CN101993485A - 促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的制备方法及其用途。促胰岛素分泌肽类似物通过C末端的半胱氨酸残基形成由二硫键或者聚乙二醇偶联而成的二聚体，有降低血糖和促进胰岛素分泌的功能，可作为一种糖尿病的治疗药物。

Description

促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体及其用途
技术领域
本发明涉及促胰岛素分泌肽同源二聚体的制备及用途，属于生物技术及药物领域。
背景技术
胰高血糖素类似肽(Glucagon-like peptide，GLP)是人体分泌的一种肠道激素，由胰高血糖素原分子经肠道蛋白水解酶裂解而成，产生二种胰高血糖素类似肽GLP-1和GLP-2。其中GLP-1有二种活性形成，即GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)酰胺形式，在体内具有相同的促进胰岛素分泌的作用，故又称促胰岛素分泌肽(Incretin或Insulinotropic peptide)(Negar Sadrzadeh et.al.，Pharmaceutical Sciences，Vol.96，1925-1954(2007))。
Exendin-4是在毒蜥的唾液分泌物中发现的蛋白多肽，由39个氨基酸组成。其氨基酸序列与GLP家族中数个成员有序列的相似性，其中与GLP-1(7-36)有53％的同源性(Eng J et.al.，J Biol Chem，1992，267：7402-7405)。作为一种GLP-1R的强激动剂，Exendin-4同样在体内外被证实促进胰岛素的分泌，因此也可以称为一种促胰岛素分泌肽。GLP-1(7-36)和Exendin-4的氨基酸序列如下：
GLP-1(7-36)：
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
Exendin-4：
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
Ser GlyAla Pro Pro Pro Ser
由于Exendin-4的第二位氨基酸Gly不同于GLP-1的Ala，可以有效抵抗二肽酰基肽酶IV的降解。此外，Exendin-4的C末端中多出的(PSSGAPPS)氨基酸序列，除可防止肽链内切酶降解外，尚可增强与GLP-1受体的亲和力。因此，Exendin-4在体内的降血糖能力比GLP-1强千倍左右。针对Exendin-4的改进而成的新型类似物众多，如在C末端增加5个KKKKK的类似物ZP10(Petersen JS，Diabetologia，2002，45：A147)：将其20位的Lys替换成Arg或His，25位的Trp替换Phe，将其14位Met替换成Leu或Ile。将Exendin-4从C末端缺失形成Exendin-4(1-28)或Exendin-4(1-30)以及相应的酰胺形式(
Figure B200910104650XD0000021
T，DiabetesCare，2007，30：1608-1610.)。
GLP-1(7-36)和Exendin-4通过上述的序列改造，包括一个或多个氨基酸替换，或者C末端的氨基酸缺失或添加成截短的或延长的类似物。
GLP(7-36)和Exendin-4在体内半衰期分别为2min和2小时左右，为实现延长体内半衰期的目的，众多公开文献和专利报了将其与人血白蛋白、人Ig的Fc片段，转铁蛋白等的融合形式(如GLP-1-HSA，GLP-1-Fc，GLP-1-Transferrin，Exendin4-HAS，Exendin4-Fc等)(US7271149，US 2007/0036806 A1，US 2007/0060512 A1，US 2006/0293232 A1，US2007/0161087A1)。该类融合形式的GLP-1或Exendin-4主要通过基因工程重组技术表达和制备而实现，其表达宿主包括大肠杆菌、酵母和哺乳动物细胞(Xiaopu Yin，et.al.，Protein Expression and Purification 41(2005)259-265；Jin Zhou，et.ai.，Biotechnol Lett(2008)30：651-656；FehmannHC，et.al.，Peptides.1994；15(3)：453-456)。
在另外的公开文献和专利中报道由PEG修饰的GLP-1或Exendin-4的偶联物，主要偶联位点位于Lys上的氨基或C末端的COOH上(US 6284727，US9/561,226)。同样实现延长体内半衰期的目的。
通过体外对GLP-1的脂肪链化学修饰(如Liraglutide)，或通过专一的氨基酸(Lys34)化学链修饰(如CJC-1131)，形成体内与白蛋白的结合，实现每日给药一次(半衰期达11-15hr)的目的(Kim，JG，Diabetes，2003Mar；52(3)：751-759)。
GLP-1和Exendin-4除了采用化学固相肽合成制备外，采用重组DNA的方法进行重组表达制备也有相应的文献和专利报道。如在大肠杆菌中重组表达(Xiaopu Yin，et.al.，ProteinExpression and Purification 41(2005)259-265)，在Pichia酵母中重组表达(JinZhou，et.ai.，Biotechnol Lett(2008)30：651-656)。此外，有将Exendin-4用串联的方式表达形成二聚体的报道(Lina Yin，et.al.，Protein&Peptide Letters，2006，13，823-827)。
