CN109387638A - 参麦注射液细菌内毒素检测方法 - Google Patents

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黄筱萍
杨强
廖远征
王瑾
姚欣
蒲虹橙
刘倩如
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Abstract

本发明公开一种参麦注射液内毒素检查方法，属于药物领域，包括如下步骤：（1）内毒素限值L的确定；（2）鲎试剂灵敏度复核；（3）干扰试验预试验，确定供试品至少稀释8倍；（4）供试品干扰试验，确定不干扰稀释倍数为32倍；（5）供试品细菌内毒素检测步骤。本发明方法快速、灵敏，在确定了内毒素限值和稀释倍数后，可直接对待测供试品进行检测，无需再次进行试验来确定稀释倍数，在保证检测准确的同时，减少检验成本、提高检验效率、方便生产过程监控及检验工作的开展。

Description

参麦注射液细菌内毒素检测方法
技术领域
本发明属于药物领域，特别涉及一种参麦注射液细菌内毒素检测方法。
背景技术
细菌内毒素是G-菌细胞壁上的特有结构，其主要成分是脂多糖，具很强的热原活性。当内毒素通过注射等方式进入血液时，会导致不同程度的内毒素血症。因此，对于注射液应进行细菌内毒素的控制，以确保产品质量，保障用药安全。
细菌内毒素的检测常用方法是家兔热原法和鲎试剂法，目前运用较多的是鲎试剂法。采用该方法进行细菌内毒素检测之前，须进行干扰实验，排除供试品对鲎试剂实验的干扰，确保该方法的准确度。但是现有技术中，所采用的参麦注射液细菌内毒素检测方法存在操作繁琐费时，又不能用于生产过程中的质量监控。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种参麦注射液细菌内毒素检测方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
参麦注射液细菌内毒素检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：
(1)内毒素限值L的确定；
(2)鲎试剂灵敏度复核步骤；
(3)干扰试验预试验步骤，确定供试品至少稀释8倍；
(4)供试品干扰试验步骤，确定不干扰稀释倍数为32倍；
(5)供试品细菌内毒素检测步骤。
进一步的，所述步骤(1)中，细菌内毒素限值L的确定:
进一步的，为了临床用药安全性，将本品细菌内毒素限值定为L＝1.0EU/mL。
进一步的，所述供试品干扰试验的次数为三次。
本发明的有益效果为：
本发明方法快速、灵敏，在确定了内毒素限值和稀释倍数后，可直接对待测供试品进行检测，无需再次进行试验来确定稀释倍数，在保证检测准确的同时，减少检验成本、提高检验效率、方便生产过程监控及检验工作的开展。
具体实施例
实施例
1、实验材料及仪器
1.1鲎试剂
标示灵敏度(λ)0.125EU/mL，规格0.1mL/支，批号1712182；标示灵敏度(λ)0.06EU/mL，规格0.1mL/支，批号1803052；标示灵敏度(λ)0.03EU/mL，规格0.1mL/支，批号1710262；有效期均为二年，湛江安度斯生物有限公司生产。
标示灵敏度(λ)0.125EU/mL，规格0.1mL/支，批号17080912；标示灵敏度(λ)0.06EU/mL，规格0.1mL/支，批号17061112；标示灵敏度(λ)0.03EU/mL，规格0.1mL/支，批号17080612；有效期均为二年，福州新北生化工业有限公司生产。
1.2细菌内毒素检查用水
规格100mL/瓶，批号1710260，含细菌内毒素<0.003EU/mL，有效期三年，湛江安度斯生物有限公司生产。
1.3细菌内毒素工作标准品(冻干)
效价80EU/支，批号150601-201783，中国食品药品检定研究院。
1.4药品
参麦注射液，规格10mL，批号1608106、1701101；规格20mL，批号1803101、1610101、1703101、1707116，四川升和药业股份有限公司提供。
1.5仪器
ZRD-A7140型十段编程鼓风干燥箱，温度范围5-300℃；TAL-40试管恒温仪，控温精度37±0.2℃，孔间温差≤0.1℃；ZH-2型孔式旋涡混合仪。
2、方法和结果
2.1细菌内毒素限值L的确定
本品肌内注射，一次2-4mL，一日1次；静脉滴注，一次20-100mL(用5％葡萄糖注射液250-500mL稀释后使用)。计算本品内毒素限值为为了临床用药安全性，将本品细菌内毒素限值定为L＝1.0EU/mL。
2.2鲎试剂灵敏度复核
