CN103981103A - Dse菌株j-n3及其在铁皮石斛生产上的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了DSE菌株J-N3及其在铁皮石斛生产上的应用，所述菌株为Phialophorafinlandia.，其保藏号为：CGMCCNo.9113。利用该菌株接种铁皮石斛组培苗45d后生物量比对照增加了18.9%，接种盆栽铁皮石斛180d后植株生物量比空白对照增加了16.2%，株高增加了15.5%，茎径增加了6.3%。该菌株可应用于铁皮石斛生产专用微生物菌剂和生物有机肥的开发，提高铁皮石斛的成活率和产量，对促进铁皮石斛规模化生产具有重要意义，具有广阔的应用前景。

Description

DSE菌株J-N3及其在铁皮石斛生产上的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及能促进铁皮石斛生长的DSE菌株J-N3及其在铁皮石斛生产上的应用。 

背景技术

铁皮石斛是一种名贵中草药材，由于铁皮石斛的生长除了对气候和土壤环境要求较高外，在自然界中其生长还需要共生真菌的参与，人工栽培往往成活率较低，生长缓慢，生长周期长，难以规模化种植。 

深色有隔内生真菌(Dark septate endophyte，DSE)广泛地存在于植物根的表皮、皮层甚至维管束组织的细胞内或细胞间隙，而对宿主植物无致病性的真菌。(张玉洁.2010.植物深色有隔内生真菌(DSE)的研究进展[J].文山学院学报，23(1):145-150.)。许多研究表明DSE与宿主互惠共生，赋予植物优良生长性状，能提高宿主抗病虫能力及在胁迫环境中的抗逆性(刘茂军等.深色有隔内生真菌(DSE)研究进展[J].菌物学报，2009,28(6):888-894)。通过建立“铁皮石斛-DSE”高效共生体系，可促进铁皮石斛生长，缩短生长周期，以促进铁皮石斛规模化种植。 

发明内容

本发明提供一种DSE菌株J-N3及其在铁皮石斛生产上的应用。 

本发明所述的DSE菌株J-N3为Phialophora finlandia.，该菌株已于2014年4月29日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，其地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其保藏编号为：CGMCC No.9113。 

DSE菌株J-N3在铁皮石斛组培苗生产上的应用，包括以下步骤： 

步骤A：将供试菌株活化后接种于燕麦培养基中，培养待菌落长大后备用； 

步骤B：选择长势一致的无菌铁皮石斛组培苗移栽至平板菌落上，放入组培瓶中培养。 

优选的，所述步骤A中，燕麦培养基包括：燕麦粉8-12g/L，琼脂15-18g/L，MgSO₄·7H₂O1-2g/L，KH₂PO₄1-2g/L，NaNO₃1-2g/L。 

优选的，所述步骤B中，培养的条件为：温度为25℃，光照强度为180μmol m^-2s^-2，光照时间为16h/d，培养时间为45d。 

DSE菌株J-N3在铁皮石斛盆栽苗或杯苗在生产上的应用，包括以下步骤： 

步骤A′：将铁皮石斛组培苗，移栽至育苗盘或培养杯中，移栽定殖后浇菌液； 

步骤B′：在马铃薯葡萄糖液体培养基PDB中接入菌丝块，振荡培养后将培养物打碎制备成菌液，将菌液灌根铁皮石斛苗。 

优选的，所述步骤A′中，育苗盘或培养杯中的培养基质为树皮和木屑，树皮和木屑的体积比为3:1。 

优选的，所述步骤A′中，育苗盘或培养杯中的培养基质为水草。 

优选的，所述步骤B′中，马铃薯葡萄糖液体培养基PDB包括马铃薯200g，葡萄糖20g，水1000mL。 

本发明的有益效果是：通过筛选能显著促进铁皮石斛生长的DSE真菌，建立“铁皮石斛-DSE”高效共生体系，提高铁皮石斛的产量，可用于铁皮石斛专用菌肥的开发。该菌株可应用于铁皮石斛专用微生物菌剂的生产和生物有机肥的开发，对保护生态环境具有重要意义，具有广阔的应用前景。 

