CN107884588A - 用于检测糖化血红蛋白的溶血剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物化学技术领域具体涉及一种用于检测糖化血红蛋白的溶血剂及其制备方法和应用。本发明的用于检测糖化血红蛋白的溶血剂包括:磷酸盐缓冲溶液、氯化钠、磷酸和水介质;所述溶血剂中磷酸盐缓冲溶液的含量为6~30g/L。本发明的溶血剂,处理样本后检测准确率高,处理样品的时间为10~30s,较同类试剂处理的时间短;所述溶血剂能直接替代进口的原研产品溶血剂,达到进口试剂相同检测能力,减少了医疗成本,减轻患者的医疗费用。
Description
技术领域
本发明属于生物化学技术领域,涉及一种生化诊断试剂,具体涉及一种用于检测糖化血红蛋白的溶血剂及其制备方法和应用。
背景技术
糖化血红蛋白(HbA1c)是人体血液中血红蛋白与血糖结合的产物,血糖与血红蛋白结合生成糖化血红蛋白,并与血糖浓度成正比,且保持120天左右,所以监测糖化血红蛋白可以反映病人8-12周血糖的变化情况。因此被作为糖尿病的诊断和治疗的重要指标。糖
化血红蛋白越高表示血糖与血红蛋白结合越多,糖尿病病情也越重。它避免了每日的血糖值的波动,与病人抽血时间、是否空腹、是否使用胰岛素等因素无关。当糖尿病控制较好时其浓度在一定值范围,如糖尿病控制不佳时其浓度可高至正常的2倍以上。因此成为糖尿病治疗过程中疗效监测的重要手段。HbA1c检测用于常规实验室始于20世纪70年代末期,且稳定发展至今,检查糖化血红蛋白已成为了解糖尿病控制良好与否的重要指标。国外已将糖化血红蛋白监测作为糖尿病疗效判定和调整治疗方案的“金指标”。
对于检测糖化血红蛋白,目前临床检测糖化血红蛋白有高效液相色谱法、电泳法、免疫法等。但是电泳法、免疫法等存在准确度和灵敏度低的缺点,不能够准确的反映病人的血糖水平;而通过高效液相色谱法能够准确的、快速检测病人的糖化血红蛋白浓度及HbA1c(%)的值,减少医院工作者的时间,同时也能够准确的反映病人血糖情况。
在检测糖化血红蛋白中,检测样本中不稳定糖化血红蛋白L-A1c结构不稳定,会随着血糖浓度的变化而变化,可水解问葡糖糖和血红蛋白,也可生成更稳定的醛胺,该位置不能对平均血糖的浓度进行反应。最简单去除该物质的方法就是将样本用溶血剂进行处理。
但目前全自动糖化血红蛋白分析仪都是配套试剂,没有效果好的可替代国产试剂,造成了检测成本高,提高了患者的治疗费用。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种用于检测糖化血红蛋白的溶血剂,本发明的溶血剂,检测精确度高,能够替代进口糖化血红蛋白检测试剂中的溶血剂,减轻医院医疗成本,减少病人治疗费用。
为实现上述目的,本发明的技术方案为:
一种用于检测糖化血红蛋白的溶血剂,所述溶血剂包括:所述溶血剂包括:磷酸盐缓冲溶液、氯化钠、曲拉通、磷酸和水介质;所述溶血剂中磷酸盐缓冲溶液的含量为6~30g/L。
溶血剂作为血液细胞分析仪中常用的分析试剂之一,也是定量检测糖化血红蛋白的关键试剂。被稀释的血液(溶血)或全血加入溶血剂后,红细胞溶解释放糖化血红蛋白,后者与溶血剂中相关成分形糖化血红蛋白衍生物,进入糖化血红蛋白分析仪中,定量分析糖化血红蛋白的百分含量;本技术中含磷酸盐等成分快能快速溶解红细胞,与糖化血红糖化形成稳定的衍生物,在磷酸的调节下,保证溶血剂在温度的变化情况下,本发明的溶血剂都有一个相对的pH和一个较长的存储期,本技术代替市场上现有的技术,组分简单,容易配制且对实验室工作人员身体健康危害极小,同时对环境污染也极小。
作为一种优选,所述溶血剂中磷酸盐缓冲溶液的含量为10~20g/L。优选所述溶血剂中磷酸盐缓冲溶液的含量为10g/L或15g/L。
进一步,所述磷酸盐缓冲溶液为磷酸氢二钾、磷酸氢二钠的一种或多种。
作为一种优选,所述磷酸盐缓冲溶液为磷酸氢二钾。
进一步,所述溶血剂中氯化钠的含量为0.6~5g/L。
作为一种优选,所述溶血剂中氯化钠的含量为1~5g/L。
