CN104593273A - 一种铁皮石斛内生真菌菌株nt43j06及其应用 - Google Patents
一种铁皮石斛内生真菌菌株nt43j06及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104593273A CN104593273A CN201510043952.6A CN201510043952A CN104593273A CN 104593273 A CN104593273 A CN 104593273A CN 201510043952 A CN201510043952 A CN 201510043952A CN 104593273 A CN104593273 A CN 104593273A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nt43j06
- herba dendrobii
- fungal
- bacterial strain
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
- C05F11/00—Other organic fertilisers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
- C05F11/00—Other organic fertilisers
- C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06及其应用,所述菌株NT43J06在分类学上属于黑痣菌属,命名为Phyllachora sp.,已于2014年7月9日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC NO.M2014333;该菌株的基因组18s rDNA碱基序列如SEQ ID No.1所示。实验证明:采用本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06制备的真菌诱导子培养基和生物菌肥均对铁皮石斛的生长具有明显的促进作用,可用于铁皮石斛的人工种植中,以提高铁皮石斛的产量,具有显著的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种铁皮石斛内生真菌菌株及其应用,属于微生物技术领域。
背景技术
植物内生真菌是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的真菌,与菌根真菌只存在于植物根系不同,内生真菌在植株的地下和地上部分的任何组织器官都能存在(Faeth&Fagan,2002)。研究发现:植物内生真菌不仅包括了互惠共利的和中性的内共生真菌,也包括了那些潜伏在宿主体内的病原菌;有的内生真菌能促进宿主植物的生长、增强宿主的抗逆性、促进宿主植物活性成分的合成和积累,在提高植物产量和质量中可以起到积极作用。因此,内生真菌与植物的互作研究己日益受到研究者的关注,并成为内生真菌研究领域的国际热点。
铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)属兰科附生草本植物,是我国传统名贵中药,广泛运用于慢性咽炎、闭塞性周围血管病、白内障、青光眼等疾病的治疗药方及各种保健品中,市场需求量很大,长期无节制的采挖造成其资源枯竭,已无野生资源可用。近年来,铁皮石斛的人工种植已在浙江、云南等地大规模开展,成为一个新兴产业。因此,研究筛选具有明显促生作用的铁皮石斛内生真菌菌株,将对铁皮石斛的大规模人工种植具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有明显促生作用的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06及其在铁皮石斛生长中的应用。
本发明所提供的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06,在分类学上属于黑痣菌属(Phyllachora),命名为Phyllachora sp.,已于2014年7月9日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC NO.M2014333;该菌株的基因组18s rDNA碱基序列如SEQ ID No.1所示。
本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06是采用内生真菌分离纯化技术从铁皮石 斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)植物活体中分离、纯化得到。
本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06可通过制备成真菌诱导子培养基或生物菌肥应用于铁皮石斛的生长中。
由本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06制备真菌诱导子培养基的方法,包括如下步骤:菌种活化→种子液培养→发酵培养→将发酵液真空抽滤,将菌丝体与液氮研磨液与滤液合并后灭菌,得到真菌诱导子→将真菌诱导子接入MS培养基中,即得真菌诱导子培养基。
作为优选方案,真菌诱导子按5%~15%体积的量接入MS培养基中。
由本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06制备生物菌肥的方法,包括如下步骤:菌种活化→种子液培养→发酵培养→将发酵液与树皮粉搅拌混匀,即得生物菌肥。
作为优选方案,按每50g树皮粉加5~15mL发酵液搅拌混匀。
作为优选方案,上述的菌种活化采用试管斜面培养,培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(固体PDA),于28±1℃活化培养72小时。
作为优选方案,上述的种子液培养采用马铃薯葡萄糖液体培养基(液体PDA),于28±1℃摇床培养72小时。
作为优选方案,上述的发酵培养采用马铃薯葡萄糖液体培养基(液体PDA),于28±1℃发酵培养7天,接种量为5V%~15V%。
实验证明:采用本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06制备的真菌诱导子培养基和生物菌肥均对铁皮石斛的生长具有明显的促进作用,可用于铁皮石斛的人工种植中,以提高铁皮石斛的产量,具有显著的应用价值。
附图说明
图1为本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06在100倍显微镜下观察到的菌丝形态图。
图2为本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06在电子显微镜下观察到的菌丝形态图。
图3为本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06在电子显微镜下观察到的孢子形态图。
