CN102721795A

CN102721795A - 一种参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法

Info

Publication number: CN102721795A
Application number: CN2012101808399A
Authority: CN
Inventors: 叶湘武; 毕昌琼; 周光羽; 左红雨
Original assignee: GUIZHOU JINGFENG INJECTION CO Ltd
Current assignee: GUIZHOU JINGFENG INJECTION CO Ltd
Priority date: 2012-06-04
Filing date: 2012-06-04
Publication date: 2012-10-10

Abstract

本发明公开的一种参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法，包括如下步骤：（1）参芎葡萄糖注射液细菌内毒素限值(L)的确定步骤；（2）鲎试剂灵敏度复核步骤；（3）干扰试验预试验步骤，确定参芎葡萄糖注射液最小不干扰稀释倍数；（4）正式干扰试验步骤；（5）供试品细菌内毒素检测步骤。利用本发明的方法检测参芎葡萄糖注射液细菌内毒素检查，快速、灵敏、大大缩短了检测时间，降低检测成本，特别适合实验室进行的检测工作。

Description

一种参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法

技术领域：

本发明涉及参芎葡萄糖注射液，尤指参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法。

背景技术：

参芎葡萄糖注射液具有抗血小板凝集，扩张动脉，降低血液粘度，改善微循环，改善心肌供血供氧等作用，是临床常用药。

参芎葡萄糖注射液收录于国家药品标准化学药品地标升国标第12册，原质量标准热原检查方法为家兔法，而家兔法检验结果的准确性与一致性取决于实验动物状况，故对饲养家兔的饲养环境、检测的条件及操作人员都有严格的要求，操作繁琐费时，又不能用于生产过程中的质量监控。

发明内容：

本发明所解决的技术问题在于克服了家兔法检测方法中的不足之处，提供一种参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法。该方法快速、灵敏，能在保证检测准确的同时，减少检验成本、提高检验效率、方便生产过程监控及检验工作的开展。

本发明所解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：

一种参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法，包括如下步骤：

（1）参芎葡萄糖注射液细菌内毒素限值(L)的确定步骤；

（2）鲎试剂灵敏度复核步骤；

（3）干扰试验预试验步骤，确定参芎葡萄糖注射液最小不干扰稀释倍数；

（4）正式干扰试验步骤；

（5）供试品细菌内毒素检测步骤。

在所述步骤（1）中，参芎葡萄糖注射液细菌内毒素限值(L)的确定考虑联合用药，确定限值为1.0EU·mL^-1

在所述步骤（3）中，干扰试验预试验中参芎葡萄糖注射液对应的最大有效稀释倍数为2～32倍。

本发明依据现参照中国药典2010年版二部附录细菌内毒素检查法，对参芎葡萄糖注射液应用鲎试剂进行细菌内毒素检查的可行性做了研究。本发明的参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查法代替家兔热原检测方法，具有快速、灵敏的优点，能在保证检测准确的同时，减少检验成本、提高检验效率、方便生产过程监控及检验工作的开展。

下面通过具体实施方式进一步说明本发明。

具体实施方式：

1、实验材料及仪器

鲎试剂（TAL）：湛江博康海洋生物有限公司，规格：0.1mL，批号：1012020，灵敏度：0.25EU·mL^-1；湛江安度斯生物有限公司，规格：0.1mL，批号：1101181，灵敏度：0.25EU·mL^-1。

细菌内毒素工作标准品(WSE)：中国药品生物制品检定所，效价：120EU/支，批号：150601－201072。

细菌内毒素检查用水（BET）：中国药品生物制品检定所，规格：10mL，批号：2008－04。

参芎葡萄糖注射液：贵州景峰注射剂有限公司，规格100mL，批号：1、2、3。

仪器：电热干燥箱、ET－96细菌内毒素凝胶法测定仪、旋涡混合器、微量移液器、无热原吸头、试管、试管架、75%酒精棉球、封口膜、剪刀、砂轮。所用玻璃器皿均以250℃干烤1小时以上。

