CN102030788A - 一种莱鲍迪苷c的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种高纯度甜菊糖苷莱鲍迪苷RC的制备方法,属于食品添加剂技术领域。本发明以甜菊糖为原料,原料中莱鲍迪苷RC含量约为3-15%之间,利用重结晶和柱层析技术相结合,以甲醇溶解甜菊糖原料进行重结晶,于4℃搅拌结晶24-48小时,结晶母液减压回收溶剂得浓缩物,将浓缩物进行硅胶柱层析,条件为:固定相为200-300目硅胶,拌样硅胶为浓缩物质量的2.5倍,空白硅胶为浓缩物质量的20-50倍;二氯甲烷-乙醇(2:1)或二氯甲烷-乙醇(2:1)混合溶剂系统洗脱,其中乙醇中含水量为2%-10%。收集含莱鲍迪苷RC的主段洗脱液,合并,浓缩,干燥,检测,包装。使用本发明可以得到纯度95%以上的莱鲍迪苷C产品,工艺简单,适合工业化大规模生产。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,涉及一种莱鲍迪苷C(Rebaudioside C)的制备方法,具体涉及的是从甜菊糖中分离高纯度的莱鲍迪苷C的方法。
背景技术
甜菊糖中的甜味成分均属糖苷类。苷(glycoside或heteroside)亦称甙或配糖体杂糖体,是糖或糖的衍生物与另一非糖化合物,通过糖的端基碳原子连接缩合而成的化合物。苷水解后能生成糖和非糖两部分,其非糖部分称为苷元或配基,配糖基(agly-cone,genin),国外研究先后从甜菊叶提取物中分离出8种不同甜味成分:即甜菊糖苷(stevioside);莱鲍迪苷(renaudiside)A、B、C、D、E;杜尔可苷(dulcoside)A、B,这8种成分是以相同的双萜配基构成的配糖体,属于四环双萜化合物,它们在C-4位的α-羧基上连接一个葡萄糖,其次C-13位上连接有二糖或三糖。其中以在C-13上连接一个槐糖的甜菊糖苷(Stevioside简称Stv)和C-13上槐糖分子上又连一个葡萄糖分子的莱包迪甙A (RebaudiosideA 简称RebA )为主要。现已确定的甜菊甜味成分有6种:即甜菊苷;莱鲍迪苷A、D、C、E;杜尔可甙A。它们均属甙类化合物,具有相同甙元——甜菊醇(steviol)。它们之间的区别在于甙键上结合糖的种类数量和构成型式不同。甜叶菊糖不但对人体没有任何不良影响,相反,它还有降血压、强壮身体、治糠尿病等药用价值,它不但夺得了“甜味世界”的冠军,还被称作“时髦的甜味品”。其中瑞鲍迪甙A甜度最高口感最接近蔗糖,甜菊甙具有甜菊甙产品特有的甜味和清凉感,其他成分不仅甜度较低,而且还带有不同程度的苦涩味,虽然含量不高,但对产品的品质影响较大,特别是瑞鲍迪甙C苦涩味较重,严重影响了甜菊糖甙产品的口感和品质,成为生产厂家千方百计想要出去的成分。但是,正是这种具有苦涩味的物质蕴含着很多不为人知的潜在功效,成为科研开发的一个新方向,因其具有抗肿瘤、降血压、降血脂、减肥等功效,在日本被制成药品在临床上进行应用。我国作为一个甜菊甙产品的生产和出口大国,科研开发部门也在时刻关注瑞鲍迪苷C的发展动向,因其潜在的经济价值,国内外众多生产厂家也把目光聚焦到该产品上来,成为甜菊糖甙产品深加工的又一个新方向。