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解,在阅读了本发明讲授的内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件、实验室手册中所述的条件或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06于2014年7月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学,邮编430072),保藏号为CCTCC NO.M2014333;该菌株的基因组18s rDNA碱基序列如SEQ ID No.1所示。
所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06的固体培养特征为:
在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上于28±1℃培养,最初气生菌丝无色,渐变淡黄色;菌落呈淡黄棕色,周围稍淡,粘稠,边缘整齐,菌丝体短细,背面稍深于前面的黄棕色。
所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06的液体培养特征为:
a)培养基PDA,摇瓶培养7天,培养温度为28±1℃;
b)发酵培养特征:培养第1-2天,未见明显生长现象;培养第3天,有白色菌丝出现;培养第4-5天,形成直径1-2mm白色菌丝球;培养第6天,形成直径2-4mm白色菌丝球;培养第7天,菌丝球增大到5-6mm。
本发明所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06的形态特征为:
1、无性世代,菌丝细而密,可见典型根须形态,5根均多,根须末端可产孢子囊,孢子囊中最多可含8个孢子,见大量游离孢子囊。
2、有性世代,未发现。
实施例2
1)取本发明的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06菌种,在无菌条件下,用接种针挑取少量菌丝,接入已灭菌的固体PDA培养基试管,于28±1℃活化培养72小时;
2)取活化培养后的菌种,在无菌条件下,转接入已灭菌的液体PDA种子培养基中,于28±1℃、140rpm摇床培养72小时,得种子液;
3)在无菌条件下,按10V%(体积百分比)接种量接入500mL液体PDA培养基中,于28±1℃、140rpm摇床培养7天;
4)将发酵液真空抽滤,将菌丝体与液氮的研磨液与滤液合并后于121℃灭菌20分钟,得到真菌诱导子;
5)将真菌诱导子按10%体积的量接入MS培养基中,得到真菌诱导子培养基;
6)在无菌条件下,接苗于对照(MS)培养基和真菌诱导子培养基中,无菌室培养,记录好苗的数量,根数目及高度;
7)定期观察,培养6个月后,对原球茎、苗进行称重,并计算增苗棵数,与对照组进行组间分析;观察结果见表1所示;
表1 真菌诱导子对铁皮石斛苗增殖分化的影响
菌株/对照 | 原球茎增重(g) | 苗增重(g) | 总增重(g) | 苗分化率(倍数) |
NT43J06 | 2.449±0.805 | 7.249±0.843 | 10.298±1.471 | 5.60±0.56 |
空白对照 | 3.153±1.203 | 4.492±0.611 | 7.645±1.536 | 3.93±0.45 |
由表1结果可见:由铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06制备的真菌诱导子具有明显促进铁皮石斛苗的增重和分化作用。
8)取诱导组铁皮石斛苗及对照组铁皮石斛苗,提取总RNA,进行荧光定量PCR,对诱导组铁皮石斛苗进行相关基因表达分析,选取基因PAL;iaaM;检测结果见表2和表3所示;
表2 PAL基因表达变化
组别 | 2-ΔΔct |
空白对照 | 1.0060±0.1185 |
NT43J06 | 6.3736±0.5035 |
表3 iaaM基因表达变化
组别 | 2-ΔΔct |
空白对照 | 1.0026±0.0875 |
NT43J06 | 3.7884±0.3097 |
由表2和表3结果可见:诱导组铁皮石斛苗中PAL基因表达和iaaM基因均与空白组相比有明显增强(P<0.05)。
Claims (10)
1.一种铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06,其特征在于:该菌株在分类学上属于黑痣菌属,命名为Phyllachora sp.,已于2014年7月9日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC NO.M2014333;该菌株的基因组18s rDNA碱基序列如SEQ ID No.1所示。
2.权利要求1所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06在铁皮石斛生长中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于:将铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06制备成真菌诱导子培养基或生物菌肥应用于铁皮石斛的生长中。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,由所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06制备真菌诱导子培养基的方法包括如下步骤:菌种活化→种子液培养→发酵培养→将发酵液真空抽滤,将菌丝体与液氮研磨液与滤液合并后灭菌,得到真菌诱导子→将真菌诱导子接入MS培养基中,即得真菌诱导子培养基。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于:真菌诱导子按5%~15%体积的量接入MS培养基中。
6.如权利要求3所述的应用,其特征在于,由所述的铁皮石斛内生真菌菌株NT43J06制备生物菌肥的方法包括如下步骤:菌种活化→种子液培养→发酵培养→将发酵液与树皮粉搅拌混匀,即得生物菌肥。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于:按每50g树皮粉加5~15mL发酵液搅拌混匀。
8.如权利要求4或6所述的应用,其特征在于:所述的菌种活化采用试管斜面培养,培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基,于28±1℃活化培养72小时。
9.如权利要求4或6所述的应用,其特征在于:所述的种子液培养采用马铃薯葡萄糖液体培养基,于28±1℃摇床培养72小时。
10.如权利要求4或6所述的应用,其特征在于:所述的发酵培养采用马铃薯葡萄糖液体培养基,于28±1℃发酵培养7天,接种量为5V%~15V%。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510043952.6A CN104593273A (zh) | 2015-01-28 | 2015-01-28 | 一种铁皮石斛内生真菌菌株nt43j06及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510043952.6A CN104593273A (zh) | 2015-01-28 | 2015-01-28 | 一种铁皮石斛内生真菌菌株nt43j06及其应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104593273A true CN104593273A (zh) | 2015-05-06 |
