CN115287194B - 一种药用野生稻内生真菌yya21及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种药用野生稻内生真菌YYA21及其应用，属于微生物应用技术领域。所述药用野生稻内生真菌YYA21保藏号为CCTCC NO:M 2022102，其分类命名为Acrocalymma vagum。本发明提供了一株新的Acrocalymma vagum内生真菌，通过将内生真菌YYA21定殖于水稻根部组织，可以显著提升水稻种苗素质、增加水稻产量。内生真菌YYA21对水稻显著的共生互作效果使其在农业领域内的推广应用具有巨大价值。

Description

一种药用野生稻内生真菌YYA21及其应用

技术领域

本发明涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种药用野生稻内生真菌YYA21及其在提高水稻种苗素质和/或产量中的应用。

背景技术

近年来随着人们对植物微生态系统的深入认识，发现植物的表型除了受自身遗传特性的影响外，还受周围有益微生物的积极调控。植物与内生真菌的共生互作就是其中典型的例子。

植物内生真菌是指至少生活史的一部分能侵染定殖在健康植物组织中，宿主无明显病症的一类真菌，普遍存在于生态系统中，且与宿主植物进行着非常稳定的长期互作关系。在植物内生真菌与寄主形成互惠共生关系的过程中，一方面植物内生真菌从寄主中获取水分、矿物营养等生长所需的养分，另一方面植物内生真菌赋予植物丰富多样的生物学功能，例如促进植物生长，提高植物生物量，增强寄主植物的抗生物和非生物胁迫的能力。

任颖等从药用植物根际土样和根样中分离到深色有隔内生真菌Acrocalymmavagum，该菌株可定殖于黄芪根组织，促进黄芪地上生长、根系发育及生物量(深色有隔内生真菌和绿色木霉对黄芪促生抗旱研究，河北大学，2019年)。

随着对内生真菌研究的逐渐关注，植物与内生真菌共生互作机制研究已成为新的国际研究热点。水稻作为我国最重要的粮食作物，实现水稻的稳定高产是我国可持续发展的基础。利用野生稻内生真菌重建有益的水稻-内生真菌共生体系是促进水稻生长、提高产量与抗逆性的有效途径之一。因此建立野生稻内生真菌与水稻的互惠共生体，对于提高水稻产量以及对于农业的可持续发展具有重要的意义。

专利文献CN 101486970 A公开从野生稻(Oryza granulata)中分离到一株瓶霉属内生真菌R5-6-1，该菌株接种水稻后，表现出水稻长势旺，苗壮，根系颜色呈褐色，水稻干重显著增加，表明该菌株能促进水稻生长和增加生物量。

水稻作为粮食作物，其可食用部分为种子。前期研究表明，通过重建水稻-内生真菌共生体系以促进水稻植株生长，并不能必然提高水稻产量。因此，挖掘更多野生稻内生真菌资源，利用与水稻共生互作增加水稻产量是本领域技术人员需要解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一株新的内生真菌，利用与水稻的共生互作来实现水稻的稳定高产。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明从云南药用野生稻根系中分离得出一株Acrocalymma属的内生真菌，其ITS序列如SEQ ID No.1所示，其形态特征为：在PDA平板上菌落生长缓慢，25℃生长10天后菌落直径为5cm；气生菌丝不发达，匍匐状贴于培养基表面，菌落为灰白色，菌丝透明，宽0.6-1.0μm；分生孢子球状，无色，无隔膜，1.0-9.0×1.0-0.9μm。鉴定该菌株属于真菌界(Fungi)，子囊菌门(Ascomycota)，座囊菌纲(Dothideomycetes)，格孢菌目(Pleosporales)，畸腔菌科(Morosphaeriaceae)，Acrocalymma属，并将其命名为Acrocalymma vagum YYA21，于2022年1月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉、武汉大学，保藏号CCTCCNO:M 2022102。

内生真菌YYA21的培养条件为：将内生真菌YYA21菌丝接种于PDA固体培养基，25℃黑暗培养7-10天。

本发明还提供了内生真菌YYA21的两种制剂形式，一种是将内生真菌制成种衣剂，所述种衣剂对作物种子进行包衣，育苗过程中，内生真菌YYA21定殖于植株苗根部；另一种是将内生真菌制成固体菌肥，所述固体菌肥混合到育苗基质中，萌发的作物种子播种于含有内生真菌YYA21的育苗基质中，育苗过程中，内生真菌YYA21定殖于植株苗根部。

