、流行性出血热疫苗、卡介苗、伤寒疫苗、斑疹伤寒疫苗、霍乱疫苗、布氏菌疫苗、炭疽疫苗、痢疾疫苗、百日咳疫苗、鼠疫疫苗、肺炎链球菌疫苗、沙门Vi多糖疫苗、脑膜炎球菌A/C疫苗、痢疾疫苗、百日咳疫苗、鼠疫疫苗、肺炎链球菌疫苗、沙门Vi多糖疫苗、脑膜炎球菌A/C疫苗、流感嗜血杆菌疫苗、白喉疫苗，SARS疫苗。
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Cited By (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102608321A (zh) * 2012-02-29 2012-07-25 厦门大学 多房棘球绦虫循环抗原斑点金免疫渗滤试剂盒及制备方法
CN102928589A (zh) * 2012-11-15 2013-02-13 南京凯基生物科技发展有限公司 呼吸道疾病IgG抗体的胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法
CN102998455A (zh) * 2012-02-14 2013-03-27 昂科生物医学技术(苏州)有限公司 一种检测或诊断前列腺癌的试剂盒
CN103048472A (zh) * 2011-10-14 2013-04-17 深圳太太基因工程有限公司 一种卵泡刺激素胶体金检测试剂盒的使用方法
CN103076455A (zh) * 2012-12-26 2013-05-01 上海奥普生物医药有限公司 快速定量检测血清淀粉样蛋白a试剂盒及其制备和应用
CN103123358A (zh) * 2012-07-23 2013-05-29 石河子大学 人畜布鲁氏菌抗体免疫层析试纸及其制备方法
CN103185789A (zh) * 2011-12-27 2013-07-03 深圳市爱速尔生物技术有限公司 Rv-adv抗原粪便快速检测仪
CN104165994A (zh) * 2014-08-11 2014-11-26 上海应用技术学院 一种血中tnni3k的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用
CN104165993A (zh) * 2014-08-11 2014-11-26 上海应用技术学院 一种血中tnni3k的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用
CN104198704A (zh) * 2014-09-02 2014-12-10 张明 一种百日咳诊断试剂盒及制备方法
CN104280548A (zh) * 2013-07-08 2015-01-14 电子科技大学 一种快速简易检测癌胚抗原的试剂盒以及试剂盒的制作和使用方法
CN104330576A (zh) * 2014-11-17 2015-02-04 中国人民解放军第三0五医院 一种心型脂肪酸结合蛋白检测试剂及其制备方法
CN104330575A (zh) * 2014-11-17 2015-02-04 中国人民解放军第三0五医院 一种肌钙蛋白i检测试剂及其制备方法
CN104330567A (zh) * 2014-08-11 2015-02-04 上海应用技术学院 一种血中tnni3k的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用
CN104483491A (zh) * 2014-12-19 2015-04-01 成都永安制药有限公司 结核分枝杆菌tb-sa抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法
CN105548541A (zh) * 2016-01-11 2016-05-04 王好玉 一种禽流感病毒检测试剂盒
CN106248959A (zh) * 2016-07-21 2016-12-21 首都医科大学附属北京佑安医院 一种检测血清岩藻糖蛋白的免疫渗滤方法及免疫渗滤装置
CN106596968A (zh) * 2016-08-23 2017-04-26 广东优尼德生物科技有限公司 一种检测尿微量白蛋白斑点金渗滤试剂盒及其应用
CN107422116A (zh) * 2017-04-28 2017-12-01 北京金豪制药股份有限公司 一种基于渗滤法的hiv‑1/2型确认与初筛二合一试剂及其制备方法
CN110702902A (zh) * 2019-11-04 2020-01-17 珠海丽珠试剂股份有限公司 试剂条及其使用方法
CN112485449A (zh) * 2020-11-23 2021-03-12 爱若维生物科技(苏州)有限公司 一种检测猫saa的斑点免疫金渗滤试剂盒及半定量检测方法
CN113009139A (zh) * 2021-02-26 2021-06-22 中牧实业股份有限公司 检测猪伪狂犬病毒抗原的酶联免疫试剂盒及其应用
CN113834929A (zh) * 2021-09-27 2021-12-24 山东康华生物医疗科技股份有限公司 一种用于过敏原检测的检测膜条、检测卡以及检测试剂盒
CN115950868A (zh) * 2022-12-26 2023-04-11 深圳市雷诺华科技实业有限公司 一种抗体-斑点法进行糖化白蛋白测定的测试装置及其测试方法