作为一种优选,所述溶血剂中氯化钠的含量为1~3g/L。优选所述溶血剂中磷酸盐的含量为1g/L或2g/L。
进一步,所述溶血剂中磷酸的含量为0.03~0.1g/L。
作为一种优选,所述溶血剂中磷酸的含量为0.05~0.1g/L。优选所述溶血剂中磷酸的含量为0.05g/L或0.01g/L。
进一步,所述溶血剂的pH值为5~9。
作为一种优选,所述溶血剂的pH值为7~8。
本发明的本溶血剂中各物质的浓度配比能够较大程度的溶解红细胞,与糖化血红蛋白形成稳定的糖化血红蛋白衍生物。
进一步,所述溶血剂中还包括表面活性剂,所述表面活性剂包括皂苷、曲拉通、吐温的一种或多种;所述表面活性剂在溶血剂中的含量为0.5~3g/L。
作为一种优选,所述表面活性剂在溶血剂中的含量为1~2g/L。
作为一种优选,所述表面活性剂为曲拉通;优选所述溶血剂中曲拉通的含量为1g/L或2g/L。
本发明的目的之二在于提供一种所述的溶血剂的制备方法,包括以下步骤:
1)按上述含量取磷酸盐,氯化钠加入水介质中充分溶解,得混合液;
2)在步骤1)得到的混合液中加入相应浓度的表面活性剂,再加入水介质充分溶解后配制到相应的浓度,用磷酸调节相应的pH值,pH值为7~8,再经过滤,得溶血剂。
上述制备方法在室温条件下进行。
本发明的目的之三在于提供一种利用所述的溶血剂处理生物样品的方法,在10~30℃向生物样品中加入所述溶血剂,混合处理10~30s;所述生物样品包括全血、末梢血、抗凝静脉全血的一种或多种;所述溶血剂与生物样品的体积比为0.6~1.3:100。
本发明所涉及的处理方式简单、快速,无其他环节处理,在实验室、临床试验过程中节约时间;在实验过程中不会对生物样品其他处理,不会应生物样品的特殊性而造成其他污染;在处理生物样品过程中,只需要对生物样品进行溶解操作,进而注入糖化血红蛋白分析仪中,对糖化血红蛋白进行定量分析。
作为一种优选,所述溶血剂与生物样品的体积比为0.8~1.1:100。优选所述溶血剂与生物样品的体积比为1:100。
本发明的目的还在于提供一种所述的溶血剂在检测血液样本中的应用,所述血液样本包括全血、末梢血、抗凝静脉全血的一种或多种。
所述末梢血、血浆经过溶血后需要稀释后再进行检测。经过调查分析市场上所应用于糖化血红蛋白检测的采血管多为2-10ml规格,本发明可对任何规格的所述生物样品包括全血、末梢血、抗凝静脉全血的一种或多种进行溶解和稀释,满足实验室及临床试验的要求。
本发明的目的还在于提供一种利用所述的溶血剂通过全自动糖化血红蛋白分析仪检测糖化血红蛋白的方法,包括以下步骤:
1)在10~30℃向待测样品中加入所述溶血剂(还是向溶血剂中加入生物样品),混合处理10~30s;
2)将处理后的待测样品置于全自动糖化血红蛋白分析仪中测定待测样品的糖化血红蛋白的浓度;
所述待测样品包括全血、末梢血、抗凝静脉全血的一种或多种;所述溶血剂与待测样品的体积比为0.6~1.3:100。
作为一种优选,所述溶血剂与待测样品的体积比为0.8~1.1:100。优选所述溶血剂与待测样品的体积比为1:100。
本发明比例特征优势在于既可以满足小剂量的生物样品分析,又可以保证在全自动糖化血红蛋白分析仪能够准确的对糖化血红蛋白进行识别,对糖化血红蛋白进行定量的分析。
所述全自动糖化血红蛋白分析仪优选日本爱科来全自动糖化血红蛋白分析仪HA-8180。与现有的技术相比,本发明直接替代了进口的原研产品溶血剂,达到进口试剂相同检测能力,在保证检测精确度的同时减少了医疗成本,减轻患者的医疗费用。
本发明的有益效果在于:
1)本发明提供的用于检测糖化血红蛋白的溶血剂,处理样本后检测准确率高,处理样品的时间为10~30s,较同类试剂处理的时间短。
2)本发明提供的用于检测糖化血红蛋白的溶血剂,市场运用广,配制简单,即可运用于实验室,临床试验过程中包括全血、末梢血、抗凝静脉全血的一种或多种的溶解。
3)本发明提供的用于检测糖化血红蛋白的溶血剂具有极大的经济效益,可以做工艺研究、放大生产中实现有效的收益。