进一步的，本发明提供了一种药用野生稻内生真菌YYA21种衣剂，其制备方法包括：将保藏号为CCTCC NO:M 2022102的药用野生稻内生真菌YYA21菌丝与壳聚糖溶液混匀后制得种衣剂。

优选的，将药用野生稻内生真菌YYA21菌株接种于PDA培养基中，25℃黑暗培养，再接种于液体发酵培养基中，25℃培养，获得内生真菌YYA21菌丝；然后菌丝与质量百比分浓度为1％的壳聚糖溶液按照1g：10L的比例混合制得种衣剂；菌丝质量以干重计。1％壳聚糖溶液由1g壳聚糖溶于100mL的1％醋酸溶液制得。

所述液体发酵培养基以质量百分比计，每升含0.4％豆饼粉、1％玉米粉、0.05％硫酸镁、0.1％磷酸氢二钾。

进一步的，本发明提供了一种药用野生稻内生真菌YYA21固体菌肥，其制备方法包括：将保藏号为CCTCC NO:M 2022102的药用野生稻内生真菌YYA21接种于液体发酵培养基中，培养获得发酵液，再将发酵液接种于无菌大麦粒上，黑暗培养至菌丝生长布满麦粒，制得YYA21固体菌肥；

所述液体发酵培养基以质量百分比计，每升含0.4％豆饼粉、1％玉米粉、0.05％硫酸镁、0.1％磷酸氢二钾。

优选的，发酵液与无菌大麦粒按照100mL：500g的比例混合，25℃黑暗培养至菌丝生长布满麦粒，即得YYA21固体菌肥。

本发明研究表明，来源于药用野生稻的内生真菌YYA21定殖于水稻根部组织后，能够显著提升水稻种苗素质，即显著提高种苗鲜重、干重与叶绿素含量等。

因此，本发明提供了药用野生稻内生真菌YYA21在提高水稻种苗素质中的应用。

进一步的，所述应用包括：将内生真菌YYA21制备成种衣剂，再与水稻种子混合，置于阴凉通风处晾干制得包衣种子，然后包衣种子经过育秧获得水稻种苗；

或者，将内生真菌YYA21制备成固体菌肥，再混合到育苗基质中制得混合基质，水稻种子萌发后播种于混合基质中，育苗培养获得水稻种苗。

优选的，制备包衣种子时，种衣剂与消毒后的种子按照1mL:2.5g的比例混匀，包衣后置于15-28℃的阴凉通风处晾干；

制备混合基质时，固体菌肥与育苗基质按照质量比1:9进行混合。

本发明研究表明来源于药用野生稻的内生真菌YYA21定殖于水稻根部组织后，对水稻具有增产效果，实际增产达到5.06％(种衣剂)，6.93％(菌肥)。

因此，本发明提供了药用野生稻内生真菌YYA21在提高水稻产量中的应用。

进一步的，所述应用包括：将内生真菌YYA21制备成种衣剂，再与水稻种子混合，置于阴凉通风处晾干制得包衣种子，然后将包衣种子通过直播的方式播种于大田，培育至收获；

或者，将内生真菌YYA21制备成固体菌肥，再混合到育苗基质中制得混合基质，水稻种子萌发后播种于混合基质中育苗，然后水稻秧苗移栽至大田，培育至收获。

本发明具备的有益效果：

本发明从药用野生稻中分离得到一株新的内生真菌Acrocalymma vagum YYA21，通过将该菌株定殖于水稻根部组织，可以显著提升水稻种苗素质、增加水稻产量。内生真菌YYA21对水稻显著的共生互作效果使其在农业领域内的推广应用具有巨大价值。

附图说明

图1为内生真菌YYA21菌落形态图。

图2为内生真菌YYA21菌株的菌丝形态，其中(A)为光学显微镜下的菌丝形态，(B)为共聚焦显微镜下的菌丝形态。标尺为10μm。

图3为内生真菌YYA21菌株在光学显微镜下分生孢子形态。

图4为实施例2中内生真菌YYA21包衣剂对水稻秧苗产生影响的照片，其中(A)为对照组，未使用包衣剂；(B)为处理组，使用内生真菌YYA21包衣剂。

图5为实施例2中内生真菌YYA21包衣剂对水稻秧苗素质的影响，水稻秧苗素质包括：叶龄、株高、茎基宽、地上部鲜重、地下部鲜重、地上部干重、地下部干重、叶绿色SPAD、第一叶鞘长度、第二叶鞘长度、根长、根数。显著性采用t-test，*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001，****表示P<0.0001。

