CN105018391A - 一种死亡谷芽胞杆菌nbif-001及发酵方法和应用 - Google Patents
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Landscapes
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Abstract
本发明公开了一种死亡谷芽胞杆菌NBIF-001及发酵方法和应用，所述的死亡谷芽胞杆菌为为死亡谷芽胞杆菌（<i>Bacillus？vallismortis</i>）NBIF-001，保藏编号为CCTCC？NO：M2015087。利用本发明的死亡谷芽胞杆菌NBIF-001对西瓜进行灌根处理后，防效高达88.5%，进行蘸根处理后，其防效也达到了65.7%。本发明提供的死亡谷芽胞杆菌NBIF-001同时对番茄枯萎病菌、番茄早疫病菌、禾谷镰刀菌、小麦赤霉病菌或水稻纹枯病菌均有抑制作用。同时对黄瓜灰霉病和水稻纹枯病具有良好的防效，可与其他化学抑菌剂联合施用，以减少化学抑菌剂对环境的影响。
Description
技术领域
本发明属于微生物应用技术领域，具体涉及一种死亡谷芽胞杆菌NBIF-001及发酵方法和应用。
背景技术
西瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.Niveum)病原菌引起的，在土中存活时间较长(8～10年)。该病害在我国的发生面积约为总栽培面积的42％，造成减产15％，重者达85％甚至绝收，导致西瓜品质降低(含糖量下降等)，是危害最为严重、造成经济损失最大的病害之一。该病从苗期到坐果期均可发生，以坐果初期发病最为严重。苗期的发病苗，茎、叶因失水而枯萎、倒伏，根部的根毛枯萎、脱落，茎基部出现皱缩，呈现淡紫色或浅褐色。坐果初期发病，植株下部茎叶枯萎发黄，几天后迅速扩散到整个植株，直至完全枯死。病情扩展很快，几天至十几天便可蔓延全田。生产中采用多种方法防治这种病害，如嫁接防治、抗病育种、农业防治、化学防治和生物防治等。但由于目前西瓜枯萎病防治手段不能高效杀菌，抗病品种选育难度大，病原菌生理小种的不断分化，抗药性、致病力增强，农耕技术水平低下等原因，对我国西瓜生产造成很大影响，严重挫伤了生产者的积极性。寻找一种经济、安全、高效的防治方法是当务之急。近年来，根际生防菌的研究为西瓜枯萎病的生物防治提供了新途径，许多根际有益微生物既能够产生多种抗菌物质直接抑菌，又能够诱导植物产生系统抗性，使植物获得广谱抗病能力。因此根际生防菌诱导植物产生的防护作用安全而有效，在植物病害生物防治中具有重要的应用价值。
目前应用于生物防治的芽胞杆菌种类主要有苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、多粘芽胞杆菌(Bacillus polymyxa)、蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus)、地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽胞杆菌(Bacillus pumilis)等。通过同化作用产生抗菌物质，抑制有害病原物的生长或者直接杀灭病原物，是生防芽胞杆菌防治植物病害的重要机制之一。芽胞杆菌产生的拮抗物质主要有抗生素、抗菌蛋白及挥发性抗菌物质等，其中脂肽抗生素是一个较大的类群。它们易于繁殖，适应环境能力强，具有很大的开发利用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种死亡谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)，申请人将其命名为死亡谷芽胞杆菌NBIF-001，该菌株于2015年3月6日送至中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，其保藏号为CCTCC NO：M2015087，分类命名：死亡谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)NBIF-001，地址：中国武汉武汉大学。
本发明还有一个目的在于提供了死亡谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)NBIF-001的发酵方法，方法简单，易行。
