CN116376723B - 一株篮状菌tm28、tm28分生孢子固体制剂及其应用 - Google Patents

一株篮状菌tm28、tm28分生孢子固体制剂及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物防治技术领域，尤其涉及一株篮状菌TM28、TM28分生孢子固体制剂及其应用，篮状菌TM28已于2022年8月24日保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.40277，分类命名为Talaromyces muroii。篮状菌TM28通过空间和营养竞争抑制病原菌的生长，并且该菌株具有良好的广谱抗性，对黄瓜尖孢镰刀菌的抑菌率最高，可达82.43%。TM28分生孢子悬液可显著促进黄瓜植株的生长，对FOC引起的黄瓜枯萎病的防治效果达到77.30%。在田间试验中，TM28分生孢子固体制剂对FOC引起的枯萎病防效高达72.85%，说明TM28可以有效地防治黄瓜枯萎病，应用潜力巨大。

Description

一株篮状菌TM28、TM28分生孢子固体制剂及其应用
技术领域
本发明涉及生物防治技术领域，尤其涉及一株篮状菌TM28、TM28分生孢子固体制剂及其应用。
背景技术
黄瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌黄瓜专化型（Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum，FOC）引起的一种典型的土传真菌性病害，是黄瓜生产上的毁灭性病害之一。该病害在世界黄瓜种植区广泛发生，可使黄瓜产量减少10%~30%，并导致质量退化，造成严重的经济损失。化学防治可以有效保护黄瓜免受病原菌的侵害，如利用唑类、甲酯类和酰胺类等药物对种子进行消毒，或通过灌根处理抑制病原菌生长，但高频次、大剂量使用化学药剂会导致土壤环境恶化、病害抗性增加、食品安全等问题，不能满足农业的可持续发展和绿色食品的理念。
许多微生物菌株目前被用作生物防治，目前已报道用来防治黄瓜枯萎病的生防菌主要有细菌、真菌、放线菌等。如中国专利CN112646755B公开了一株特基拉芽孢杆菌（Bacillus tequilensis）及其应用，该特基拉芽孢杆菌菌悬液和发酵液对黄瓜枯萎病盆栽防效分别达到50.00%和58.00%，与药剂对照多菌灵防效相当，且对黄瓜具有明显的促生作用。中国专利CN106591154B公开了一株有效防治黄瓜枯萎病的青霉菌，该青霉菌菌株NSY15分离自酒糟基质，能够有效防治黄瓜枯萎病，防治效果达到52.39%，并且NSY15能够溶解基质中的无机磷，提高土壤中有效磷水平，从而促进黄瓜的生长。但多数生防菌剂存在防效低，效果不稳定，对黄瓜植株生长促进作用低的问题，亟需开发防治效果更高、更稳定，生长促进作用更强的生防菌剂。
发明内容
针对目前多数生防菌剂存在防效低、效果不稳定、对黄瓜植株生长促进作用低的技术问题，本发明提供一株篮状菌TM28及其在防治黄瓜枯萎病中的应用。
第一方面，本发明提供一株篮状菌TM28，篮状菌TM28已于2022年8月24日保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.40277，分类命名为Talaromyces muroii。
第二方面，本发明提供上述篮状菌TM28在防治尖孢镰刀菌黄瓜专化型（Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum）引起的黄瓜枯萎病中的应用。
第三方面，本发明提供一种TM28分生孢子固体制剂，包括上述篮状菌TM28的分生孢子悬液、载体和助剂。
进一步的，载体为麦饭石，助剂包括海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、氯化钙。
进一步的，制备方法包括以下步骤：