图6为实施例3中内生真菌YYA21固体菌肥对水稻秧苗影响的照片。左：对照组(Control)，未使用内生真菌YYA21固体菌肥；右：处理组(A21-1-1)，采用内生真菌YYA21固体菌肥。

图7为实施例3中内生真菌YYA21固体菌肥对水稻秧苗素质的影响。显著性采用t-test，*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001，****表示P<0.0001。

图8为内生真菌YYA21在水稻根部的定殖。

图9为实施例4中内生真菌YYA21包衣剂对水稻谷粒的影响，左：对照组，未使用包衣剂；右：处理组，采用内生真菌YYA21包衣剂。

图10为实施例5中内生真菌YYA21固体菌肥对水稻谷粒的影响，左：对照组，未使用内生真菌YYA21固体菌肥；右：处理组，采用内生真菌YYA21固体菌肥。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。以下实施例仅用于说明本发明，不用来限制本发明的适用范围。

若无特别说明，实施中采用的技术手段均为本领域常规技术手段，试剂均为市售商品。

实施例1菌株YYA21的分离和鉴定

一、菌株YYA21的分离纯化

菌株YYA21分离自云南药用野生稻(从中国云南省西双版纳采集)根系。

具体分离方法为：首先，用自来水连续冲洗药用野生稻根系，仔细去除土壤颗粒和附属物。选取健康根组织，进行表面消毒处理，75％乙醇浸泡1-2min，1％次氯酸钠4-5min，再用无菌去离子水清洗3次。将根组织块切成0.5cm小段，然后放入2％麦芽粉琼脂培养基(MEA，malt extract agar，OXOID；培养基中加入50mg/L的氯霉素抑制内生细菌的生长)平板上孵育，25℃黑暗培养。培养至第5天，从组织切口边缘处长出内生真菌菌丝，用接种针小心将其挑出后转接到新鲜PDA培养基上纯化培养并记录菌株编号YYA21。

PDA培养基：葡萄糖20g/L，马铃薯200g/L，琼脂15g/L。根据待配培养基的体积称取所需马铃薯(200g/L)，水煮后捣碎溶解过滤，加入葡萄糖和琼脂，121℃高压蒸汽灭菌20min。

二、菌株鉴定

1、形态鉴定

YYA21菌株经过分离纯化后，接种到PDA培养基上，25℃培养7天。用挑针挑取少量菌体，制成玻片，在显微镜下观察，测量，拍照。

结果显示，其形态特征为：菌株YYA21在PDA平板上菌落生长缓慢，25℃生长10天后菌落直径为5cm；气生菌丝不发达，匍匐状贴于培养基表面，菌落为灰白色(图1)，菌丝透明，宽0.6-1.0μm(图2)；分生孢子球状，无色，无隔膜，1.0-9.0×1.0-0.9μm(图3)。

2、分子鉴定

(1)DNA提取

①在PDA平板上25℃培养YYA21菌株7天后，用牙签刮取平板上的菌丝，放入已灭菌的含有300μL提取缓冲液(1M KCl，100mM Tris-HCl，10mM EDTA，pH＝8.0；)1.5mL离心管中；

②用电磨机研碎，剧烈震荡2min；

③10000rpm离心10min；

④吸取上清液，转移至另一新的离心管中，弃沉淀；

⑤在上清液中加入等体积的异丙醇(分析纯)，轻轻颠倒混匀数次后，12000rpm离心10min，沉淀核酸；

⑥轻轻倒去上清液，将含有沉淀的离心管倒置在吸水纸上排干水分；

⑦再加入300μL 70％乙醇，轻轻颠倒混匀数次后，12000rpm离心2min；

⑧轻轻倒去上清液，重复步骤⑦一次；

⑨将离心管倒置在吸水纸上排干水分，置于37℃下15min，使乙醇充分挥发；

⑩用50μL ddH₂O重悬沉淀，得到YYA21基因组DNA，浓度达到30ng/μL。

(2)真菌ITS rDNA基因的PCR扩增

PCR扩增在50μL反应体系中进行，体系中含有：上下游引物各2μM，dNTPs 200μM，MgCl₂ 1.5mM，10×PCR buffer 5μL，模版DNA 2μL，Taq酶2U。

上游引物ITS1序列为：5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′，

下游引物ITS4序列为：5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′。

PCR扩增反应在朗基MG96G型PCR仪上进行。反应条件：94℃预变性2min，然后35个循环包括：94℃变性30sec，55℃退火40sec，72℃延伸1min。最后72℃延伸10min。