目前甜菊糖的生产厂家大多数都采用结晶的方法来获得高纯度的STV及RA,经美国学者研究发现,莱鲍迪苷C可以作为甜味增强剂进行应用并能显著降低蔗糖的使用量,作为替代糖源的莱鲍迪苷C越来越受到人们的关注。因此获得高纯度莱鲍迪苷C(Rebaudioside C)的制备工艺,是该领域科研人当前急待解决的课题之一。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以甜菊糖为原料制备高纯度莱鲍迪苷C分离工艺,从而获得了高纯度莱鲍迪苷C产品。
为实现上述目的本发明采用的实施方案如下:
一种高纯度莱鲍迪甙C的制备工艺,实施步骤如下:
以甜菊糖为原料,原料中RC的含量为3%-15%之间,采用重结晶及柱层析技术相结合,制备高纯度的莱鲍迪苷C产品;其步骤如下:
1)将甜菊糖用甲醇于40℃水浴中加热溶解进行重结晶,甲醇的体积用量为干燥物质量的8~12倍;
2)将结晶后的母液进行硅胶柱层析,柱层析条件如下:拌样硅胶用量为母液质量的2.5倍量,空白硅胶用量为母液质量的20-50倍量,洗脱剂为三氯甲烷或二氯甲烷与含水乙醇的混合溶剂,以薄层板进行监测,薄层条件为:展开剂为正丁醇-冰醋酸-乙醚-水,固定相为GF254硅胶,显色剂为50%硫酸-水溶液;
3)根据薄层检识结果,将莱鲍迪苷C主段合并,减压浓缩,干燥,检测,得到高纯度莱鲍迪苷C(Rebaudioside C,RC)。
所述的甜菊糖中莱鲍迪苷C的含量为3%-15%。
所述的含水乙醇中其中乙醇含水量为2%-10%。
所述的混合溶剂选自三氯甲烷- 92%乙醇、三氯甲烷-92%乙醇、三氯甲烷-95%乙醇、二氯甲烷-95%乙醇、二氯甲烷-98%乙醇、二氯甲烷-90%乙醇。
所述的混合溶剂的比例为:氯仿或二氯甲烷:含水乙醇=2:1~4 : 1。
本发明采用了一种重结晶与柱层析技术相结合的方法制备了莱鲍迪苷C,该方法简便易行,适合工业化生产,且能提高产物的纯度。
附图说明
图1为工艺流程图;
图2 RC对照品;
图3 实施例1附图;
图4实施例 2附图;
图5实施例 3附图;
图6实施例 4附图;
图7实施例 5附图;
图8实施例 6附图。
具体实施方式
实施例一
取甜菊糖3Kg(RC含量为3.5%,RA含量为38%,ST含量为33.58%),加入30L甲醇溶解,于40℃加热溶解,降至室温后,置于4℃水浴中搅拌结晶24小时,过滤,将结晶母液减压回收溶剂得浓缩物1.52Kg,备用;
取20Kg硅胶(200-300目),加入三氯甲烷- 92%乙醇(4:1)混合溶剂,充分排除气泡,装入直径273mm、高1.5m的层析柱中;另取1.0Kg浓缩物,加入适量乙醇溶解,拌入2.5Kg200-300目硅胶,于45℃烘箱干燥24小时;将拌好样品的硅胶装入层析柱中,以三氯甲烷-92%乙醇(4:1)混合溶剂进行洗脱,10L/份收集洗脱液,采用薄层监测,薄层条件为:展开剂为正丁醇-冰醋酸-乙醚-水,固定相为GF254硅胶,显色剂为50%硫酸-水溶液。根据薄层检测结果进行合并,得莱鲍迪苷C主段洗脱液,减压回收溶剂得浓缩物,干燥,经检测莱鲍迪苷C的纯度为97.29%,包装,得莱鲍迪苷C113.2g;
实施例二
取甜菊糖3Kg((RC含量为3.5%,RA含量为38%,ST含量为33.58%),加入24L甲醇溶解,于40℃加热溶解,降至室温后,置于4℃水浴中搅拌结晶36小时,过滤,将结晶母液减压回收溶剂得浓缩物1.56Kg,备用;