本发明的另一个目的在于提供死亡谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)NBIF-001的应用，包括在制备防治西瓜枯萎病药物中的应用；还包括在制备番茄枯萎病菌、番茄早疫病菌、禾谷镰刀菌、小麦赤霉病菌或水稻纹枯病菌抑制剂中的应用；还包括在制备防治黄瓜灰霉病药物、或防治水稻纹枯病药物中的应用；还包括在制备抑螨药物中的应用。
为了达到上述目的，本发明采取以下
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株的分离与培养：
申请人自云南香格里拉的土壤样品，通过高温筛选，获得了一株死亡谷芽胞杆菌，该菌株已于2015年3月6日送至中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，其保藏号为CCTCC NO：M2015087，分类命名：死亡谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)NBIF-001，地址：中国 武汉 武汉大学。
生物学特性：该菌株在LB琼脂平板上繁殖生长形成的菌落圆形，边缘有褶状突起，乳白色，直径3～5mm，通过镜检观察，细胞形态呈杆状。生理生化鉴定结果如下表1所示：
表1死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株生理生化鉴定
死亡谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)NBIF-001的发酵方法：将死亡谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)NBIF-001种子液按1.5％的接种量转接至200L发酵罐中，发酵培养基为NT培养基，进行发酵罐大量发酵。发酵条件：30℃，溶氧量4m3/h，通气量1:0.75，转速200rpm，pH7.0，发酵36h。
死亡谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)NBIF-001的应用，包括在制备防治西瓜枯萎病药物中的应用，包括利用该菌株的菌液对西瓜进行灌根或蘸根处理，即可达到防治西瓜枯萎病的作用；或与其他生防菌混合，制备成混合菌剂，用于防治西瓜枯萎病；包括在制备番茄枯萎病菌、番茄早疫病菌、禾谷镰刀菌、小麦赤霉病菌或水稻纹枯病菌抑制剂中的应用；还包括在制备防治黄瓜灰霉病药物、或防治水稻纹枯病药物中的应用；还包括在制备抑螨药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1.本发明提供的是一种从植物根际土壤中筛选获得对西瓜枯萎病具有拮抗作用的生防细菌菌株，低浓度下能够有效抑制西瓜枯萎病菌的生长，对西瓜枯萎病的防治具有重要意义。
2.利用本发明的死亡谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)NBIF-001(10亿个/ml)对西瓜进行灌根处理后，防效高达88.5％，进行蘸根处理后，其防效也达到了65.7％，因此是一株对西瓜枯萎病病原菌具备特异性效果的生防菌。
3.本发明提供的死亡谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)NBIF-001同时对番茄枯萎病菌、番茄早疫病菌、禾谷镰刀菌、小麦赤霉病菌或水稻纹枯病菌均有抑制作用。同时对黄瓜灰霉病和水稻纹枯病具有良好的防效，可与其他化学抑菌剂联合施用，以减少化学抑菌剂对环境的影响。
附图说明
图1是本发明的死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株的形态图。
A：死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株的菌落形态图；B：死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株的显微镜观察图。
图2是本发明的死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对西瓜枯萎病菌的抑制效果图。
图3是本发明的死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株及3种芽胞杆菌菌株对西瓜枯萎病菌的抑制效果图。