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014144002A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Drexel University Devices, methods, and kits for detecting an analyte in a sample
CN104407152B (zh) * 2014-11-27 2015-12-30 济南大学 一种双抗体单通道乙脑抗原免疫传感器的制备方法及应用
CN106635747A (zh) * 2017-02-15 2017-05-10 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 一种纸基微流控快速核酸提取装置
CN109374900B (zh) * 2018-09-25 2022-05-31 邱灵冰 基于检测卡的疫苗抗体检测方法
CN111875677A (zh) * 2020-07-07 2020-11-03 杭州傲锐生物医药科技有限公司 一种犬细小病毒vp2蛋白重组抗原、其编码基因及其表达和应用
CN112557652A (zh) * 2020-11-19 2021-03-26 安徽瀚海博兴生物技术有限公司 一种双抗体夹心法检测新型冠状病毒的胶体金试剂盒及制备方法
CN113512598B (zh) * 2020-12-07 2024-03-22 上海仁度生物科技股份有限公司 百日咳杆菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒及其专用引物和探针
CN113917134A (zh) * 2021-08-17 2022-01-11 东北农业大学 用于检测肝片形吸虫病抗体的免疫胶体金试纸条及其制备方法和应用
CN114638807B (zh) * 2022-03-22 2023-10-20 无锡雪浪数制科技有限公司 一种基于深度学习的金属板材表面缺陷检测方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1064550A (zh) * 1992-03-24 1992-09-16 祝加贝 一检多项新型膜式快速斑点免疫渗滤检测方法及装置
CN2213997Y (zh) * 1994-08-30 1995-11-29 徐兵 一步渗滤法斑点免疫检测器
WO1999061892A1 (en) * 1998-03-06 1999-12-02 Angelo Joseph P D Estimation of active infection by helicobacter pylori
CN201269877Y (zh) * 2008-04-03 2009-07-08 鲁东大学 多功能高通量免疫检测试剂盒

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS587332Y2 (ja) * 1978-06-06 1983-02-08 富士写真フイルム株式会社 多層血液化学分析材料
JP2665640B2 (ja) * 1991-07-22 1997-10-22 富士写真フイルム株式会社 乾式分析要素を用いた測定方法及び乾式分析要素
EP0535485B1 (en) * 1991-10-03 1997-07-16 Bayer Corporation Device and method of separating and assaying whole blood
EP0882224A4 (en) * 1996-02-22 1999-06-09 Dexall Biochemical Labs Inc LIQUID PHASE IMMUNOASSAY WITH NON-CAPTURED SUBSTRATE
CA2270797A1 (en) * 1998-07-27 2000-01-27 Bayer Corporation Transparent flow through membrane for dry reagent analytical devices
CN1866014B (zh) * 2006-05-19 2010-05-12 浙江省农业科学院 诊断猪囊虫病斑点金标免疫渗滤试剂盒其制备及应用方法
CN201464476U (zh) * 2009-08-05 2010-05-12 上海市疾病预防控制中心 斑点免疫金渗滤法血吸虫病抗体检测系统
CN201569658U (zh) * 2009-12-16 2010-09-01 郑州大学 旋毛虫病斑点免疫金渗滤法快速诊断试剂盒

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1064550A (zh) * 1992-03-24 1992-09-16 祝加贝 一检多项新型膜式快速斑点免疫渗滤检测方法及装置
CN2213997Y (zh) * 1994-08-30 1995-11-29 徐兵 一步渗滤法斑点免疫检测器
WO1999061892A1 (en) * 1998-03-06 1999-12-02 Angelo Joseph P D Estimation of active infection by helicobacter pylori
CN201269877Y (zh) * 2008-04-03 2009-07-08 鲁东大学 多功能高通量免疫检测试剂盒

