CN101888780B - 喹诺酮类似物及其相关方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供可抑制细胞增殖和/或诱导细胞凋亡的新型喹诺酮化合物及其药物组合物。本发明还提供制备这种化合物和组合物的方法以及制备和使用这些化合物的组合物的方法。

Description

喹诺酮类似物及其相关方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2007年10月5日提交的美国序列号60/978,042；2008年3月21日提交的61/038,681和2008年4月17日提交的61/045,933的优先权。这些申请的内容通过引用全文纳入本文。

发明领域

本发明涉及新型喹诺酮化合物及其药物组合物。本发明还涉及利用和制备这种喹诺酮化合物和组合物来抑制细胞增殖和/或诱导细胞凋亡的方法。

发明概述

本发明提供可抑制细胞增殖和/或诱导细胞凋亡的新型喹诺酮化合物及其药物组合物。本发明还提供制备这种喹诺酮化合物和组合物的方法以及通过给予所述药物和组合物来治疗细胞增殖疾病的方法。

在一方面，本发明提供式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯；

式中表示任选不饱和键；

如果Z¹、Z²、Z³和Z⁴分别是N，则B、X、A或V各自不存在；和

当Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自分别是C时，B、X、A和V各自独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

Z是O、S、CR⁴ ₂、NR⁴CR⁴、CR⁴NR⁴、CR⁴、NR⁴或N；

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自独立地为C或N，只要任何3个N不相邻；

Z⁵是C；或者当Z是N时，Z⁵可以是N；

Y是任选取代的5-6元碳环或杂环；

U¹是-C(＝T)N(R)-、-C(＝T)N(R)O-、-C(＝T)-、-SO₂N(R)-、-SO₂N(R)N(R⁰)-、-SO₂-或-SO₃-，其中T是O、S或NH；或者当Z⁵是N或U²是H或-CN时，U¹可以是键；

U²是H、-CN或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C3-C7环烷基、C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；或者U²是-W、-L-W、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基、或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式(heteroform)，这些基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

各R⁴独立为H、或C 1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

R和R⁰各自独立地为H或C1-C6烷基；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基(heteroalkylene)、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基(heteroalkenylene)连接基(linker)，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基；

前提是U²、V、A、X和B之一是仲胺A²或叔胺A³，其中

所述仲胺A²是-NH-W⁰，和

所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的完全饱和、任选取代的6-元或7-元氮杂环，或者所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的部分不饱和或芳族任选取代的5-元氮杂环；

前提是当Z¹是N，Z²和Z⁴是C，Z⁵是C，U¹是-C(O)NH-，U²是-L-W，和L是亚乙基连接基时，V、A和X之一独立地为任选取代的芳基、杂芳基、或7-元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员，如果W是吡咯烷-1-基、N-甲基-吡咯烷-2-基、哌啶-1-基或吗啉-1-基的话。

在一些实施方式中，提供式(I)所示化合物的前提是：当Z¹、Z²、Z⁴和Z⁵各自是C，Z³是C或N，U¹是-C(O)NH-，U²是-L-W及L是亚乙基连接基时，V、A、B和X之一独立地为任选取代的芳基、杂芳基或7-元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员，如果W是吡咯烷-1-基、N-甲基-吡咯烷-2-基、哌啶-1-基或吗啉-1-基的话。

在一方面，本发明提供式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯，

式中表示任选不饱和键；

A和X各自独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

Z是O、S、CR⁴ ₂、NR⁴CR⁴、CR⁴NR⁴或NR⁴；

Y是任选取代的5-6元碳环或杂环；

U¹是-C(＝T)N(R)-、-C(＝T)N(R)O-、-C(＝T)-、-SO₂N(R)-、-SO₂N(R)N(R⁰)-、-SO₂-或-SO₃-，其中T是O、S或NH；或者当U²是H或-CN时，U¹可以是键；

U²是H、-CN或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C3-C7环烷基、C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或者任选取代的3-7元碳环或杂环；或U²是-W、-L-W、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基、或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

各R⁴独立地为H、或C1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

R和R⁰各自独立地为H或C1-C6烷基；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基；

前提是U²、A和X之一是仲胺A²或叔胺A³，其中

所述仲胺A²是-NH-W⁰，和

所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的完全饱和及任选取代的6-元或7-元氮杂环，或者所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的部分不饱和或芳族任选取代的5-元氮杂环；

前提是当U¹是-C(O)NH-，U²是-L-W，和L是亚乙基连接基时，A和X之一独立地为任选取代的芳基、杂芳基、或7-元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员，如果W是吡咯烷-1-基、N-甲基-吡咯烷-2-基、哌啶-1-基或吗啉-1-基的话。

在另一方面，本发明提供式(III)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯，

式中表示任选不饱和键；和A、B、V、X、Z¹、Z²、Z³、Z⁴、U¹、U²和Y如对式(I)所定义。在另一方面，本发明提供式(IV)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯，

式中表示任选不饱和键；和

如果Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自是N，B、X、A或V各自不存在；和

当Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自独立地为C时，B、X、A和V各自独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自独立地为C或N，只要任何3个N不相邻；

Y是任选取代的5-6元碳环或杂环；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基、或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

R⁴是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；和

R各自独立地为H或C1-C6烷基；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；和

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基。

在还有另一方面，本发明提供式(V)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯

式中：

表示任选不饱和键；

A和V独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

Z是O、S、CR⁴ ₂、NR⁴CR⁴、CR⁴NR⁴或NR⁴；

Y是任选取代的5-6元碳环或杂环；

U¹是-C(＝T)N(R)-、-C(＝T)N(R)O-、-C(＝T)-、-SO₂N(R)-、-SO₂N(R)N(R⁰)-、-SO₂-或-SO₃-，其中T是O、S或NH；或者当U²是H或-CN时，U¹可以是键；

U²是H、-CN、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C3-C7环烷基、C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；或者U²是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这些基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

R⁴各自独立地为H、或C1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

R和R⁰各自独立地为H或C1-C6烷基；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基；

前提是U²、A和V之一是仲胺A²或叔胺A³，其中

所述仲胺A²是-NH-W⁰，和

所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的完全饱和及任选取代的6-元或7-元氮杂环，或者所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的部分不饱和或芳族任选取代的5-元氮杂环。

在一些实施方式中，式(V)所示化合物中，U²、A和V之一是仲胺A²或叔胺A³，其中所述仲胺A²是-NH-W⁰，其中W⁰如式(I)所定义，所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的完全饱和及任选取代的6-元或7-元氮杂环，或者所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的部分不饱和或芳族任选取代的5-元氮杂环。在一些实施方式中，提供式(V)所示化合物的前提是，当U¹是-C(O)NH-，U²是-L-W和L是亚乙基连接基时，A和V之一是任选取代的芳基、杂芳基、或7-元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员，如果W是吡咯烷-1-基、N-甲基-吡咯烷-2-基、哌啶-1-基或吗啉-1-基的话。

在另一方面，本发明包括式(VI)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯

式中：

X¹是CH或N；

X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷独立地为NR⁴、CH₂、CHQ或C(Q)₂，前提是：(i)X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中无一个是NR⁴、或1个或2个是NR⁴；(ii)当X¹是N时，X²和X⁷均不是NR⁴；(iii)当X¹是N时，X³和X⁶不是NR⁴；和(iv)当X¹是CH时，X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中两个是NR⁴时，两个NR⁴位于相邻的环位置或被两个或更多个其它环位置隔开；

A和V独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰；

各Q独立地为卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的一个额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这些基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

R⁴各自独立地为H、或C1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

各R独立地为H或C1-C6烷基；

R⁷是H，R⁸是C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基，各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；或者在-NR⁷R⁸中，R⁷和R⁸与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

m是0、1、2、3或4；

n是0、1、2、3、4或5；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；和

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基。

在这些化合物的一些实施方式中，X¹是CH，X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中的两个是NR⁴。在一些实施方式中，X¹是CH，X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中的一个是NR⁴。在其它实施方式中，X¹是CH，X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中无一个是NR⁴。在还有其它实施方式中，X¹是N，X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中无一个是NR⁴。在还有其它实施方式中，X¹是N，X⁴或X⁵中一个是NR⁴。

在另一方面，本发明包括式(VI’)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯

式中：

X¹是CH或N；

X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷独立地为NR⁴、CH₂、CHQ或C(Q)₂，前提是：X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中无一个是NR⁴、或1个或2个是NR⁴；

A和V独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰；

各Q独立地为卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的一个额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这些基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

R⁴各自独立地为H、或C1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

各R独立地为H或C1-C6烷基；

R⁷是H，R⁸是C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基，各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；或者在-NR⁷R⁸中，R⁷和R⁸与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

m是0、1、2、3或4；

n是0、1、2、3、4或5；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；和

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基。

在还有另一方面，本发明包括式(VII)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯

式中：

A和V独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰；

各Q独立地为卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰、或-L-N(R)-W⁰；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

R⁴各自独立地为H、或C1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

各R独立地为H或C1-C6烷基；

m是0、1、2、3或4；

n是0、1、2、3、4或5；

p是0、1、2或3；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；和

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基。

在还有另一方面，本发明提供式(VIII)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯：

式中：

A和V独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰；

各Q独立地为卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

R⁴各自独立地为H、或C1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

各R独立地为H或C1-C6烷基；

R⁷是H，R⁸是C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基，各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；或者在-NR⁷R⁸中，R⁷和R⁸与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

m是0、1、2、3或4；

n是0、1、2、3、4或5；

p是0、1、2或3；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；和

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基。

在另一方面，本发明提供含有式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VI’)、式(VII)或式(VIII)所示化合物的药物组合物，如本文进一步描述的。在一些实施方式中，药物组合物适于口服给予。在其它实施方式中，药物组合物适于静脉内给予。

在另一方面，本发明提供治疗或缓解对象中细胞增殖疾病的方法，所述方法包括给予有此需要的对象治疗有效量的式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VI’)、式(VII)或式(VIII)所示化合物，或其药物组合物，如本文进一步描述的。

在一些实施方式中，所述细胞增殖疾病是肿瘤或癌症。在一些实施方式中，所述对象的人或动物对象。

在另一方面，本发明提供减缓或抑制细胞增殖的方法，包括使有此需要的系统或对象接触有效量的的式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VI’)、式(VII)或式(VIII)所示化合物或其药物组合物，从而减缓或抑制细胞增殖。

在另一方面，本发明提供降低微生物滴度和/或缓解微生物感染的方法，包括使有此需要的系统或对象接触有效量的的式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VI’)、式(VII)或式(VIII)所示化合物或其药物组合物和任选的抗微生物剂，从而降低微生物滴度和/或缓解所述微生物感染。

在一些实施方式中，所述系统是细胞或组织，所述对象是人或动物对象。在一些实施方式中，所述微生物滴度和/或微生物感染是病毒、细菌或真菌滴度。

在另一方面，本发明提供诱导细胞死亡和/或诱导凋亡的方法，包括给予此需要的系统或对象有效量的的式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VI’)、式(VII)或式(VIII)所示化合物或其药物组合物以及任选的程序(precedure)和/或化疗剂，从而诱导细胞死亡和/或诱导凋亡。

在一些实施方式中，所述系统是细胞或组织，所述对象是人或动物对象。

在式(I)所示化合物中，如果Z¹、Z²、Z³和Z⁴分别是N，B、X、A或V各自不存在；当Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自分别是C时，B、X、A和V各自独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰、-L-N(R)-W⁰、A²或A³，

在式(I)所示化合物中，Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自独立地为C或N，前提是任何3个N不相邻。在优选的实施方式中，Z¹、Z²、Z³和Z⁴中至少一个是N。在其它优选的实施方式中，Z¹、Z²、Z³和Z⁴中至少两个是N。在式(I)的一些实施方式中，Z¹是N，B不存在，或者Z¹是C，B是H或卤素。在某些实施方式中，Z¹是N，Z²、Z³和Z⁴各自是C。在其它实施方式中，Z¹和Z²是N，Z³和Z⁴是C。

在式(I)所示化合物中，Z是O、S、CR⁴ ₂、NR⁴CR⁴、CR⁴NR⁴、CR⁴、NR⁴或N。在常见的实施方式中，Z是S或NR⁴。在某些实施方式中，当Z⁵是N时，Z是N。在一些实施方式中，含有Z的环是5-元环(例如，当Z是O、S、CR⁴ ₂、CR⁴、NR⁴或N时)。在其它实施方式中，如果Z⁵是N，含有Z的环是6-元环(例如，当Z是NR⁴CR⁴或CR⁴NR⁴时)。在某些实施方式中，Z是S。

在式(I)的常见实施方式中，Z⁵是C。在某些实施方式中，当Z是N时，Z⁵可以是N。

式(I)的化合物中的Y是任选取代的5-6元碳环或杂环。在某些实施方式中，Y是任选取代的苯基、吡啶基或萘基环系统。

当存在于Y上时，任选取代基的例子包括一个或多个C_1-6烷基、C_1-6杂烷基、C_6-12芳基烷基、C_6-12杂芳基烷基、卤素、-CN、-NO₂、叠氮基、-CF₃、-OCF₃、或-OR’、-SR’、-NR’₂、-COOR’、或-CONR’₂，其中各R’独立地为H或C_1-4烷基，或者其中任何NR’₂上的两个R’基团可以环化形成5-6元氮杂环。Y还可以被任选取代的碳环或杂环任选取代，所述环可以是饱和的、部分不饱和的或芳族的。

在式(I)所示化合物中，U¹是-C(＝X)N(R)-、-C(＝X)N(R)O-、-C(＝X)-、-SO₂N(R)-、-SO₂N(R)N(R)-、-SO₂-或-SO₃-，其中X是O、S或NH，各R独立地为H或C1-C6烷基。

在常见的实施方式中，U¹是-C(O)N(R)-。在一些这样的实施方式中，R是H或C_1-4烷基。在具体的实施方式中，R是H或甲基。在某些实施方式中，U¹是-C(O)-或-SO₂N(R)-，其中R是H或甲基。在其它实施方式中，当Z⁵是N时，U¹可以是键，或者当U²是H或-CN时，U¹可以是键。

在式(I)所示化合物中，U²是H、-CN、或C3-C7环烷基、C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基，各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；或者U²是-W、-L-W、-L-N(R)-W⁰、A²或A³。

在式(I)所示化合物中，在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员。

在式(I)所示化合物中，R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基。R¹常是H或甲基。

在式(I)所示化合物中，R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环。

在式(I)所示化合物中，R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基或C6-C12芳基烷基，或这些基团之一的杂合形式，各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、或任选取代的3-6元碳环或杂环；其中烷基和烯基部分以及它们相应的杂合形式可以任选被＝O取代。

在式(I)所示化合物中，如果存在的话，各R⁴独立地为H、或任选取代的C1-C6烷基；或R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

式(I)所示化合物中的L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基。

在式(I)所示化合物中，W是任选取代的4-7元饱和、部分不饱和或芳族氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员，其中环W可以通过键标记的R⁴、或通过连接基团-L-或-L-N(R)-经氮杂环上的任何位置连接。在式(I)所示化合物中，W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基。

在某些实施方式中，W含有至少一个双键。例如，W可以是任选取代的咪唑、咪唑啉、吡咯、吡咯啉、吡啶、二氢吡啶、四氢吡啶、嘧啶、吡嗪或哒嗪环。

在其它实施方式中，W是任选取代的饱和氮杂环。例如，W可以是任选取代的氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、硫代吗啉、高哌嗪(homopiperazine)、高吗啉(homomorpholine)、或高硫代吗啉(homothioemorpholine)环。

在式(I)的某些实施方式中，U²是-W或-L-W，其中W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员。

在一些这样的实施方式中，W是完全饱和和任选取代的6-元或7-元氮杂环，任选含有选自N、O或S的一个额外杂原子作为环成员。在具体的实施方式中，W是任选取代的哌啶、哌嗪、吗啉、硫代吗啉或高哌嗪环。

在其它实施方式中，W是任选取代的部分不饱和或芳族5-元氮杂环，任选含有选自N、O或S的一个额外杂原子作为环成员。在具体的实施方式中，W是任选取代的吡咯、吡咯啉、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、噻唑、噻唑啉、噁唑、噁唑啉、异噁唑或异噁啉环。

在进一步的实施方式中，W是任选取代的芳族6-元氮杂环，任选含有1或2个额外的N原子作为环成员。在具体的实施方式中，W任选为吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪环或三嗪。

在式(I)的其它实施方式中，U²是环丙基环或是-L-N(R)-W⁰，其中L、R和W₀如上所述。在某些实施方式中，L是C 1-C6亚烷基或杂亚烷基连接基，R是H或甲基。在具体的实施方式中，W₀是环丙基或环丁基环，或是被1-4个氟原子取代的C1-C4烷基。

在式(I)所示化合物中，当Z¹是N，Z²和Z⁴是C，Z⁵是C，U¹是-C(O)NH-，U²是-L-W，和L是亚乙基连接基时，V、A和X之一独立地为任选取代的芳基、杂芳基或杂芳基环，或任选取代的7-元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员，如果W是吡咯烷-1-基、N-甲基-吡咯烷-2-基、哌啶-1-基或吗啉-1-基的话。在具体的实施方式中，V、A或X处的所述芳基或杂芳基环是任选取代的苯基、吡啶基、嘧啶基、苯硫基、噁唑基、异噁唑基或吲哚基环。在具体的实施方式中，V、A或X处的所述7-元氮杂环是任选取代的高哌嗪环。

在一些实施方式中中，提供式(I)所示化合物的前提是当Z¹、Z²、Z⁴和Z⁵各自是N，Z³是C或N，U¹是-C(O)NH-，U²是-L-W，和L是亚乙基连接基时，V、A、B和X之一独立地为任选取代的芳基、杂芳基，或7-元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员，如果W是吡咯烷-1-基、N-甲基-吡咯烷-2-基、哌啶-1-基或吗啉-1-基的话。

在式(I)所示化合物中，U²、V、A、X和B中至少一个是仲胺A²或叔胺A³。所述仲胺A²是-NH-W⁰，其中W⁰如上所述。所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的完全饱和及任选取代的6-元或7-元氮杂环，或者所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的部分不饱和或芳族的5-元氮杂环，其可以是任选取代的。

例如，在某些实施方式中，A³可以是任选取代的哌啶、哌嗪、高哌嗪、吗啉、硫代吗啉、高吗啉或高硫代吗啉环。在其它实施方式中，A³可以是任选取代的吡咯、吡咯啉、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、噻唑、噻唑啉、噁唑、噁唑啉、异噁唑或异噁唑啉环。

在式(I)的优选实施方式中，Z¹是N，B不存在，Z²-Z⁵各自是C。

在式(I)的另一优选实施方式中，U²包含任选取代的3-吡咯啉环。

在式(I)的另一优选实施方式中，U²包含任选取代的咪唑环。

在式(I)的另一优选实施方式中，U²包含环丙基环。

在式(I)的还有其它优选实施方式中，U²包含任选取代的吡嗪环。

在式(I)的其它优选实施方式中，X是叔胺A³。

在式(I)的进一步优选实施方式中，A是H或氟。

在某些优选的实施方式中，式(I)所示化合物包含两个或更多个优选特征，有时3个或更多个优选特征。

式(I)所示化合物中，本文所述A、B、X、V、Z、Z¹、Z²、Z³、Z⁴、Z⁵、U¹、U²和Y的相同基团也适用于式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI′)、(VII)或(VIII)所示化合物。

