CN101935616A

CN101935616A - 一种杜鹃花菌根真菌菌株及其培养基和培养方法

Info

Publication number: CN101935616A
Application number: CN2009102012479A
Authority: CN
Inventors: 张春英; 尹丽娟
Original assignee: Shanghai Landscape Gardening Research Institute
Current assignee: Shanghai Landscape Gardening Research Institute
Priority date: 2009-12-16
Filing date: 2009-12-16
Publication date: 2011-01-05

Abstract

本发明公开了一种杜鹃花菌根真菌菌株及其培养基和培养方法属于微生物领域，为解决现有技术中杜鹃花组培苗在炼苗移栽中成活率较低而发明。所述杜鹃花菌根真菌菌株的培养基包括重量含量为20％的马铃薯汁为900.0～1100.0、葡萄糖为10.0～30.0、硫酸镁为0.3～0.8、磷酸二氢钾为0.3～0.8、维生素B1为0.1～0.3，所述组分配比为重量份数比；所述培养基的酸碱度为pH＝4.5～5.5。所述菌根真菌菌株的培养方法包括：将所述菌根真菌菌株浸在盛有培养基的容器中培养7～10天。本发明可用于培养杜鹃花组培苗。

Description

一种杜鹃花菌根真菌菌株及其培养基和培养方法

技术领域

本发明涉及微生物菌根真菌菌株及其培养基和培养方法，尤其涉及杜鹃花菌根真菌菌株及其培养基和培养方法。

背景技术

目前，组织培养是很多林木、花卉、果树等作物的育苗技术，也是杜鹃花种苗生产的重要方式。杜鹃花组培苗菌根化的关键在于有效菌根真菌菌株的筛选。目前世界上分离并鉴定的杜鹃花菌根真菌菌株不到20种。

组织培养受特殊微繁环境的影响，组培苗生理状况及品质较差、移栽驯化阶段成活率低是当前技术应用中大多数植物种类存在的普遍问题。主要表现在组培苗常有非功能性根系、根系与茎之间常缺乏微管连接、叶片具有很低的叶绿素含量和光合速率、没有表皮或具有发育很差的表皮、气孔控制弱等。由于组培苗生理功能的不健全导致在移栽驯化阶段易过量失水而死亡，在炼苗移栽中成活率较低。这一问题在杜鹃花组培育苗中也比较突出。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种杜鹃花菌根真菌菌株，该菌根真菌菌株接种后能够使杜鹃花组培苗在炼苗移栽中成活率较高。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种杜鹃花菌根真菌菌株的真菌核糖体脱氧核糖核酸内转录间隔区序列全长为：

TCCTCCGCTTATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATCCCTACCTGATCCGAGGTCAACCACAGAGTTGGGGGGTTCTGGCAGGCTGCCGCCGGACCCTGGAGCGAGAGCTGTACTACGCTGAGGGCCAGGCGGCGCCGCCACTGTCTTTAGGGCCGGCCGCGGCGGGCAGGGCCCAACACCAAGCGAGGCTTGAGGGTTGAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCTGCGGAATACCACAGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGACTCACTGAATTCTGCAATTCGCATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTAACGATTGTATAGTTACTCGGACGACACTAACATTCAGAGTCTGTGAGGTCTCTGGCGGGCACGCGCCAGCCGGGGCCGGCGGCCGGGCAGGGCCCAGCGGCCCGCCAAAGCAACGAGAGTAGTGATAACAGTGGGTGGGAGATCTACCCGGAGGGCATGAACTCTGTAATGATCCCTCCGCAGGTTCACCTACGGA。

本发明杜鹃花菌根真菌菌株能够活化土壤中的矿物质成分，促进寄主植物对营养元素的吸收，增强有机质的分解和氮的捕获能力，提高寄主抵抗逆境胁迫的能力，在接种后能够有效提高杜鹃花组培苗炼苗移栽中的成活率。