GLP-1或Exendin-4具有多重的生物作用，主要包括：(1)与胰岛β细胞作用后，促进胰岛素的分泌和释放；(2)抑制胰岛α细胞的胰岛血糖素释放，促进糖原合成；(3)提高胰岛素的敏感性和糖耐量；(4)改善胰岛β细胞的功能，促进其增殖防止凋亡；(5)降低胃排空的速度；(6)抑制食欲和降低能量摄取量。因此，Exendin-4(商品名Byatta)和Liraglutide已被批准作为治疗II型糖尿病的多肽药物，相关的研究已成为该领域的热点。
本发明提供了一种衍生于GLP-1或Exendin-4的促胰岛素分泌类似肽的同源二聚体，该同源二聚体通过位于C末端的半胱氨酸巯基还原共价而成。本发明人经研究发现，同源二聚体形式的促胰岛素分泌类似肽具有更好的体内稳定性和生物活性，并可实现体内血液中半衰期的延长。可作为一种新型治疗糖尿病的药物或药物组合物。
发明内容：
本发明的目的是提供一类促胰岛素分泌肽类似物的同源二聚体，以及实现同源二聚体的制备方法，可用于制备降血糖的药物。
本发明中促胰岛素分泌肽类似物的氨基酸序列具有以下特征，分别衍生于GLP-1和Exendin-4。
序列SEQ ID NO：1(GLP-1(Gly87-34)的衍生物)：
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala
Trp Leu Val Lys Xaa Cys-OH(或NH2)
序列SEQ ID NO：2(Exendin-4(1-28)的衍生物)：
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Len Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile
Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys-OH(或NH2)
其中的Xaa特征为：
A：(GlyGlySer)n，或(GlyGlyPro)n，其中n是1至5的整数；
B：(Gly)n，或(Gly)n Ser，其中n是4至20的整数；
C：A或B的任意组合。
此外，技术人员可按本领域常规方法设计Xaa序列，而不影响本专利的实现。
本发明提供的促胰岛素分泌肽类似物序列SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的特征是C末端氨基酸残基是半胱氨酸。
本发明提供的促胰岛素分泌肽类似物序列SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的另一特征是C末端可以是酰胺化形式。
促胰岛素分泌肽类似物除SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的序列外，还包含由此经一个或多个氨基酸替换、缺失或添加而成的衍生物，与SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2序列具有50％同源性并保留了促胰岛素分泌和降血糖作用的类似肽。促胰岛素分泌肽类似物可以是酰胺化形式。
本发明的另一目的提供制备促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的制备方法和实施过程。通过类似物多肽C末端的半胱氨酸上的游离巯基(或称硫代基团)在一定反应条件下还原成二硫键而成。
本发明实施的另一方案是通过双活化的聚乙二醇分子作为偶联物，与类似物多肽C末端的游离巯基在一定反应条件下还原成共价的聚乙二醇偶联同源二聚体，具以下特征：
GLP-1-Cys-PEG-Cys--GLP-1或Exendin4-Cys-PEG-Cys-Exendin4。
双活化的聚乙二醇分子(PEG)包括双活化的马莱酸PEG，特征为MAL-PEG-MAL；或包括双活化的巯基PEG，特征为SH-PEG-SH。或包括双活化的邻二硫吡啶(ortho-pyridyldisulfite)PEG，特征为OPSS-PEG-OPSS。
用于本发明中促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的聚乙二醇分子可是小分子或是大分子，分子量范围从500至40,000道尔顿。通过分子量大于5000的PEG分子作为二聚体偶联物可实现将促胰岛素分泌肽类似物二聚体在体内半衰期的显著延长。优选的PEG分子大小是10KD-40KD之间。
本发明的另一目的是提供了用于制备促胰岛素分泌肽类似物的化学固相合成或重组DNA技术的方法。重组DNA技术指应用表达载体插入编码促胰岛素分泌肽类似物cDNA基因片段后，转化宿主细胞。再经发酵或培养，纯化制备相对应重组多肽的技术过程。
本发明的另一目的，提供了分离和纯化促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的方法，包括众所周知的离子交换色谱、亲和色谱、疏水层析以及反相层析色谱、分子排阻色谱和超滤等技术手段。
本发明的另一目的，提供了促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的促胰岛分泌作用以及降血糖的作用，可作为治疗糖尿病或高血糖相关的代谢综合症的药物或药物组合物。
作为一种药物组合物，它包括药学上可接受的载体或赋形剂或稀释剂，以及有效剂量的本发明所述的同源二聚体多肽。
本发明中所用“同源二聚体”，是指通过共价结合键将氨基酸序列和组成完全相同的促胰岛素分泌肽类似物在C末端共价结合而形成的二聚体。
本发明中所用“聚乙二醇偶联”，是指由不同大小分子量的聚乙二醇在二端分别与一个促胰岛素分泌肽类似物的C末端共价相连而成的聚乙二醇化同源二聚体。