（1）制备TM28分生孢子悬液；
（2）使用麦饭石对TM28分生孢子悬液进行吸附，加入海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、氯化钙，用搅拌机搅拌混匀，制得TM28分生孢子固体制剂。
进一步的，步骤（1）具体为：将TM28在PDA培养基上活化4天，得到TM28菌饼；将TM28菌饼接入麦粒培养基，在26℃恒温培养箱中黑暗培养15天，用无菌水将分生孢子洗下来获得分生孢子悬液，调整分生孢子浓度至5×109CFU/mL。
进一步的，步骤（2）中，以质量分数计，加入1%海藻酸钠、2%羧甲基纤维素钠和0.2%氯化钙。
进一步的，TM28分生孢子固体制剂的有效活菌数为5×108CFU/g。
第三方面，本发明还提供上述篮状菌TM28在促进黄瓜植株生长方面的应用。
进一步的，向黄瓜种植土壤中接种TM28分生孢子固体制剂，使每克土壤中TM28分生孢子终浓度达到106个。
本发明的有益效果在于：
本发明提供的篮状菌TM28通过空间和营养竞争抑制病原菌的生长，并且该菌株具有良好的广谱抗性，对黄瓜尖孢镰刀菌的抑菌率最高，可达82.43%。TM28分生孢子悬液可显著促进黄瓜植株的生长，对FOC引起的黄瓜枯萎病的防治效果达到77.30%。在田间试验中，TM28分生孢子固体制剂对FOC引起的枯萎病防效高达72.85%，说明TM28可以有效地防治黄瓜枯萎病，应用潜力巨大，对黄瓜枯萎病的生物防治及生防菌剂的进一步开发利用具有重要意义。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是实施例1中TM28的菌落及显微形态特征图；A-C依次为TM28在PDA、MEA和CYA培养基上，25℃培养15d的菌落背面形态；D-F依次为TM28在PDA、MEA和CYA培养基上，25℃培养15d的菌落正面形态；G-I为TM28分生孢子和分生孢子梗显微镜观察图，图中标尺为20μm。
图2是基于BenA-Rpb2-ITS组合序列矩阵构建的多基因联合系统发育树。
图3是实施例3中TM28菌株对黄瓜尖孢镰刀菌菌丝形态影响的观察结果图；A为未接种TM28菌饼的对照组FOC菌丝形态；B为有TM28平板对峙下的FOC菌丝形态；图中标尺为20μm。
图4是实施例4中保温培养24小时后黄瓜尖孢镰刀菌分生孢子萌发情况的观察结果图；A为PDB与FOC分生孢子混合液的孢子萌发状况图；B-F依次为在TM28发酵滤液50倍、20倍、10倍、4倍、23倍稀释液作用下FOC分生孢子萌发状况图；图中标尺为20μm。
图5是TM28分生孢子悬液防治黄瓜枯萎病的盆栽试验效果图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
实施例1 菌株TM28的分离及鉴定
1、菌株分离
（1）来源：山东省威海荣成市虎山镇1~3年生西洋参种植田根腐病发生严重的西洋参根，采集时间为2021年8月19日。
（2）分离及纯化：选取带有典型病斑的西洋参根部，用流动的清水冲洗干净，在病健交界处切取5mm×5mm大小的组织块，依次在75%（V/V）的酒精中消毒10s，在无菌水中连续漂洗3次，取出后用无菌滤纸吸去多余水分，然后将组织块放在马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）平板上，于25℃恒温培养。挑取典型菌落边缘的菌丝，移植到新的PDA平板上培养以获得分离物的纯培养，进行3次纯化后，获得的纯化菌株编号为TM28。
2、菌株鉴定
（1）形态鉴定
