CN103087947B - 一株假黄色单胞菌zkb4-4及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一株假黄色单胞菌ZKB4-4及其应用，属微生物农药技术领域。本发明的假黄色单胞菌ZKB4-4(Pseudoxanthomonas sp. ZKB4-4)，已于2012年7月18日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.6351。本发明的假黄色单胞菌ZKB4-4作为制备用于防治根结线虫制剂的应用。用本发明的微生物菌株制备的菌剂对番茄根结线虫病温室防效达到50%以上，对烟草根结线虫病温室防效达到30%以上。并能明显促进植物的生长。本发明的防治根结线虫制剂，具有高效、低毒及无残留的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一株假黄色单胞菌ZKB4-4及其应用，属微生物农药技术领域。
背景技术
植物寄生线虫是作物上普遍发生的病害之一，危害几乎所有作物。仅根结线虫（Meloidogynespp.）每年在全球造成的损失就高达数百亿美元。由于生产上缺乏抗性品种，农作物复种指数高，化学杀线剂的使用受到限制，以及现代农业可持续发展的需要，生物防治植物线虫日益受到重视。
细菌作为作为根际土壤中最为广泛的微生物资源，其防治根结线虫的作用主要有诱导植物抗性，分泌胞外酶和作用于线虫的次生代谢产物等。本专利利用云南特有的生物资源，筛选出产生高效毒杀线虫活性代谢产物来毒杀根结线虫的细菌菌株，在线虫的生物防治中具有潜在和实际的应用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一株假黄色单胞菌ZKB4-4及其应用。
本发明具体是这样实现的：
发明人在前期研究中，筛选获得了具有良好杀线虫功能的假黄色单胞菌 (Pseudoxanthomonas sp. ZKB4-4)。ZKB4-4菌株已于2012年7月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所；保藏号为CGMCC No.6351。
假黄色单胞菌为直或稍弯的革兰氏阴性杆菌。大小(0.5～1)×（1.5～4）微米。以极生鞭毛运动，不形成芽孢、孢囊、鞘或突柄。化能有机营养，除单碳有机物外，能以多种有机物为碳源和能源；利用有机氮或无机氮为氮源，但不能固定分子氮；严格好氧，呼吸代谢，从不发酵，有的种在硝酸盐存在时可行厌氧呼吸；生长温度40～43℃；接触酶阳性，氧化酶通常阳性；DNA中的G+C克分子含量为58～71％。
本发明的假黄色单胞菌 (Pseudoxanthomonas sp. ZKB4-4)菌株作为制备用于防治根结线虫制剂的应用。
本发明将假黄色单胞菌ZKB4-4通过液体体培养，获得包括菌丝和菌丝胞外分泌物的液体菌体培养物，穴施使用。
本细菌菌剂能与其他的杀线虫农药、植物生长调节剂混合使用，但必须保证所混合药剂对本发明采用的菌剂无副作用。
本发明的细菌菌剂一般在作物播种或移栽时施用。方法是播种时与种子共同施入土壤中，移栽时将本制剂施入作物根际周围。对线虫发生严重地区可在作物生长过程中追施一次，方法是将本制剂施入作物根际周围。
本发明具有高效、低毒以及无残留的优点。
具体实施方式：
本发明化合物的发酵生产方法（常规方法）：
1、将ZKB4-4菌株的菌丝体接种到试管固体培养基斜面上，培养基配方为NB培养基，35-37℃下培养1-2天，获得试管种。
2、将NB培养基分装到500ml三角瓶中，常规灭菌，再于超净工作台上用接种针从试管斜面上挑取一些菌体接种于其中，然后32-38℃，180-210rpm/min于摇床上培养1-2天备用。
3、将摇好的种子按10-20%的接种量接种到发酵罐中，控制温度在35-38℃，培养1-2天，然后将发酵液用水调节，使CFU在106-109，备用。
本发明制剂对根结线虫的防效试验：
