CN102127510B - 促进兰科石斛属植物种子萌发的两株真菌 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了2株促进兰科石斛属植物种子萌发的真菌。它们对于兰科石斛属植物的有性繁殖和种苗的规模化生产和资源可持续利用具有重大应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，具体地说涉及两株能够促进兰科石斛属植物种子萌发，用于石斛属植物的繁殖、生产，保护该属植物资源的真菌。
背景技术
兰科(Orchidaceae)是被子植物的大科之一，全世界约有700属近20000种，其中很多为珍稀濒危植物。所有野生兰科植物均被列入《野生动植物濒危物种国际贸易公约》的保护范围，占该公约应保护植物的90％以上，是植物保护中的“旗舰”类群。石斛属是兰科第二大属，其中很多品种具有很高的药用及观赏价值。据2005年版《中华人民共和国药典》一部载：以金钗石斛(Dendrobium nobile LindL.)、铁皮石斛(D.candidum Wall，ex Lind1.)或马鞭石斛(D.fimbriatum Hook，var.oculatum Hook.)及其近似种的新鲜或干燥茎做石斛药用，具有益胃生津、滋阴清热、明目利嗓等作用。20世纪70年代以来，石斛的需求量大增，特别是石斛夜光丸、脉络宁注射液等中成药的问世，野生石斛资源已不能满足需求。由于生态环境日益恶化和过度开采，铁皮石斛等名贵品种已濒临灭绝，市场上的混淆品、假冒伪劣产品屡禁不止，因此加强石斛种质资源的研究迫在眉睫。
对兰科植物繁殖方法的研究，主要有有性繁殖和无性繁殖两种。在无性繁殖方面，利用组织培养的方法进行大规模克隆繁殖，无疑可以减轻对野生石斛的采集压力，但是，组培苗经过多次继代会出现减产降质的退化现象，容易产生病害，降低产量和质量。在有性繁殖方面，研究者通过控制营养、生态等条件，促进兰科植物种子萌发与生长，已取得了较理想的结果，目前已经有一些石斛属植物可以通过种子的无菌萌发大量获得幼苗。但这种繁殖方式存在的主要问题是：种子萌发后形成的幼苗比较脆弱，从组织培养的条件移栽到大田环境继续生长时，有许多难以克服的困难。兰科植物的种子微小，本身无法贮存养分，其萌发阶段完全依靠菌根真菌为其提供营养。基于兰科植物种子萌发阶段依赖于真菌的特点，研究促进兰科植物种子萌发的优良真菌菌株(俗称萌发菌)的工作就显得尤为重要。
发明内容
本发明的目的在于提供两株能促进兰科石斛属植物种子萌发的真菌。它们能用于多种珍稀濒危的药用石斛属植物的人工繁殖和生产中，提高石斛的产量，解决石斛药用资源紧缺的问题，也能用于石斛属植物中名贵的观赏花卉的种质资源保育，保护石斛属植物的自然资源，具有巨大的应用价值。
本发明提供的2株真菌经鉴定分别为：胶膜菌属真菌pw-3(Tulasnella sp.)，保藏编号CGMCC No.3397；蜡壳菌属真菌shh-53(Sebacina sp.)，保藏编号为CGMCC No.3398。这2株真菌于2009年11月4日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位地址：北京市朝阳区大屯路甲3号，中国科学院微生物研究所。2株真菌的保藏和存活证明见附件。
两株真菌的培养特性分别为：
pw-3：在PDA培养基上菌落为白色，圆形，气生菌丝不发达，25℃生长10天的菌落直径为1.9厘米，常规培养基上不产生孢子。
shh-53：在PDA培养基上菌落为黄色，圆形，气生菌丝不发达，25℃生长10天的菌落直径为3.8厘米，常规培养基上不产生孢子。
具体实施方式
实施例1
pw-3对铁皮石斛种子的萌发效果