分别将5mm的TM28菌饼接种至PDA、CYA和MEA培养基中央，倒置放入25℃恒温培养箱，每种培养基重复3次，分别于第7天、15天采用十字交叉法测量菌落半径，同时观察菌落形态。TM28在PDA培养基上，25℃下培养15天，菌落直径约8.52cm，菌丝淡黄色，疏松，中等厚度，表面产生黄色颗粒状孢子，菌落背面淡黄色向外扩散变浅（图1A、D）。TM28在MEA培养基上，25℃下培养15天，菌落直径约5.61cm，质地紧密，边缘整齐，产适量孢子，背面中央深黄色向外扩散变浅（图1B、E）。TM28在CYA培养基上，25℃下培养15天菌落直径约6.45cm，菌落呈轮纹状，中央灰白，外圈黄色，菌丝致密，边缘整齐，菌落背面蜂蜡黄色（图1C、F）。在显微镜下观察，TM28分生孢子梗帚状单轮生或不规则生，瓶梗安瓿形排列紧密，呈黄绿色、梭形至椭球形。
（2）分子鉴定
使用DNA提取试剂盒提取菌株基因组DNA，分别根据β-微管蛋白基因（BenA）、RNA多聚酶Ⅱ第二大亚基基因（Rpb2）和rDNA ITS1-5.8S-ITS2（ITS）保守序列设计引物，进行3基因扩增得到422bp、823bP和528bp的片段，基因序列如下：
BenA序列：
TCGTCCGAACTTTCTATCATTGTCGCGACAACACGCTGACTTTTCTAGGCAAATCATCTCTGCTGAGCACGGTCTCGATGGCTCTGGTGTGTAAGTATTGCACGATTCGATTCCACCTACAATCCGACAATATCTGATTATCAACAGCTACAATGGCTCCTCCGACCTCCAGTTGGAGCGTATGAACGTCTACTTCAACGAGGTGCGTTAGAAAACACTCGACTCATGCAGAACAAACACTCATTTGAATAGGCCTCCGGCAACAAATACGTTCCCCGTGCTGTCCTCGTCGACTTGGAGCCCGGTACCATGGACGCCGTCCGCGCTGGTCCCTTTGGTCAGCTCTTCCGTCCCGACAACTTTGTTTTCGGTCAGTCCGGTGCTGGTAACAACTGGGCCAAGGGTCACTAACTTTGAGGGTA
Rpb2序列：
CGCGGGCTTGGCGGTTGACCGAGCTCACGTGATAACCTACACCTCTTCCTTGCCGTTTGGACGTACTCTACCCCTATTGGTGTGATGGAAAAAATAATTTGCCTCGACAACTACATAAACATCACTGGGGTCTGGCTTGTCCTGCCGAGACTCCTGAAGGTCAAGCTTGTGGTTTGGTCAACAACTTGGCTTTGATGTGCTCTATCACTGTGAATTCTCCTACTGAGCCTATTGTTGATTTCATGATTCAGCGAAACATGGAAGTGCTTGAGGAATTCCAACCGCTCGTTACCCCCCATGCCACCAAGGTCTTTGTCGATGGTGTTTGGGTTGGCGTGCATCCCGATCCGAATAATTTGGTCAGCACTGTCAAATCACTACACCGACAAAACATGATTTCCCACGAAATCAGTTTAGTTCATGATATTCATGACCGAGAGTTCAAGATCTTCCCCCATGCTGGCCGTGTTTGTCGACCACTTTTCGTCATTGACAACGATCCACGAATTGAAAACTGCAGTTCTTTGGTGCTCAACAAAAACCATATTCGCAGACTTGAAGCATACCGTGAGCTTCCACCAAATCTCGACCCCGAAGAACGAAGGGAACACTACTACAGCTGGGAGGGCCTTGTCAAATCGGGAGTCATTGAGTATGTTGATGCTGAAGAGGAGGAAACTATTATGATTGCCATGTCTCCGGAAGATCTTGAAATTTCGAAACAACTACAAGCCGGTTATGCTCTGCCTGAAGACAACAGCGATCCGAATAAACGTGTGCGCTCAGTGTTGAGTCAGCGGGCGCACACCTGGACTTCACTGTG
ITS1-5.8S-ITS2（ITS）序列：