在式(II)所示化合物中，A、X、U¹、U²和Y各自如式(I)所定义。

在式(II)的某些实施方式中，A或X之一被仲胺A²或叔胺A³取代，如本文所述。在优选的实施方式中，A或X之一是叔胺A³。在特别优选的实施方式中，A或X之一是叔胺A³，其中A³选自：任选取代的吗啉、硫代吗啉、吡咯烷、哌嗪、高哌嗪、高吗啉或高硫代吗啉。

在式(II)的其它实施方式中，A或X之一是卤素。在一些这样的实施方式中，A或X之一优选氟或氯。

在式(II)所示化合物中，Z可以是O、S、CR⁴ ₂、或NR⁴，其中R⁴如式(I)所定义。在某些实施方式中，Z是S或NR⁴，其中R⁴是H或C1-C6烷基。在其它实施方式中，R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)W⁰，其中W、L、R和W⁰如式(I)所定义。在常见的实施方式中，Z是S。

在式(II)的某些实施方式中，U¹是-C(O)N(R)-或-SO₂N(R)-，其中R是H或C_1-4烷基，优选甲基。在一些这样的实施方式中，U²是环丙基，或是-W、-L-W、-L-N(R)W⁰。

在常见的实施方式中，U¹是-C(O)N(R)-，U²是-L-W或-L-N(R)W⁰，其中L是C1-C4亚烷基，各R独立地为H或甲基，W和W⁰如本文进一步定义的。在其它实施方式中，U²是A²或A³。

在式(II)的优选实施方式中，Z是S。

在式(II)的优选实施方式中，Y是任选取代的苯基环。

在式(II)的另一优选实施方式中，U²包含任选取代的3-吡咯啉环。

在式(II)的另一优选实施方式中，U²包含任选取代的咪唑环。

在式(II)的进一步优选实施方式中，U²包含环丙基环。

在式(II)的还有其它优选实施方式中，U²包含任选取代的吡嗪环。

在式(II)的其它优选实施方式中，U²是-L-W或-L-N(R)W⁰，其中L是C1-C4亚烷基，各R独立地为H或甲基，W和W⁰如本文进一步描述的。在特别优选的实施方式中，W是任选取代的5-或6-元部分不饱和或芳族氮杂环，W⁰是环丙基。在具体的实施方式中，W是选自下组的任选取代的5-或6-元部分不饱和或芳族氮杂环：3-吡咯啉、咪唑、吡唑、吡啶、嘧啶、吡嗪和哒嗪。

在式(II)的其它优选实施方式中，X是叔胺A³。在特别优选的实施方式中，X是叔胺A³，其中A³选自下组：任选取代的吗啉、硫代吗啉、哌啶、哌嗪、高哌嗪、高吗啉和高硫代吗啉。有时，A³选自：任选取代的咪唑、咪唑啉和吡咯啉。

在式(II)的进一步优选实施方式中，A是H或氟。

在某些特别优选的实施方式中，式(II)所示化合物包含两个或更多个优选特征，有时三个或更多个优选特征。

在式(III)所示化合物中，A、B、V、X、Z¹、Z²、Z³、Z⁴、U¹、U²和Y各自如式(I)所定义。

在式(III)的某些实施方式中，U¹是键，U²是-L-W，其中L和W如式(I)所定义。在优选的实施方式中，L是任选取代的C1-C6亚烷基或杂亚烷基连接基，W是5-6元饱和、不饱和或芳族氮杂环，任选还有选自N、O或S的额外杂原子，该环可以是任选取代的。在具体的实施方式中，W是任选取代的吡咯烷、吡咯啉、咪唑、咪唑啉、哌啶、吡啶、哌嗪、嘧啶、哒嗪、吗啉或硫代吗啉环。

在式(III)的其它实施方式中，U¹是键，U²是-L-N(R)-W⁰，其中L、R和W⁰如式(I)所定义。在优选的实施方式中，L是任选取代的C1-C6亚烷基或杂亚烷基连接基，R是H或甲基。在一些这样的实施方式中，W⁰是环丙基或环丁基环。在进一步的实施方式中，W⁰是被1-4个氟原子取代的C1-C4烷基。

在式(III)的某些实施方式中，Z¹是N，Z²、Z³和Z⁴各自是C。在一些这样的实施方式中，A和X中至少一个是仲胺A²或叔胺A³，V是H。

在式(III)的优选实施方式中，Z¹是N，B不存在，Z²-Z⁴各自是C。

在式(III)的另一优选实施方式中，U¹是键，U²是-L-W，其中W是任选取代的吡咯烷或吡咯啉环。

在式(III)的另一优选实施方式中，U¹是键，U²是-LN(R)W⁰，其中W⁰是环丙基环。

在式(III)的另一优选实施方式中，U¹是键，U²是-LN(R)W⁰，其中W⁰是被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基。

在式(III)的另一优选实施方式中，X是叔胺A³。

在式(III)的进一步优选实施方式中，A是H或氟。

在某些特别优选的实施方式中，式(III)所示化合物包含两个或更多个优选特征，有时三个或更多个优选特征。

在式(IV)所示化合物中，R⁴是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰，A、B、V、X、Z¹、Z²、Z³、Z⁴、Y、L、W、R和W⁰各自如式(I)所定义。

在式(IV)的一些实施方式中，Z¹是N，Z²、Z³和Z⁴各自是C。在一些这样的实施方式中，A和X中至少一个是A²或A³，V是H或卤素。在一些实施方式中，X是A³，A和V各自独立地为H或卤素。

在式(IV)的具体实施方式中，L是任选取代的C1-C6亚烷基或杂亚烷基连接基。在具体的实施方式中，R⁴是-L-W，其中W是任选取代的吡咯烷、吡咯啉、咪唑、咪唑啉、哌啶、吡啶、哌嗪、嘧啶、哒嗪、吗啉或硫代吗啉环。

在其它实施方式中，R⁴是-L-N(R)-W⁰，W⁰是被1-4个氟原子取代的环丙基或环丁基环的C1-C4烷基。

在式(IV)的优选实施方式中，Z¹是N，B不存在，Z²-Z⁴各自是C。

在式(IV)的另一优选实施方式中，R⁴是-L-W，其中W是任选取代的吡咯烷或吡咯啉环。

在式(IV)的另一优选实施方式中，R⁴是-LN(R)W⁰，其中W⁰是环丙基环。

在式(IV)的另一优选实施方式中，R⁴是-L-N(R)-W⁰，其中W⁰是被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基。

在式(IV)的其它优选实施方式中，Y是任选取代的苯环。

在式(IV)的其它优选实施方式中，X是叔胺A³。

在式(IV)的进一步优选实施方式中，A是H或氟。

在某些特别优选的实施方式中，式(IV)所示化合物包含两个或更多个优选特征，有时三个或更多个优选特征。

在式(V)的某些实施方式中，A是仲胺A²或叔胺A³，其中所述仲胺A²是-NH-W⁰，其中W⁰如式(I)所定义，所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的完全饱和及任选取代的6-元或7-元氮杂环，或者所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的部分不饱和或芳族的任选取代5-元氮杂环。

在式(V)的某些实施方式中，U¹是-CON(R)-，U²是环烷基、-W、-L-W或LN(R)W⁰，其中各R独立地为H或C1-C6烷基，W、L和W⁰如上所述。

在式(V)的优选实施方式中，U¹是-CON(R)-，R是H或C_1-4烷基，优选甲基；U²是-L-W，其中L是C1-C4亚烷基连接基，W是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的任选取代的4-7元氮杂环。在一些这样的实施方式中，W是任选取代的吡咯烷、吡咯啉或咪唑环。

在其它优选的实施方式中，U¹是-CON(R)-，R是H或C_1-4烷基，优选甲基，U²是被任选取代的碳环或杂环任选取代的C1-C6烷基或C1-C6杂烷基。在一些这样的实施方式中，杂环是任选取代的吡啶、吡嗪、嘧啶、哌啶、吡咯烷或咪唑环。

在式(V)的其它优选实施方式中，U¹是-C(O)-，U²是W，其中W如上所述。

在式(V)的某些优选实施方式中，A是叔胺A³。在一些这样的实施方式中，A是任选取代的吗啉、硫代吗啉、哌嗪或高哌嗪环。

在式(V)的优选实施方式中，V是H或卤素。

在式(V)的另一优选实施方式中，Z是S或N(Me)。

在式(V)的另一优选实施方式中，Y是任选取代的苯基环。

在式(V)的某些实施方式中，当U¹是-C(O)NH-、U²是-L-W、和L是亚乙基连接基时，A和V之一为任选取代的芳基、杂芳基或7-元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员，如果W是吡咯烷-1-基、N-甲基-吡咯烷-2-基、哌啶-1-基或吗啉-1-基的话。

在某些特别优选的实施方式中，式(V)所示化合物包含两个或更多个优选特征，有时三个或更多个优选特征。

在式(VI)的一些实施方式中，X¹是CH或N，X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷独立地为NR⁴、CH₂、CHQ或C(Q)₂，前提是X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中无一个是NR⁴、一个或两个是NR⁴。

在式(VI)的一些实施方式中，A和V独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰。在常用的实施方式中，A和V独立为H或卤素。

在式(VI)的一些实施方式中，各Q独立地为卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰。应该知道，当m或n是0时，被基团Q任选取代的各位置被氢取代。在优选的实施方式中，m或n各自是0或1。

在式(VI)的某些优选实施方式中，X¹是N，X³、X⁴、X⁵和X⁶中一个或两个独立地为NR⁴，其余的X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷独立地为CH₂。

在式(VI)的某些优选实施方式中，X¹是N；X³、X⁴、X⁵和X⁶之一是NR⁴；其余X³、X⁴、X⁵、X⁶和X²及X⁷独立地为CH₂。

在某些优选的实施方式中，X¹是N，X⁴或X⁵之一是NR⁴，另一个是CH₂，X²、X³和X⁶是CH₂。

在式(VI)的一些实施方式中，R⁷是H，R⁸是C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基、或C2-C 10杂烯基，各自可被一个或多个卤素、＝O或任选取代的3-7元碳环或杂环任选取代。在其它实施方式中，R⁷和R⁸和N一起形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员。

在式(VI)的某些优选实施方式中，R⁷是H，R⁸选自：-CH₂CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OCH(CH₃)₂、-CH₂-(吡啶)、-CH₂-(甲基吡啶)、-CH₂-(甲基嘧啶)、-CH₂-(甲基嘧啶)、-CH₂-(吡嗪)、-CH₂-(甲基吡嗪)、-CH₂-(咪唑)；-CH₂-(N-甲基咪唑)；-CH₂-(吡咯烷)；-CH₂-(N-甲基吡咯烷)；-CH₂-(噻唑)；和CH₂-(N-甲基噻唑)。

在式(VI)的一些优选实施方式中，R⁷和R⁸与-NR⁷R⁸中的N一起形成任选取代的吗啉、硫代吗啉、哌啶或哌嗪环。

在某些特别优选的实施方式中，式(VI)所示化合物包含两个或更多个优选特征，有时三个或更多个优选特征。

本文对式(VI)所述的实施方式也适用于式(VI’)。

在式(VII)的一些实施方式中，A和V独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰、其中R¹、R²、-R³、-W、-L、-W⁰和R如上定义。

在式(VII)的某些实施方式中，A和V独立地为H或卤素，优选氟。在一些优选实施方式中，A和V各自是H。在其它优选实施方式中，A是氟，V是H。

在式(VII)的一些实施方式中，各Q独立地为卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰。应该知道，当m、n或p是0时，被基团Q任选取代的各位置被氢取代。

在优选的实施方式中，m和n各自是0或1。

在式(VII)所示另一优选实施方式中，m和n各自是0。

在式(VII)所示其它优选实施方式中，p是0或1。

在特别优选的实施方式中，m和n是0，p是1，Q是C1-C4烷基，优选甲基。

在式(VII)所示优选实施方式中，R⁴是H或C1-C4烷基或C3-C7环烷基。在特别优选的实施方式中，R⁴是甲基。在另一优选的实施方式中，R⁴是H。

在某些特别优选的实施方式中，式(VII)所示化合物包含两个或更多个优选特征，有时三个或更多个优选特征。

在式(VIII)的一些实施方式中，A和V独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰，其中R¹、R²、-R³、-W、-L、-W⁰和R如上定义。

在某些实施方式中，A和V独立地为H或卤素，优选氟。在一些优选实施方式中，A和V各自是H。在其它优选实施方式中，A是氟，V是H。

在式(VIII)所示的一些实施方式中，各Q独立地为卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰。应该知道，当m、n或p是0时，被基团Q任选取代的各位置被氢取代。

在优选的实施方式中，m和n各自是0或1。

在式(VII)所示其它优选实施方式中，m和n各自是0。

在优选的实施方式中，m和n是0。

在式(VIII)的优选实施方式中，R⁴是C1-C4烷基或C3-C7环烷基。在特别优选的实施方式中，R⁴是甲基。在另一个优选的实施方式中，R⁴是H。

在式(VIII)的一些实施方式中，R⁷是H，R⁸是C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基、或C2-C10杂烯基，各自可任选被一个或多个卤素、＝O或任选取代的3-7元碳环或杂环取代。在一些这样的实施方式中，R⁸是被任选取代的芳族杂环取代的C_1-4烷基。在某些实施方式中，R⁸是被任选取代的咪唑、吡啶、嘧啶、哒嗪或吡嗪环取代的C_1-4烷基。在其它实施方式中，R⁷和R⁸与N一起可形成任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的任选取代氮杂环。

在一些实施方式中，R⁷是H，R⁸是被任选取代的芳族杂环取代的C_1-4烷基。在一些这样的实施方式中，任选取代的芳族杂环选自吡啶、嘧啶、吡嗪、咪唑、吡咯烷和噻唑。

在式(VIII)的某些优选实施方式中，R⁷是H，R⁸选自：-CH₂CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OCH(CH₃)₂、-CH₂-(吡啶)、-CH₂-(甲基吡啶)、-CH₂-(甲基嘧啶)、-CH₂-(甲基嘧啶)、-CH₂-(吡嗪)、-CH₂-(甲基吡嗪)、-CH₂-(咪唑)；-CH₂-(N-甲基咪唑)；-CH₂-(吡咯烷)；-CH₂-(N-甲基吡咯烷)；-CH₂-(噻唑)；和CH₂-(N-甲基噻唑)。

在式(VIII)的一些优选实施方式中，R⁷和R⁸与-NR⁷R⁸中的N一起形成任选取代的吗啉或哌嗪环。

在某些特别优选的实施方式中，式(VIII)所示化合物包含两个或更多个优选特征，有时三个或更多个优选特征。

本发明的优选实施方式包括表1-8和实施例中所示的化合物。

在某些特别优选的实施方式中，化合物是如以下结构之一所示或其药学上可接受的盐或酯：

本发明提供包含上式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI′)、(VII)或(VIII)中任一式所示的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一个实例中，所述组合物包含在缓冲溶液中的上述任一式所示的化合物、聚乙二醇和丙二醇。

本发明化合物在本文所述试验中施加生物学活性。例如，本发明化合物可抑制RNA生物合成并可抑制肿瘤生长。虽然不想通过任何作用原理限制本发明，但据信这些化合物可与核酸的四链体形成区相互作用和调节核糖体RNA转录而部分起作用。本发明化合物还可调节四链体形成核酸与核仁蛋白相互作用，该蛋白与凋亡相关；因此，调节核仁蛋白的活性、定位或稳定性也有助于这些化合物诱导凋亡的能力。本发明还提供制备这些化合物的方法以及使用它们的方法。

因此，本发明部分涉及减缓细胞增殖和/或诱导细胞死亡的方法，包括使某系统接触有效量的任一上式所示化合物，或其药物组合物以及任选的与化疗剂的组合，从而减缓所述系统中的细胞增殖和/或诱导细胞死亡，例如凋亡或凋亡性细胞死亡。所述系统可以是细胞或组织。在一个实施方式中，所述系统包括胰腺细胞，例如来自对象的细胞或培养细胞(例如，体外或离体)。在具体的实施方式中，所述系统包括胰腺癌细胞。在一个实施方式中，所述细胞是细胞系，例如PC3、HCT116、HT29、MIA Paca-2、HPAC、Hs700T、Panc10.05、Panc 02.13、PL45、SW 190、Hs 766T、CFPAC-1、PANC-1、MV-4-11、THP-1和K-562。

本发明还提供治疗或缓解细胞增殖性疾病的方法，包括给予有此需要的对象有效量的式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VI′)、式(VII)或式(VIII)所示化合物或其药物组合物以及任选与化疗剂组合，从而治疗或缓解所述细胞增殖性疾病。例如，可减缓细胞增殖，和/或可诱导细胞死亡，例如凋亡或凋亡性细胞死亡。细胞增殖性疾病可以是人或动物对象中的肿瘤或癌症。在具体的实施方式中，所述癌症是胰腺癌，包括非-内分泌性肿瘤和内分泌性肿瘤。非-内分泌性肿瘤的示范性例子包括但不限于：腺癌、腺泡细胞癌、腺样鳞状细胞癌(adenosquamous carcinoma)、巨细胞瘤、管内乳头粘蛋白肿瘤(intraductal papillary mucinous neoplasms)、粘蛋白囊腺癌、胰胚细胞瘤、血清囊腺瘤、实体和假视神经乳头肿瘤。内分泌肿瘤可以是胰岛细胞瘤。

以上减缓细胞增殖和/或诱导细胞死亡的方法还可与医学程序和/或化疗剂组合实施。可与本发明方法联用的医学程序的例子包括但不限于放疗和外科手术。在某些实施方式中，本发明化合物与化疗剂组合给予，用于减缓细胞增殖、诱导细胞死亡和/或缓解细胞增殖性疾病。

本发明还提供减缓或抑制细胞增殖的方法，包括使有此需要的系统或对象接触有效量的式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VI′)、式(VII)或式(VIII)所示的化合物或其药物组合物，从而减缓或抑制细胞增殖。

此外，本发明提供降低微生物滴度的方法，包括使某系统接触有效量的式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI′)、(VII)或(VIII)所示的化合物或其药物组合物和任选的抗微生物剂，从而降低微生物滴度。所述系统可以是细胞或组织。本发明还提供缓解微生物感染的方法，包括给予有此需要的对象有效量的上式任一所示化合物或其药物组合物和任选的抗微生物剂，从而缓解所述微生物感染。所述对象可以是人或动物。微生物滴度可以是病毒、细菌或真菌滴度。

本发明还涉及测定上式任一所示化合物和能形成四链体结构的核酸之间相互作用选择性的方法，包括：a)在没有竞争性分子存在下使得化合物接触能形成四链体结构的三种或更多种核酸，其中每种核酸不是端粒核酸；b)检测该化合物与所述三种或更多种核酸之间的直接相互作用；和c)从相互作用检测值的比较测定相互作用选择性。在一个实例中，三种或更多种核酸包含位于癌基因核苷酸序列5’的核苷酸序列。所述癌基因可以是MYC、HIF、VEGF、ABL、TGF、PDGFα、MYB、SPARC、HER、VAV、RET、H-RAS、EGF、SRC、BCL-1、BCL-2、DHFR或HMGA。在测定相互作用选择性时，化合物可在不同容器中分别接触所述三种或更多种核酸的每一种。此外，可从IC₅₀值的比较中测定相互作用选择性。