以细菌内毒素检查用水溶解内毒素工作标准品，并配制成含内毒素2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ系列浓度的溶液，依法进行加样操作，每浓度平行做4支。同时用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照。37±1℃恒温60分钟，观察并记录结果，并按式λC＝antilg(∑x/4)计算λC值，见表1。
表1鲎试剂灵敏度复核结果
注：(+)为形成凝胶且倒置不变形，(－)为未形成凝胶或形成凝胶但倒置变形。
表1结果表明：每一批鲎试剂灵敏度测得值均在0.5λ～2.0λ范围内，符合要求。复核的鲎试剂均按标示灵敏度值使用。
2.3干扰试验预试验
目前，我国常用的鲎试剂灵敏度范围一般在1.0EU/mL～0.03EU/mL之间，故取本品用细菌内毒素检查用水稀释2倍、4倍、8倍、16倍、32倍系列浓度进行预试。预试结果见表2。
表2参麦注射液细菌内毒素检查干扰试验预试验结果
注：(+)为形成凝胶且倒置180度不变形，(-)为未形成凝胶或形成凝胶但倒置180度凝胶滑落。
表2预试验结果显示，供试品用细菌内毒素检查用水稀释8倍以下供试液对内毒素与鲎试剂的反应有抑制性干扰，稀释8倍或8倍以上的供试品对反应可能无干扰作用，确定供试品至少稀释8倍。
2.4供试品干扰试验(1)
取供试品，用细菌内毒素检查用水稀释8倍后，按中国药典2015年版附录细菌内毒素检查法干扰试验项进行实验。
按公式Es＝lg(∑Xs/4)、Et＝lg(∑Xt/4)计算用BET水制成的内毒素标准溶液反应终点浓度的几何平均值(Es)和用供试品稀释液制成的内毒素溶液反应终点浓度的几何平均值(Et)，结果见表3。
表3参麦注射液细菌内毒素检查干扰试验结果(1)
注：(+)为形成凝胶且倒置180度不变形，(-)为未形成凝胶。
表3结果显示：参麦注射液稀释8倍，用湛江安度斯生物有限公司生产的鲎试剂试验，结果Et/Es>1；用福州新北生化工业有限公司生产的鲎试剂试验，结果Et/Es>1，表明供试品稀释8倍浓度的溶液，对细菌内毒素与鲎试剂的反应存在抑制性干扰作用。
2.4供试品干扰试验(2)
取供试品，用细菌内毒素检查用水稀释16倍后，依法操作进行干扰试验。结果见表4。
表4参麦注射液细菌内毒素检查干扰试验结果(2)
注：(+)为形成凝胶且倒置180度不变形，(-)为未形成凝胶。
表4结果显示：参麦注射液稀释16倍后，用湛江安度斯生物有限公司和福州新北生化工业有限公司的鲎试剂，其中批号1707116供试品的结果为Et/Es>1，表明本批供试品稀释16倍浓度的溶液，对细菌内毒素与鲎试剂的反应存在一定的抑制性干扰作用；批号1608106，1803101供试品的结果为Et/Es＝1，表明16倍稀释液对细菌内毒素与鲎试剂的反应无干扰作用。
用福州新北生化工业有限公司生产的鲎试剂，三批供试品的结果为Et/Es>1，表明16倍稀释液对细菌内毒素与鲎试剂的反应存在抑制性干扰作用。
2.4供试品干扰试验(3)
取供试品，用细菌内毒素检查用水稀释32倍后，操作进行干扰试验。结果见表5。
表5参麦注射液细菌内毒素检查干扰试验结果(3)
注：(+)为形成凝胶且倒置180度不变形，(-)为未形成凝胶。
表5结果显示：将参麦注射液稀释32倍，用湛江安度斯生物有限公司的鲎试剂试验，结果为Et/Es＝1；用福州新北生化工业有限公司生产的鲎试剂试验，结果为Et/Es＝1，表明32倍稀释液对细菌内毒素与鲎试剂的反应完全无干扰作用。
2.5供试品细菌内毒素检查
取参麦注射液供试品，批号为1608106、1803101、1610101、1703101、1701101、1707116，分别用细菌内毒素检查用水稀释32倍，进行检查。结果见表6。
表6参麦注射液细菌内毒素检查
注：(+)为形成凝胶且倒置180度不变形，(-)为未形成凝胶。
结果：阴性对照管呈阴性、阳性对照管呈阳性，实验成立。检验的6批供试品管均呈阴性。

Claims (4)

1.参麦注射液细菌内毒素检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：
(1)内毒素限值L的确定；
(2)鲎试剂灵敏度复核；
(3)干扰试验预试验，确定供试品至少稀释8倍；
(4)供试品干扰试验，确定不干扰稀释倍数为32倍；
(5)供试品细菌内毒素检测。
2.根据权利要求1所述的参麦注射液细菌内毒素检测方法，其特征在于：所述细菌内毒素限值L的计算公式为：
3.根据权利要求2所述的参麦注射液细菌内毒素检测方法，其特征在于：所述细菌内毒素限值定为L＝1.0EU/mL。
4.根据权利要求1至3任一项所述的参麦注射液细菌内毒素检测方法，其特征在于：所述供试品干扰试验的次数为三次。
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