所述杜鹃花菌根真菌菌株的分类命名为：Oidiodendron sp；

拉丁文学名为：Oidiodendron sp；

保藏日期为：2009年11月30日；

保藏单位全称为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；

保藏单位简称为；微生物所；

保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；

保藏编号为：3468。

本发明要解决的另一个技术问题是提供一种杜鹃花菌根真菌菌株的培养基，利用该培养基培养的菌根真菌菌株接种后能提高杜鹃花组培苗在炼苗移栽中的成活率。

为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种杜鹃花菌根真菌菌株的培养基包括：重量含量为20％的马铃薯汁为900.0～1100.0、葡萄糖为10.0～30.0、硫酸镁为0.3～0.8、磷酸二氢钾为0.3～0.8、维生素B1为0.1～0.3，所述组分配比为重量份数比；

所述培养基的酸碱度为pH＝4.5～5.5。

本发明杜鹃花菌根真菌菌株的培养基含有马铃薯汁、葡萄糖、硫酸镁、磷酸二氢钾、维生素B1，营养丰富，酸碱度适宜，使用该培养基培养的菌根真菌菌株可以实现杜鹃花组培苗的有效菌根化，菌根能够促进杜鹃花组培苗的根系吸收营养元素、增强有机质的分解和氮的捕获能力、防止根系水分流失，杜鹃花组培苗移栽中平均成活率比传统增加10％～15％。

本发明要解决的另一个技术问题是提供一种杜鹃花菌根真菌菌株的培养方法，利用该方法培养的菌根真菌菌株接种后能提高杜鹃花组培苗在炼苗移栽中的成活率

为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

将所述菌根真菌菌株浸在盛有培养基的容器中培养7～10天；

所述培养基包括重量含量为20％的马铃薯汁为900.0～1100.0、葡萄糖为10.0～30.0、硫酸镁为0.3～0.8、磷酸二氢钾为0.3～0.8、维生素B1为0.1～0.3，所述组分配比为重量份数比，所述培养基的酸碱度为pH＝4.5～5.5。

进一步地，所述将所述菌根真菌菌株浸在盛有培养基的容器中培养7～10天具体为：将所述菌根真菌菌株浸在盛有所述培养基的容器中，置于震荡培养箱中，震荡培养8天。

所述震荡培养箱的转速为150转/分钟。

更进一步地，所述培养箱的温度为25℃。

该方法所使用的培养基含有马铃薯汁、葡萄糖、硫酸镁、磷酸二氢钾、维生素B1，营养丰富，酸碱度适宜，使用该培养基培养的菌根真菌菌株可以实现杜鹃花组培苗的有效菌根化，菌根能够促进杜鹃花组培苗的根系吸收营养元素、增强有机质的分解和氮的捕获能力、防止根系水分流失，杜鹃花组培苗移栽中平均成活率比传统增加10％～15％。

杜鹃花菌根真菌菌株的保藏

保藏日期：2009年11月30日；

保藏单位全称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；

保藏单位简称：微生物所；

保藏编号：3468。

具体实施方式

本发明的目的在于提供一种杜鹃花菌根真菌菌株及其培养基和培养方法，该菌株接种后能够提高杜鹃花组培苗在炼苗移栽中的成活率。一种杜鹃花菌根真菌菌株的真菌核糖体脱氧核糖核酸内转录间隔区序列全长为：

本实施例中，所述菌根真菌菌株通过以下方法获得：

L1：准备材料

采取华顶山森林公园自然生境中云锦杜鹃(Rhododendron fortunei L)的生活根，连同泥土保湿放置在冰桶内，放在4℃冰箱保存待用。

L2：准备培养基

(1)分离培养基：使用马丁-孟加拉红培养基(简称MA)，对其酸碱度进行调整改良。配方为：葡萄糖10克、胰蛋白胨5克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、孟加拉红0.033克，琼脂20克，蒸馏水定容至1000毫升，调节PH值至5.0，然后121℃高压灭菌20分钟，冷却至60℃以下时加入0.03克链霉素，混合均匀，倒平板待用。

(2)菌株鉴定培养基：使用麦芽提取物培养基(MEA)，配方为：麦芽提取物20g、胰蛋白胨1克、葡萄糖20克、琼脂20克，蒸馏水定容至1000毫升，然后121℃高压灭菌20分钟，冷却至60℃以下时加入0.03克链霉素。

