CN105075632A - 大白花杜鹃无菌苗菌根化技术 - Google Patents

大白花杜鹃无菌苗菌根化技术 Download PDF

Info

Publication number
CN105075632A
CN105075632A CN201510550819.XA CN201510550819A CN105075632A CN 105075632 A CN105075632 A CN 105075632A CN 201510550819 A CN201510550819 A CN 201510550819A CN 105075632 A CN105075632 A CN 105075632A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seedling
aseptic
mycorrhiza
leaf
sweetshell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510550819.XA
Other languages
English (en)
Inventor
李奋勇
田伟
张长芹
刘国强
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DALI CANGSHAN BOTANIC GARDEN BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
DALI CANGSHAN BOTANIC GARDEN BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by DALI CANGSHAN BOTANIC GARDEN BIOTECHNOLOGY Co Ltd filed Critical DALI CANGSHAN BOTANIC GARDEN BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201510550819.XA priority Critical patent/CN105075632A/zh
Publication of CN105075632A publication Critical patent/CN105075632A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00—Cultivation of mushrooms
    • A01G18/10—Mycorrhiza; Mycorrhizal associations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01C—PLANTING; SOWING; FERTILISING
    • A01C1/00—Apparatus, or methods of use thereof, for testing or treating seed, roots, or the like, prior to sowing or planting
    • A01C1/08—Immunising seed
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G22/00—Cultivation of specific crops or plants not otherwise provided for

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)

Abstract

本发明涉及一种大白花杜鹃(<i>Rhododendron？decorum</i>)无菌苗菌根化方法，特别是一种将大白花杜鹃和真菌共培养形成菌根苗的方法。属于植物和真菌共生形成菌根的生物技术领域。选取大白花杜鹃的种子培育无菌苗，接入杜鹃类菌根菌剂建立一个共培养体系，达到形成菌根苗的目的。使用该方法可在1个月内分别得到无菌苗和真菌菌剂，无菌苗接种真菌后10-30天即可形成菌根，得到菌根苗，为杜鹃花菌根苗的培育、幼苗复壮和规模化生产提供了技术支撑。