取25Kg硅胶(200-300目),加入三氯甲烷-92%乙醇(4:1)混合溶剂,充分排除气泡,装入直径273mm、高1.5m的层析柱中;另取1.0Kg浓缩物,加入适量乙醇溶解,拌入2.5Kg200-300目硅胶,于45℃烘箱干燥24小时;将拌好样品的硅胶装入层析柱中,以三氯甲烷-92%乙醇(4:1)混合溶剂进行洗脱,10L/份收集洗脱液,采用薄层监测,薄层条件为:展开剂为正丁醇-冰醋酸-乙醚-水,固定相为GF254硅胶,显色剂为50%硫酸-水溶液。根据薄层检测结果进行合并,得莱鲍迪苷C主段洗脱液,减压回收溶剂得浓缩物,干燥,经检测莱鲍迪苷C的纯度为96.76%,包装,得莱鲍迪苷C115.4g;
实施例三
取甜菊糖3Kg(RC含量为10.80%,RA含量为37.14%,ST含量为35.53%),加入36L甲醇溶解,于40℃加热溶解,降至室温后,置于4℃水浴中搅拌结晶48小时,过滤,将结晶母液减压回收溶剂得浓缩物1.54Kg,备用;
取30Kg 硅胶(200-300目),加入三氯甲烷-95%乙醇(3:1)混合溶剂,充分排除气泡,装入直径273mm、高1.5m的层析柱中;另取1.0Kg浓缩物,加入适量乙醇溶解,拌入2.5Kg200-300目硅胶,于45℃烘箱干燥24小时;将拌好样品的硅胶装入层析柱中,以三氯甲烷-95%乙醇(3:1)混合溶剂进行洗脱,10L/份收集洗脱液,采用薄层监测,薄层条件为:展开剂为正丁醇-冰醋酸-乙醚-水,固定相为GF254硅胶,显色剂为50%硫酸-水溶液。根据薄层检测结果进行合并,得莱鲍迪苷C主段洗脱液,减压回收溶剂得浓缩物,干燥,经检测莱鲍迪苷C的纯度为97.52%,包装,得莱鲍迪苷C114.5g;
实施例四
取甜菊糖3Kg(RC含量为10.80%,RA含量为37.14%,ST含量为35.53%),加入30L甲醇溶解,于40℃加热溶解,降至室温后,置于4℃水浴中搅拌结晶36小时,过滤,将结晶母液减压回收溶剂得浓缩物1.55Kg,备用;
取50Kg 硅胶(200-300目),加入二氯甲烷-95%乙醇(3:1)混合溶剂,充分排除气泡,装入直径273mm、高1.5m的层析柱中;另取1.0Kg浓缩物,加入适量乙醇溶解,拌入2.5Kg200-300目硅胶,于45℃烘箱干燥24小时;将拌好样品的硅胶装入层析柱中,以二氯甲烷-95%乙醇(3:1)混合溶剂进行洗脱,10L/份收集洗脱液,采用薄层监测,薄层条件为:展开剂为正丁醇-冰醋酸-乙醚-水,固定相为GF254硅胶,显色剂为50%硫酸-水溶液。根据薄层检测结果进行合并,得莱鲍迪苷C主段洗脱液,减压回收溶剂得浓缩物,干燥,经检测莱鲍迪苷C的纯度为96.31%,包装,得莱鲍迪苷C110.5g;
实施例五
取甜菊糖3Kg(RC含量为4.97%,ST含量为38.81%,RA含量为42.04%),加入30L甲醇溶解,于40℃加热溶解,降至室温后,置于4℃水浴中搅拌结晶36小时,过滤,将结晶母液减压回收溶剂得浓缩物1.61Kg,备用;
取25Kg 硅胶(200-300目),加入二氯甲烷-98%乙醇(2:1)混合溶剂,充分排除气泡,装入直径273mm、高1.5m的层析柱中;另取1.0Kg浓缩物,加入适量乙醇溶解,拌入2.5Kg200-300目硅胶,于45℃烘箱干燥24小时;将拌好样品的硅胶装入层析柱中,以二氯甲烷-98%乙醇(2:1)混合溶剂进行洗脱,10L/份收集洗脱液,采用薄层监测,薄层条件为:展开剂为正丁醇-冰醋酸-乙醚-水,固定相为GF254硅胶,显色剂为50%硫酸-水溶液。根据薄层检测结果进行合并,得莱鲍迪苷C主段洗脱液,减压回收溶剂得浓缩物,干燥,经检测莱鲍迪苷C的纯度为96.51%,包装,得莱鲍迪苷C112.5g;
实施例六