本发明化合物可与或不与能形成四链体的DNA诸区域相互作用。在某些实施方式中，本发明化合物可结合和/或稳定螺旋桨式四链体(propellerquadruplexes)。螺旋桨式四链体的实例包括但不限于：H-RAS、RET、BCL-1、DHFR、TGF-β、HIF-1α、VEGF、c-Myc或PDGFα。在另一实施方式中，所述化合物可结合和/或稳定椅-L形(chair-eller)或筐式四链体(basketquadruplex)。例如，所述化合物可结合和/或稳定BCL-2。

本发明还提供诱导细胞死亡，例如凋亡性细胞死亡(凋亡)的方法，包括给予有此需要的系统或对象有效量的上式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI′)、(VII)或(VIII)中任一式所示的化合物或其药物组合物和任选的化疗剂。本发明还提供治疗或缓解癌基因过表达，例如cMyc过表达所介导的疾病的方法，包括给予有此需要的系统或对象有效量的上述式中任一式所示的化合物或其药物组合物和任选的化疗剂。所述对象可以是人或动物，系统可以是细胞或组织。

上式所示化合物还能调节各种蛋白激酶活性，因为它们含有已知结合蛋白激酶的结构特征，因此可用于采用本领域已知的筛选方法来鉴定蛋白激酶调节剂。本文提供了某些激酶的代表性筛选方法。因此，本发明提供鉴定蛋白激酶调节剂的方法，所述调节剂有时是一种或多种特定蛋白激酶的强效调节剂。该方法包括筛选本文所述化合物文库调节蛋白激酶活性的能力，该文库含有各如式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI’)、(VII)或(VIII)所示的至少10种不同化合物，常常是至少100种这样的化合物。

或者，所述方法包括用式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI’)、(VII)或(VIII)所示化合物筛选一组蛋白激酶，例如至少三种或至少十种蛋白激酶来测定差别活性谱(differential activity profile)。这些方法使得用户能鉴定具有所需活性水平和/或选择性的化合物作为蛋白激酶活性调节剂，该化合物可用于开启药物开发程序。因此，在另一实施方式中，本发明提供包含分离的蛋白激酶与式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI’)、(VII)或(VI)示化合物形成的复合物的组合物。这种复合物可用于提供关于调节性化合物结合特定激酶的结合位点的信息，并可用作分析激酶结构的研究工具。由于这种复合物比未形成复合物的激酶更易结晶，从而它们还可用于测定结晶和晶体结构，而这在没有结合的调节性化合物时是不可能的。

本文还提供鉴定调节核糖体核酸和与该核酸相互作用的蛋白质之间相互作用的分子的方法，包括：(a)使得含有人核糖体核苷酸序列的核酸和蛋白质接触具有上述任何结构的测试分子，其中所述核酸能结合所述蛋白质，和(b)检测与所述蛋白质结合或未结合的所述核酸的量，从而在有测试分子条件下结合所述蛋白质的所述核酸量不同于没有测试分子存在条件下的量时，将所述测试分子鉴定为调节所述相互作用的分子。在一些实施方式中，所述蛋白质选自：核仁蛋白、纤维蛋白、RecQ、QPN1和上述的功能片段。

一些实施方式提供鉴定导致核仁蛋白置换的分子的方法，包括：(a)使得含有人核糖体核苷酸序列的核酸和核仁蛋白接触式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI’)、(VII)或(VIII)所示测试分子，其中所述核酸能结合所述核仁蛋白，和(b)检测与所述核仁蛋白结合或未结合的所述核酸量，从而在有测试分子存在下结合所述核仁蛋白的所述核酸量低于没有测试分子存在时，将所述测试分子鉴定为导致核仁蛋白置换的分子。在一些实施方式中，核仁蛋白与可检测标记物结合，有时核仁蛋白与固相结合。有时核酸与可检测标记物结合，在某些实施方式中，核酸可与固相结合。核酸可以是DNA、RNA或其类似物，可包含以上具体实施方式中所述的核苷酸序列。还提供了包含核酸，和/或结合所述核苷酸序列的蛋白质(例如，核仁蛋白、纤维蛋白、RecQ、QPN1和上述的功能片段)，和式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI’)、(VII)或(VIII)所示化合物的组合物，所述核酸具有本文提供的核糖体核苷酸序列，或其基本上相同的序列。

还提供鉴定能结合含有人核糖体核苷酸序列的核酸的分子的方法，包括：(a)使得含有本文所述人核糖体核苷酸序列的核酸，结合所述核酸的化合物接触式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI’)、(VII)或(VIII)所示的测试分子，和(b)检测与所述核酸结合或未结合的所述化合物量，从而在有测试分子存在下结合所述核酸的所述化合物量低于没有测试分子存在时，将所述测试分子鉴定为结合所述核酸的分子。有时化合物与可检测标记物结合，有时作放射性标记。在某些实施方式中，核酸可与固相结合。核酸可以是DNA、RNA或其类似物，可包含以上具体实施方式中所述的核苷酸序列。在某些实施方式中，核酸可形成四链体，例如分子内四链体。

本文还提供鉴定核酸合成的调节剂的方法，包括在允许引物寡核苷酸与模板核酸杂交的条件下，使得模板核酸、具有与模板核酸核苷酸序列序列互补的核苷酸序列的引物寡核苷酸、延伸核苷酸、聚合酶与式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI’)、(VII)或(VIII)所示测试分子接触，其中所述模板核酸包含人核糖体核苷酸序列，并检测引物核酸延伸合成的延伸引物产物是否存在或含量，从而在有测试分子存在下合成的延伸引物产物少于没有测试分子存在下时将测试分子鉴定为核酸合成的调节剂。

在某些实施方式中，该方法涉及鉴定RNA合成的调节剂，在某些实施方式中，涉及鉴定核仁RNA合成的调节剂。模板核酸有时是DNA，有时是RNA，模板可包含，例如本文所述核糖体核苷酸序列中的任一种或更多种。聚合酶有时是DNA聚合酶，有时是RNA聚合酶。在某些实施方式中，将细胞与式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI’)、(VII)或(VIII)所示测试化合物接触并检测细胞中的RNA水平，从而将与未用测试化合物处理的细胞相比，降低RNA量的测试化合物鉴定为调节RNA合成的分子。在后一实施方式中，可评估总RNA水平，例如，在一些实施方式中，评估新合成的RNA总量，例如通过在RNA中掺入可检测核苷酸并检测(例如，放射性标记的核苷酸(例如，氚化核苷酸))。

在具体的试验实施方式中，本文提供了鉴定调节核糖体RNA(rRNA)合成的分子的方法，包括：使细胞接触式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI’)、(VII)或(VIII)所示的测试分子，使核糖体核苷酸序列接触扩增其一部分的一种或多种引物和杂交扩增产物的标记探针，并通过标记探针的杂交来检测扩增产物量，从而将减少或增加扩增产物量的测试分子鉴定为调节rRNA合成的分子。在一些实施方式中，在引物加入和扩增rRNA后加入标记的探针，在某些实施方式中，标记的探针和引物同时加入。有时扩增的核糖体核苷酸序列部分在rDNA的5’端。

在某些实施方式中，本发明提供化合物文库，该文库包含至少10种式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI’)、(VII)或(VIII)所示化合物。该文库优选包含至少100种这样的化合物。该文库可用于采用本领域已知的方法鉴定具有本文所述的一种或多种活性，或这些活性的特定组合的化合物。该方法尤其可用于鉴定具有生物学活性阈值水平的分子，包括但不限于(a)结合四链体核酸或抑制四链体核酸(rDNA或rRNA)形成，(b)针对特定蛋白激酶或一组蛋白激酶的活性和(c)作为核酸结合某蛋白，例如核仁蛋白的调节剂的活性。

附图简述

图1显示口服给予RBI化合物的组合(cassette)和单独AUC值的比较。

定义

参考本发明优选实施方式的以下详述和本文所包含的实施例更利于理解本发明。应该知道，本文所用的术语只是出于描述特定实施方式的目的，而非限制性的。

除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解相同的意义。

本文所用的“一个”或“一种”表示“至少一个”或“一个或多个”。本文所用的“约”表示该数值是近似值，些许偏差不会显著影响本发明的实施。除非文中另有表述，采用数值限定之处，“约”表示该数值可有±10％的变化并维持在本发明的范围内。

本文所用的术语“烷基”指含碳化合物，包括含有一个或多个杂原子的化合物。术语“烷基”还包括被一个或多个取代基取代的烷基部分。“烷基”可以是直链、支链或环状的。在一些情况中，本文将环状烷基称为“环烷基”。“杂烷基”指烷基主链中的至少一个碳原子被杂原子，通常是N、O或S取代的化合物。“烯基”和“炔基”部分分别指含有至少一个双键或三键的烷基部分。

当存在于烷基、烯基或炔基部分上时，任选取代基或这些取代基之一的杂合形式包括但不限于OH、C_1-6烷氧基、任选取代的氨基、酰氨基、CN、羧基、卤素、＝O、芳基、任选取代的杂环或碳环或无机取代基。

本文所用的术语“碳环”指在环中只含有碳的环状化合物，而“杂环”指包含杂原子作为环成员的环状化合物。碳环和杂环结构包括具有单环、双环或多环系统的化合物，可以是饱和的、部分不饱和或芳族的。碳环和杂环可以被适于它们结构的取代基任选取代。

本文所用的术语“氮杂环状”或“氮杂环”指含有至少一个氮原子的饱和、部分不饱和或芳族的3-7元单环或8-12元稠合双环系统。这种氮杂环可任选含有选自N、O或S的1-2个额外杂原子作为环成员，这些环可作一定程度的任选取代从而使得这种取代有化学意义。

本文所用的术语“芳基”指多不饱和，通常是芳族的烃取代基，而“杂芳基”或“杂芳族”指含有杂原子作为环成员的芳族环。芳基和杂芳基结构包括具有单环、双环或多环系统的化合物，可以是任选取代的。

本文所用的术语“杂原子”指非碳和非氢的任何原子，例如氮、氧或硫。

本文所用的“杂合形式”指其烃基部分中的一个或多个碳原子被杂原子，通常是N、O或S替代的基团。例如，杂芳基是芳基的杂合形式，而杂烷基是烷基的杂合形式。

杂环的示范性例子包括但不限于：四氢呋喃、1，3-二氧戊环、2，3-二氢呋喃、吡喃、四氢吡喃、苯并呋喃、异苯并呋喃、1，3-二氢-异苯并呋喃、异噁唑、4，5-二氢异噁唑、哌啶、吡咯烷、吡咯烷-2-酮、吡咯、吡啶、嘧啶、八氢-吡咯并[3，4-b]吡啶、哌嗪、吡嗪、吗啉、硫代吗啉、咪唑、咪唑烷-2，4-二酮、1，3-二氢苯并咪唑-2-酮、吲哚、噻唑、苯并噻唑、噻二唑、噻吩、四氢-噻吩1，1-二氧化物、二氮杂环庚烯、三唑、胍、二氮杂二环[2.2.1]庚烷、2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷、2，3，4，4a，9，9a-六氢-1H-β-咔啉、环氧乙烷、氮杂环丁烷、四氢吡喃、二噁烷、内酯、氮丙啶、氮杂环丁烷、哌啶、内酰胺，还可包含杂芳基。杂芳基的其它示范性例子包括但不限于：呋喃、吡咯、吡啶、嘧啶、咪唑、苯并咪唑和三唑。

氮杂环的示范性例子包括但不限于：任选取代的氮丙啶、氮杂环丁烷、咪唑、咪唑啉、吡咯、吡咯啉、吡咯烷、吡唑、吡唑啉、噁唑、噁唑啉、异噁唑、异噁唑啉、噻唑、噻唑啉、吡啶、二氢吡啶、四氢吡啶、哌啶、哌嗪、嘧啶、哒嗪、吡嗪、吗啉、硫代吗啉、高哌嗪、高吗啉、高硫代吗啉、苯并咪唑和吲哚环。

当存在于氮杂环或杂环上时，优选的取代基包括卤素、＝O、酰基、芳酰基、氨甲酰基或任选取代的碳环或杂环；或任选取代的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、或这些基团的杂合形式；或-OR⁵、-NR⁵R⁶、-COOR⁵或-C(O)NR⁵R⁶，其中R⁵和R⁶各自独立地为H、或C1-C6烷基、芳基或芳基烷基，或这些基团之一的杂合形式；其中在各-NR⁵R⁶中，R⁵和R⁶与N一起可形成任选取代的5-6元环，任选含有选自N、O或S的一个额外杂原子作为环原子。

当存在于芳族氮杂环上时，特别优选的取代基包括一个或多个卤素或任选取代的C_1-6烷基，其中所述任选的取代基选自：卤素、羟基、和氧代(＝O)。

当存在于芳基或杂芳基环上时，优选的取代基包括：任选取代的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基；卤素、-CN、-CF₃、-OCF₃、NO₂；或-OR⁵、-NR⁵R⁶、-COOR⁵、或-C(O)NR⁵R⁶、-SO₂NR⁵R⁶、-NC(O)R⁵、或-NSO₂R⁵，其中R⁵和R⁶各自独立地为H、或C1-C6烷基、芳基、或芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式；其中在各-NR⁵R⁶中，R⁵和R⁶与N一起可形成任选取代的5-7元环，任选含有选自N、O或S的一个额外杂原子作为环成员。

本文所用的术语“无机取代基”指不含碳或含与不是氢的元素结合的碳的取代基(例如，元素碳、一氧化碳、二氧化碳和碳酸根)。无机取代基的例子包括但不限于：硝基、卤素、磺酰基、亚硫酰基、磷酸根等。

本文所用的术语“治疗”和“疗效”指减缓或终止细胞增殖速度(例如，减缓或停止肿瘤生长)或减少增殖性癌细胞的数量(例如，除去肿瘤的一部分或全部)。这些术语还适用于降低受微生物感染的系统中(即，细胞、组织或对象)的微生物滴度，减缓微生物增殖速度，减少微生物感染相关的症状数量或症状影响，和/或从该系统中除去可检测量的微生物。微生物的例子包括但不限于：病毒、细菌和真菌。

本文所用的术语“化疗剂”指可用于治疗或缓解细胞增殖性疾病，例如肿瘤或癌症的治疗剂。化疗剂的例子包括但不限于：抗肿瘤剂、烷化剂、植物碱、抗微生物剂、磺胺、抗病毒剂、铂剂和本领域已知的其它抗癌症药剂。化疗剂的具体例子包括但不限于：顺铂、碳铂、白消安、甲氨蝶呤、柔红霉素、阿霉素、环磷酰胺、美法仑、长春新碱、长春碱、瘤可宁、紫杉醇、吉西他滨和本领域已知的其它化疗剂。(参见，例如Goodman和Gilman，The Pharmacological Basis of Therapeutics(治疗剂的药理学基础)(第9版)(Goodman等编)(M-H公司(McGraw-Hill))(1996)；和1999 Physician′s Desk Reference(1999医师案头参考)(1998))。

本文所用的术语“凋亡”指内在的细胞自身破坏或自杀程序。细胞对触发刺激起反应而经历包括细胞缩小、细胞膜起泡及染色质聚集和断裂在内的级联事件。这些事件在细胞转变成膜结合颗粒的群集体(凋亡小体)中达到顶点，随后由巨噬细胞吞噬这些群集体。

本文所用的“对象”指人或动物对象。在某些优选实施方式中，所述对象是人。

发明详述

本发明涉及式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VII)所示化合物及其药学上可接受的盐、酯和前药。本发明提供可抑制细胞增殖和/或诱导细胞凋亡的口服活性喹诺酮类似物。本发明还提供制备这种口服活性喹诺酮类似物的方法，和通过给予这些类似物来治疗细胞增殖性疾病的方法。

本发明化合物可与或不与能形成四链体的DNA诸区域相互作用。

本发明的式(I) (II)、(III)、(IV)所示化合物如下所示：

式中A、B、V、X、Z、Z¹、Z²、Z³、Z⁴、Z⁵、U¹、U²、Y和R⁴按本文进一步描述定义。

本发明的式(V)、(VI)、(VI’)、(VII)和(VIII)所示化合物如下所示：

式中A、V、Y、Z、U¹、U²、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶、X⁷、R⁴、R⁷、R⁸、Q、m、n和p如本文进一步描述的定义。

本发明化合物可以是手性的。本文所用的手性化合物是不同于其镜像并具有对映体的化合物。此外，该化合物可以是外消旋的，或是分离的对映体或立体异构体。合成手性化合物和拆分对映体的外消旋混合物的方法是本领域技术人员熟知的。参见，例如通过引用纳入本文的March，“Advanced Organic Chemistry(高级有机化学)”约翰威利父子公司(John Wiley and Sons，Inc.)，纽约，(1985)。

可采用筛选试验，例如本文所述那些测试本发明化合物。

本文所述化合物可与能形成四链体的核酸诸区域相互作用。由于能形成四链体的DNA诸区域是生物学过程，例如癌基因转录的调节剂，四链体生物学活性的调节剂可用作癌症治疗剂。与能形成四链体的DNA诸区域相互作用的分子可对某些细胞增殖性疾病和相关病症施加治疗作用。异常升高的癌基因表达尤其可导致细胞增殖性疾病，四链体结构通常下调癌基因表达。癌基因的例子包括但不限于：MYC、HIF、VEGF、ABL、TGF、PDGFA、MYB、SPARC、HUMTEL、HER、VAV、RET、H-RAS、EGF、SRC、BCL1、BCL2、DHFR、HMGA和本领域技术人员已知的其它癌基因。此外，本文所述化合物可诱导细胞死亡(例如，凋亡)，与能形成四链体的DNA诸区域不相互作用。

结合能形成四链体的DNA诸区域的分子可按照不同机理施加生物学作用，包括，例如稳定天然四链体结构，通过阻断链切割而抑制天然四链体向双链体DNA转化，和稳定具有四链体去稳定核苷酸取代的天然四链体结构及其它序列特异性相互作用。因此，出于下调癌基因转录的目的，可将本文所述结合能形成四链体的DNA诸区域的化合物给予细胞、组织或生物体，从而治疗细胞增殖性疾病。

可通过监测四链体生物学活性来测定能形成四链体的天然DNA在细胞、组织和生物体中的生物学活性是否受到调节。可监测细胞、组织或生物体中DNA四链体形成区域的生物学活性，例如通过检测基因转录在对四链体形成DNA接触某分子的反应中是降低还是增加。可通过直接观察RNA转录物或观察转录物翻译的多肽来检测转录，这些方法是本领域熟知的。