Description

大白花杜鹃无菌苗菌根化技术
技术领域：
本发明涉及一种大白花杜鹃(Rhododendrondecorum)无菌苗菌根化方法，特别是一种将大白花杜鹃和真菌共培养形成菌根苗的方法。，属于植物和真菌共生形成菌根的生物技术领域。
背景技术：
大白花杜鹃(Rhododendrondecorum)属于杜鹃花科杜鹃花属植物。其树姿优美，花色洁白，味清香，集观赏与食用价值于一身，在杜鹃花栽培过程中，杜鹃花极易因根系不发达而导致植株死亡，所以在引种驯化和产业化过程中，杜鹃花由于根系差而影响营养生长和株型，导致质量下降的情况屡见不鲜。
发明内容：
本发明的目的是提供大白花杜鹃(Rhododendrondecorum)无菌苗菌根化方法，使之形成发达根系，提高植株成活率，保证在栽培过程中植株能够正常生长，为提高杜鹃花商品质量提供理论指导和技术支撑。
为了实现本发明的目的，本发明提供了如下的技术方案：
大白花杜鹃无菌苗菌根化技术，其特征在于先选取大白花杜鹃的种子进行无菌苗的培育，再接种菌粒的培养，最后加入菌粒和杜鹃类接种菌剂建立一个共培养体系，用于菌根苗的合成。，
取健康、饱满的大白花杜鹃种子先用无菌水冲洗后，再采用0.1％升汞溶液进行表面消毒3-5分钟，然后无菌水冲洗7-8遍，放入灭菌的培养皿中进行萌发。
从已纯化的菌种中挑取的菌丝加入液体真菌培养基中，养基为马铃薯葡萄糖培养基(PDA)：200g/l去皮马铃薯+20g/l葡萄糖+3g/l磷酸二氢钾+1.5g/l硫酸镁+10mg/l维生素B1，pH5.8；封口后放于国产回旋振荡器HY-5中，在黑暗，21-25℃条件下培养一个月得到用于接种的菌粒。
待无菌苗发芽长出两片真叶后，无菌条件下将其移栽至装有0.5％水琼脂的培养瓶中，然后加入菌粒，同时倒入液体真菌培养基，pH自然，培育菌根苗合成，培养菌根苗合成10天后，即可取小苗根系观察菌根的形成情况。
所述种子发芽、接种菌剂培养及菌根苗合成的温度为20-25℃，湿度30-45％，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。
一种大白花杜鹃无菌苗菌根化技术组培繁殖及菌根苗合成方法，其特征在于选取健康、饱满的大白花杜鹃种子，先用无菌水冲洗后，再采用0.1％升汞溶液进行表面消毒3-5分钟，然后无菌水冲洗7-8遍，放入灭菌的培养皿中进行萌发；
从已纯化的菌种中挑取一定量的菌丝加入液体真菌培养基中，封口后放于国产回旋振荡器HY-5中，在黑暗，21-25℃条件下培养一个月得到用于接种的菌粒；
待无菌苗发芽长出两片真叶后，无菌条件下将其移栽至装有0.5％水琼脂的培养瓶中，然后加入菌粒，同时倒入少量液体真菌培养基，从而建立了一套完整的共培养体系，用于合成菌根苗；培养10天后即可取小苗根系来观察菌根的形成情况。
本发明技术方案的提出是基于下述的研究基础：大白花杜鹃具很高的观赏和食用价值。杜鹃花为须根系，在栽培过程中极易因根系不发达影响营养生长和株型，导致质量下降甚至植株死亡。但是杜鹃花在生长过程中会与真菌形成一种互惠共生体，即菌根。菌根可以促进杜鹃花对水和营养物质的吸收，从而增强植物生存竞争的能力和耐性，使植物在恶劣条件下仍能存活。为提高杜鹃花引种驯化的成功率，培养出根系发达的高品质商品，推动我国花卉产业的发展，需要进行大白花杜鹃和真菌的菌根合成培养实验，摸索出合适的培养条件，并形成一套专门的菌根合成技术体系。
由于大白花杜鹃花种子苗的根系生长初期较细弱，易导致吸收水分和营养的能力不佳，本发明的优点在于：
1.通过接种菌根真菌，使幼苗根系发达，促进水分和营养吸收，为营养生长奠定良好的基础。
2.菌根苗在生存竞争能力和耐性方面远优于未形成菌根的植株，从而保证了植株的正常生长。
3.菌根苗的营养生长得到改善，可以极大地提高杜鹃花作为商品的质量和价格，为花卉产业化提供理论依据和技术支持。
本发明试验程序简便易行，杜鹃花无菌种子苗接种菌根真菌后，最快的在第5天即可培养出菌根苗，一个月后90％以上的杜鹃花苗根系可以形成菌根，极大地提高了幼苗菌根化的程度，增强了幼苗吸收营养水分的能力和恶劣条件下的耐性，为其健康生长提供了保证。
具体实施方式：
以下实施例用来进一步说明本发明的实质性内容。根据本发明技术方案和实施例的描述，也许同领域技术人员在本发明的基础上还可以对本发明技术方案进行一些修改和改进。因此，在不偏离本发明主要技术方案基础上所做的修改和改进，均应属于本发明所要求保护的范围。