GGGCGGGGCATCCTCCCACCCTTGTCTCTATACACCTGTTGCTTTGGCGGGCCCACCGGGGCCACCTGGTCGCCGGGGGACGCACGTCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGCGCTCTGTGAACCCTGATGAAGATGGGCTGTCTGAGTACTATGAAAATTGTCAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCTGCCCTCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTGTGGTCCCCCCGGGGACCTGCCCGAAAGGCAGCGGCGACGTCCGTCTGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTCTGTCACTCGCTCGGGAAGGACCTGCGGGGGTTGGTCACCACCATATTTTACCACGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAGTTACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAACG
将3个序列串联后做成BenA-Rpb2-ITS组合序列矩阵，进行多基因序列比对，构建多基因联合系统发育树，结果如图2所示。结果发现TM28与Talaromyces muroii聚在一起，结合形态学观察，将TM28鉴定为Talaromyces muroii，目前该菌种未有中文译名，将该菌株命名为篮状菌TM28。
篮状菌TM28已经保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2022年8月24日，保藏号：CGMCC No.40277，分类命名为Talaromyces muroii。
实施例2 菌株TM28对病原真菌的拮抗活性
采用平板对峙法测定菌株TM28对9株常见植物病原真菌的拮抗作用。在距离PDA培养基平板中心2.5cm的相对2点上分别接种TM28和病原菌的5mm菌饼，以不接TM28只接病原菌为对照，重复3次，倒置28℃恒温培养至对照组病菌菌落生长至平板面积三分之二时，采用十字交叉法测量菌落半径，计算对菌丝生长的抑制率。结果如表1所示，结果表明：菌株TM28对胶孢炭疽菌以外的8种植物病原真菌的生长抑制率在64.87%~82.43%之间，对黄瓜尖孢镰刀菌的抑菌率最高为82.43%。说明TM28可以通过空间和营养竞争抑制病原菌的生长，并且该菌株具有良好的广谱抗性。
表1 菌株TM28对9株常见植物病原真菌的拮抗活性
注：同列数据后不同小写字母表示差异显著（P<0.05），下同。
实施例3 菌株TM28对黄瓜尖孢镰刀菌（FOC）菌丝形态的影响
采用平板对峙法，分别将直径为5mm的FOC菌饼接种至PDA培养基中心，在距离中心2.5cm处接种拮抗菌TM28菌块，26℃培养3天后，挑取靠近拮抗菌一侧的病原菌FOC菌丝，在显微镜下观察其形态变化。以不接种TM28菌块、仅接种有FOC菌饼的PDA培养基为对照。结果见图3，对照组FOC菌丝粗细均匀，表面光滑，有弹性，菌丝内原生质均匀分布；在TM28的作用下，FOC菌丝膨大、变弯变短，粗细不均匀，分枝减少、扭曲、生长杂乱，中部出现分叉、缢缩，顶部膨大。
实施例4 TM28发酵滤液对病原菌黄瓜尖孢镰刀菌孢子萌发的抑制作用
将TM28接种于马铃薯葡萄糖肉汤（PDB）培养基，26℃培养20天得到发酵菌液，将发酵液3000r/min离心5min，取上清液过0.45μm微孔滤膜得到TM28发酵滤液。分别将TM28发酵滤液用无菌PDB稀释2、4、10、20、50倍，取1mL，加入100μL新鲜制备的FOC分生孢子悬液，使FOC分生孢子浓度为106CFU/mL，26℃黑暗培养，每隔2h在显微镜下观察FOC孢子萌发情况。以PDB与FOC分生孢子混合液为对照组，每个浓度设3个重复，每次统计150~200个孢子萌发状况，计算孢子萌发率，孢子萌发率（%）=孢子萌发数量/孢子总量×100，结果如表2所示。