与四链体形成DNA和四链体形成核酸相互作用的分子可用于治疗许多细胞增殖性疾病。细胞增殖性疾病包括，例如结肠直肠癌和造血肿瘤性疾病(即，涉及造血器官的增生性/瘤性细胞的疾病，例如骨髓、淋巴或红细胞谱系或其前体细胞产生的那些)。所述疾病可由分化不良的急性白血病，例如成红细胞白血病和急性原始巨核细胞白血病产生。其它骨髓疾病包括但不限于：急性前髓细胞性白血病(APML)、急性骨髓性白血病(AML)和慢性骨髓性白血病(CML)(Vaickus，Crit.Rev.刊于Oncol./Hemotol.11：267-297(1991))。淋巴恶性疾病包括但不限于：急性成淋巴细胞性白血病(ALL)，其包括B-谱系ALL和T-谱系ALL，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，前淋巴细胞性白血病(PLL)，毛细胞性白血病(HLL)和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)。恶性淋巴瘤的其它形式包括但不限于：非-霍奇金淋巴瘤及其变体、外周T细胞淋巴瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATL)、皮肤T-细胞淋巴瘤(CTCL)、大颗粒淋巴细胞性白血病(LGF)。霍奇金病和里-施二氏病(Reed-Sternberg disease)。细胞增殖性疾病还包括结肠直肠、乳腺、肺、肝、胰腺、淋巴结、结肠、前列腺、脑、头和颈、皮肤、肝、肾、血液和心脏的癌症。与可形成四链体的DNA诸区域相互作用的化合物还可通过抑制对象的血管生成而用于靶向癌症相关过程和状况，例如血管生成增加。

本发明提供减缓细胞组织或治疗或缓解细胞增殖性疾病的方法，包括使具有能形成四链体区域的天然DNA的系统接触任一上式所示化合物。所述系统可以是细胞的组合或一种或多种组织。在一个实施方式中，所述系统是需要治疗细胞增殖性疾病的对象(例如，哺乳动物，如小鼠、大鼠、猴或人)。本发明还提供治疗结肠直肠癌症的方法，该方法将与c-MYC四链体形成区域相互作用的化合物给予有此需要的对象，从而减缓结肠直肠癌细胞增殖。此外，本发明提供抑制血管生成并任选治疗血管生成相关癌症的方法，包括将与血管内皮生长因子(VEGF)四链体形成区域相互作用的化合物给予有此需要的对象，从而减缓血管生成并任选治疗血管生成相关癌症。

与DNA的四链体形成区域相互作用的化合物还可用于减轻微生物感染，例如病毒感染。逆转录病毒为G-四链体靶向治疗提供丰富的潜在靶位。有人指出，G-四链体结构在HIV的病毒RNA或DNA形成的至少两个二级结构，即，二聚体连接基结构(DLS)和中心DNA薄片(central DNA flap)(CDF)中作为功能元件。此外，能采取分子间或分子内四链体结构的DNA适体能抑制病毒复制。在一个实例中，DNA适体能通过靶向包装糖蛋白而抑制病毒复制(推定的)。在另一实例中，DNA适体通过分别靶向HIV-整合酶而抑制病毒复制，提示涉及天然四链体结构与整合酶的相互作用。

二聚体连接基结构对于所有逆转录病毒是普遍的，其用于通过两条病毒RNA序列的两个5’端之间的非共价相互作用而将两拷贝的病毒基因组结合在一起。在成熟病毒颗粒中，基因组二聚体与gag蛋白稳定结合。以HIV为例，该非共价结合的起源可追溯至含有几轮的至少两个保守性鸟嘌呤的98-碱基对序列(例如，用于体外形成RNA二聚体的3’)。除反义序列未能有效二聚合外，观察到体外二聚体的形成和稳定性依赖于阳离子(钾)提示最可能结合的结构是分子间G-四链体。

整合入宿主基因组之前，逆转录的病毒DNA与至少两种主要的病毒蛋白，即整合酶和逆转录酶形成整合前复合物(PIC)，随后转运入核。中心DNA薄片(CDF)指+链的长99-碱基的单链尾，其接近病毒双链体DNA的中心，已知其在PIC的核输入中起作用。CDF的寡核苷酸模拟物显示在无细胞系统中形成分子间G-四链体结构。

因此，识别四链体形成区域的化合物可用于稳定二聚体连接基序列，因而阻止两条RNA链的再偶联。通过与CDF形成的四链体结构结合，可破坏PIC核运输的蛋白质识别和/或结合事件。与其它抗病毒治疗剂相比，每种情况均存在实质性优势。目前高度活性的抗逆转录病毒治疗(HAART)方案依赖于联用靶向HIV蛋白酶和HIV整合酶的药物。多药方案要求尽可能降低单独使用药剂时通常快速产生的耐药性。这种快速耐药性的原因是逆转录酶的不保真性，从而大约每10,000碱基对中出现1次突变。靶向病毒四链体结构而非蛋白质靶标的优点在于耐药性的产生缓慢或者不可能。靶四链体的点突变可损害四链体结构的完整性并产生病毒的无功能拷贝。基于这一概念的单一治疗剂可替代目前采用的多药方案，随之带来成本降低和消除有害的药物/药物相互作用的益处。

本发明提供降低系统中微生物滴度的方法，包括使得具有天然DNA四链体消除区域的系统接触任一上式所示化合物。该系统可以是一个或多个细胞或组织。微生物滴度的例子包括但不限于：病毒、细菌或真菌滴度。在具体实施方式中，该系统是需要治疗病毒感染的对象(例如，哺乳动物，如小鼠、大鼠、猴或人)。病毒感染的例子包括以下病毒所致感染：肝炎病毒(例如，乙型或丙型肝炎)、人免疫缺陷病毒(HIV)、鼻病毒、带状疱疹病毒(VZV)、单纯疱疹病毒(例如，HSV-1或HSV-2)、巨细胞病毒(CMV)、痘苗病毒、流感病毒、脑炎病毒、汉坦病毒、虫媒病毒、西尼罗病毒、人乳头瘤病毒(HPV)、E-B病毒和呼吸道合胞体病毒。本发明还提供治疗HIV感染的方法，所述方法将任一上式所示化合物给予有此需要的对象，从而减轻HIV感染。

鉴定能结合DNA的四链体形成区域的化合物

本文所述化合物可结合DNA的四链体形成区域，该区域的生物学活性常表示为“信号”，而含有所述化合物的系统产生的信号不同于不含所述化合物的系统中产生的信号。虽然每次通过试验检测新分子时可评估背景信号，但每次检测新分子时无需评估背景信号。

除了测定测试分子或测试核酸是否产生不同信号外，还可定量测定核酸和化合物之间相互作用的亲和力。可将IC₅₀、Kd或Ki阈值与每次相互作用的检测IC₅₀或Kd值作比较，从而鉴定作为四链体相互作用分子的测试分子或作为四链体形成核酸的测试核酸。例如，常采用10μM或更低、1μM或更低和100nM或更低的IC₅₀或Kd阈值。在另一实例中，可采用10nM或更低、1nM或更低、100pM或更低和10pM或更低的阈值来鉴定四链体相互作用分子和四链体形成核酸。

可采用许多试验鉴定对DNA的四链体形成区域具有亲和力的化合物。在一些试验中，生物学活性是四链体核酸与化合物的结合，该结合检测为信号。在其它试验中，生物学活性是四链体的聚合酶抑制功能，抑制程度检测为信号降低。在某些试验中，生物学活性是转录，转录水平可定量测定为信号。在另一试验中，生物学活性是细胞死亡，并定量测定经历细胞死亡的细胞数量。另一试验监测癌细胞的增殖率。试验的例子是荧光结合试验、凝胶迁移率变动分析(参见，例如Jin和Pike，Mol.Endocrinol.(1996)10：196-205)、聚合酶抑制试验、转录报道试验、癌细胞增殖试验和凋亡试验(参见，例如AB公司(Amersham Biosciences，皮斯卡塔韦，新泽西州))，这些试验的实施方式描述于下文实施例8。拓扑异构酶试验也可用于测定四链体相互作用分子是否具有拓扑异构酶途径活性(参见，例如拓扑金公司(TopoGEN，Inc.，哥伦布，俄亥俄州))。

配制化合物

本文所用的术语“其药学上可接受的盐或酯”包括但不限于本领域技术人员已知适用于人和动物的羧酸盐、氨基酸加成盐和这些化合物的酯及其两性离子形式。(参见，例如通过引用纳入本文的Gerge，S.M.等，“PharmaceuticalSalts”(药物盐)J.Pharm.Sci.(1977)66：1-19)。

可制备本文所述化合物的任何合适制剂。在化合物碱性或酸性足以形成稳定的无毒酸性或碱性盐的情况中，所述化合物作为盐给予是合适的。药学上可接受的盐的例子是与形成生理可接受的阴离子的酸形成的有机酸加成盐，例如甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮戊二酸盐和α-甘油磷酸盐。还可形成合适的无机盐，包括盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐。采用本领域熟知的标准方法获得药学上可接受的盐。例如，可将碱性足够的化合物，例如胺与提供生理上可接受的阴离子的合适酸反应而获得药学上可接受的盐。还可制备羧酸的碱金属(例如，钠、钾或锂)或碱土金属(例如，钙)盐。

可将化合物配制成药物组合物并给予需要这种治疗的哺乳动物宿主。在一个实施方式中，所述哺乳动物宿主是人。可采用任何合适的给药途径，包括但不限于口服、胃肠外、静脉内、肌肉内、局部和皮下途径。

在一个实施方式中，全身性(例如，口服)组合给予化合物和药学上可接受的载体，例如惰性稀释剂或可同化的可食用运载体。可将它们封闭在硬或软壳明胶胶囊中，压制成片剂或直接掺入患者饮食的食物中。对于口服治疗剂给药，可将活性化合物与一种或多种赋形剂组合并以可摄取片剂、口腔含化片剂、锭剂、胶囊、酏剂、混悬液、糖浆、薄膜片等使用。这种组合物和制品应含有至少0.1％的活性化合物。组合物和制品的百分比可以不同，以给定单位剂型的重量计，可以方便地在约2-约60％之间。这种治疗有用的组合物中活性化合物的含量是能获得有效剂量水平的量。

片剂、锭剂、丸剂、胶囊等还可含有以下组分：粘合剂，例如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，例如磷酸二钙；崩解剂，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸等；润滑剂，例如硬脂酸镁；和甜味剂，例如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜，或调味剂，例如胡椒、冬青油或可加入樱桃调味剂。当单位剂型是胶囊时，除上述类型的物质外，其还可含有液体运载体，例如植物油或聚乙二醇。可存在各种其它物质作为包衣或用于修饰固体单位剂型的物理形式。例如，可用明胶、蜡、虫胶或糖等包衣片剂、丸剂或胶囊。糖浆或酏剂可含有活性化合物，作为甜味剂的蔗糖或果糖，作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和丙酯，色素和调味剂，例如樱桃或橙味调味剂。用于制备任何单位剂型的任何物质是药学上可接受的并且其用量是基本上无毒的。此外，可将活性化合物掺入缓释制品和装置。

还可通过输注或注射而静脉内或腹膜内给予活性化合物。可用缓冲溶液，常是磷酸缓冲盐水制备活性化合物或其盐的溶液，任选混合有无毒表面活性剂。还可用甘油、液体聚乙二醇、三醋精和它们的混合物以及油制备分散体。在储存和使用的常规条件下，这些制品含有防腐剂以防止微生物生长。有时，化合物制备成用于这种给药的含聚合基质的制剂(例如，脂质体或微粒体)。脂质体描述于，例如美国专利号5,703,055(Felgner等)和Gregoriadis，LiposomeTechnology(脂质体技术)第I-III卷(第2版，1993)。

适于注射或输注的药物剂型可包括无菌水性溶液或分散体，或含有活性成分，适于临时制备成无菌可注射或可输注溶液或分散体的无菌粉末，任选包裹在脂质体中。在所有情况中，最终的剂型在制备和储存条件下应是无菌的、液体和稳定的。液体运载体或载体可以是溶剂或液体分散体介质，包括，例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒甘油酯和它们的合适混合物。可通过，例如形成脂质体，在分散体的情况通过维持颗粒大小或利用表面活性剂来维持适当流动性。可利用各种抗细菌或抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等阻止微生物的作用。在许多情况中，优选包含等渗剂，例如糖、缓冲剂或氯化钠。可利用延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶的组合物延长可注射组合物的吸收。

将所需量的活性化合物掺入视需要含有上述各种其它成分的合适溶剂中，然后经过滤除菌制备无菌可注射溶液。以制备无菌可注射溶液的无菌粉末为例，优选的制备方法是真空干燥和冻干技术，从而产生事先无菌过滤的溶液中存在的活性成分加任何额外的所需成分的粉末。

对于局部给药，可采用液体形式施加本发明化合物。常将化合物作为组合物或制剂与皮肤可接受的运载体组合给予，其可以是固体或液体。用于将化合物递送给皮肤的有用皮肤组合物的例子是已知的(参见，例如Jacquet等，(美国专利号4,608,392)，Geria(美国专利号4,992,478)，Smith等，(美国专利号4,559,157)和Wortzman(美国专利号4,820,508)。

可用固体运载体配制化合物，所述运载体包括精细粉碎的固体，例如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝等。有用的液体运载体包括水、醇或甘油或水-醇/甘油混合物，本发明化合物可以有效量溶解或分散于其间，任选借助无毒表面活性剂。可加入辅助剂，例如香料和其它抗微生物剂，从而达到给定应用的最佳特性。得到的液体组合物可从吸收剂垫施加，用于浸渍绷带和其它包扎用品，或利用泵形或气溶胶喷雾器喷在受影响区域上。增稠剂，例如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯、脂肪醇、改性纤维素或改性矿物质也可与液体运载体联用形成可涂开的糊剂、凝胶、乳膏、肥皂等以便直接应用于用户的皮肤。

液体组合物中化合物的浓度通常是约0.1wt％-约25wt％，有时是约0.5wt％-约10wt％。半固体或固体组合物，例如凝胶或粉末中的浓度常是约0.1wt％-约5wt％，有时是约0.5wt％-约2.5wt％。可根据医药工业已知的常规技术将化合物组合物制备成单位剂型。这些技术通常包括使化合物与液体形式或精细分级固体形式的药物运载体和/或赋形剂，或二者结合，然后如果需要使产物成形。

在具体的例子中，药物组合物包含约2％w/w的式(I)所示化合物，约4％甘露醇和约0.5％蔗糖。在具体的实例中，制剂的pH约为3.5。对于可注射制剂，可加水至最终重量。

可将化合物组合物配制成任何剂型，例如片剂、胶囊、凝胶胶囊、液体糖浆、软凝胶、栓剂和灌肠剂。还可在水性、非水性或混合介质中将组合物配制成混悬液。水性混悬液还可含有增加粘度的物质，包括例如羧甲基纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖。混悬液还可含有一种或多种稳定剂。

用于治疗所需的化合物，或其活性盐或衍生物的含量不仅可随选择的特定盐，还可随给药途径、所治疗疾病的性质和患者的年龄及情况而有所不同，最终应由主治医师或临床医师判断。

有用的化合物剂量常通过在细胞或组织系统中评估其体外活性或在动物系统中评估体内活性来测定。例如，本领域已知将小鼠和其它动物中的有效剂量外推至人的方法(参见，例如美国专利号4,938,949)。这些系统可用于测定化合物的LD₅₀(50％群体的致死剂量)和ED₅₀(在50％群体中治疗有效的剂量)。毒性和疗效之间的剂量比是治疗指数，其可表示为比率ED₅₀/LD₅₀。化合物剂量常落在ED₅₀与毒性不大或无毒性相关的循环浓度范围内。该剂量可根据所用剂型和给药途径而在该范围内改变。对于本文所述方法中使用的任何化合物，可首先从细胞培养试验建立治疗有效剂量。有时将剂量配制成能在体外试验中测定到循环血浆浓度范围涵盖IC₅₀(即，实现症状的半最大抑制的测试化合物浓度)，因为这种信息常用于更精确地测定人的有用剂量。可检测血浆中的水平，例如通过高效液相层析。

测定对象的有效剂量的另一例子是能直接检验测试对象血清中“游离”和“结合”化合物的水平。这些试验可利用通过分子印记技术产生的抗体模拟物和/或“生物传感器”。化合物用作模板，或“印记分子”，从而先在空间上组织可聚合的单体，再用催化试剂聚合它们。随后除去印记分子留下含有化合物的重复“负图像”并能在生物学试验条件下选择性再结合该分子的聚合物基质(参见，例如Ansell等.，Current Opinion in Biotechnology(1996)7：89-94和Shea，Trends in Polymer Science(1994)2：166-173)。这种“印记”亲和力基质适于配体结合试验，从而用合适印记的基质替代固定化单克隆抗体组分(参见，例如Vlatakis等，Nature(1993)361：645-647)。通过利用同位素标记，不难监测化合物的“游离”浓度，并用于计算IC₅₀。还可将这种“印记”亲和力基质设计成包含荧光基团，其光子发射特性在局部和选择性结合化合物后发生可检测的改变。采用合适的光纤装置不难实时检验这些改变，进而根据其各IC₅₀快速优化测试对象中的剂量。这种“生物传感器”的例子讨论于Kriz等，Analytical Chemistry(1995)67：2142-2144。

在一些实施方式中，提供的化合物和组合物在小鼠或人对象中显示口服生物利用度。在具体的实施方式中，本发明提供包含式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VI′)、(VII)或(VIII)所示化合物的组合物，所述组合物在小鼠或人对象中的口服生物利用度至少15％。在其它实施方式中，所述组合物在小鼠或人对象中的口服生物利用度至少20％、30％、40％或50％。在优选的实施方式中，所述对象是人。不想受理论的束缚，但据信本发明化合物所显示的口服生物利用度可能至少部分是因为A²、A³、-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰所示基团中存在的碱性部分的质子化状态。

可选择本发明的示范性化合物，从而使得A²、A³、-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰所示基团中存在的碱性部分的共轭酸的pKa在约7-9之间，从而该基团在pH约7.0-约9.0范围有约50％质子化。在一些实施方式中，式(VI)或(VI’)中的7-元X¹-X⁷环，或式(VII)和(VIII)中的高哌嗪环可用作碱性部分，如上所述。

本发明还提供单位剂型的药物组合物，其包含治疗有效量式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VI’)、式(VII)或式(VIII)所示的至少一种化合物。

在具体的实施方式中，本发明提供单位剂型的药物组合物，其包含式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VI’)、式(VII)或式(VIII)所示化合物，其中将该剂型一次口服给予对象可提供至少1000纳克/毫升*小时，优选大于2000纳克/毫升*小时，更优选大于10,000纳克/毫升*小时的AUC(8小时)。

生物利用度(F)是药物的给予剂量达到全身循环或所需作用部位程度的量度。生物利用度取决于吸收率和药物在达到全身性循环之前的清除或代谢的程度。例如，口服给予的药物先经过肝脏，再达到全身性循环，可能经历肝脏或胆排泄的首过代谢作用。

对于某些治疗适应症，口服给予因其安全性、便利性和经济优势而是优选的给药途径。开发高度口服生物利用度化合物常是开发生物活性分子作为治疗剂的重要考虑。

口服生物利用度不佳可导致与活性药物接触时的易变，还可导致缺乏疗效或与特定药剂过度接触。例如，药物代谢酶，例如细胞色素P450或甲基转移酶中的多晶型变化或共同给予能抑制这种酶的药物可降低首过清除并增加不良或毒性水平的药物接触。

描述药物离开其给予部位的速度和程度的“吸收”受许多变量的影响，包括影响经膜转运的药物的物理化学特性和所选的剂型。对于口服给予的化合物，吸收主要发生在胃肠(GI)道中，受包括吸收的可用表面积、血流程度、药物的物理状态和药物在吸收部位的局部浓度在内的因素影响。具体地说，水溶性会影响吸收速度和部位。低溶解性药物常显示生物利用度不佳或吸收不规则，吸收程度受诸如剂量水平、患者的进食状态和剂型等因素影响。在固体剂型中，溶出速度可能是决定吸收的限制因子。