(3)菌丝体鉴定培养基(PDA培养基)：配方为：重量含量为20％的马铃薯汁为1000克、葡萄糖为20克、硫酸镁为0.6克、磷酸二氢钾为0.6克、维生素B1为0.2克、琼脂20克，培养基的pH＝5.0。

L3：分离

菌根真菌菌株的分离：从冰箱中取出如L1中所述的材料，用自来水轻轻冲洗掉泥土，挑取健康的生活细根。清洗干净后，用72％酒精冲洗一下，放于10％家用84消毒液中洗涤15-20分钟，无菌水冲洗3-5次后，剪切成0.3～0.5厘米根段，置于装有MA培养基的培养皿中，每个培养皿中放置5个根段，然后置于25℃培养箱中黑暗培养2至4周，共培养100个根段。

菌落形态和菌丝体显微特征观察：待菌落从根段中长出来，用牙签挑取菌落至MEA培养基，继续进行菌落形态鉴定。每个菌落点6个菌斑，培养2周后观察菌落形态的一致性和均匀性。若菌落形态有差异，进行二次分离和鉴定。菌落形态特征稳定的菌株用牙签挑取至PDA平板25℃培养箱中黑暗培养2周，然后于4℃培养箱中黑暗培养2周，光学显微镜100-400倍下观察菌丝体形态和孢子形状。本实施例所使用培养箱为赛福恒温恒湿培养箱HWS-350，光学显微镜为莱卡光学显微镜Leica DM2000。

其中，菌体内部为棕色至灰色的、边缘颜色为灰白色的、质地为绒毛状的、无液体分泌物的、菌落外形为圆形的、菌落直径在1.6～1.9cm的为本发明菌株。

一种杜鹃花菌根真菌菌株的培养基包括重量含量为20％的马铃薯汁为900.0～1100.0、葡萄糖为10.0～30.0、硫酸镁为0.3～0.8、磷酸二氢钾为0.3～0.8、维生素B1为0.1～0.3，所述组分配比为重量份数比；

所述培养基的酸碱度为pH＝4.5～5.5。

本发明培养基含有马铃薯汁、葡萄糖、硫酸镁、磷酸二氢钾、维生素B1，营养丰富，酸碱度适宜，可获得稳定、质量好的杜鹃花菌根真菌菌株，利用该培养基培养的菌根真菌菌株可以实现杜鹃花组培苗的有效菌根化，接种后杜鹃花组培苗的平均移栽成活率可达88％以上，接种苗菌根平均侵染率可达50％以上，且平均苗高可达5.9cm，且菌丝平均干重可达102.6mg。

下面对本发明杜鹃花菌根真菌菌株的培养基进行举例说明。

实施例1

本实施例提供一种杜鹃花菌根真菌菌株的培养基，其组分及重量为：

所述培养基包括：重量含量为20％的马铃薯汁为900.0克、葡萄糖为10.0克、硫酸镁为0.3克、磷酸二氢钾为0.3克、维生素B1为0.2克，所述培养基的酸碱度为pH＝4.5。

实施例2

所述培养基包括：重量含量为20％的马铃薯汁为1000.0克、葡萄糖为20克、硫酸镁为0.5克、磷酸二氢钾为0.5克、维生素B1为0.1克，所述培养基的酸碱度为pH＝5.0。

实施例3

所述培养基包括：重量含量为20％的马铃薯汁为1100.0克、葡萄糖为30.0克、硫酸镁为0.8克、磷酸二氢钾为0.8克、维生素B1为0.3克，所述培养基的酸碱度为pH＝5.5。

一种杜鹃花菌根真菌菌株的培养方法包括：

将所述菌根真菌菌株浸在盛有培养基的容器中培养7～10天；

所述震荡培养箱的转速为150转/分钟。

更进一步地，所述培养箱的温度为25℃。

本发明杜鹃花菌根真菌及其培养基和培养方法同样适用于接种蓝莓组培苗，可提高组培苗移栽成活率和生长量。

本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的宗旨和范围。若这些改动和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