附图说明

图1是本发明实施例1的效果对照图。 

图2是本发明实施例3的效果对照图。 

具体实施方式

下面结合附图，对本发明的较优的实施例作进一步的详细说明。 

实施例1 

本发明菌株对铁皮石斛组培苗的促生效果。 

将供试菌株活化后接种于燕麦培养基(燕麦粉8-12g/L，琼脂15-18g/L，MgSO₄·7H₂O1-2g/L，KH₂PO₄1-2g/L，NaNO₃1-2g/L)上，每培养皿接种3个菌块，培养10d待菌落长大后备用。选择长势一致的无菌铁皮石斛组培苗移栽至菌落上，在每个平板的3个菌落上分别移栽3株组培苗，放入组培瓶中，于22-28℃，光照强度为180μmol m^-2s^-2，光照时间为每天16h的培养箱中共培养45d后，将根部培养基洗净后在50℃烘箱中烘烤3d以上称量干重。以未接种菌株的处理为对照，结果如图1所示，接种了本菌株的铁皮石斛的生物量明显优于对照组。 

实施例2 

本发明菌株对铁皮石斛盘栽苗的接种效应。 

选取长势一致的铁皮石斛组培苗，移栽至育苗盘中(长50×宽50×高6cm)，每盆种植9丛，每丛3株苗，培养基质为树皮和木屑，树皮和木屑的体积比为3:1，移栽成活后浇菌液。 

在马铃薯葡萄糖液体培养基中接入菌丝块，于25℃转速为100-150rpm摇床中振荡培养14d后，用灭菌纱布过滤收集菌丝团，用灭菌水冲洗数次后，将菌丝团打碎配制成浓度为5×10⁵cfu/mL的菌液。每丛铁皮石斛苗灌根25-35mL菌液，每隔10-15d灌根一次，共灌根2-3次，灌根结束后6个月调查株高、干重等生长指标。以未浇菌液的处理为对照，结果见表1所示。 

表1 

处理	林高(cm)	茎径(cm)	芽数(个)	鲜重(cm)	干重(mg)
						J-N3	7.7	3.0	2	504.7	116.9
J-N3	7.9	3.0	3	625.1	135.2
						J-N3	8.5	3.0	4	560.0	121.1
J-N3	5.6	3.2	2	482.3	96.7
						对照	4.9	2.5	1	426.0	83.0

实施例3 

本发明菌株对大棚铁皮石斛杯苗的接种效应。 

选取长势一致的铁皮石斛苗，移栽至培养杯中(直径4.5cm×高4.5cm)，每杯种植3株苗，培养基质为水草，移栽成活后浇菌液。 

菌液制备方法同实施例2，每杯铁皮石斛苗灌根25-35mL菌液，每隔10-15d灌根一次，共灌根2-3次，灌根结束后6个月调查株高、干重等生长指标。以未浇菌液的处理为对照，结果见表2所示。由图2可得知，铁皮石斛接种DSE菌株J-N3六个月后各生长指标明显好于未接种对照。 

表2 

由此可以得出，利用该菌株接种铁皮石斛组培苗45d后生物量比对照增加了18.9％，接种大棚盆栽铁皮石斛180d后植株生物量比空白对照增加了16.2％，株高增加了15.5％，茎径增加了6.3％。该菌株可应用于铁皮石斛专用微生物菌剂的生产和生物有机肥的开发，对保护生态环境，促进铁皮石斛规模化生产具有重要意义，具有广阔的应用前景。 

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱 离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。 

Claims (9)

1.DSE菌株J-N3，所述菌株为Phialophora finlandia.，其保藏号为：CGMCC No.9113。

2.权利要求1所述DSE菌株在铁皮石斛盆栽苗或杯苗生产上的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

步骤A：将供试菌株活化后接种于燕麦培养基中，培养待菌落长大后备用；

步骤B：选择长势一致的无菌铁皮石斛组培苗移栽至平板菌落上，放入组培瓶中培养。

4.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述步骤B中，培养的条件为：温度为22-28℃，光照强度为180 μmol m^-2s^-2，光照时间为16h/d，培养时间为45d。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述燕麦培养基包括：燕麦粉8-12 g/L，琼脂15-18 g/L，MgSO₄·7H₂O 1-2 g/L，KH₂PO₄ 1-2 g/L，NaNO₃ 1-2 g/L。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

步骤A′：将铁皮石斛组培苗，移栽至育苗盘或培养杯中，移栽定殖后浇菌液；

步骤B′: 在马铃薯葡萄糖液体培养基PDB中接入菌丝块，振荡培养后将培养物打碎制备成菌液，将菌液灌根铁皮石斛苗。

7.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述步骤A′中，所述育苗盘或培养杯中的培养基质为树皮和木屑，所述树皮与木屑的体积比为3:1。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述步骤A′中，所述育苗盘或培养杯中的培养基质为水草。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述步骤B′中，所述马铃薯葡萄糖液体培养基PDB包括马铃薯200g，葡萄糖20g，水1000mL。