药物溶解性受GI道中pH梯度的影响。例如，在胃部的低pH环境中(pH约1.2)可溶的碱性药物达到小肠的高pH环境时(pH 5-7，通常约6.5)溶解性降低，这取决于药物的pKa。虽然在GI道的特定位置非电离形式的药物比电离形式更快吸收，但小肠的总吸收率高于胃，而无论电离状态，因为可用的表面积较大。(参见，例如Goodman和Gilman The Pharmacological Basis of Therapeutics(治疗的药理学基础)(第9版)(Goodman等编)(M-H公司)(1996)。

许多药物由弱酸或弱碱构成，在溶液中它们的电离(即，荷电的)和非电离形式之间存在平衡。药物的pKa以及溶液的pH决定电离程度。pH影响弱酸和弱碱的溶出速度。弱酸在碱性环境中变得电离从而解离，而弱碱在酸性环境中变得电离。

可采用方程式1计算HA酸的电离百分比，采用方程式2计算BH⁺酸的电离百分比：

％电离＝100/(1+10^(pKa-pH))(方程式1)

％电离＝100/(1+10^(pH-pKa))(方程式2)

当pH等于pKa，化合物有50％电离，即电离与非电离药物之比为50∶50。在亨-哈二氏方程中，当log[共轭碱]/[酸]＝1时，pKa＝pH。从pKa增加1个pH单位(即，溶液的碱度增加)导致BH⁺酸的电离百分比降低至只有9.1％，并导致HA酸有90.9％成为电离的共轭碱形式。增加两个pH单位基本上将BH⁺酸变成非离子共轭碱形式(0.99％)，而HA酸变得几乎完全电离(99％)。当溶液比药物的pKa值更具酸性时，观察到相反的情况。(参见，例如Block，刊于Textbook of Organic Medicinal and Pharmaceutical Chemistry(有机医学和药物化学教材)(第10版)(Delgado和Remers编)(LR公司(Lippincott-Raven))(1998)。

在一方面，选择本发明口服组合物的活性化合物，从而该化合物在约7-约9的pH范围时有约50％电离。这种化合物可显示最佳口服生物利用度和效力。

在某些实施方式中，优选的A²、A³、-W、-L-W和-L-N(R)W⁰基团是在水性溶液中显示的解离常数pKa的幅度使得至少一部分胺在生理pH值，例如pH-值约4-约9时电离的那些基团。显示pKa在约6-约10，优选约7-约9的胺可能尤其适合。

药代动力学

可根据在不同时间点取得的样品中化合物的含量测定药代动力学参数。本领域普通技术人员可适当选择药代动力学参数的类型和测定参数的方法。可评估的药代动力学参数的例子包括但不限于：最高(峰值)血浆药物浓度(Cmax)(通常以ng/ml表示)；最高血浆药物浓度发生的时间(峰值时间；Tmax)；和液体(例如，血浆)浓度-时间曲线下面积(AUC)。本领域普通技术人员能计算这种参数(例如，Mei等.，AAPS Journal(2006)8(3)58章(http地址www.aapsj.org))。

可通过检测“曲线下面积”(AUC)或C_max这两个本领域熟知的参数来评估口服生物利用度。通过绘制沿纵坐标(Y-轴)的药物血清或血浆浓度与沿横坐标(X-轴)的时间的图来测定AUC。AUC的值通常表示从测试群体中所有对象取得的许多值，因此是在整个测试群体上取平均的平均值。

AUC_0-8(纳克.小时/毫升)是第0时到第8小时的血浆浓度与时间曲线下的面积，可根据Gibaldi，M.和Perrier，D.Pharmacokinetics(药代动力学)，第二版，MD公司(Marcel Dekker，Inc.)，纽约(1982)，采用线性梯形规则计算。AUC_0-inf是从第0时外推至无限的血浆浓度与时间曲线下的面积(以纳克.小时/毫升表示)。

可测定其它药代动力学参数。例如，T_1/2是末端半衰期(terminal halflife)(以小时表示)；Vd_ss是稳态分布体积(以升/千克表示)；和Cl_S是全身性清除率(以升/小时/千克表示)。

剂量

有用的化合物剂量常通过在细胞或组织系统中评估其体外活性或在动物系统中评估体内活性来测定。例如，本领域已知将小鼠和其它动物中的有效剂量外推至人的方法(参见，例如美国专利号4,938,949)。这些系统可用于测定化合物的LD₅₀(50％群体的致死剂量)和ED₅₀(在50％群体中治疗有效的剂量)。毒性和疗效之间的剂量比是治疗指数，其可表示为比率ED₅₀/LD₅₀。化合物剂量常落在ED₅₀与毒性不大或无毒性相关的循环浓度范围内。该剂量可根据所用剂型和给药途径而在该范围内改变。对于本文所述方法中使用的任何化合物，可首先从细胞培养试验建立治疗有效剂量。有时将剂量配制成能在体外试验中测定到循环血浆浓度范围涵盖IC₅₀(即，实现症状的半最大抑制的测试化合物浓度)，因为这种信息常用于更精确地测定人的有用剂量。可检测血浆中的水平，例如通过高效液相层析。

测定对象的有效剂量的另一例子是能直接检验测试对象血清中“游离”和“结合”化合物的水平。这些试验可利用通过分子印记技术产生的抗体模拟物和/或“生物传感器”。化合物用作模板，或“印记分子”，从而先在空间上组织可聚合的单体，再用催化试剂聚合它们。随后除去印记分子留下含有化合物的重复“负图像”并能在生物学试验条件下选择性再结合该分子的聚合物基质(参见，例如Ansell等.，Current Opinion in Biotechnology(1996)7：89-94和Shea，Trends in Polymer Science(1994)2：166-173)。

这种“印记”亲和力基质适于配体结合试验，从而用合适印记的基质替代固定化单克隆抗体组分(参见，例如Vlatakis等，Nature(1993)361：645-647)。通过利用同位素标记，不难监测化合物的“游离”浓度，并用于计算IC₅₀。还可将这种“印记”亲和力基质设计成包含荧光基团，其光子发射特性在局部和选择性结合化合物后发生可检测的改变。采用合适的光纤装置不难实时检验这些改变，进而根据其各IC₅₀快速优化测试对象中的剂量。这种“生物反应器”的例子讨论于Kriz等，Analytical Chemistry(1995)67：2142-2144。

示范性剂量包括每千克对象或样品重量的毫克或微克量化合物，例如每千克约1微克-每千克约500毫克，每千克约100微克-每千克约5毫克，或每千克约1微克-每千克约50微克。应该知道小分子的合适剂量取决于小分子对于待调节的表达或活性的效力。当要将一种或多种这些小分子给予动物(例如，人)以调节本文所述多肽或核酸的表达或活性时，医师、兽医或研究人员可以例如首先开出较低剂量的处方，然后增加该剂量直至获得合适的反应。此外，应该知道任何具体动物对象的特定剂量水平取决于各种因素，包括所用具体化合物的活性，对象的年龄、体重、总体健康、性别和饮食，给药时间，给药途径，排出途径，任何药物组合和表达或活性的调节程度。

提供以下实施例是为了说明而非限制本发明。

实施例1

向氯酯(5.00g，13.94mmol)的ACN(50mL)浆液中加入N-甲基哌嗪(3.10mL，27.95mmol)，将该混合物加热回流过夜。将反应冷却至室温，通过过滤收集沉淀物从而产生褐色固体状的所需产物(4.7g，80％)。¹H NMR(CDCl₃)δ：9.47(d，1H)，8.62(d，1H)，7.74(dd，1H)，7.51(m，1H)，7.43(m，1H)，6.89(d，1H)，4.50(q，2H)，3.85(t，4H)，2.62(t，4H)，2.40(s，3H)，1.49(t，3H)。LCMS(ES)：m/z 423[M+1]⁺。

实施例2

向酯(150mg，0.34mmol)和2-甲氧基乙胺(0.50mL，5.80mmol)的DCM(10mL)溶液中加入AlCl₃(150mg，1.12mmol)。室温下，搅拌反应混合物过夜。用DCM(100mL)和6N NaOH(25mL)稀释反应，并搅拌10分值。分离诸层，用H₂O(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去溶剂，在ACN中研磨得到的固体获得白色固体状的所需产物。LCMS(ES)：m/z 470[M+1]⁺。

实施例3

向酯(1.45g，3.44mmol)、吡啶-2-基甲胺(1.00mL，9.78mmol)和DBU(1.50mL，10.03mmol)的DCM(40mL)溶液中加入AlCl₃(475mg，7.31mmol)。室温下搅拌该反应混合物过夜。用DCM(400mL)和1N NaOH(200mL)稀释反应并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×100mL)、盐水(100mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，在ACN中研磨得到的固体获得白色固体状的所需产物(1.07g，64％)。¹H NMR(CDCl₃)δ：11.24(t，1H)，9.50(d，1H)，8.62(m，2H)，7.77(dd，1H)，7.65(m，1H)，7.53(m，1H)，7.49(m，2H)，6.93(d，1H)，4.89(d，2H)，3.88(t，4H)，2.63(t，4H)，2.41(s，3H)。LCMS(ES)：m/z 485[M+1]⁺。

实施例4

向酯(150mg，0.34mmol)、(1-甲基-1H-咪唑-4-基)甲胺(0.15mL，1.35mmol)和DBU(2.00mL，1.33mmol)的DCM(10mL)溶液中加入AlCl₃(130mg，0.97mmol)。室温下搅拌反应混合物过夜。用DCM(100mL)和6NNaOH(25mL)稀释反应并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，用硅胶制备型TLC(10％MeOH/DCM)纯化反应粗品得到所需产物。LCMS(ES)：m/z 506[M+1]⁺。

实施例5

向酯(72mg，0.17mmol)、(5-甲基吡嗪-2-基)甲胺(0.10mL，0.81mmol)和DBU(0.20mL，1.34mmol)的DCM(10mL)溶液中加入AlCl₃(80mg，0.60mmol)。室温下搅拌反应混合物30分钟。用DCM(100mL)和3N NaOH(25mL)稀释反应并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，在ACN中研磨得到的固体获得白色固体状的所需产物(60mg，71％)。LCMS(ES)：m/z 500[M+1]⁺。

实施例6

向酯(100mg，0.238mmol)和环丙胺(37.7mg，0.66mmol)的DCM(10mL)溶液中加入DBU(0.35mL)和AlCl₃(130mg)。室温下搅拌反应混合物2小时。用DCM(30mL)和6N NaOH(10mL)稀释反应并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×10mL)、盐水(20mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，在乙酸乙酯中研磨得到的固体获得白色固体状的所需产物。LCMS(ES)：m/z 431[M+1]⁺。

实施例7

向吗啉代酯(morpholino ester)(1.0g，2.44mmol)的二氯甲烷(20mL)浆液中加入1-甲基-哌嗪(370mg，3.66mmol)和氯化铝(487mg，3.66mmol)，室温下搅拌该混合物2小时。真空除去溶剂，加入1N HCl(10mL)，然后加入2mL饱和的酒石酸溶液，搅拌该混合物30分钟直至均匀，用50mL水稀释。得到的混合物用3X 20mL乙酸乙酯萃取(弃去)，然后用1N NaOH碱化。过滤收集得到的固体，干燥并用乙腈(20mL)研磨。过滤得到白色固体状的终化合物(1.184g，略湿，含乙腈)。LCMS(ES)：m/z 464[M+1]⁺。

实施例8

向吗啉代酯(1.0g，2.44mmol)的二氯甲烷(20mL)浆液中加入1-2，氨基乙基吡咯烷(418mg，3.66mmol)和氯化铝(487mg，3.66mmol)，室温下搅拌该混合物2小时。真空除去溶剂，加入1N HCl(10mL)，再加入2mL饱和的酒石酸溶液，搅拌该混合物30分钟直至均匀，用50mL水稀释。得到的混合物用3X 20mL乙酸乙酯萃取(弃去)，然后用1N NaOH碱化。过滤收集得到的固体，干燥并用乙腈(20mL)研磨。过滤得到白色固体状的终产物(900mg，77％)。LCMS(ES)：m/z 478[M+1]⁺。

实施例9

向氯酯(15.00g，41.81mmol)的ACN(150mL)浆液中加入吗啉(7.5mL，85.74mmol)，将混合物回流加热过夜。将反应冷却至室温，过滤收集沉淀物。然后将固体溶解于CHCl₃(600mL)并经过CELITE^TM垫。减压除去有机溶剂，在ACN中研磨得到的固体获得灰白色固体状的所需产物(14.00g，82％)。¹H NMR(CDCl₃)δ：9.36(d，1H)，8.60(d，1H)，7.70(dd，1H)，7.47(m，1H)，7.37(m，1H)，6.84(d，1H)，4.51(q，2H)，3.92(t，4H)，3.77(t，4H)，1.49(t，3H)。LCMS(ES)：m/z 410[M+1]⁺。

实施例10

向2-(2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基氨基甲酸叔丁酯(160mg，0.75mmol)的DCM(1mL)溶液中加入HCl(2.0mL，4M，二噁烷配制)。室温下搅拌反应混合物2小时。减压除去有机溶剂，再溶解于DCM(10mL)和DBU(0.56mL，3.74mmol)中。向反应中加入该酯(150mg，0.37mmol)，然后加入AlCl₃(150mg，1.12mmol)，室温下搅拌1小时。用DCM(100mL)和3N NaOH(50mL)稀释反应并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，硅胶柱(0-10％MeOH/DCM)纯化反应粗品得到白色固体状的所需产物(130mg，75％)。¹H NMR(CDCl₃)δ：10.60(t，1H)，9.44(d，1H)，8.62(d，1H)，7.75(dd，1H)，7.48(m，1H)，7.44(m，1H)，6.91(d，1H)，5.78(s，2H)，3.94(t，4H)，3.81(t，4H)，3.66(q，2H)，3.63(s，4H)，2.96(t，2H)。LCMS(ES)：m/z 476[M+1]⁺。

实施例11

向酯(150mg，0.37mmol)、(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲胺(0.15mL，1.35mmol)和DBU(0.20mL，1.34mmol)的DCM(10mL)溶液中加入AlCl₃(150mg，1.12mmol)。室温下搅拌反应混合物1小时，加入更多的DBU(0.30mL，2.01mmol)，再搅拌30分钟。用DCM(150mL)和6N NaOH(25mL)稀释反应并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，在硅胶制备型TLC(10％MeOH/DCM)纯化反应粗品得到所需产物(100mg，58％)。LCMS(ES)：m/z 475[M+1]⁺。

实施例12

向酯(100mg，0.24mmol)、2-(哌嗪-1-基)嘧啶(0.10mL，0.61mmol)和DBU(0.10mL，0.67mmol)的DCM(10mL)溶液中加入AlCl₃(100mg，0.75mmol)。室温下搅拌反应混合物2小时。用DCM(150mL)和6N NaOH(25mL)稀释反应并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，硅胶柱(0-5％MeOH/DCM)纯化反应粗品得到白色固体状的所需产物(80mg，63％)。LCMS(ES)：m/z528[M+1]⁺。

实施例13

向酯(750mg，1.83mmol)、(1-甲基-1H-咪唑-2-基)甲胺(0.50mL，4.50mmol)和DBU(0.80mL，5.35mmol)的DCM(50mL)溶液中加入AlCl₃(750mg，5.62mmol)。室温下搅拌反应混合物3小时。用DCM(200mL)和3NNaOH(100mL)稀释反应并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×100mL)、盐水(100mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，硅胶柱(0-5％MeOH/DCM)纯化反应粗品得到白色固体状的所需产物(275mg，32％)。¹H NMR(CDCl₃)δ：11.0(t，1H)，9.45(d，1H)，8.61(d，1H)，7.76(dd，1H)，7.50(m，1H)，7.45(m，1H)，6.99(d，1H)，6.90(d，1H)，6.83(d，1H)，4.82(d，2H)，3.93(t，4H)，3.81(t，4H)，3.70(s，3H)。LCMS(ES)：m/z 475[M+1]⁺。

实施例14

向酯(500mg，1.22mmol)、2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)乙胺(325mg，2.60mmol)和DBU(1.00mL，6.69mmol)的DCM(18mL)溶液中加入AlCl₃(350mg，2.62mmol)。室温下搅拌反应混合物过夜。用DCM(200mL)和3NNaOH(50mL)稀释反应并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，在ACN中研磨得到的固体获得灰白色固体状的所需产物(360mg，60％)。¹H NMR(CDCl₃)δ：10.77(t，1H)，9.47(d，1H)，8.60(d，1H)，7.78(dd，1H)，7.53(m，1H)，7.44(m，1H)，6.93(m，3H)，4.15(t，2H)，3.94(t，4H)，3.83(t，4H)，3.79(q，2H)，2.42(s，3H)。LCMS(ES)：m/z 489[M+1]⁺。

实施例15

向酯(105mg，0.26mmol)、(1-甲基-1H-咪唑-4-基)甲胺(0.10mL，0.90mmol)和DBU(0.10mL，0.71mmol)的DCM(10mL)溶液中加入AlCl₃(75mg，0.56mmol)。室温下搅拌反应混合物过夜。用DCM(100mL)、6N NaOH(50mL)和饱和酒石酸钠钾(溶液)(50mL)稀释反应，并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，硅胶制备型TLC(5％MeOH/DCM)纯化反应粗品得到白色固体状的所需产物(40mg，33％)。LCMS(ES)：m/z 475[M+1]⁺。

实施例16

向氯酯(6.08g，16.14mmol)的ACN(100mL)浆液中加入吗啉(2.8mL，32.01mmol)，将该混合物加热回流3小时。将反应冷却至室温，过滤收集沉淀物。然后将固体溶解于CHCl₃(200mL)并经过CELITE^TM垫。减压除去有机溶剂，在ACN中研磨得到的固体获得白色固体状的所需产物(5.00g，73％)。¹H NMR(CDCl₃)δ：9.37(d，1H)，8.29(d，1H)，7.72(dd，1H)，7.47(m，1H)，7.42(m，1H)，4.50(q，2H)，3.94(t，4H)，3.81(t，4H)，1.48(t，3H)。LCMS(ES)：m/z 428[M+1]⁺。

实施例17

向酯(700mg，1.64mmol)和2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙胺(0.70mL，4.83mmol)的DCM(25mL)溶液中加入AlCl₃(645mg，4.84mmol)。室温下搅拌反应混合物1小时。用DCM(150mL)、6N NaOH(50mL)和饱和酒石酸钠钾(溶液)(50mL)稀释反应，并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，用Et₂O/EtOAc(1∶1)研磨得到的固体，获得白色固体状的所需产物(690mg，83％)。¹H NMR(CDCl₃)δ：10.45(t，1H)，9.41(d，1H)，8.29(d，1H)，7.76(dd，1H)，7.50(m，1H)，7.49(m，1H)，3.96(t，4H)，3.85(t，4H)，3.55(m，2H)，3.06(m，1H)，2.34(s，3H)，2.17(m，1H)，2.08(m，3H)，1.80(m，2H)，1.56(m，2H)。LCMS(ES)：m/z 510[M+1]⁺。