本发明中所用“宿主细胞”，是指大肠杆菌或酵母。
本发明中所用“表达载体”，是指含有表达启动子包括T7、Tac、Trp、lac的大肠杆菌表达载体，或含有α分泌因子以及AOX或GAP表达启动子的酵母表达载体。
至此已对本发明进行了详细的描述，通过参考下列实例，能够对本发明有更清晰的理解。
说明书附图说明：
附图1：源于GLP-1(Gly87-34)的促胰岛素分泌肽类似物氨基酸序列(SEQ ID NO：1)和源于Exendin-4(1-28)的促胰岛素分泌肽类似物氨基酸序列(SEQ ID NO：2)的序列比较。
附图2：Ex4C的氨基酸序列(SEQ ID NO：3)和GLP-G8C的氨基酸序列(SEQ ID NO：4)的序列比较。
附图3：Ex4C-PEG35K-Ex4C的SDS-PAGE电泳(A)和RP-HPLC(B)。
附图4：Ex4C和Ex4C-Ex4C的RP-HPLC分析比较，其中A图为Ex4C单体，B图为Ex4C-Ex4C同源二聚体。
附图5：Ex4C-PEG5k-Ex4C，Ex4C-PEG35k-ExC、Ex4C-Ex4C和Exendin-4(WT)在小鼠体内的降血糖实验结果。
附图6：Ex4C-PEG5k-Ex4C，Ex4C-PEG35k-Ex4C和Ex4C-Ex4C和Exendin-4(WT)在小鼠体内的促胰岛素分泌作用实验结果。
下述实例仅为说明目的而并不旨在对本发明的限制。
具体实施方式
实例1、Ex4C和GLP-G8C的化学固相合成
Ex4C和GLP-G8C的氨基酸序列如下：
Ex4C(SEQ IDNO：3)：
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Len Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe
Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Ser Gly Gly Ser Cys
GLP-G8C(SEQ ID NO：4)：
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe
Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly Gly Ser Cys
当C末端为羧基时，选择王树脂进行二种多肽的化学固相合成。合成结束后，将得到的侧链保护基的多肽树脂进行裂解，Ex4C或GLP-G8C的C末端从树脂上断裂下来形成羧基。当多肽C末端为酰胺时，选择Fmoc-PAL-PEG-PS树脂进行二种多肽的化学固相合成。合成结束后，将得到的侧链保护基的多肽树脂进行裂解，Ex4C或GLP-G8C的C末端从树脂上断裂下来形成酰胺。
以上固相合成是在ABI公司的多肽合成仪上进行。首先将C末端的半胱氨酸连接树脂，然后一个一个的氨基酸从C端向N端进行。待合成结束后，脱保护基和从树脂上断裂后，用反向HPLC层析(Waters公司，C18制备柱)对Ex4C或GLP-G8C多肽进行纯化。纯化条件为A相含0.5％(V/V)乙酸的水溶液，B相为含80％乙腈和0.5％(V/V)乙酸的水溶液，0-100％B液梯度洗脱。收集目的多肽，经冻干成干粉。经质谱分析，Ex4C-NH2的分子量为4019.39，GLP-G8C-NH2的分子量为3521.87，与理论值一致。
实例2、Ex4C在大肠杆菌中的重组制备
根据实例1中Ex4C的氨基酸序列(SEQ ID NO：3)，采用大肠杆菌偏爱密码子设计其cDNA序列，由大连宝生物公司全基因人工合成。
Ex4C的cDNA序列(SEQ ID NO：5)
ggtaccgacg acgacgacaa gcatggcgaa ggcaccttta ccagcgatct gagcaaacag    60
atggaagaag aagcggtgcg tctgtttatt gaatggctga aaaatggcgg cagcggcggc    120
agctgctagg aattc                                                     135
将合成的cDNA片段(插入pMD-18质粒中)，用KPN I和EcoRI双酶切后回收，将pET32a(NOVAGEN公司)质粒同样双酶切后回收大片段。在T4连接酶作用下，将Ex4C基因片段和pET32a片段连接后转化DH5α菌。筛选出含插入Ex4C基因的重组质粒命名为pET32a-Ex4C。再用CaCl2法转化表达宿主菌BL21(DE3-plys)中。经0.5mMol/LIPTG诱导表达产生TRX-EK-Ex4C的融合蛋白。融合蛋白经Ni-Sepharose层析纯化后，用肠激酶酶切除去TRX(硫还氧蛋白)，重组Ex4C用C18反相柱纯化回收，再冻干成干粉。
实例3、Ex4C-Ex4C同源二聚体的制备
将实例1制备的纯度大于98％的Ex4C(NH2)多肽，溶于50mMol/LTris-Cl(pH8.5)缓冲中，多肽终浓度为1～2.0mg/ml。在4℃反应过夜或室温反应4-6小时，通过RP-HPLC分析90％的Ex4C形成二聚体，即Ex4C-Ex4C。加入1％的TFA终止反应，用C18柱纯化分离二聚体。Ex4C-Ex4C经冻干后成干粉保存，质谱测定分子量为8036.68，与理论值一致。
实例4、GLP-G8C同源二聚体的制备
将实例1制备的纯度大于98％的GLP-G8C多肽，溶于50mMol/L Tris-Cl 1(pH8.5)缓冲中，多肽终浓度为1～2.0mg/ml。在4℃反应过夜或室温反应4-6小时，通过RP-HPLC分析90％的GLP-G8C形成二聚体，即Di-GLP-G8C。加入1％的TFA终止反应，用C18柱纯化分离二聚体。Di-GLP-G8C经冻干后成干粉保存。