2、方法和结果

2.1细菌内毒素限值(L)的确定

根据公式L＝K/M，考虑到可能联合用药，最终确定限值为1.0EU·mL^-1。

2.2鲎试剂灵敏度复核

按照中国药典2010年版附录细菌内毒素检查法规定进行鲎试剂的标示灵敏度复核，2批鲎试剂经检查λc与λ一致，结果均符合规定（见表1）。

表1鲎试剂灵敏度复核结果

2.3干扰试验预试验

2.3.1参芎葡萄糖注射液干扰试验稀释倍数的确定

根据计算公式MVD=cL/λ，其中L为参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素限值1.0EU·mL^-1，λ为鲎试剂标示灵敏度，目前市售鲎试剂灵敏度λ通常在0.5～0.03EU·mL^-1之间，则参芎葡萄糖注射液对应的最大有效稀释倍数分别为2倍、6倍、12倍、32倍。

2.3.2实验操作

将参芎葡萄糖注射液（批号1）用BET水稀释为原液、2倍、6倍、12倍32倍的溶液，将此系列溶液记为NPC。另制备同样系列浓度的供试液，并使每—浓度的供试液中均含有2λ(0.5EU／mL)浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为PPC。分别取两个厂家灵敏度为0.25EU／mL的鲎试剂，与上述NPC和PPC进行反应，每一浓度重复2管，并设阳性对照记为PC和阴性对照记为NC，混匀后，置内毒素凝胶法测定仪60min，结果见表2。

表2干扰预试验结果

由干扰试验预试验结果可初步确定参芎葡萄糖注射液最小不干扰稀释倍数。

2.4正式干扰试验

取3批参芎葡萄糖注射液用BET水稀释至预试验中确定的不干扰稀释倍数，再用该浓度溶液和BET水分别将WSE稀释成含内毒素0.5(2λ)、0.25(λ)、0.125(0.5λ)、0.0625(0.25λ)EU·mL^-1的溶液，分别与2个厂家灵敏度为0.25EU·mL^-1的鲎试剂反应，每一浓度重复4管，并设阴性对照，按中国药典2010年版附录细菌内毒素检查法干扰试验项进行实验。

按公式Es＝lg(∑X_s/4)、Et＝lg(∑X_t/4)计算用BET水制成的内毒素标准溶液反应终点浓度的几何平均值（Es）和用供试品稀释液制成的内毒素溶液反应终点浓度的几何平均值（Et），结果见表3。

表3干扰试验结果

Tab3 Results of interference test

正式干扰试验结果表明：3批参芎葡萄糖注射液的最小不干扰稀释倍数，用2个厂家灵敏度均为0.25EU·mL^-1的鲎试剂进行试验，结果Es在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2λ）范围之内，且Et在0.5Es～2.0Es（包括0.5Es和2.0Es）之间，符合药典规定。说明参芎葡萄糖注射液按最小不干扰稀释倍数稀释，确已排除干扰作用，可在低于或等于此浓度的情况下使用细菌内毒素检查法对供试品进行细菌内毒素检查。

2.5供试品细菌内毒素检查

按中国药典2010年版细菌内毒素检查法，取3批参芎葡萄糖注射液用BET水分别稀释成最小不干扰稀释倍数溶液，用2个厂家灵敏度均为0.25EU·mL^-1的鲎试剂进行细菌内毒素检查，结果见表4。

表4参芎葡萄糖注射液细菌内毒素检查结果

Tab4 Salivae Miltiorrhizae Liguspyragine Hydrochride and Glucose Injection bacterial endotoxin test results

由表4可知，3个批号的参芎葡萄糖注射液使用2个厂家相同灵敏度的鲎试剂作细菌内毒素检查，结果3批参芎葡萄糖注射液内毒素含量均小于限值1.0EU·mL^-1，说明可用此限值进行该样品的细菌内毒素检查。

结论：根据上述实验数据分析，用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法，对参芎葡萄糖注射液进行细菌内毒素检查是可行的。

Claims

1.一种参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）参芎葡萄糖注射液细菌内毒素限值(L)的确定步骤；

（2）鲎试剂灵敏度复核步骤；

（4）正式干扰试验步骤；

（5）供试品细菌内毒素检测步骤。

2.如权利要求1所述的参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法，其特征在于，在所述步骤（1）中，参芎葡萄糖注射液细菌内毒素限值(L)的确定考虑联合用药，确定限值为1.0EU·mL^-1。

3.如权利要求1所述的参芎葡萄糖注射液的细菌内毒素检查方法，其特征在于，在所述步骤（3）中，干扰试验预试验中参芎葡萄糖注射液对应的最大有效稀释倍数为2～32倍。