取甜菊糖3Kg(RC含量为4.97%,ST含量为38.81%,RA含量为42.04%),加入30L甲醇溶解,于40℃加热溶解,降至室温后,置于4℃水浴中搅拌结晶36小时,过滤,将结晶母液减压回收溶剂得浓缩物1.52Kg,备用;
取25Kg 硅胶(200-300目),加入二氯甲烷-98%乙醇(2:1)混合溶剂,充分排除气泡,装入直径273mm、高1.5m的层析柱中;另取1.0Kg浓缩物,加入适量乙醇溶解,拌入2.5Kg200-300目硅胶,于45℃烘箱干燥24小时;将拌好样品的硅胶装入层析柱中,以二氯甲烷-98%乙醇(2:1)混合溶剂进行洗脱,10L/份收集洗脱液,采用薄层监测,薄层条件为:展开剂为正丁醇-冰醋酸-乙醚-水,固定相为GF254硅胶,显色剂为50%硫酸-水溶液。根据薄层检测结果进行合并,得莱鲍迪苷C主段洗脱液,减压回收溶剂得浓缩物,干燥,经检测莱鲍迪苷C的纯度为97.34%,包装,得莱鲍迪苷C113.7g。
Claims (6)
1.一种莱鲍迪苷C的制备方法,其特征在于,采用重结晶及柱层析技术相结合,其步骤如下:
1)将甜菊糖原料用甲醇于40℃水浴中加热溶解进行重结晶,甲醇的体积用量为干燥物质量的8~12倍;
2)将结晶后的母液进行硅胶柱层析,柱层析条件如下:拌样硅胶用量为母液质量的2.5倍量,空白硅胶用量为母液质量的20-50倍量,洗脱剂为三氯甲烷或二氯甲烷与含水乙醇的混合溶剂,以薄层板进行监测,薄层条件为:展开剂为正丁醇-冰醋酸-乙醚-水,固定相为GF254硅胶,显色剂为50%硫酸-水溶液;
3)根据薄层检识结果,将莱鲍迪苷C主段合并,减压浓缩,干燥,检测,得到高纯度莱鲍迪苷C。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的甜菊糖中莱鲍迪苷C的含量为3%-15%。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的含水乙醇中其中乙醇含水量为2%-10%。
4. 根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的混合溶剂选自三氯甲烷- 92%乙醇、三氯甲烷-92%乙醇、三氯甲烷-95%乙醇、二氯甲烷-95%乙醇、二氯甲烷-98%乙醇、二氯甲烷-90%乙醇。
5. 根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的混合溶剂的比例为:氯仿或二氯甲烷:含水乙醇=2:1~ 4 : 1。
6. 根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,其步骤如下:
A:重结晶:取甜菊糖,加入甲醇于40℃加热溶解,降至室温后,置于4℃水浴中搅拌结晶24-48小时,过滤,将结晶母液减压回收溶剂的浓缩物,备用;
B:层析分离:取200-300目硅胶,加入三氯甲烷或二氯甲烷与含水乙醇的混合溶剂,充分排除气泡,装入层析柱中;取浓缩物,加入乙醇溶解,拌入200-300目硅胶,于45℃烘箱干燥24小时;将拌好样品的硅胶装入层析柱中,以三氯甲烷或二氯甲烷与含水乙醇2:1~4:1的混合溶剂进行洗脱,收集洗脱液,根据薄层检测结果进行合并,得莱鲍迪甙C主段洗脱液,减压回收溶剂得浓缩物,干燥,经检测莱鲍迪甙C的纯度为95%以上。
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