(3)PCR产物的回收纯化

PCR反应结束后，PCR产物经1％的琼脂糖凝胶电泳检测后，采用爱思进生物技术公司的DNA凝胶纯化试剂盒，按照试剂盒说明书的步骤进行。

(4)基因的测序和序列分析

经电泳检测后的已经纯化回收的目的DNA片段送至上海生工用ABIPRISMA377型自动测序仪进行测序。测序结果经过严格核对后，得到如SEQ ID No.1所示的长度为364bp的DNA片段序列。

在NCBI网站上，将测得的核苷酸序列用BLAST在GenBank数据库中查找和比对同源或相似的核苷酸序列。经过BLAST比对，该序列与登录号为MK611668.1序列覆盖率100％，相似度达到100％，属于Acrocalymma vagum。

上述分子鉴定与形态鉴定结果表明，新分离的菌株属于真菌界(Fungi)，子囊菌门(Ascomycota)，座囊菌纲(Dothideomycetes)，格孢菌目(Pleosporales)，畸腔菌科(Morosphaeriaceae)，Acrocalymma属。将其命名为Acrocalymma vagum YYA21，于2022年1月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉、武汉大学，保藏号CCTCC NO:M 2022102。

实施例2 YYA21菌株包衣剂育秧

供试植物：水稻Oryza sativa L.，常规品种，春优927。

1、YYA21菌株培养与液体发酵

将保存于滤纸片上的YYA21菌株接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)固体培养基上进行活化培养，25℃，黑暗培养7d。用直径0.5cm的打孔器打取菌饼，将菌饼(5个)接种至含有500ml液体发酵培养基的三角瓶中，置于摇床中(25℃，转速150)培养7d。然后将液体发酵液真空抽滤，去除培养基，得到菌丝。称取0.1g菌丝，测定含水率为80％，以备计算菌丝干重。

PDA培养基：葡萄糖20g/L，马铃薯200g/L，琼脂15g/L。根据待配培养基的体积称取所需马铃薯(200g/L)，水煮后捣碎溶解过滤，加入葡萄糖和琼脂，121℃高压蒸汽灭菌20min。

液体发酵培养基：豆饼粉0.4％，玉米粉1％，硫酸镁0.05％，磷酸氢二钾0.1％，按比例配制，加水至250mL；120℃湿热灭菌15min。

2、YYA21种衣剂制备：将菌丝与1％壳聚糖溶液按照1：10000的比例(干重：体积)混合均匀，即干重为1g的菌丝与10L 1％壳聚糖溶液混合，制成种衣剂。因真空抽滤后的菌丝含水率不同，所以每次制备种衣剂按照菌丝干重来计算。

1％壳聚糖溶液配方如下：1g壳聚糖溶于100mL的1％醋酸溶液。

3、种子包衣处理：用1％次氯酸钠对水稻种子表面消毒10分钟，清水冲洗干净，沥干，然后将种衣剂与消毒后的种子按照2.5:1的比例(体积：重量)混匀，即每2.5g种子使用1mL种衣剂，得到包衣种子。将包衣后的种子平铺于无菌纱布上，置于阴凉通风处(15-28℃)晾干2-3天。

4、将包衣种子通过基质育秧方式均匀播种于育苗盘，正常水肥管理，整个育苗期不施用任何杀菌剂，培育25-28天。

5、秧苗素质测定

内生真菌包衣剂育秧示范田位于浙江省杭州市瓶窑地区，以未包衣的水稻种子为对照。播种期5月23日，育秧25天，发现内生真菌包衣处理的水稻苗生长健壮，长势平衡，无明显病虫害发生，如图4-5所示。

实施例3 YYA21固体菌肥育秧

供试植物：水稻Oryza sativa L.，南粳5055。

1、YYA21菌株培养与发酵

将保存于滤纸片上的YYA21菌株接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)固体培养基上进行活化培养，25℃，黑暗培养7d。用直径0.5cm的打孔器打取菌饼，将菌饼(5个)接种至含有500mL液体发酵培养基的三角瓶中，置于摇床中(25℃，转速150)培养7d。然后将液体发酵液接种于装有无菌麦粒培养瓶中(500g麦粒/瓶，100mL发酵液：500g麦粒)，25℃黑暗培养箱中培养10-15d，待菌丝生长布满麦粒，备用。