实施例18

向酯(515mg，1.20mmol)和C-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)-甲胺(199.5，1.79mmol)的DCM(40mL)溶液中加入DBU(0.98mL)和AlCl₃(352.3mg)。室温下搅拌反应混合物过夜。用DCM(100mL)和6N NaOH(25mL)稀释反应，并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，在乙酸乙酯中研磨得到的固体获得白色固体状的所需产物。LCMS(ES)：m/z 493[M+1]⁺。

实施例19

向酯(300mg，0.70mmol)和1-甲基哌嗪(0.25mL，2.25mmol)的DCM(15mL)溶液中加入AlCl₃(305mg，2.29mmol)。室温下搅拌反应混合物1小时。用DCM(100mL)、6N NaOH(50mL)和饱和酒石酸钠钾(溶液)(50mL)稀释反应，并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，用Et₂O/EtOAc(1∶1)研磨得到的固体，获得白色固体状的所需产物(280mg，83％)。¹H NMR(CDCl₃)δ：9.37(d，1H)，8.29(d，1H)，7.65(dd，1H)，7.48(m，1H)，7.40(m，1H)，3.95(t，4H)，3.88(m，2H)，3.82(t，4H)，3.48(m，2H)，2.54(m，2H)，2.44(m，2H)，2.32(s，3H)。LCMS(ES)：m/z 482[M+1]⁺。

实施例20

用微波炉将氯酯(800mg，2.25mmol)和吡咯烷(0.40mL，4.79mmol)的DMF(5.0mL)浆液在65℃加热15分钟。用EtOAc(50mL)稀释反应，过滤收集得到的沉淀物获得所需产物。LCMS(ES)：m/z 391[M+1]+。

实施例21

向酯(675mg，1.73mmol)、2-(吡咯烷-1-基)乙胺(0.65mL，5.13mmol)和DBU(0.75mL，5.02mmol)的DCM(30mL)溶液中加入AlCl₃(680mg，5.10mmol)。室温下搅拌反应混合物1.5小时。用DCM(100mL)、6N NaOH(50mL)和饱和酒石酸钠钾(溶液)(50mL)稀释反应并搅拌15分钟。分离诸层，用H₂O(2×100mL)、盐水(100mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，硅胶柱(5％MeOH/2％TEA/DCM)纯化反应粗品得到白色固体状的所需产物(538mg，68％)。¹H NMR(CDCl₃)δ：9.91(t，1H)，8.90(d，1H)，8.45(d，1H)，7.37(m，3H)，6.52(d，1H)，4.00-3.40(br s，4H)，3.81(s，3H)，3.65(q，2H)，2.79(t，2H)，2.63(m，4H)，2.14(m，4H)，1.81(m，4H)。LCMS(ES)：m/z 459[M+1]⁺。

实施例22

利用微波炉在100℃加热5分钟，使氯酯(1.0当量，250mg，2.67mmol)与吗啉(0.29ml)在NMP(1ml)中反应。过滤冷却后形成的固体，用NMP洗涤。在热AcOEt中超声处理该物质，冷却后过滤。分离白色固体状的产物2(173mg，62％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 425[M+1]⁺。

实施例23

将酯(1.0当量，312mg，0.73mmol)和2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙胺(2.0当量，0.21ml，1.45mmol)与DBU(4.0当量，0.44ml，2.94mmol)在CH₂Cl₂(5ml)中混合。加入氯化铝(2.0当量，196mg，1.47mmol)，45℃搅拌反应5小时。真空除去溶剂，用饱和的酒石酸水溶液处理固体1小时。加入水后，通过加入NaOH将pH调节至12-14。用CH₂Cl₂(4x)萃取产物。用水和盐水洗涤合并的萃取物，Na₂SO₄干燥，真空除去溶剂。用AcOEt和己烷的混合物研磨残留物，过滤并干燥得到灰白色固体状的所需化合物(318mg，85％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 507[M+1]⁺。

通过相同的方法，利用合适的胺和喹诺酮乙酯制备表1所示的以下化合物。

表1

实施例24

150℃，将酯(6.53g，15.97mmol)的乙醇胺(30mL)溶液搅拌过夜。用H₂O(100mL)稀释反应，过滤收集得到的沉淀物。用H₂O(2x)和ACN(2x)洗涤固体得到白色固体状的所需产物(5.75g，85％)。¹H NMR(DMSO-d⁶)δ：10.57(t，1H)，9.32(d，1H)，8.36(d，1H)，7.99(dd，1H)，7.55(m，1H)，7.48(m，1H)，7.18(d，1H)，4.85(t，1H)，3.82(t，4H)，3.75(t，4H)，3.56(q，2H)，3.43(q，2H)。LCMS(ES)：m/z 425[M+1]⁺。

实施例25

向醇(500mg，1.18mmol)和TEA(0.50mL，3.58mmol)的DCM(30mL)溶液中加入MsCl(0.20mL，2.58mmol)。室温下搅拌反应混合物1小时，然后用DCM(100mL)和饱和NH₄Cl(50mL)稀释。分离诸层，用H₂O(100mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，用ACN研磨反应粗品得到淡黄色固体状的所需产物(400mg，68％)。该物质无需进一步纯化即可使用。LCMS(ES)：m/z 503[M+1]⁺。

实施例26

用微波炉在130℃加热甲磺酸酯(mesylate)(90mg，0.18mmol)、2-氟乙胺(40mg，0.40mmol)和TEA(0.05mL)的NMP(1.5mL)溶液20分钟。用ACN(5mL)稀释反应，过滤收集得到的沉淀物。硅胶TLC(10％MeOH/DCM)纯化反应粗品得到所需产物。LCMS(ES)：m/z 470[M+1]⁺。

实施例27

用微波炉在130℃加热甲磺酸酯(50mg，0.10mmol)、环丙胺(0.10mL，1.75mmol)、HCl(1N，0.05mL)和TEA(0.05mL)的NMP(1.5mL)溶液20分钟。反相HPLC纯化反应粗品得到所需产物。¹H NMR(CDCl₃)δ：10.64(t，1H)，9.45(d，1H)，8.63(d，1H)，7.77(dd，1H)，7.50(m，1H)，7.42(m，1H)，6.92(d，1H)，3.94(t，4H)，3.82(t，4H)，3.66(q，2H)，3.01(t，2H)，2.00(m，1H)，0.43(m，4H)。LCMS(ES)：m/z 464[M+1]⁺。

实施例28

用微波炉在120℃加热甲磺酸酯(100mg，0.20mmol)、环丁胺(0.10mL，1.41mmol)、HCl(1N，0.05mL)和TEA(0.05mL)的ACN(2.0mL)溶液15分钟。过滤收集得到的沉淀物，经硅胶TLC(15％MeOH/DCM)纯化得到所需产物(65mg，98％)。LCMS(ES)：m/z 478[M+1]⁺。

实施例29

160℃，将酯(0.5g，1.16mmole)和乙醇胺(0.7mL，11.63mmole)在3mL NMP中加热20分钟(微波炉)。过滤形成的固体，用MeOH洗涤数次，真空下空气干燥。获得灰白色固体状的醇，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。室温下，向DCM(10mL)中的该醇(0.204g，0.46mmole)和三乙胺中加入MsCl。室温下，搅拌该混合物30分钟。加入二氯甲烷(100mL)，用饱和碳酸氢钠溶液(2×100mL)、盐水(100mL)洗涤得到的溶液，硫酸钠干燥并在真空下浓缩得到黄色固体状的甲磺酸酯。

实施例30

100℃，将甲磺酸酯(50mg)和环丙胺(0.2mL)的ACN(1mL)溶液加热20分钟(微波炉)。真空除去溶剂，用乙酸乙酯研磨化合物得到白色固体。LCMS(ES)：m/z 482[M+1]⁺。

实施例31

90℃，将甲磺酸酯(54mg)、环丁胺盐酸盐(0.2g)和TEA(0.2mL)的ACN(1mL)溶液加热1小时(微波炉)。真空除去溶剂，硅胶TLC(10％MEOH/DCM)纯化残留物得到白色固体。LCMS(ES)：m/z 482[M+1]⁺。

通过相同的方法，利用合适的胺和甲磺酸酯制备表2中的以下类似物。

表2

实施例32

向酯(1.00g，2.34mmol)、(1-甲基吡咯烷-2-基)甲胺(1.20g，5.99mmol)和DBU(1.80mL，12.06mmol)的DCM(40mL)溶液中加入AlCl₃(650mg，4.87mmol)。室温下搅拌反应混合物过夜。用DCM(150mL)和1N NaOH(50mL)稀释反应并搅拌15分钟。分离诸层，用H₂O(2×100mL)、盐水(100mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，在ACN中研磨得到的固体获得白色固体状的所需产物。LCMS(ES)：m/z 582[M+1]⁺。

实施例33

室温下，向Boc-胺(321mg，0.55mmol)的DCM(3.0mL)溶液中加入HCl(3.0mL，4M，二噁烷配制)并搅拌1小时。用DCM(150mL)和6N NaOH(50mL)稀释反应并搅拌10分钟。分离诸层，用盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂得到白色固体状的所需产物(250mg，94％)。¹H NMR(CDCl₃)δ：10.63(t，1H)，9.44(d，1H)，8.33(d，1H)，7.77(dd，1H)，7.53(m，1H)，7.44(m，1H)，3.91(t，4H)，3.86(t，4H)，3.61(m，1H)，3.43(m，2H)，3.03(m，1H)，2.94(m，1H)，1.97(m，1H)，1.85(m，1H)，1.75(m，1H)，1.52(m，1H)。LCMS(ES)：m/z 482[M+1]⁺。

实施例34

室温下，向胺(40mg，0.08mmol)的DCM(5.0mL)和TEA(0.05mL)溶液中加入碘甲烷(0.05mL)并搅拌10分钟。减压除去有机溶剂，用ACN研磨得到的固体。硅胶TLC(10％MeOH/DCM)纯化反应粗品得到白色固体状的所需产物。LCMS(ES)：m/z 496[M+1]⁺。

通过相同的方法，利用合适的氨基喹诺酮和烷基卤、酰基卤或酐制备表3中的以下类似物。

表3

实施例35

采用该方法，利用氯化铝条件，用氯酯和胺合成所需氯酰胺，产率为72％。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 427[M+1]⁺。

实施例36

在DMF(1ml)中混合氯酰胺(1.0当量，100mg，0.23mmol)和苯硼酸(2.0当量，57mg，0.47mmol)与乙酸钠(3.0当量，58mg，0.70mmol)。加入PdCl₂(dppf)(0.1当量，19mg，0.02mmol)后，用微波炉在100℃加热混合物5分钟。溶液经CELITE^TM过滤，通过加入乙酸乙酯和己烷沉淀该物质。制备型HPLC纯化后，分离棕色固体状的所需产物(51mg，47％产率)。LCMS(ES)：95％纯度，m/z 469[M+1]⁺。

通过相同的方法，利用合适的氯酰胺和硼酸制备表4中的以下类似物。

实施例37

用微波炉在120℃加热氯化物(40mg，0.13mmol)和1-甲基哌嗪(0.10mL)的ACN(1.0mL)溶液10分钟。过滤收集沉淀物，依次用ACN和EtOAc洗涤，得到固体状的所需产物。LCMS(ES)：m/z 376[M+1]⁺。

通过相同方法，利用合适的氯喹诺酮和胺制备表5中的以下类似物。

实施例38

合成化合物A1

向氯酯(5.00g，13.94mmol)的CH₃CN(50mL)浆液中加入N-甲基哌嗪(3.10mL，27.95mmol)，混合物加热回流过夜。将反应冷却至室温，过滤收集产物获得褐色固体状的所需产物(4.7g，80％)。¹H NMR(CDCl₃)δ：9.47(d，1H)，8.62(d，1H)，7.74(dd，1H)，7.51(m，1H)，7.43(m，1H)，6.89(d，1H)，4.50(q，2H)，3.85(t，4H)，2.62(t，4H)，2.40(s，3H)，1.49(t，3H)。LCMS(ES)：m/z 423[M+1]⁺。

化合物A1

向酯(72mg，0.17mmol)、(5-甲基吡嗪-2-基)甲胺(0.10mL，0.81mmol)和DBU(0.20mL，1.34mmol)的DCM(10mL)溶液中加入AlCl₃(80mg，0.60mmol)。室温下搅拌反应混合物30分钟。用DCM(100mL)和3N NaOH(25mL)稀释反应并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，在ACN中研磨得到的固体获得白色固体状的所需产物(60mg，71％)。LCMS(ES)：m/z 500[M+1]⁺。

实施例39

合成化合物A2

向氯酯(3.51g，9.7mmol)的CH₃CN(50mL)浆液中加入N-甲基高哌嗪(1.34mL，10mmol)和三乙胺(1.49ml，10mmol)。将该混合物加热回流过夜。将反应冷却至室温，过滤收集产物得到褐色固体状的所需产物(2.85g)。LCMS(ES)：m/z 437[M+1]⁺。

化合物A2

向酯(2.85mg，6.53mmol)、(5-甲基吡嗪-2-基)甲胺(2.45mL)和DBU(2.93mL)的DCM(100mL)溶液中加入AlCl₃(2.67g)。室温下搅拌反应混合物30分钟。用DCM(100mL)和4N NaOH(100mL)稀释反应并搅拌15分钟。分离诸层，用H₂O(2×100mL)、盐水(100mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，在ACN中研磨得到的固体获得白色固体状的所需产物(1.98g)。LCMS(ES)：m/z 514[M+1]⁺。

实施例40

大规模合成化合物A2

向氯酯(20.0g，55.90mmol)的ACN(300mL)浆液中加入N-甲基高哌嗪(13.9mL，111.70mmol)，将该混合物加热回流过夜。将反应冷却至室温，过滤收集沉淀物。将得到的固体溶解于CHCl₃(500mL)，经CELITE^TM过滤。减压除去有机溶剂得到固体状的所需产物(16.07g，66％)。LCMS(ES)：m/z437[M+1]⁺。

化合物A2

向酯(2.24g，5.15mmol)、2-(氨基甲基)-5-甲基吡嗪(1.27g，10.32mmol)和DBU(2.3mL，15.38mmol)的DCM(50mL)溶液中加入AlCl₃(2.05g，15.39mmol)。室温下搅拌反应混合物30分钟。用DCM(200mL)和3NNaOH(50mL)稀释反应并搅拌10分钟。分离诸层，用H₂O(2×100mL)、盐水(100mL)洗涤有机层，Na₂SO₄干燥。减压除去有机溶剂，在ACN中研磨得到的固体，获得淡黄色固体状的所需产物(1.80g)。¹H NMR(CDCl₃)δ：11.28(t，1H)，9.52(d，1H)，8.57(m，2H)，8.45(d，1H)，7.74(m，1H)，7.44(m，2H)，6.78(d，1H)，4.86(d，2H)，3.90(br，4H)，2.86(m，2H)，2.65(m，2H)，2.56(s，3H)，2.42(s，3H)，2.15(m，2H)。LCMS(ES)：m/z 485[M+1]⁺.LCMS(ES)：m/z 514[M+1]⁺。

实施例41

合成化合物A3

150℃，搅拌酯(6.53g，15.97mmol)的乙醇胺(30mL)溶液过夜。用H₂O(100mL)稀释反应，过滤收集得到的沉淀物。用H₂O(2x)和ACN(2x)洗涤固体得到白色固体状的所需产物(5.75g，85％)。¹H NMR(DMSO-d⁶)δ：10.57(t，1H)，9.32(d，1H)，8.36(d，1H)，7.99(dd，1H)，7.55(m，1H)，7.48(m，1H)，7.18(d，1H)，4.85(t，1H)，3.82(t，4H)，3.75(t，4H)，3.56(q，2H)，3.43(q，2H)。LCMS(ES)：m/z 425[M+1]⁺。

化合物A3

向醇(4.810g，11.343mmol)和TEA(4.75mL，34.076mmol)的DCM(125mL)溶液中加入MsCl(1.70mL，21.964mmol)。室温下搅拌反应混合物2小时，用DCM(200mL)和饱和NH₄Cl(50mL)稀释。分离诸层，Na₂SO₄干燥有机层。减压除去有机溶剂，用ACN研磨反应粗品得到甲磺酸酯。将以上甲磺酸酯、环丙胺(2.20mL，33.570mmol)、HCl(1N，1.0mL)和TEA(4.75mL，34.076mmol)的ACN(100mL)溶液加热回流过夜。过滤收集沉淀物，硅胶柱纯化得到白色固体状的所需产物(1.2g)。¹H NMR(CDCl₃)δ：10.64(t，1H)，9.45(d，1H)，8.63(d，1H)，7.77(dd，1H)，7.50(m，1H)，7.42(m，1H)，6.92(d，1H)，3.94(t，4H)，3.82(t，4H)，3.66(q，2H)，3.01(t，2H)，2.00(m，1H)，0.43(m，4H)。LCMS(ES)：m/z 464[M+1]⁺。

实施例42

通过与化合物A1相同的方法，利用合适的胺和喹诺酮乙酯制备实施例42的化合物。

分子量499.6；LCMS(ES)：m/z 500[M+1]⁺。

实施例43

通过与化合物A2相同的方法，利用合适的胺和喹诺酮乙酯制备实施例43的化合物。

分子量501.61；LCMS(ES)：m/z 502[M+1]⁺。

通过相同的方法，利用合适的胺和喹诺酮乙酯制备表6中的以下类似物。

实施例44

向3，6-二氯哒嗪-4-羧酸(2.5g，12.9mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液中加入草酰氯(14.2mmol，1.1当量)，然后加入2滴DMF，室温下搅拌该混合物过夜。然后真空除去溶剂得到油状的粗制酰氯，其无需进一步纯化即可使用(定量)。

0℃，向苯并噻唑酯(2.53g，11.45mmol)的乙腈(25mL)溶液中加入氯化镁(1.63g，1.5当量)，搅拌该混合物5分钟。经加料漏斗向该混合物中加入溶解于THF(5.0mL)的哒嗪-4-碳酰氯(2.36g，11.45mmol)，将混合物再搅拌5分钟。缓慢加入三乙胺(3.75mL，2.5当量)，在1小时期间将混合物升温至室温。真空除去溶剂并替换以DMF(75mL)，加入碳酸钾(3.16g，22.9mmol)，将混合物加热至100℃，持续2小时。冷却后，过滤混合物，将得到的固体在水(20mL)中搅拌，然后过滤，用水(20mL)、甲醇(20mL)和乙酸乙酯(20mL)洗涤并干燥，得到褐色固体状的哒嗪苯并噻唑酯(2.9g，8.08mmol，70％)。

向哒嗪苯并噻唑酯(500mg)的干燥NMP(5mL)浆液中加入吗啉(500mg)，将该混合物加热回流4小时。然后将混合物冷却至室温并过滤，用乙腈洗涤并干燥得到褐色固体状的吗啉代化合物(505mg)。

向DCM(2mL)中的吗啉代哒嗪苯并噻唑酯(100mg)和1-(2-氨基乙基)-吡咯烷(100mg)混合物中加入氯化铝(100mg)，室温下搅拌该混合物过夜。真空除去溶剂，加入饱和L-酒石酸溶液(5mL)，搅拌30分钟。用DCM(5mL)洗涤该溶液，用1N NaOH碱化。过滤收集固体并溶解于DCM(20mL)和甲醇(2mL)中，将溶液通过氧化铝垫。真空除去溶剂，用甲醇研磨得到的固体获得黄色固体状的终化合物。