大白花杜鹃无菌苗菌根化技术，包括无菌苗的培育、菌剂的培养及菌根苗的合成步骤，其特征在于取健康、饱满的大白花杜鹃种子，无菌条件下进行萌发；培养菌剂的培养基为马铃薯葡萄糖培养基(PDA)：200g/l去皮马铃薯+20g/l葡萄糖+3g/l磷酸二氢钾+1.5g/l硫酸镁+10mg/l维生素B1，pH5.8；培育菌根苗的培养基为0.5％的水琼脂，pH自然。
所述种子消毒先用无菌水冲洗后，再用0.1％升汞溶液进行表面消毒3-5分钟，然后无菌水冲洗7-8遍，放入灭菌的培养皿中。
所述液体菌剂培养采用液体真菌培养基，放于国产回旋振荡器HY-5中，在黑暗，21-25℃条件下培养一个月。
所述合成培养方法为将长出两片真叶的无菌苗移栽至装有0.5％水琼脂的培养瓶中，然后加入菌粒，同时倒入少量液体真菌培养基。
所述种子发芽和菌根苗合成的温度为20-25℃，湿度30-45％，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。
本发明的方法可具体描述为：选取健康、饱满的大白花杜鹃种子，先用无菌水冲洗后，再采用0.1％升汞溶液进行表面消毒3-5分钟，然后无菌水冲洗7-8遍，放入灭菌的培养皿中进行萌发；从已纯化的菌种中挑取少量的菌丝加入液体真菌培养基中，封口后放于国产回旋振荡器HY-5中，在黑暗，21-25℃条件下培养一个月得到菌粒；待无菌苗发芽长出两片真叶后，无菌条件下将其移栽至装有0.5％水琼脂的培养瓶中，然后加入菌粒，同时倒入少量液体真菌培养基，建立完整的共培养体系，用于合成菌根苗；合成培养10天后即可取根来观察菌根的形成情况。
对比实施例1：
采取将大白花杜鹃(Rhododendrondecorum)无菌种子苗接入长有菌丝的固体马铃薯葡萄糖培养基中进行接种合成菌根实验。
选取大白花杜鹃健康、饱满的种子，先用无菌水冲洗后，再采用0.1％升汞溶液进行表面消毒3-5分钟，然后无菌水冲洗7-8遍，放入灭菌的培养皿中进行萌发；从已纯化的3种菌种中挑取少量的菌丝加入真菌培养基(PDA，200g/l去皮马铃薯+20g/l葡萄糖+3g/l磷酸二氢钾+1.5g/l硫酸镁+10mg/l维生素B1)中，封口后在黑暗，21-25℃条件下培养一个月后，菌丝即可长满培养瓶表面；待无菌苗发芽长出两片真叶后，在无菌条件下将其从培养皿中移出，分别转接入长满3种真菌菌丝的真菌培养基表面，根系深入培养基中进行合成培养。每瓶中放入5棵小苗，共5瓶，另设一瓶未培养真菌的马铃薯葡萄糖培养基，接入5棵小苗作为对照。共18瓶，其中3瓶对照；5天后发现合成培养瓶中接种的小苗被菌丝围绕，生长状况不佳，取10个根进行根系切片发现其中1棵形成菌根，但10天后小苗逐渐干枯。而对照瓶内小苗仍旧正常生长，但一个月后逐渐干枯，三个月后死亡。
实施例2：
采取将液体培养基中的液体菌粒加入事先接入大白花杜鹃(Rhododendrondecorum)无菌种子苗的水琼脂培养基中进行接种合成菌根实验。选取大白花杜鹃健康、饱满的种子，先用无菌水冲洗后，再采用0.1％升汞溶液进行表面消毒3-5分钟，然后无菌水冲洗7-8遍，放入灭菌的培养皿中进行萌发；从已纯化的3种菌种中挑取少量的菌丝加入液体马铃薯葡萄糖培养基(200g/l去皮马铃薯+20g/l葡萄糖+3g/l磷酸二氢钾+1.5g/l硫酸镁+10mg/l维生素B1，PDA)中，封口后放于国产回旋振荡器HY-5中，在黑暗，21-25℃条件下培养一个月得到用于接种的菌粒；待无菌苗发芽长出两片真叶后，无菌条件下将其移栽至装有0.5％水琼脂的培养瓶中，根系深入培养基中，然后分别将3种真菌菌粒加入培养基内部，同时倒入少量液体真菌培养基；每瓶中放入5棵小苗，3-5粒菌粒，共5瓶，另设一瓶未培养真菌的马铃薯葡萄糖培养基，接入5棵小苗作为对照。共18瓶，其中3瓶对照。
统计结果显示：合成培养5天后取10个根切片发现仅有2个形成菌根，但10天后取10个根切片则发现有8个形成菌根。接种一个月后取出菌根苗和对照苗进行对比观察，主要比较小苗外观形态、根系形态及解剖学特点等指标。在解剖镜下发现：与对照苗相比，菌根苗根系形态特征表现为：植株较高，叶片多；根系长，分支多。对根系进行徒手切片，在显微镜下观察发现：对照无菌苗根尖处为白色或褐黄色，细胞内无菌丝圈；菌根苗根系则呈现或深或浅的褐色，在表面会有菌丝缠绕，并侵入表皮细胞中呈现出典型的杜鹃类菌根结构—菌丝圈。杜鹃花为须根系，在生长过程中会与真菌之间形成一种互惠共生体，即菌根。经调查和研究发现，菌根可以促进杜鹃花对水和营养物质的吸收，从而增强植物生存竞争的能力和耐性，使植物在恶劣条件下仍能存活。通过本发明菌根合成技术，使大白花杜鹃菌根苗根系发达，植株生长状态良好，为提高杜鹃花引种驯化的成功率和花卉质量商品，推动我国花卉产业的发展提供了保证，是一套专门的简单操作、低成本高效益的技术。