4)本发明提供的用于检测糖化血红蛋白的溶血剂能直接替代进口的原研产品溶血剂,达到进口试剂相同检测能力,减少了医疗成本,减轻患者的医疗费用。
具体实施方式
以下将对本发明的优选实施例进行详细描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明,但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整,仍属于本发明的保护范围。
实施例1用于检测糖化血红蛋白的溶血剂
用于检测糖化血红蛋白的溶血剂:
磷酸氢二钾:10g/L;
氯化钠:1g/L;
磷酸:0.05g/L;
曲拉通:1g/L;
纯化水为溶剂。
实施例2用于检测糖化血红蛋白的溶血剂
用于检测糖化血红蛋白的溶血剂:
磷酸氢二钾:15g/L;
氯化钠:2g/L;
曲拉通:2g/L;
磷酸:0.08g/L;
纯化水为溶剂。
对比例1
溶血剂:
磷酸氢二钾:5g/L;
氯化钠:6g/L;
磷酸:0.15g/L;
曲拉通:4g/L
纯化水为溶剂。
对比例2
溶血剂:
磷酸氢二钾:20g/L;
氯化钠:0.5g/L;
曲拉通:0.3g/L
磷酸:0.02g/L;
纯化水为溶剂。
对比例3
溶血剂:
碳酸钾:25g/L;
氯化钠:3g/L;
曲拉通:0.2g/L
磷酸:0.3g/L;
纯化水为溶剂。
对比例4
溶血剂:
磷酸二氢钾:30g/L;
氯化钠:0.5g/L;
十二磺基硫酸钠:1g/L
磷酸:0.1g/L;
纯化水为溶剂。
实施例3溶血剂的制备方法
实施例1和实施例2所述的溶血剂的制备方法,包括以下步骤:
1)按上述含量取磷酸盐,氯化钠加入水介质中充分溶解,得混合液;
2)在得到的混合液中加入磷酸后,再加入纯化水充分溶解后配制到相应的浓度,再经过滤,得溶血剂。
实施例4利用本发明的溶血剂处理生物样品
所述生物样品为全血,在室温条件下向全血中加入所述溶血剂,混合处理30s,得处理后的生物样品;所述溶血剂与全血的体积比为1:100。
实施例5通过全自动糖化血红蛋白分析仪检测糖化血红蛋白
仪器:全自动糖化血红蛋白分析仪
1.质控品的配制和使用方法
分别取糖化血红蛋白质控品水平一(HbA1c为5.4%)、水平二(HbA1c为10.5%),按照质控品说明书,分别加入0.5ml的纯化水使质控品溶解,溶解后,分别移取少量的溶解后质控品,取溶解后的质控品按照体积比为1:100的体积比,加入分别配制好的溶血剂(实施例1、实施例2),过滤,置采血管中。
2.全自动糖化血红蛋白设置参数
检测环境:10-30℃,RH:20%-80%
检测波长:420nm/500nm
3.检测步骤
(a)开启全自动糖化血红蛋白分析仪。
(b)更换全自动糖化血红蛋白分析仪的配套试剂洗脱液,溶血剂(实施例1、实施例2)
取配制好的质控品水平一、水平二检测其结果。
4.检测结果
表1所表示为所用的实施例1中的溶血剂和所用的实施例2中的溶血剂对糖化血红蛋白质控品水平一(HbA1c为5.4%)测定的结果。
表1
第一次 | 第二次 | 第三次 | 均值 | 相对偏差 | |
实施例1 | 5.4% | 5.4% | 5.4% | 5.40% | 0.00% |
实施例2 | 5.4% | 5.3% | 5.3% | 5.33% | 1.30% |
对比例1 | 5.3% | 5.2% | 5.2% | 5.23% | 3.15% |
对比例2 | 5.2% | 5.3% | 5.2% | 5.23% | 3.15% |
对比例3 | 5.3% | 5.3% | 5.2% | 5.27% | 2.41% |
对比例4 | 5.2% | 5.2% | 5.2% | 5.20% | 3.70% |
由表1可知,本发明所配制的溶血剂测得质控品水平一的值与质控品水平一的值偏差较小,因此测定准确度高,实施例1为最优选择。
表2所表示为所用的实施例1中的溶血剂和所用的实施例2中的溶血剂对糖化血红蛋白质控品水平二(HbA1c为10.5%)测定的结果。
表2