PDA培养基：葡萄糖20g/L，马铃薯200g/L，琼脂15g/L。根据待配培养基的体积称取所需马铃薯(200g/L)，水煮后捣碎溶解过滤，加入葡萄糖和琼脂，121℃高压蒸汽灭菌20min。

液体发酵培养基：豆饼粉0.4％，玉米粉1％，硫酸镁0.05％，磷酸氢二钾0.1％，按比例配制，加水至250mL；120℃湿热灭菌15min。

2、YYA21固体菌肥的基质育秧

将发酵好的固体菌肥与常规育苗基质混合后，平铺于育苗盘中，每育苗盘含有10g固体菌肥。将水稻种子用25％氰烯菌酯3000倍液浸泡2天进行种子消毒，随后放于30℃黑暗恒温箱中催芽1-2天。待种子露白，将其均匀播种于育苗盘中，放入秧田育苗培养，正常浇水管理。

3、水稻秧苗素质测定

待秧苗在育苗盘中生长23-25天后，测定秧苗素质。如图6-7所示，内生真菌固体菌肥处理的水稻苗生长健壮，长势平衡，无明显病虫害发生。

实施例4 YYA21菌株包衣剂对水稻产量的影响

供试植物：水稻Oryza sativa L.，杂交品种，甬优538。

1、YYA21菌株培养发酵、种衣剂制备、种子包衣处理同实施例2。

2、将包衣种子通过人工直播方式均匀播种于大田，正常水肥管理，整个生育期不施用任何杀菌剂，培育至收获。种子每亩用量为2kg。

同时，为确保真菌能够定殖于根部，在播种15天后将秧苗拔出，清洗根系，剪少量样品，置于LSM780荧光共聚焦显微镜(Carl Zeiss Inc.,Jena，Germany)下进行观察，镜检根部YYA21真菌定殖情况(图8)。

3、稻谷测产

内生真菌包衣剂育秧示范田位于浙江省杭州市桐庐县江南镇，总面积60亩，以未包衣的种子为对照。播种期6月23日，成熟日期11月6日。水稻成熟时，发现内生真菌包衣处理的水稻生长健壮，长势平衡，青杆黄熟，无明显病虫害发生，穗长增加，谷粒饱满(图9)。

理论测产：经过内生真菌包衣处理的水稻平均理论亩产为633.19kg/亩，未使用内生真菌包衣处理的对照组平均理论亩产为581.99/亩，理论增产8.80％(表1)。

表1内生真菌YYA21包衣剂对水稻的理论增产表

实际测产：内生真菌种衣剂处理的稻田和对照田各取1块田，面积分别为1.0018亩和1.0049亩。经全田机械收割、实测含水量，稻谷称重，按照1.0％扣除杂质，按籼粳杂交稻含水率13.5％的标准折算，内生真菌包衣剂直播水稻实收稻谷664公斤/亩，对照为632公斤/亩，实际增产5.06％。

百亩方测产：按农业农村部水稻产量测产验收办法，对内生真菌包衣处理直播单季稻百亩方进行测产，换算公式：湿谷重*(100-杂质)％*(100-水分)/(100-13.5)，结果如表2，经算术平均，示范方平均亩产662.59公斤/亩。

表2内生真菌YYA21包衣剂百亩示范方测产结果

实施例5 YYA21固体菌肥对水稻产量的影响

供试植物：水稻Oryza sativa L.，杂交品种，甬优1450。

1、YYA21菌株培养与发酵、基质育秧同实施例3。

2、水稻秧苗移栽

待秧苗在育苗盘中生长23-25天后，将秧苗拔出，移栽至大田。移栽时，每丛3株苗，每丛株距10-15cm，行距30cm。正常水肥管理，整个生育期内不施用任何杀菌剂，培育至收获。

4、稻谷测产

内生真菌菌肥育秧示范田位于浙江省金华市武义县泉溪镇王山头村，总面积160亩，以常规营养土育秧机插为对照。播种期6月23日，机插期7月18日，成熟日期11月14日。水稻成熟时，发现内生真菌育秧机插连作晚稻生长健壮，长势平衡，青杆黄熟，无明显病虫害发生，穗长增加，谷粒饱满(图10)。

理论测产：经过内生真菌固体菌肥育秧的水稻平均理论亩产为657.88kg/亩，未使用内生真菌菌肥的对照组平均理论亩产为610.06kg/亩，理论增产7.84％(表3)。