通过相同的方法，利用合适的胺和哒嗪苯并噻唑酯制备表7中的以下类似物。

表7

实施例45

细胞增殖调节活性

下文描述了利用阿拉玛蓝染料(Alamar Blue dye)的代表性细胞增殖试验方案(保存于4℃，每孔利用20ul)。

96-孔板设置和化合物处理

a.分裂和胰蛋白酶作用细胞

b.利用血球计数器计数细胞

c.按照以下平板设计，每孔涂布100μl培养基中的4,000-5,000个细胞并接种入96-孔板。孔B10-B12中只加细胞培养基。孔B1-B9有细胞而没有化合物.

d.将100μl 2X药物稀释液加入各孔，浓度如以上平板设计所示。同时将100μl培养基加入对照孔(孔B10-B12)。总体积是200微升/孔。

e.37℃，5％CO₂，在湿化孵育箱中温育4天。

f.将20μl阿拉玛蓝试剂加入各孔。

g.37℃，5％CO₂，在湿化孵育箱中温育4小时。

h.利用微板读数计记录在544nm激发波长和590nm发射波长的荧光。

在这些试验中，用测试化合物培养细胞约4天，然后将染料加入细胞并在约4小时后检测非-还原染料的荧光。试验可利用不同类型的细胞(例如，HCT-116人结肠直肠癌细胞，PC-3人前列腺癌细胞和MiaPaca人胰腺癌细胞)。下文提供了代表性化合物的抗-增殖作用。

实施例46

细胞试验中的mRNA检测值

可采用实时定量PCR(QPCR)方法检测靶标c-myc和同一试管中内源性参比GAPDH基因拷贝的变化。通常将细胞(15,000个细胞/孔)接种于96孔平底板(康宁公司(Corning)，纽约)并在正常生长条件下温育过夜。随后一天，将培养基替换成含有各种浓度的抗癌药的培养基，37℃，在5％CO₂的湿化气氛中温育4小时。利用加利福尼亚州恰根公司的RN简易96试剂盒(RNeasy 96 Kit，QIAGEN，CA)提取总RNA(tRNA)。利用俄勒冈州分子探针公司的RiboGreen RNA定量试剂(RiboGreen RNA Quantitation Reagent，Molecular Probes，OR)测定tRNA的浓度。

利用每孔的50ng tRNA，在25μl反应体系中进行逆转录(RT)反应，所述体系含有1x TaqMan RT缓冲液、2.5uM随机六聚体、5.5mM MgCl₂、0.5mM各脱氧核苷三磷酸(dNTP)、30U多导逆转录酶(MultiScribe ReverseTranscriptase)和10U RNA酶抑制剂。25℃，温育RT反应10分钟；48℃，逆转录30分钟；95℃，灭活5分钟；并置于4℃。所有RT试剂可购自加利福尼亚州应用生物系统公司(Applied Biosystems，CA)。

可在50μl反应体系中进行实时QPCR反应，所述体系含有5μl cDNA、1x通用PCR主混合物、1x c-myc预开发引物和探针组及0.8x GAPDH预开发引物和探针组。由于Hela中GAPDH基因的相对丰度，可调节GAPDH引物和探针浓度以获得同一试管中两种基因的精确阈值周期(thresholdcycle)(C_T)。阈值周期(C_T)表明扩增的靶标量达到固定阈值时的周期分数。如此做，GAPDH扩增在其限制c-myc扩增可用的共同反应物之前终止。ΔRn值表示标准化(normalized)的报道信号减去基线信号。PCR期间ΔRn随扩增子拷贝数增加而增加，直至反应达到平台。

用6FAM^TM染料-MGB标记c-myc探针，用VIC^TM染料-MGB标记GAPDH探针。50℃预温育2分钟以激活AmpErase UNG酶，然后95℃温育10分钟以激活AmpliTaq DNA聚合酶。DNA扩增40个周期：95℃，15秒和60℃，1分钟。利用加利福尼亚州应用生物系统公司的ABI棱镜7000序列检测系统(ABI Prism 7000 Sequence Detection system)放大、检测和定量测定人c-myc和GAPDH cDNA，将该系统设置成同时检测6-FAM和VIC报道染料。

可利用ABI棱镜序列检测系统和微软Excel分析数据。同时采用标准曲线和比较C_T方法进行相对定量测定，两种方法得到相等结果。已知扩增图与C_T交叉的周期精确反映相对mRNA值。(参见，Heid等，Genome Res.(1996)6：986-994；Gibson等，Genome Res.(1996)6：995-1001)。各cDNA样品的QPCR反应一式三份设置，取三份C_T值的平均值。包括预开发的引物和探针组在内的所有试剂可购自加利福尼亚州应用生物系统公司。

实施例47

体外表征

可采用各种方法体外表征本发明化合物。包括但不限于：i)终止试验；ii)四链体/双链体竞争试验；iii)四元足迹法(Quadrome footprint)；和iv)没有竞争性分子存在下的直接试验。

终止试验

终止试验是检测结合并稳定靶标G-四链体的药物的高通量、首过筛选。通常产生DNA模板寡核苷酸，其含有药物筛选所针对的“靶”四链体的核苷酸序列。荧光标记的引物DNA然后与模板DNA的3’端退火。然后引入DNA聚合酶，例如Taq聚合酶，通过从荧光标记的引物延伸来合成DNA的互补链。当Taq聚合酶的进展不受阻碍时，其合成模板的全长拷贝。加入只结合双链体DNA，但不选择性结合四链体区域的测试药物导致全长产物的合成减少以及相伴的长度可变DNA拷贝增加。然而，如果测试药物选择性结合并稳定四链体，聚合酶的进展只在四链体处停止，从而合成特征性的“终止产物”。

首先在单一浓度筛选化合物，“选中物”在各种剂量上再次检验以测定IC₅₀值(即，产生1∶1比例的停滞产物/全长产物所需的药物浓度)。通过毛细管电泳目测观察这些产物。

四链体/双链体竞争性试验

可采用竞争性试验(即，“选择性筛选”)检测与双链体DNA相比，化合物对靶四链体序列的选择性。该选择性筛选采用终止试验作为报道系统来检测外部添加的DNA序列与DNA模板中形成的靶四链体结构竞争结合药物的相对能力。例如，竞争物是c-myc四链体结构，其与模板DNA中存在的四链体序列相同；或是模拟复杂的基因组双链体DNA的质粒DNA。终止产物的合成相对降低反映了各竞争物成功“吸收”溶液中药物的程度。以此方式测定药物与靶四链体和双链体DNA的相对结合亲和力。

四元足迹法

还可评估化合物结合生物相关的其它天然四链体结构的能力，包括调节各种不同癌基因的四链体控制元件。得到的数据用于产生四元足迹。

直接相互作用试验

可评估化合物与能形成四链体结构的核酸直接相互作用的能力，其中所述核酸不是末端着丝粒核酸。可在相同或不同容器中进行该试验。例如，化合物可与同一容器中的各核酸接触。或者，化合物可分别接触在不同容器中测试的各核酸。本文所用的末端着丝粒核酸表示染色体末端高度重复核酸的区域。在没有竞争性核酸存在下检测本文所用的“直接相互作用”。

可通过，例如检测表示结合和/或四链体稳定的IC₅₀值来测定化合物与核酸之间的相互作用。可通过，例如比较检测的IC₅₀值来测定选择性。例如，最低IC₅₀值可用于表示化合物与核酸之间的强烈相互作用，而最高IC₅₀值显示相互作用差；因此显示了相互作用的选择性。可通过毛细管电泳表征反应产物。

实施例48

RBI化合物的药物特性

采用组合给药方法(cassette dosing procedure)测定本文所述化合物的药物特性。在该方法中，根据质谱分析后各化合物的质谱信号不会干扰另一化合物(例如，不会重叠)来选择各组合(即，混合物)的化合物。给药组合中各化合物的浓度常是约20mg/mL，以在ICR小鼠中达到25mg/kg的口服剂量水平。下文描述了组合给药方法的诸方面。

MS/MS方法开发

制备12种测试化合物的0.5mL 20mg/mL的给药溶液(PBS或配制载体配制)。将10μL母液加入含0.1％甲酸的190μL乙腈将给药溶液作20倍稀释，从而获得终浓度为1mg/mL。将1μL母液加入含0.1％甲酸的999μL乙腈将1mg/mL溶液作1,000倍稀释，从而获得终浓度为1μg/mL。将该1μg/mL溶液用于基于直接输注的质谱方法开发。采用多重反应监测(MRM)测定各化合物的母体/子体质谱。比较各化合物的母体/子体质谱来确保LC-MS/MS检测期间没有交叉反应干扰。根据MRM质谱测定所有组合的组成。

给药组合制备

按照组合设计将250μL四种制备的给药溶液与口服PK内标(各20mg/mL)混合，从而获得4mg/mL的终浓度。剧烈震荡各组合，超声处理获得清澈溶液或均匀悬液。利用组合溶液，通过口服给药途径以25mg/kg给予动物。

动物和给药

所有体内实验遵循动物使用和照料委员会(Animal Use and CareCommittee)批准的方案。8-10周龄的雌性ICR小鼠(IcrTac：ICR)购自纽约州哈得逊市塔克尼克公司(Taconic，Hudson，New York)。以12小时/12小时亮光/黑暗周期饲养小鼠，随意饮水和进食。最少两周适应期后，将小鼠随机分组，每组最少4只。用于药代动力学研究的动物体重为25-35g。将25mg/kg(4mg/ml)剂量的实施例1所述组合口服给予禁食过夜的小鼠。

血液样品制备

化合物给予后，利用毛细试管通过眶后穿刺收集各时间点(15、30分钟和1、2、4、6和8小时)的连续血液样品。将样品转移至肝素化的0.5mL微量离心管，并置于冰上。离心分离血浆，将样品保存于-80℃直至试验。

制备工作标准液

将25μL母液加入含0.1％甲酸的75μL乙腈，对组合给药溶液(4mg/mL)作4倍稀释，从而获得浓度为1mg/mL。将该母液进一步连续稀释，从而制备0.01、0.1、1和5μg/mL工作标准液。

制备猝灭液

利用含0.1％甲酸的100％乙腈制备50mL 0.5μg/mL的生物分析内标溶液。4℃，将猝灭溶液保存在密封的瓶中。

分析用的校验标准制品

将15μL空白小鼠血浆转移入96孔板，将120μL猝灭液移入所有血浆试样来沉淀血浆蛋白。用匹配的平板垫覆盖该平板，利用垂直多管摇床充分混合30-60秒。

加入15μL相应组合的工作标准液至猝灭血浆，再震荡平板30-60秒。然后在4℃，以4,000rpm离心该平板10分钟。在不扰动血浆蛋白质片状沉淀物下，将120μL上清液转移至新的96孔板，氮气下利用马萨诸塞州霍普金顿市卡氏生命科学公司(Caliper Life Sciences；Hopkinton，Massachusettes)的平板蒸发器干燥样品。用含0.1％甲酸的120μL 20％乙腈重建干燥的残留物。震荡该平板30-60秒，进行LC-MS/MS分析(下文所述)。

分析用研究样品制备

将15μL空白小鼠血浆转移入96孔板，将120μL猝灭液移入所有血浆试样来沉淀血浆蛋白。用匹配的平板垫覆盖该平板，利用垂直多管摇床充分混合30-60秒。

加入15μL相应组合的工作标准液至猝灭血浆，再震荡平板30-60秒。加入含0.1％甲酸的15μL 50％乙腈至猝灭血浆从而匹配基质，再震荡平板30-60秒。然后在4℃，以4,000rpm离心该平板10分钟。不扰动血浆蛋白质片状沉淀物下，将120μL上清液转移至新的96孔板，氮气下利用马萨诸塞州霍普金顿市卡氏生命科学公司的平板蒸发器干燥样品。用含0.1％甲酸的120μL 20％乙腈重建干燥的残留物。震荡该平板30-60秒，进行LC-MS/MS分析(下文所述)。

LC-MS/MS分析

按照以下HPLC条件，分析反应混合物的各化学实体在对母体形式的组合中的量：

柱：Synergi^TM极性RP，20.0×2.0mm，3μM

保护柱：C18，4.0×2.0mm

流速：0.25毫升/分钟

柱温：40℃

样品温度：10℃

注射体积：10μL

运行时间：3.5分钟

梯度溶剂系统：

溶剂A：水配制的0.1％甲酸

溶剂B：乙腈配制的0.1％甲酸

溶剂梯度分布：

时间，分钟	％A	％B
			0.0	95	5
1.0	95	5
			1.5	5	95
2.0	5	95
			2.5	95	5
3.5	95	5

质谱参数：

MS模式：ESI(+)

毛细管：3.5kV

锥：40V

提取器：3V

RF透镜：0.2V

源温度：120℃

去溶剂化温度：300℃

气体_去溶剂化：450升/小时

气体_浓缩(Cone)：72升/小时

LM解析(Resolution)：15.0

HM解析：15.0

离子能量：0.5

放大器(Multiplier)：650

药代动力学分析

将非隔室药代动力学分析应用于口服给药。记录观察到的Cmax和Tmax。按照Gibaldi，M.和Perrier，D.Pharmacokinetics(药代动力学)，第二版，MD公司，纽约，1982，采用线性梯度规则计算AUC(0-8)。

代表性组合给药和生物利用度数据见表8，连同细胞增殖抑制(来自阿拉玛蓝(AB)试验(例如本文的实施例45))和rRNA抑制(来自定量PCR(QPCR)试验(例如本文的实施例46))。

表8.代表性组合给药、生物利用度数据和药物活性数据

实施例49

评估药代动力学特性

在分别接受5mg/kg和25mg/kg的静脉内(IV)快速推注和口服(PO)剂量的药物的ICR小鼠中研究药物的药代动力学特性。在预定时间收集血液样品，分离血浆。从在给药后5、15和30分钟及1、2、4、8和24小时收集的血液样品分离血浆。

通过下述LC/MS/MS方法定量测定药物水平。将非隔室药代动力学分析应用于静脉内给药。采用线性梯度规则计算AUC(0-24)或AUC(0-8)。分别采用后3个和前3个数据点计算最终t_1/2和C₀。

利用Quattro Micro LC/MS/MS仪器，以MRM检测方式进行生物分析，含内标(IS)。简言之，制备15μL血浆样品以便利用120μL乙腈进行蛋白质沉淀进行分析。将上清液转移入96孔板，利用Polar-RPHPLC柱进行LC-MS/MS分析。移动相是水配制的10mM NH₄HCO₃(溶液-A)和甲醇配制的10mM NH₄HCO₃(溶液-B)。首先用25％溶液-B平衡柱，然后用100％溶液B流过保持5分钟。该方法的动态范围是1-10,000ng/mL。按照生物分析样品清单，利用两条定标校验曲线(bracketing calibration curve)分批定量测定分析物.

实施例50

细胞色素P450(CYP450)抑制试验

可评估本发明化合物对细胞色素P450同工酶的潜在抑制活性。通常制备6个含100μL溶液的反应试管连同6个合适阳性对照抑制剂的1∶6连续稀释液的试管，所述溶液含有50mM磷酸钾，pH 7.4，2.6mM NADP+，6.6mM葡萄糖6-磷酸，0.8U葡萄糖6-磷酸脱氢酶/mL和测试化合物的1∶6连续稀释液。将100μL预热的酶/底物加入反应试管来启动反应。将50μL乙腈加入100μL辅因子溶液以灭活酶，然后加入100μL酶/底物溶液，从而制备零点对照反应。还可制备无抑制剂的对照反应。37℃，适当温育后，加入50μL乙腈终止反应。采用LC/MS/MS分析反应中探针底物的代谢物形式。

实施例51

评估化合物在肿瘤抑制中的效力

可如下所示设计在人癌的无胸腺裸鼠模型中评估本发明化合物的效力的代表性实验。利用5-6周龄，体重超过20克的雄性或雌性动物(小鼠，Sim)(NCR，nu/nu)。特意使动物交配，研究开始时动物是首次用于实验。肿瘤可从注射的细胞或从肿瘤片段传代繁殖。所用的细胞系包括但不限于：alia Paca-2、HPAC、Hs700T、Panc10.05、Panc 02.13、PL45、SW 190、Hs 766T、CFPAC-1和PANC-1。

细胞移植.将悬浮在含或不含马萨诸塞州贝德福德市合作生物医学产品公司的基质胶(Matrigel，Collaborative Biomedical Products，Inc，Bedford，MA)的培养基中的1百万-1千万个细胞皮下接种入60只动物的右肋。每只动物只注射一次。注射后7-14天内，肿瘤长到约1.0cm³的研究使用大小。考虑小亚组(＜10/60)的动物。供者和肿瘤培养10-28天，直至大小为1.5cm³以便用于连续移植。

片段移植.对供者动物施以安乐死，采用无菌技术手术取出肿瘤并切成2mm³大小的片段。用异氟烷轻微麻醉待植入的动物。用70％酒精和聚维酮碘清洁待植入的区域。然后利用套针皮下植入一个片段。

效力研究.将50-60只携带肿瘤的动物随机分组。例如，在代表性研究中，可将动物随机分成各含7只动物的3-8个组，如表9所述。

表9

组编号	雄性/雌性数量	剂量水平	给药体积(μL)	给药溶液浓度(mg/mL)	第28-42天施以安乐死的数量
						1	N＝7	阴性对照*	250		全部
2	N＝7	阳性对照**	10-400腹膜内10-250静脉内125-500口服	2-5腹膜内2.5-5静脉内≤10口服	全部
						组3-8	N＝7/组＜56总共	测试化合物1-25腹膜内1-50静脉内50-200口服	10-400腹膜内10-250静脉内125-500口服	2.5-5腹膜内2.5-5静脉内10口服	全部

^*载体/稀释剂

^**使用市售可得的抗癌症化合物包括但不限于：紫杉醇、CPT11和吉西他滨，用作阳性对照。

给药方法.通过腹膜内、静脉内(侧面尾静脉)或口服每天、每隔一天、每3天或每周一次给予化合物。对动物全身性给药，给药时间在所有组中类似分配。对于腹膜内快速推注和口服给药，手工约束动物。对于静脉内快速推注或短期静脉内输注(1分钟)，以机械方式束缚动物，但不施以镇静剂。各动物/剂量使用一次性无菌注射器。还测试了测试化合物与约10-100mg/kg(例如，约40mg/kg)化疗剂，如吉西他滨的组合，通常是通过腹膜内每周给予一次。

实施例52

评估最大耐受剂量

可如下所示设计评估本发明化合物的最大耐受剂量(MTD)的代表性实验。

急性毒性研究.在测定单次给药后MTD的代表性研究中，例如，将60只原初动物随机分成含有10只动物的组(5雄和5雌)，这些动物通过两种给药途径接受一种化合物或通过一种给药途径接受两种化合物。单次50mg/kg静脉内剂量显示是耐受的，其用作初步低剂量水平。口服研究的低剂量是依据计划耐受性(projected tolerability)，如果需要可下调。剂量水平、给药体积和给药溶液浓度的代表性设计描述于表10。