Claims (6)

1.大白花杜鹃无菌苗菌根化技术，其特征在于先选取大白花杜鹃的种子进行无菌苗的培育，再接种菌粒的培养，最后加入菌粒和杜鹃类接种菌剂建立一个共培养体系，用于菌根苗的合成。
2.根据权利要求1所述的大白花杜鹃无菌苗菌根化技术，其特征在于取健康、饱满的大白花杜鹃种子先用无菌水冲洗后，再采用0.1%升汞溶液进行表面消毒3-5分钟，然后无菌水冲洗7-8遍，放入灭菌的培养皿中进行萌发。
3.根据权利要求1所述的大白花杜鹃无菌苗菌根化技术，其特征在于从已纯化的菌种中挑取的菌丝加入液体真菌培养基中，养基为马铃薯葡萄糖培养基（PDA）：200g/l去皮马铃薯+20g/l葡萄糖+3g/l磷酸二氢钾+1.5g/l硫酸镁+10mg/l维生素B1，pH5.8；封口后放于国产回旋振荡器HY-5中，在黑暗，21-25℃条件下培养一个月得到用于接种的菌粒。
4.根据权利1所述的大白花杜鹃无菌苗菌根化技术，其特征在于待无菌苗发芽长出两片真叶后，无菌条件下将其移栽至装有0.5%水琼脂的培养瓶中，然后加入菌粒，同时倒入液体真菌培养基，pH自然，培育菌根苗合成，培养菌根苗合成10天后，即可取小苗根系观察菌根的形成情况。
5.根据权利要求1所述的大白花杜鹃无菌苗菌根化技术，其特征在于所述种子发芽、接种菌剂培养及菌根苗合成的温度为20-25℃，湿度30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。
6.一种大白花杜鹃无菌苗菌根化技术组培繁殖及菌根苗合成方法，其特征在于选取健康、饱满的大白花杜鹃种子，先用无菌水冲洗后，再采用0.1%升汞溶液进行表面消毒3-5分钟，然后无菌水冲洗7-8遍，放入灭菌的培养皿中进行萌发；
从已纯化的菌种中挑取一定量的菌丝加入液体真菌培养基中，封口后放于国产回旋振荡器HY-5中，在黑暗，21-25℃条件下培养一个月得到用于接种的菌粒；
待无菌苗发芽长出两片真叶后，无菌条件下将其移栽至装有0.5%水琼脂的培养瓶中，然后加入菌粒，同时倒入少量液体真菌培养基，从而建立了一套完整的共培养体系，用于合成菌根苗；培养10天后即可取小苗根系来观察菌根的形成情况。
CN201510550819.XA 2015-09-01 2015-09-01 大白花杜鹃无菌苗菌根化技术 Pending CN105075632A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510550819.XA CN105075632A (zh) 2015-09-01 2015-09-01 大白花杜鹃无菌苗菌根化技术

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510550819.XA CN105075632A (zh) 2015-09-01 2015-09-01 大白花杜鹃无菌苗菌根化技术

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105075632A true CN105075632A (zh) 2015-11-25

Family

ID=54557710

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510550819.XA Pending CN105075632A (zh) 2015-09-01 2015-09-01 大白花杜鹃无菌苗菌根化技术