1、南方根结线虫（Meloidogyne incognita）的培养
将温室培养的带有南方根结线虫的番茄根用无菌水洗净，解剖针挑取根结线虫的卵囊置于0.4M的KCl溶液中，在5ml离心管中依次用4ml无菌水（三次）、1ml无菌青-链霉素双抗溶液、3ml 0.1%的NaClO溶液洗涤和消毒，每一步骤均通过短暂离心（8000转30秒）除去上清液。洗涤好的虫卵置于0.4M的ZnCl2溶液中孵化48小时，二龄幼虫用移液器收集于1.5ml离心管，通过短暂离心（5000转30秒）富集备用。
2、防效试验方法
（1）试验所用药剂及处理
A、液体菌剂，在作物移栽时一次性施于作物根际；
B、阳性对照，0.5%阿维菌素按37.5 kg/hm2处理；
C、空白对照，不加菌剂或药剂处理。
（2）试验方法
在直径为15 cm的盆钵加入500g土样(病土:沙土:腐殖土=1:1:1)，做以上几个处理。每个处理5盆且3次重复，置于25－28℃的温室中培养。移栽后每隔3天浇水，使其正常生长。菌剂处理后30、60天分别调查各处理组作物根部的根结数、根际的虫卵数和作物的株高、地上部分重以及根的湿重，计算菌剂对根结线虫病的防治效果。
实施例1：用菌剂防治番茄根结线虫病试验
移栽1月龄番茄（4-6叶），番茄品种为：中杂9号，山东农业科技开发公司生产。每盆施用150ml菌剂，按上述试验方法进行防效试验。列表所示为防效数据。
表1 菌剂对番茄根结线虫病的防治效果（60d）
| 病情指数 | 防效% | |
| 菌剂 | 2 | 56.7 |
| 阳性对照 | 1 | 81.0 |
| 空白对照 | 4 | － |
结果表明，该菌剂对番茄根结线虫病具有明显的防治作用。
表2 菌剂对番茄生长的影响（60d）
| 根湿重g | 地上部分重g | 株高cm | |
| 菌剂 | 9.4 | 21.4 | 58.7 |
| 阳性对照 | 6.8 | 13.6 | 41.9 |
| 空白对照 | 8.7 | 17.1 | 54.3 |
结果表明，该菌剂对番茄的生长具有显著的促生长作用，明显高于对照。
实施例2：用菌剂防治烟草根结线虫病试验
实施例2方法同实施例1，不同之处为：移栽烟草品种为：云南85，云南省育烟草研究所培育。
表3 菌剂对烟草根结线虫病的防治效果（60d）
| 病情指数 | 根中虫数/g | 防效% | |
| 菌剂 | 2 | 9 | 30.1 |
| 阳性对照 | 2 | 7 | 32.5 |
| 空白对照 | 3 | 14 | － |
结果表明，该菌剂对烟草根结线虫病具有明显的防治作用。
表4 菌剂对烟草生长的影响（60d）
| 根湿重g | 地上部分重g | 株高cm | |
| 菌剂 | 30.2 | 85.6 | 55.8 |
| 阳性对照 | 21.6 | 65.2 | 46.8 |
| 空白对照 | 27.4 | 78.5 | 52.1 |
结果表明，该菌剂对烟草的生长具有显著的促生长作用，明显高于对照。
实施例3：不同菌剂施用量的防效比较
实施例3方法同实施例1，不同之处为：施用菌剂为每盆50ml，100ml和150ml。
表5 不同量菌剂对番茄根结线虫病的防治效果%
| 施用量 | 30d | 60d |
| 50ml | 32.4 | 42.1 |
| 100ml | 39.5 | 42.6 |
| 150ml | 43.4 | 56.7 |
| 阳性对照 | 89.2 | 81.0 |
| 空白对照 | - | - |
结果表明，使用剂量越高，防治效果越好。
Claims (2)
1.一株假黄色单胞菌Pseudoxanthomonas sp.ZKB4-4，其特征在于所述菌株的保藏号为CGMCC NO.6351。
2.权利要求1所述的假黄色单胞菌Pseudoxanthomonas sp.ZKB4-4菌株在制备用于防治根结线虫制剂中的应用。
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