实例5、Ex4C-PEG5K-Ex4C二聚体的制备
将SH-PEG5K-SH(北京健凯公司)按20.0mg/ml溶于100mMol/L磷酸钠缓冲中(pH6.5)，室温或4℃搅拌条件下，逐渐加入Ex4C多肽至两者的摩尔浓度达到PEG5K∶Ex4C为1∶2～4。反应4-12小时后，用RP-HPLC经ESD(蒸发光)检测PEG偶联二聚体达到85％以上。加入1％的TFA终止反应，用C18柱纯化分离除去未修饰的Ex4C和PEG修饰的单链PEG5K-Ex4C，纯化后的二聚体Ex4C-PEG5K-Ex4C冻干成干粉保存。
实例6、Ex4C-PEG35K-Ex4C二聚体的制备
将MAL-PEG35K-MAL(北京健凯公司)按20.0mg/ml溶于100mMol/L磷酸钠缓冲中(pH6.5)，室温或4℃搅拌条件下，逐渐加入Ex4C多肽至两者的摩尔浓度达到PEG35K∶Ex4C为1∶2～4。反应4-12小时后，用RP-HPLC经ESD(蒸发光)检测PEG偶联二聚体达到85％以上。加入1％的TFA终止反应，用C18柱纯化分离除去未修饰的Ex4C和PEG修饰的单链PEG35K-Ex4C，纯化后的二聚体Ex4C-PEG35K-Ex4C冻干成干粉保存。
实例7、四种不同大小的促胰岛素分泌肽类似物二聚体在小鼠体内降血糖作用
取Balb/c小鼠(重庆医科大学试验动物中心)，体重20-25克，每组10只，分成6组，禁食过夜。对照组为生理盐水组，实验组为Exendin-4(成都迅捷公司)组、Ex4C-Ex4C组、Di-GLP-G8C组、Ex4C-PEG5K-Ex4C组和Ex4C-PEG35K-Ex4C组，每组样品用10mMol/L磷酸钠缓冲(pH6.5)溶解配成相同摩尔浓度即10nMol/L。分别按每只小鼠腹腔注射100μl各组药物，同时腹腔注射40％的葡萄糖溶液200μl。于注射后30、60、120、180分钟取血测定血糖(LifeScan，Inc血糖仪测定)。于给药后24小时、48小时、72小时和96小时，再分别腹腔注射40％的葡萄糖溶液200μl，给予葡萄糖后30、60分钟取血测定血糖(LifeScan，Inc血糖仪测定)。
实验结果见图5。结果证明同源二聚体(Ex4C-Ex4C和Di-GLP-G8C)给药后3小时依然具有明显降血糖作用，24小时后无降血糖作用；而Ex4C-PEG5K-Ex4C和Ex4C-PEG35K-Ex4C二聚体可维持降血糖作用，分别达到24小时和96小时。
实例8、四种不同分子量大小的促胰岛素分泌肽类似物二聚体体内促胰岛素分泌作用
取Balb/c小鼠(重庆医科大学试验动物中心)，体重20-25克，每组10只，分成6组，禁食过夜。对照组为生理盐水组，实验组为Exendin-4组、Ex4C-Ex4C组、Di-GLP-G8C组、Ex4C-PEG5K-Ex4C组和Ex4C-PEG35K-Ex4C组，每组样品用10mMol/L磷酸钠缓冲(pH6.5)溶解配成相同摩尔浓度即10mMol/L，分别按每只小鼠腹腔注射100μl各组药物。
测定方法：每组动物腹腔注射40％的葡萄糖溶液100μl后，同时给予注射相同体积各组药物。于注射后10和30分钟取血20μl(眼眶取血)，加入20μl 1％的EDTA离心管中，离心取血清用胰岛素测定试剂盒(北方同位素公司)测定血中胰岛素水平。
从图6中可清晰证明四种不同分子量大小的促胰岛素分泌肽类似物二聚体在给药后的10分钟内可明显促进小鼠体内胰岛素的分泌肽。
序列表
<110>重庆富进生物医药有限公司
<120>促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体及其用途
<160>5
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>30
<212>PRT
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221>xaa
<222>(29)..(29)
<223>Xaa can be(GlyGlySer)n，(GlyGlyPro)n，(Gly)n
or(Gly)nSer，
<400>1
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Cys
            20                  25                  30
<210>2
<211>30
<212>PRT
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221>xaa
<222>(29)..(29)
<223>Xaa can be(GlyGlySer)n，(GlyGlyPro)n，(Gly)n
or(Gly)nSer
<400>2
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys
            20                  25                  30
<210>3
<211>35
<212>PRT
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>3
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1               5                   10                 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Ser Gly