第一次 | 第二次 | 第三次 | 均值 | 相对偏差 | |
实施例1 | 10.5% | 10.5% | 10.5% | 10.50% | 0.00% |
实施例2 | 10.4% | 10.3% | 10.3% | 10.33% | 1.65% |
对比例1 | 10.3% | 10.3% | 10.4% | 10.33% | 1.65% |
对比例2 | 10.3% | 10.2% | 10.3% | 10.27% | 2.19% |
对比例3 | 10.3% | 10.3% | 10.3% | 10.30% | 1.90% |
对比例4 | 10.2% | 10.2% | 10.2% | 10.20% | 2.86% |
由表2可知,本发明所配制的溶血剂测得质控品水平二的值与质控品水平二的值偏差较小,因此测定准确度高,实施例1为最优选择。
表3所表示为所用的实施例1中的溶血剂和所用的实施例2中的溶血剂对糖化血红蛋白质控品水平一(HbA1c为5.4%)10次测定的结果。
表3
由表3可知,本发明所配制的溶血剂测得质控品水平一的值与质控品水平一的值偏差较小,且精密度较好,实施例1为最优选择。
表4所表示为所用的实施例1中的溶血剂和所用的实施例2中的溶血剂对糖化血红蛋白质控品水平一(HbA1c为10.5%)10次测定的结果。
表4
由表4可知,本发明所配制的溶血剂测得质控品水平二的值与质控品水平二的值偏差较小,且精密度较好,实施例1为最优选择。
最后说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (10)
1.用于检测糖化血红蛋白的溶血剂,其特征在于,所述溶血剂包括:磷酸盐缓冲溶液、氯化钠、曲拉通、磷酸和水介质;所述溶血剂中磷酸盐缓冲溶液的含量为6~30g/L。
2.根据权利要求1所述的溶血剂,其特征在于,所述磷酸盐缓冲溶液为磷酸氢二钾、磷酸氢二钠的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的溶血剂,其特征在于,所述溶血剂中氯化钠的含量为0.6~5g/L。
4.根据权利要求1所述的溶血剂,其特征在于,所述溶血剂中磷酸的含量为0.03~0.1g/L。
5.根据权利要求1所述的溶血剂,其特征在于,所述溶血剂的pH值为5~9。
6.根据权利要求1所述的溶血剂,其特征在于,所述溶血剂中还包括表面活性剂,所述表面活性剂包括皂苷、曲拉通、吐温的一种或多种;所述表面活性剂在溶血剂中的含量为0.5~3g/L。
7.权利要求1至6任一项所述的溶血剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)按上述含量取磷酸盐,氯化钠加入水介质中充分溶解,得混合液;
2)在步骤1)得到的混合液中加入磷酸后,再加入水介质充分溶解后配制到相应的浓度,再经过滤,得溶血剂。
8.利用权利要求1至6任一项所述的溶血剂处理生物样品的方法,其特征在于,在10~30℃向生物样品中加入所述溶血剂,混合处理10~30s;所述生物样品包括全血、末梢血、抗凝静脉全血的一种或多种;所述溶血剂与生物样品的体积比为0.6~1.3:100。
9.权利要求1至6任一项所述的溶血剂在检测血液样本中的应用,其特征在于,所述血液样本包括全血、末梢血、抗凝静脉全血的一种或多种。
10.利用权利要求1至6任一项所述的溶血剂通过全自动糖化血红蛋白分析仪检测糖化血红蛋白的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)在10~30℃向待测样品中加入所述溶血剂,混合处理10~30s;
2)将处理后的待测样品置于全自动糖化血红蛋白分析仪中测定待测样品的糖化血红蛋白的浓度;
所述待测样品包括全血、末梢血、抗凝静脉全血的一种或多种;所述溶血剂与待测样品的体积比为0.6~1.3:100。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20180406 |