其中：图3中A：死亡谷芽胞杆菌NBIF-001(10亿个/ml)；图3中B：多粘芽胞杆菌(10亿个/ml)；图3中C：地衣芽胞杆菌(10亿个/ml)；图3中D：枯草芽胞杆菌(10亿个/ml)。
图4是本发明的死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对西瓜枯萎病的盆栽灌根防治效果图。
其中：图4中A：接种了西瓜枯萎病菌且仅用培养基灌根的西瓜苗对照；图4中B：接种了西瓜枯萎病菌且用NBIF-001菌株发酵液灌根的西瓜苗。
图5是本发明的死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对西瓜枯萎病的盆栽蘸根防治效果图。
其中：图5中A：接种了西瓜枯萎病菌且仅用培养基蘸根的西瓜苗对照；图5中B：接种了西瓜枯萎病菌且用NBIF-001菌株发酵液蘸根的西瓜苗。图5中C：接种了西瓜枯萎病菌且用地衣芽胞杆菌菌株发酵液蘸根的西瓜苗。图5中D：接种了西瓜枯萎病菌且用多粘芽胞杆菌菌株发酵液蘸根的西瓜苗。图5中E：接种了西瓜枯萎病菌且用枯草芽胞杆菌菌株发酵液蘸根的西瓜苗。图5中F：接种了西瓜枯萎病菌且用咪鲜胺溶液(500ppm)蘸根的西瓜苗。图6是本发明的死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对番茄枯萎病菌的抑制效果图。
图7是本发明的死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对黄瓜灰霉病的离体叶片防治效果图。
图8是本发明的死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对水稻纹枯病的离体叶片防治效果图。
具体实施方案
本发明实施例所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案，所述试剂或菌剂，如未特别说明，均为本领域公知或来源于商业渠道。
实施例1：
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株的分离与培养
1.细菌的分离与保存
将采自云南香格里拉的土壤样品，进行细菌分离培养与保存。
具体方法是：称取0.1g土样，分别加入灭菌去离子水至总体积为10ml，混匀后放于70℃水浴锅中加热30min，再依次取1ml继续稀释10倍、100倍、1000倍、10000倍，取稀释后的菌液2ml涂布LB(配方：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，琼脂粉20g，补充水分1L，pH 7.2，121℃灭菌30min)平板，30℃培养过夜。
分别挑取单菌落，转接入5ml LB液体培养基中，200rpm 30℃活化8-10h，用25％甘油保存在-80℃。
2、细菌的小量发酵
将活化过夜的细菌单菌落按1％的接种量转接于100ml LB液体培养基(配方：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，补充水分1L，pH 7.2，121℃灭菌30min)中，200rpm30℃振荡培养24-36h。
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株的鉴定
1、细菌的显微镜观察
挑取细菌单菌落，用2％结晶紫染色液(配置方法：溶液A：结晶紫2g，95％乙醇20ml；溶液B：草酸铵0.8g，蒸馏水80ml。A、B溶液混合后过滤)简单染色后置普通光学显微镜下观察，均为产芽胞的杆状细菌(图1)。
2、细菌总DNA的抽提
从显微观察的菌落中，挑取一个单菌落，用接种环通过无菌操作接种于5mL的LB液体培养基中，置于30℃、200rpm的摇床中培养过夜；然后通过无菌操作将50μL的培养物转移至5mL的LB液体培养基中，同样条件培养3-4小时；然后以12000rpm，0.5min离心收集菌体，用1mL STE[配方：0.1mol/L NaCl，10mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)，1mmol/L EDTA(pH8.0)]洗涤一次，加100μL溶液I[配方：1mol/L Tris-HCl(pH8.0)，0.5mol/L EDTA(pH8)，50mmol/L葡萄糖]和10μL溶菌酶(浓度：50mg/mL)，在37℃作用30min以上；加入200μL 2％的十二烷基磺酸钠(SDS)于55℃水浴30min；加入200μL 5mol/L NaCl混和，再加入500μL苯酚/氯仿/异戊醇(按体积比：25:24:1)，离心12000rpm，5min，吸取上清液，重复抽提1－2次；将上层DNA溶液转移至1.5ml离心管，加入等体积95％乙醇，室温静置5min后以12000rpm离心5min，沉淀用200μL 70％乙醇洗涤一次，冷冻抽干后溶于50μL TE溶液中。