            20                  25                  30
Gly Ser Cys
        35
<210>4
<211>35
<212>PRT
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>4
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
            20                  25                  30
Gly Ser Cys
        35
<210>5
<211>135
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221>Other information
<222>(1)..(135)
<223>Systhetic cDNA for Ex4C
<400>5
ggtaccgacg acgacgacaa gcatggcgaa ggcaccttta ccagcgatct gagcaaacag    60
atggaagaag aagcggtgcg tctgtttatt gaatggctga aaaatggcgg cagcggcggc    120
agctgctagg aattc                                                     135

Claims (15)

1.促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体其特征是，通过在促胰岛素分泌肽类似物的羧基末端半胱氨酸残基共价而成的同源二聚体。
2.根据权利要求1中促胰岛素分泌肽类似物指C末端是半胱氨酸残基的具有促进体内胰岛素分泌的蛋白多肽，特征序列是：SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。
3.根据权利要求2中SEQIDNO：1的序列特征为：
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala
Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Cys-OH(或NH2)。
4.根据权利要求2中SEQIDNO：2的序列特征为：
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Len Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala
Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys-OH(或NH2)。
5.根据权利要求3，4中任一项Xaa的特征为：
A：(GlyGlySer)n，或(GlyGlyPro)n，其中n是1至5的整数；
B：(Gly)n，或(Gly)n Ser，其中n是4至20的整数；
C：A或B的任意组合。
6.根据权利要求1，2任一项所述促胰岛素分泌肽类似物，可以是C末端的酰胺化形式。
7.根据权利要求1，2，6任一项所述促胰岛素分泌肽类似物，其特征在于，所述促胰岛素分泌肽类似物除SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的序列外，还包含由此经一个或多个氨基酸残基替换、缺失或添加而成的衍生物，与SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2序列具有50％同源性并保留了促胰岛素分泌和降血糖作用的类似肽。
8.促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的特征是，羧基末端的半胱氨酸巯基经还原成二硫键而成的同源二聚体。
9.促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的另一特征是，羧基末端半胱氨酸的巯基与含双巯基的聚乙二醇(SH-PEG-SH)分子经还原形成PEG化的同源二聚体。
10.促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的另一特征是，羧基末端的半胱氨酸巯基与含双马莱酸的聚乙二醇(Mal-PEG-Mal)经还原形成PEG化的同源二聚体。
11.促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的另一特征是，羧基末端的半胱氨酸巯基与含双邻二硫吡啶的聚乙二醇(OPSS-PEG-OPSS)经还原形成PEG化的同源二聚体。
12.权利要求9，10，11中所述聚乙二醇分子量包括500-40000道尔顿。
13.权利要求8，9，10，11中所述促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体具有促进胰岛素分泌的作用。
14.权利要求8，9，10，11中所述促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体具有降低血糖的作用。
15.权利要求13，14所述的促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的生物作用，可作为治疗糖尿病的药物。
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