表2 菌株TM28发酵滤液对FOC分生孢子萌发的影响
由表2的结果可知，TM28发酵滤液对FOC分生孢子的萌发有显著的抑制作用，可显著降低其萌发率。随着发酵滤液浓度的提高，FOC分生孢子萌发率逐渐下降。保温培养12h时，发酵滤液稀释50倍对FOC分生孢子萌发的抑制效果与对照组相比无显著性差异，稀释10倍FOC孢子萌发率仅为16.50%，稀释2倍FOC孢子均未萌发；保温培养24h后，在显微镜下观察（结果见图4），对照组孢子几乎全部萌发，可以明显观察到孢子萌发旺盛，芽管错综复杂，而TM28发酵液处理后，随着处理浓度的增加，孢子的萌发率减少，芽管变短。与对照相比，4倍和2倍稀释处理组的FOC孢子萌发数极低，孢子几乎看不到芽管，且多数孢子还没有经过萌发所必需的体积膨大期。
实施例5 TM28分生孢子悬液防治黄瓜枯萎病的盆栽试验
（1）TM28分生孢子悬液制备：从生长有TM28的PDA平板上刮取TM28分生孢子，悬浮于无菌生理盐水中，经无菌镜头纸过滤后，得孢子悬液，血球计数板计数后，调整孢子悬液浓度为5.0×107CFU/mL。
（2）FOC分生孢子悬液制备：从生长有FOC的PDA平板刮取FOC分生孢子，悬浮于无菌生理盐水中，经无菌镜头纸过滤后，得孢子悬液，血球计数板计数后，调整孢子悬液浓度为5.0×106CFU/mL。
（3）利用盆栽试验测定TM28对黄瓜苗期枯萎病的室内防效，所试黄瓜品种为津研4号。试验设置4个处理：
①空白对照，不加病原菌FOC和TM28；
②病原菌FOC对照，只接种FOC分生孢子悬液，使每克土壤中FOC分生孢子终浓度达到105个；
③只接种TM28分生孢子悬液，使每克土壤中TM28分生孢子终浓度达到106个；
④同时接种FOC分生孢子悬液与TM28分生孢子悬液，使每克土壤中FOC和TM28分生孢子终浓度分别达到105和106个。
分别将上述处理好的土壤装盆，每个处理4个重复。将催芽露白的黄瓜种子均匀播种在盆中，每盆播10粒种子，两叶一心期每盆定苗5株，随机区组排列，常规管理。
播种后40天，量取株高，将黄瓜苗冲洗干净，滤纸吸干水分，称量各处理组幼苗鲜重并统计根冠比；取新鲜叶片采用丙酮法测定叶绿素含量，采用TCC法测定根系活力。
表3 TM28分生孢子悬液的促生效果
结果如表3和图5所示，表明在没有病原菌FOC存在的情况下，TM28可显著增加黄瓜苗的株高和单株鲜重，黄瓜根系活力增加43.75%，可促进根系的生长，使根冠比增加21.78%，并且显著增加了黄瓜叶片中叶绿素的含量。
播种8周后，统计黄瓜的发病情况：
黄瓜枯萎病采取5级分级，0级：无症状，植株正常生长；1级：真叶、子叶黄化或萎蔫面积小于总面积的50%；2级：真叶、子叶黄化或萎蔫面积大于总面积的50%；3级：叶片萎蔫或枯死，仅生长点存活；4级：全株萎蔫，以致整株枯萎死亡。
病情指数及防效计算公式如下：
病情指数＝∑（各级病株数×该病级值）/（调查总株数×最高级值）×100；
防效（%）＝（对照组病情指数-实验组病情指数）/对照组病情指数×100。
表4 TM28分生孢子悬液的防治效果
处理 病情指数 防效（%）
对照 5.12±0.24c -
FOC对照 65.34±3.89a -
TM28 3.35±0.06d -
TM28+FOC 14.83±0.53b 77.30
结合表3和表4的结果可知，在接种病原菌FOC的情况下，篮状菌TM28的分生孢子悬液除了促进黄瓜植株的生长以外，对FOC引起的黄瓜枯萎病的防治效果达到77.30%。
实施例6 田间小区实验
田间小区实验在山东省泰安市大汶口镇北藤村黄瓜棚内进行，供试黄瓜品种为津研4号。
TM28分生孢子固体制剂制备：以灭菌麦粒作为TM28固体培养基质，将在PDA培养基上活化4天的菌饼接入麦粒培养基，在26℃恒温培养箱中黑暗培养15d后，用无菌水将分生孢子洗下来获得TM28分生孢子悬液，调整分生孢子浓度至5×109CFU/mL。使用麦饭石对TM28分生孢子菌悬液进行吸附，以质量分数计，加入1%海藻酸钠、2%羧甲基纤维素钠、0.2%氯化钙，用搅拌机搅拌混匀，制得有效活菌数为5×108CFU/g的TM28分生孢子固体制剂。