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105075632A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107148886A (zh) * 2017-05-18 2017-09-12 广州华苑园林股份有限公司 一种杜鹃花播种苗的菌根化技术
CN108432547A (zh) * 2018-03-14 2018-08-24 云南上智科技有限公司 一种菌根合成培养方法
CN113748913A (zh) * 2021-10-14 2021-12-07 北京京彩弘景园林工程有限公司 一种松树复壮方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101138322A (zh) * 2007-08-09 2008-03-12 贵州省生物技术研究所 杜鹃兰组培根状茎菌根化育苗技术
CN101935616A (zh) * 2009-12-16 2011-01-05 上海市园林科学研究所 一种杜鹃花菌根真菌菌株及其培养基和培养方法
CN102696466A (zh) * 2012-06-25 2012-10-03 上海市园林科学研究所 一种杜鹃花无菌苗快速菌根化的方法
CN103039366A (zh) * 2013-01-18 2013-04-17 通化师范学院 一种长白山杜鹃花属植物菌根化苗的工厂化方法
CN103109746A (zh) * 2013-03-10 2013-05-22 通化师范学院 一种杜鹃花属菌根试管内直接诱导和菌根化种苗快繁方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101138322A (zh) * 2007-08-09 2008-03-12 贵州省生物技术研究所 杜鹃兰组培根状茎菌根化育苗技术
CN101935616A (zh) * 2009-12-16 2011-01-05 上海市园林科学研究所 一种杜鹃花菌根真菌菌株及其培养基和培养方法
CN102696466A (zh) * 2012-06-25 2012-10-03 上海市园林科学研究所 一种杜鹃花无菌苗快速菌根化的方法
CN103039366A (zh) * 2013-01-18 2013-04-17 通化师范学院 一种长白山杜鹃花属植物菌根化苗的工厂化方法
CN103109746A (zh) * 2013-03-10 2013-05-22 通化师范学院 一种杜鹃花属菌根试管内直接诱导和菌根化种苗快繁方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
于芳等: "云锦杜鹃菌根真菌接种技术及其效应", 《福建农林大学学报（自然科学版）》 *
尹丽娟: "云锦杜鹃根系内生真菌营养特性及其接种效应分析", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 *
钟林芳等: "杜鹃花科植物菌根研究进展", 《中国农业科技导报》 *
龙毅: "三种杜鹃属植物菌根真菌的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107148886A (zh) * 2017-05-18 2017-09-12 广州华苑园林股份有限公司 一种杜鹃花播种苗的菌根化技术
CN108432547A (zh) * 2018-03-14 2018-08-24 云南上智科技有限公司 一种菌根合成培养方法
CN113748913A (zh) * 2021-10-14 2021-12-07 北京京彩弘景园林工程有限公司 一种松树复壮方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103918475B (zh) 秀珍菇盆景式栽培的方法及用于栽培秀珍菇的培养基
CN103891524B (zh) 灵芝盆景式栽培的方法及用于栽培灵芝的培养基
CN103992972A (zh) 一种用于苗木种植的复合微生态制剂
CN101720627A (zh) 一种活体蚕蛹栽培蛹虫草的方法
CN106613355A (zh) 一种平菇生态种植方法
CN102127510B (zh) 促进兰科石斛属植物种子萌发的两株真菌
CN105325244A (zh) 一种联合应用amf与pgpr菌剂进行柑橘容器菌根苗栽培的方法
CN104145716B (zh) 硬皮马勃菌根苗的合成方法
CN105660191A (zh) 一种乌芝子实体的培养方法
CN102626029A (zh) 一种使用微生物进行朱砂根容器苗栽培的方法
CN103250529A (zh) 一种利用益生菌营养物栽培菊花的方法
CN104303833A (zh) 一种台湾秀珍菇在皖北地区栽培的方法
CN107509618A (zh) 一种豌豆尖潮汐生产方法
CN106635821B (zh) 一种促进蓝莓营养吸收的菌根真菌及其制备方法与应用
CN105075632A (zh) 大白花杜鹃无菌苗菌根化技术
CN107629966A (zh) 真菌诱导子、其制备方法及利用该真菌诱导子进行白芨种苗快繁的方法
CN110301290A (zh) 一种快速合成外生菌根的装置和方法
CN108124749B (zh) 一种铁线莲水培扦插生根的方法
CN103250564B (zh) 一种板栗菌根菌人工培养方法
CN104429486A (zh) 加工番茄未成熟种子培养成苗的方法
CN110229757A (zh) 一株有效促进作物生长的桔绿木霉js84及其研制的生物有机肥
CN110218657A (zh) 一株长枝木霉md30及其研制的生物有机肥
CN106386335A (zh) 一种国槐播种育苗方法
CN101401515B (zh) 一种大花蕙兰组培苗染菌栽培方法
CN106635826A (zh) 一种基于一次性竹筷再生利用的食用菌栽培菌种的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20151125

RJ01 Rejection of invention patent application after publication