3、PCR扩增细菌的16S rDNA
根据真细菌16S rDNA保守区设计通用引物CW34667和CW34668(BW Eckloff,et al,Acomparison of 16S ribosomal DNA sequences from five isolates of Helicobacter pylori,International Journal of Systematic Bacteriology,1994,44:320-323)进行PCR扩增。
通用引物序列如下：
CW34667:5’-CTCTCAAACTAGGACCGAGTC-3’
CW34668:5’-TTCCTCCACTAGGTRGGCGT-3’
PCR反应体系为：10×buffer 2μl，2mmol/L dNTP 1.5μl，10μmol/L通用引物各0.4μl，Taq酶1U，拮抗细菌总DNA1μl，补加灭菌去离子H2O至20μl。
PCR扩增反应程序为：第1步94℃预变性5min；第2步94℃变性1min，第3步58℃复性1min，第4步72℃延伸1.5min；第5步转到第2步继续运行28个重复；第6步72℃延伸5min。
4、PCR产物的序列测定及分析
将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳后，切下需要的DNA片段所在的琼脂糖块，使用X-gene公司DNA片段回收试剂盒回收DNA片段。将回收产物连接到大连宝生物公司的T-载体连接试剂盒所提供的pMD19-T载体上，利用CaCl2转化法将连接产物转化到大肠杆菌DH5α中。筛选阳性克隆，送至上海生物工程有限公司测序，测序结果输入NCBI，用Blastn程序交送GenBank数据库进行比较分析，鉴定该菌株属于芽胞杆菌科(Bacillaceae)芽胞杆菌属(Bacillus)，与已报道的死亡谷芽胞杆菌菌株菌株(KP994551)处于同一进化分支，申请人将其命名为NBIF-001。
该菌株已于2015年3月6日送至中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，其保藏号为CCTCC NO：M2015087，分类命名：死亡谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)NBIF-001，地址：中国武汉武汉大学。
实施例2：
死亡谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)NBIF-001的发酵方法：
1、摇瓶发酵：
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001的500mL摇瓶发酵培养基用的是NF培养基，培养基配方包括：葡萄糖25g/L，蛋白胨20g/L，KH2PO4 1g/L，MgSO4.7H2O 30mg/L，MnSO4.H2O 10mg/L，CaCl2.6H2O 20mg/L。NF液体培养基5mL中接种死亡谷芽胞杆菌NBIF-001单菌落，28℃200rpm过夜培养。第二天按照1.0％的接种量转接至500mL三角瓶中，进行摇瓶大量发酵。发酵条件：28℃，溶氧量30％，通气量1：0.5，转速200rpm，pH7.0，发酵48h。
2、发酵罐发酵：
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001的200L发酵罐发酵培养基用的是NT培养基，培养基配方包括：淀粉2％，豆粕4％，玉米浆1％，NaCl 0.5％，CaCl2.6H2O 0.01％，MgSO4.7H2O 0.02％。NF液体培养基5mL中接种死亡谷芽胞杆菌NBIF-001单菌落，28℃200rpm过夜培养。第二天按照1.5％的接种量转接至200L发酵罐中，进行发酵罐大量发酵。发酵条件：30℃，溶氧量4m3/h，通气量1:0.75，转速200rpm，pH7.0，发酵36h，放罐时孢子浓度达到109个/ml。
