CN101832998A

CN101832998A - 一种细菌内毒素或热原检测的方法

Info

Publication number: CN101832998A
Application number: CN200910037831A
Authority: CN
Inventors: 张晓元; 郭勇
Original assignee: South China University of Technology SCUT
Current assignee: South China University of Technology SCUT
Priority date: 2009-03-12
Filing date: 2009-03-12
Publication date: 2010-09-15

Abstract

本发明公开了一种细菌内毒素或热原检查的方法，该方法先将样品溶液用除热原处理的切向流超滤膜过滤，超滤膜的截留分子量为1-15kd，保留未透过液作为初始超滤浓缩液，当初始超滤浓缩液的体积达到样品原液的5％～20％时，用初始超滤浓缩液0.5～5倍体积的无热原水冲洗超滤膜和管路得清洗液，将清洗液与初始超滤浓缩液合并为超滤浓缩液；本发明通过细菌内毒素的定量分离制备，消除了药物制剂中所含的化学成分干扰细菌内毒素与鲎试剂反应过程而干扰细菌内毒素检测结果的可靠性，或无法直接用凝胶检查法检查药物制剂中的细菌内毒素。

Description

一种细菌内毒素或热原检测的方法

技术领域

本发明涉及细菌内毒素或热原检测；特别是涉及一种应用超滤处理的细菌内毒素或热原检测的方法。

背景技术

细菌内毒素系存在与革兰氏阴性细菌细胞壁外膜中的脂多糖成分，在理化特性上属于兼具亲水性与疏水性的两性分子，携带正电与负电荷。内毒素是一类具有高度活性的分子，对机体具有广泛的生物学作用。内毒素对机体可引发一系列的毒害作用：是热原反应的主要诱因，一纳克的内毒素足以引起健康成人产生发热反应；白细胞数目改变(开始为白细胞减少，数小时后为白细胞增多)；皮肤炎症；休克和其它等。注射用的药物制剂(包括各种注射液、冻干粉针、注射用水等)、医疗器械(临床诊断产品、各种洗液、检验用试剂)、生化试剂等对细菌内毒素含量均有严格的限量规定。按照现有的中国药典、行业标准、其它技术标准中，对于细菌内毒素检查法，描述了操作的要求和注意事项，提出了通过稀释来控制对内毒素检查的干扰，但没有对待测样品进行细菌内毒素的分离制备、同时又去除影响内毒素检测的干扰成分等方法，因此，有些药物制剂，如清开灵注射液、其它天然药物(包括中药)注射制剂中，难以实施细菌内毒素的检查，没有细菌内毒素的检测指标。对于清开灵注射液，它本身具有清热解毒，化痰通络，醒神开窍的功效，是中医里用于高烧和上呼吸道感染的一线用药，但它在使用中常常发生过敏性休克、皮炎、高热等不良反应，这些都与清开灵注射液的细菌内毒素的质量控制密切相关。现行的中国药典中，对中药和其它药物注射剂，通过以家兔为供试动物的热原检查法，判断供试品中所含热原的限度是否符合规定，但当这些药物本身具有退热降温的功效时，所测定的结果往往不可靠，易出现假阴性的结果，如清开灵注射液在生产中就经常发生这种情形，导致成品制剂中的细菌内毒素和热原超过药典规定而未能检查出来，致使不合格品进入药品流通市场。

中国发明专利申请(申请号200510045847.2)“一种定量测定样品中内毒素浓度的判断方法”公开了一种定量测定样品中内毒素浓度的判断方法：将内毒素标准品和待测样品做系列稀释；将上述经过系列稀释的内毒素标准品和待测样品分别与鲎试剂反应，在内毒素测定仪上测得浊度值；该发明提出了定量测定样品中内毒素浓度的判断方法，定量给出了通过标准曲线来计算样品中内毒素浓度的试验误差，也可以与内毒素测定仪、动态比浊定量法配合使用，判断定量测定样品内毒素浓度的试验误差，从而提高了测定结果的准确性。

Claims

1.一种细菌内毒素或热原检测的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)超滤处理：将样品溶液用除热原处理的切向流超滤膜过滤，超滤膜的截留分子量为1-15kd，保留未透过液作为初始超滤浓缩液，当初始超滤浓缩液的体积达到样品原液的5％～20％时，用初始超滤浓缩液0.5～5倍体积的无热原水冲洗超滤膜和管路得清洗液，将清洗液与初始超滤浓缩液合并为超滤浓缩液；收集超滤透过液备用；所述的样品溶液来源于液体样品或配置的液体样品；

(2)细菌内毒素或热原检查：按照中国药典2005版附录的方法检测超滤浓缩液中细菌内毒素的含量；或者是按照中国药典2005版附录热原检查方法，对超滤浓缩液进行热原检测。

2.根据权利要求1所述的细菌内毒素或热原检测的方法，其特征在于：所述的步骤(1)还包括初始超滤浓缩液的洗涤，初始超滤浓缩液的洗涤是指当初始超滤浓缩液的体积达到样品原液的5％～20％时，该初始超滤浓缩液为第一次超滤浓缩液，向第一次超滤浓缩液中加入第一次超滤浓缩液1-3倍体积的无热原水，进行超滤处理，当第二次超滤浓缩液的体积又减少到第一次超滤浓缩液体积时，再加入第一次超滤浓缩液1-3倍体积的无热原水进行超滤处理；重复加入第一次超滤浓缩液1-3倍体积的无热原水进行超滤处理2-7次；合并收集超滤浓缩液与对超滤膜与和管路清洗液即获得超滤浓缩液，用于内毒素和热原检测。

3.根据权利要求1或2所述的细菌内毒素或热原检测的方法，其特征在于：所述的超滤膜为超滤膜包或滤芯。

4.根据权利要求1所述的细菌内毒素或热原检测的方法，其特征在于：所述的超滤膜的截留分子量为5～10KD。

5.根据权利要求1所述的细菌内毒素或热原检测的方法，其特征在于：所述配置的液体样品是指将待检测固态样品用无热原水溶解，置于除热原处理的容器中所得的样品溶液。

6.根据权利要求1所述的细菌内毒素或热原检测的方法，其特征在于：所述的液体样品为中药注射制剂、水、化学试剂或医用透析液；或者是所述液体样品为动物、植物或微生物的提取液。

7.根据权利要求6所述的细菌内毒素或热原检测的方法，其特征在于：所述的中药注射制剂为清开灵注射液、清开灵冻干粉针、鱼腥草注射液及冻干粉针、艾迪注射液、白花蛇舌草注射液、板蓝根注射液及冻干粉针、板蓝解毒注射液、参附注射液参麦注射液、柴胡注射液、柴辛感冒注射液、川参通注射液、穿心莲注射液喘可治注射液、刺五加注射液、丹参滴注液、丹参注射液、当归寄生注射液、灯盏花素注射液、灯盏细辛注射液、丁公藤注射液、复方半边莲注射液、复方大青叶注射液、复方风湿宁注射液、复方苦参注射液、复方蒲公英注射液、复方麝香注射液、冠心宁注射液、红花注射液、红茴香注射液、黄瑞香注射液、黄芪注射液、苦黄注射液、苦木注射液、勒马回注射液、羚羊角注射液、脉络宁注射液、毛冬青注射液、生脉注射液、舒肝宁注射液、双黄连注射液粉针冻干粉、田基黄注射液、痛可宁注射液、香丹注射液、雪莲注射液、雪上一枝蒿总碱注射液、血栓通注射液、益母草注射液、茵栀黄注射液、银黄注射液、鱼金注射液或正清风痛宁注射液。