序列表

<110>张春英

<120>一种杜鹃花菌根真菌菌株及其培养基和培养方法

<160>1

<210>1

<211>557

<212>核苷酸

<213>云锦杜鹃根系(Rhododendron fortunei L)

<440>1

tcctccgctt attgatatgc ttaagttcag cgggtatccc tacctgatcc gaggtcaacc 60

acagagttgg ggggttctgg caggctgccg ccggaccctg gagcgagagc tgtactacgc 120

tgagggccag gcggcgccgc cactgtcttt agggccggcc gcggcgggca gggcccaaca 180

ccaagcgagg cttgagggtt gaaatgacgc tcgaacaggc atgccctgcg gaataccaca 240

gggcgcaatg tgcgttcaaa gattcgatga ctcactgaat tctgcaattc gcattactta 300

tcgcatttcg ctgcgttctt catcgatgcc agaaccaaga gatccgttgt tgaaagtttt 360

aacgattgta tagttactcg gacgacacta acattcagag tctgtgaggt ctctggcggg 420

cacgcgccag ccggggccgg cggccgggca gggcccagcg gcccgccaaa gcaacgagag 480

tagtgataac agtgggtggg agatctaccc ggagggcatg aactctgtaa tgatccctcc 540

gcaggttcac ctacgga 557

Claims

1.一种杜鹃花菌根真菌菌株，其特征在于：所述菌根真菌菌株的真菌核糖体脱氧核糖核酸内转录间隔区序列全长为：

TCCTCCGCTTATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATCCCTACCTGATCC

GAGGTCAACCACAGAGTTGGGGGGTTCTGGCAGGCTGCCGCCGGACCC

TGGAGCGAGAGCTGTACTACGCTGAGGGCCAGGCGGCGCCGCCACTGT

CTTTAGGGCCGGCCGCGGCGGGCAGGGCCCAACACCAAGCGAGGCTTG

AGGGTTGAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCTGCGGAATACCACAGG

GCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGACTCACTGAATTCTGCAATTCG

CATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGA

GATCCGTTGTTGAAAGTTTTAACGATTGTATAGTTACTCGGACGACACT

AACATTCAGAGTCTGTGAGGTCTCTGGCGGGCACGCGCCAGCCGGGGC

CGGCGGCCGGGCAGGGCCCAGCGGCCCGCCAAAGCAACGAGAGTAGT

GATAACAGTGGGTGGGAGATCTACCCGGAGGGCATGAACTCTGTAATG

ATCCCTCCGCAGGTTCACCTACGGA。

2.根据权利要求1所述的杜鹃花菌根真菌菌株的培养基，其特征在于：包括重量含量为20％的马铃薯汁为900.0～1100.0、葡萄糖为10.0～30.0、硫酸镁为0.3～0.8、磷酸二氢钾为0.3～0.8、维生素B1为0.1～0.3，所述组分配比为重量份数比；

所述培养基的酸碱度为pH＝4.5～5.5。

3.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于：包括所述重量含量为20％的马铃薯汁为1000.0、所述葡萄糖为20.0、所述硫酸镁为0.5、所述磷酸二氢钾为0.5、所述维生素B1为0.1。

4.根据权利要求1所述的菌根真菌菌株的培养方法，其特征在于：包括：将所述菌根真菌菌株浸在盛有培养基的容器中培养7～10天；

所述培养基为如权利要求2所述的培养基。

5.根据权利要求4所述的菌根真菌菌株的培养方法，其特征在于：将所述菌根真菌菌株浸在盛有培养基的容器中培养7～10天具体为：将所述菌根真菌菌株浸在盛有所述培养基的容器中，置于震荡培养箱中，震荡培养8天。

6.根据权利要求5所述的杜鹃花菌根真菌菌株的培养方法，其特征在于：所述震荡培养箱的转速为150转/分钟。

7.根据权利要求5所述的杜鹃花菌根真菌菌株的培养方法，其特征在于：所述培养箱的温度为25℃。