实施例3：
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对西瓜枯萎病菌的平板拮抗作用
在真菌生长PDA培养基中央接入直径为5mm的西瓜枯萎病菌(尖孢镰刀菌西瓜专化型，Fusarium oxysporum f.sp.Niveum)的菌丝块，随后在等距离(距离平板中央2cm)菌丝块的圆周上均匀放入直径为5mm的灭菌滤纸片，每片滤纸片上接入死亡谷芽胞杆菌NBIF-001培养液(10亿个/ml)，10μl，28℃培养箱中培养3天，测定抑菌圈平均直径为12.9mm，图2可见死亡谷芽胞杆菌NBIF-001对西瓜枯萎病菌抑制作用强。
实施例4：
不同芽胞杆菌菌株对西瓜枯萎病菌的平板拮抗作用
枯草芽胞杆菌、地衣芽胞杆菌、多粘芽胞杆菌，与死亡谷芽胞杆菌NBIF-001做抑菌对比实验。在真菌生长PDA培养基中央接入直径为5mm的菌丝(尖孢镰刀菌西瓜专化型，Fusarium oxysporum f.sp.Niveum)块，随后在等距离(距离平板中央2cm)菌丝块的圆周上均匀放入直径为5mm的灭菌滤纸片，每片滤纸片上接入各种芽胞杆菌培养液5μl(10亿个/ml)，28℃培养箱中培养3天，测定抑菌圈直径，图3可见对西瓜枯萎病菌的抑菌效果如下：
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001(11.3mm)>枯草芽胞杆菌(9mm)>多粘芽胞杆菌(8.3mm)>地衣芽胞杆菌(6.8mm)。
实施例5：
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对西瓜枯萎病的盆栽灌根防治效果
利用西瓜盆栽实验进行NBIF-001菌株对西瓜枯萎病的灌根防效验证。具体操作如下：
1、西瓜幼苗的培育：将西瓜种子用温水浸泡过夜，用70％酒精洗一遍，点播在装有培养土的培养钵中，每钵放2颗种子。在20℃温室中避光培养14d，每天浇水一次。苗子长出后，打开植物生长灯，模拟自然条件，早开灯，晚关灯。
2、西瓜幼苗的移栽：将生长至3-4叶片的西瓜幼苗移栽至花盆中，玻璃温室中继续生长1个星期。
3、生防菌的接入：将死亡谷芽胞杆菌NBIF-001(10亿个/ml)按照20ml/棵的发酵液进行西瓜灌根，设置仅用LB培养基灌根的对照处理，每个处理设置30次重复。每个星期灌根1次，共灌根2次。
4、病原菌的接种：接种生防菌2天后，进行西瓜枯萎病病原菌(尖孢镰刀菌西瓜专化型，Fusarium oxysporum f.sp.Niveum)的孢子液灌根，每棵的灌根量是25ml，孢子液浓度为105个/ml。
5、验证抑菌效果：病原菌接入2个星期后，查看防治效果(图4)，死亡谷芽胞杆菌NBIF-001的防效高达88.5％。
实施例6：
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株及其他几种芽胞杆菌和药剂对西瓜枯萎病的盆栽蘸根防治效果
利用西瓜盆栽实验进行NBIF-001菌株及其他几种芽胞杆菌和药剂对西瓜枯萎病的蘸根防效验证。具体操作如下：
1、西瓜幼苗的培育和移栽如实施例5。
2、生防菌的蘸根处理：将死亡谷芽胞杆菌NBIF-001(10亿个/ml)、地衣芽胞杆菌(10亿个/ml)、多粘芽胞杆菌(10亿个/ml)及药剂咪鲜胺(500ppm)等进行西瓜苗蘸根处理，每种菌液或药剂处理5分钟，设置仅用LB培养基灌根的对照处理，每个处理设置6次重复。
3、病原菌的接种：接种生防菌2天后，进行西瓜枯萎病病原菌(尖孢镰刀菌西瓜专化型，Fusarium oxysporum f.sp.Niveum)的孢子液灌根(每棵的灌根量是25ml)，孢子液浓度为105个/ml。
4、验证抑菌效果：病原菌接入2个星期后，查看防治效果(图5)，死亡谷芽胞杆菌防效为65.7％，地衣芽胞杆菌防效为43.2％，多粘芽胞杆菌防效为30.8％，枯草芽胞杆菌防效为28.8％，咪鲜胺(500ppm)防效为29.6％。蘸根防效结果为：死亡谷芽胞杆菌>地衣芽胞杆菌>多粘芽胞杆菌>咪鲜胺(500ppm)>枯草芽胞杆菌。
实施例7：
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对番茄枯萎病菌的平板拮抗作用