把铁皮石斛种子播种到已经长满pw-3真菌菌丝的燕麦培养基上，以播种于无菌燕麦培养基上的种子为对照，在培养室中培养，培养温度为23-27℃，三个月时调查种子萌发情况。兰科植物种子发育级别划分标准如表1。结果为：接种pw-3真菌的铁皮石斛种子萌发率为69.3％，不接真菌的铁皮石斛种子萌发率为24.6％；并且接种pw-3真菌的铁皮石斛萌发到第4级，即分化出叶，对照组仅发育到第2级，即种子膨大破皮，未见进一步发育。
表1兰科种子发育级别分级标准
实施例2
pw-3对金钗石斛种子的萌发效果
把金钗石斛种子播种到已经长满pw-3真菌菌丝的燕麦培养基上，以播种于无菌燕麦培养基上的种子为对照，在培养室中培养，培养温度为23-27℃，三个月时调查种子萌发情况。结果为：接种pw-3真菌的金钗石斛种子萌发率为56.6％，不接真菌的金钗石斛种子萌发率为31.7％；并且接种pw-3真菌的金钗石斛萌发到第5级，即长出一到两片叶，发育成苗，对照组仅发育到第2级，即种子膨大破皮，未见进一步发育。
实施例3
pw-3对铜皮石斛种子的萌发效果
把铜皮石斛种子播种到已经长满pw-3真菌菌丝的燕麦培养基上，以播种于无菌燕麦培养基上的种子为对照，在培养室中培养，培养温度为23-27℃，两个月时调查种子萌发情况。结果为：接种pw-3真菌的铜皮石斛种子萌发率为92.0％，不接真菌的铜皮石斛种子萌发率为54.3％；并且接种pw-3真菌的铜皮石斛萌发到第5级，即长出一到两片叶，发育成苗，对照组仅发育到第2级，即种子膨大破皮，未见进一步发育。
实施例4
shh-53对铁皮石斛种子的萌发效果
把铁皮石斛种子播种到已经长满shh-53真菌菌丝的燕麦培养基上，以播种于无菌燕麦培养基上的种子为对照，在培养室中培养，培养温度为23-27℃，三个月时调查种子萌发情况。结果为：接种shh-53真菌的铁皮石斛种子萌发率为51.6％，不接真菌处理的铁皮石斛种子萌发率为24.6％；并且接种shh-53真菌的铁皮石斛萌发到第5级，即长出一到两片叶，发育成苗，对照组仅发育到第2级，即种子膨大破皮，未见进一步发育。
实施例5
shh-53对金钗石斛种子的萌发效果
把金钗石斛种子播种到已经长满shh-53真菌菌丝的燕麦培养基上，以播种于无菌燕麦培养基上的种子为对照，在培养室中培养，培养温度为23-27℃，三个月时调查种子萌发情况。结果为：接种shh-53真菌的金钗石斛种子萌发率为81.6％，不接真菌的金钗石斛种子萌发率为31.7％；并且接种shh-53真菌的金钗石斛萌发到第5级，即长出一到两片叶，发育成苗，对照组仅发育到第2级，即种子膨大破皮，未见进一步发育。
实施例6
shh-53对大苞鞘石斛种子的萌发效果
把大苞鞘石斛种子播种到已经长满shh-53真菌菌丝的燕麦培养基上，以播种于无菌燕麦培养基上的种子为对照，在培养室中培养，培养温度为23-27℃，两个月时调查种子萌发情况。结果为：接种shh-53真菌的大苞鞘石斛种子萌发率为79.0％，不接真菌处理的大苞鞘石斛种子萌发率为56.5％；并且接种shh-53真菌的大苞鞘石斛萌发到第5级，即长出一到两片叶，发育成苗，对照组仅发育到第2级，即种子膨大破皮，未见进一步发育。
实施例7
shh-53对长苏石斛种子的萌发效果
把长苏石斛种子播种到已经长满shh-53真菌菌丝的燕麦培养基上，以播种于无菌燕麦培养基上的种子为对照，在培养室中培养，培养温度为23-27℃，两个月时调查种子萌发情况。结果为：接种shh-53真菌的长苏石斛种子萌发率为85.2％，不接真菌的长苏石斛种子萌发率为61.4％；并且接种shh-53真菌的长苏石斛萌发到第5级，即长出一到两片叶，发育成苗，对照组仅发育到第2级，即种子膨大破皮，未见进一步发育。
Claims (2)
1.促进兰科石斛属植物种子萌发的1株真菌，它是保藏编号为CGMCC No.3397的胶膜菌属真菌(Tulasnella sp.)pw-3。
2.权利要求1所述的真菌在兰科石斛属植物的有性繁殖和种苗的规模化生产中的应用。
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