Cited By (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103048472A (zh) * 2011-10-14 2013-04-17 深圳太太基因工程有限公司 一种卵泡刺激素胶体金检测试剂盒的使用方法
CN103185789A (zh) * 2011-12-27 2013-07-03 深圳市爱速尔生物技术有限公司 Rv-adv抗原粪便快速检测仪
CN102998455A (zh) * 2012-02-14 2013-03-27 昂科生物医学技术(苏州)有限公司 一种检测或诊断前列腺癌的试剂盒
CN102998455B (zh) * 2012-02-14 2016-01-13 昂科生物医学技术(苏州)有限公司 一种检测或诊断前列腺癌的试剂盒
CN102608321A (zh) * 2012-02-29 2012-07-25 厦门大学 多房棘球绦虫循环抗原斑点金免疫渗滤试剂盒及制备方法
CN103123358A (zh) * 2012-07-23 2013-05-29 石河子大学 人畜布鲁氏菌抗体免疫层析试纸及其制备方法
CN102928589A (zh) * 2012-11-15 2013-02-13 南京凯基生物科技发展有限公司 呼吸道疾病IgG抗体的胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法
CN103076455A (zh) * 2012-12-26 2013-05-01 上海奥普生物医药有限公司 快速定量检测血清淀粉样蛋白a试剂盒及其制备和应用
CN104280548A (zh) * 2013-07-08 2015-01-14 电子科技大学 一种快速简易检测癌胚抗原的试剂盒以及试剂盒的制作和使用方法
CN104165993A (zh) * 2014-08-11 2014-11-26 上海应用技术学院 一种血中tnni3k的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用
CN104330567A (zh) * 2014-08-11 2015-02-04 上海应用技术学院 一种血中tnni3k的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用
CN104165994A (zh) * 2014-08-11 2014-11-26 上海应用技术学院 一种血中tnni3k的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用
CN104198704A (zh) * 2014-09-02 2014-12-10 张明 一种百日咳诊断试剂盒及制备方法
CN104198704B (zh) * 2014-09-02 2015-11-11 张明 一种百日咳诊断试剂盒及制备方法
CN104330576A (zh) * 2014-11-17 2015-02-04 中国人民解放军第三0五医院 一种心型脂肪酸结合蛋白检测试剂及其制备方法
CN104330575A (zh) * 2014-11-17 2015-02-04 中国人民解放军第三0五医院 一种肌钙蛋白i检测试剂及其制备方法
CN104483491B (zh) * 2014-12-19 2016-08-17 成都永安制药有限公司 结核分枝杆菌tb-sa抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法
CN104483491A (zh) * 2014-12-19 2015-04-01 成都永安制药有限公司 结核分枝杆菌tb-sa抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法
CN105548541A (zh) * 2016-01-11 2016-05-04 王好玉 一种禽流感病毒检测试剂盒
WO2018014709A1 (zh) * 2016-07-21 2018-01-25 首都医科大学附属北京佑安医院 一种检测血清岩藻糖蛋白的免疫渗滤方法及免疫渗滤装置
CN106248959A (zh) * 2016-07-21 2016-12-21 首都医科大学附属北京佑安医院 一种检测血清岩藻糖蛋白的免疫渗滤方法及免疫渗滤装置
RU198108U1 (ru) * 2016-07-21 2020-06-18 Бэйцзин Юань Хоспитал, Кэпитал Медикал Юниверсити Иммунофильтрационное устройство для анализа фукозилированного гликопротеина в сыворотке крови
CN106248959B (zh) * 2016-07-21 2019-01-25 首都医科大学附属北京佑安医院 一种检测血清岩藻糖蛋白的免疫渗滤方法及免疫渗滤装置
CN106771144A (zh) * 2016-08-23 2017-05-31 广东优尼德生物科技有限公司 一种检测c‑反应蛋白斑点免疫金渗滤试剂盒及定量检测方法
CN106855573A (zh) * 2016-08-23 2017-06-16 广东优尼德生物科技有限公司 检测人前列腺特异性抗原斑点金渗滤试剂盒及其检测方法
CN106596968A (zh) * 2016-08-23 2017-04-26 广东优尼德生物科技有限公司 一种检测尿微量白蛋白斑点金渗滤试剂盒及其应用
CN107422116A (zh) * 2017-04-28 2017-12-01 北京金豪制药股份有限公司 一种基于渗滤法的hiv‑1/2型确认与初筛二合一试剂及其制备方法
CN107422116B (zh) * 2017-04-28 2019-08-27 北京金豪制药股份有限公司 一种基于渗滤法的hiv-1/2型确认与初筛二合一试剂及其制备方法
CN110702902A (zh) * 2019-11-04 2020-01-17 珠海丽珠试剂股份有限公司 试剂条及其使用方法
CN110702902B (zh) * 2019-11-04 2022-12-09 珠海丽珠试剂股份有限公司 试剂条及其使用方法
CN112485449A (zh) * 2020-11-23 2021-03-12 爱若维生物科技(苏州)有限公司 一种检测猫saa的斑点免疫金渗滤试剂盒及半定量检测方法
CN113009139A (zh) * 2021-02-26 2021-06-22 中牧实业股份有限公司 检测猪伪狂犬病毒抗原的酶联免疫试剂盒及其应用
CN113009139B (zh) * 2021-02-26 2022-07-29 中牧实业股份有限公司 检测猪伪狂犬病毒抗原的酶联免疫试剂盒及其应用
CN113834929A (zh) * 2021-09-27 2021-12-24 山东康华生物医疗科技股份有限公司 一种用于过敏原检测的检测膜条、检测卡以及检测试剂盒
CN115950868A (zh) * 2022-12-26 2023-04-11 深圳市雷诺华科技实业有限公司 一种抗体-斑点法进行糖化白蛋白测定的测试装置及其测试方法
CN115950868B (zh) * 2022-12-26 2024-02-13 深圳市雷诺华科技实业有限公司 一种抗体-斑点法进行糖化白蛋白测定的测试装置及其测试方法

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