Family
ID=53119332
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510043952.6A Pending CN104593273A (zh) | 2015-01-28 | 2015-01-28 | 一种铁皮石斛内生真菌菌株nt43j06及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104593273A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107904177A (zh) * | 2017-07-26 | 2018-04-13 | 华南理工大学 | 一种铁皮石斛内生真菌菌株及其产生的胞外多糖以及该胞外多糖的提取方法与应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102776127A (zh) * | 2010-05-05 | 2012-11-14 | 中国医学科学院药用植物研究所 | 一株对石斛属植物软腐病有防治作用的内生真菌 |
CN103497900A (zh) * | 2013-10-09 | 2014-01-08 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种瘤菌根菌菌株及其应用和菌根真菌接种法 |
CN103981102A (zh) * | 2014-05-23 | 2014-08-13 | 广西壮族自治区农业科学院微生物研究所 | Dse菌株24l-4及其在铁皮石斛生产上的应用 |
CN103981103A (zh) * | 2014-05-23 | 2014-08-13 | 广西壮族自治区农业科学院微生物研究所 | Dse菌株j-n3及其在铁皮石斛生产上的应用 |
-
2015
- 2015-01-28 CN CN201510043952.6A patent/CN104593273A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102776127A (zh) * | 2010-05-05 | 2012-11-14 | 中国医学科学院药用植物研究所 | 一株对石斛属植物软腐病有防治作用的内生真菌 |
CN103497900A (zh) * | 2013-10-09 | 2014-01-08 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种瘤菌根菌菌株及其应用和菌根真菌接种法 |
CN103981102A (zh) * | 2014-05-23 | 2014-08-13 | 广西壮族自治区农业科学院微生物研究所 | Dse菌株24l-4及其在铁皮石斛生产上的应用 |
CN103981103A (zh) * | 2014-05-23 | 2014-08-13 | 广西壮族自治区农业科学院微生物研究所 | Dse菌株j-n3及其在铁皮石斛生产上的应用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
姚领爱: "铁皮石斛资源优化及内生真菌促铁皮石斛苗生长相关研究", 《万方学位论文数据库》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107904177A (zh) * | 2017-07-26 | 2018-04-13 | 华南理工大学 | 一种铁皮石斛内生真菌菌株及其产生的胞外多糖以及该胞外多糖的提取方法与应用 |
CN107904177B (zh) * | 2017-07-26 | 2020-12-22 | 华南理工大学 | 一种铁皮石斛内生真菌菌株及其产生的胞外多糖以及该胞外多糖的提取方法与应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101486970B (zh) | 一种真菌菌株及其用途 | |
US20220369648A1 (en) | Endophytic falciphora oryzae fo-r20 and its application | |
CN107058160B (zh) | 一株花生根际解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
CN104195055A (zh) | 一种尖孢镰刀菌及其在铁皮石斛抗叶斑病中的应用 | |
CN105199996B (zh) | 一种用于防治番茄灰霉病的解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
CN105176894B (zh) | 一种防治番茄灰霉病的解淀粉芽孢杆菌及其微生物菌剂 | |
CN104560827A (zh) | 一种防治烟草青枯病的生防放线菌菌株及其应用 | |
CN103642734A (zh) | 一种甜菜内生微杆菌及其用于甜菜病害生物防治中的应用 | |
CN110591957A (zh) | 一株耐盐苜蓿根瘤菌及其应用 | |
CN104593274A (zh) | 一种铁皮石斛内生真菌菌株nt04y01及其应用 | |
CN114134070A (zh) | 一株芽孢杆菌及其在植物防病促生长中的应用 | |
CN112342173A (zh) | 贝莱斯芽孢杆菌及其应用 | |
CN109971656B (zh) | 一株生姜内生绿色木霉及其应用 | |
CN104630073A (zh) | 一种铁皮石斛内生真菌菌株nt66g01及其应用 | |
CN110343621A (zh) | 一种棘孢木霉菌株及其应用 | |
CN109370923B (zh) | 一种维持金针菇菌种活力的方法 | |
CN108587969B (zh) | 可防治棉花黄萎病的大丽轮枝菌的菌株hcx-01的制备及其应用 | |
CN115287194B (zh) | 一种药用野生稻内生真菌yya21及其应用 | |
CN104593273A (zh) | 一种铁皮石斛内生真菌菌株nt43j06及其应用 | |
CN104593272A (zh) | 一种铁皮石斛内生真菌菌株nt12j04及其应用 | |
CN112877220B (zh) | 一种硬毛木霉及其应用 | |
CN104357345B (zh) | 一种拮抗油茶多种新炭疽病原菌的菌株及其应用方法 | |
CN103834579B (zh) | 内生真菌菌株ycef199及其用途 | |
CN103849572A (zh) | 内生真菌菌株ycef005及其用途 | |
CN102876580B (zh) | 能促进文山红柱兰组培苗生长的丛赤壳科属真菌的分离与应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20150506 |