表10

组编号	雄性和雌性数量	剂量水平(mg/kg)	给药体积(μL)	给药溶液浓度(mg/mL)	第7天施以安乐死的数量
						1	N＝5MN＝5F	测试化合物#150静脉内100口服	250静脉内500口服	5静脉内5口服	全部
2	N＝5MN＝5F	测试化合物#175静脉内200口服	250静脉内500口服	8.25静脉内10口服	全部
						3	N＝5MN＝5F	测试化合物#1100静脉内300口服	250静脉内500口服	10静脉内15口服	全部
4	N＝5MN＝5F	测试化合物#250静脉内100口服	250静脉内500口服	5静脉内5口服	全部
						5	N＝5MN＝5F	测试化合物#275静脉内200口服	250静脉内500口服	8.25静脉内10口服	全部
6	N＝5MN＝5F	测试化合物#2100静脉内300口服	250静脉内500口服	10静脉内15口服	全部

亚慢性研究.在表征反复给药后剂量-应答关系的代表性研究中，例如，25只原初动物随机分成含有5只动物的组(各如表11所述)。通过一种给药途径，两周的研究各自只测试通过从先前急性毒性研究收集的数据获得的最佳剂量的单一给药途径的一种化合物。

表11

组编号	雄性或雌性的数量	剂量水平(mg/kg)	给药体积(μL)	给药溶液浓度(mg/mL)	在第14天施以安乐死的数量
						1	N＝5	阴性对照	250静脉内500口服	取决于剂量水平	全部
2每天	N＝5	测试化合物如MTD研究中测定	250静脉内500口服	取决于剂量水平	全部
						3每隔一天	N＝5	测试化合物如MTD研究中测定	250静脉内500口服	取决于剂量水平	全部
4每3天	N＝5	测试化合物如MTD研究中测定	250静脉内500口服	取决于剂量水平	全部
						5每7天	N＝5	测试化合物如MTD研究中测定	250静脉内500口服	取决于剂量水平	全部

给药方法.通过静脉内(侧面尾静脉)或口服每天、每隔一天、每3天或每7天给予化合物。对动物全身性给药，给药时间在所有组中类似分配。对于口服给药，手工约束动物。对于静脉内快速推注或短期静脉内输注(1分钟)，以机械方式束缚动物，但不施以镇静剂。各动物/剂量使用一次性无菌注射器。

实施例53

化合物A1、A2和A3的药物活性

采用阿拉玛蓝细胞活力试验(例如，本文的实施例39)，利用代表不同癌症的各种细胞类型测定化合物A1、A2和A3对细胞增殖的抑制活性。以微摩尔浓度计的抑制值(IC₅₀)见下表(表12)。

表12

在异种移植啮齿类动物中测试化合物A1、A2和A3的肿瘤抑制作用。通过口服递送途径，每日两次分别给予具有A375细胞异种移植肿瘤的啮齿类动物100mg/kg、75mg/kg和100mg/kg剂量的化合物A1、A2和A3。与未处理组相比，这些化合物各自在7天时间内显著抑制A375肿瘤生长。还通过口服递送每日两次给予具有MiaPaCa异种移植肿瘤的啮齿类动物100mg/kg剂量的化合物A1和A3。与未处理对照组相比，这些化合物各自在22天时间内显著抑制MiaPaCa肿瘤生长。

实施例54

基于细胞的代表性IC ₅₀ 数据

采用阿拉玛蓝细胞活力试验(例如，本文的实施例39)，利用代表不同癌症的各种细胞类型测定本发明的代表性化合物对细胞增殖的抑制活性。以微摩尔浓度计的抑制值(IC₅₀)见表13和表14。

表13

表14

实施例55.代表性实施方式

提供以下实施方式是为了说明而非限制本发明

1.式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯；

式中表示任选不饱和键；

如果Z¹、Z²、Z³和Z⁴分别是N，则B、X、A或V各自不存在；和

当Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自分别是C时，B、X、A和V各自独立为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

Z是O、S、CR⁴ ₂、NR⁴CR⁴、CR⁴NR⁴、CR⁴、NR⁴或N；

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自独立为C或N，只要任何3个N不相邻；

Z⁵是C；或者当Z是N时，Z⁵可以是N；

Y是任选取代的5-6元碳环或杂环；

U¹是-C(＝T)N(R)-、-C(＝T)N(R)O-、-C(＝T)-、-SO₂N(R)-、-SO₂N(R)N(R⁰)-、-SO₂-或-SO₃-，其中T是O、S或NH；或者当Z⁵是N或U²是H时，U¹可以是键；

U²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C3-C7环烷基、C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；或者U²是-W、-L-W、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基、或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这些基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

各R⁴独立地为H、或C1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

R和R⁰各自独立地为H或C1-C6烷基；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基；

前提是U²、V、A、X和B之一是仲胺A²或叔胺A³，其中

所述仲胺A²是-NH-W⁰，和

所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原予作为环成员的完全饱和及任选取代的6-元或7-元氮杂环，或者所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的部分不饱和或芳族的任选取代5-元氮杂环；

前提是当Z¹是N，Z²和Z⁴是C，Z⁵是C，U¹是-C(O)NH-，U²是-L-W，和L是亚乙基连接基时，V、A和X之一独立地为任选取代的芳基、杂芳基、或7-元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员，如果W是吡咯烷-1-基、N-甲基-吡咯烷-2-基、哌啶-1-基或吗啉-1-基的话。

2.如实施方式1所述的化合物，其中Z¹是N，Z²、Z³和Z⁴各自是C。

3.如实施方式1或2所述的化合物，其中U²是-W或-L-W，其中W是任选取代的5-6元不饱和或芳族氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子，或者W是任选取代的5-7元饱和的氮杂环，任选含有选自N或S的额外杂原子。

4.如实施方式1或2所述的化合物，其中U²是-L-N(R)-W⁰。

5.如实施方式1-4中任一项所述的化合物，其中Y是任选取代的苯环。

6.式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯，

式中表示任选不饱和键；

A和X各自独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

Z是O、S、CR⁴ ₂、NR⁴CR⁴、CR⁴NR⁴或NR⁴；

Y是任选取代的5-6元碳环或杂环；

U¹是-C(＝T)N(R)-、-C(＝T)N(R)O-、-C(＝T)-、-SO₂N(R)-、-SO₂N(R)N(R⁰)-、-SO₂-或-SO₃-，其中T是O、S或NH；或者当U²是H时，U¹可以是键；

U²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C3-C7环烷基、C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或者任选取代的3-7元碳环或杂环；或U²是-W、-L-W、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基、或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这些基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

各R⁴独立地为H、或C1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

R和R⁰各自独立地为H或C1-C6烷基；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基；

前提是U²、A和X之一是仲胺A²或叔胺A³，其中

所述仲胺A²是-NH-W⁰，和

所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的完全饱和及任选取代的6-元或7-元氮杂环，或者所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的部分不饱和或芳族的任选取代5-元氮杂环；

前提是当U¹是-C(O)NH-，U²是-L-W，和L是亚乙基连接基时，A和X之一独立地为任选取代的芳基、杂芳基、或7-元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员，如果W是吡咯烷-1-基、N-甲基-吡咯烷-2-基、哌啶-1-基或吗啉-1-基的话。

7.如实施方式6所述的化合物，其中A和X中至少一个是叔胺A³。

8.如实施方式6或7所述的化合物，其中A³选自下组：咪唑、咪唑啉、吡咯啉、哌啶、哌嗪、吗啉、硫代吗啉和高哌嗪。

9.如实施方式6、7或8所述的化合物，其中U¹是-C(＝T)N(R)-，T是O，U²是-L-W或-L-N(R)-W⁰。

10.式(III)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯；

式中表示任选不饱和键；和

如果Z¹、Z²、Z³和Z⁴分别是N，则B、X、A或V各自不存在；和

当Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自分别是C时，B、X、A和V各自独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自独立地为C或N，只要任何3个N不相邻；

Y是任选取代的5-6元碳环或杂环；

U¹是-C(＝T)N(R)-、-C(＝T)N(R)O-、-C(＝T)-、-SO₂N(R)-、-SO₂N(R)N(R⁰)-、-SO₂-或-SO₃-，其中T是O、S或NH；或者当Z⁵是N或U²是H时，U¹⁺可以是键；

U²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C3-C7环烷基、C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；或者U²是-W、-L-W、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基、或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这些基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

各R⁴独立地为H、或C1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

R和R⁰各自独立地为H或C1-C6烷基；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基；

前提是U²、V、A、X和B之一是仲胺A²或叔胺A³，其中

所述仲胺A²是-NH-W⁰，和

所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的完全饱和及任选取代的6-元或7-元氮杂环，或者所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的部分不饱和或芳族的任选取代5-元氮杂环。

11.式(IV)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯，

式中表示任选不饱和键；和

如果Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自是N，B、X、A或V各自不存在；和

当Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自分别为C时，B、X、A和V各自独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

Z¹、Z²、Z³和Z⁴各自独立地为C或N，只要任何3个N不相邻；

Y是任选取代的5-6元碳环或杂环；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基、或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这些基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

R⁴是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；和

R各自独立为H或C1-C6烷基；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C 1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；和

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基。

12.式(V)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯

式中：

表示任选不饱和键；

A和V独立为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰、-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

Z是O、S、CR⁴ ₂、NR⁴CR⁴、CR⁴NR⁴或NR⁴；

Y是任选取代的5-6元碳环或杂环；

U¹是-C(＝T)N(R)-、-C(＝T)N(R)O-、-C(＝T)-、-SO₂N(R)-、-SO₂N(R)N(R⁰)-、-SO₂-或-SO₃-，其中T是O、S或NH；或者当U²是H时，U¹可以是键；

U²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C3-C7环烷基、C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；或者U²是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰、A²或A³；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这些基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

R⁴各自独立地为H、或C1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

R和R⁰各自独立地为H或C1-C6烷基；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C 1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基；

前提是U²、A和V之一是仲胺A²或叔胺A³，其中

所述仲胺A²是-NH-W⁰，和

所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的完全饱和及任选取代的6-元或7-元氮杂环，或者所述叔胺A³是任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员的部分不饱和或芳族的任选取代5-元氮杂环。

13.式(VI)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯

式中：

X¹是CH或N；

X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷独立地为NR⁴、CH₂、CHQ或C(Q)₂，前提是：(i)X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中无一个是NR⁴、或一个或两个是NR⁴；(ii)当X¹是N时，X²和X⁷均不是NR⁴；(iii)当X¹是N时，X³和X⁶都不是NR⁴；和(iv)当X¹是CH，X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中两个是NR⁴时，两个NR⁴位于相邻的环位置或被两个或更多个其它环位置隔开；

A和V独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰；

各Q独立地为卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的一个额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这些基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

R⁴各自独立地为H、或C1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

各R独立地为H或C1-C6烷基；

R⁷是H，R⁸是C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基，各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；或者在-NR⁷R⁸中，R⁷和R⁸与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

m是0、1、2、3或4；

n是0、1、2、3、4或5；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；和

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基。

14.如实施方式13所述的化合物，其中X¹是CH，X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中两个是NR⁴。

15.如实施方式13所述的化合物，其中X¹是CH，X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中一个是NR⁴。

16.如实施方式13所述的化合物，其中X¹是CH，X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中无一个是NR⁴。

17.如实施方式13所述的化合物，其中X¹是N，X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶和X⁷中无一个是NR⁴。

18.如实施方式13所述的化合物，其中X¹是N，X⁴或X⁵之一是NR⁴。

19.式(VIII)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯

式中：

A和V独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰；

各Q独立地为卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这些基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

R⁴各自独立地为H、或C1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

各R独立地为H或C1-C6烷基；

R⁷是H，R⁸是C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基，各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；或者在-NR⁷R⁸中，R⁷和R⁸与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

m是0、1、2、3或4；

n是0、1、2、3、4或5；

p是0、1、2或3；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；和

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基。

20.如实施方式19所述的化合物，其中R⁷是H，R⁸是被任选取代的芳族杂环取代的C_1-4烷基。

21.如实施方式20所述的化合物，其中所述任选取代的芳族杂环选自：吡啶、嘧啶、吡嗪、咪唑、吡咯烷和噻唑。

22.如实施方式19所述的化合物，其中R⁷和R⁸与-NR⁷R⁸中的N一起形成选自下组的任选取代氮杂环：吗啉、硫代吗啉、哌啶或哌嗪环。

23.式(VII)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯

式中：

A和V独立地为H、卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰；

各Q独立地为卤素、叠氮基、-CN、-CF₃、-CONR¹R²、-NR¹R²、-SR²、-OR²、-R³、-W、-L-W、-W⁰或-L-N(R)-W⁰；

在各-NR¹R²中，R¹和R²与N一起可形成任选取代的氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；

R¹是H或任选被一个或多个卤素或＝O取代的C1-C6烷基；

R²是H、或各自可被一个或多个以下基团任选取代的C1-C10烷基、C1-C10杂烷基、C2-C10烯基或C2-C10杂烯基：卤素、＝O、或任选取代的3-7元碳环或杂环；

R³是任选取代的C1-C10烷基、C2-C10烯基、C5-C10芳基、或C6-C12芳基烷基、或这些基团之一的杂合形式，这些基团各自可被一个或多个以下基团任选取代：卤素、＝O、或任选取代的3-6元碳环或杂环；

R⁴各自独立地为H、或C1-C6烷基；或者R⁴可以是-W、-L-W或-L-N(R)-W⁰；

各R独立地为H或C1-C6烷基；

m是0、1、2、3或4；

n是0、1、2、3、4或5；

p是0、1、2或3；

L是C1-C10亚烷基、C1-C10杂亚烷基、C2-C10亚烯基或C2-C10杂亚烯基连接基，这些连接基各自可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、氧代(＝O)、或C1-C6烷基；

W是任选取代的4-7元氮杂环，任选含有选自N、O或S的额外杂原子作为环成员；和

W⁰是任选取代的3-4元碳环、或被1-4个氟原子取代的C1-C6烷基。

24.如实施方式23所述的化合物，其中A和V独立地为H或卤素。

25.如实施方式23或24所述的化合物，其中R⁴是H或C 1-4烷基。

26.如实施方式23、24或25所述的化合物，其中m和n各自是0。

27.如实施方式23-26中任一项所述的化合物，其中p是0或1。

28.如实施方式23-27中任一项所述的化合物，是具有如以下结构所示化合物，或其药学上可接受的盐或酯：

29.一种选自下组的化合物或其药学上可接受的盐或酯：

30.一种选自表1-4和6-8以及实施例所示化合物中的化合物，或其药学上可接受的盐或酯。

31.一种药物组合物，其包含以上实施方式中任一项所述化合物或其药学上可接受的盐或酯，和药学上可接受的赋形剂。

32.一种药物组合物，其包含实施方式19所述的至少一种化合物或其药学上可接受的盐或酯，和药学上可接受的赋形剂。

33.一种治疗或缓解对象中细胞增殖性疾病的方法，所述方法包括给予有此需要的对象治疗有效量的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯，从而治疗或缓解所述细胞增殖性疾病，

式中表示任选不饱和键；和

A、B、V、X、Z¹、Z²、Z³、Z⁴、Z⁵、U¹、U²、Y和Z如实施方式1所定义。

34.一种治疗或缓解对象中细胞增殖性疾病的方法，所述方法包括给予有此需要的对象治疗有效量的实施方式1-32中任一项所述化合物，从而治疗或缓解细胞增殖性疾病。

35.一种治疗或缓解对象中细胞增殖性疾病的方法，所述方法包括给予有此需要的对象治疗有效量的式(VIII)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯，从而治疗或缓解所述细胞增殖性疾病，

式中A、V、X、Q、m、n、p、R⁴、R⁷和R⁸如实施方式19中所定义。

36.一种治疗或缓解对象中细胞增殖性疾病的方法，所述方法包括给予有此需要的对象治疗有效量的实施方式1-32中任一项所述化合物，从而治疗或缓解所述细胞增殖性疾病。

37.如实施方式33-36中任一项所述的方法，其中所述对象是人。

38.一种降低微生物滴度和/或缓解微生物感染的方法，所述方法包括使得有此需要的系统或对象接触有效量的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯，从而降低微生物滴度，

式中表示任选不饱和键；和

A、B、V、X、Z¹、Z²、Z³、Z⁴、Z⁵、U¹、U²、Y和Z如实施方式1所定义。

38.一种降低微生物滴度和/或缓解微生物感染的方法，所述方法包括使得有此需要的系统或对象接触有效量的实施方式1-31中任一项所述化合物，从而降低微生物滴度。

40.如实施方式38或39所述的方法，其中所述系统是细胞或组织。

41.如实施方式38、39或40所述的方法，其中所述微生物滴度和/或微生物感染是病毒、细菌或真菌滴度。

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本文引用的各专利、专利申请、出版物和文件的内容通过引用纳入本文。引述上述专利、专利申请、出版物和文件不是承认以上任何属于现有技术，也不承认这些出版物或文件的内容或日期。

可对上述实施方式作出改进而不脱离本发明的基本面。虽然参考一个或多个具体实施方式描述了本发明的实质性细节，但本领域技术人员应知道可对本申请具体公开的实施方式作出改变，而这些改变和改进属于本发明的范围和构思。本文示范性描述的发明适合在本文公开的任何元素不存在的情况下实施。因此，例如在本文的各例子中，术语“包含”、“基本上由...组成”和“由...组成”中任一个可用另两个中的任一替换。因此，所用的术语和表述是用于描述而非限制的术语，不排除所示和所述特征的等价方式或其一部分，应该知道在本发明的范围内可能作出各种改进。本发明的实施方式列于以下方面。

Claims (14)

1.具有式(VIII)的化合物或其药学上可接受的盐

式中：

A为H或卤素；

V为H；

各Q独立地为卤素；

R⁴独立地为H或C1-C6烷基；

R⁷是H；R⁸是取代有任选取代的吡嗪、咪唑、吡啶和噻唑的C1-C4烷基，其中取代基为C1-C6烷基；

m是0或1；

n是0或1。

2.具有式(VII)的化合物或其药学上可接受的盐

式中：

A为H或卤素；

V为H；

各Q独立地为卤素或-R³；

R³是C1-C10烷基；

R⁴独立地为H或C1-C6烷基；

m是0或1；

n是0或1；

p是0或1。

3.如权利要求2所述的化合物，其特征在于，R⁴是H或C1-4烷基。

4.如权利要求2所述的化合物，其特征在于，m和n各自是0。

5.如权利要求2所述的化合物，是具有如以下结构所示化合物，或其药学上可接受的盐：

6.化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自下组：

7.一种药物组合物，其包含权利要求1或2所述化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的赋形剂。

8.式(VIII)所示化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或缓解对象中细胞增殖性疾病的药物中的应用，

式中A、V、Q、m、n、R⁴、R⁷和R⁸如权利要求1中所定义。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述对象是人。

10.如权利要求8所述的应用，其中所述细胞增殖性疾病为肿瘤。

11.如权利要求8所述的应用，其中所述细胞增殖性疾病为癌症。

12.如权利要求8所述的应用，其中所述细胞增殖性疾病为造血肿瘤性疾病。

13.如权利要求11所述的应用，其中所述细胞增殖性疾病为结肠直肠、乳腺、肺、肝、胰腺、淋巴结、前列腺、脑、头和颈、皮肤、肾和心脏的癌症。

14.如权利要求11所述的应用，其中所述细胞增殖性疾病为结肠的癌症。