在真菌生长PDA培养基中央接入直径为5mm的番茄枯萎病菌(尖孢镰刀菌番茄专化型，Fusarium oxysporum(Schl)f.sp lycopersici[sacc]snyderetetHansen)的菌丝块，随后在等距离(距离平板中央2cm)菌丝块的圆周上均匀放入直径为5mm的灭菌滤纸片，每片滤纸片上接入死亡谷芽胞杆菌NBIF-001培养液(10亿个/ml)，10μl，28℃培养箱中培养3天，测定抑菌圈平均直径为6.5mm，图6可见死亡谷芽胞杆菌NBIF-001对番茄枯萎病菌抑制作用效果。
实施例8：
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对其他病原真菌的抑制作用
1、病原真菌的培养
真菌生长培养基用的是PDA培养基，PDA培养基制备方法为：称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，再加20g葡萄糖，充分溶解后趁热纱布过滤，分装，115℃，灭菌20min。
PDA液体培养基5mL中各接种4种病原真菌：番茄早疫病菌(Alternaria solani)、小麦赤霉病菌(Gibberella zeae)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)菌块，28℃ 200rpm培养3天。
取1ml病原真菌孢子悬液(106个/ml)、不同浓度梯度(31.25-250μl/ml)的死亡谷芽胞杆菌NBIF-001培养液(初始浓度为10亿个/ml)与100ml PDA固体培养基混合，混合液加入48深孔板中，待混合液凝固后，置于28℃培养箱中静置培养3天。3天后根据加入死亡谷芽胞杆菌NBIF-001培养液的病原真菌与加入NF液体培养基做对照的病原真菌的生长情况，查看相对抑真菌效果。
2、死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对4种不同病原真菌的抑制作用
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对小麦赤霉病菌的相对抑菌效果最好，125μl/ml浓度下，相对抑菌率为70％，对禾谷镰刀菌和水稻纹枯病菌相对抑菌效果次之，为50％，番茄早疫病菌相对抑菌率为30％(表格3)。
表3死亡谷芽胞杆菌NBIF-001发酵液对病原真菌的抑制效果a
a：相对抑制率：(-)0；(+)30％；(++)50％；(+++)70％；(++++)90％。
3、死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对黄瓜灰霉病和水稻纹枯病的离体叶片法防治效果
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对黄瓜灰霉病的离体叶片法操作步骤：剪取生长一致黄瓜叶片，制备死亡谷悬浮液，均匀喷施在黄瓜叶片中，药剂对照使用25ppm多菌灵，喷施清水作为空白对照。每个处理45个叶片，三次重复。待药液晾干后贴黄瓜灰霉病病菌片，28℃，90％湿度保湿48h后进行各处理统计，测定菌落直径。防治效果＝(对照病斑直径-处理病斑直径)/对照病斑直径-×100％。死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对黄瓜灰霉病的防治效果为82.00％，多菌灵(25ppm)的防效为83.34％(图7)。
死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对水稻纹枯病的离体叶片法操作步骤：剪取生长一致蚕豆叶片，制备死亡谷悬浮液，均匀喷施在蚕豆叶片中，药剂对照使用25ppm多菌灵，喷施清水作为空白对照。每个处理48个叶片，三次重复。待药液晾干后贴水稻纹枯病菌片，28℃，90％湿度保湿48h后进行各处理统计。分级标准0级：无病斑；1级：病斑占叶面积小于20％；2级：病斑占叶面积20％-50％；3级：病斑占叶面积50％-80％；2级：病斑占叶面积20％-50％；4级：病斑占叶面积80％以上；病情指数＝∑(各级叶片数×级别)/(调查总叶片数×最高代表级别)。
防治效果＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数×100％。死亡谷芽胞杆菌NBIF-001菌株对水稻纹枯病的防效为66.67％，多菌灵(25ppm)的防效为89.99％(图8)，如表4所示。
表4死亡谷芽胞杆菌NBIF-001发酵液对水稻纹枯病的防治效果