表3内生真菌YYA21固体菌肥对水稻的理论增产表

实际测产：内生真菌固体菌肥育秧和对照各取1块田，面积均为1亩。经全田机械收割、实测含水量，稻谷称重，按照1.0％扣除杂质，按籼粳杂交稻含水率13.5％的标准折算，内生真菌固体菌肥育秧机插实收稻谷697.9公斤/亩，对照为652.7公斤/亩，实际增产6.93％。

百亩方测产：按农业农村部水稻产量测产验收办法，对内生真菌基质育秧机插连作晚稻百亩方进行测产，结果如表4，经算术平均，示范方平均亩产674.33公斤/亩。

表4内生真菌YYA21固体菌肥百亩示范方测产结果

以上实施例仅仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。

序列表

<110> 浙江中医药大学

<120> 一种药用野生稻内生真菌YYA21及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 364

<212> DNA

<213> Acrocalymma vagum

<400> 1

gttttctacc tatgtctacg cgtaccacat gtttcctcgg ggggcttgcc ccccgctagg 60

accctttatc aaaccttttt gtaatagcag tcagcgtctg atactaagtt aattattaaa 120

actttcaaca atggatctct tggttctggc atcgatgaag aacgcagcga aatgcgataa 180

gtagtgtgaa ttgcagaatt cagtgaatca tcgaatcttt gaacgcacat tgcgcccctt 240

ggtattccat ggggcatgcc tgttcgagcg tcatttgaac cctcaagctc tgcttggtgt 300

tgggtgtttg tcccgccatt gcgcgtggac tcgccttaaa gcaattggca gccatgtaat 360

ccgg 364

Claims (10)

1.一种药用野生稻内生真菌YYA21，其特征在于，其保藏号为：CCTCC NO:M 2022102，分类命名为Acrocalymma vagum。

2.一种药用野生稻内生真菌YYA21种衣剂，其特征在于，所述种衣剂的制备方法包括：将保藏号为CCTCC NO:M 2022102的药用野生稻内生真菌YYA21菌丝与壳聚糖溶液混匀后制得种衣剂。

3.如权利要求2所述的药用野生稻内生真菌YYA21种衣剂，其特征在于，将药用野生稻内生真菌YYA21菌株接种于PDA培养基中，25℃黑暗培养，再接种于液体发酵培养基中，25℃培养，获得内生真菌YYA21菌丝；然后菌丝与质量百比分浓度为1％的壳聚糖溶液按照1g：10L的比例混合制得种衣剂；

所述液体发酵培养基以质量百分比计，每升含0.4％豆饼粉、1％玉米粉、0.05％硫酸镁、0.1％磷酸氢二钾。

4.一种药用野生稻内生真菌YYA21固体菌肥，其特征在于，所述固体菌肥的制备方法包括：将保藏号为CCTCC NO:M 2022102的药用野生稻内生真菌YYA21接种于液体发酵培养基中，培养获得发酵液，再将发酵液接种于无菌大麦粒上，黑暗培养至菌丝生长布满麦粒，制得YYA21固体菌肥；

所述液体发酵培养基以质量百分比计，每升含0.4％豆饼粉、1％玉米粉、0.05％硫酸镁、0.1％磷酸氢二钾。

5.如权利要求4所述的药用野生稻内生真菌YYA21固体菌肥，其特征在于，发酵液与无菌大麦粒按照100mL：500g的比例混合，25℃黑暗培养至菌丝生长布满麦粒，即得YYA21固体菌肥。

6.如权利要求1所述的药用野生稻内生真菌YYA21在提高水稻种苗素质中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用包括：将内生真菌YYA21制备成种衣剂，再与水稻种子混合，置于阴凉通风处晾干制得包衣种子，然后包衣种子经过育秧获得水稻种苗；

或者，将内生真菌YYA21制备成固体菌肥，再混合到育苗基质中制得混合基质，水稻种子萌发后播种于混合基质中，育苗培养获得水稻种苗。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，制备包衣种子时，种衣剂与消毒后的种子按照1mL:2.5g的比例混匀，包衣后置于15-28℃的阴凉通风处晾干；

制备混合基质时，固体菌肥与育苗基质按照质量比1:9进行混合。

9.如权利要求1所述的药用野生稻内生真菌YYA21在提高水稻产量中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用包括：将内生真菌YYA21制备成种衣剂，再与水稻种子混合，置于阴凉通风处晾干制得包衣种子，然后将包衣种子通过直播的方式播种于大田，培育至收获；

或者，将内生真菌YYA21制备成固体菌肥，再混合到育苗基质中制得混合基质，水稻种子萌发后播种于混合基质中育苗，然后水稻秧苗移栽至大田，培育至收获。

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