FOC分生孢子颗粒制备：以灭菌麦粒作为FOC固体培养基质，将在PDA培养基上活化4天的菌饼接入麦粒培养基，在26℃恒温培养箱中黑暗培养15d后检测麦粒上FOC分生孢子的数目不低于108CFU/粒。
田间小区面积为13.5m2（9m×1.5m），每小区定植60株黄瓜。试验设3个处理：处理1，空白对照组，不接种病原菌；处理2，病原菌FOC对照组，接种FOC；处理3，TM28处理组，接种FOC和TM28。定植前，分别向处理2和处理3的定植穴内加入5粒长满FOC分生孢子的麦粒。将黄瓜苗从穴盘中取出后，抖掉基质，将根部浸泡于灭菌水中蘸根处理15min，然后分别定植于处理1和处理2的种植穴内。用无菌水10倍稀释TM28分生孢子固体制剂，制备悬液，将黄瓜根部浸泡于悬液中，15min后取出，定植于处理3的种植穴内。每个处理设4个重复，随机排列，各小区管理操作一致，20天后每个小区随机选取20株，调查枯萎病发生情况，病情指数及防效计算公式同实施例5。
结果如表5所示，TM28处理组的病情指数为18.53%，对FOC引起的枯萎病防效高达72.85%，说明TM28可以有效地防治黄瓜枯萎病，应用潜力巨大。
表5 TM28防治黄瓜枯萎病的田间小区试验效果
尽管通过参考附图并结合优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1. 一株篮状菌TM28，其特征在于，篮状菌TM28已于2022年8月24日保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.40277，分类命名为Talaromyces muroii。
2. 如权利要求1所述篮状菌TM28在预防尖孢镰刀菌黄瓜专化型（Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum）引起的黄瓜枯萎病中的应用。
3.一种TM28分生孢子固体制剂，其特征在于，包括如权利要求1所述篮状菌TM28的分生孢子悬液、载体和助剂。
4.如权利要求3所述的TM28分生孢子固体制剂，其特征在于，载体为麦饭石，助剂包括海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、氯化钙。
5.如权利要求4所述的TM28分生孢子固体制剂，其特征在于，制备方法包括以下步骤：
（1）制备TM28分生孢子悬液；
（2）使用麦饭石对TM28分生孢子悬液进行吸附，加入海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、氯化钙，用搅拌机搅拌混匀，制得TM28分生孢子固体制剂。
6.如权利要求5所述的TM28分生孢子固体制剂，其特征在于，步骤（1）具体为：将TM28在PDA培养基上活化4天，得到TM28菌饼；将TM28菌饼接入麦粒培养基，在26℃恒温培养箱中黑暗培养15天，用无菌水将分生孢子洗下来获得分生孢子悬液，调整分生孢子浓度至5×109CFU/mL。
7.如权利要求5所述的TM28分生孢子固体制剂，其特征在于，以质量分数计，加入1%海藻酸钠、2%羧甲基纤维素钠和0.2%氯化钙。
8.如权利要求5所述的TM28分生孢子固体制剂，其特征在于，TM28分生孢子固体制剂的有效活菌数为5×108CFU/g。
9.如权利要求1所述篮状菌TM28在促进黄瓜植株生长方面的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，向黄瓜种植土壤中接种TM28分生孢子固体制剂，使每克土壤中TM28分生孢子终浓度达到106个。
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