| 处理名称 | 病情指数 | 防效(％) |
| 死亡谷芽胞杆菌NBIF-001(108个/ml) | 31.25 | 66.67 |
| 多菌灵(25ppm) | 9.38 | 89.99 |
| 对照(CK) | 93.75 | - |
实施例9：
死亡谷芽胞杆菌菌株NBIF-001发酵液对朱砂叶螨的生测实验：
操作步骤：参照FAO(联合国粮农组织)推荐的测定害螨的标准方法-玻片浸渍法。将双面胶带剪成2-3cm长，贴在显微镜载玻片的一端，用镊子揭去胶带上的纸片，用零号毛笔挑选大小一致、体色鲜艳、行动活泼的雌成螨，将其背部粘在双面胶带上(注意：不要粘住螨足、螨须和口器)，每片粘4行，每行粘10头。在温度25℃，相对湿度85％左右的生化培养箱中放置4h后，用双目镜观察，剔除死亡或不活泼个体。药剂(为实施例2制备的发酵液冻干粉)在预试的基础上用水稀释5-7个浓度，将带螨玻片的一端浸入药液中，轻轻摇动5s后取出，迅速用吸水纸吸干螨体及其周围多余的药液。置于上述生化培养箱中，24h后用双目镜检查结果。用毛笔轻触螨体，以螨足不动者为死亡。每一浓度重复3次，另以浸渍清水作为对照。
按照上述实验步骤，死亡谷芽胞杆菌菌株NBIF-001发酵液冻干粉对朱砂叶螨的LC50值为0.0295μg/ml，结果见下表所示。LC50值的计算利用SPASS 19.0数据处理软件计算获得。
表5死亡谷芽胞杆菌菌株NBIF-001发酵液对朱砂叶螨的LC50值
Claims (8)
1.一种分离的菌株，其特征在于，所述的菌株为死亡谷芽胞杆菌（Bacillus vallismortis）NBIF-001，保藏编号为CCTCC NO：M2015087。
2.权利要求1所述菌株的发酵方法，包括将死亡谷芽胞杆菌（Bacillus vallismortis）NBIF-001种子液按1.5%的接种量转接至200 L发酵罐中，发酵培养基为NT培养基；发酵条件：30℃，溶氧量4 m3/h，通气量1:0.75，转速200 rpm，pH7.0，发酵36 h。
3.权利要求1所述的菌株在制备防治西瓜枯萎病药物中的应用。
4.权利要求1所述的菌株在制备防治黄瓜灰霉病药物中的应用。
5.权利要求1所述的菌株在制备防治水稻纹枯病药物中的应用。
6.权利要求1所述的菌株在制备抑螨药物中的应用。
7.权利要求1所述的菌株在制备真菌抑制剂中的应用；所述的真菌为番茄枯萎病菌、番茄早疫病菌、禾谷镰刀菌、小麦赤霉病菌或水稻纹枯病菌。
8.权利要求1所述的菌株在制备同时抑制两种或两种以上真菌抑制剂中的应用；所述的真菌为番茄枯萎病菌、番茄早疫病菌、禾谷镰刀菌、小麦赤霉病菌或水稻纹枯病菌中的两个或三个或四个或五个的组合。
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105802882A (zh) * | 2016-04-11 | 2016-07-27 | 江苏省农业科学院 | 一株死谷芽孢杆菌及其应用 |
| CN105907669A (zh) * | 2016-04-27 | 2016-08-31 | 山东农业大学 | 一株产挥发性抑菌气体的拮抗菌的筛选、鉴定及应用 |
| CN110157641A (zh) * | 2019-05-20 | 2019-08-23 | 黑龙江省农业科学院土壤肥料与环境资源研究所 | 一株防治玉米茎基腐病的生防细菌bv23及其应用 |
| CN111961604A (zh) * | 2020-01-21 | 2020-11-20 | 吉林农业大学 | 一种死谷芽孢杆菌sz-4产胞外抑菌蛋白用发酵培养液及其发酵方法 |
| CN112868671A (zh) * | 2021-01-15 | 2021-06-01 | 湖北省生物农药工程研究中心 | 杀柑橘害螨的死亡谷芽胞杆菌悬浮剂制备方法及应用 |
| CN112889843A (zh) * | 2021-01-25 | 2021-06-04 | 湖北省生物农药工程研究中心 | 一种防治柑橘红蜘蛛的死亡谷芽胞杆菌可湿性粉剂及应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103232952A (zh) * | 2013-03-18 | 2013-08-07 | 黑龙江省科学院微生物研究所 | 一株抑制植物病原真菌的花域芽孢杆菌 |
-
2015
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103232952A (zh) * | 2013-03-18 | 2013-08-07 | 黑龙江省科学院微生物研究所 | 一株抑制植物病原真菌的花域芽孢杆菌 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| GUOYI ZHANG ET AL.: "Systemic modification of cotton root exudates induced by arbuscular mycorrhizal fungi and Bacillus vallismortis HJ-5 and their effects on Verticillium wilt disease", 《APPLIED SOIL ECOLOGY》 * |
| PREET K. KAUR ET AL.: "Antifungal potential of Bacillus vallismortis R2 against different phytopathogenic fungi", 《SPANISH JOURNAL OF AGRICULTURAL RESEARCH》 * |
| YIU-KWOK CHAN ET AL.: "Characterization of an antifungal soil bacterium and its antagonistic activities against Fusarium species", 《CAN. J. MICROBIOL.》 * |
| 林英 等: "一株死谷芽孢杆菌的分离、鉴定及抗病促生效果初探", 《北方园艺》 * |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105802882A (zh) * | 2016-04-11 | 2016-07-27 | 江苏省农业科学院 | 一株死谷芽孢杆菌及其应用 |
| CN105802882B (zh) * | 2016-04-11 | 2019-03-22 | 江苏省农业科学院 | 一株死谷芽孢杆菌及其应用 |
| CN105907669A (zh) * | 2016-04-27 | 2016-08-31 | 山东农业大学 | 一株产挥发性抑菌气体的拮抗菌的筛选、鉴定及应用 |
| CN105907669B (zh) * | 2016-04-27 | 2019-06-28 | 山东农业大学 | 一株产挥发性抑菌气体的拮抗菌的筛选、鉴定及应用 |
| CN110157641A (zh) * | 2019-05-20 | 2019-08-23 | 黑龙江省农业科学院土壤肥料与环境资源研究所 | 一株防治玉米茎基腐病的生防细菌bv23及其应用 |
| CN110157641B (zh) * | 2019-05-20 | 2023-05-05 | 黑龙江省农业科学院土壤肥料与环境资源研究所 | 一株防治玉米茎基腐病的生防细菌bv23及其应用 |
| CN111961604A (zh) * | 2020-01-21 | 2020-11-20 | 吉林农业大学 | 一种死谷芽孢杆菌sz-4产胞外抑菌蛋白用发酵培养液及其发酵方法 |
| CN111961604B (zh) * | 2020-01-21 | 2021-09-28 | 吉林农业大学 | 一种死谷芽孢杆菌sz-4产胞外抑菌蛋白用发酵培养液及其发酵方法 |
| CN112868671A (zh) * | 2021-01-15 | 2021-06-01 | 湖北省生物农药工程研究中心 | 杀柑橘害螨的死亡谷芽胞杆菌悬浮剂制备方法及应用 |
| CN112868671B (zh) * | 2021-01-15 | 2021-08-03 | 湖北省生物农药工程研究中心 | 杀柑橘害螨的死亡谷芽胞杆菌悬浮剂制备方法及应用 |
| CN112889843A (zh) * | 2021-01-25 | 2021-06-04 | 湖北省生物农药工程研究中心 | 一种防治柑橘红蜘蛛的死亡谷芽胞杆菌可湿性粉剂及应用 |
| CN112889843B (zh) * | 2021-01-25 | 2021-09-24 | 湖北省生物农药工程研究中心 | 一种防治柑橘红蜘蛛的死亡谷芽胞杆菌可湿性粉剂及应用 |
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